DE19543265A1 - Autoantigens and methods for diagnosing autoimmune diseases - Google Patents
Autoantigens and methods for diagnosing autoimmune diseasesInfo
- Publication number
- DE19543265A1 DE19543265A1 DE19543265A DE19543265A DE19543265A1 DE 19543265 A1 DE19543265 A1 DE 19543265A1 DE 19543265 A DE19543265 A DE 19543265A DE 19543265 A DE19543265 A DE 19543265A DE 19543265 A1 DE19543265 A1 DE 19543265A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- polypeptide
- nucleic acid
- acid sequence
- antibody
- protease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 32
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 27
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 230000000599 auto-anti-genic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 5
- 201000003066 Diffuse Scleroderma Diseases 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 208000027932 Collagen disease Diseases 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 abstract description 22
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 3
- 102100027998 Macrophage metalloelastase Human genes 0.000 description 3
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 2
- 102100030411 Neutrophil collagenase Human genes 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 1
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 101000990912 Homo sapiens Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- LFVLUOAHQIVABZ-UHFFFAOYSA-N Iodofenphos Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC(Cl)=C(I)C=C1Cl LFVLUOAHQIVABZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 1
- 101710187853 Macrophage metalloelastase Proteins 0.000 description 1
- 108090000855 Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010076501 Matrix Metalloproteinase 12 Proteins 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 101150095652 Mmp14 gene Proteins 0.000 description 1
- 108030001564 Neutrophil collagenases Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100028847 Stromelysin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108050005271 Stromelysin-3 Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000005067 joint tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft Nukleinsäuren, die minde stens eine für ein Polypeptid kodierende Nukleinsäuresequenz enthalten, wobei das Polypeptid mindestens eine aus einer Me tallprotease stammende autoantigene Determinante enthält, das Polypeptid selbst sowie gegen das Polypeptid gerichtete Anti körper und gegen das Polypeptid gerichtete spezifische Inhibi toren. Ferner betrifft die vorliegende Erfindung Verfahren und Kits zum Nachweis von autoantigenen Metallproteasen und von Au toimmunkrankheiten wie rheumatoide Arthritis.The present invention relates to nucleic acids, the min at least one nucleic acid sequence coding for a polypeptide contain, wherein the polypeptide at least one from a Me contains tallprotease-derived autoantigenic determinant that Polypeptide itself as well as anti directed against the polypeptide body and specific inhibi directed against the polypeptide goals. The present invention further relates to methods and Kits for the detection of autoantigenic metal proteases and Au immune disorders such as rheumatoid arthritis.
Trotz umfangreicher Untersuchungen konnten bisher Autoimmun krankheiten und insbesondere deren Etiologie noch nicht aufge klärt werden, was natürlich die therapeutische Behandlung sowie die Diagnosemöglichkeiten stark einschränkt bzw. nachteilig be einflußt. Beispielsweise erfordert die gegenwärtige Diagnose von rheumatoider Arthritis unter anderem eine Röntgenun tersuchung, in gravierenden Fällen sogar eine Gelenkpunktion, was für den Patienten äußerst belastend bzw. schmerzhaft sein kann. Ferner ist mit den im Stand der Technik bekannten Diagnosemöglichkeiten eine Frühdiagnose von beispielsweise rheu matoider Arthritis und damit verbunden die Möglichkeit einer entsprechend frühzeitigen therapeutischen Behandlung meistens nicht gegeben (vgl. Arnett, F.C. et al. (1987) Arthritis Rheum. 31 : 315).Despite extensive investigations, autoimmune has so far been possible diseases and especially their etiology have not yet been resolved to be clarified, what of course the therapeutic treatment as well the diagnostic options are severely limited or disadvantageous influences. For example, the current diagnosis requires of rheumatoid arthritis including an x-ray examination, in severe cases even a joint puncture, which can be extremely stressful or painful for the patient can. Furthermore, with those known in the prior art Diagnostic options early diagnosis of rheu, for example matoid arthritis and the associated possibility of one corresponding to early therapeutic treatment mostly not given (see Arnett, F.C. et al. (1987) Arthritis Rheum. 31: 315).
