DE2347628C3 - Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammaglobuline und Verwendung der Gammaglobuline zur Behandlung der Implanat-Abstoflung und von Autoaggressionskrankheiten - Google Patents
Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammaglobuline und Verwendung der Gammaglobuline zur Behandlung der Implanat-Abstoflung und von AutoaggressionskrankheitenInfo
- Publication number
- DE2347628C3 DE2347628C3 DE19732347628 DE2347628A DE2347628C3 DE 2347628 C3 DE2347628 C3 DE 2347628C3 DE 19732347628 DE19732347628 DE 19732347628 DE 2347628 A DE2347628 A DE 2347628A DE 2347628 C3 DE2347628 C3 DE 2347628C3
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- gammagiobulins
- gamma globulins
- immunosuppressive
- treatment
- diseases
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 title claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 6
- 239000007943 implant Substances 0.000 title claims description 5
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 title description 17
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 3
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 3
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 230000001391 lymphocytotoxic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003293 antilymphocyte serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002532 anti-gammaglobulin Effects 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000013905 glycine and its sodium salt Nutrition 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 229920000137 polyphosphoric acid Polymers 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000004144 purine metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Beschreibung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammagiobuline. Ferner betrifft
die Erfindung die Verwendung der nach dem Verfahren hergestellten Gammagiobuline zur Behandlung der
Implantat-Abstoßung und von Autoaggressionskrankheiten.
Aus B. Helwig, »Moderne Arzneimittel 1967 — 1969,
Erg. Bd. Seite 145-147 ist ein Azathiopurin bekannt, das als Inhibitor für verschiedene biochemische
Reaktionsabläufe insbesondere beim Purinstoffwechsel in unspezifischer Weise, d. h. gegen alle Zellen und auch
gegen Lymphozyten wirkt. Es besitzt daher bei mehrfach aufeinanderfolgender Verabreichung eine
toxische Wirkung, wenn es zur Behandlung von Autoaggressionskrankheilen als Immunsuppressivum
eingesetzt wird.
Eine wirksame Inhibierung (Depression) des immunologischen Systems derjenigen Stoffe, die die zelluläre
Immunität bewirken, und insbesondere eine Behandlung der Implantatabstoßung sowie eine Behandlung von
immunologisch auf der Zellwirkung beruhenden Krankheiten (Autoaggressionskrankheiten) kann, wie gefunden
wurde, durch aus Humanplacenta gewonnenen Gammaglobulinen erreicht werden.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammagiobuline, das
dadurch gekennzeichnet ist, daß man
a) feinzerteiltes oder zerriebenes menschliches PIaceniagewebe
wäscht, bis die Waschflüssigkeit praktisch keine Proteine mehr enthält,
b) danach die am Gewebe fixierten Gammagiobuline mit einer sauren Pufferlösung extrahiert,
c) hierauf die im sauren Eluat enthaltenen Gammagiobuline durch übliche physikalisch-chemische
Verfahren abtrennt,
d) anschließend den pH-Wert des die abgetrennten Gammagiobuline enthaltenden Milieus auf den
Neutralpunkt einstellt, dialysiert, gegebenenfalls gebildeten Niederschlag abzentrifugiert und
e) bei Feststellen einer lymphozytotoxischen Wirkung in Gegenwart eines Oberschusses von Kaninchen-Komplement,
einem enzymatischen Abbau durch Pepsin oder Papain unterwirft, um Fragmente der Immunoglobuline Fab2 oder Fab2' zu erhalten.
Die erfindungsgemäß aus dem Placentagewebe extrahierten Gammagiobuline sind von gewöhnlichen
Gammaglobulinen, die man aus dem Blut oder dem Placentaserum erhält und die im allgemeinen als
»Placenta-Gammaglobuline« bezeichnet werden und keinen merklichen immunsuppressiven Effekt aufweisen,
verschieden. Vielmehr sind die erfindungsgemäß gewonnenen Gammagiobuline unmittelbar an das
Placentagewebe fixiert und können nicht durch übliche zur Gewinnung der »Placenta-Gammaglobuline« verwendete
Methoden abgetrennt werden. Der Ausdruck »Extraktion« gemäß der Erfindung ragt daher, daß eine
direkte Bindung zwischen dem Globulin und dem Gewebe gespalten wird.
