DE29922680U1 - Device for electrophoretic separation and blotting - Google Patents
Device for electrophoretic separation and blottingInfo
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(Abzweigung aus der Patentanmeldung 199 49 349.9. vom(Branch from patent application 199 49 349.9. of
13. Oktober 1999)13 October 1999)
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Die vorliegende Erfindung betrifft eine Vorrichtung zum elektrophoretischen Trennen und Blotten und spezieller eine solche Vorrichtung, die zur Verwendung bei einem elektrophoretischen Gelierverfahren sowie einem Blottingverfahren praktisch ist.The present invention relates to an apparatus for electrophoretic separation and blotting, and more particularly to such an apparatus which is practical for use in an electrophoretic gelling process as well as a blotting process.
Elektrophorese ist eine Technik, die gewöhnlich verwendet wird, um Protein und DNA zu trennen. Gemäß herkömmlichen Verfahren wird ein Gel zwischen zwei Platten (in vertikaler Richtung) oder auf ein Flachbett (in horizontaler Richtung) gegossen und zwischen Puffer/Elektroden-Kammern in eine Elektrophoresevorrichtung gesetzt. Eine Pufferlösung wird zu den Puffer/Elektroden-Kammern hinzuzugegeben, und eine kleine Menge Probenlösung wird in Mulden im Gel geladen. Glyzerin und "Indikator"-Farbstoff werden in die Mulden gegeben oder zur Probenlösung hinzugefügt. Ein elektrischer Strom wird dann dem Gel zugeführt. Nachdem Indikatorfarbstoff durch die Länge des Gels hindurchgelaufen ist, wird der elektrische Strom unterbrochen, und das Gel wird zur Analyse aus der Vor-Electrophoresis is a technique commonly used to separate protein and DNA. According to conventional methods, a gel is poured between two plates (vertically) or on a flatbed (horizontally) and placed between buffer/electrode chambers in an electrophoresis apparatus. A buffer solution is added to the buffer/electrode chambers and a small amount of sample solution is loaded into wells in the gel. Glycerol and "indicator" dye are placed in the wells or added to the sample solution. An electric current is then applied to the gel. After indicator dye has passed through the length of the gel, the electric current is interrupted and the gel is removed from the pre-
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richtung entfernt, um die Überführung der Moleküle der Probe zu messen. Das Gel kann beispielsweise durch einen Farbstoff gefärbt sein, damit sich der Farbstoff am Protein oder der DNA binden kann. Das Gel kann dann getrocknet, haltbar gemacht oder photographiert werden, um zu ermöglichen, daß die Verteilung der Moleküle der Probe für eine dauernde visuelle Überprüfung erfaßt wird. Nach der Elektrophorese muß das Gel aus der Elektrophoresevorrichtung herausgenommen werden und dann zum Blotten an eine Blottingvorrichtung übergeben werden. Weil die Elektrophoresevorrichtung und die Blottingvorrichtung zwei unabhängige Vorrichtungen sind, müssen sie separat vorbereitet werden. Weil die Elektrophoreseprozedur und die Blottingprozedur separat in der Elektrophoresevorrichtung und der Blottingvorrichtung durchgeführt werden müssen, ist es kompliziert und zeitaufwendig, Elektrophorese- und Blotting-Vorgänge zu bewerkstelligen.device to measure the transfer of the sample molecules. The gel may be colored, for example, by a dye to allow the dye to bind to the protein or DNA. The gel may then be dried, preserved, or photographed to enable the distribution of the sample molecules to be recorded for continuous visual inspection. After electrophoresis, the gel must be removed from the electrophoresis device and then transferred to a blotting device for blotting. Because the electrophoresis device and the blotting device are two independent devices, they must be prepared separately. Because the electrophoresis procedure and the blotting procedure must be carried out separately in the electrophoresis device and the blotting device, it is complicated and time-consuming to carry out electrophoresis and blotting operations.
Die vorliegende Erfindung ist gemacht worden, um eine Vorrichtung zum elektrophoretischen Trennen und Blotten bereitzustellen, die die zuvor genannten Nachteile vermeidet. Es ist das Hauptziel der vorliegenden Erfindung, eine Vorrichtung zum elektrophoretischen Trennen und Blotten bereitzustellen, die in verschiedenen Modi angeordnet werden kann, um ein Elektrophoreseverfahren sowie ein Blottingverfahren ökonomisch und wirkungsvoll durchzuführen.The present invention has been made to provide an electrophoretic separation and blotting apparatus which avoids the aforementioned disadvantages. It is the main object of the present invention to provide an electrophoretic separation and blotting apparatus which can be arranged in various modes to perform an electrophoresis process as well as a blotting process economically and efficiently.
Die Figuren 1, 2, 2A und 3 sind Explosions- und Schnitt-Anordnungsansichten eines Teils einer Vorrichtung zum elektrophoretischen Trennen und Blotten gemäß der vorliegenden Erfindung.Figures 1, 2, 2A and 3 are exploded and sectional assembly views of a portion of an electrophoretic separation and blotting apparatus according to the present invention.
Die Figuren 4 und 4A sind eine Aufriß- und Schnitt-Seitenansicht eines Teils der vorliegenden Erfindung, die die zum Gießen angeordnete Vorrichtung zeigen.Figures 4 and 4A are elevational and sectional side views of a portion of the present invention showing the apparatus arranged for casting.
Die Figuren 5, 6 und 6A sind eine Aufriß-, Explosionsund Schnitt-Seitenansicht der vorliegenden Erfindung für dieFigures 5, 6 and 6A are elevational, exploded and sectional side views of the present invention for the
Schritte Laden und Durchführen.Steps: Loading and executing.
