DE2653267A1 - Vorrichtung zur bestimmung der influenz-neuraminidase - Google Patents
Vorrichtung zur bestimmung der influenz-neuraminidaseInfo
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Description
■»I +
Labor Müszeripari Müvek, 2501 Esztergom, Rudas Laszlo
ut 44., Ungarn
VORRICHTUNG ZUR BESTIMMUNG DER INPLUENZ-NEURAMINIDASE
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung, mit welcher die Influenz-Neuraminidase bestimmt werden kann.
'Eine der wichtigsten laboratoriumsmäßigen Aufgaben im Kampf gegen die Influenz (Grippe) besteht darin, die
ständigen Veränderungen des Oberflächeneiweißes (der Hülle)
des Virus so schnell wie· möglich und so genau wie möglich zu bestimmen, da nur in Kenntnis dieser Veränderungen wirk-
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»ame Impfstoffe hergestellt werden können beziehungsweise
Informationen darüber erhalten werden können, in welchem Maße die Bevölkerung gegen Grippe geschützt ist.
Pur die laboratoriumsmäßige Untersuchung des einen
der beiden Oberflächeneiweiße beziehungsweise Antigene des Grippe-Virus, und zwar des sogenannten Haemagglutinis, steht
eine Mkromethode zur Verfugung, Die Untersuchung des zweiten
Oberflächenantigens, des sogenannten leuraminidase-» Enzyms,
Jcann jedoch gegenwärtig .nur mit Hilfe der außerordentlich umständlichen
und komplizierten Epruvettenmethode vorgenommen *
werden. ■ .
Diese Methode beruht auf der Grundlage, daß das Oberflächenantigen
des Virus in seiner Eigenschaft als Enzym im Stande ist, aus einem geeigneten Mucoprotein-Substrat N-Acetylneuraminsäure
(HAIiA.) freizusetzen. Diese kann durch Zugabe geeigneter
Reagentien kolorimetrisch bestimmt werden. Aus der Aktivität des Enzyms kann einesteils auf die Eigenschaften der
Oberflächenantigene des Virus, zum anderen durch die Hemmung der Enzyme mittels spezifischer Antikörper auf die Verwandschaftsverhältnisse
der Viren· beziehungsweise die Spezifität der Antikörper geschlossen werden.
Die gegenwärtig angewendete Epruvettenmethode ist daher schwierig und kompliziert, weil die Farbr.eaktion lediglich in
einem bestimmten engen Temperaturbereich (90-95 0C) vor sich
geht beziehungsweise nur in diesem Temperaturbereich stabil ist. Da die Farbsubstanz unter diesen Bedingungen für kolorimetrisch^
Messungen ungeeignet ist, muß sie aus dem Gemisch mit Butanol ausgeschüttelt und zentrifugiert werden. Auch dabei muß jedoch
schnell gearbeitet werden, da sich die Farbreaktion zwischen-
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seitlich ändern kann. Die Epmverten müssen einsein behandelt
werden, die Farbintensität muß mit einem Spektrophotometer bestii;imt werden, und dies macht die Reaktion derart umständlich,
daß Has ει enuntersuchungen mit dieser Methode beinahe unmöglich
sind. Gerade durch Massenuntersuchungen könnte jedoch nicht nur ein Vergleich der Viren durchgeführt werden, sondern sie
wäre auch für den Erhalt von Informationen über die Geschützt-* heit der Bevölkerung von hoher Wichtigkeit.
Ziel der Erfindung ist es, die genannten 1ΐ· enteile zu
beseitigen und eine Vorrichtung auszuarbeiten, mit der die Messungen an einer großen Zahl von Objekten ohne Schwierigkeiten
innerhalb kurzer Zeit kontinuierlich mit geringem Arbeitsaufwand durchgeführt werden können.
Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, daß obiges Ziel erreicht werden kann, wenn unter Anwendung des Ivükroprinzips
die Reaktion nicht in Epruvetten, sondern in den Vertiefungen einer speziell für diesen Zweck ausgebildeten Titrierplatte
vorgenommen wird. Das Aufheizen des Reaktionsgeraisches geschieht
mit einem speziellen Heizeinsatz.
Gegenstand der Erfindung ist demnach eine Vorrichtung
zur Bestimmung der Influenz-lTeuraminidase. Das Wesen der er~
findungsgemäßen Vorrichtung bssteht darin, daß sie über eine mit das Reaktionsgemisch aufnehmende Bohrungen versehene Titrierplatte,
eine mit in die Bohrungen der Titrierplatte einsenkbaren Heizelementen versehene Heizauflage und über die
Heizauflage in Bezug auf die Titrierplatte positionierende Elemente verfügt. Die Heizelemente haben zweckmäßig einen
wärmeisolierenden Schaft und eine Heizspitze.
