DE2706227C2 - - Google Patents

Description

In der DE-PS 26 38 551 werden neue Sulfonylbenzimidazole beschrieben, die antivirale Wirkung besitzen. Die vorliegende Erfindung betrifft 1-Sulfonyl-5(6)-subst.-benzimidazole, die ebenfalls antivirale Wirkung besitzen.

Der obere Atmungstrakt wird äußerst häufig von Viren befallen. Allein in den Vereinigten Staaten von Amerika kommt es entsprechenden Schätzungen zufolge jährlich zu nahezu 1 Milliarde derartiger Erkrankungen. Entsprechende, in England von Tyrell und Bynoe 1966 durchgeführte Untersuchungen zeigen, daß 74% der Personen mit Erkältungen durch Rhinoviren infiziert sind. Es wurden bereits über 80 Stämme von Rhinoviren identifiziert. Die Entwicklung einer einfachen Rhinovirenvakzine ist somit nicht möglich. Günstiger scheinen die Aussichten zur Bekämpfung solcher Krankheiten daher mit Chemotherapeutika zu sein.

Die Fähigkeit chemischer Verbindungen zur Unterdrückung des Wachstums von Viren in vitro wurde bereits unter Einsatz eines Virus-Plättchensuppressionstests gezeigt, der dem in Applied Microbiology, 9(1), 66 (1961), von Siminoff beschriebenen Test ähnlich ist.

Bestimmte, antifungal wirksame 1-Dimethylaminosulfonyl-2-aminobenzimidazol-Verbindungen werden in der US-PS 38 53 908 beschrieben.

Aus DE-OS 25 28 846 sind antiviral wirksame, in 1-Stellung eine alkyl- oder dialkylamino-substituierte Sulfonylgruppe tragende, in 5- oder 6-Stellung substituierte 2-Aminobenzimidazole bekannt.

Aus der Literaturstelle J. Med. Chem. 12, 1010 (1969) sind 1-(benzimidazol-2-yl)-3-substituierte Harnstoffe bekannt, die eine antivirale Wirksamkeit aufweisen. Die Wirksamkeit gegenüber Rhinoviren ist jedoch begrenzt.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung von neuen Benzimidazolverbindungen zu schaffen, die das Wachstum von Viren, insbesondere Rhinoviren, Polioviren, Coxsackieviren, Echoviren und Mengoviren, inhibieren.

Gegenstand der Erfindung sind pharmakologisch nützliche Sulfonylbenzimidazol-Verbindungen der allgemeinen Formel

in der
R¹ für i-Propyl oder -N(CH₃)₂ und
R² für

steht, worin R³ C₁-C₇-Alkyliden bedeutet und R² in der 5- oder 6-Stellung steht.

Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel (I), das dadurch gekennzeichnet ist, daß man in an sich bekannter Weise eine tautomere Benzimidazolverbindung der allgemeinen Formel

in der R¹ die oben angegebene Bedeutung besitzt,

• a) mit einem C₁-C₇-Alkylmagnesiumhalogenid oder C₁-C₇-Alkyllithium umsetzt,
• b) anschließend zu einer Verbindung der Formel (I), worin R² bedeutet und R⁴ für C₁-C₇-Alkyl steht, hydrolysiert und
• c) danach zu einer Verbindung der Formel (I), worin R² bedeutet und R³ für C₁-C₇-Alkyliden steht, dehydratisiert.

Beispiele für erfindungsgemäße Verbindungen sind:
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-5(6)-(a-n-propylidenbenzyl)-benzimidazol,
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-5(6)-(α-n-pentylidenbenzyl)-benzimidazol,
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-5(6)-(α-2,4-dimethyl-3-pentylidenbenzol)-benzimidazol,
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-5(6)-(α-n-hexylidenbenzyl)-benzimidazol,
1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-5(6)-(α-sek.-butylidenbenzyl)-benzimidazol,
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-α-isopropylidenbenzylbenzimidazol,
1-Isopropylsulfonyl-2-amino-5(6)-(α-2,4-dimethyl-3-pentylidenbenzyl)-benzimidazol.