Die Figuren 7, 8, 9, 10, 1OA und 11 sind Aufriß-, Explosions- und Schnitt-Seitenansichten der vorliegenden Erfindung, die die zum Blotten angeordnete Vorrichtung zeigen. 5Figures 7, 8, 9, 10, 10A and 11 are elevational, exploded and sectional side views of the present invention showing the device arranged for blotting. 5
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM Ein elektrophoretisches Gel-Trennverfahren ist eine Technik, die gewöhnlich verwendet wird, um Protein und DNA zu trennen. Ladungstragende Moleküle sind unter der Führung eines elektrischen Feldes bewegbar. Durch die poröse Natur eines Gels und unter dem Treiben eines elektrischen Feldes werden die Moleküle abhängig von der Reihenfolge der Molekülgröße getrennt oder angeordnet. DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENT An electrophoretic gel separation process is a technique commonly used to separate protein and DNA. Charge-bearing molecules are movable under the guidance of an electric field. Due to the porous nature of a gel and under the driving of an electric field, the molecules are separated or arranged depending on the order of molecular size.
Elektrophorese umfaßt die Schritte Gelierung (Ausrichten, Gießen), Probenladen und Durchführen. Die Ausführung eines Schrittes beeinträchtigt den Erfolg eines nächsten Schrittes.Electrophoresis involves the steps of gelation (alignment, pouring), sample loading and running. The performance of one step affects the success of the next step.
Mit Bezug auf die Figuren von 1 bis 6 umfaßt eine Vorrichtung zum elektrophoretischen Trennen und Blotten gemäß der vorliegenden Erfindung einen Druckblock 1, zwei Glasplatten 11 und 11', zwei Abstandhalter 12, einen Kamm 13, einen Unterteilungsrahmen 2, ein Gestell 3, eine Positioniereinheit 4, eine Zelle 5, eine Transfermembran 7, zwei Stücke Filterpapier 8, eine Blottingkassette 9 und zwei Plattenelektroden 10 und 10'.Referring to Figures 1 to 6, an apparatus for electrophoretic separation and blotting according to the present invention comprises a pressure block 1, two glass plates 11 and 11', two spacers 12, a comb 13, a partition frame 2, a rack 3, a positioning unit 4, a cell 5, a transfer membrane 7, two pieces of filter paper 8, a blotting cassette 9 and two plate electrodes 10 and 10'.
Die Glasplatten 11 und 11' weisen unterschiedliche Höhen auf. Die Abstandhalter 12 und 12' sind beidseitig zwischen den Glasplatten 11 und 11' angeordnet. Der Kammm 13 ist im Höhenunterschied zwischen den Glasplatten 11 und 11' angeordnet.The glass plates 11 and 11' have different heights. The spacers 12 and 12' are arranged on both sides between the glass plates 11 and 11'. The comb 13 is arranged in the height difference between the glass plates 11 and 11'.
Der Unterteilungsrahmen 2 umfaßt eine erste Seitenstütze 21, eine parallel zur ersten Seitenstütze 21 angeordnete zweite Seitenstütze 21', ein zwischen der ersten Seitenstütze 21 und der zweiten Seitenstütze 21' am Boden verbundenes Bodenquerstück 22, eine zwischen den Seitenstützen 21 und 21' verbun-The partition frame 2 comprises a first side support 21, a second side support 21' arranged parallel to the first side support 21, a floor crosspiece 22 connected to the floor between the first side support 21 and the second side support 21', a floor crosspiece 22 connected between the side supports 21 and 21'.
dene und über dem Bodenquerstück 22 im Abstand angeordnete Querplatte 25, zwei Positionierstäbe 26 bzw. 26', die zur Befestigung an zwei gegenüberliegenden lateralen Seiten der Zelle 5 jeweils am oberen Teil von den Seitenstützen 21 und 21' aus nach außen zu erhöht sind. Die Seitenstützen 21 und 21' weisen jeweils eine Positioniernut 23 auf, die an einer Außenseite in Längsrichtung angeordnet ist und jeweils mit zwei vertikalen Seitenbahnen 31 im Innern des Gestells 3 gekoppelt sind. Das Bodenquerstück 22 weist eine Positioniernut 221 auf, die an einer Unterseite in Verbindung mit der Positioniernnut 23 an jeder Seitenstütze 21 und 21' in Längsrichtung angeordnet ist. Die zweite Seitenstütze 21' weist ein vertikales Durchgangsloch 211' auf, durch das eine negative Elektrode mit einem Leiter eingesetzt und an einem Positionierblock 24 zwischen dem Bodenquerstück 22 und der zweiten Seitenstütze 21' befestigt ist, wodurch eine negative elektrische Zone gebildet wird. Die erste Seitenstütze 21 weist ein vertikales Durchgangsloch 211 auf, durch das eine positive Elektrode mit einem Leiter eingesetzt und bis zur Positioniernut 23 benachbart zum Bodenquerstück 22 verlängert ist, wodurch eine positive elektrische Zone gebildet wird. Eine vorstehende Zunge 27 ist am Positionierstab 26' an der zweiten Seitenstütze 21' vorgesehen, um die Montage des Deckels 52 der Zelle 5 in seine Position zu führen, um einen elektrischen Verbindungsfehler zu vermeiden. Zwei Führungsnuten 28 sind an der Vorder- und Rückseite des Unterteilungsrahmens 2 vorgesehen und durch die Seitenstützen 21 und 21' und das Bodenquerstück 22 verlängert. Eine biegsame Dichtung 29 ist jeweils an jeder Führungsnut 28 befestigt. Jede Führungsnut 28 weist zwei schräge Enden 281 auf, die in Richtung auf den oberen Teil an jeder Seitenstütze 21 und 21' nach oben auswärts verlängert sind. Nach Montage der Dichtungen in den Führungsnuten 28 werden die beiden distalen Ende jeder Dichtung 29 jeweils auswärts gezwungen und stabil an den Glasplatten 11 und 11' zurückgehalten.and spaced above the floor crosspiece 22, two positioning rods 26 and 26' respectively, which are raised outwards from the side supports 21 and 21' for attachment to two opposite lateral sides of the cell 5 at the upper part respectively. The side supports 21 and 21' each have a positioning groove 23 which is arranged on an outer side in the longitudinal direction and is each coupled to two vertical side tracks 31 in the interior of the frame 3. The floor crosspiece 22 has a positioning groove 221 which is arranged on a lower side in connection with the positioning groove 23 on each side support 21 and 21' in the longitudinal direction. The second side support 21' has a vertical through hole 211' through which a negative electrode with a conductor is inserted and fixed to a positioning block 24 between the bottom crosspiece 22 and the second side support 21', thereby forming a negative electrical zone. The first side support 21 has a vertical through hole 211 through which a positive electrode with a conductor is inserted and extended to the positioning groove 23 adjacent to the bottom crosspiece 22, thereby forming a positive electrical zone. A protruding tongue 27 is provided on the positioning rod 26' on the second side support 21' to guide the assembly of the lid 52 of the cell 5 into position to avoid electrical connection failure. Two guide grooves 28 are provided on the front and rear of the partition frame 2 and extended through the side supports 21 and 21' and the bottom crosspiece 22. A flexible seal 29 is secured to each guide groove 28. Each guide groove 28 has two inclined ends 281 which are extended upwardly and outwardly toward the upper part of each side support 21 and 21'. After mounting the seals in the guide grooves 28, the two distal ends of each seal 29 are respectively forced outwardly and stably retained on the glass plates 11 and 11'.
