DE2722586C3 - Pipette für eine Kulturflüssigkeit für Gewebe- und Zellkulturen - Google Patents

Description

bzw. das Vermischen durch die vielen kleinen öffnungen wird die Verteilung der Flüssigkeit verbessert gegenüber derjenigen, die mit einer üblichen Pipette erreicht werden kann.

Die Fig.2 zeigt eine andere Ausführungsform, bei der der Endteil der Pipette einen trapezoiden Querschnitt besitzt und in den verschiedenen Flächen eine Anzahl kleiner öffnungen vorgesehen sind. In diesem Falle wird das Vermischen bzw. die Bewegung der Flüssigkeit weiter verbessert da das Ausstoßen der Flüssigkeit in verschiedene Richtungen erfolgt. Die in F i g. 3 dargestellte Ausführungsform ist ähnlich der in F i g. 1 gezeigten Pipette mit der Ausnahme, daß sich auch in der Seitenwand einige kleine Öffnungen befinden, neben denen in der Bodenfläche. Die F i g. 4 zeigt eine weitere Ausführungsform, bei der der Endteil der Pipette eine gekrümmte Oberfläche besitzt, in der sich eine Anzahl kleiner öffnungen befindet, um wiederum ein Ausfließen der Flüssigkeit in verschiedene Richtungen zu ermöglichen.

Bei praktischen Ausführungsformen ist die Pipette insgesamt rohrförmig und besitzt einen inneren Durchmesser in der Größenordnung von 10 mm und besteht am besten aus Glas, Polytetrafluoräthylen oder einem PoIycarbonaL Die kleinen öffnungen können

ίο einen inneren Durchmesser im Bereich von einigen μίτι bis zu einigen mm besitzen (im allgemeinen in einen inneren Durchmesser in der Größenordnung von 10 μπι oder darunter, da die zu züchtenden Zellen einen Durchmesser von mehr als ungefähr 10 μπι besitzen, wenn man annimmt, daß sie kugelförmig sind).

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Pipette für eine Kulturflüssigkeit für Gewebe- und Zellkulturen, dadurch gekennzeichnet, daß die Pipette (1) im Endteil eine Anzahl kleiner Öffnungen (lajaufweist.

   Die Erfindung betrifft eine Pipette fur eine Kulturflüssigkeit für Gewebe- und Zellkulturen.

   Das Zuchten von biologischem Gewebe und Zellmaterial ist eine grundlegende Technik bei der Erforschung bzw. Untersuchung vieler unterschiedlicher Zellarten in der Medizin, Biologie, Pharmazie, Landwirtschaft und auf anderen Gebieten. Jedoch traten bei der Züchtung über mehrere aufeinanderfolgende Generationen technische Schwierigkeiten auf bezüglich der Zurverfügungssteliung bzw. Aufrechterhaltung stabilisierter Stämme, die weitergezüchtet werden können.

   Durch die neuere Entwicklung von »Gaskulturen«, d.h. Kulturen unter einer bestimmten Atmosphäre in einem Inkubator, ist es möglich geworden, solche speziellen Zellen, wie Leberzellen, Nervenzellen und Zellen der Hypophyse zu züchten, tue bisher als nicht züchtbar angesehen wurden. Im folgenden wird eine kurze Zusammenfassung der üblichen Praxis bei der Züchtung von Zellen angegeben. Zunächst wird eine gegebene Zahl von Zellen in ein Kulturgefäß gegeben, wie z. B. eine Petri-Schale, und mit einer Kulturlösung verdünnt, bevor das Gefäß in eii^n für die Kultur geeigneten Brutschrank gebracht wird.

   Nach einer vorgegebenen Zeit wii 1 das Gefäß aus dem Brutschrank entnommen, um die Entwicklung der Kultur durch Untersuchung des Zellwachstums im Mikroskop zu prüfen. Wenn sichergestellt ist, daß die gewünschten Zellen in dem gesamten Gefäß gewachsen sind, wird dieses auf eine saubere Arbeitsplatte gebracht, die aseptisch gehalten wird. Die Kulturlösung in dem Gefäß wird in eine Pipette aufgezogen und verworfen, und die im Gefäß verbleibenden Zellen werden durch Einspritzen einer Pufferlösung gewaschen, die anschließend abgezogen wird. Daraufhin wird ein Exzym, wie z. B. Trypsin, eingespritzt, damit sich am Boden des Gefäßes fortgesetzte Zellen ablösen. Man läßt das Gefäß einige Minuten in diesem Zustand stehen und entfernt dann das Enzym. Das Gefäß wird einige Minuten freigehalten und anschließend wird eine Kulturlösung eingespritzt, durch die die Wirkung des Trypsins aufgehoben wird. Nach dem Einspritzen der Kulturlösung wird das Gemisch geschüttelt und zentrifugiert. Die Oberstehende Flüssigkeit des zentrifugierten Materials wird abgezogen und verworfen. Dann wird eine Kulturlösung eingespritzt und geschüttelt, um die Zellen wieder in Suspension zu bringen. Die die Zellen in Suspension enthaltende Lösung wird in einer gegebenen Menge in getrennte neue Gefäße verteilt, und in diese Gefäße wird eine Kulturlösung eingespritzt, bis eine gegebene Konzentration erreicht ist. Die Gefäße werden dann von der Arbeitsplatte in den Brutschrank gegeben, in dem eine bestimmte Atmosphäre aufrechterhalten wird, damit die Kultur wachsen kann.