Der Ausdruck "tautomeres Benzimidazol" bedeutet ein Benzimidazol-Reagens, das an jedem Stickstoffatom mit einem Wasserstoffatom substituiert sein kann. Das Benzimidazol-Reagens, das am Stickstoff unsubstituiert ist und eine Substituentengruppe in der 5-Stellung des Benzolmolekülteils enthält, besitzt eine entsprechende tautomere Form, worin der Substituent alternativ in der 6-Stellung steht. Das Isomerengemisch kann auch durch Numerierung der entsprechenden Stellungen als 5(6) bezeichnet werden.

Die folgenden Definitionen beziehen sich auf die verschiedenen in der vorliegenden Anmeldung verwendeten Angaben bzw. Ausdrücke.

Die Angabe "C₁-C₇-Alkyl" bedeutet geradkettige und verzweigtkettige aliphatische Gruppen mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen wie Methyl, Äthyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl, Pentyl, Isopentyl, Hexyl, Isohexyl, Heptyl, Isoheptyl, 2,4-Dimethyl-3-pentyl, tert.-Butyl und Neopentyl.

Die Angabe "C₁-C₇-Alkyliden" bedeutet geradkettige und verzweigtkettige Gruppen mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen wie Methylen, Äthyliden, Propyliden, Isopropyliden, Butyliden, Isobutyliden, 3-Methyl-2-butyliden, 2,4-Dimethyl-3-pentyliden und n-Hexyliden.

Bei dem obigen Verfahren sind geeignete Dehydratisierungsmittel starke Säuren wie p-Toluolsulfonsäure, Schwefelsäure, Trifluoressigsäure, Methansulfonsäure oder Trifluormethansulfonsäure. Das C₁-C₇-Alkylmagnesiumhalogenid ist ein geeignetes Grignardreagens, wobei anschließend hydrolysiert wird. Das C₁-C₇-Alkyllithium-Reagens ergibt ein Produkt, das ähnlich ist wie das Grignardreagens. Die bevorzugten Lösungsmittel für die Alkylierungsverfahren sind inerte organische Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran; aromatische Verbindungen wie Benzol oder Toluol; und Äther wie Diäthyläther. Die bevorzugten Lösungsmittel für das Dehydratationsverfahren sind aromatische Verbindungen wie Benzol oder Toluol; Alkane wie Hexan; und halogenierte Kohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid und Chloroform. Der normalerweise verwendete Temperaturbereich liegt bei etwa 25°C bis zur Rückflußtemperatur des Lösungsmittels.

Die Ausgangsmaterialien der Formel (II) werden hergestellt, wie in der DE-OS 26 38 551 beschrieben.

Das Reaktionsprodukt ist eine 1-Sulfonylbenzimidazolverbindung. Das Produkt kann durch Filtration des Reaktionsgemisches und Konzentration des Filtrats zur Induzierung der Kristallisation isoliert werden. Alternativ kann das Reaktionsgemisch zur Trockene eingedampft werden und der Rückstand mit einem geeigneten Lösungsmittel wie Aceton oder Methanol zur Abtrennung und Entfernung von unlöslichem Material behandelt werden. Die die Sulfonylbenzimidazolverbindung enthaltende Lösung wird zur Kristallisation des Produktes konzentriert oder eingedampft, wobei man einen zweiten Rückstand erhält, der gelöst wird, z. B. in Methanol. Die Sulfonylbenzimidazolverbindung wird aus dem Methanol durch Kristallisation gewonnen.

Die 5(6)-Isomeren werden durch fraktionierte Kristallisation oder durch Säulenchromatographie getrennt. Normalerweise kristallisiert das 6-Isomer zuerst aus der Lösung des Gemisches aus.

Die Sulfonylbenzimidazolverbindungen der Formel (I) werden als reine Verbindungen und als Isomerengemische geprüft. Beide Isomeren inhibieren das Viruswachstum, das 6-Isomer ist im allgemeinen aktiver als das 5-Isomer.

