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DE4103727A1 - Zur spezifischen erkennung eines antigens des stratum corneum der menschlichen epidermis befaehigte antikoerper, ihre herstellung und ihre anwendung, insbesondere als traeger von arzneimittelwirkstoffen - Google Patents

Zur spezifischen erkennung eines antigens des stratum corneum der menschlichen epidermis befaehigte antikoerper, ihre herstellung und ihre anwendung, insbesondere als traeger von arzneimittelwirkstoffen

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Publication number
DE4103727A1
DE4103727A1 DE4103727A DE4103727A DE4103727A1 DE 4103727 A1 DE4103727 A1 DE 4103727A1 DE 4103727 A DE4103727 A DE 4103727A DE 4103727 A DE4103727 A DE 4103727A DE 4103727 A1 DE4103727 A1 DE 4103727A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
antibodies
antibody
stratum corneum
epidermis
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE4103727A
Other languages
English (en)
Inventor
Serge Michel
Jacques Bailly
Gaelle Saintigny
Uwe Reichert
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Galderma Research and Development SNC
Original Assignee
Centre International de Recherches Dermatologiques Galderma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre International de Recherches Dermatologiques Galderma filed Critical Centre International de Recherches Dermatologiques Galderma
Publication of DE4103727A1 publication Critical patent/DE4103727A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
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Description

Die vorliegende Erfindung betrifft monoklonale Antikörper, die zur Erkennung einer Antigen-bindenden Stelle befähigt sind, die sich im Bereich des Stratum corneum (Hornschicht) der menschlichen Epider­ mis befindet. Die Erfindung betrifft auch die Herstellung der Anti­ körper und ihre Anwendung.
Es ist bekannt, daß die Epidermis eine basale Membran umfaßt, auf der eine Schicht von proliferativen Basalzellen und Schichten von suprabasalen Zellen liegen, die das Stratum spinosum (Stachelzel­ lenschicht) und das Stratum granulosum (Körnerzellenschicht) um­ fassen, und Schichten von Zellen auf dem Weg zur Differenzierung liegen, die sich zunehmend keratinisieren und letzten Endes an der Oberfläche der Haut eine verhornte Schicht (Stratum corneum, Horn­ schicht) bilden, die aus toten, vollständig keratinisierten Zellen, den Corneocyten, zusammengesetzt ist. Die Corneocyten bestehen haupt­ sächlich aus Keratinfasern, die von einer sehr beständigen Membran umgeben sind, die Hornhaut (enveloppe cornee) genannt wird. Diese Hornhaut besteht aus Proteinvorstufen, die durch kovalente Bindun­ gen unter Einwirkung eines spezifischen Enzyms, der Transglutami­ nase, verbunden werden.
Um Hautkrankheiten wie beispielsweise Psoriasis, Akne, Warzen, Pa­ pillome, Krebs usw. untersuchen zu können, ist es erforderlich, die Differenzierung der normalen Zellen der Epidermis, die Keratinocyten genannt werden, besser zu kennen. Um solche Studien vorzunehmen, ist es erforderlich, verschiedene Marker der Enddifferenzierung der Keratinocyten zu bestimmen.
Es wurde nun gefunden, daß es möglich ist, Antikörper zu gewinnen, die befähigt sind, auf einem Schnitt von normaler menschlicher Epi­ dermis eine Antigen-bindende Stelle als charakteristisch für das Stratum corneum (Hornschicht) spezifisch zu erkennen. Der Begriff "normal" bedeutet im vorliegenden Zusammenhang "nicht patholo­ gisch".
Die vorliegende Erfindung hatte also zur Aufgabe, derartige Anti­ körper bereitzustellen, die befähigt sind, sich auf einem Schnitt von nicht pathologischer menschlicher Epidermis einzig und allein im Be­ reich des Stratum corneum (Hornschicht) zu fixieren. Diese Antikör­ per erkennen insbesondere nicht die Basalzellen und suprabasalen Zellen der normalen menschlichen Epidermis.
Unter den Antikörpern gemäß der Erfindung sind insbesondere dieje­ nigen zu nennen, die unter anderem wenigstens eine der folgenden Eigenschaften aufweisen:
  • - sie erkennen das Stratum corneum der menschlichen Epidermis, wenn es von Störungen der Keratinisierung wie beispielsweise Ichthyosis (Fischschuppenkrankheit) oder der lichtinduzierten Hautalterung befallen ist, wobei diese Störungen unter anderem eine entzündliche Komponente zeigen können, wie beispielsweise im Fall von Psoriasis oder von Ekzemen;
  • - bei Immunomarkierung in der Elektronenmikroskopie ergeben sie eine diskontinuierliche Markierung im intercorneocytären Bereich des Stratum corneum der Epidermis, beispielsweise der nicht pathologischen menschlichen Epidermis;
  • - sie erkennen menschliche keratinisierte Epithelgewebe;
  • - sie erkennen das Stratum corneum der Epidermis bei wenigstens einem anderen Säuger als dem Menschen.
Unter den Antikörpern gemäß der Erfindung sind insbesondere dieje­ nigen zu nennen, die ein spezifisches Antigen des Stratum corneum der normalen menschlichen Epidermis erkennen, wobei das Antigen dasjenige ist, das von dem monoklonalen Antikörper BC 21 erkannt wird, der nachfolgend beschrieben wird.
