DE2546001C3

DE2546001C3 - Immunostimulierende, Phospholipide enthaltende Stoffgemische, diese Stoffgemische enthaltende Arzneimittel und Verfahren zu ihrer Gewinnung

Info

Publication number: DE2546001C3
Application number: DE2546001A
Authority: DE
Inventors: Robert Sevres Fauve (Frankreich)
Original assignee: Institut Pasteur
Current assignee: Institut Pasteur
Priority date: 1974-10-14
Filing date: 1975-10-14
Publication date: 1980-06-19
Also published as: ZA756462B; IL48293A0; CA1063052A; DE2546001A1; FR2287901A1; IL48293A; FR2287901B1; DE2546001B2; NL7512053A; GB1530138A; AU8570375A; BE834493A

Description

OH

HO

OH

in denen sich die Acylgruppen

O O

-C-R¹ und —C—R²

von gleichartigen oder verschiedenen Cit,- bis Ci8-Fettsäuren ableiten, enthalten,

b) beim Chromatographieren der Chloroform-Lösung auf einer mit Kieselgel beschichteten Platte in einem Laufmittel-System aus 25 Volumenteilen Methanol, 65 Volumenteilen Chloroform und 4 Volumenteilen Wasser einen einzigen Fleck ergeben, der mit Jod, jedoch nicht mit Ultraviolettlicht und Ninhydrin nachgewiesen werden kann,

c) die Ausbreitung von Listeria monocytogenes in den Makrophagen der Leber und der Milz von Mäusen inhibieren,

d) die Beseitigung von Salmonella typhimurim aus dem Blut beschleunigen und

e) in vitro in einer Dosis von 1 bis 10(^g/ml die Inkorporation von Tritium-Thymidin durch Lymphozyten von Mäusen stimulieren.

2. Arzneimittel, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff ein Stoffgemisch nach Anspruch 1 enthält.

3. Verfahren zur Gewinnung der Stoffgemische nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man

eine Suspension von Bakterien des Stammes Salmonella typhimurium C 5 in einem Lösungsmittel-Gemisch aus einem Halogenkohlenwasserstoff und einem Alkohol herstellt, diese Bakterien vorzugsweise in dem Lösungsmittel-Gemisch verreibt, anschließend die unlöslichen Fraktionen abtrennt und die erhaltene Lösung bei verminderter Temperatur, vorzugsweise unterhalb 60" C, und insbesondere bei vermindertem Druck eindampft, den festen Rückstand mit Chloroform aufnimmt, die nichtgelöste feste Fraktion abtrennt und die Chloroformlösung chromatographisch fraktioniert.

Die Erfindung betrifft aus Salmonella typhimurium Stamm C 5 mit Lösungsmittel-Gemischen aus einem Halogenkohlenwasserstoff und einem Alkohol extrahierbare, in Chloroform lösliche Phospholipide enthaltende Stoffgemische, diese Stoffgemische enthaltende Arzneimittel und Verfahren zur Gewinnung dieser Stoffgemische.

Gegenstand der Erfindung sind die Stoffgemische gemäß Anspruch 1.

Die weiter unten beschriebenen pharmakologischen Untersuchungen wurden mit den Stoffgemischen der in h Anspruch 1 angegebenen Formeln durchgeführt.

Da die erfindungsgemäßen Stoffgemische interessante pharmakologische Wirkungen entfalten, nämlich insbesondere die Ausbreitung von Listeria monocytoge-

nes in den Makrophagen der Leber und der Milz inhibieren und die Beseitigung von Salmonella typhimurium aus dem Blut beschleunigen, betrifft die Erfindung auch die Arzneimittel gemäß Anspruch 2.

Gegenstand der Erfindung ist ferner das Verfahren zur Gewinnung der beanspruchten Stoffgemische, das in Anspruch 3 definiert ist.