Verbindungen der Formel (I) können das Wachstum verschiedener Viren unterdrücken, wenn sie zu einem Medium zugegeben werden, in dem das Virus wächst. Die Verbindungen der Formel (I) können daher als wäßrige Lösungen, bevorzugt mit einem oberflächenaktiven Mittel, zur Dekontaminierung von Oberflächen verwendet werden, auf denen Polio-, Coxsackie-, Rhinoviren oder andere Viren vorhanden sind, z. B. Krankenhausglaswaren und Krankenhausarbeitsflächen und ähnliche Flächen, wie sie zur Zubereitung von Nahrungsmitteln verwendet werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) lassen sich ferner oral warmblütigen Säugetieren einschließlich Menschen in Dosen von 1 bis 300 mg/kg Säugetierkörpergewicht verabreichen. Die Verabreichung kann periodisch je nach Bedarf wiederholt werden. Im allgemeinen wird die antivirale Verbindung alle 4 bis 6 Stunden verabreicht.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren Adjuvantien, die für den besonderen Verabreichungsweg geeignet sind, vermischt. Bei der oralen Verabreichung können die Verbindungen mit pharmazeutischen Verdünnungsmitteln oder Trägern wie Lactose, Saccharose, Stärkepulver, Cellulose, Talk, Magnesiumstearat, Magnesiumoxid, Calciumsulfat, Akazienpulver, Gelatine, Natriumalginat, Natriumbenzoat und Stearinsäure modifiziert werden. Solche Zubereitungen können in Form von Tabletten oder eingeschlossen in Kapseln für die entsprechende Verabreichung formuliert werden. Die Verbindungen können ebenfalls parenteral verabreicht werden. Die Verbindungen können ebenfalls mit einer Flüssigkeit vermischt und in Form von Nasentropfen oder als intranasaler Spray verabreicht werden.

Die folgenden Beispiele erläutern die Herstellung der Verbindungen der Formel (I). Der Ausdruck "m/e", wie er zur Charakterisierung der Produkte verwendet wird, betrifft das Masse-zu-Ladungs-Verhältnis der Ionen, die im Massenspektrum der Produkte auftreten. Im allgemeinen entsprechen die Werte den Molekulargewichten der Hauptpeaks.

Beispiel 1

A) Zu einer Lösung aus 600 ml Tetrahydrofuran und 21,7 ml (60 mMol) Methylmagnesiumbromid in Diäthyläther gibt man tropfenweise unter Stickstoff im Verlauf von 1 h eine Lösung aus 4,1 g (12 mMol) 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol in 180 ml Tetrahydrofuran. Das Gemisch wird 5 h am Rückfluß erwärmt, auf Eis und 1n Chlorwasserstoffsäure gegossen, zweimal mit Diäthyläther extrahiert, mit gesättigtem Natriumchlorid gewaschen, getrocknet und filtriert; man erhält 2,9 g amorphen Feststoff von 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-methylbenzyl)-benzimidazol; m/e 360.

Analyse: C₁₇H₂₀N₄O₃S (MW 360)
berechnet: C 56,67%, H 5,59%, N 15,54%;
gefunden: C 56,77%, H 5,46%, N 15,27%.

B) 2 g (5,5 mMol) 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-methylbenzyl)-benzimidazol in 130 ml Chloroform werden mit 1,3 g p-Toluolsulfonsäure umgesetzt. Die Lösung wird 6 h unter Rühren am Rückfluß erwärmt. Die Lösung wird dann mit gesättigtem Natriumcarbonat gewaschen, getrocknet und filtriert; man erhält 1,7 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-methylenbenzyl)-benzimidazol, Fp. 201 bis 202°C.

Analyse: C₁₇H₁₈N₄O₂S (MW 342)
berechnet: C 59,63%, H 5,30%, N 16,36%;
gefunden: C 59,67%, H 5,35%, N 16,07%.