Diese Antikörper, die das durch den Antikörper BC 21 erkannte An­ tigen erkennen, können leicht durch einfache Routineexperimente selektioniert werden, beispielsweise durch kompetitive Tests.
Die Antikörper gemäß der Erfindung können polyklonale Antikörper oder - vorzugsweise - monoklonale Antikörper sein.
Diese Antikörper stellen Marker der terminalen Differenzierung von Keratinocyten dar.
Die vorliegende Erfindung erstreckt sich in gleicher Weise auf die Antikörper, die vorstehend definiert und durch Markierung mit einem Tracer entsprechend den klassischen Verfahrensweisen der Herstel­ lung solcher markierter Antikörper modifiziert sind. Der Tracer kann beispielsweise ein radioaktiver, fluoreszierender oder enzymatischer Tracer sein.
Die Markierung mit einem radioaktiven Tracer kann durch Kupplung mit einem radioaktiven Isotop, wie beispielsweise einem Isotop des Jods oder des Indiums, erreicht werden. Die Kupplung eines Anti­ körpers mit einem radioaktiven Tracer ist als solche bekannt.
Die Kupplung der Antikörper mit einem Fluorochrom, beispielsweise einem Isothiocyanat des Fluoresceins oder des Rhodamins, oder mit einem Enzym, ist in gleicher Weise bekannt. Das Enzym ist bei­ spielsweise eine Peroxidase oder eine alkalische Phosphatase. Die enzymatische Aktivität, die das Reagenz nach Durchführung eines Tests gegebenenfalls aufweist, kann nach bekannten Verfahrenswei­ sen mit einem geeigneten Substrat bestimmt werden, das beispiels­ weise einen Nachweis durch Kolorimetrie, Fluoreszenz, Lumineszenz, Potentiometrie usw. erlaubt.
Die Erfindung erstreckt sich unter anderem auf die oben beschrie­ benen Antikörper, die markiert oder nicht markiert und auf einem festen Träger fixiert sind, der ihre Verwendung als Immun­ adsorbierende Mittel in Verfahren der Affinitätschromatographie oder als Reagentien in Analysenverfahren erlaubt, die auf einer Antigen- Antikörper-Reaktion beruhen, wie z. B. radioimmunologische, Immun­ fluoreszenz- und immunenzymatische Verfahrensweisen.
Der feste Träger kann mit jedem festen biologischen oder syntheti­ schen Material bereitgestellt werden, das mit adsorbierenden Eigen­ schaften versehen oder befähigt ist, ein Kupplungsmittel zu fixieren. Derartige Materialien sind bekannt und in der Literatur beschrieben. Von den festen Materialien, die zur Fixierung von Antikörpern durch Adsorption befähigt sind, sind beispielsweise Polystyrol, Polypropy­ len, Latices usw. zu nennen. Von den festen Materialien, die zur Fixierung der Antikörper durch kovalente Bindung mittels eines Kupplungsmittels befähigt sind, sind insbesondere Dextran, Cellulose, deren aminierte Derivate (Diethylaminoethylcellulose oder Diethyl­ aminoethyldextran) usw. zu nennen.
Der feste Träger kann beispielsweise in Form von Platten, Röhrchen, Stäbchen, Kugeln oder Mikrotitrationsplatten vorliegen.
Die Kupplungsmittel, die die Fixierung der Antikörper an dem festen Träger durch kovalente Bindung erlauben, sind bekannt. Es sind bi­ funktionelle Verbindungen (Derivate) wie beispielsweise Dialdehyde, Chinone usw.
Die Antikörper können gleichfalls in bekannter Weise an festen mi­ neralischen Trägern fixiert sein.
Die Erfindung hat auch ein Verfahren zur Herstellung der Antikör­ per, wie sie oben beschrieben wurden, zum Gegenstand.
Dieses Verfahren ist hauptsächlich durch die Tatsache gekennzeich­ net, daß man ein Wirbeltier mit gereinigten Hornzellen der Epidermis eines Säugers immunisiert und daß man nach bekannten Methoden monoklonale oder polyklonale Antikörper, die eine oder mehrere der oben angegebenen Eigenschaften aufweisen, herstellt oder gewinnt und reinigt sowie selektioniert. Die Epidermis, von der das Immunisie­ rungsmittel stammt, ist insbesondere eine nicht pathologische Epi­ dermis, speziell eine menschliche Epidermis.
Die Säuger, deren Hornzellen der Epidermis als Immunisierungsmittel in dem Verfahren, das soeben beschrieben wurde, verwendet werden können, können leicht mit Routineexperimenten in der Weise be­ stimmt werden, daß man die Immunisierung von Tieren mit Hilfe von gereinigten Hornzellen durchführt, die von einem Säuger stammen, und daß man bestimmt, ob die hergestellten Antikörper Antikörper enthalten, wie sie oben definiert wurden. Als Säuger außer dem Menschen, deren Hornzellen der Epidermis für die Immunisierung verwendbar sind, sind insbesondere Ratte, Kaninchen und Zwerg­ schwein zu nennen. Selbstverständlich ist das Wirbeltier, das man immunisiert, eine Spezies, die verschieden ist von dem Säuger, von dem das Immunisierungsmittel stammt.
