DE2530416A1

DE2530416A1 - Alkylaminoglucopyranosid-derivate und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE2530416A1
Application number: DE19752530416
Authority: DE
Inventors: Spaeter Genannt Werden Wird
Original assignee: Tokyo Tanabe Co Ltd
Current assignee: Tokyo Tanabe Co Ltd
Priority date: 1974-07-05
Filing date: 1975-07-04
Publication date: 1976-01-22
Also published as: SU670225A3; NL173959C; DE2530416C3; JPS5230491B2; FR2276828B1; JPS516925A; HU172906B; US4057684A; CH610334A5; CA1044228A; GB1499760A; NL7507973A; NL173959B; DE2530416B2; FR2276828A1

Description

Tokyo Tanabe Company, Ltd., 7-3» Nihonbashi-Honcho 2-chome, Chuo-ku, Tokyο, Jap an

Alkylaminoglueopyranosid-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung

Zusammenfassung:

Alkylaminoglucopyranosid-Derivate, einschließlich Alkyl-N- -carbamyl-N¹-(2-chloräthyl)-N^!-nitroso-G-amino-G-desoxy-D- -glueopyranosid, Alkyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-N'-nitroso- -2-amino-2-desoxy-D-glucopyranosid und Alkyldi-N,N^l-flT-(2- -chloräthyl)-N-nitrosocarbamylJ-2,6-diamino-2,6-didesoxy-D- -glucopyranosid, werden geoffenbart. Die Derivate zeigen erstaunliche Antitumoraktivität, aber keine diabetogene Aktivität und keine Knochenmarktoxizität. Die Derivate sind wasserlöslich und frei von antibafcterieller Aktivität.

Die Erfindung betrifft neue Verbindungen mit potentieller Anticanceraktivität. Im einzelnen betrifft sie Alkylaminoglucopyranosid-Derivate der allgemeinen lormel (I)

509884/1080

BORO MÖNCHEN:	TELEX:	TELEGRAMM:	TELEFON:	BANKKONTO:	POSTSCHECKKONTO:
8 MÖNCHEN 22	1-856 44	INVENTION	BERLIN	BERLINER BANK AG.	W. MEISSNER, BLN-W
ST. ANNASTR. 11	INVEN d	BERLIN	030/885 60 37	BERLIN 31	122 82 -109
TEL.: 089/2235 44			030/886 23 82	3695716000

? 5 3 (U 1 6

CH2R1 -2-

(1)

H₃

in welcher Rp eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und R. und R, jeweils die N-Garbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-N^l-nitrosoamino-Gruppe (d.h. -NHGON(NO)GH_pGHpCl) oder Hydroxylgruppe bedeuten

Hajqab* dap ^- *- -

mit der/EL und R^ nicht gleichzeitig Hydroxylgruppen sind; sowie ein Verfahren zur Herstellung dieser Derivate.

Es ist bekannt, daß N-Garbamyl-N'-methyl-N'-nitroso-2-amino-2- -desoxy-D-glucopyranose , das sogenannte Streptozotocin, Antitumoraktivität zeigt. Kürzlich wurde berichtet, daß 2-^3-(2-Chloräthyl)-3-nitrosoureidoj-2-desoxy-D-glucopyranose, ein wasserlösliches Derivat dieses Streptozotocins, eine verbesserte Antitumoraktivität zeigt, während es eine niedrige Knochenmarktoxizität aufweist (T.Anderson et al., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 15» 65th Meet. 60 (1974) ). Diese Nitrosoureido-Verbindung hat jedoch wie Streptozotocin den Nachteil, daß es sich im Tiertest als diabetogen erweist. Im Gegensatz hierzu soll das Tetraacetat dieser Nitrosoureido-Verbindung, d.h. 3-(Tetraacetylß;lucopyranos-2- -yl)-1-(2-chloräthyl)-1-nitrosoharnstoff (nachfolgend mit GGNU abgekürzt) eine 137proz. Steigerung der Lebensspanne der Testtiere zeigen, ohne Leukopenie zu verursachen, und zwar mit einer einzigen i.p.-Verabreichung in einer Dosis von 15 mg/kg an Mäuse, denen leukemia L-121o implantiert worden war, wobei es nichtdiabetogene Aktivität und verminderte Knochen'tnarktoxizität aufweist (P.S.Schein et al., Cancer Research *5£, 2oo5 (1973) ). GCNU hat jedoch den großen Nachteil, wasserunlöslich zu sein.

Das Amino-fcucopyranosid-Derivat I der Erfindung, welches strukturell dem Streptozotocin ziemlich unähnlich ist, ist wasserlöslich und zeigt eine erstaunliche Anti tumor aktivität, während es frei von diabetogener und antibakterieller Aktivität ist. Das Derivat I besitzt außerdem verminderte Knochenmarktoxizität.

Das Aminoglucopyranosid-Derivat I der Erfindung umfaßt die folgenden drei Verbindungsgruppen:

509884/1080

Alkyl-N-carbamyl-N¹ -( 2-chloräthyl)-N' -nitroso-G-amino-G-desoxy-D- -glucopyranosid (1-1);

Alkyl-N-carbamyl-N¹ -( 2-chloräthyl)-N* -nitroso^-amino^-desoxy-D- -glucopyranosid (1-2);

Alkylbis-N,N^l-£N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamyl}-2,6-diamino- -2,6-didesoxy-D-glucopyranosid (1-3)·

Die Glucopyranosid-Derivate I der Erfindung können, wie aus dem nachstehenden Reaktionsformelschema ersichtlich wird, hergestellt werden, indem man die Verbindung der allgemeinen Formel II oder ihr Säureadditionssalz einer Kondensationsreaktion mit 2-Ghloräthylisocyanat (IV) unterwirft, um die Verbindung der allgemeinen Formel III zu erhalten, wonach diese Verbindung III nitrosiert

CH₂R6
-υ

und R^ sind wie oben definiert; R₂, und R,- bedeuten eine

Hydroxyl- oder Aminogruppe mit der Ausnahme, daß beide HydroxyΙα«

gruppen darstellen; und Rg und Rr₇ bedeuten jeweilsVB-Garbamyl-N'- -(2-chloräthyl)-amino-Gruppe oder Hydroxylgruppe mit der Ausnahme, daß sowohl Rg als auch R„ Hydroxylgruppen darstellen; IV ist 2-Chloräthylisocyanat (d.h. 010H₂OH₂NGO).

Um die Verbindung I-1 der Erfindung herzustellen, wird die Verbindung der Formel II, in welcher R^ eine Aminogruppe und R₁-eine Hydroxylgruppe ist, d.h. Alkyl-e-amino-e-desoxy-D-glucopyranosid (H-I), als Ausgangsmaterial verwendet, wodurch man Verbindung III erhält, in welcher Rg die N-0arbamyl-N^l-(2-chloräthyl)amino-Gruppe und Rr₇ eine Hydroxylgruppe bedeutet, d.h. Alkyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-D-glucopyranosid (HI-I) $ diese Verbindung HI-I wird dann nitrosiert.

Analog verwendet man zur Herstellung der Verbindung 1-2 die Verbindung der Formel II, in welcher R₁, eine Hydroxylgruppe und R₁-eine Aminogruppe ist, d.h. Alkyl-2-amino-2-desoxy-D-glucopyrano-

609884/1080

2530418

sid (II-2), um die Verbindung der Formel III herzustellen, in welcher Rg eine Hydroxylgruppe und Rr₇ die N-0arbamyl-N'-(2-chloräthyl)amino-Gruppe ist , d.h. Alkyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)- -2-amino-2-desoxy-D-glucopyranosid (III-2), welche Verbindung III-2 darm nitrosiert wird.

Zur Herstellung der Verbindung 1-3 verwendet man die Verbindung der Formel II, in welcher sowohl R₂, als auch R₁- Aminogruppen sind, d.h. Alkyl-2,6-diamino-2,6-didesoxy-D-glucopyranosid (II-3)» um die Verbindung der Formel III herzustellen, in welcher sowohl R_fi als auch R₁-, eine N-Carbamyl-N'-(2-chloräthyl)amino-Gruppe ist, d.h. Alkyldi-N,N^l-[N-(2-chloräthyl)carbamyl]2,6-diamino-2,6-didesoxy-D-glucopyranosid (111-3)» wonach diese Verbindung III-3 nitrosiert wird.