Das Gestell 3 umfaßt zwei vertikale Bahnen 31, die zur Posi-The frame 3 comprises two vertical tracks 31 which are used to position
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tionierung der Seitenstützen 21 und 21' beidseitig auf der Innenseite angeordnet sind, eine Mehrzahl von Niederhalteelementen 33, die so eingestellt sind, daß sie auf dem Druckblock 1 gleichmäßig gegen die Glasplatten 11 und 11' drücken, symmetrische Positionierteile 34, die zum Positionieren auf der Positioniereinheit 4 an seinen zwei entgegengesetzten Umfangsseitenwänden 32 an einer Unterseite vorgesehen sind, eine Mehrzahl von vorstehenden Trageteilen 35, die jeweils als Einheit mit den Positionierteilen 34 ausgebildet sind, eine Mehrzahl von vertikalen Führungsnuten 36, die zum Positionieren der während des Blottens verwendeten anderen Elemente beidseitig auf der Innenseite vorgesehen sind, zwei Aufnahmeteile 37, die beidseitig auf der Außenseite angeordnet sind, zwei Anschlußhalteplatten 38, die jeweils in die Aufnahmeteile 37 eingesetzt sind, und zwei Bananenstecker 39, die jeweils in den Anschlußhalteplatten 38 montiert sind. Die Anschlußhalteplatten 38 umfassen jeweils zwei Positioniernuten 381, die an zwei entgegengesetzten lateralen Seiten angeordnet sind und jeweils mit einem Aufnahmeteil 37 gekoppelt sind, einen Positionierstab 382 und einen Tragestab 383, die von ihrer Oberseite in umgekehrte Richtungen horizontal verlängert sind, und eine vorstehende Anzeigevorrichtung 384 zur Polaritätserkennung. Die Bananenstecker 39 sind an jeder Anschlußhalteplatte 38 jeweils auf dem Tragestab 383 angebracht. tion of the side supports 21 and 21' are arranged on both sides on the inner side, a plurality of hold-down elements 33 which are adjusted so as to press evenly against the glass plates 11 and 11' on the pressure block 1, symmetrical positioning parts 34 which are provided for positioning on the positioning unit 4 on its two opposite peripheral side walls 32 on a lower side, a plurality of projecting support parts 35 each formed as a unit with the positioning parts 34, a plurality of vertical guide grooves 36 which are provided for positioning the other elements used during blotting on both sides on the inner side, two receiving parts 37 which are arranged on both sides on the outer side, two terminal holding plates 38 which are respectively inserted into the receiving parts 37, and two banana plugs 39 which are respectively mounted in the terminal holding plates 38. The terminal holding plates 38 each comprise two positioning grooves 381 arranged on two opposite lateral sides and each coupled to a receiving part 37, a positioning rod 382 and a support rod 383 horizontally extended from their upper side in reverse directions, and a protruding indicator 384 for polarity detection. The banana plugs 39 are attached to each terminal holding plate 38 on the support rod 383, respectively.
Die Positioniereinheit 4 umfaßt einen ausgesparten Teil 4 2 an ihrer oberen Seitenwand auf der Mitte, eine im ausgesparten Teil 42 angebrachte Trageplatte 43, eine Dichtung 44 zum Positionieren im ausgesparten Teil 42 während eines elektrophoretischen Geliervorgangs, eine Mehrzahl von Fixierlöchern 41 zur Aufnahme der Positionierteile 34 des Gestells 3, die um den ausgesparten Teil 42 herum im Abstand angeordnet sind, zwei Hülsen 45, die als Einheit mit der oberen Seitenwand ausgebildet sind und an zwei gegenüberliegenden Seiten des ausgesparten Teils 42 quer angeordnet sind, und zwei Schwenkelemente 47, die jeweils mit den Hülsen 45 gekoppelt sind.The positioning unit 4 comprises a recessed part 42 on its upper side wall at the center, a support plate 43 mounted in the recessed part 42, a gasket 44 for positioning in the recessed part 42 during an electrophoretic gelation process, a plurality of fixing holes 41 for receiving the positioning parts 34 of the frame 3, which are arranged at a distance around the recessed part 42, two sleeves 45 formed as a unit with the upper side wall and arranged transversely on two opposite sides of the recessed part 42, and two pivot members 47 each coupled to the sleeves 45.