Somit liegt der vorliegenden Erfindung die Aufgabe zugrunde, ein neues System zur Diagnose von Autoimmunkrankheiten bereit zustellen, welches die Nachteile der gegenwärtig im Stand der Technik verwendeten Untersuchungsmethoden beseitigt und insbe sondere für Vorsorgeuntersuchungen auf Autoimmunkrankheiten ge eignet ist. The present invention is therefore based on the object a new system to diagnose autoimmune diseases to deliver, which the disadvantages of the currently in the Technology used examination methods eliminated and esp especially for preventive examinations for autoimmune diseases is suitable.
Diese Aufgabe wird durch die in den Patentansprüchen gekenn zeichneten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung gelöst.This task is characterized by the in the claims Drawn embodiments of the present invention solved.
Ein erster erfindungsgemäßer Gegenstand betrifft eine Nu kleinsäure, die mindestens eine für ein Polypeptid kodierende Nukleinsäuresequenz enthält, wobei das Polypeptid mindestens eine aus einer Metallprotease stammende autoantigene Determi nante umfaßt.A first subject of the invention relates to a nu small acid, which encodes at least one for a polypeptide Contains nucleic acid sequence, wherein the polypeptide at least an autoantigenic determinant derived from a metal protease nante includes.
Die Begriffe "Nukleinsäure" und "Nukleinsäuresequenz" bedeuten natürliche oder halbsynthetische oder synthetische oder modifi zierte Nukleinsäuremoleküle aus Desoxyribonukleotiden und/oder Ribonukleotiden und/oder modifizierten Nukleotiden.The terms "nucleic acid" and "nucleic acid sequence" mean natural or semi-synthetic or synthetic or modifi decorated nucleic acid molecules from deoxyribonucleotides and / or Ribonucleotides and / or modified nucleotides.
Der Begriff "Polypeptid" umfaßt natürlich vorkommende Polypep tide und rekombinante Polypeptide. Natürlich vorkommende Poly peptide umfassen erfindungsgemäß autoantigene Metallproteasen per se oder autoantigene Abschnitte bzw. Fragmente davon. In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sind die Metallproteasen sogenannte Membranproteine, d. h. sie haften so in der Zelloberflächenmembran, daß die funktionellen Teile des Proteins nach außen gewandt sind und gegebenenfalls proteolytisch abgespalten werden können. Metallproteasen stam men vorzugsweise aus Makrophagen und verwandten Zelltypen und kommen beispielsweise in der Gelenkinnenhaut, Membrana synovia lis, von Säugern vor. Rekombinante Polypeptide bezeichnen ein mit molekularbiologischen Techniken hergestelltes Konstrukt, dem die natürliche DNA des originalen Genoms bzw. die natürli che DNA modifiziert mit einer fremden DNA-Sequenz zugrunde liegt und rekombiniert werden kann, z. B. mit Plasmiden, und in einem geeigneten Wirtssystem repliziert und exprimiert werden kann.The term "polypeptide" encompasses naturally occurring polypep tide and recombinant polypeptides. Naturally occurring poly According to the invention, peptides comprise autoantigenic metal proteases per se or autoantigenic sections or fragments thereof. In a preferred embodiment of the present invention are the metal proteases so-called membrane proteins, d. H. she stick in the cell surface membrane so that the functional Parts of the protein are facing outwards and if necessary can be split off proteolytically. Metal proteases stam men preferably from macrophages and related cell types and come for example in the inner skin of the joint, membrane synovia lis, from mammals before. Recombinant polypeptides denote one construct made using molecular biological techniques, which the natural DNA of the original genome or the natural che DNA modified with a foreign DNA sequence lies and can be recombined, e.g. B. with plasmids, and in be replicated and expressed in a suitable host system can.