Die Extraktion der Gammagiobuline wird dadurch bewerkstelligt, daß das Gewebe mit einer Glycin-HCI-Pufferlösung,
vorzugsweise bei einem pH-Wert zwischen 2 und 3, behandelt wird.
Die Behandlung, die etwa 30 Minuten dauert, wird bei einer Temperatur bewirkt, die vorzugsweise zwischen
10 und 38°C oder z. B. bei 37°C liegt.
■»o Die Extraktion der Immunoglobuline durch Elution
kann mehrmals erneut hintereinander mit dem Placentagewebe vorgenommen werden.
Nach der Elution wird schnell die Abtrennung der im sauren Eluat enthaltenen Gammagiobuline durch
übliche Verfahren, wie durch Ausfällung in Äthanol oder in Polyphosphorsäure vorgenommen. Danach wird der
pH-Wert des Milieus, das die Immunoglobuline enthält, auf den Neutralpunkt eingestellt, und es werden eine
oder mehrere Dialysen durchgeführt. Der gegebenenfalls gebildete restliche Niederschlag wird durch
Zentrifugieren abgetrennt. Gemäß einer vorteilhaften Arbeitsweise wird anschließend das Präparat aus den
Immunoglobulinen durch Zugeben von Äthanol rekonzentriert, worauf ein oder mehrere aufeinanderfolgende
Dialysen durchgeführt werden, um die Gammagiobuline zu reinigen.
Die Präparate, die aus unterschiedlichen Extraktionen herstammen, können entweder vereinigt werden und in
das gleiche Endprodukt einverleibt werden, oder sie können getrennt zur Herstellung von verschiedenen
Präparaten verwendet werden.
Die erfindungsgemäß gewonnenen Gammagiobuline inhibieren die gemischte Lymphozytenreaktion, d. h. die
Transformation einer Kultur von menschlichen Lymphozyten, die von zwei histologisch unverträglichen
Organismen herstammt. Die gemischte Lymphozytenreaktion wird als in vitro-Äquivalent der Zellreaktion
angesehen, die durch Einführen eines Transplantats, das
mit einem Organismus unverträglich ist, eingeleitet wird.
Die erfindungsgemäß gewonnenen Gammaglobuline zeigen u. a. die folgenden charakteristischen Eigenschaften:
Sie reagieren und fällen menschliche Antigammaglobuline
mit einem Kaninchen- oder Schafserum aus. Sie zeigen eine Zytotoxizität null bzw. eine sehr schwach
Zytotoxizität durch menschliche Lymphozyten in Gegenwart des Komplements. Andererseits zeigen sie
Inhibierungseigenschaften des Immuno-Zellhaftungsvermögens,
wie sich gegebenenfalls durch den Rosettentest zeigen läßt, der darin besteht, daß die Bildung
von Rosetten beobachtet wird, d. h. die Agglutination der roten Blutkörperchen des Schafes rings um die
menschlichen Lymphozyten in Gegenwart des Komplements vom Meerschweinchen. Sie wirken daher wie
Antikörper und werden an die für dit lmplantatabitoßung
verantwortlichen Zellantigene fixiert. Daneben werden solche Zellen blockiert, die für Immunitätsreaktionen
verantwortlich sind, wie Lymphocyten B, bestimmte Lymphocyten C und Monocyten.
Die erfindungsgemäß gewonnenen Gammaglobuline zeigen die Transformation und die Proliferation von
menschlichen Lymphozyten, die in Gegenwart eines Antigens kultiviert worden sind, wie z. B. von Tuberkulin
oder verschiedenen anderen Antigenen, sowie inhibieren in höheren Konzentrationen die durch
Mitogene, wie z. B. vom Phytohämagglutinin induzierte Transformation und die Proliferation von menschlichen
Lymphozyten.
Sie sind daher besonders für die vorbeugende Behandlung der Transplantatabsloßung beim Menschen
sowie für die Behandlung von Autoaggressionskrankheiten geeignet und angepaßt. Sie können hierbei u. a.
mit anderen Immuninhibitoren zusammen angewendet werden, wie mit Antilymphozytenserum, das durch
Immunisation eines Tieres mit Hilfe von Lymphozyten menschlichen Ursprungs oder von Affen hergestellt
worden ist, oder mit chemischen Immuninhibitoren.
Die immunsuppressive Dosis der erfindungsgemäß verwendeten Placenta-Gammaglobuline kann beispielsweise
in der Größenordnung von 500 mg je Tag während mehrerer Tage beim Erwachsenen betragen.