Beispiel 2

A) Wird das Verfahren von 1A unter Verwendung von 100 ml Tetrahydrofuran, 22 ml (60 mMol) Äthylmagnesiumbromid (2,7 mMol/ml) in Diäthyläther und 4,1 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol wiederholt, so erhält man 3,2 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-äthyl-α-hydroxybenzyl)-benzimidazol als Schaum.

Hochresolutionsmassenspektrum für C₁₈H₂₂N₄O₃S:
berechnet: 374,14123;
gefunden: 374,141.

B) Wird das Verfahren von Beispiel 1B unter Verwendung von 1,2 g (3,21 mMol) 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-äthyl-α-hydroxybenzyl)-benzimidazol, 750 mg p-Toluolsulfonsäure und 100 ml Chloroform wiederholt, so erhält man 388 mg 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-äthylidenbenzyl)-benzimidazol, Fp. 200 bis 202°C (Zers.).

Hochresolutionsmassenspektrum für C₁₈H₂₀N₄O₂S:
berechnet: 356,13107;
gefunden: 356,131.

Beispiel 3

A) Wird das Verfahren von Beispiel 1A unter Verwendung von 4,1 g (12 mMol) 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol in 180 ml Tetrahydrofuran, 100 ml Tetrahydrofuran und 28,6 ml (60 mMol) Isopropylmagnesiumchlorid in 100 ml Tetrahydrofuran wiederholt, so erhält man 4,0 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-isopropyl-α-hydroxybenzyl)-benzimidazol als gelben Schaum; Ausbeute 65%.

B) Wird das Verfahren von Beispiel 1B unter Verwendung von 1,2 g (3,2 mMol) 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-isopropyl-α-hydroxybenzyl)-benzimidazol, 750 mg p-Toluolsulfonsäure und 100 ml Chloroform wiederholt, so erhält man 82 mg 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-isopropylidenbenzyl)-benzimidazol als beigefarbenen Feststoff.

Beispiel 4

A) Zu einer Lösung aus 150 ml Tetrahydrofuran und 31 ml (84 mMol) Methylmagnesiumbromid in Diäthyläther gibt man tropfenweise unter Stickstoff eine Lösung aus 5,0 g (15 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol in 200 ml Tetrahydrofuran. Das Gemisch wird 1 h bei 25°C gerührt, 2 h am Rückfluß erwärmt, abgekühlt, auf Eis und 1n Chlorwasserstoffsäure gegossen und mit Diäthyläther extrahiert. Die 1500 ml Lösung werden auf 800 ml konzentriert, getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das sich bildende Produkt wird aus Diäthyläther/Hexan umkristallisiert, indem man das Produkt in Diäthyläther löst, Diäthyläther/Hexan zufügt und die Lösung kocht, bis sie trübe wird. Die Lösung wird auf 25°C gekühlt, bei 10°C im Eisschrank aufbewahrt und filtriert; man erhält 2 g Produkt. Weiteres Produkt wird durch Konzentration des Filtrats im Vakuum erhalten; Ausbeute 2 g. Das Produkt ist 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-methylbenzyl)-benzimidazol; m/e 360, 344 Base.

Analyse: C₁₈H₂₁N₃O₃S (MW 359)
berechnet: C 60,15%, H 5,89%, N 11,69%;
gefunden:
(1. Ansatz) C 60,37%, H 5,73%, N 11,46%
(2. Ansatz) C 61,30%, H 6,26%, N 10,69%.

B) 2 g (5,6 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-methylbenzyl)-benzimidazol in 100 ml Chloroform werden mit 1,3 g p-Toluolsulfonsäure umgesetzt. Die Lösung wird unter Rühren 4 h am Rückfluß erwärmt. Die Lösung wird auf 25°C abgekühlt, zweimal mit gesättigtem Kaliumcarbonat und zweimal mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum konzentriert und aus Diäthyläther/Hexan umkristallisiert; man erhält 1,1 g 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-methylenbenzyl)-benzimidazol als hellorange Kristalle, Fp.147 bis 148°C; m/e 341.

