DE4028677A1 - Heteroatome enthaltende, tricyclische verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft Heteroatome enthaltende tricyclische Verbindungen der Formel

worin
R₁ für die 1-Imidazolylcarbonyloxygruppe, R₂ für Methyl, Ethyl, n-Propyl oder Allyl und R₃ für Methoxy oder Hydroxy stehen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung.

Erfindungsgemäß gelangt man zu den Verbindungen der Formel I, indem man Verbindungen der Formel

worin R für eine Schutzgruppe steht und R₁, R₂ und R₃ obige Bedeutung besitzen, nach an sich bekannten Methoden entschützt.

Die Abspaltung der Schutzgruppe kann nach einer der verwendeten Schutzgruppen entsprechenden bekannten Methode durchgeführt werden. Beispielsweise kann sie im Falle der t.Butyldimethylsilylgruppe durch Behandeln mit HF in einem Lösungsmittel, z. B. in Acetonitril erfolgen.

Die als Ausgangsprodukte benötigten Verbindungen der Formel Ia können erhalten werden, indem man Verbindungen der Formel

worin R₂, R₃ und R obige Bedeutung besitzen, mit Vanadiumoxyacetylacetonat und anschließend mit t.Butylhydroperoxid behandelt und die entstehenden Verbindungen der Formel

worin R₂, R₃ und R die obige Bedeutung besitzen, mit 1,1′-Carbonyldiimidazol umsetzt.

Die erste Stufe dieses Verfahrens kann beispielsweise ausgeführt werden, indem man eine Verbindung der Formel II in einem unter den Reaktionsbedingungen inerten Lösungsmittel, z. B. in einem chlorierten Kohlenwasserstoff wie Dichlormethan, mit Vanadiumoxyacetylacetonat und anschließend bei vorzugsweise tiefer Temperatur, z. B. bei etwa 0°C, mit t.Butylhydroperoxid behandelt. Nach üblicher Aufarbeitung erhält man ein Diastereomerengemisch, das nach an sich bekannten Methoden, z. B. chromatographisch, aufgetrennt werden kann.

Die zweite Stufe wird vorzugsweise in Gegenwart von 4-Dimethylaminopyridin und einem unter den Reaktionsbedingungen inerten Lösungsmittel, beispielsweise in einem cyclischen Ether wie Tetrahydrofuran ausgeführt.

Die übrigen als Ausgangsprodukte benötigten Verbindungen sind bekannt oder können nach bekannten Methoden bzw. analog wie in den Beispielen beschrieben hergestellt werden.

Die Verbindungen der Formel I besitzen interessante pharmakologische Eigenschaften und können daher als Heilmittel verwendet werden. Insbesondere zeigen sie immunosuppressive und antiinflammatorische Wirkung. Die immunosuppressive Wirkung zeigt sich z. B. in vitro durch die Hemmung der Allogen-stimulierten Hyperproliferation von Lymphozyten (MLR = mixed lymphocyte reaction) sowie in der Unterdrückung der primären humoralen Immunantwort gegen Schaferythrozyten. In vitro konnte auch eine Hemmung des Keratinozytenwachstums festgestellt werden, was die Verbindung der Formel I als antiproliferative Substanzen ausweist. Die immunosuppressive Wirkung zeigt sich in vivo in den Modellen Graft versus host- Reaktion und der Hypersensitivität der Maus gegen Schaferythrozyten. Die antiinflammatorische Wirkung läßt sich an Modellen einer allergischen Dermatitis an Maus und Schwein zeigen.

Diese Wirksamkeiten können mit den folgenden Testmethoden nachgewiesen werden:

1. Proliferative Antwort von Lymphozyten auf allogene Stimulation

Der Test wird wie in der Literatur beschrieben durchgeführt: T. Meo (1979): The MLR in the mouse. In "Immunological Methods", L. Lefkovits and B. Pernis, Eds., Acad. Press, N.Y., S. 227-239. Die Verbindungen der Formel I zeigen in diesem Test eine Suppression (IC50) bei einer Dosis von etwa 0,09 bis etwa <0,0008 µg/ml.

2. Primäre humorale Immunantwort auf rote Schafsblutzellen in vitro

Der Test wird wie in der Literatur beschrieben durchgeführt: R.I. Mishell, R.W. Dutton: Immunization of normal mouse spleen cell suspensions in vitro, Science 153/1004-1006 (1966); R.I. Mishell, R.W. Dutton: Immunization of dissociated spleen cell cultures from normal mice, J. Exp. Med. 126/423-442 (1976). Die Verbindungen der Formel I sind in diesem Test in einer Konzentration von etwa 0,32 bis etwa 0,0024 µg/ml aktiv (IC50).