Die Kopplungsblöcke 45 weisen jeweils eine Kerbe 46 auf. Die Schwenkelemente 47 weisen jeweils eine Schwenkwelle 471 auf, die jeweils und axial in die Hülse 45 eingesetzt ist, zwei Nocken 473, die starr an zwei distalen Enden der Schwenkwelle 471 vorgesehen sind, und einen Fingerstab 472, der auf der Mitte senkrecht angeordnet ist und jeweils aus der Kerbe 46 an jeder Hülse 45 heraus verlängert ist. Die Nocken 473 weisen jeweils einen vorstehenden Teil 474 auf.The coupling blocks 45 each have a notch 46. The pivot members 47 each have a pivot shaft 471 each axially inserted into the sleeve 45, two cams 473 rigidly provided at two distal ends of the pivot shaft 471, and a finger rod 472 arranged vertically on the center and extended from the notch 46 on each sleeve 45. The cams 473 each have a protruding part 474.
Die Zelle 5 umfaßt ein Gehäuse 51 zum Enthalten der vorgenannten Teile und eines Puffers und einen Deckel 52, der das Gehäuse 51 bedeckt. Das Gehäuse 51 umfaßt zwei Kopplungslöcher 511 an seinen zwei gegenüberliegenden lateralen Seitenwänden. Der Deckel 52 umfaßt einen oberen Handgriff 521, zwei zylindrische Anschlußbuchsen 522 und 522', die aus seiner oberen Seitenwand an zwei entgegengesetzten Seiten des oberen Handgriffs 521 erhöht sind, und einen unteren Zwangsführungsblock 523, der für eine korrekte Polaritätspositionierung des Deckels 52 auf dem Gehäuse 51 aus seiner unteren Seitenwand erhöht ist.The cell 5 comprises a housing 51 for containing the aforementioned parts and a buffer, and a cover 52 covering the housing 51. The housing 51 comprises two coupling holes 511 on its two opposite lateral side walls. The cover 52 comprises an upper handle 521, two cylindrical connector sockets 522 and 522' raised from its upper side wall on two opposite sides of the upper handle 521, and a lower constraining block 523 raised from its lower side wall for correct polarity positioning of the cover 52 on the housing 51.
Die Blottingkassette 9 besteht aus zwei symmetrischen perforierten Platten, nämlich der ersten perforierten Platte 91 und der zweiten perforierten Platte 92, und einer Verschiebearretierung 93. Die erste perforierte Platte 91 umfaßt eine Mehrzahl von Fußelementen 911 zur Abstützung auf einer Tischplatte, die aus ihrer Rückseitenwand symmetrisch erhöht sind, eine Mehrzahl von Steckerstreifen 912, die von ihrer Unterseite aus nach unten verlängert sind, und eine Bahn 913, die aus ihrer Oberseite nach vorne erhöht ist. Die zweite perforierte Platte 92 umfaßt eine Mehrzahl von verschiedenen Größen von Justiersteckerlöchern 921, die zur Aufnahme der Steckerstreifen 912 der ersten perforierten Platte 91 an ihrer Unterseite vorgesehen sind, ein oberes Querstück 922 und eine Kerbe 923 an dem oberen Querstück 922 auf der Mitte zur Aufnahme der Bahn 913 der ersten perforierten Platte 91. Die Steckerstreifen 912 werden selektiv in die Justier-The blotting cassette 9 consists of two symmetrical perforated plates, namely the first perforated plate 91 and the second perforated plate 92, and a sliding lock 93. The first perforated plate 91 comprises a plurality of foot members 911 for support on a table top, which are symmetrically raised from its rear wall, a plurality of plug strips 912 extended downward from its lower side, and a track 913 raised forward from its upper side. The second perforated plate 92 comprises a plurality of different sizes of adjustment plug holes 921 provided for receiving the plug strips 912 of the first perforated plate 91 on its lower side, an upper crosspiece 922 and a notch 923 on the upper crosspiece 922 on the center for receiving the track 913 of the first perforated plate 91. The plug strips 912 are selectively inserted into the adjustment
steckerlöcher 912 eingesetzt, abhängig von dem gewünschten Abstand zwischen den perforierten Platten 91 und 92. Nach Einsetzen der Steckerstreifen 912 in die Justiersteckerlöcher 912 wird die Bahn 913 in der Kerbe 923 positioniert, und die Verschiebearretierung 93 wird mit dem oberen Querstück 922 gekoppelt, um die Bahn 913 am oberen Querstück 922 zu befestigen (siehe Figur 7).plug holes 912 depending on the desired distance between the perforated plates 91 and 92. After inserting the plug strips 912 into the adjusting plug holes 912, the track 913 is positioned in the notch 923 and the sliding lock 93 is coupled to the upper crosspiece 922 to secure the track 913 to the upper crosspiece 922 (see Figure 7).
Die Elektrodenplatten 10 und 10' umfassen jeweils eine Mehrzahl von parallel angeordneten Drahtnuten 102 und eine Mehrzahl von Durchgangslöchern 101, die jeweils an zwei distalen Enden jeder Drahtnut 102 angeordnet sind. Elektrodenleiter 103 werden jeweils durch die Durchgangslöcher 101 eingesetzt und in den Drahtnuten 102 angeordnet (siehe Figur 9).The electrode plates 10 and 10' each include a plurality of parallel-arranged wire grooves 102 and a plurality of through holes 101 each arranged at two distal ends of each wire groove 102. Electrode conductors 103 are respectively inserted through the through holes 101 and arranged in the wire grooves 102 (see Figure 9).