In der Praxis hängt diese Dosis von den zu behandelnden Beschwerden ab wie auch von der
therapeutischen Nutzbarmachung damit zusammenhängender immunsuppressiver Arzneimittel, wie dem
Antilymphozytenserum oder den chemischen Immuninhibitoren.
Die Globuline können durch intraarterielle Perfusion der transplantierten Organismen im Augenblick der
Übertragung und für Operationsfolgen aber auch auf parenteralem Weg verabreicht werden.
Eine Durchführungsform der Erfindung sowie die Eigenschaften des erhaltenen Arzneimittels v/erden im
folgenden Beispiel erläutert.
Ein Ausgangsmaterial, bestehend aus einem Gemisch von 30 frischen Placentas, die nicht gefroren sind,
welche bei +40C in einer PBS-Pufferlösung aus 8 g
Natriumchlorid, 0,2 g Kaliumchlorid, 1,44 g Na2HPO4 (2 H2O), 0,2 g KH2PO4, aufgefüllt mit destilliertem
Wasser auf 11, konserviert worden sind, wird zerkleinert,
wodurch 8,8 kg Gewebematerial und 6 1 Placenta-Blutflüssigkeit gewonnen werden. Anschließend wird
mit 4 1 PBS-Pufferlösung je kg Placentagewebe derart gewaschen, daß nach dem Waschen die Gewichtsmenge
des gewonnenen Gewebematerials 7,8 kg beträgt.
Es werden 5 aufeinanderfolgende Wäschen durchgeführt
Bei der letzten Wäsche enthält die Waschflüssigkeil praktisch keine Proteine mehr, und das Gewicht der
gewonnenen Gewebemasse ist auf 5 kg vermindert
Es wird nun eine erste Extraktion bei einem pH-Wert 2,2 mit den 5 kg gewaschenes Gemisch des Gewebes mit
201 Glycin-HCl-Pufferlösung unter mäßigem Rühren 30
Minuten bei 37° C durchgeführt Die Glycin-HCl-Pufferlösung
bestand je Liter aus einem Gemisch von 420 ml einer Lösung von 0,1-m HCl, verdünnt auf die Dichte
1,120 sowie 580 ml einer Salzlösung, enthaltend 4,3 g Glycocoll und 3,39 g Natriumchlorid in destilliertem
Wasser.
Anschließend wird zentrifugiert, wobei 201 einer ersten überstehenden Flüssigkeit und 4,8 kg Gewebematerial
gewonnen werden.
Der pH-Wert der ersten überstehenden Flüssigkeit wird durch eine Pufferlösung aus 12,1 g (0,1 -m)
Trishydroxymethylaminomethan in 1 Liter destilliertem Wasser sowie HCl bis zum pH-Wert 10 erhöht.
Der gebildete Niederschlag wird abgetrennt, und es wird etwa 251 Lösung erhalten, welcher Äthanol bis zu
einer Konzentration von 40% zugefügt wird. Danach werden 210 g eines Niederschlags erhalten, der isoliert
wird und zuerst einer Dialyse gegen Wasser und danach gegen PBS-P'ifferlösung unterworfen wird. Schließlich
wird erneut eine Dialyse gegen Wasser durchgeführt, wonach 0,200 1 einer Lösung von 7,32 g der Gammaglobuline
je Liter erhalten werden.
Die 4,8 g Gewebemaleria!, die vorher ausgefällt worden sind, werden einer zweiten Extraktion beim
pH-Wert 2,2 mit einer Glycin-HCI-Pufferlösung über 30
Minuten bei 37°C unterworfen, in der gleichen Weise wie oben beschrieben. Die zweite überstehende
Flüssigkeit mit einem Volumen von 201 wird durch Zentrifugieren gewonnen und der pH-Wert der Lösung
auf den Wert 7 durch Hinzufügen von Tris-HCl-Puffer-
lösung erhöht. Es wird Äthanol bis zu einer Konzentration von 40% zugefügt, und der erhaltene Niederschlag
wird zweimal hintereinander dialysiert, einmal gegen Wasser und das zweite Mal gegen PBS-Pufferlösung. Es
werden 20 ml Lösung erhalten, die 5,85 g Gammaglobuline je Liter enthalten.
Die in dieser Lösung enthaltenen Gammaglobuline werden durch Ausfällen und Konditionieren mit einem
gewöhnlichen therapeutischen Serum abgetrennt.