3. Inhibition der Proliferation von Human-Keratinozyten

Dieser Test wird analog wie in der EP 3 15 978 beschrieben. Die Verbindung der Formel I hemmten in Konzentrationen von 1 bis 10 µg/ml das Keratinozytenwachstum von etwa 30 bis etwa 90%.

Hemmung der Oxazolon-induzierten Kontaktallergie der Maus

Dieser Test wird analog, wie bei F.M. Dietrich und R. Hess in Int. Arch. Allergy 38/246-259 (1970) beschrieben, durchgeführt. Die Verbindungen der Formel I zeigen in diesem Test eine Hemmung der entzündlich bedingten Schwellung von etwa 15% bis etwa 68% bei topischer Verabreichung in einer Konzentration von 0,01%.

5. DNFB-Allergie/Schwein

Dieser Test wird analog wie in der EP 3 15 978 beschrieben ausgeführt. Zweimalige topische Applikation von 1,2%igen Bereitungen der Verbindungen der Formel I führten zu einer Hemmung der entzündlichen Reaktion von 36 bis 40%.

Die Verbindungen der Formel I sind daher für die Behandlung und Vorbeugung der Resistenz bei Transplantation von Organen und Geweben wie Herz, Niere, Leber, Knochenmark, Haut usw., von Graft-versus-Host Erkrankungen bei Knochenmarktransplantationen, Autoimmunerkrankungen wie Rheumatoider Arthritis, Systemischer Lupus erythematodes, Hashomoto′s Thyroiditis, Multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Typ I Diabetes, Uveitis, usw., sowie für die Therapie von entzündlichen und hyperproliferativen Hauterkrankungen, wie Psoriasis, atopischer Dermatitis, Kontakt-Dermatitis und anderen ekzematösen Dermatitiden, seborrhoeischer Dermatitis, Lichen planus, Pemphigus, bullosem Pemphigoid, Epidermolysis bullosa, Urticaria, Angioödemen, Vaskulitiden, Erythemen, kutanen Esonophilien, Lupus erythematodes, Akne, sowie von Alopecia areata geeignet. Die Verbindungen können topisch oder systemisch verabreicht werden.

Für die oben angeführten Verwendungsmöglichkeiten hängt die zu verabreichende Dosis von der verwendeten Verbindung, der Verabreichungsart sowie der Behandlungsart ab. Man erhält bei größeren Säugetieren zufriedenstellende Ergebnisse bei mehrmals täglicher lokaler Verabreichung einer 1 bis 3%igen Wirkstoffkonzentration, z. B. 2 bis 5 mal täglich. Beispiele von geeigneten galenischen Formen sind Lotionen, Gele oder Cremen. Für systemische Anwendung kann die Tagesdosis etwa 0,15 mg/kg bis etwa 1,5 mg/kg Körpergewicht betragen. Für größere Säugetiere, z. B. für den Menschen, liegt die tägliche Dosis im Bereich von etwa 0,01 mg bis etwa 100 mg und kann gewünschtenfalls in bis zu vier Teildosen täglich oder in Retardform verabreicht werden.

Die Verbindungen der Formel I besitzen auch die Wirksamkeit, die Wirkung und/oder Sensitivität anderer chemotherapeutischer Mittel zu erhöhen bzw. zu verstärken. Sie können daher dazu eingesetzt werden, um die regulären Dosishöhen zu vermindern, beispielsweise bei der antineoplastischen und cytostatischen Therapie, wodurch auch die allgemeine Toxizität gesenkt werden kann. Diese Wirkung wurde in Tests nachgewiesen, die in der EP 3 60 760 beschrieben sind.

Ein weiterer Teil der Erfindung sind pharmazeutische Zusammensetzungen für obrige topische Verwendungen, enthaltend eine Verbindung der Formel I in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, zusammen mit pharmazeutisch verträglichen Träger- oder Verdünnungsmitteln.

In den nachfolgenden Beispielen, die die Erfindung näher erläutern, ihren Umfang jedoch in keiner Weise einschränken sollen, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden.

In den Beispielen werden die folgenden Verbindungen durch Kurzbezeichnungen dargestellt:

Beispiel 24-(1-Imidazolylcarbonyloxy)-22(S)-dihydro-19,20-oxiran-FR 520

92 mg 33-t.Butyldimethylsilyloxy-24-(1-imidazolylcarbonyloxy)-22(S)-dihydr-o-19,20-oxi­ ran-FR 520 werden mit 1 ml eines Gemisches Acetonitril/40% wäßriger HF (95/5) bei Raumtemperatur behandelt. Nach 15 Minuten wird das Reaktionsgemisch mit Diethylether verdünnt, nacheinander mit gesättigter wäßriger NaHCO₃-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen, die Etherphase über Na₂SO₄ getrocknet, im Vakuum konzentriert und der Rückstand chromatographisch (Toluol/Aceton: Gradient 5/1→3/1) gereinigt. Man erhält so die Titelverbindung als farblosen amorphen Feststoff.