Es wird nun auf die Figuren 1, 2 und 2A Bezug genommen. Vor einer elektrophoretischen Gelierung werden sämtliche Teile angebracht und starr befestigt. Während der Ausrichtung wird die Trägerplatte 43 im ausgesparten Teil 42 an der Positioniereinheit 4 angebracht, dann wird der Unterteilungsrahmen im Gestell 3 angebracht, und dann wird das Gestell 3 mit dem Unterteilungsrahmen 2 auf der Positioniereinheit 4 angebracht, indem die Positionierteile 34 in die jeweiligen Fixierlöcher 41 gesteckt werden, und dann wird der Druckblock 1 in das Gestell 3 eingesetzt, und dann werden die Abstandhalter 12 und 12' zwischen den beiden Glasplatten 11 und 11' angeordnet und mit den Glasplatten 11 und 11' in das Gestell 3 zwischen dem Unterteilungsrahmen 2 und dem Druckblock 1 eingesetzt, und dann werden die Niederhalteelemente 3 3 angezogen, um den Druckblock 1 gegen die Glasplatten 11 und 11' zu drücken, wodurch ermöglicht wird, daß die Glasplatten 11 und 11' zwangsweise auf der Dichtung 29 getragen werden, und dann wird das Gestell 3 von der Positioniereinheit 4 entfernt. Nach Entfernen des Gestells 3 von der Positioniereinheit 4 wird die Trägerplatte 43 weggenommen (siehe die Figuren 3, 4 und 4A), dann wird die Dichtung 44 in den ausgesparten Teil 42 gelegt, und dann wird das Gestell 3 wieder in derReferring now to Figures 1, 2 and 2A, all parts are assembled and rigidly secured prior to electrophoretic gelation. During alignment, the support plate 43 is mounted in the recessed part 42 on the positioning unit 4, then the partition frame 2 is mounted in the rack 3, and then the rack 3 with the partition frame 2 is mounted on the positioning unit 4 by inserting the positioning parts 34 into the respective fixing holes 41, and then the pressure block 1 is inserted into the rack 3, and then the spacers 12 and 12' are arranged between the two glass plates 11 and 11' and inserted with the glass plates 11 and 11' into the rack 3 between the partition frame 2 and the pressure block 1, and then the hold-down members 3 3 are attracted to press the pressure block 1 against the glass plates 11 and 11', thereby allowing the glass plates 11 and 11' to be forcibly supported on the gasket 29, and then the rack 3 is removed from the positioning unit 4. After removing the frame 3 from the positioning unit 4, the support plate 43 is removed (see Figures 3, 4 and 4A), then the seal 44 is placed in the recessed part 42, and then the frame 3 is again placed in the
Positioniereinheit 4 angebracht, wodurch ermöglicht wird, daß dem Unterteilungsrahmen 2 und dem inneren Bereich des Gestells 3 bei der Dichtung 44 ein Platz zugeordnet wird, und dann werden die Fingerstäbe 472 der Schwenkelemente 47 jeweils nach innen gedreht, um den vorstehenden Teil 474 jedes Nocken 473 gegen die Trageteile 35 des Gestells 3 zu drücken. Zu diesem Zeitpunkt wird ein Gelatinefluid in den zwischen den Glasplatten 11 und 11' begrenzten Raum gefüllt, um eine erste Gelschicht zu erzeugen, und dann wird der Kamm 13 in den Höhenunterschied zwischen den Glasplatten 11 und 11' angebracht. Nach Gelierung des Gelatinefluids wird eine zweite Gelschicht hergestellt. Nach Gelierung der zweiten Gelschicht wird der Kamm 13 weggenommen, und eine Mehrzahl von Probenmulden 61 wird auf dem Gel 6 auf der Oberseite gebildet (siehe Figur 7). Danach wird das Gestell 3 aus der Positioniereinheit 4 entfernt und in die Zelle 5 gesetzt, wodurch ermöglicht wird, daß die Montagestäbe 26 und 26' des Unterteilungsrahmens 2 jeweils mit den Kopplungslöchern 511 am Gehäuse 51 der Zelle 5 in Eingriff treten, und dann wird ein Puffer in das Gehäuse 51 und zwischen zwei Gele (oder Unterteilungsrahmen 2) eingefüllt, wodurch bewirkt wird, daß die negative Elektrode, die Gele 6, der Puffer und die positive Elektrode eine Schleife bilden. Danach wird eine Probe zu den Mulden 61 im Gel 6 geladen, dann wird der Deckel 52 auf das Gehäuse 51 gedeckt (siehe die Figuren 5, 6 und 6A), und dann werden die Bananenstecker 39 elektrisch angeschlossen, wodurch bewirkt wird, daß die Probe in den Löchern im Gel 6 in Ordnung angeordnet wird. Nachdem sie eine gewisse Zeitspanne in Betrieb waren, werden der Unterteilungsrahmen und das Gestell 3 aus dem Gehäuse 51 entfernt, dann werden die Niederhalteelemente des Gestells 3 gelockert, und dann werden der Druckblock 1 und die Glasplatten 11 und 11' aus dem Gestell 3 entfernt, und dann wird das Gel 6 aus dem Gestell 3 weggenommen, und dann wird der Unterteilungsrahmen 2 vom Gestell 3 getrennt, folglich kann dann der Blottingvorgang vonstatten gehen.positioning unit 4, thereby allowing the partition frame 2 and the inner portion of the stage 3 to be allocated a space at the seal 44, and then the finger rods 472 of the pivot members 47 are each rotated inward to press the projecting part 474 of each cam 473 against the support parts 35 of the stage 3. At this time, a gelatin fluid is filled into the space defined between the glass plates 11 and 11' to produce a first gel layer, and then the comb 13 is fitted into the height difference between the glass plates 11 and 11'. After gelation of the gelatin fluid, a second gel layer is produced. After gelation of the second gel layer, the comb 13 is removed, and a plurality of sample wells 61 are formed on the gel 6 on the upper side (see Figure 7). Thereafter, the stage 3 is removed from the positioning unit 4 and placed in the cell 5, thereby allowing the mounting rods 26 and 26' of the partition frame 2 to engage the coupling holes 511 on the housing 51 of the cell 5, respectively, and then a buffer is filled into the housing 51 and between two gels (or partition frames 2), thereby causing the negative electrode, gels 6, buffer and positive electrode to form a loop. Thereafter, a sample is loaded into the wells 61 in the gel 6, then the lid 52 is covered on the housing 51 (see Figures 5, 6 and 6A), and then the banana plugs 39 are electrically connected, thereby causing the sample to be arranged in order in the holes in the gel 6. After operating for a certain period of time, the partition frame and the rack 3 are removed from the housing 51, then the hold-down members of the rack 3 are loosened, and then the pressure block 1 and the glass plates 11 and 11' are removed from the rack 3, and then the gel 6 is taken out of the rack 3, and then the partition frame 2 is separated from the rack 3, thus the blotting operation can then proceed.