Die zur Immunisierung verwendeten gereinigten Hornzellen können ausgehend von menschlicher oder tierischer Epidermis oder von menschlichem oder tierischem Stratum corneum hergestellt werden. Für diesen Zweck behandelt man mehrmals die Probe durch suk­ zessives Inkubieren bei 90°C in Natriumdodecylsulfat-(SDS)-Lö­ sungen, die beta-Mercaptoethanol enthalten. Dem folgen mehrere Elektrodialyseschritte. Diese Behandlungsschritte haben die Wirkung, daß die biologischen Stoffe (Lipide und Proteine, insbesondere Kera­ tin), die nicht kovalent an die Struktur der Hornzelle gebunden sind, gelöst und danach eliminiert werden. Die so gereinigten Horn­ zellen werden im Folgeschritt gewonnen, gewaschen und in physiolo­ gischem Serum suspendiert.
Um die polyklonalen Antikörper herzustellen, gewinnt man die Anti­ körper aus dem Serum der immunisierten Tiere und reinigt sie in an sich bekannter Weise, beispielsweise durch Affinitätschromatographie, um nur die Antikörper zurückzubehalten, die das Stratum corneum erkennen und die nicht Basalzellen und Suprabasalzellen entweder der Epidermis, die zur Herstellung der Hornzellen gedient hat, die als Immunisierungsmittel verwendet werden, oder einer normalen menschlichen Epidermis erkennen, oder um nur die Antikörper zu­ rückzubehalten, die unter anderem eine der anderen Eigenschaften aufweisen, die oben genannt wurden.
Um monoklonale Antikörper herzustellen, entnimmt man dem immuni­ sierten Tier mittels üblicher Verfahrensweisen die Lymphocyten, führt nachfolgend beispielsweise nach bekannten Verfahren mit den in vitro kultivierbaren Lymphocyten eine Zellfusion durch und se­ lektioniert auf an sich bekannte Weise die Hybrid-Zellklone, die Antikörper ausscheiden, die die oben bei der Definition der Anti­ körper gemäß der Erfindung aufgezählten charakteristischen Eigen­ schaften aufweisen.
Die Erfindung erstreckt sich auch auf Hybrid-Zellinien, die befähigt sind, diese Antikörper auszuscheiden.
Die Erfindung erstreckt sich insbesondere auf die Hybrid-Zellinie CIRD BC 21, die bei der European Collection of Animal Cell Culture unter der Nummer 8 90 91 901 hinterlegt ist, sowie auf den monoklo­ nalen Antikörper (hier "Antikörper BC 21" genannt, der von dieser Zellinie sekretiert wird).
Die Erfindung hat in gleicher Weise ein Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikörper zum Gegenstand, wie sie voranstehend de­ finiert wurden. Dies geschieht durch Kultivieren der oben beschrie­ benen Hybrid-Zellinien und Abtrennen der im Kulturmedium oder in Ascites-Flüssigkeit hergestellten Antikörper.
Sofern erwünscht, kann man die Antikörper noch auf einem festen Träger fixieren und/oder sie mit einem radioaktiven, Fluoreszenz- oder enzymatischen Marker umsetzen.
Die Erfindung hat in gleicher Weise die Verwendung der monoklona­ len Antikörper, wie sie oben definiert wurden, als Reagentien in immunologischen Verfahren zum Gegenstand, die auf der Reaktion Antigen-Antikörper beruhen.
Diese Verfahrensweisen, wie beispielsweise die direkte oder indirekte Immofluoreszenz, immoenzymatische Verfahrensweisen, radioimmunolo­ gische Verfahrensweisen usw. sind bekannt und werden in der vor­ liegenden Anmeldung nicht beschrieben.
Die Antikörper gemäß der Erfindung können insbesondere als "Biofänger (biocapteurs)" in Verfahrenweisen verwendet werden, die sich biologischer Sonden für die Erfassung von Molekülen bedienen, die die antigene Determinante tragen, gegen die der Antikörper ge­ richtet ist.
Die Antikörper gemäß der Erfindung können beispielsweise als Reagentien zur Untersuchung der normalen oder pathologischen Differenzierung der Epidermiszellen, insbesondere der Zellen der menschlichen Epidermis, verwendet werden. Sie sind insbesondere brauchbar in der Humanmedizin bei der Diagnostik dermatologischer Krankheiten und auch der Krankheiten der inneren Epithelien. Ins­ besondere können die Antikörper gemäß der Erfindung, die die kera­ tinisierten Epithelgewebe erkennen, zur Bestimmung verwendet wer­ den, ob die inneren Epithelien keratinisiert sind.
Die Antikörper gemäß der Erfindung sind insbesondere brauchbar bei allen Techniken der bildlichen Darstellung in der Medizin, die sich Antikörper bedienen.
Die Antikörper gemäß der Erfindung können auch insbesondere ver­ wendet werden als Reagentien für die Quantifizierung des Stratum corneum (Hornschicht) der Epidermis, beispielsweise um die Verän­ derung der Dicke des Stratum corneum unter dem Einfluß eines Me­ dikaments zu untersuchen und so die Wirksamkeit des Medikaments zu verifizieren. Die Antikörper, die das Stratum corneum in spezifi­ scher Weise bei einem Säuger wie beispielsweise der Ratte, dem Kaninchen, dem Zwergschwein usw. erkennen, erlauben in vorteilhafter Weise, diesen Säuger als Modelltier für eine solche Studie zu wählen.