Stoffgemische nach Anspruch 1 erhält man wie folgt:

Man suspendiert Salmonella typhimurium Stamm C 5 (der unter der Hinterlegungsnummer 1-027 beim Institut Pasteur, 25 — 28, rue du Docteur Roux, Paris/Frankreich, hinterlegt wurde) in einem Lösungsmittel-Gemisch, aus einem Halogenkohlenwasserstoff, insbesondere Chloroform, und einen Alkohol, insbesondere Methanol, und trennt dann, beispielsweise durch Zentrifugieren, die unlöslichen Fraktionen ab, gewinnt die überstehende Flüssigkeit, dampft sie ein, was man insbesondere unter vermindertem Druck und bei niedriger Temperatur bewirkt, nimmt den festen Rückstand mit Chloroform auf und filtriert die erhaltene Chloroformlösung. Das erfindungsgemäße Stoffgemisch wird ausgehend von dieser Lösung erhalten.

Dieses Stoffgemisch kann auch aus anderen Bakterien gewonnen werden.

Man verfährt beispielsweise nach der folgenden Vorschrift, ausgehend von Salmonella typhimurium Stamm C 5 der Sammlung des Institut Pasteur:

Zu Zellen von Salmonella typhimurium gibt man 10 Volumen einer Mischung aus gleichen Volumen Chloroform und Methanol, wobei man 10 Volumen der Mischung pro Volumen der genannten Zellen einsetzt. Die erhaltene Mischung wird während 2 Stunden bei + 4⁰C mit Hilfe einer Verreibeinrichtung homogenisiert und anschließend während 20 Minuten bei 3500 g zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wird in einen Kolben überführt und im (Wasserstrahl-Vakuum bei einer Temperatur von 40⁰C eingedampft. Der Kolben wird dann mit einem Chloroformvolumen aufgefüllt, das dem Doppelten der Anfangsprobe entspricht, und bei einer Drehzahl von 40 UpM während 30 Minuten gerührt. Anschließend filtriert man die Chloroformlösung über Filtrierpapier. Die erhaltene Lösung (im folgenden als »Gesamtextrakt« bezeichnet) wird mit Chloroform derart verdünnt, daß man eine Lösung erhält, die pro ml 100 mg (Trockengewicht) des immunostimuüerenden Stoffes enthält. Man trägt dann auf einer Länge von 5 cm 0,5 ml dieser Lösung auf den unteren Teil einer mit Kieselgel beschichteten Chromatographieplatte (Dicke 2 mm) auf. Die Platte wird dann derart in einen Chromatographierbehälter eingebracht, daß der Teil der Platte, auf den die genannte Lösung aufgetragen worden ist, teilweise in ein Lgufmittelsystem eintaucht, das aus 25 Volumenteilen Methanol, 65 Volumenteilen Chloroform und 4 Volumenteilen Wasser besieht. Die Platte zeigt beim Entwickeln mit Ultraviolettlicht, mit Joddampf und beim Besprühen mit Ninhydrin 8 deutliche Flecken oder Fraktionen, die im folgenden mit I bis VIII numeriert sind, wobei der Flecken I der Fraktion entspricht, die sich am weitesten vom Startpunkt entfernt hu., wiiiuend die Fraktion VIII diejenige mit der geringsten Wanderungsstrecke ist.

Die Entwicklung der Flecken erfolgt insbesondere wie folgt:

4 Stunden nach dem Einführen der Platte in den Chromatographierbehälter belichtet man die Platte mit Ultraviolettstrablen, wobei man die Fraktionen feststellen kann, die im Ultraviolettlicht sichtbar sind.

Nach dem Trock'ien der Platte bei 37°C in einem

I:	117 με
II:	73 μg
III:	154 μg
IV:	154 μ_ε
V:	517 μg
VI:	87 μg
VII:	51 μg
VIII:	312 ue

belüfteten Trockenschrank behandelt man sie mit Joddampf.

Nachdem man die Platte während einer Zeitdauer, die

zu einem Vertreiben des Jods ausreicht, in einem belüfteten und bei 37° C gehaltenen Trockenschrank aufbewahrt hat, besprüht man sie mit Ninhydrin und erwärmt sie dann während 10 Minuten auf 100⁰C, wonach man die Fraktionen nachweisen kann, die mit

Ninhydrin angefärbt werden können.
ίο Die Flecken HL IV, V, VlI und VIII können im

Ultraviolettlicht festgestellt werden.
Die Flecken I, II, V, VI, VII und VIII können mit

Joddämpfen nachgewiesen werden,

während die Flecken V, VII und VIII mit Ninhydrin angefärbt werden können.