Der Begriff "autoantigene Determinante bzw. Epitop" bedeutet, daß ein oder mehrere lineare oder konformationelle Bereiche der Metallprotease vom eigenen Immunsystem durch sogenannte Autoan tikörper erkannt werden. Das Vorkommen von Autoantikörpern wird als Indiz dafür gewertet, daß ein Protein der eigenen Zellen, z. B. in den Makrophagen der Synovialmembran, als Folge einer Krankheit quantitativ und qualitativ abnormal ausgeprägt wird. Beispielsweise wird als mögliche Ursache der Gelenkzerstörung bei rheumatoider Arthritis angenommen, daß ein bisher nicht identifiziertes infektiöses Agens Gelenkmakrophagen zur ver mehrten Expression von Proteasen anregt, die durch Proteolyse von Gelenkgewebe weitere potentielle Autoantigene freisetzen (vgl. Opdenakker et al., 1994, Immunol. Today 15 : 103; Wicks et al., 1994, Immunol. Today 15 : 553). In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfaßt die Nuklein säure die in Fig. 1 gezeigte Nukleinsäuresequenz oder Ab schnitte bzw. Fragmente davon. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfaßt die Nuklein säure den Sequenzabschnitt 1110-2206 der in Fig. 1 gezeigten Nukleinsäuresequenz.The term “autoantigenic determinant or epitope” means that one or more linear or conformational regions of the metal protease are recognized by one's own immune system by so-called autoantibodies. The presence of autoantibodies is taken as an indication that a protein of one's own cells, e.g. B. in the macrophages of the synovial membrane, as a result of a disease is quantitatively and qualitatively abnormal. For example, the possible cause of joint destruction in rheumatoid arthritis is assumed to be that an as yet unidentified infectious agent stimulates joint macrophages to increase the expression of proteases that release further potential autoantigens through proteolysis of joint tissue (cf. Opdenakker et al., 1994, Immunol. Today 15: 103; Wicks et al., 1994, Immunol. Today 15: 553). In a preferred embodiment of the present invention, the nucleic acid comprises the nucleic acid sequence shown in FIG. 1 or sections or fragments thereof. In a particularly preferred embodiment of the present invention, the nucleic acid comprises the sequence section 1110-2206 of the nucleic acid sequence shown in FIG. 1.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Vek tor, der die vorstehend definierte, erfindungsgemäße Nuk leinsäure zur Expression des rekombinanten Polypeptids in pro karyotischen oder eukaryotischen Wirtszellen enthält. Der er findungsgemäße Vektor kann vorzugsweise geeignete regulato rische Elemente, wie Promotoren, Enhancer, Terminationssequen zen, enthalten. Der erfindungsgemäße Vektor kann beispielsweise ein Expressionsvektor oder ein Vektor zur vorzugsweise stabilen Integration der erfindungsgemäßen Nukleinsäure in das geneti sche Material einer Wirtszelle sein. Ein geeignetes Expressi onssystem umfaßt beispielsweise den Vektor pET-24 und E. coli BRL(DE3) oder BL21(DE3), oder für die Expression in eukaryonti schen Zellen den Vektor pcDNA3 und cos-Zellen oder CHO-Zellen.Another object of the present invention is a Vek gate, the nuc linseic acid for expression of the recombinant polypeptide in pro contains karyotic or eukaryotic host cells. The he Vector according to the invention can preferably be suitable regulato elements such as promoters, enhancers, termination sequences zen, included. The vector according to the invention can, for example an expression vector or a vector for the preferably stable Integration of the nucleic acid according to the invention into the geneti material of a host cell. A suitable expressi Onsystem includes, for example, the vector pET-24 and E. coli BRL (DE3) or BL21 (DE3), or for expression in eukaryonti cells the vector pcDNA3 and cos cells or CHO cells.