Die Antikörper gemäß der Erfindung können in gleicher Weise auch verwendet werden bei der Herstellung von Medikamenten, als Träger von Arzneimittelwirkstoffen, insbesondere von Arzneimittelwirkstof­ fen, die bei der Behandlung von Erkrankungen verwendet werden, die mit Störungen der Keratinisierung verbunden sind, wie z. B. Ichthyosis (Fischschuppenkrankheit) oder lichtinduzierte Alterung, oder verbunden sind mit Störungen der Keratinisierung mit einer entzündlichen Komponente wie beispielsweise im Fall von Psoriasis oder von Ekzemen. Beispielsweise können die Antikörper gemäß der Erfindung, die von Psoriasis befallene Hautgewebe erkennen, als Träger von Arzneimittelwirkstoffen verwendet werden, die bei der Behandlung von Psoriasis verwendet werden, insbesondere von anti­ mitotischen Arzneimittelwirkstoffen.
Die Antikörper gemäß der Erfindung können beispielsweise mittels kovalenter Bindung an kolloidale Träger wie beispielsweise Liposome gekuppelt werden (siehe beispielsweise Wright und Huang, Advanced Drug Delivery Reviews, 3, 343 bis 389 (1989)) oder polymere Mikro­ kügelchen, die eine biologisch aktive Substanz oder ein Diagnostik­ mittel enthalten, um als Immunreagentien oder als therapeutische Mittel verwendet zu werden.
Die biologisch aktive Substanz ist beispielsweise ein antimitotisches Mittel wie beispielsweise Methotrexat.
Diese Liposome oder Mikrokügelchen, die Antikörper enthalten, die befähigt sind, von Psoriasis befallene Hautgewebe zu erkennen, können beispielsweise als Medikament in der Humanmedizin zur Be­ handlung von Psoriasis verwendet werden. In diesem Fall werden die Liposome oder Mikrokügelchen auf topischem Wege aufgebracht.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie in ir­ gendeiner Weise zu beschränken.
Beispiel 1 Herstellung von monoklonalen Antikörpern 1) Herstellung von Hornzellen, die als Antigen verwendet werden
Menschliche Epidermis oder Stratum corneum wurden während eines Zeitraums von 10 Minuten bei 90°C in einer Lösung A (2% SDS; 0,1% DTE; 0,01% Natriumazid) inkubiert. Während der Inkubation wurde die Suspension von Hornzellen dreimal stark mit einem Vortex-Rüh­ rer gerührt. Die Probe wurde danach 10 Minuten lang bei 4000 g zentrifugiert, und das erhaltene Zentrifugat wurde nochmals in der Lösung A suspendiert. Der gesamte Verfahrensschritt wurde viermal wiederholt.
Das Zentrifugat der nach der letzten Zentrifugation erhaltenen Hornzellen wurde in einer Lösung B suspendiert (62,5 mM Tris-HCl, pH 6,8; 2% SDS; 5% beta-Mercaptoethanol; 10% Glycerin; 0,025% Bromphenolblau). Danach wurde es 10 Minuten lang bei 90°C inku­ biert und in ein Dialysegefäß überführt (Spectrapor 6/132542; Ver­ trieb durch Spectrum Industries). Das Gefäß wurde danach in eine Elektrophoresekammer (Transblot; Vertrieb durch Biorad) eingetaucht, die eine Pufferlösung C enthielt (Glycin 200 mM; Tris 25 mM; 0,1% SDS). Eine Spannung von 20 V wurde während 24 Stunden bei 4°C angelegt.
Die Hornzellen wurden nachfolgend wiedergewonnen und durch Zen­ trifugation in der Lösung C gewaschen. Das erhaltene Zentrifugat wurde von neuem in der Pufferlösung B suspendiert. Die Elektrodia­ lyse wurde dreimal wiederholt. Nach der letzten Elektrodialyse wurde das Zentrifugat in destilliertem Wasser suspendiert. Die Suspension wurde 5 Minuten bei 4000 g zentrifugiert. Dieser Verfahrensschritt wurde dreimal wiederholt. Danach wurde das Zentrifugat in physio­ logischem Serum mit einer Konzentration an Protein von 1 mg/ml suspendiert, das durch die Dosierungsvorschrift von Lowry et al. bestimmt ist (J. Biol. Chem., 1951, 193, 265 bis 275).
SDS bedeutet Natriumdodecylsulfat; DTE bedeutet Dithioerythrit(ol).
2) Immunisierung
Weibliche BALB/c-Mäuse (Alter 8 bis 11 Wochen) wurden auf intra­ peritonealem Wege mit 1 mg Hornzellen immunisiert, die wie oben beschrieben hergestellt worden waren. Die Verfahrensweise wurde in identischer Weise dreimal im Zeitabstand von 3 Wochen wiederholt. Die Milz der Tiere wurde 3 Tage nach der letzten Wiederholung entnommen.