Die in dieser Weise ermittelten Fraktionen werden

durch Abkratzen des Kieselgels isoliert. Sie werden dann mit der obengenannten Methanol/Chloroform/ Wasser-Mischung eluiert. Den Flecken I bis VIII entsprechen die folgenden Fraktionen:

Die (nur mit Joddämpfen nachweisbare) Fraktion VI, die als wesentlichen Bestandteil das Stoffgemisch gemäß Anspruch 1 enthält, besitzt, wie die im folgenden angegebene pharmakologische Untersuchung zeigt, die überwiegende immunostimulierende Wirkung des Gesamtextrakts.

Zu diesem Nachweis werden diese Fraktionen an 10 Mäuse verabreicht, denen man jeweils auf intravenösem Wege '/ίο der oben angegebenen Dosierungen zuführt.

Parallel behandelt man 10 andere Mäuse auf intravenösem Wege mit 100μg des Gesamtextrakts und 10 andere Mäuse lediglich mit physiologischem Serum.

18 Stunden später werden sämtliche Mäuse auf intravenösem Wege mit 7,5 χ ΙΟ⁶ Bakterien (Salmonella typhimurium C 5) infiziert. 2 Stunden später entnimmt man den Mäusen der verschiedenen Gruppen Blut und führt bei jeder Blutprobe eine Bakterienauszählung durch. Die dabei erhaltenen Ergebnisse (die als Anzahl der Keime oder Bakterien pro ml des Bluts angegeben sind) sind die folgenden:

Mäuse, die mit 100 μg des Gesamtextrakts

behandelt worden sind 2x10"

Mäuse, die mit 0,5 ml physiologischem
Serum behandelt worden sind 1,5x10⁶

Mäuse, die mit 11,7 μgdeΓ Fraktion I

behandelt worden sind 2,7 χ 10⁶

Mäuse, die mit 7,3 μg der Fraktion 11

behandelt worden sind 6,4 χ 10⁵

^b0 Mäuse, die mit 15,4 μg der Fraktionen

III+ 1V behandelt worden sind 1,1 xiO⁶

Mäuie, die mit 51,7 μg der Fraktion V

behandelt worden sind 6,5 χ 10⁵

Mäuse, die mit 8,7 μg der Fraktion Vl

behandelt worden sind 4 χ IO⁴

Mäuse, die mit 5,1 μgder Fraktion VIII

behandelt worden sind 1.1 χ ΙΟ⁶

Mäuse, die mit 31,2 μg der Fraktion VIII
behandelt worden sind

1,9XlO⁶

Die obigen Ergebnisse verdeutlichen die signifikante Wirkung der Fraktion VI gegen die Vermehrung von Salmonella typhimurium.

Bei einer weiteren Untersuchungsreihe hat sich gezeigt, daß eine durch Injektion an Mäuse, die 18 Stunden später mit Listeria monocytogenes infiziert werden, verabreichte Dosis der Fraktion VI im wesentlichen die gleiche Wirkung entfaltet wie eine zehnfach größere Dosis des Chloroform-Gesamtextrakts.

Diese Ergebnisse verdeutlichen insgesamt die Tatsache, daß die wesentliche immunostimulierende Wirkung, die in dem anfänglichen Gesamtextrakt enthalten ist, sich in der Fraktion VI wiederfindet. Das in dieser Fraktion VI enthaltene immunostimulierende Stoffgemisch besitzt die oben angegebene chemische Struktur.

Somit kann einer der erfindungsgemäßen Wirkstoffe dadurch definiert werden, daß er ein Phospholipid darstellt, das mit Jod, jedoch nicht mit Ultraviolettlicht und Ninhydrin nachgewiesen werden kann.

Insbesondere kann er auch dadurch definiert werden, daß er eine Phospholipid-Fraktion darstellt, die aus Bakterien des Stammes Salmonella typhimurium C 5 gewonnen werden kann, wobei man durch Chromatographieren einer auf eine mit Kieselgel beschichtete Chromatographieplatte aufgetragene Chloroformlösung einen einzigartigen Wanderungsfleck erhält, der mit Joddämpfen, jedoch nicht mit Ultraviolettlicht oder Ninhydrin nachgewiesen werden kann, wenn man den Bereich der genannten Platte, auf den man die Abscheidung aufgetragen hat, teilweise in ein Laufmittel-System eintaucht, das aus 25 Volumenteilen Methanol, 65 Volumenteilen Chloroform und 4 Volumenteilen Wasser besteht.