Die Aminoglueopyranoside I der Erfindung werden wie erwähnt nach den folgenden drei Reaktionswegen hergestellt:

II-2 —-^ III-2 * 1-2

TT X ■> TTT— ~Z\ «w "T ^z

Das Glucopyranosid I der Erfindung umfaßt zwei Anomere, d.h. ein ot-Anomer und ein ß-Anomer, jedoch sind beide Anomere und des weiteren auch Gemische der Verbindungen dieser beiden Anomere aktiv, d.h. sie besitzen eine erstaunliche Antitumoraktivität. Jene Verbindungen I des cfc-Anomers oder ß-Anomers können unter Verwendung der entsprechenden Ausgangsverbindungen II des ofc-Anomers oder ß-Anomers hergestellt werden. Gleiches gilt für das Gemisch der Verbindungen I aus ot-Anomer und ß-Anomer.

Im Verfahren zur Herstellung der Aminoglucopyranoside I der Erfindung erfolgt die Kondensationsreaktion des ersten Schrittes ^: vorzugsweise in einem geeigneten Lösungsmittel bei einer Tempe- : ratur im Bereich von -15°0 bis Rückflußtemperatur des verwendeten Lösungsmittfels. Die Ausgangsverbindungen II können entweder in Form der freien Base oder in Form eines Additionssalzes einer anorganischen oder organischen Säure, wie Chlorwasserstoffsäure,. Schwefelsäure, Phosphorsäure, Eisessig, Oxalsäure oder Bernsteinsäure, verwendet werden. Im Falle der Verwendung des oben erwähn-¹ ten Säureadäitionssalzes ist es erwünscht,, ein Desaeidifizierungs-

S09884/1080

mittel im Reaktionssystem zu verwenden. Als Desacidifizierungsmittel können verwendet werden Metallcarbonat , wie Silbercarbonat, Erdalkalicarbonat oder Schwermetallcarbonat; tertiäre Amine wie Trimethylamin, Triäthylamin, Tripropylamine, Tributylamine, Triamylamine, Pyridin oder Chinolin; oder ein Anionaustauscherharz, wie ein Harz des Aminotyps.

Als Lösungsmittel in ober Kondensationsreaktion V vorteilhaft mindestens ein Vertreter der Gruppe der aliphatischen, alicyclischen oder aromatischen, mono- oder mehrwertigen Alkohole mit Λ bis 12 Kohlenstoffatomen; schwefelhaltigen Verbindungen wie Dimethylsulfoxid oder Tetramethylensulfon; und phosphorhaltigen Verbindungen wie Hexamethylphosphoramid. Als Lösungsmittel

ist auch Wasser geeignet oder ein wäßriges Lösungsmittel, das Nitrile, Kohlenwasserstoffe, Kohlenwasserstoffhalogenide, Ketone, Ester, Äther, Alkohole, schwefelhaltige Verbindungen oder phosphorhaltige Verbindungen , die oben erwähnten Alkohole.DimethyI-sulfoxid, Tetramethylensulfon oder Hexamethylphosphoramid enthält.

Die Nitrosierungsreaktion der Verbindung III im zweiten Schritt des vorliegenden Verfahrens kann in bekannter Weise erfolgen. Beispielsweise führt man diese Umsetzung geeigneterweise so aus, daß man entweder eine Verbindung der Gruppe: Salpetrige Säure, Nitrit oder Alkylnitrit mit der Verbindung III in Gegenwart einer organischen oder anorganischen Säure, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Ameisensäure oder ähnlichen, reagieren läßt oder Nitrosylehlorid mit der Verbindung III in einem Gemisch aus Essigsäure mit Natriumacetat umsetzt. Diese Umsetzung kann vorzugsweise bei einer Temperatur von .-15 bis etwa 5o°C durchgeführt werden. Die so gebildete angestrebte Verbindung I kann schnell aus der Umsetzungslösung abgetrennt und durch bekannte Reinigungsmethoden, wie Ionenaustauschbehandlung, Säulenchromatographie und Umkristallisieren aus organischem Lösungsmittel gereinigt werden.

Die Ergebnisse der pharmakologischen Studien an den Aminoglucopyranosiden I der Erfindung werden nachfolgend erläutert: Als Testverbindungen wurden verwendet Methyl-N-carbamyl-N¹-

5Ö9884/1Ö80

2530418

AnitrosQ^-amino^desoxy-cfc-D-glucopyranosid und Methyl-N-carbamyl-N' - ( 2-chloräthyl)-N'-nitroso-e-amino-ö-des oxy-ct-D-glucopyranosid (nachfolgend abgekürzt als 2MCdG und 6MCo(G), während als Kontrollverbindungen benutzt wurden l-(2-Ghloräthyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosoharnstoff (nachfolgend GCNU abgekürzt), der verbreitet als Kontrollverbindung bei solchen pharmakologischen Tests der Streptozotocin-Derivate angewendet wird, sowie das bereits erwähnte GCNU. Als Tumorsystem wurden verwendet leukemia L-I2I0, Nakahara-Fukuoka sarcoma, adenocarcinoma-755» ascites sarcoma I80 und Ehrlich ascites carcinoma (nachfolgend abgekürzt mit L-I2I0, Ni¹S, Ca-755, S-I80A und EAC); die Antitumoraktivitäten wurden nach der Methode des National Cancer Center, Tokyo (A.Hoshi et al., Farumashia % 464 (1973) ) ermittelt. Als Testtiere wurden ICR- und BDF.-Mäuse eingesetzt.

Tabelle I zeigt die Antitumorwirkungen von 2MCo(G gegen verschiedene Tumorsysteme. Wie beobachtet werden konnte, zeigte 2MCo(G in einer Dosierung von 12,5 mg/kg/J;ag, verabreicht intraperitoneal an Mäuse während 5 aufeinanderfolgender Tage, Aktivitäten von ++ und +++ gegen Ni¹S, Ca-755» S-I80A und EAC; insbesondere war es wirksamer als CCNU gegen NFS und Ca-755» während nach gleichem Schema, jedoch mit einer Dosierung von 3»2 mg/kg/Tag keine Akkumulation von ascites-Tumorzellen bei S-18oA-und EAC-implantierten MäuVen zu beobachten war. Gegen L-121o , bei einer Dosierung von 3»2 mg/kg/Tag intraperitoneal an 5 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht, überlebten 3 von 6 Mäusen und es wurde eine Erhöhung der Lebensspanne (Abkürzung ILS) von 39²J- % beobachtet; nach gleichem Schema, jedoch mit einer Dosierung von 6,3 mg/kg/Tag, oral verabreicht, überlebten 2 von 6 Mäusen und eine ILS von 3^-3 # wurde gefunden, während eine einzige intraperitoneale Verabreichung von 1o - 2o mg/kg zu einer ILS von 717$ führte und alle 6 Tiere überlebten. Diese Ergebnisse zeigten, daß gegen L-12I0 eine einzige Dosis von 2MCo(G wirksamer sein könnte als eine Verabreichung in 5 Dosierungen derselben.

Andererseits betrug die LD^₀ des 2MCo(G bei ICR-Mäusen 48 mg/kg bei Einzeldosis und 16 mg/kg bei 5 Dosen,qd. Außerdem zeigte eine Imonatige Verabreichung, qd, Tag 1- 30, bei Verwendung mann-

50 9 884/1080

oxidase-Methode (L.T.Saloman et al., Anal. ehem. ^l, 453 (1959)) bestimmt wurde, weder Erhöhungs- noch Senkungstendenzen. Bei Anwendung der Kulturverdünnungsmethode erwies sich 2MOo(G frei von antibakterieller Aktivität.

Tabelle II gibt die Antitumofwirkungen des 6MCo(G gegen verschiedene Tumorsysteme wieder. Wie zu ersehen ist, war 6MGc(G aktiver als OCNU gegen sowohl NFS als auch Oa-755» wenn an 5 aufeinanderfolgenden Tagen intraperitoneal verabreicht wurde. Die LD,-des 6MCoIG bei einer einzigen Verabreichung wurde zu 91 mg/kg gefunden, welcher Wert zeigt, daß 6MOoIG weniger toxisch war als 2MOc(G.