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Die Erfindung wird an Hand dor Zeictimmg :i_n Zusammenhoii;·;
idt eiiior konkreten Ausführungoform der erf indungsgeinüßen
Vorrichtung näher erläutert. Die Abbildung zeigt die erfindungs-
remäue Vorrichtung in zum Teil geschnittener Seitenansicht.
Me Vorrichtung besteht aus einer Titrierplatte 1 und einer Heizauflage 2. In der Titrierplatte 1 sind zur Aufnahme des
Keaktionsgemisch.es dienende Bohrungen 4 ausgebildet. Auf der
Heizauflage 2 sind in einer der "Verteilung der Bohrungen 4 der Titrierplatte 1 entsprechenden Waise Heizelemente 7
angeordnet. Der Schaft 5 der Heizelemente 7 ist aus wärmeisolierendem
Material gefertigt, ihre Spitzen 3 sind als Heizspitzen ausgebildet. Für die Führung (Positionierung) der
Titrierplatte 1 und der Heizauflage 2 zueinander sind Positionierelemente 6 vorgesehen, welche im Falle der als Beispiel gewählten
Ausfuhrungsform aus einem sich an die Heizauflage 2
anschließenden Zapfen und den in der Titrierplatte 1 ausgebildeten Bohrungen bestehen.
Bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung wird die Reaktion
in den Bohrungen 4 der Titrierplatte 1 vorgenommen. Die Verdünnungen der Antikörper für die Enzym- beziehungsweise Enzymhemmreaktion
werden mit der Verdünnungsvorrichtung eines Mikrotitrators
vorgenommen. Das Vorlegen der Verdünnungsflüssigkeit beziehungsweise der Reagentien geschieht mit auf 25 /um beziehungsweise
50 /Um kalibrierten Pipetten. Zwecks Aufheizung
des Reaktionsgemisches.werden die Heizelemente 7 der Heizauflage
2 in die Bohrungen 4 der Titrierplatte 1 eingeführt. Da das Aufheizen lediglich durch die Heizspitzen 3 der Heizelemente
7 geschieht, kommt in dem Reaktionsgemisch eine konvektive Strömung zu Stande, und dadurch wird das Reaktionsgemisch
gleichzeitig beheizt und vermischt.
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Dadurch geht die Farbreaktion schnell vor sich. Nach dem
Abheben' der Hnizauflage kann die Farbintonsität sofort abgolewen
und die den Tit er repräsentierende 50 /i>«-ige Farbreaktion
bei jeder Titerreihe durch Vergleich bestimmt werden.
Die Heizauf lage kann eingeh ein«-· Stromquelle veränderlicher
«Spannung oder durch einen mit Temperaturfühlern versehenen Temperaturschalter mit Energie versorgt werden.
Die erfindungrvj-emiiße Vorrichtung verfügt über sämtliche
Vorteile des Mkrotitrators. Der Materialbedarf sinkt bei Anwendung der erfindungsgemäßen Vorrichtung auf ein Zehntel,
die für die Reihenverdünnungen notwendige Zeit sinkt ebenfalls auf ein Zehntel. Das Abmessen der Reagentien geschieht schneller
und genauer, wodurch die Stabilität der Reaktion ebenfalls gesteigert wird. Das Aufheizen de3 Reaktionsgeraisches geht
schneller und gleichmäßiger vor üich5 ä-ind es sind dazu keine
komplizierten, schwer handhabbaren iifasserbader erforderlich.
Die Auswertung der Ergebnisse kann um Größenordnungen schneller
vorgenommen werden, als dies bei den bekannten Methoden der Fall ist.
Der bedeutendste Vorteil der Vorrichtung besteht jedoch
darin, daß bei Vorhandensein einer entsprechenden Anzahl Titrierplatten eine beinahe unbeschränkte Anzahl von Untersuchungen
kontinuierlich durchgeführt werden kann. Aus diesem Grunde ist die erfindungsgemäße Vorrichtung auch für Massen-
und Reihenuntersuchungen geeignet, welche bislang mit den bekannten Methoden undurchführbar waren*
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Claims (1)
- Pat ent ans prUchefl) Vorrichtung zur Bestimmung der Influenz-HeuraminidaBe» dadurch gekennzeichnet, daß sie über eine mit das Reaktionsgemisch aufnehmenden Bohrungen (4) versehene Titrierplatte (1), eine mit in die Bohrungen (4) der Titrierplatte (l) einsenkbaren Heizelementen (7) versehene Heizauflage (2) und über die Heizauflage (2) in Bezug auf die Titrierplatte (1) positionierende Elemente (6) verfügt,2, Vorrichtung nach Anspruch 1» dadurch gekennzeichnet, daß die Heizelemente (7) wärmeisolierende Schäfte (5) und Heizspitzen (3) aufweisen*7098 28/09 52 0Rra'NAL
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