Er kann ferner als ein Phospholipid definiert werden, das die Struktur eines Materials besitzt, das man durch fraktionierte Chromatographie einer Chloroformlösung erhält, die man mit Hilfe eines Verfahrens bereitet, das im wesentlichen darin besteht, daß man eine Suspension von Bakterien, des Stammes Salmonella typhimurium C 5, in einer Lösungsmittelmischung, die aus einem Halogenkohlenwasserstoff, wie Chloroform, und einem Alkohol, wie Methanol, besteht, herstellt, vorzugsweise die Bakterien in dieser Lösungsmittelmischung verreibt, anschließend die unlöslichen Fraktionen abtrennt und die überstehende Flüssigkeit gewinnt, diese bei verminderter Temperatur, vorzugsweise bei einer Temperatur unterhalb 60" C, und insbesondere unter vermindertem Druck eindampft, den erhaltenen festen Rückstand in Chloroform aufnimmt, aus dem man nach Abtrennen der nichtgelösten festen Fraktion die genannte Chloroformlösung erhält, wobei das fragliche Phospholipid dasjenige ist, das ausgehend von dieser Chloroformlösung in derjenigen Chromatographie-Fraktion enthalten ist, die mit Jod, jedoch nicht mit Ultraviolettlicht und nicht mit Ninhydrin nachgewiesen werden kann.

Ausgehend von der oben definierten Chloroformlösung, kann man auch einen Extrakt erhalten, der eine Verbindung des Typs des oben definierten Stoffgemisches enthält, indem man diese Chloroformlösung mit Aceton in Berührung bringt und den die genannten Phospholipide enthaltenden Niederschlag gewinnt. Gewünschtenfalls nimmt man diesen Niederschlag in Chloroform auf und bringt diese Chloroformlösung erneut mit Aceton in Berührung, wobei man schließlich einen Niederschlag erhält, der einen relativ hohen Gehalt des Stoffgemisches aufweist.

Den im folgenden als »Acetonextrakt« bezeichneten

Extrakt erhält man unter den folgenden Bedingungen ausgehend von einer Chloroformlösung, die den »Gesamtextrakt« enthält, den man aus Zellen von Salmonella typhimurium gewonnen hat.

Zu dieser Chloroformlösung gibt man 10 Volumen

Aceton. Der gebildete Niederschlag wird bis zur

ίο vollständigen Auflösung mit Chloroform aufgenommen, worauf die erhaltene Lösung erneut mit 10 Volumen Aceton pro Volumen der Chloroformlösung versetzt wird. Der erhaltene Niederschlag wird dann so lange in einen Stickstoffstrom eingebracht, bis das Aceton vollständig vertrieben ist. Der gebildete Niederschlag stellt dann den sogenannten »Acetonextrakt« dar.

Der Extrakt wird dann erneut in Chloroform gelöst,

wonach man die Lösung mit einer flüssigeninjizierbaren Lösung, insbesondere einer physiologischen Natriumchloridlösung, in Berührung bringt und ein Inertgas, wie Stickstoff, in die Mischung einleitet, bis das Chloroform vollständig vertrieben ist. Die erhaltene Suspension wird dann zur Verminderung der Teilchengröße der Feststoffe homogenisiert, bis die Suspension im wesentlichen keine Teilchen mehr enthält, die einen Durchmesser von mehr als 0,5 μπι besitzen (bei der mikroskopischen Untersuchung und der Untersuchung mit Hilfe des Phasenkontrastverfahrens). In dieser Form ist der Acetonextrakt bei den im folgenden beschriebener. pharmakologischen Untersuchungen verabreicht worden.

Das Gleiche trifft auch auf die anderen untersuchten Verbindungen zu.