Gegen L-121o bei einer Dosierung von 6-25 mg/kg/Tag und 5 aufeinanderfolgenden Verabreichungen des 6MOo(G entweder intraperitoneal oder oral überlebten 4- bis 5 von 6 Tieren und es wurde eine ILS von 52o bis 64-5 % gefunden; während eine einzige intraperitoneale Verabreichung mit einer Dosis von 35-4-5 mg/kg zu einer ILS von 717 # führte und alle 6 Tiere überlebten. Außerdem war 6MOo(G wie 2MOo(G frei von diabetogener und antibakterieller Aktivität.

Tabelle III zeigt die Ergebnisse des Tests der peripheren weißen Blutkörperchenzählungen (abgekürzt WBO) und die Überlebensraten bei normalen männlichen Ißp-Mäusen nach Behandlung mit den Testverbindungen.

Solche peripheren weißen Blutkörperchenzählungen wurden wie folgt durchgeführt: Normale männliche IOR-Mäuse wurden in Gruppen von 1o Tieren verwendet, die Testverbindungen zur Behandlung wur- ^l den in ihre entsprechenden Lösungen überführt. 2MOo(G und 6MOo(G wurden in physiologischen Salzlösungen gelöst, während CCNU und GCNU suspendiert wurden in o,5 #iger wäßriger CMC-Lösung und 5o#iger PEG-Lösung. Eine Einzelverabreichung mit einem Volumen von 1 ml pro 1oo g Körpergewicht des Tieres (o,1 ml/1ο g) wurde intraperitoneal gegeben; die Zählung der peripheren weißen Blutkörperchen wurde 3» 8 und 15 Tage nach Verabreichung der

509884/1080

- -8-Testverbindungen durchgeführt.

Die Testdaten zeigen, daß die Modellverbxndungen dieser Erfindung, 2MGcCG und 6MOo(G, gegen L-1210 aktiver waren als CONTJ und GONU und des weiteren Aktivität gegen feste wie auch ascites Tumorsysteme zeigBn. Die Verbindungen dieser Erfindung sind wasserlöslich und frei von diabetogener und antibakterxeller Aktivität. Außerdem zeigen sie Antitumoraktivität, selbst wenn man oral verabreicht, welche Eigenschaften bisher nicht bei bisher bewährten Verbindungen gefunden wurde und als charakteristisch

für die erfindungsgemäßen Verbindungen angesehen werden können.

609884/1080

Tabelle I

Tumor

Test

Test-

Dosis

Behandlung⁵¹·

Schema

1-p

T/C

b

Aktivität⁰ ILS^d

48

Überlebende⁰

system

mäuse

verbindg.

mg/kg/Ta

•ff Weg

D

%

(tot/getestet) %

>249

NJ¹S

ICR

2MCCXG

3,2

ip.

86,

Λ

>394

6,3

55,

2

>349

12,5

3

+ +

>198

15,o

^Dl-5

29!

2

++

>19o

2o,o

toxisch(6/6)

>16o

CCNU

2o,o

48,

3

58

ο

Ca-755

BBP₁

2MCc(G

3,2
6,3

ip.

^Dl-5

22,
9,

4
6

tt+

>143

(O

15,0

3,
0,

3

toxisch(6/6)

>343

Oft

CCNU

10,0

D₁ c

15,

O

+++

211

O

S 18oA

ICE

2MCcCG

3,2
12,5

ip.

0
0

:::

CO

Dnc

O

EAC

ICR

2MCcCG

3,2

ip·

0

+++

12,5

0

+++

I1-I2I0

BDB¹.

2MCcXG

1,0

ip.

0/6

1

2,o

1/6

3,2

3/6

2/6

6',3

1/6

1o,o

^Dl-5

1/6

12,5

1/6

2o,o

0/6

2MCc(G

2,0
3,2

po.

1/6
1/6

6^3

2/6

12,5

0/6

Tabelle I (Fortsetzung)

Tumor- Test- Test- Dosis Behandlung⁵¹ T/0^b Aktivität⁰ ILS'³' Überlebende*

system mause verbindg. mg/kg/Tag Weg Schema % (tot/getestet) %

BDF. 2MOc(G 6,3 ip. D. 128 0/6

' 8,0 ' >432 3/6

1o,o ./717 6/6

2o,o >717 6/6

25,o >539 4/6

ο Behandlung wurde begonnen 24 Stdn. nach Implantieren des Tumors (Tag 1):

*o D^ j-= qd., Tag 1-5 ; D. = nur 1 Tag

⁰⁰ T/0 wird ausgedrückt als das Tumor gewicht sverhältnis in festen Tumoren oder -^

f~ Zellpackungsvolumenverhältnis bei ascites-Tumoren behandelt/Kontrolle ι

ο ^C^T/C als Aktivität wird auf folgende Weise bewertet: I00-7I % = "-"; 7o - 5I % = "+" α» 50-21 % = ++, 2o-O ^ = "+++" in Fällen fester Tumore. I00-66 ^= "-",65-41 %= "+", ο 4o-11 % ="++", I0-O ^=¹¹+++" in Fällen von ascites-Tumoren.

% Erhöhung der Lebensspannne (mittlere Überlebensdauer) gegenüber Kontrolltests. ^e 60-Tage-Überlebende/sämtliche Tiere in behandelter Gruppe.

	Tumor	Test- Test	OONU	6MOc(G	Dosis
	system	mäuse verbindung			mg/kg/Tag
	NJ?S	ICE 6MOcCG	BDI¹. 6MOc(G		12,5
			I	6MOc(G	25,o
					35,o
				'^e siehe Fußnoten zu	5o,o
		COM		12,o
				2o,o
	Ga-755	BDI¹. 6MOo(G	6,3
σι		I	12,5
ο			25,0
40			5o,o
«SO		1o,o
OO		25,o
■Ρ»	L-1210	3,o
_*		6,o
O		1o,o
00		12,5
O		25,o
		4o,o
		6,o
		12,5
		25,o
		35,o
		45,o
	a,b,c,d	Tab. I

Tabelle II

Behandlung⁸"
Wep; Schema

¹P' ^Di_5

ip- D_1-5

ip· D,

1-5

P° ^Di_5
ip. D₁

Τ/θ'

77,8 61,6 38,8 34,1 57,5 48,3

53,4

16,3 7,6 ο

15,o 1,1

Aktivität⁰ ILS^d (tot/getestet) %

toxisch(6/6)

Überlebende^

toxisch(6/6)	>292	2/6	I _Λ
toxisch(6/6)	v639	3/6	-Λ I
v645	3/6
>52o	4/6
>615	4/6
>237	2/6
>58o	4/6
>57o	4/6
>62o	4/6
>717	6/6
>717	6/6

		K)
		cn
		co
		O

Behandlung

Dosis

Mittlere

3

98,o

Mäuse

Tabelle III

jich der

WBC/mm^

für

Sterberate

Ol

(mg/kg, ip.

) 1o

125,o

Zählrate und Ber«

")

(tote/getestete)

CO

1o2,6

+ 8,8

nach Tagen (x 1o^c

15

CD

5o $ PEG

74,0

+ 9,9

8

14,6

11o,7 +

9,9

o/l 0

Salzlösung

-

46,3

+ 3,3

134,9 +

19,4

133,8 +

15,7

o/l 0

0,5 # CMC

—

3o,8

±4,6

118,8 +

5,1

135,7 +

14,8

o/l 0

. 2MCoCG

1o

35,4

+ 9,5

1o9,o +

4,5

131,8 +

5,4

o/l 0

2o

32,o

+ 2,8

1o5,6 +

16,5

129,4 +

2o,1

2/10

4o

73,2

+ 2,9

ΙΟΙ ,0 Hh

Ιο/Ιο

60

41,1

± 3,8

10/10

cn

80

31,2

+ 3,5

Ιο/Ιο

ο

6MCc(G

4o

28,1

+ 4,1

3,8

136,9 +

1o,o

0/10

CO
CO

60

38,7

+ 2,5

1O5,7 +

5,8

11o,4· +

6,3

ο/Ιο ,

co

loo

31,5

± 3,8

73,5 +

4,9

99,8 +

1o,8

^2/,¹⁰ w

150

27,9

+ 2,9

71,9 +

Ιο/Ιο Ψ

CCIiU

2o

2o,4

± 1t7

61,o

5,o

1oo,4 +

9,8

o/1o

O

4o

83,1

+ 3,7

81,8 +

6,0

77,9 +

9,o

1/10

60

6o,4

± 2,5

59,o +

36,o

9/10

ο

80

33,2

+ 4,5

60,0

Ιο/Ιο

GCNU

1o

26,5

+ 3,6

15,7

116,0 +

1o,o

o/l 0

2o

± 3,3

14o,3 +

17,4

1o6,o +

9,o

6/10

4o

± 3,5

131,4 +

Ιο/Ιο

60

Ιο/Ιο

2530418

Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der Erfindung, ohne sie jedoch zu beschränken:

' Beispiel 1

2,29 g Methyl^-amino^-desoxy-cfc-D-glucopyranosid-hydrochlorid werden in 2o ml Wasser gelöst; zu dieser Lösung werden 3o ml Acetonitril und dann noch unter Eiskühlung 1,48 g 2-Ghloräthylisocyanat und 1,8 g Silbercarbonat gegeben. Das erhaltene Gemisch wird 1 Std. unter Rückfluß auf einem Wasserbad erwärmt und die umgesetzte Lösung heiß filtriert, um das gebildete unlösliche Silbersalz zu entfernen. Das Filtrat wird i.V. eingeengt und der kristalline Rückstand aus Äthanol umkristallisiert. Es ergeben sich 1,84 g Methyl-N-carbamyl-lT^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2- -desoxy-cfc-D-glucopyranosid. Ausbeute: 61,5 #» Schmp. 162-163⁰G. \μ\ψ= + 94,9° (G - ο,5, H₂O). Beilsteintest:positiv. IR (KBr): 162o cm"¹(-G0), I575 cm"¹ (-NH),33oo cm"¹(-BH,-OH). Analyse für

298,72) in %: G 4o,2i, H 6,41, N 9,38, Gl 11,87. Gefunden:~C 4o,15, H 6,39, N 9,41, Gl 11,8o.

6,1 ο g Methyl-H-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-cirD- -glucopyranosid,wie oben hergestellt, werden in 8o ml 2o#iger Essigsäurelösung (wäßrig) gelöst, wozu dann langsam 1,69 g Natriumnitrit unter Rühren und Eiskühlung zugegeben werden. Die erhaltene Lösung wird über Nacht in einem Kühlschrank stehen gelassen, dann werden 27 ml lonenaustauscherharz (H⁺-IOrm,"Amberlite IR-12o", im folgenden wird die gleiche Art Harz verwendet) zugesetzt und 3o Minuten gerührt. Das lonenaustauscherharz wird abfiltriert und das Piltrat i.V. zur Trockne eingeengt bei einer Temperatur unter 3o°G. Der kristalline Rückstand wird aus Äthanol umkristallisiert und ergibt 4,42 g Methyl-N-carbamyl-N¹- -(Ä~chloräthyl)-N·-nitroso-2-amino-2-deso3cy-oi-D-glucopyranosid als schwach gelbliche Nadeln. Ausbeute: 66,1 #, Schmp. 144-146°G (Zers.j,fct|^⁵= +1o4° (G=o,5, H₂O). Beilsteintest:positiv. IR(KBr): 337o cm" ^ (-0Ξ), 17oo cm~¹(-GO), 153o cm"¹(-NH), 1485 cm"¹ (-NO), 85o cm" (cfc-anomerisches G₁-H). Analyse für O₁ (MG 327,72) in % : G 36,65, H 5»54, N 12,82 Gl 1o,82. Gefunden: G 36,69, H 5,58 N 12,78, 01 1o,79.

503884/1030

Beispiel 2

2,42 g Methyl^-amino^-desoxy-cfc-D-glucopyranosid-hemihydrosulfat werden in 3o ml Wasser gelöst und zu dieser Lösung 4o ml Benzol- -Chloroform(1:1) und dann unter Eiskühlung 1 ,4 g 2-Chloräthylisocyanat und 2,5 g Bariumcarbonat gegeben. Das erhaltene Gemisch wird unter Rückfluß 1 Std. auf einem Wasserbad erwärmt und die umgesetzte Lösung heiß filtriert, um das gebildete unlösliche Bariumsalz zu entfernen. Das Filtrat wird i.V. eingeengt und der kristalline Rückstand aus Isopropanol umkristallisiert, um 1,74- g Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ctr D-glucopyranosid zu erhalten. Ausbeute: 58,5 #, Schmp. 162-163°C. [ct|23_{= +95i}5^o (G=o,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₉N₂O₆Gl (MG 298,72) in #: C 4o,21, N- 6,41, N 9,38 Cl 11,87. Gefunden: C 4o,29, H 6,45, Ii 9,31, Cl 11,95.

2,98 g Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-drD- -glucopyranosidjWie oben hergestellt, werden in 4o ml 99#iger Ameisensäure gelöst, zu welcher dann langsam 1,6 g Natriumnitritpulver gegeben wird, während man kräftig unter Eiskühlung rührt. Das Rühren wird 4 Stdn. unter den gleichen Bedingungen fortgesetzt. Die umgesetzte Lösung wird auf 2oo ml Eis-Wasser gegossen, wozu dann unter Rühren 13 ml des bereits beschriebenen Ionenaustauscherharzes gegeben werden; nachfolgend wird 2o Minuten gerührt. Das Ionenaustauscherharz wird abfiltriert und das Filtrat i.V. bei einer !Temperatur unter 30 C eingeengt. Der kristalline Rückstand wird aus Äthanol umkristallisiert und gibt 2,51 g Methyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-N'-nitroso-2-amino-2-desoxy- -a(-D-glucopyranosid als schwach gelbliche Kristalle. Ausbeute: 76,7 %· Schmp. 144-146⁰C (Zers.). [ctj^² - + 1o2° (C= 0,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₈N₅O₇Cl (MG 327,72) in $: C 36,65, H 5,5*. N 12,82, Cl 1o,82. Gefunden: C 36,72, H 5,51, N 12,88, Cl 1o,78.

Beispiel 3

1,92 g Methy 1-2,6-diamino-2,6-didesoxy-cfe-D-glucopyranosid werden , in 4o ml 4o%igem wäßrigen Äthanol gelöst, hierzu werden 2,5 ml 2-Chloräthylisocyanat bei 2ü°C unter kräftigem Rühren gegeben. , Das Rühren wird 1 Std. fortgesetzt, wobei die Beendigung dieser

609884/1080

Reaktion durch Dünnschichtchromatographie(nachfolgend "tic" abgekürzt) festgestellt wird.(Kieselsäuregel, Entwicklungsmittel: Chloroform-Äthanol 4:1, im folgenden werden diese Hilfsmittel in entsprechenden Fallen nur dann erwähnt , wenn sie sich von obigem unterscheiden). Die umgesetzte Lösung wird i.V. bei einer Temperatur unter 3o°C eingeengt und der Rückstand aus Äthanol umkristallisiert, um 2,52 g Rohkristalle zu erhalten. Schmp. 158—162 G. Diese Rohkristalle werden aus Isopropanol umkristallisiert und geben 2,1? g Methyldi-N,N'-[N-(2-chloräthyl)carbamyl}- -2,6-diamino-2,6-didesoxy-ot-D-glucopyranosid. Ausbeute: 53,8 #, Schmp. 176-178°C. [ctj^⁰= + 69,6° (O= o,3, Methanol). Rf o,78 (tlc). Analyse für O₁₅H₂₄N₄O₆Ol₂ (MG 4o3,26) in #: 0 38,?2, H 6,0 N 13,89, 01 17,58 . Gefunden: 0 38,78, H 6,o2, N 13,82, 01 17,52.

4,o g Methyldi-N,N'-[N-(2-chloräthyl)carbamyl3-2,6-diamino-2₁6-didesoxy-Oc-D-glucopyranosid, so hergestellt, werden in 2oo ml Wasser gelöst, wozu I00 ml einer 0,25 N Salpetrigsäurelösung bei O - 3°0 unter Rühren und Kühlen tropfenweise zugesetzt werden; diese wäßrige Salpe-fcrigsäurelösung wird hergestellt, indem man Distickstofftrioxid-Gas in I00 ml Wasser von 0 - 3 °0 leitet. Das Rühren wird etwa 30 Stdn. unter den gleichen Bedingungen fortgesetzt, die umgesetzte Lösung dann lyophilisiert, um Rohkristalle zu erhalten, die dann aus Äthanol umkristallisiert werden und 3,14 g Methyldi-N,N^l-[N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamylJ- j -2,6-diamino— 2,6-didesoxy-ct-D-glucopyranosid ergeben. Ausbeute: 68,2 #. Schmp. 135-137°O (Zers.). {ctjjp- +82° (0= 0,3, Methanol).; Analyse für O₁₅H₂₂N₆OgOl₂ (MG 461,26) in %: 0 33,85, H 4,81, ^: N 18,22, 01 15,37. Gefunden: 0 33,91, H 4,83, N 18,27, 01 15,32.