3) Myelom-Zellkultur von Mäusen SP 2/0
Man verwendete eine Zellinie SP 2/0 (Shulmann und Köhler, Nature, 276, 269, 1978). Die Zellen waren nicht befähigt, in einem Medium zu überleben, das Azaserin und Hypoxanthin enthielt (Buttin et al., Curr. Top. Microbiol. Immunol., 81, 27, 1978). Die Zellen wurden in einem Medium nach Eagle kultiviert, das nach Dulbecco (DME) modi­ fiziert war und 4,5 g/l Glucose, 1,2 g/l Natriumbicarbonat, 1 mM Natriumpyruvat, 2 mM Glutamin (vollständiges DME-Medium) enthielt, dem 10% fetales dekomplementiertes (10 Minuten bei 56°C) Käl­ berserum zugesetzt worden war. Nach Wiederauftauen mußten die SP 2/0-Zellen auf Konzentrationen von 2 × 104 bis 8 × 105/ml kulti­ viert werden, bis sie eine Verdoppelungszeit von 12 bis 15 Stunden erreicht hatten. Das Einfrieren dieser Zellen erfolgte bei einer Kon­ zentration von 5 × 106/ml in 95%igem fetalem Kälberserum und 5% DMSO (Dimethylsulfoxid) .
4) Herstellung der SP 2/0-Zellen
SP 2/0-Zellen in exponentieller Wachstumsphase bei einer Konzen­ tration von 105 bis 2 × 105 Zellen/ml wurden bei 800 Upm (Umdrehungen/Minute) 5 Minuten lang zentrifugiert und in vollstän­ digem DME ohne Serum bei 107 Zellen/ml suspendiert.
5) Herstellung von Milzzellen (Splenocyten)
Man stellte in klassischer Weise immunisierte Mäuse-Milzzellen (-Splenocyten) her und suspendierte sie in vollständigem DMEM-Me­ dium ohne Serum (Dulbecco′s modifiziertes essentielles Medium). Zur Zählung wurden 50 µl der Suspension entnommen und mit 50 µl Trypanblau (0,2%) und 400 µl PBS-Puffer (Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung) vermischt. Nach 30 Sekunden wurde ein aliquoter Teil in eine Buerkerzelle überführt. Die Suspension wurde bei 800 Upm 5 Minuten lang zentrifugiert und auf 107 lebende Zellen/ml eingestellt.
6) Fusion (Tag 0)
Die eingesetzte Verfahrensweise ist der Verfahrenweise der "Fusion in Masse" von Juy et al. abgeleitet (J. Immunol., 129, 1153, 1982). In einem Polypropylen-Röhrchen von 50 ml Inhalt wurden die Mye­ lomzellen und die Milzzellen (Splenocyten) in einem Verhältnis 1 Myelomzelle auf 4 Splenocyten vermischt und bei 800 Upm 5 Minuten lang zentrifugiert. Der Überstand wurde abpipettiert, und man setzte dem Zentrifugat 1 ml DME (vollständig ohne Serum) zu, worauf dieses wieder suspendiert war (Galfre et al., Nature, 266, 550, 1977). Man setzte dem Zentrifugat außerdem 100 µl - auf 107 Splenocyten - Polyethylenglykol 4000 (PEG 4000) zu, das in DME, das 5% DMSO enthielt, gelöst worden war. Das DMSO mußte frisch zubereitet zugesetzt werden. Die PEG-Lösung wurde tropfenweise während 1 Minute zugesetzt, während man das Röhrchen langsam kontinuierlich bewegte. Nach 1 Minute Ruhenlassen bei Umgebungs­ temperatur wurde 1 ml vollständiges DME, das 10% fetales Kälber­ serum (SVF) enthielt, in 1 Minute zugesetzt. Man ließ das Röhrchen 1 Minute lang ruhen. Danach wurden 15 ml Komplettmedium, das 10% fetales Kälberserum enthielt, tropfenweise (etwa 1 ml/Minute) un­ ter Rühren langsam zugegeben. Die erhaltene Suspension wurde mit einer 25 ml-Pipette entnommen und in einer Kulturschale von 150 mm Durchmesser verteilt, die bei 37°C 6 Stunden lang in einem Brutschrank inkubiert wurde. Die Zellen wurden bei 800 Upm 5 Mi­ nuten lang zentrifugiert und in einem Selektivmedium in einem Verhältnis 1 ml des Selektivmediums auf 2,5 × 106 Ausgangsmilzzel­ len aufgenommen. Das Selektivmedium war wie folgt zusammengesetzt: vollständiges DME, enthaltend 10-5 M Azaserin, 10-5 M Hypoxanthin und 2 µg/ml Insulin. Die Suspension wurde nachfolgend auf Kultur­ platten mit 24 Näpfen in einer Menge von 0,5 ml/Napf verteilt.
Unter diesen Bedingungen erschienen Hybridom-Klone zwischen dem 5. und 7. Tag. Man setzte 0,2 ml Selektivmedium/Napf am 6. Tag zu.
7) Bestimmung der Hybridome, die die gesuchten Antikörper produ­ zieren
Sobald die Hybridome ein Drittel der Oberfläche der Näpfe bedeckten, wurde der Kulturüberstand mittels indirekter Immunfluoreszenz auf Schnitten menschlicher Epidermis entsprechend der nachfolgend be­ schriebenen Verfahrensweise getestet.
8) Verpflanzung der selektionierten Näpfe
Sobald die Näpfe zu zwei Dritteln konfluent waren, wurde ihr Inhalt in Platten mit 12 Näpfen überführt. In der Vorkonfluenz wurden die Hybridome entsprechend der nachfolgend beschriebenen Verfahrens­ weise kloniert. Zur gleichen Zeit wurden sie vermehrt, bis man einen konfluenten Flakon T 25 (25 cm2) erhielt. Diese Zellen wurden nachfolgend in dem weiter oben beschriebenen Einfriermedium einge­ froren.