1. Schutz der Mäuse gegen durch
Listeria monocytogenes verursachte Infektionen

Die Wirkstoffe der erfindungsgemäßen Arzneimittel schützen Mäuse gegen die Infektionen, die durch Listeria monocytogenes verursacht werden. Bei der Untersuchung wird die Tatsache ausgenützt, daß die in Rede stehenden Bakterien sich nur in den Makrophagen der Leber und der Milz der Mäuse entwickeln. Die zu untersuchenden Produkte, die in der linken Spalte der folgenden Tabelle I angegeben sind, werden in Form von Suspensionen von Teilchen, die so fein sind, daß sie auf intravenösem Wege injiziert werden können, in einer Dosierung von 500 μg Produkt pro Maus verabreicht. 15 Stunden später injiziert man den Mäusen auf intravenösem Wege eine Suspension von Bakterien des Stammes Listeria monocytogenes, wobei man pro Maus 5XlO⁴ Bakterien anwendet. 48 Stunden nach der Infizierung werden die Tiere durch einen Nackenschnitt getötet, worauf die Lebern und die Milzen entnommen, verrieben und nach dem Verdünnen auf einen Nährboden (Agar-Agar) aufgebracht werden. 48 Stunden später werden die auf diesen Kulturen vorhanenen Bakterien ausgezählt, so daß man die Anzahl der lebenden Bakterien (Listeria monocytogenes) erhält, die in der Milz und der Leber der behandelten Tiere enthalten waren.

Die erhaltenen Ergebnisse werden mit jenen der Kontrollmäuse verglichen, die ebenso infiziert wurden, jedoch zuvor nur mit physiologischem Serum behandelt worden waren.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle angegeben.

Tabelle I

Untersuchte Produkte, Verabreichung durch intravenöse
Injektion einer Dosis von
500|J.g 15 Stunden vor der
Infektion mit 5 x 10⁴ Bakterien des Stammes Listeria
monocytogenes

Anzahl der in der Milz und in der Leber der Mäuse 48 Stunden nach der Infektion gefundenen Bakterien (Mittelwert von 5 Mäusen pro Gruppe)

Milz Leber

D	0,5 ml physiologisches	Diphosphatidylglycerin	2,3	X	10⁷	1,2 X	10⁷
	Serum	Lysocardiolipin
2)	Acetonextrakt	Phosphatidylcholin	2	X	10⁵	4,2 X	10⁴
Vergleich	Phosphatidyläthanol-
3)	amin	10⁷			6,3 X	10⁶
4)	Glycerylphosphoryl-	1,8	X	10⁷	1,1 X	10⁷
5)	chlolin	8	X	10"	8,6 x	10"
6)	Phosphatidylserin	6,5	X	10⁶	7,1 X	10"
	Kephalin
7)	Sphingomyelin	6,7	X	10"	6,4 X	10"

8)	1,5	X	10⁷	8,9 x	10⁶
9)	7,4	X	10"	8,2 X	10"
10)	8,4	X	10"	1,1 X	10⁷

Aus der obigen Tabelle ist ersichtlich, daß die Anzahl der in der Milz und der Leber der Kontrolltiere enthaltenen Bakterien 48 Stunden nach der Infektion erheblich zugenommen hat. Im Gegensatz dazu hat bei Produkt 2 die Anzahl der Bakterien (Listeria monocytogenes) praktisch nicht zugenommen. Sie hat sogar unter der Einwirkung der wirksamsten Produkte deutlich abgenommen. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel begünstigen somit in erheblichem Umfang die bactericide Wirkung der Makrophagen, insbesondere der Milz und der Leber.

Die als Vergleichsverbindungen eingesetzten Produkte 3 bis 10 haben sich im wesentlichen als inaktiv erwiesen.

2. Wirkung der Stoffgemische gemäß

Anspruch 1 auf die in vitro-Keimumwandlung von Lymphozyten der Milz von Mäusen

Die zuvor entnommenen Milzen von Mäusen werden in der Flüssigkeit nach Hanks zerkleinert, und die in dieser Weise erhaltene Zellsuspension wird über ein Sieb mit einer Maschenweite von 60 μπι nitriert. Dann führt man in Mikroröhrchen für Gewebekulturen 0,5 ml einer Zellensuspension in dem Medium 199 ein, das zwischen 0,5 χ 10⁶ und 10⁷ Zellen, 0,05 ml Humanserum und 0,05 ml einer Suspension des zu prüfenden Stoffgemisches in Wasser enthält Man führt verschiedene Untersuchungen bei wachsenden Diglucosidkonzentrationen durch, die zwischen 10 und 500 μ§/ηι1 liegen.