Die pharmakologisehen Eigenschaften obiger Verbindung unter Anweildung der Testprozeduren gemäß Tab. I - III, waren wie folgt: · Wenn Testtieren verabreicht (BDI.-Mäuse) intraperitoneal mit ',

' j

einer Dosis von 8,5 mg/kg/Tag an 5 aufeinanderfolgenden Tagen, i wurden Aktivitäten von ++ oder +++ gegen NFS, Oa-755, S-I80A ! und EAO gefunden. Gegen L-I2I0 bei einer Dosierung von 2,2 mg/kg/' /Tag, intraperitoneal an 5 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht, ■wurden drei 60-Tage-Überlebende von sechs Testtieren und eine ILS von 4oo % ; bei einer Dosierung von 4,5 mg/kg/Tag(oral) wur- I

509884/1080

den drei 6o-Tage-Überlebende von 6 Tieren und eine ILS von 37° % beobachtet, während bei einer einzigen intraperitonealen Verabreichung und Dosierung von 7 - 15 mg/kg alle sechs getesteten Tiere die 6o-Tageperiode überlebten und ihre ILS 717 % war. Diese Verbindung erwies sich auch als nichtdiabetogen und frei von antibakteriellen Aktivitäten. Außerdem war ihre Toxizität gegen Knochenmark geringer als die des CClTU und vergleichbar mit GCNU. .

Beispiel 4-

2,29 g Methyl-2-amino-2-desoxy-ß-D-glucopyranosid-hydrochlorid werden in 55 ml Wasser-Isopropanol (3j2o) gelöst, wozu dann 1,1g 2-Ohloräthylisocyanat und 1,08 g Triäthylamin unter Rühren und Eiskühlung gegeben werden. Das Gemisch wird weiter etwa 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt, während die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Die umgesetzte Lösung wird i.V. bei einer Temperatur unter 3ö°C eingeengt. Der erhaltene kristalline Rückstand wird aus Äthanol umkristallisiert und ergibt 1,62g Methyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute: 54,3 #. Schmp. 168-17o°C. [<i|jjp- -28,4° (C - o,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₉N₂O₆Cl (MG 298,72) in % : C 4-0,21, H 6,41, N 9,38, Cl 11,87. Gefunden: C 4-0,27, H 6,4-8,' N 9,4-2, Cl 11,83.

2,98 g Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ß- -D-glucopyranosid, so hergestellt, werden in I00 ml 1#iger Schwefelsäure gelöst, zu welcher dann langsam 12 g einer 5#ig^en Salpetrigsäurelösung unter Rühren und Eiskühlung gegeben werden. Das Rühren wird 1 Tag fortgesetzt, während die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Die umgesetzte Lösung wird i.V. bei einer Temperatur unter 3o°C eingeengt. Der erhaltene kristalline Rückstand wird aus wasserfreiem Methanol umkristalli-*- siert und ergibt 1,87 g Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-N^l- -nitroso-2-amino-2-deso3q7-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute: 57,2 %.

Schmp. 152 - 154-⁰C (Zers.). [ct^⁵= -4·° (C =0,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₈N₃O₇Cl (MG 327,72) in %'. C 36,65, H 5,54, N 12,82, Cl Ίο,82. Gefunden: C 36,71, H 5,54, N 12,78, Cl 1o,89.

509884/1080

_₁₇_ 2530418

Die oben erhaltene Verbindung war, wenn sie mit ihrem cfc-Anomer verglichen wurde, si&fte Tab. I , etwa 11o-12o %

wirksamer als Antitumormittel. Das vorliegende ß-Anomer zeigte in einer Dosierung von 12,5 mg/kg/Tag, intraperitoneal an 5 aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht, eine Aktivität von ++ oder +++ gegen NFS, Ga-755, S-I80A und EAC. 3ntraperitoneal an 5 aufeinanderfolgenden Tagen in einer Dosis von 3,2 mg/kg/Tag verabreicht, waren ascites-Zellhäufungen sowohl bei mit S-I80A als auch EAO implantierten Tieren nicht feststellbar. Gegen L-I2I0 in gleicher Dosierungsweise'wurden vier 60- -Tage-Überlebende von 6 Tieren und eine ILS von 4-8o ^, bei oral verabreichter Dosis von 6,3 mg/kg/Tag an 5 Tagen drei 60-Tage-Überlebende von 6 Tieren und eine ILS von 385 % gefunden, während bei einer einzigen intraperitonealen Verabreichung von 8-25 mg/kg allesechs Testtiere nach 60 Tagen überlebten und die ILS 717 # betrug. Diese Verbindung war weder diabetogen noch zeigte sie irgendwelche antibakteriellen Aktivitäten. Bei einer Dosis waren die Zählungen, der peripheren weißen Blutkörperchen für die Verbindung 5 - 2o % höher als die des ofc-Anomers bei entsprechend 3» 8 und I5 Tagen. Hieraus ist zu schließen, daß die Knochenmarktoxizität der Verbindung 5 - 2o % geringer ist.

Beispiel 5

1,93 g Methyl-ö-amino-G-desoxy-oi-D-glucopyranosid werden in 2o ml Wasser gelöst und zu dieser Lösung 5° ml Isopropanol gegeben; dann wird unter kräftigem Rühren tropfenweise 1,2 g 2-Chloräthylisocyanat bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Rühren wird etwa 2 Stdn. fortgesetzt, wälirend die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird (Lösungsmittel: OhIoroform-Äthanol, 3:1). Die umgesetzte Lösung wird i.V. bei einer Temperatur unter 3o°0 eingeengt. Der so erhaltene kristalline Rückstand wird aus wasserfreiem Äthanol umkristallisiert und ergibt 1,71 g Methyl-N- -carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-cfc-D-glucopyranosid als weißliche Kristalle. Ausbeute: 57,3 #. Schmp. 161-162°0. |⁵

⁵= +76,4 ° (0= 0,3, Methanol). Analyse für O₁₀H₁₉F₂O₆Ol (MG 298,72) in #: 0 4o,21, H 6,4-1, Ή 9,38, 01 11,87. Gefunden: 0 4-0,28, H 6,45, N 9,32, 01 11,92.

509884/1080

2,98 g Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-ct-D- -glucopyranosid, so hergestellt ,werden in 80 ml Eisessig- suspendiert. Zu dieser Suspension werden 0,7 g Natriumnitritpulver bei 0-5 C unter Rühren zugegeben-, es bildet sich eine schwachgelbe homogene Lösung. Diese Lösung wird bei gleicher Temperatur weiter 1 Tag gerührt, dann wird das Ionenaustauscherharz zwecks Entfernung der Natriumionen zugesetzt. Das Ionenaustauscherharz wird abfiltriert und mit Eisessig gewaschen; Filtrat und Waschflüssigkeit werden kombiniert und i.V. eingeengt. Der so erhaltene Rückstand wird aus Isopropanol umkristallisiert und ergibt o,296 g Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-Ii^t-nitroso-6-amino-6-desoxy-c(-D-glucopyranosid. Ausbeute: 9,o5 %. Schmp. Ιοί - 1o3°C (Zers.). £<*)β⁵=+73,2^ο (^c=o»⁵» Methanol). Analyse für G₁₀H₁₈N₅O₇Ol (MG 327,72) in %: 0 36,65, H 5,54·, N 12,82, Cl 1o,82. Gefunden: 0 36,59, H 5,4-8, N 12,91, 01 1o,75.

Beispiel 6

1,93 g Methyl^-amino^-desoxy-cfc-D-glucopyranosid werden in 3oml wasserfreiem Ithanol gelöst und zu dieser Lösung 1,2 g 2-Chloräthylisocyanat tropfenweise bei 2o C unter kräftigem Rühren gegeben. Das Rühren wird etwa 1 Std. bei Raumtemperatur unter den gleichen Bedingungen fortgesetzt, wobei die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Die umgesetzte Lösung wird i.V. bei einer Temperatur unter 3o 0 eingeengt und der Rückstand aus Äthanol umkristallisiert, um 2,42 g Rohkristalle zu erhalten. Schmp. 147-151⁰O. Diese Kristalle werden aus Isopropanol umkristallisiert und geben 1,7o g Methyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-oC-D-glucopyranosid. Ausbeute: 57,2 ¥>. Schmp. 162-163°0.[iJp⁵= +94,9° (0=o,5 , H₃O). Analyse für O₁₀H₁₉N₂O₅Ol (MG 298,72) in %'. 0 4-o,21, H 6,41, N 9,38, öl 11,87, Gefunden: 0 4-0,15, H 6,4-9, N 9,4-2, 01 11,85.