I.I.
Es wird nun auf die Figuren 7 bis 11 Bezug genommen. Bevor mit dem Blottingvorgang begonnen wird, werden die zwei Stücke Filterpapier 8 und die Transfermembran 7 vorbehandelt, um das Auftreten von Blasen im Filterpapier 8, der Transfermembran 7 5 oder dem Gel während des Blottens zu verhindern, dann wird die Transfermembran 7 an einer Seite des Gels 6 adheriert, und dann werden die beiden Stücke Filterpapier 8 jeweils an der anderen Seite des Gels 6 und der Transfermembran 7 adheriert, und dann werden das Gel 6 und die Transfermembran 7 mit dem Filterpapier 8 an der Blottingkassette 9 befestigt. Danach werden die Anschlußhalteplatten 38 jeweils an den Einsatzschlitzen 37 am Gestell 3 befestigt, dann wird das Gestell 3 in das Gehäuse 51 der Zelle 5 gesetzt, wodurch ermöglicht wird, daß die Montagestäbe 382 der Anschlußhalteplatten 38 jeweils an den Kopplungslöchern 511 am Gehäuse 51 befestigt werden, und dann wird die Blottingkassette 9 in das Gestell 3 gesetzt, und dann werden die Elektrodenplatten 10 und 10' jeweils in die vertikalen Führungsnuten 36 im Gestell 3 eingeführt, und die Bananenstecker 39 werden jeweils mit den Elektrodenplatten 10 und 10' verbunden, und dann wird der Puffer in die Zelle 5 gegossen, und dann wird der Deckel 52 auf das Gehäuse 51 gedeckt, und es wird mit dem Blottingverfahren nach Anschluß an eine Stromversorgung begonnen. Nach dem Blotten wird das Gestell 3 von der Zelle 5 entfernt, dann wird die Blottingkassette 9 auseinandergebaut, und die geblottete Transfermembran wird erhalten.Referring now to Figures 7 to 11, before starting the blotting process, the two pieces of filter paper 8 and the transfer membrane 7 are pretreated to prevent the occurrence of bubbles in the filter paper 8, the transfer membrane 7 or the gel during blotting, then the transfer membrane 7 is adhered to one side of the gel 6, and then the two pieces of filter paper 8 are respectively adhered to the other side of the gel 6 and the transfer membrane 7, and then the gel 6 and the transfer membrane 7 are attached to the blotting cassette 9 with the filter paper 8. Thereafter, the terminal holding plates 38 are respectively attached to the insertion slots 37 on the rack 3, then the rack 3 is set in the housing 51 of the cell 5, thereby allowing the mounting rods 382 of the terminal holding plates 38 to be respectively attached to the coupling holes 511 on the housing 51, and then the blotting cassette 9 is set in the rack 3, and then the electrode plates 10 and 10' are respectively inserted into the vertical guide grooves 36 in the rack 3, and the banana plugs 39 are respectively connected to the electrode plates 10 and 10', and then the buffer is poured into the cell 5, and then the lid 52 is covered on the housing 51, and the blotting process is started after connecting to a power supply. After blotting, the rack 3 is removed from the cell 5, then the blotting cassette 9 is disassembled, and the blotted transfer membrane is obtained.
Obwohl nur eine Ausführungsform der vorliegenden Erfindung dargestellt und beschrieben worden ist, versteht es sich, daß verschiedene Abwandlungen und Änderungen an derselben vorgenommen werden könnten, ohne vom Geist und Gebiet der offenbarten Erfindung abzuweichen.Although only one embodiment of the present invention has been shown and described, it will be understood that various modifications and changes could be made thereto without departing from the spirit and scope of the disclosed invention.
Claims (3)
einen Druckblock;
zwei parallele Glasplatten von unterschiedlichen Höhen;
zwei Abstandhalter, die beidseitig zwischen den Glasplatten festgehalten werden;
einen Kamm zum Anbringen zwischen dem Höhenunterschied zwischen den Glasplatten;
einen Unterteilungsrahmen, wobei der Unterteilungsrahmen umfaßt: eine erste Seitenstütze, eine parallel zur ersten Seitenstütze angeordnete zweite Seitenstütze, ein zwischen der ersten Seitenstütze und der zweiten Seitenstütze an einer unteren Seite verbundenes Bodenquerstück, eine zwischen den Seitenstützen verbundene und über dem Bodenquerstück im Abstand angeordnete Querplatte, zwei Positionierstäbe, die zur Befestigung an zwei gegenüberliegenden lateralen Seiten einer Zelle jeweils an einer Oberseite von den Seitenstützen aus nach außen zu erhöht sind, zwei Führungsnuten, die an seiner Vorder- bzw. Rückseite vorgesehen sind und durch die Seitenstützen und das Bodenquerstück verlängert sind, und zwei Dichtungen, die jeweils an den Führungsnuten befestigt sind, wobei die Seitenstützen jeweils eine Positioniernut aufweisen, die zur Kopplung mit zwei vertikalen Seitenbahnen im Innern eines Gestells an einer Außenseite in Längsrichtung angeordnet ist, wobei das Bodenquerstück eine Positioniernut aufweist, die an seiner Unterseite in Verbindung mit der Positioniernnut an jeder der Seitenstützen in Längsrichtung angeordnet ist, wobei die zweite Seitenstütze ein vertikales Durchgangsloch aufweist, durch das eine negative Elektrode mit einem Leiter eingesetzt und an einem Positionierblock zwischen dem Bodenquerstück und der zweiten Seitenstütze befestigt ist, so daß eine negative elektrische Zone gebildet wird, wobei die erste Seitenstütze ein vertikales Durchgangsloch aufweist, durch das eine positive Elektrode mit einem Leiter eingesetzt und bis zur Positioniernut an der ersten Seitenstütze benachbart zum Bodenquerstück verlängert ist, so daß eine positive elektrische Zone gebildet wird, wobei der Positionierstab der zweiten Seitenstütze eine vorstehende Zunge umfaßt, um die Montage einer Zelle in ihre Position zu führen, um einen elektrischen Verbindungsfehler zu vermeiden;