42 Stunden später setzt man 0,05 ml einer Lösung zu, die Tritiumthymidin enthält und eine Aktivität von 10 μ Ci/ml aufweist 4 Stunden später zentrifugiert man die Röhrchen während 10 Minuten bei 1500 g. Der abzentrifugierte Feststoff wird erneut in 0,5 ml physiologischem Serum in Suspension gebracht

Dann gibt man 0,5 ml einer 10%igen Chloressigsäure zu und saugt den Niederschlag über Filterpapier unter Anwendung eines Unterdrucks von 60 cm Wassersäule ab. Nach dem Spülen des Filters und des Röhrchens mit 5°/oiger Trichloressigsäure und I ml Äthylalkohol (90°) trocknet man den Niederschlag auf dem Filter und überführt beides in ein Zählfläschchen. Die eigentliche Auszählung der Impulse erfolgt in einem Flüssigkeits-Szintillations-Zähler. Aus der Zählung errechnet man den Mitose-Index, der für das Verhältnis der Anzahl der in den Kulturen in Gegenwart des geprüften Stoffgemisches beobachteten Teilungen zu der Anzahl der in den

ίο Kontrollkulturen beobachteten Teilungen steht.

Die in der Figur angegebenen Kurven verdeutlichen die Veränderungen des Mitose-Index (I) in Abhängigkeit von den angewandten Dosierungen — in μg/ml — des Stoffgemisches (bei dem es sich um das durch fraktionierte Chromatographie gemäß der Verfahrensweise des Anspruchs 3 erhaltene Material handelt) (Kurve A) und — zu Vergleichszwecken — des Gesamtextrakts (Kurve B). Die Figur läßt eine erhebliche Aktivität des geprüften Stoffgemisches bei Konzentrationen zwischen 1 und 100μg/ml erkennen, während eine merkliche Wirkung des Gesamtextrakts erst beginnend mit 10 μg/ml festzustellen ist (wobei die aktive Wirkung zwischen 10 und 500 μg/ml liegt).

3. Weitere biologische Wirkungen des Wirkstoffs
des erfindungsgemäßen Arzneimittels

Malaria

Es hat sich gezeigt, daß, wenn man Mäuse mit 2500 Sporozoiten und 24 Stunden später mit 250 μg des Acetonextraktes behandelt, nach 8 bis 30 Tagen sämtliche Kontrollmäuse Parasiten im Blut zeigen, während keine der behandelten Mäuse Parasiten besitzt.

Vernarbende Wirkung

Man bringt auf der Haut der Mäuse Wunden mit einem Durchmesser von 8 mm an. 2 Stunden später verabreicht man den Mäusen auf intravenösem oder subkutanem Weg 1 mg des Acetonextrakts oder die gleiche Menge des Acetonextrakts auf lokalem Wege. 7 Tage später sind die Wunden der behandelten Mäuse vernarbt und mit Epithelgewebe bedeckt, während die Wunden der Kontrolltiere dieses Verhalten nicht zeigen.

Wirkung als pharmakologisches Adjuvans

Durch Injektion von 500 μg des Acetonextrakts an Mäuse kann man die für die Betäubung notwendige so Barbitursäure-Menge um die Hälfte vermindern.

Psychotrope Wirkung

Wenn man die Mäuse mit 1 mg des Acetonextrakts auf intravenösem Wege behandelt und sie mit den Kontrollmäusen in den gleichen Käfig einbringt reagieren die letzteren auf Geräuschreizungen weniger stark, und ihre spontane Aktivität ist weniger heftig als die der behandelten Mäuse.