Für die Klonierung setzte man die Verfahrensweise der begrenzten Verdünnung ein. Auf einer Platte mit 96 Näpfen setzte man 1 Zelle/Napf an. Man setzte außerdem eine Platte mit einer theoreti­ schen Konzentration von 0,3 Zellen/Napf an. Die Napf-Überstände wurden mittels indirekter Immunfluoreszenz getestet, und die mit der ganzen oder einem Teil der Epidermis reagierenden Klone wurden nachfolgend kultiviert und in einem Selektivmedium vermehrt, das kein Azaserin enthielt. Nach 1 Woche des Kultivierens wurden sie weiter in vollständigem DME-Medium kultiviert. Die Klonierung wurde einmal unter denselben Bedingungen wiederholt.
Man selektionierte mit den in Beispiel 2 beschriebenen Verfahrens­ weisen die Klone, die Antikörper sekretieren, die die normale men­ schliche Epidermis erkennen.
Aus der Gruppe der zurückgehaltenen Klone (Kategorie A) selektio­ nierte man diejenigen Klone, die spezifisch (Unterkategorie B) das Stratum corneum der normalen menschlichen Epidermis erkennen.
Es wurde beobachtet, daß von den Klonen der Kategorie A wenig­ stens etwa 5% (im allgemeinen von 5 bis etwa 10%) auch zur Un­ terkategorie B gehören.
Ein unter diesen Bedingungen erhaltener Klon (CIRD BC 21) wurde bei der European Collection of Animal Cell Culture unter der oben angegebenen Nummer hinterlegt.
9) Wachstum der Hybridome in Ascites-Flüssigkeit
Das Wachstum der erhaltenen Hybridome in Ascites-Flüssigkeit wurde durch intraperitoneale Injektion von 107 Zellen, die aus ein und demselben Klon stammten, in 8 Wochen alte BALB/c-Mäuse erreicht, die vorher durch intraperitoneale Injektion von 0,5 ml Pristan (2,6,10,14-Tetramethylpentadecan) sensibilisiert worden waren.
10) Indentifizierung der Klasse der sekretierten Immunglobuline
Die Klasse der sekretierten Immunglobuline im Myelom-Überstand wurde bestimmt durch doppelte Diffusion auf Agar mit Reagentien, die spezifisch sind für kurze Ketten von Immunglobulinen (Serotec Ltd., Bicester, Großbritannien).
Das von dem Klon CIRD BC 21 sekretierte Immunglobulin ist ein IgM.
Beispiel 2 Gewebespezifität des von der Zellinie CIRD BC 21 sekretierten Antikörpers 1) Immunfluoreszenz
Die Gewebespezifität der Antikörper, die in den Myelom-Überständen und den Ascites-Flüssigkeiten zugegen waren, wurde mittels der Verfahrensweise der indirekten Immunfluoreszenz an Schnitten von etwa 5 µm von verschiedenen Geweben untersucht, die eingefroren und in einem Einschlußmedium (Tissue-Tek) eingeschlossen waren. Die getrockneten Objektträger (lames), auf denen sich die Gewebe befanden, wurden 10 Minuten lang in einem Phosphatpuffer-Bad PBS gespült und danach 30 Minuten lang in feuchter Atmosphäre in Ge­ genwart der erhaltenen monoklonalen Antikörper inkubiert. Danach wurde noch einmal 10 Minuten gespült. Danach wurde ein zweiter Inkubationsschritt von 30 Minuten in Gegenwart von Anti-IgM-An­ tikörpern von Mäusen durchgeführt, die an Fluoresceinisothiocyanat (FITC; Hersteller: Cappel) gekoppelt waren. Nach einer weiteren Spülung unter denselben Bedingungen, wie sie oben beschrieben wurden, wurden die Schnitte zwischen Objektträger (lame) und Deck­ glas (lamelle) in einem Fixiermedium fixiert (Glycerin 90%; PBS 10%, enthaltend 1% para-Phenylendiamin; pH 8).
Epithelgewebe unterschiedlicher Herkunft wurden verwendet, um die Spezifität der Antikörper-Sorte zu untersuchen. Verschiedene Epi­ thelgewebe menschlichen Ursprungs wurden verwendet, um die Ge­ webespezifität der Antikörper zu untersuchen. Es wurden auch pa­ thologische menschliche Gewebe verwendet, um den diagnostischen Wert der Antikörper abzuschätzen. Außerdem wurde die Reaktivität der Antikörper mit in klassicher Kultur kultivierten (Rheinwald und Green, Cell, 6, 331, 1975) oder in Emerskultur auf toter Haut kulti­ vierten (Regnier et al., Front. matrix biol., 9, 4, 1981) oder auf Kollagengittern kultivierten Keratinocyten (Lenoir et al., Dev. Biol., 130, 610, 1988) untersucht.
2) Elektronenimmunmikroskopie
Epidermis-Schnitte von etwa 10 µm, die gefroren und in ein Ein­ schlußmedium (Tissue-Tek) eingeschlossen waren, wurden in Gegen­ wart der oben erwähnten monoklonalen Antikörper inkubiert. Nach Spülen wurden die Schnitte mit dem Vectastain ABC-Kit (Vector lab.) inkubiert. Die Gewebefixierung wurde entsprechend der Verfahrens­ weisen nach Graham und Karnovski durchgeführt (J. Histochem. Cytochem., 14, 291, 1966). Die ultrafeinen Schnitte, die in wäßrigen Ethanollösungen unterschiedlicher Konzentrationen, die 70% bis 100% (Volumen/Volumen) Alkohol enthielten, dehydratisiert und dann in dem Einschlußmedium EPON 812 eingeschlossen worden waren, wurden mit einem Transmissions-Elektronenmikroskop (JEOL 1200 EX) unter­ sucht.