Eine elektrophoretische Analyse auf Immunstoffe der durch Extraktion erhaltenen Gammaglobuline ergab in erster Linie die Gegenwart von Gammaglobulinen vom Typ G sowie solcher Gammaglobuline der Typen A und M.
Eine elektrophoretische Analyse auf Immunstoffe der durch Extraktion erhaltenen Gammaglobuline ergab in erster Linie die Gegenwart von Gammaglobulinen vom Typ G sowie solcher Gammaglobuline der Typen A und M.
Es wird sichergestellt, daß die in dieser Weise erhaltenen Gammaglobuline keine lymphozytotoxische
Wirkung in Gegenwart eines Überschusses von Kaninchen-Komplement aufweisen. Wenn eine zytotoxische
Aktivität ausgelöst wird, kann das Produkt gegebenenfalls einem enzymatischen Abbau durch
Pepsin oder Papain unterworfen werden, um Fragmente der Immunglobuline Fab2 und Fab2' zu erhalten, die
nicht cytotoxisch sind und immunsuppressive Stoffe darstellen.
Der Inhibierungstiter des Gammaglobulin-Präparats wird durch Lymphoblasten-Transformation in Mischkultur
einer Mischung von Lymphozyten, die von zwei verschiedenen Spenderorganismen stammen, gemessen.
Die Messung erfolgt durch Impulszählung in einer
Szintillationsflüssigkeit, in welcher durch 16stündiges
Aussetzen in Gegenwart von 1 μο von 3 H-Methylthymidin
(spezifische Aktivität ΙΟΟμο/πιΜοΙ) radioaktiv
gemachte Zeilkerne einer Zellkultur vorliegen. Der Inhibierungsttter von 50% beträgt '/loo bei dem
Präparat, das gemäß dem Beispiel hergestellt wurde (entsprechend 0,05 mg/ml).
Claims (3)
1. Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammagiobuline, dadurch gekennzeichnet,
daß man
a) feinzerteiltes oder zerriebenes menschliches Placentagewebe wäscht, bis die Waschflüssigkeit
praktisch keine Proteine mehr enthält,
b) danach die am Gewebe fixierten Gammagiobuline mit einer sauren Pufferlösung extrahiert,
c) hierauf die im sauren Eluat enthaltenen Gammagiobuline durch übliche physikalischchemische Verfahren abtrennt,
d) anschließend den pH-Wert des die abgetrennten Gammagiobuline enthaltenden Milieus auf
den Neutralpunkt einstellt, dialysiert, gegebenenfalls gebildeten Niederschlag abzentrifugiertund
e) bei Feststellen einer lymphozytotoxischen Wirkung in Gegenwart eines Überschusses von
Kaninchen-Komplement einem enzymatischen Abbau durch Pepsin oder Papain unterwirft, um
Fragmente der Immunglobuline Fab2 oder Fab'2
zu erhalten.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Extraktion bei 37° C während
30 Minuten durchführt.
3. Verwendung der nach Anspruch 1 oder 2 hergestellten immunsuppressiven Gammagiobuline
zur Behandlung der Implantat-Abstoßung und von Autoaggressionskrankheiten.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7233703A FR2201078A1 (en) | 1972-09-22 | 1972-09-22 | Gamma globulin immuno depressants - isolated from placental tissue |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2347628A1 DE2347628A1 (de) | 1974-04-04 |
| DE2347628B2 DE2347628B2 (de) | 1980-04-03 |
| DE2347628C3 true DE2347628C3 (de) | 1980-11-27 |
Family
ID=9104675
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19732347628 Expired DE2347628C3 (de) | 1972-09-22 | 1973-09-21 | Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammaglobuline und Verwendung der Gammaglobuline zur Behandlung der Implanat-Abstoflung und von Autoaggressionskrankheiten |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS577130B2 (de) |
| BE (1) | BE805141A (de) |
| DE (1) | DE2347628C3 (de) |
| FR (1) | FR2201078A1 (de) |
| LU (1) | LU68440A1 (de) |
| NL (1) | NL175625C (de) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1453255A (fr) * | 1964-12-29 | 1966-06-03 | Procédé d'extraction, notamment d'organes foetaux |
-
1972
- 1972-09-22 FR FR7233703A patent/FR2201078A1/fr active Granted
-
1973
- 1973-09-18 LU LU68440D patent/LU68440A1/xx unknown