Analyse: C₁₈H₁₉N₃O₂S (MW 341)
berechnet: C 63,32%, H 5,61%, N 12,31%;
gefunden: C 63,58%, H 5,53%, N 12,15%.

Beispiel 5

A) Wird das Verfahren von Beispiel 4A unter Verwendung von 150 ml Tetrahydrofuran, 31 ml (84 mMol)n-Butylmagnesiumbromid, 5,0 g (15 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol und 20stündiges Erwärmen am Rückfluß wiederholt, so erhält man 5,0 g 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-a-n-butylbenzyl)-benzimidazol als dunkelgelben Schaum.

Analyse: C₂₁H₂₇N₃O₃S (MW 401)
berechnet: C 62,82%, H 6,78%, N 10,47%;
gefunden: C 63,14%, H 6,57%, N 10,17%.

B) Wird das Verfahren von Beispiel 8 unter Verwendung von 1 g (2,5 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-n-butylbenzyl)-benzimidazol, 75 ml Chloroform, 600 mg p-Toluolsulfonsäure und 90minütiges Erwärmen am Rückfluß wiederholt, so erhält man 790 mg 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-n-butylidenbenzyl)-benzimidazol.

Analyse: C₂₁H₂₅N₃O₂S (MW 383)
berechnet: C 65,77%, H 6,57%, N 10,96%;
gefunden: C 65,49%, H 6,31%, N 10,78%.

Beispiel 6

A1) Wird das Verfahren von Beispiel 4A unter Verwendung von 40 ml (85 mMol) Isopropylmagnesiumbromid, 5,0 g (15 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol und 200 ml Tetrahydrofuran wiederholt, so erhält man 5,0 g 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-isopropylbenzyl)-benzimidazol als gelben Schaum; m/e 399.

A2) Wird das Verfahren von Beispiel 4A unter Verwendung von 31 ml (2,7 mMol in Diäthyläther) Äthylmagnesiumbromid, 5 g (15 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol und 150 ml Tetrahydrofuran wiederholt, so erhält man 4,6 g 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-äthylbenzyl)-benzimidazol als beigefarbenen Schaum; m/e 373, 343.

B) Wird das Verfahren von Beispiel 4B unter Verwendung von 890 mg (2,4 mMol) 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-äthylbenzyl)-benzimidazol, 50 ml Chloroform und 600 mg p-Toluolsulfonsäure wiederholt, so erhält man 630 mg 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-äthylidenbenzyl)-benzimidazol als amorphen Schaum.

Analyse: C₁₉H₂₁N₃O₂S (MW 355)
berechnet: C 64,20%, H 5,96%, N 11,82%;
gefunden: C 63,93%, H 6,04%, N 11,64%.

Beispiel 7

A1) Wird das Verfahren von Beispiel 1A unter Verwendung von 30 ml (60 mMol) n-Propylmagnesiumbromid in 100 ml Tetrahydrofuran und 4,1 g (5 mMol) 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol in 150 ml Tetrahydrofuran wiederholt, so erhält man 3,5 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-n-propylbenzyl)-benzimidazol als dunkelgelben Schaum; m/e 388.

A2) Wird das Verfahren von Beispiel 1A unter Verwendung von 80 ml Tetrahydrofuran, 11,1 ml n-Butylmagnesiumbromid und 2,05 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-benzoylbenzimidazol in 90 ml Tetrahydrofuran wiederholt, so erhält man 1,7 g 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α -n-butylbenzyl)-benzimidazol als weißen Schaum; m/e 402.

B) Wird das Verfahren von Beispiel 1B unter Verwendung von 402 mg 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-n-butylbenzyl)-benzimidazol in 20 ml Chloroform, 234 mg p-Toluolsulfonsäure und 100 ml Chloroform wiederholt, so erhält man 302 mg 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-n-butylidenbenzyl)-benzimidazol; m/e 384.