3) Ergebnisse
Die bei der Immunfluoreszenz erhaltenen Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabellen angegeben:
Tabelle I
Gewebespezifität des von der Zellinie CIRD BC 21 sekretierten Antikörpers beim Menschen
Tabelle II
Sezies-Spezifität des von der Zellinie CIRD BC 21 sekretierten Antikörpers
Tabelle III
Hauptpathologie: Fehlende oder vorhandene Reaktivität des von der Zellinie CIRD BC 21 sekretierten Antikörpers
Tabelle IV
Reaktivität des Antikörpers BC 21 mit Keratinocyten in Kultur
Zusammenfassend ist festzustellen, daß bei Vorliegen von normaler menschlicher Haut, von Psoriasis oder Ichthyosis vulgaris befallener Haut der von der Zellinie CIRD BC 21 sekretierte Antikörper aus­ schließlich mit dem Stratum corneum reagierte. Er reagierte indessen nicht mit den inneren, vollständig differenzierten Bereichen oder "Hornkügelchen" (globes cornes) von spinocellulären Carcinomen. Dieser Antikörper reagierte nicht mit nicht keratinisierten Plat­ tenepithelien oder mit einfachen Epithelien. Es wurde allerdings eine spezifische Markierung von Schleimzellen des Duodenums beobachtet. Der Antikörper reagierte auch mit der Stratum corneum anderer tie­ rischer Spezies.
Der Antikörper reagierte nicht mit Keratinocyten, die in klassischer Weise kultiviert wurden, markierte jedoch stark das Stratum corneum, das sich bildete, wenn die Keratinocyten auf toter Haut oder auf einem Kollagengitter unter Luftkontakt-Bedingungen kultiviert wur­ den.
Letztlich ließen Immunmarkierungen auf der menschlichen Epidermis bei Elektronenmikroskopie die Gegenwart einer spezifischen diskon­ tinuierlichen Markierung erkennen, die im intercorneocytären Bereich des Stratum corneum lag.

Claims (25)

1. Antikörper, dadurch gekennzeichnet, daß sie befähigt sind, sich auf einem Schnitt nicht pathologischer menschlicher Epidermis einzig und allein im Bereich des Stratum corneum zu fixieren.
2. Antikörper nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie außerdem das Stratum corneum der menschlichen Haut erkennen, das von Störungen der Keratinisierung wie beispielsweise Ichthyosis, lichtinduzierter Hautalterung, Psoriasis oder einem Ekzem befallen ist.
3. Antikörper nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie bei Immunmarkierung in der Elektronenmi­ kroskopie eine diskontinuierliche Markierung im intercorneocytären Bereich des Stratum corneum ergeben.
4. Antikörper nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, da­ durch gekennzeichnet, daß sie außerdem keratinisierte menschliche Epithelgewebe erkennen.
5. Antikörper nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, da­ durch gekennzeichnet, daß sie ein Antigen des Stratum corneum der normalen menschlichen Haut erkennen, wobei das Antigen dasjenige ist, das von einem monoklonalen Antikörper erkannt wird, der von der Hybridzellinie sekretiert wird, die bei der European Collection of Animal Cell Culture unter der Nummer 8 90 91 901 hinterlegt ist.
6. Antikörper nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, da­ durch gekennzeichnet, daß sie außerdem das Stratum corneum der Epidermis wenigstens eines anderen Säugers als des Menschen er­ kennen.
7. Antikörper nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, da­ durch gekennzeichnet, daß sie polyklonale Antikörper sind, die durch Affinitätschromatographie gereinigt wurden.
8. Antikörper nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch ge­ kennzeichnet, daß sie monoklonale Antikörper sind.
9. Antikörper nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß es sich um monoklonale Antikörper handelt, die von der Hybridzellinie se­ kretiert werden, die bei der European Collection of Animal Cell Cul­ ture unter der Nummer 8 90 91 901 hinterlegt wurde.
10. Antikörper nach irgendeinem der vorangehenden Ansprüche, da­ durch gekennzeichnet, daß sie markiert und/oder auf einem festen Träger fixiert sind.
11. Antikörper wie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 9 definiert, dadurch gekennzeichnet, daß sie an kolloidale Träger wie beispiels­ weise Liposome oder Mikrokügelchen gekuppelt sind, die eine biolo­ gisch aktive Substanz oder ein diagnostisches Mittel enthalten.
12. Verfahren zur Herstellung von Antikörpern, wie sie in irgend­ einem der vorangehenden Ansprüche definiert wurden, dadurch ge­ kennzeichnet, daß man ein Wirbeltier mit gereinigten Hornzellen von Säugerepidermis immunisiert und daß man nach bekannten Methoden monoklonale oder polyklonale Antikörper herstellt oder gewinnt und reinigt sowie selektioniert, die die Eigenschaften aufweisen, die in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 6 definiert sind.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Herstellung der polyklonalen Antikörper die Antikörper aus dem Serum der immunisierten Tiere gewinnt und sie auf an sich bekannte Weise reinigt, damit man nur die Antikörper zurückbehält, die die Eigenschaften aufweisen, die in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7 definiert sind.
14. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Herstellung monoklonaler Antikörper nach üblichen Verfahrens­ weisen dem immunisierten Tier die Lymphocyten entnimmt, nach be­ kannten Methoden eine Zellfusion mit kultivierbaren Lymphocyten in vitro vornimmt und in an sich bekannter Weise die Hybrid-Zellklone selektioniert, die Antikörper sekretieren, die charakteristische Eigenschaften aufweisen, wie sie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 6 aufgezählt sind.
15. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man zusätzlich einen derartigen Klon kultiviert und daß man die Anti­ körper abtrennt, die im Kulturmedium produziert werden.
16. Zellinien, dadurch gekennzeichnet, daß sie Antikörper sekretie­ ren, wie sie in irgendeinem der Ansprüche 8 und 9 definiert sind.
17. Zellinie nach Anspruch 16, hinterlegt bei der European Collection of Animal Cell Culture unter der Nummer 8 90 91 901.
18. Verwendung eines Antikörpers, wie er in irgendeinem der An­ sprüche 1 bis 10 definiert ist, als Reagenz in immunologischen Ver­ fahren, die auf der Reaktion Antigen-Antikörper beruhen.
19. Verwendung nach Anspruch 18, in Immunfluoreszenz-Verfahren, Immunenzymatischen Verfahren, radioimmunlogischen Verfahren, in affinitätschromatographischen Verfahren oder in Verfahren, die bio­ logische Sonden zur Bestimmung von Molekülen verwenden, die die antigene Determinante des Stratum corneum tragen, gegen die der Antikörper gerichtet ist.
20. Verwendung nach Anspruch 18, als Reagenz zur Quantifizierung des Stratum corneum der Epidermis.
21. Verwendung nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß man den Antikörper als Reagenz zur Untersuchung der normalen oder pathologischen Differenzierung von Zellen der Epidermis und der in­ neren Epithelien verwendet.
22. Verwendung von Antikörpern, wie sie in irgendeinem der An­ sprüche 2 bis 5 definiert wurden, als Träger für Arzneimittel bei der Herstellung eines Medikaments.
23. Verwendung nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, daß der Antikörper ein Antikörper ist, wie er in Anspruch 11 definiert wurde.
24. Verwendung nach Anspruch 22 oder 23, dadurch gekennzeichnet, daß das Arzneimittel ein Arzneimittel ist, wie es bei der Behandlung von Erkrankungen verwendet wird, die mit Störungen der Keratini­ sierung verbunden sind.
25. Verwendung nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß das Arzneimittel ein Arzneimittel ist, welches bei der Behandlung von Ichthyosis, lichtinduzierter Hautalterung, Psoriasis oder Ekzemen verwendet wird.
DE4103727A 1990-02-08 1991-02-07 Zur spezifischen erkennung eines antigens des stratum corneum der menschlichen epidermis befaehigte antikoerper, ihre herstellung und ihre anwendung, insbesondere als traeger von arzneimittelwirkstoffen Withdrawn DE4103727A1 (de)

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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6288215B1 (en) * 1996-08-30 2001-09-11 Auburn University Monoclonal antibodies specific to cooked meats
AU4094297A (en) * 1996-08-30 1998-03-19 Auburn University Monoclonal antibodies specific to cooked meats
CA2630696A1 (en) * 2005-11-24 2007-05-31 Basf Se Keratin-binding effector molecules and method for the production thereof by coupling keratin-binding polypeptides with effector molecules that support carboxylic groups or sulfonic acid groups
BRPI0618980A2 (pt) * 2005-11-24 2016-09-13 Basf Se métodos de produzir uma molécula efetora que liga queratina, de aplicar molécula efetoras dermocosmeticamente ativas à pele, cabelo e/ou unhas das mãos e unhas dos pés e de aumentar o tempo de residência de um ingrediente dermocosmeticamente ativo sobre a pele, cabelo e/ou unhas das mãos ou unhas dos pés, molécula efetora que liga queratina, uso de moléculas efetoras que ligam queratina, compostos e dermocosmético
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Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4598051A (en) * 1980-03-12 1986-07-01 The Regents Of The University Of California Liposome conjugates and diagnostic methods therewith
US4510244A (en) * 1980-04-17 1985-04-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Cell labeling with antigen-coupled microspheres
US4668638A (en) * 1983-03-24 1987-05-26 The Liposome Company, Inc. Liposome composition for lupus assay
US4649115A (en) * 1983-03-31 1987-03-10 Sloan-Kettering Institute Monoclonal antibodies to skin cells
FR2606033B1 (fr) * 1986-10-31 1988-12-16 Cird Proteine cytoplasmique des cellules suprabasales de l'epiderme, anticorps capables de reconnaitre cette proteine, et lignees cellulaires hybrides capables de secreter de tels anticorps
FR2606034B1 (fr) * 1986-10-31 1989-06-02 Cird Nouvelle proteine de surface des cellules basales de l'epiderme, anticorps capables de reconnaitre cette proteine, et leur utilisation, et lignees cellulaires hybrides capables de secreter de tels anticorps

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US5541073A (en) 1996-07-30
FR2657885B1 (de) 1995-01-13
GB2241702A (en) 1991-09-11
GB9102616D0 (en) 1991-03-27
US5312751A (en) 1994-05-17

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