ein Gestell, wobei das Gestell umfaßt: zwei vertikale Bahnen, die zur Positionierung der Seitenstützen des Unterteilungsrahmens beidseitig auf der Innenseite angeordnet sind, eine Mehrzahl von Niederhalteelementen, die so eingestellt sind, daß sie auf dem Druckblock gegen die Glasplatten drücken, symmetrische Positionierteile, die zum Positionieren auf einer Positioniereinheit an seinen zwei entgegengesetzten Umfangsseitenwänden an einer Unterseite vorgesehen sind, eine Mehrzahl von vorstehenden Trageteilen, die jeweils als Einheit mit den Positionierteilen ausgebildet sind, eine Mehrzahl von vertikalen Führungsnuten, die zum Positionieren von Blottingelementen beidseitig auf der Innenseite vorgesehen sind, zwei Aufnahmeteile, die beidseitig auf der Außenseite angeordnet sind, zwei Anschlußhalteplatten, die jeweils in die Aufnahmeteile eingesetzt sind, und zwei Bananenstecker, die jeweils in den Anschlußhalteplatten montiert sind, wobei die Anschlußhalteplatten jeweils umfassen: zwei Positioniernuten, die an zwei entgegengesetzten lateralen Seiten angeordnet sind und mit den Aufnahmeteilen gekoppelt sind, einen Positionierstab und einen Tragestab, die von ihrer Oberseite in umgekehrte Richtungen horizontal verlängert sind, und eine vorstehende Anzeigevorrichtung zur Polaritätserkennung;
eine Positioniereinheit, wobei die Positioniereinheit umfaßt: einen ausgesparten Teil an ihrer oberen Seitenwand auf der Mitte, eine in dem ausgesparten Teil angebrachte Trageplatte, eine Dichtung zum Positionieren in dem ausgesparten Teil während eines elektrophoretischen Geliervor- . gangs, eine Mehrzahl von Fixierlöchern zur Aufnahme der Positionierteile des Gestells, die um den ausgesparten Teil herum im Abstand angeordnet sind, zwei Hülsen, die als Einheit mit der oberen Seitenwand ausgebildet sind und an zwei gegenüberliegenden Seiten des ausgesparten Teils quer angeordnet sind, und zwei Schwenkelemente, die jeweils mit den Hülsen gekoppelt sind, wobei die Kopplungsblöcke jeweils eine Kerbe aufweisen, wobei die Schwenkelemente jeweils umfassen: eine Schwenkwelle, die jeweils und axial in die Hülse eingesetzt ist, zwei Nocken, die starr an zwei distalen Enden der Schwenkwelle vorgesehen sind, wobei die Nocken jeweils einen vorstehenden Teil aufweisen, und einen Fingerstab, der auf der Mitte senkrecht angeordnet ist und jeweils aus der Kerbe an jeder Hülse heraus verlängert ist, zum Drehen von Hand, um den vorstehenden Teil von jedem der Nocken gegen die Trageteile des Gestells zu drücken;
eine Zelle zur Aufnahme des Gestells und des Unterteilungsrahmens in dem Gestell, wobei die Zelle ein Gehäuse und einen Deckel umfaßt, der das Gehäuse bedeckt, wobei das Gehäuse umfaßt: zwei Kopplungslöcher an seinen zwei gegenüberliegenden lateralen Seitenwänden zum Positionieren der Montagestäbe des Gestells, wobei der Deckel umfaßt: einen oberen Handgriff, zwei zylindrische Anschlußbuchsen an zwei entgegengesetzten Seiten des oberen Handgriffs, zwei elektrische Anschlüsse, die jeweils in den Anschlußbuchsen angebracht sind, und einen unteren Zwangsführungsblock, der für eine korrekte Polaritätspositionierung des Deckels auf dem Gehäuse aus seiner unteren Seitenwand erhöht ist;
eine Blottingkassette, wobei die Blottingkassette umfaßt: eine erste perforierte Platte, eine zweite perforierte Platte und eine Verschiebearretierung, wobei die erste perforierte Platte umfaßt: eine Mehrzahl von Fußelementen zur Abstützung auf einer Tischplatte, die aus ihrer Rückseitenwand symmetrisch erhöht sind, eine Mehrzahl von Steckerstreifen, die von ihrer Unterseite aus nach unten verlängert sind, und eine Bahn, die aus ihrer Oberseite nach vorne erhöht ist, wobei die zweite perforierte Platte umfaßt: eine Mehrzahl von . verschiedenen Größen von Justiersteckerlöchern, die zur Aufnahme der Steckerstreifen der ersten perforierten Platte an ihrer Unterseite vorgesehen sind, ein oberes Querstück und eine Kerbe an dem oberen Querstück auf der Mitte zur Aufnahme der Bahn der ersten perforierten Platte, wobei die Verschiebearretierung mit dem oberen Querstück der ersten perforierten Platte gekoppelt ist, um die Bahn der zweiten perforierten Platte an dem oberen Querstück der ersten perforierten Platte zu befestigen; und
zwei Elektrodenplatten, die jeweils in das Gestell eingesetzt sind, wobei die Elektrodenplatten jeweils eine Mehrzahl von parallel angeordneten Drahtnuten und eine Mehrzahl von Durchgangslöchern zur Aufnahme von Elektrodenleitern umfassen, die jeweils an zwei distalen Enden jeder der Drahtnut angeordnet sind. 1. Apparatus for electrophoretic separation and blotting, comprising:
a printing block;
two parallel glass plates of different heights;
two spacers that are held between the glass plates on both sides;
a comb to adjust the height difference between the glass panels;
a partition frame, the partition frame comprising: a first side support, a second side support arranged parallel to the first side support, a floor crosspiece connected between the first side support and the second side support on a lower side, a cross plate connected between the side supports and arranged at a distance above the floor crosspiece, two positioning rods each raised outwardly from the side supports on an upper side for attachment to two opposite lateral sides of a cell, two guide grooves provided on its front and rear sides respectively and extended by the side supports and the floor crosspiece, and two seals each attached to the guide grooves, the side supports each having a positioning groove arranged on an outer side in the longitudinal direction for coupling to two vertical side panels inside a frame, the floor crosspiece having a positioning groove arranged on its underside in connection with the positioning groove on each of the side supports in the longitudinal direction, the second side support having a vertical through hole through which a negative Electrode having a conductor is inserted and secured to a positioning block between the bottom crosspiece and the second side support so as to form a negative electrical zone, the first side support having a vertical through-hole through which a positive electrode having a conductor is inserted and extended to the positioning groove on the first side support adjacent the bottom crosspiece so as to form a positive electrical zone, the positioning bar of the second side support including a projecting tongue to guide the assembly of a cell into position to avoid electrical connection failure;