2,98 g Methyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-cC-D- -glucopyranosid, so hergestellt, werden in 5ο ml 2N Schwefelsäure gelöst, zu dieser Lösung werden tropfenweise bei 0 - 5°C unter kräftigem Rühren 4- ml Isoamylnitrit zugegeben. Das Rühren wird 3 Stdn. fortgesetzt, wobei die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Die umgesetzte Lösung wird i.V.

509884/1080

_₁₉_ 2530418

eingeengt und ergibt Rollkristalle, die dann aus Äthanol umkristallisiert werden und 2,75 g Methyl-N-carbamyl-N'-(2-chlor-

äthyl)-N'-nitroso^-amino^-desoxy-o^-D-glucopyranosid ergeben. Ausbeute: 84,1 #. Schmp. 144- 146°0 (Zers.)· [°(]ΐΡ⁼ +1o4° (G =o,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₈N₃O₇Ol (MG 327,72) in %'. 0 36,65, H 5,54, N 12,82, 01 1o,82. Gefunden: 0 36,68, H 5,58, N 12,76, 01 1o,87-

Analog wird das bereits erwähnte Methyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ot-D-glucopyranosid nach der oben beschriebenen Methode behandelt mit der Ausnahme, daß 2o ml 2N Salzsäure und 3,5 ml Isobutylnitrit anstelle der 5° ml 2N Schwefelsäure und 4 ml Isoamylnitrit verwendet werden*Es werden 2,7 g Methyl-N-carbamyl-N¹-(2-chloräthyl)-N'-nitroso'—2-amino-2-desoxy-o(-D-glucopyranosid erhalten. Ausbeute: 82,6 %. Schmp. 144-146°0 (Zers.).[ol]Jp= +1o4° (0 = 0,5, H₂O). Analyse für O₁₀H₁₈N₃O₇Ol (MG 327,72) in £: 0 36,65, H 5,54, N 12,82, 01 1o,82. Gefunden: 0 36,7o, H 5,51, N 12,90, 01 10,78.

Beispiel 7

1,92 g Methyl-2,6-diamino-2,6-didesD3cy-ß-D-glucopyranosid werden in 5o ml Methanol-Aceton-Äthylacetat (1:1:1) gelöst und zu dieser Lösung 2,5 g 2-0hloräthylisocyanat bei 12 - 15°0 unter kräftigem Rühren tropfenweise gegeben. Das Rühren wird 2 Stdn. fortgesetzt, wobei die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Die umgesetzte Lösung wird bei einer Temperatur unter 3o°C eingeengt i.V. und der erhaltene Rückstand aus Isopropanol kristallisiert, um 3,1 g Rohkristalle zu erhalten. Schmp. 198 - 2o2°0. Die Rohkristalle werden aus Methanol umkri- ' stallisiert und geben 2,55 g Methyldi-N,N'-[N-(2-chloräthyl)-carbamyi]-2,6-diamino-2,6-didesoxy-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute:; 63,3 S*. Schmp. 227 - 229°0. [SJjp= - 23° (0- o,1, Methanol). j Analyse für O₁₃H₂₂₁N₄O₆Ol (MG 4o3,26) in #1 0 38,72, H 6,00, j N 13,89, 01 17,58. Gefunden: 0 38,80, H 5,98, N 13,92, 01 17,55J

4,o g Methyldi-N,N^l-[N-(2-chloräthyl)carbamyl][-2,6-diamino-2,6- ^; didesoxy-ß-D-glucopyranosid, so hergestellt, werden in 9o#iger Ameisensäure( H¹O vn£ ) gelöst und zu dieser Lösung werden langsam'

509884/1080

-2ο-

bei O- 4⁰C unter kräftigem Rühren 2,2 g Kaliumnitrit zugesetzt. Das Rühren wird etwa 22 Stdn. fortgesetzt, wobei die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird (Lösungsmittel:Ohloroform-Äthanol, 3:1)· Die umgesetzte Lösung wird über Nacht bei O⁰O stehen gelassen. Zur abgekü lten Lösung werden 24 g Ionenaustauscherha ζ gegeben und das Gemisch 3o Min. bei 0-4 G gerührt. Das Ionenaustauscherharz wird ab filtriert und das 3PiI-trat i.V. bei einer Temperatur unter 3o 0 eingeengt. Der kristalline Rückstand wird aus wasserfreiem Methanol umkristallisiert und ergibt 2,66 g Methyldi-Ν,Ν'-JN-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamylJ-2,6-diamirio-2,6-didesoxy-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute: 57,7 %> Schmp. 151-153⁰O (Zers.). (V]^⁵= -5,5° (C=o,2, Methanol). Analyse für O₁₅H₂₂N₆OgCl (MG 461,26) in % : C 33,85, H 4,81, N 18,22, Cl 15,37. Gefunden: C 33,91, H 4,76, N 18,18, Cl 15,32.

Die oben erhaltene Verbindung wurde pharmakologiseh geprüft und ist in Vergleich zu ihrem c(-Anomer (d.h. Verbindung des Beispiels 3) 5 - 2o % wirksamer als Antitumormittel, während sie vermin- ' derte Knochenmarktoxizitäten aufweist. Diese Verbindung ist frei von diabetogener und antibakterieller Aktivität.

Beispiel 8 i

1,93 g Methyl-2-amino-2-desoxy-ß-D-glucopyranosid werden in 2o . ml Dimethylsulfoxid gelöst und zu dieser Lösung 1,2 2-Chloräthylisocyanat tropfenweise bei 25 C unter kräftigem Rühren zugesetzt. Das Rühren wird 3o Min. fortgesetzt, wobei die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Die umgesetzte Lösung wird i.V. bei einer Temperatur unter 4o°C eingeengt. Der kristalline Rückstand wird aus Isopropanol umkristallisiert und ergibt 1,98 g Methyl-N-carbamyl^N'-(2-chloräthyl)-2-amino-2- -desoxy-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute: 65 %. Schmp. 168-17o°C. '

p= -28,4° (C - o,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₉N₂O₆Cl (MG 298,73) in #: C 4o,21, H 6,41, N 9,38, Cl 11,87. Gefunden: C 4o,25, ' N 6,45, N 9,36, Cl 11,93.

2,^8 g Methyl-N-carbamyl-N^I-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ß-D- -glucopyranosid, so hergestellt, werden in 30 ml einer Lösung gelöst, die aus 50 % Essigsäure und 5o % AmeisensäureJbesteht

503884/1080

2530418

(1:1); zu dieser Lösung werden o,8 g Natriumnitritpulver langsam bei O - 5°C unter kräftigem Rühren zugesetzt. Das Gemisch wird 1 Tag weitergerührt, dann werden 13 g Ionenaustauscherharz zugesetzt, danach wird 3o Min. gerührt. Das Ionenaustauscherharz wird abfiltriert und das Filtrat i.V. bei einer Temperatur unter 3o°C eingeengt. Der kristalline Rückstand wird aus Isobutanol umkristallisiert und ergibt 2,o9 g Methyl- -N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-N'-nitroso-2-amino-2-desoxy-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute: 63,8 %. Schmp. 152-154 ⁰C (Zers.).

F ^O

-4-^O(^c=°»5, H₂O). Analyse für O₁₀H₁₈N₃O₇Ol (MG 327,72) in %'. 0 36,65, H 5,54, N 12,82, 01 1o,82. Gefunden: 0 36,63, H 5,4-9,. N 12,79, 01 1o,9o.