- 1973-09-21 BE BE135889A patent/BE805141A/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-09-21 NL NL7313080A patent/NL175625C/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-09-21 DE DE19732347628 patent/DE2347628C3/de not_active Expired
- 1973-09-22 JP JP10656073A patent/JPS577130B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2347628A1 (de) | 1974-04-04 |
| JPS4985221A (de) | 1974-08-15 |
| LU68440A1 (de) | 1973-11-26 |
| FR2201078B1 (de) | 1975-10-31 |
| FR2201078A1 (en) | 1974-04-26 |
| JPS577130B2 (de) | 1982-02-09 |
| NL175625C (nl) | 1984-12-03 |
| NL175625B (nl) | 1984-07-02 |
| DE2347628B2 (de) | 1980-04-03 |
| BE805141A (fr) | 1974-03-21 |
| NL7313080A (de) | 1974-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3853923T2 (de) | Kationisierte antikörper für das austragen durch die blut-gehirn-schranke. | |
| DE2606118C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines gereinigten Gamaglobulins und intravenös verabreichbares Arzneimittel | |
| DE2804457C2 (de) | Immunsuppressive Mittel | |
| DE112011102362T5 (de) | Pharmazeutische Kombinationszusammensetzung und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen oder Zuständen, die mit neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung stehen | |
| DE112011102409T5 (de) | Verfahren zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit | |
| EP0346501B1 (de) | Arzneimittelzubereitung zur behandlung des immunmangels | |
| DE1927209A1 (de) | Acyl-substituierte Insuline und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| DE3788148T2 (de) | Monoklonale Antikörper und deren Verwendung. | |
| DE69911322T2 (de) | Monoklonaler antikörper der die oligosaccharide sialinsäure n-glycolierte galactose-glucose auf bösartige tumoren erkennt und zusammensetzungen die dieser enthalten | |
| DE112011102411T5 (de) | Verfahren zur Behandlung von Aufmerksamkeits-Mangel-Hyperaktivitäts-Störung | |
| EP0340604B1 (de) | Monoklonaler Antikörper und seine Verwendung | |
| DE69007799T2 (de) | Pharmazeutische antigen-antikörper-komplexe enthaltende zusammensetzungen und deren anwendungen. | |
| DE3830271A1 (de) | Mittel mit immunsuppressiver wirkung | |
| DE1940130C2 (de) | Verfahren zur Reinigung von Insulin, nach diesem Verfahren gereinigtes Insulin und dessen Verwendung | |
| DE69220939T2 (de) | Gegengift immunsera | |
| DE69434024T2 (de) | Auf humanen cortikalen thymozyten exprimierte oberflächenproteine und ihre verwendung | |
| DE2639012C3 (de) | Inununtherapeutikum zur Prophylaxe und Therapie von Pseudomonas aeruginosa-Infektionen | |
| DE2347628C3 (de) | Verfahren zur Gewinnung immunsuppressiver Gammaglobuline und Verwendung der Gammaglobuline zur Behandlung der Implanat-Abstoflung und von Autoaggressionskrankheiten | |
| Roe et al. | Thalidomide and neoplasia | |
| DE2814121B2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines bei der Krebs-Diagnose verwendbaren spezifischen Immunserums | |
| DE19909357A1 (de) | Kupferagonist, der an die Kupferbindungsstelle von APP bindet und/oder eine hemmende Wirkung auf die Freisetzung des Amyloid-Aß-Peptids ausübt | |
| DE69434256T2 (de) | Immunglobulin-Infusion bei der Xenotransplantation | |
| DE1076888B (de) | Verfahren zur Gewinnung atmungsfoerdernder Wirkstoffe fuer therapeutische Zwecke | |
| DE2533183C3 (de) | Verfahren zum Herstellen gereinigter Immunglobuline | |
| DE2110436C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines antileukopenischen und antikörperbildenden Thymusextrakts aus Kalbsthymus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
| 8328 | Change in the person/name/address of the agent |
Free format text: BERENDT, T., DIPL.-CHEM. DR., PAT.-ANW., 8000 MUENCHEN |
|
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: INSTITUT MERIEUX, LYON, RHONE, FR |
|
| 8328 | Change in the person/name/address of the agent |
Free format text: BERENDT, T., DIPL.-CHEM. DR. LEYH, H., DIPL.-ING. DR.-ING. HERING, H., DIPL.-ING., PAT.-ANWAELTE, 8000 MUENCHEN |