Das als Ausgangsprodukt benötigte 33-t.Butyldimethylsilyloxy-24-(1-imidazolylcarbonyl­ oxy)-22(S)-dihydro-19,20-oxiran-FR 520 kann folgendermaßen erhalten werden:

a) 33-t.Butyldimethylsilyloxy-22(S)-dihydro-19,20-oxiran-FR 520

12,04 g 33-t.Butyldimethylsilyloxy-22(S)-dihydro-FR 520 in 500 ml trockenem Dichlormethan werden mit 240 mg Vanadiumoxyacetylacetonat versetzt. Die grüne Lösung wird auf 0° gekühlt und dann mit 7,8 ml einer 3 M Lösung von t.Butylhydroperoxid in Toluol behandelt. Die nun rote Lösung wird auf Raumtemperatur erwärmen gelassen; nach 3 Stunden wird mit Wasser gewaschen, die organische Phase mit Na₂SO₄ getrocknet, durch ein Silicagelbett filtriert und unter Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird in 50 ml Ethylacetat gelöst, filtriert und mit ca. 500 ml Ethylacetat eluiert. Nach Konzentration unter Vakuum wird der Rückstand mittels Silicagelchromatographie (Toluol/Aceton: Gradient 6/1→3/1) gereinigt. Man erhält einen Hauptanteil an Diastereomeren A, als Nebenprodukt das Diastereomere B als farblose amorphe Feststoffe.

33-t.Butyldimethylsilyloxy-24-(1-imidazolylcarbonyloxy)-22(S)-dihydr-o-19,20-oxiran FR 520

247 mg 33-t.Butyldimethylsilyloxy-22(S)-dihydro-19,20-oxiran-FR 520 (Diastereomeres A) und 50 mg 4-Dimethylaminopyridin werden in 5 ml trockenem Tetrahydrofuran bei Raumtemperatur gelöst, die Lösung mit 60 mg 1,1′-Carbonyldiimidazol versetzt und 48 Stunden unter Argon gerührt. Dann wird das Reaktionsgemisch unter Vakuum konzentriert und der Rückstand mittels Silicagelchromatographie gereinigt (Toluol/Ethylacetat = 4/1). Man erhält die Titelverbindung neben 33-t.Butyldimethylsilyloxy-22(S)-dihydro-19,20-oxiran-FR 520-22,24-carbonat als farblosen amorphen Feststoff.

¹HNMR₁-Spektren (CDCl₃)

Spektrum:
Bsp. 1: Rotamerengemisch ca. 2 : 1
Hauptrotameres: 8.19, 7.45 und 7.11 (Imidazol-H-atome); 5.34 (m, H-24); 5.12 (d,J=9Hz, H-29); 5.10 (s, H-26); 4.45 (d,br,J=13Hz, H-6e); 4.26 (H-2); 2.61 (d,J=9Hz, H-20).

• a) Rotamerengemisch ca. 2 : 1
  Diastereomeres A Hauptrotameres; 4.19 (H-2); 5.21 (s,H-26); 5.15 (d, J=9Hz, H-29); 4.43 (d,br,J=13Hz, H-6e); ca. 4.05 (H-24); ca. 3.85 (m,H-22); 2.55 (d,J=9Hz, H-20); 0.09 und 0.08 (s, Si.CH₃).
  Nebenrotameres: 5.78 (d,br,J=5Hz, H-2); 5.16 (s,H-26); 5.00 (d, J=9Hz, H-29); ca. 4.0 (H-24); ca. 3.85 (m,H-22); 2.60 (d,J=8Hz, H-20).
• b) Rotamerengemisch ca. 2 : 1
  Hauptrotameres: 8.18, 7.44 und 7.10 (Imidazol-H-atome); 5.35 (m, H-24); 5.11 (d,J=9Hz, H-29); 5.09 (s,H-26); 4.45 (d,br,J=13Hz, H-6e); 4.25 (H-2); 2.61 (d,J=9Hz, H-20); 0.90 (s,t.Butyl); 0.09 und 0.08 (s, Si.CH₃).

Claims (2)

1. Heteroatome enthaltende tricyclische Verbindungen der Formel worin R₁ für die 1-Imidazolylcarbonyloxygruppe, R₂ für Methyl, Ethyl, n-Propyl oder Allyl und R₃ für Methoxy oder Hydroxy stehen.

2. Verfahren zur Herstellung von Heteroatome enthaltenden tricyclischen Verbindungen der Formel worin R₁ für die 1-Imidazolylcarbonyloxygruppe, R₂ für Methyl, Ethyl, n-Propyl oder Allyl und R₃ für Methoxy oder Hydroxy stehen, dadurch gekennzeichnet, daß man worin R für eine Schutzgrupe steht und R₁, R₂ und R₃ obige Bedeutung besitzen, nach an sich bekannten Methoden entschützt.