!Beispiel 9

54,4- g eines anomeren Gemisches aus n-Butyl-2-amino-2-desoxy-D-glucopyranosid-hydrochlorid (1:1) werden in 300 ml Wasser gelöst und zu dieser Lösung I00 ml Benzol und dann 22 g 2-Chloräthylisocyanat, 14,3 g Tripropylamin und 8 g Pyridin gegeben. Das erhaltene Gemisch wird unter Rückfluß erhitzt und die umgesetzte Lösung i.V. eingeengt. Der kristalline Rückstand wird nach Waschen mit einer kleinen Menge Äthanol aus Äthanol umkristallisiert und ergibt 2o,2 g n-Butyl-N-carbamyl-N^t-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ß-D-glucopyranosid. Ausbeute: 59,2 #,

⁰O [tfjjp 43°

Schmp. 182 - 184⁰O. [tfjjp= -43° (C=o,3, H₂O). Analyse für O₁₃H₂₅N₂O₅Ol (MG 34o,8o) in #1 0 45,82, H 7,39, N 8,22, Cl 1o,4o. Gefunden: 0 45,7²J-, H 7,34, N 8,13, Cl 1o,44.

Die Wasch- und Mutterlaugen, die oben erhalten wurden und n-Butyl-N-c arbamyl-N¹ -( 2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-oc-D-glucopyranosid enthalten, werden kombiniert und i.V. konzentriert. Das Konzentrat wird auf eine Kieselsäuregelsäule gegeben und die adsorbierten Materialien mit Chloroform-Äthanol (3:Ί) eluiert, welches Eluat in 2o ml-Fraktionen gesammelt wird. TIc- -Proben (Lösungsmittel:Chloroform-Äthanol, 3^) oeder Fraktion werden analysiert, um n-Butyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-deso:xy-c£-D-glucopyranosid zu bestimmen. Die die oben erwähnte Verbindung enthaltenen Fraktionen werden kombiniert und i.V. eingeengt. Der kristalline Rückstand wird mit Isopro-

509884/1080

panol gewaschen und ergibt 15,5 g n-Butyl-N-carbamyl-N¹-^- -chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-cX-D-glucopyranosid. Ausbeute: 4-5,5 %· Senmp. 135-137°G .[a]^p= +86° (C= o,3, H₂O). Analyse

für G₁₃Hp₅H₂O₆Gl (MG 34o,8o) in %: G 4-5,82, H 7,39, N 8,22, Gl 1o,4-o." Gefunden: G 45,89, H 7,41, N 8,15, Gl 1o,3o.

3,41 g n-Butyl-N-carbamyl-li^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-deso3cy-ß- -D-glucopyranosid, so erhalten, werden in 4o ml 2o#iger Essigsäure (wäßrig) gelöst und zu dieser Lösung o,95 g Natriumnitrat innerhalb 3o Min. bei o-5 C unter Rühren zugesetzt; die Reaktionslösung wird 5 Tage bei o-5°0 stehen gelassen. Ein weiterer Anteil von o,15g Natriumnitrit wird zur Reaktionslösung gegeben und diese wiederum 2 Tage bei ο - 5°C stehen gelassen, wobei die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Zur umgesetzten Lösung werden I5 ml Ionenaustauscherharz gegeben, wonach 1 Std. unter Eiskühlung gerührt wird. Das Ionenaustauscherharz wird abfiltriert und das Filtrat i.V. bei einer Temperatur unter 25°0 zu einem St-rup konzentriert. Der S-Ürup wird abgetrennt und-mit einer Kieselgelsäule ("Kieselgel-60", Entwicklungsmittel: Chloroform-Äthanol, 9=1) gereinigt. Der gereinigte Sirup wird unter Verwendung von Äther und Petroläther

kristallisiert, was dann i.V. getrocknet wird und 2,17 S n-Butyl-H-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-N^l-nitroso-2-amino —2-desoxy-ß-D-glucopyranosid ergibt. Ausbeute: 58,7 $· Schmp. 11 o- -112⁰G (Zers.).[c*]|p= -3o° (C= o,2, H₂O). Analyse für O₁₅H₂₄= =N,OC1 (MG 369,80) in %'. G 42,22, H 6,54, N 11,36, Gl 9,59. Gefunden: C 42,30, H 6,51, N 11,22 Gl 9,74.

Analog erhält man unter Verwendung von 3,41 g n-Butyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-2-amino-2-desoxy-ct-D-glucopyranosid 2,o4 g n-Butyl-N-carbamyl-N'-(2-chloräthyl)-N'-nitroso-2-amino- -2-desoxy-ot-D-glucopyranosid. Ausbeute: 55,2 %. Schmp. 98-1 oö°C. (Zers.).[oi]^⁵=+118⁰(G - 1,o, H₂O). Analyse für G₁₃H₂₄N₅O₇Cl (MG 369,80) in %'. C 42,22, H 6,54, N 11,36, 01 9,59. Gefunden: G 42,14, H 6,54, N 11,42, Gl 9,68.

Die oben erwähnten oV- und ß-Anomeren dieser Verbindung wurden pharmakologisch geprüft und zeigten den gleichen Wert der Anti-

5G9S84/1080

tumor aktivität wie die in Beispiel 1 und 4- erwähnten Verbindungen, ihre Knochenmarktoxizitäten zeigten gleichfalls jene niedrigen Werte. Diese Verbindungen besitzen weder diabetogene noch antibakterielle Aktivität.

Beispiel "Io

2»57 S getrocknetes n-Propyl-ö-amino-ö-desoxy-Oc-D-glucopyranosid-hydrochlorid (Schmp. 135°C, Zers.), [cl]|⁵= + 6o,7°(C=o,1, ' Methanol, hygroskopisch) werden in 5°.ml absolutem Methanol gelöst, wozu dann 2,ο g Silbercarbonat unter Eiskühlung und Rühren gegeben werden. Das Gemisch wird 1 Std. weitergerührt und nach Filtration die umgesetzte Lösung auf -8°0 gekühlt. Zur Lösung werden dann tropfenweise 1,26 g 2-Chloräthylisocyanat gegeben, wobei man rührt, und das Rühren wird 2 St dn. fortgesetzt. Die erhaltene Lösung wird über Nacht bei 5 C stehengelassen. Die Lösung wtTcL nach Entfärbung mit Aktivkohle i.V. konzentriert . Das Konzentrat wird auf eine Kieselgelsäule gegeben und die adsorbieren Materialien werden mit Chloroform-Äthanol (5:1) eluiert, welches Elvtat in !Fraktionen gesammelt wird« Tlc-Proben jeder Fraktion werden analysiert , um das n-Propyl- -N-c arb amy 1-N' - ( 2-chl or äthy 1 )-6-amin 0-6-de s oxy-α-D-glue opyranosid zu bestimmen. . Die die oben erwähnte Verbindung enthal- ? tenden Fraktionen, werden kombiniert und i.V. eingeengt, um 1,8o g eines Sirups zu erhalten. Der Sirup wird kristallisiert ■ unter Verwendung von Chloroform und Petroläther. Die so erhaltenen Kristalle werden mit Chloroform-Petroläther (1:1) gewä- -\ sehen und dann i.V. getrocknet, wodurch 1,36 g n-Propyl-N-carba+- myl-N^l-(2-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-oL-D-glucopyranosid erhalten werden. Ausbeute: 42,ο #. Schmp. 112- 113°C. [pt|ip=+26^o :

(C = 1,o, Methanol). Rf o,56 (tic). IR (KBr): 163o ein* (C=O), i

1 1 ''

158o cm" (-NH), 848 cm (ot-anomerisches C₁-H). Analyse

für C₁₂H₂₃N₂O₅Cl (MG 326,78) in % : C 44,11, H 7,o9, N 8,57, Cl 1o,85. Gefunden: C 44,o1, H 7,15, N 8,48, Cl 1o,62.

1,o g n-Propyl-N-carbamyl-N'-(2-chlorätPiyl)-6-amino-6-desoxy-ot- -D-glucopyranosid, so erhalten, werden in 30 ml 2o#iger wäßriger Essigsäurelösung gelöst, wozu o,255 S Natriumnitrit dann innerhalb von 3o Min. bei o-5°C unter Rühren zugegeben werden, j Das Gemisch wird bei o-5°C 4 Tage stehen gelassen und dann mit ',

509884/1080

,,:- _τ2Α_ ... 2 5 30 44-8

einem weiteren Anteil von 5° m.g Natriümnitrit versetzt, wonach wiederum 2 iß§.ge bei ο-5 Q stehen gelassen wird» Die Beendigung der Reaktion, wird durch tlc geprüft. Zur umgesetzten Lösung werden 5, ml ipnenaugtauscherharz gegeben und das Gemisch 1 Std. unter Eiskühlung gerührt. Das Ionenaustauscherharz wird abfiltriert und das FiI,trat i*Y.. bei einer Temperatur unter 25 G zu einem !Sirup konzentriert. Der Sirup wird mittels einer Kieselsäuregelsäule gereinigt (^Lösungsmittel! Chloroform-Äthanol, 9:1) und unter Verwendung von Äther und Petroläther .umkristallisiert. Die, so erhaltenen Kristalle werden i.V. getrocknet und geben o_:i51 g n-!PropylrN-carbamjl-N^l-(2-chloräthyl)-N^l-nitroso-G-aminp-ö-desoxy-QL-D-glucopyranosid. Ausbeute: 47 %· Schmp. 75⁰Q (Zers.). Rf o,63 (tlc). [pc]p⁵=+ 66° (C=o,l, Methanol) Hygroskopisch«?