Beispiel 8

Unter Wiederholung des in Beispiel 4B) beschriebenen Verfahrens erhitzt man 1,0 g 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-isopropylbenzyl)benzimidazol nach Beispiel 6 A1, 75 ml Chloroform und 600 mg p-Toluolsulfonsäure auf Rückflußtemperatur, wodurch man zu 850 mg 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-isopropylidenbenzyl)benzimidazol gelangt.
m/e-Wert = 369, UV-Spektrum (CH₃OH): λ213 ε = 34 700, λ258 ε = 14 800 und λ 280 ε = 4400.

Beispiel 9

Das in Beispiel 4B) beschriebene Verfahren wird unter Verwendung von 602 mg 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-hydroxy-α-n-propylbenzyl)benzimidazol nach Beispiel 7 A1, 20 ml Chloroform und 362 mg p-Toluolsulfonsäure wiederholt, wodurch man zu 93 mg 1-Dimethylaminosulfonyl-2-amino-6-(α-n-propylidenbenzyl)benzimidazol gelangt.

Elementaranalyse für C₁₉H₂₄N₄O₂S:
berechnet: C 61,60%, H 5,99%, N 15,12%;
gefunden: C 61,53%, H 6,14%, N 15,01%.

Die Verbindungen der Formel (I) sind antivirale Mittel mit Brandbandwirkung. Sie hemmen nicht nur in besonderer Weise das Wachstum von Echo-, Mengo-, Coxsackie (A9, 21, B5), Polio- (Typen I, II, III) oder Rhinoviren (25 Stämme), sondern inhibieren ebenfalls verschiedene Typen von Influenzaviren einschließlich Influenzastämmen wie Ann Arbor, Maryland B, Massachusetts B, Hong Kong A, Pr-8a und Taylor C (Typen A, B). Die Fähigkeit der Verbindungen der Formel (I), das Wachstum unterschiedlicher Viren in vitro zu unterdrücken, wird leicht unter Verwendung eines Plättchenunterdrückungstests bewiesen, der ist wie der von Siminoff in Applied Microbiology, 9(1), 66-72 (1961), beschriebene Test. Die spezifischen Versuche werden im folgenden näher erläutert. Die Verbindungen der Formel (I) werden nach den folgenden Verfahren geprüft.

Untersuchungsmethoden

Nierenzellen (BSC-1) oder Helazellen (5-3) afrikanischer grüner Meerkatzen läßt man bei einer Temperatur von 37°C in 25 cm³-Falcon-Kolben in Medium 199 wachsen, das 5% inaktiviertes fötales Rinderserum (FBS), Penicillin (150 Einheiten/ml) und Streptomycin (150 µg/ml) enthält. Sobald zusammenhängende Monoschichten entstanden sind, entfernt man das überstehende Wachstumsmedium und versetzt jeden Kolben mit 0,3 ml einer entsprechenden Virusverdünnung (Echo-, Mengo-, Coxsackie-, Polio- oder Rhinovirus). Nach der Absorption während 1 h bei Zimmertemperatur überdeckt man die mit den Viren infizierte Zellschicht mit einem Medium aus einem Teil 1%igem Inogar Nr. 2 und einem Teil doppelstarkem Medium 199 mit FBS, Penicillin und Streptomycin, das Wirkstoffkonzentrationen von 100, 50, 25, 12, 6, 3 und 0 µg/ml enthält. Derjenige Kolben, der keinen Wirkstoff enthält, dient als Kontrolle für die Untersuchungen. Die Stammlösungen der Sulfonylbenzimidazolverbindungen werden in Dimethylsulfoyid-Verdünnung mit einer Konzentration von 10⁴ µg/ml hergestellt. Die Kolben werden 72 h bei 37°C für Polio-, Coxsackie-, Echo- und Mengoviren und 120 h bei 32°C für Rhinoviren inkubiert. Plättchen sind an denjenigen Stellen zu sehen, an denen das Virus die Zellen infiziert und hat und sich reproduziert. Zur Inaktivierung des Virus und zur Fixierung der Zellschicht auf der Oberfläche des Kolbens versetzt man jeden Kolben mit einer Lösung aus 10%igem Formalin und 2% Natriumacetat. Die Virusplättchen werden unabhängig von ihrer jeweiligen Größe nach Anfärben der umgebenden Zellflächen mit Kristallviolett gezählt. Die Plättchenzählung wird mit der Kontrollzählung bei jeder Wirkstoffkonzentration verglichen. Die Aktivität der Testverbindungen wird als Prozentgehalt Plättchenverminderung oder Prozent Inhibierung ausgedrückt. Alternativ kann die Wirkstoffkonzentration, die die Plättchenbildung um 50% inhibiert, als Maß für die Aktivität verwendet werden. Die 50% Inhibierung wird durch das Symbol I₅₀ angezeigt.