   Dieses Verfahren besitzt verschiedene Nachteile. Um das Gewebe- oder Zellwachstum mit Hilfe eines Mikroskops zu untersuchen, ist es notwendig, das Kulturgefäß häufig aus dem Brutschrank zu entfernen und in die Atmosphäre (Raumbedingungen) zu bringen. Das führt zu einer plötzlichen Änderung der Wachstumsbedingungen, da die Kultur aus einer Umgebung, in der eine bestimmte Gasatmosphäre, Temperatur und Feuchtigkeit aufrechterhalten werden, entnommen und den Raumbedingungen ausgesetzt wird. Das kann einen kritischen, d, h. schädlichen Einfluß auf die zu züchtenden Gewebe oder Zellen ausüben. Außerdem kanu eine Verunreinigung mit verschiedenen Keimen eintreten.

   ίο Wenn der Laborant in Abhängigkeit von dem Ergebnis der mikroskopischen Untersuchung die Kultur auf der sauberen Arbeitsplatte handhabt, kann das zu einem direkten Einfluß auf die Gewebe oder Zeilen führen. Das zeigt, daß es unmöglich ist, eine standardisierte

   is Kultur unter gegebenen Bedingungen zu halten. Auch kann die Erfahrung und Übung des Fachmanns bzw. Laboranten einen Einfluß auf die zu züchtenden Gewebe oder Zellen ausüben. Als Folge davon kommt es nicht selten vor, daß zwei Forscher, die sich mit dem gleichen Thema beschäftigen, gegenteilige Schlüsse ziehen. Da die Ausbildung und Übung von Laboranten eine lange Zeit erfordert und erfahrene Laboranten selten sind, führen zur Zeit die Forscher die Züchtung häufig selbst durch.

   Es ist Aufgabe der Erfindung, eine Pipette für Gewebe- und Zellkukuren zu entwickeln, die ein wirksames Vermischen und eine verbesserte Verteilung ermöglicht, wenn eine Flüssigkeit wiederholt in der Pipette aufgesaugt und aus ihr ausgelassen wird.

   Die diese Aufgabe lösende erfindungsgemäße Pipette weist im Endteil eine Anzahl kleiner Öffnungen auf.

   Die Anzahl kleiner öffnungen im Endteil verbessert die Vermischung und Verteilung einer in die Pipette aufgesaugten Flüssigkeit beim Wiederaustritt aus ihr.

   Diese Pipette ist als Verteilervorrichtung (zum Aufnehmen und Vermischen der Kulturflüssigkeit) für Gewebe- und Zellkulturen geeignet, insbesondere wenn mehrere aufeinanderfolgende Generationen gezüchtet werden sollen.

   •to Die erfindungsgemäße Pipette kann wirksam angewandt werden in einem automatischen Kultursystem zum Aufziehen, Wiederabgeben und zur Verteilung einer Kulturlösung, die keine Zellen enthält, und sie ist besonders zur Standardisierung der Handhabung einer Kulturlösung geeignet, wenn die Kultur über mehrere Generationen erfolgen soll.

   Ausführungsbeispiele der Erfindung sind anhand einer Zeichnung näher erläutert, in der
   F i g. 1 bis 4 schematische Querschnitte verschiedener

   Endteile einer erfindungsgemäßen Pipette, und

   Fig.5 eine in eine Flüssigkeit in einem Gefäß für deren Bewegung eintauchende Pipette zeigen.

   Die F i g. 1 stellt einen Querschnitt einer Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Pipette dar. Die Pipette umfaßt einen Endteil 1, der z. B. aus einem Kunstharz besteht und z. B. die Form eines Hohlzylinders besitzt. An der Stirnfläche bzw. Bodenfläche der Pipette 1 befindet sich eine Anzahl kleiner Öffnungen la. Wenn dieser Endteil der Pipette in eine Flüssigkeit

   &0 11, wie eine KültüflösUng, die in einem Kultürgefäß 10 enthalten ist, eintaucht und das entgegengesetzte Ende mit einer Pumpe (bzw. einem Gummiball) verbunden wird, um die Flüssigkeit wiederholt in die Pipette aufzuziehen und aus ihr auszustoßen, wird die

   *>^r· Flüssigkeit 11 durch diese kleinen Öffnungen aufgezogen und ausgestoßen, die sich an dem Endstück der Pipette 1 befinden, wodurch eine gute Vermischung eintritt (vgl. hierzu auch F i g. 5). Durch diese Bewegung