Beispiel 11

2,57 g n-Propyl-ö-amino-G-desoxy-ot-D'-glucopyranosid-hydrochlorid werden mit 1,26 g 2-Chloräthylisocyanat in gleicher Weise wie in Beispiel 1o umgesetzt. Der erhaltene Sirup wird in. ²I-O ml 2o#iger wäßriger Essigsäurelösung gelöst, wozu o,69 g Natriumnitrit über 3o Min. unter Rühren und Eiskühlung gegeben " werden. Das Rühren wird 1,5 Stdn. fortgesetzt und die Lösung 2 Tage bei 0-5°C 2 Tage stehen gelassen. Zu dieser Lösung werden wiederum o,27 g Natriumnitrit gegeben, die Lösung wird dann 2 Tage bei o-5°C stehen gelassen. Nachfolgend wird die Lösung in gleicher Weise wie in Beispiel 1o aufgearbeitet, wobei man 1,2 g n-Propyl-N-carbamyl-N^l-(2-chloräthyl)-N^l-nitroso-6-amin.o- -6-desoxy-Oc-D-giucopyranosid erhält. Ausbeute: 34,3 #. Schmp. | 75°O (Zers.). [oQ]P^{= + δ6}° ^^{σ= 0}^* ^{Μθΐη&ηο1})· Hygroskopisch. !

Beispiel12 '

2,29 g Methyl-ö-amino-e-desoxy-ß-D-glucopyranosid-hydrochlorid werden in 5® ml Methanol gelöst, zu welcher Lösung 2,ο g 'Silbercarbonat bei o-5 O unter kräftigem Rühren gegeben werden. Das Rühren wird 1 Std. fortgesetzt und die Lösung zwecks Ent- ! fernung der unlöslichen Materialien filtriert. Das Filtrat wirdj auf -5⁰C abgekühlt und tropfenweise mit 1,26 g 2-Chloräthylisocyanat unter Hühren versetzt. Das Gemisch wird weiter 2 Stdn.

509884/1080

-25- 2530U6

gerührt, dann bei ο - 5°C über Nacht stehen gelassen. Die Lösung wird nach Entfärben mit Aktivkohle i.V. zu einem Sirup konzentriert. Dieser Sirup wird auf eine Kieselgelsäule gegeben und die daran adsorbierten Materialien werden mit Chloroform-Äthanol (4:1) eluiert. Das Eluat wird in Fraktionen gesammelt und tlc-Proben jeder Fraktion werden zwecks Bestimmung des Methyl-N-carbamyl-N¹ -(^-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-ß-D-glucopyranosids analysiert. Die obige Verbindung enthaltenden Fraktionen werden kombiniert und i.V. zu einem Sirup konzentriert, welcher dann unter Verwendung von Chloroform und Petroläther kristallisiert wird. Die so erhaltenen Kristalle werden mit Chloroform-Petroläther gewaschen und i.V. getrocknet', wodurch 1,66 g Methyl-N-carbamyl- -N'-(2-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-ß-D-glucopyranosid erhalten werden. Ausbeute: 55,5 %- Schmp. 169-171⁰C [pt]Jp= -31° (C=o,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₉N₂O₆Cl (MG 298,72) in #: C 4o,21, H 6,41, N 9,38, Cl 11,87. Gefunden: C 4o,15, H 6,49, N 9,44, Cl 11,73-

2,99 g Methyl-N-carbamyl-lT^l-(2-chloräthyl)-6-amino-6-desoxy-ß-D- -glucopyranosid, so hergestellt, werden in 4o ml 3o#iger wäßriger Essigsäurelösung gelöst, zu welcher o,9 g Natriumnitrat innerhalb von 30 Min. bei o-5 C unter Rühren zugesetzt wird. Das Gemisch wird über Nacht bei o-5°C stehen gelassen, während die Beendigung der Reaktion durch tlc festgestellt wird. Zur umgesetzten Lösung werden I5 ml Ionenaustauscherharz gegeben und das Gemisch 1 Std. unter Eiskühlung gerührt. Das Ionenaustauscherharz wird abfiltriert und das Filtrat i.V. bei einer Temperatur unter 25°C zu einem Sirup konzentriert. Der Sirup wird unter Verwendung einer Kieselsäuregelsäule (Lösungsmittel:Chloroform-Äthanol, 9:1) gereinigt. Der so behandelte Sirup wird unter Verwendung von Äther und Petroläther kristallisiert, welche Kristalle dann i.V. getrocknet werden, wodurch man 1,95 S Methyl-N-carbamyl-N'- -(2-chloräthyl)-N'-nitrox^o-6-amino-6-desoxy-ß-D-glucopyranosid erhält. Ausbeute: 59,4 ^. Schmp. 1o9-113°C (Zers.). L⁰OJP=³ ~⁶° (C= ο,5, H₂O). Analyse für C₁₀H₁₈N₃O₇Cl (MG 327,72) in %: C 36,65, H 5,54, N 12,82, Cl 1o,82. Gefunden: C 36,73, H 5,62, N 12,74,

ei 10,73.

Obige Verbindung wurde pharmakologisch getestet und zeigte eine

609884/1080

höhere Äntitumoraktivitat und herabgesetzte Knochenmarktoxizität und zwar bis zu 11o-12o % , verglichen mit ihrem o-Anomer (siehe Tab. II und III). Die Verbindung wies weder diabetogene noch antibakterielle Aktivitäten auf.

Patentansprüche

509 884/1080

Claims

Unser Zeichen

Tokyo Tanabe Company, Ltd.,

folgenden Formel

Patentansprüche

- Alkylaminoglucopyranosid-Derivate der

(I)

in welcher R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und Rxj und R^ jeweils eine N-Oarbamyl-N'-^-chloräthyl)-^- -nitrosoamino-Gruppe (d.h. -NH00N(N0)GH₂0H₂01) oder Hydroxylgruppe bedeuten mit der Maßgabe, daß R_x, und R, nicht gleichzeitig eine Hydroxylgruppe darstellen.
2. Verfahren zur Herstellung der Alkylamino-

glucopyranosid-Derivate der Formel I, dadurch gekennzeichnet, daß man (A) eine Verbindung der allgemeinen Formel II

CH₂R₄

R₂

(ID

509884/1080

BORO MÖNCHEN: TELEX: TELEGRAMM: TELEFON: BANKKONTO: POSTSCHECKKONTO: 8 MÖNCHEN 22 1-856 44 INVENTION BERLIN BERLINER BANK ΑΘ. W. MEISSNER, BLN-W ST. ANNASTR. 11 INVEN d BERLIN . 030/865 60 87 BERLIN 31 12282-109 . TEL: 089/22 86 44 030/886 23 82 3695716000

_2_ μ 2530A16

in welcher R₂ .^^e ^^η Anspruch 1 definiert ist, R^ und R,- eine Hydroxyl- oder Aminogruppe bedeuten mit der Maßgabe, daß nicht beide Substituenten R^, und R_n- eine Hydroxylgruppe darstellen, oder deren Säureadditionssalz einer Kondensationsreaktion mit 2-Chloräthylisocyanat unterwirft, um eine Verbindung der allgemeinen Formel III zu erhalten:

III

in welcher R^ wie in Anspruch 1 definiert ist, R^- und R₇ eine Hydroxylgruppe Oder N-Carbamyl-N'-(2-chloräthyl)amino-Gruppe
bedeuten mit der Maßgabe, daß nicht beide Substituenten Rg und R₇ Hydroxylgruppen darstellen,
und (B) die Verbindung der Formel III nitrosiert.

503884/1080