Die bei den obigen Versuchen erhaltenen Ergebnisse sind in Form der Inhibierung von Poliovirus Typ I ausgedrückt, da das Virus leicht zu züchten ist und übereinstimmende Testergebnisse erhalten werden. Die Aktivität der Verbindungen der Formel (I) wird jedoch auch gegenüber anderen Viruskulturen wie Coxsackie- (A9, A21, B5), Echo- (Stämme 1-4), Mengo-, Rhino- (25 Stämme) und Polioviren (Typ I, II, III) bestätigt. Die Versuchsergebnisse für verschiedene Sulfonylbenzimidazolverbindungen sind in der folgenden Tabelle I zusammengefaßt, wo in Spalte 1 die Nummer des Beispiels von den vorherigen chemischen Beispielen und in den Spalten 3 bis 10 die Prozentgehalte der Virusplättchenverminderung bei Wirkstoffverdünnungen von 0,75 bis 100 µg/ml angegeben sind.

Tabelle I

Polio I Plättchenreduktion durch 1-subst.-Sulfonyl-2-amino-5(6)-subst.benzimidazole

Versuchsbericht

Analog zu der in Tabelle I zum Ausdruck kommenden Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber Polioviren wurden Versuchsergebnisse gegenüber Rhinoviren gewonnen, wobei die erfindungsgemäße Verbindung gemäß Beispiel 6B mit der Verbindung 27 gemäß der Literaturstelle J. Med. Chem. 12, 1012 (1969) verglichen wurde. Es wurden sowohl die prozentualen Plättchenreduktionswerte bei unterschiedlichen Wirkstoffkonzentrationen als auch die Wirkstoffkonzentrationen, bei denen eine 50%ige Inhibierung erfolgt, ermittelt. Dieser IC₅₀-Wert liegt für die bekannte Verbindung gegenüber 1,56 und 3,12 µg/ml gegenüber Rhinovirus vom Typ 3, während die untersuchte erfindungsgemäße Verbindung einen mittleren IC₅₀-Wert von 0,22 µg/ml aufweist. Dies stellt einen überraschenden therapeutischen Fortschritt dar. Im einzelnen sind die Ergebnisse in der folgenden Tabelle II zusammengefaßt.

Claims (3)

1. Sulfonylbenzimidazolverbindungen nach DE-PS 26 38 551 der allgemeinen Formel in der
R¹ für i-Propyl oder -N(CH₃)₂ und
R² für steht, worin R³ C₁-C₇-Alkyliden bedeutet, und
R² in der 5- oder 6-Stellung steht.

2. 1-Isopropylsulfonyl-2-amino-6-(α-ethylidenbenzyl)-benzimidazol.

3. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise eine Verbindung der allgemeinen Formel worin R¹ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzt,

• a) mit einem C₁-C₇-Alkylmagnesiumhalogenid oder C₁-C₇-Alkyllithium umsetzt,
• b) anschließend zu einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, worin R² bedeutet und R⁴ für C₁-C₇-Alkyl steht, hydrolysiert und
• c) danach zu einer Verbindung der Formel (I), worin R² bedeutet und R³ für C₁-C₇-Alkyliden steht, dehydratisiert.