a frame, the frame comprising: two vertical tracks arranged on both sides of the inner side for positioning the side supports of the partition frame, a plurality of hold-down elements set to press against the glass plates on the pressure block, symmetrical positioning parts provided for positioning on a positioning unit on its two opposite peripheral side walls on a bottom side, a plurality of projecting support parts each formed as a unit with the positioning parts, a plurality of vertical guide grooves provided on both sides of the inner side for positioning blotting elements, two receiving parts arranged on both sides of the outer side, two terminal holding plates each inserted into the receiving parts, and two banana plugs each mounted in the terminal holding plates, the terminal holding plates each comprising: two positioning grooves arranged on two opposite lateral sides and coupled to the receiving parts, a positioning rod and a support rod which can be turned from their upper side in reverse directions are extended horizontally, and a protruding indicator for polarity detection;
a positioning unit, the positioning unit comprising: a recessed part on its upper side wall at the center, a support plate mounted in the recessed part, a seal for positioning in the recessed part during an electrophoretic gelling process. gangs, a plurality of fixing holes for receiving the positioning parts of the frame, which are spaced around the recessed part, two sleeves formed as a unit with the upper side wall and arranged transversely on two opposite sides of the recessed part, and two pivot members each coupled to the sleeves, the coupling blocks each having a notch, the pivot members each comprising: a pivot shaft each and axially inserted into the sleeve, two cams rigidly provided at two distal ends of the pivot shaft, the cams each having a projecting part, and a finger rod arranged perpendicularly on the center and each extended from the notch on each sleeve, for rotating by hand to press the projecting part of each of the cams against the support parts of the frame;
a cell for housing the rack and the partition frame in the rack, the cell comprising a housing and a cover covering the housing, the housing comprising: two coupling holes on its two opposite lateral side walls for positioning the mounting rods of the rack, the cover comprising: an upper handle, two cylindrical terminal sockets on two opposite sides of the upper handle, two electrical terminals respectively mounted in the terminal sockets, and a lower constraining block raised from its lower side wall for correct polarity positioning of the cover on the housing;
a blotting cassette, the blotting cassette comprising: a first perforated plate, a second perforated plate and a sliding lock, the first perforated plate comprising: a plurality of foot members for support on a table top symmetrically raised from its rear wall, a plurality of connector strips extended downwardly from its bottom and a track raised forwardly from its top, the second perforated plate comprising: a plurality of different sizes of alignment plug holes provided for receiving the connector strips of the first perforated plate on its bottom, an upper crosspiece and a notch on the upper crosspiece at the center for receiving the track of the first perforated plate, the sliding lock being coupled to the upper crosspiece of the first perforated plate to secure the track of the second perforated plate to the upper crosspiece of the first perforated plate; and
two electrode plates each inserted into the frame, the electrode plates each comprising a plurality of parallel arranged wire grooves and a plurality of through holes for receiving electrode conductors, each arranged at two distal ends of each of the wire grooves.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/397,087 US6193868B1 (en) | 1999-09-16 | 1999-09-16 | Electrophoretic separating and blotting apparatus |
| DE29922680U DE29922680U1 (en) | 1999-09-16 | 1999-10-13 | Device for electrophoretic separation and blotting |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/397,087 US6193868B1 (en) | 1999-09-16 | 1999-09-16 | Electrophoretic separating and blotting apparatus |
| DE29922680U DE29922680U1 (en) | 1999-09-16 | 1999-10-13 | Device for electrophoretic separation and blotting |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
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Family
ID=27219314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE29922680U Expired - Lifetime DE29922680U1 (en) | 1999-09-16 | 1999-10-13 | Device for electrophoretic separation and blotting |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE29922680U1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1365235A2 (en) | 2002-05-24 | 2003-11-26 | OWL Separation Systems, Inc. | Vertical electrophoresis system |
-
1999
- 1999-10-13 DE DE29922680U patent/DE29922680U1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1365235A2 (en) | 2002-05-24 | 2003-11-26 | OWL Separation Systems, Inc. | Vertical electrophoresis system |
| EP1365235A3 (en) * | 2002-05-24 | 2004-10-27 | OWL Separation Systems, Inc. | Vertical electrophoresis system |
| US6942775B1 (en) | 2002-05-24 | 2005-09-13 | Owl Separation Systems, Inc. | Vertical electrophoresis system |
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Effective date: 20021216 |
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| R151 | Utility model maintained after payment of second maintenance fee after six years |
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| R152 | Utility model maintained after payment of third maintenance fee after eight years |
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| R071 | Expiry of right |