Hypolipämische Wirkung

Verabreicht man den Mäusen auf intravenösem Wege den Acetonextrakt so scheiden sie viel schneller die Milch aus, die nach dem Verabreichen von 0,5 ml Olivenöl mit Hilfe einer Magensonde in dem Blut auftritt

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel, die die oben angegebenen Wirkstoffe enthalten, sind insbesondere geeignet für Mensch und Tier zur Behandlung oder zur

vorbeugenden Behandlung von Infektionskrankheiten, die durch Bakterienkeime oder sogar Virenkeime verursacht werden, beispielsweise Infektionen vom Typ der Tuberkulose, Pasteurellosen, Brucellosen oder Listeriosen, oder durch gramnegative Bakterien verursachte Infektionen. Sie können auch zur Behandlung von Erkrankungen eingesetzt werden, die durch gewisse Parasiten verursacht werden, die im Verlaufe ihrer Entwicklung eine Phase durchlaufen, in der sie im Blutkreislauf oder im Lymphkreislauf auftauchen, beispielsweise die Malaria, die Bilharziose und die Filariose. Sie können ferner zur Behandlung von toxischen Infektionen eingesetzt werden. Auf Grund der Schnelligkeit ihrer Wirkung können die erfindungsgemäßen Mittel zur Vorbeugung von postchirurgischen Infekten aller Art eingesetzt werden. Sie können ferner für die Herstellung von vernarbenden Arzneimitteln verwendet werden.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können auf intravenösem, intramuskulärem oder subkutanem Wege in Form von Suspensionen in flüssigen, pharmazeutisch verträglichen und sterilen Trägern, wie physiologischen Serumlösungen (Salzlösung oder Glucoseserum) in Einzeldosierungen verabreicht werden, die beim Menschen zwischen etwa 0,05 und etwa 10 mg, insbesondere zwischen 0,1 und 5 mg, liegen. Bei diesen Suspensionen muß die Teilchengröße der Wirkstoffprodukte natürlich für die Injektion geeignet sein und insbesondere unterhalb ΙΟμίτι und bevorzugter unterhalb 0,5 μπι liegen.

Man kann die Wirkstoffe auch in ein Gel einarbeiten, das über die Haut, subkutan oder intramuskulär verabreicht wird, insbesondere in ein Calciumphosphatgel-

Im folgenden sei ein Beispiel der Herstellung des Gels erläutert, das einen erfindungsgemäßen Wirkstoff enhält und in der oben beschriebenen Weise verabreicht werden kann.
Zu 40 ml einer Suspension in physiologischem Serum, die den Wirkstoff in der gewünschten Konzentration enthält, gibt man 5 ml einer Lösung von wasserfreiem Natriumphosphat (Na₂HPO₄), die pro 100 ml 7,92 g Natriumphosphat enthält, und 5 ml einer Calciumchloridlösung, die 8 g wasserfreies Calciumchlorid pro

ίο 100 ml enthält.

Man zentrifugiert den erhaltenen Niederschlag und nimmt ihn in der Weise in pyrogenfreiem physiologischen Serum auf, daß man die gewünschte Wirkstoffkonzentration erreicht.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können auch auf oralem Wege verabreicht werden, wenn sie mit pharmazeutisch verträglichen festen oder flüssigen Trägermaterialien vereinigt werden. Man kann sie auch auf rektalem Wege geben, insbesondere wenn sie mit für diesen Verabreichungszweck geeigneten Trägersubstanzen vereinigt sind. Schließlich können sie auch äußerlich angewandt werden, beispielsweise in Form eines Aerosols, das mit einem für diesen Verabreichungszweck geeigneten Trägermaterial hergestellt ist, beispielsweise zur Behandlung von Infektionen der Nase.

Die erfindungsgemäßen Mittel können ferner als Salbenwirkstoffe eingesetzt werden, insbesondere zur äußerlichen Behandlung zur Unterstützung der Vernar-

jo bung. Diese Salben können in an sich beliebiger Weise hergestellt werden, wozu man die für klassische Salben üblichen pharmazeutischen Bindemittel, Trägermaterialien und Hilfsstoffe verwendet, beispielsweise Lanolin. Die Wirkstoffkonzentration in den Salben liegt normalerweise zwischen 0,5 und 2 Gew.-%.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche:

1. Aus Salmonella typhimurium Stamm C 5 mit Lösungsmittel-Gemischen aus einem Halogenkohlenwasserstoff und einem Alkohol extrahierbare, in Chloroform lösliche Phospholipide enthaltende Stoffgemische, dadurch gekennzeichnet, daß sie

a) Phospholipide einer der beiden allgemeinen Formeln

CH₂OH
O CHOH