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine Wirtszelle, welche die erfindungsgemäße Nukleinsäure oder den erfindungsgemäßen Vektor enthält. Geeignete Wirtszellen sind beispielsweise Prokaryonten, wie E. coli, oder eukaryotische Wirtszellen wie cos oder CHO. Im Prinzip kann jedes im Handel erhältliche pro- oder eukaryontische Expressionssystem verwen det werden. Für eine ausreichende Expressionsrate ist die erfindungsgemäße Nukleinsäure entweder im genetischen Material der Wirtszelle stabil integriert oder der erfindungsgemäße Vek tor enthält geeignete regulatorische Bereiche zur Replikation, Transkription und/oder Translation in vivo und/oder in vitro, d. h. auch im zellfreien System.Another object of the present invention is a Host cell which the nucleic acid according to the invention or the contains vector according to the invention. Suitable host cells are for example prokaryotes such as E. coli or eukaryotic Host cells such as cos or CHO. In principle, anything can be found in the trade use available pro- or eukaryotic expression system be det. For a sufficient expression rate, the nucleic acid according to the invention either in the genetic material the host cell stably integrated or the Vek according to the invention tor contains suitable regulatory areas for replication, Transcription and / or translation in vivo and / or in vitro, d. H. also in the cell-free system.
Ein weiterer erfindungsgemäßer Gegenstand ist das Polypeptid selbst, das von der vorstehend definierten Nukleinsäuresequenz kodiert wird, wobei die Nukleinsäuresequenz entsprechend dem genetischen Code degeneriert sein kann. Das erfindungsgemäße Polypeptid kann durch post-translationale Reaktionen in vivo oder durch im Stand der Technik bekannte chemische und/oder en zymatische Methoden in vitro modifiziert sein. In einer be vorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfaßt das Polypeptid die in Fig. 2 gezeigte Aminosäuresequenz oder Ab schnitte bzw. Fragmente davon, beispielsweise das vom Se quenzabschnitt 1110-2206 der in Fig. 1 gezeigten Nukleinsäure sequenz kodierte Expressionsprodukt.Another object of the invention is the polypeptide itself, which is encoded by the nucleic acid sequence defined above, it being possible for the nucleic acid sequence to be degenerate in accordance with the genetic code. The polypeptide according to the invention can be modified by post-translational reactions in vivo or by chemical and / or enzymatic methods known in the art in vitro. In a preferred embodiment of the present invention, the polypeptide comprises the amino acid sequence shown in FIG. 2 or sections or fragments thereof, for example the expression product encoded by the sequence section 1110-2206 of the nucleic acid sequence shown in FIG. 1.
Die erfindungsgemäße Nukleinsäuresequenz, der erfindungsgemäße Vektor sowie das erfindungsgemäße Polypeptid können durch im Stand der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden (vgl. Ausubel et al., 1991, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, N.Y.).The nucleic acid sequence according to the invention, the one according to the invention Vector and the polypeptide according to the invention can by im Methods known in the art can be produced (cf. Ausubel et al., 1991, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, N.Y.).
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein po lyklonaler, vorzugsweise monospezifischer, oder monoklonaler Antikörper, der gegen das vorstehend definierte Polypeptid ge richtet ist. Der erfindungsgemäße Antikörper kann durch im Stand der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden (vgl. Coligan et al., 1993, Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, New York, N.Y.). Another object of the present invention is a po lyclonal, preferably monospecific, or monoclonal Antibody against the polypeptide defined above is aimed. The antibody of the invention can by Methods known in the art can be produced (cf. Coligan et al., 1993, Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, New York, N.Y.).
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von Autoimmunkrankheiten, insbesondere von rheumatoider Arthritis (RA) und anderer autoimmuner Arthri tisformen wie SLE (Systemischer Lupus Erythematodes), MCTD (Mischkollagenose) und PSS (Progressive Sklerodermie), worin entweder das vorstehend definierte Polypeptid oder der vorste hend definierte Antikörper mit Serum eines Säugers einem Enzym immunoassay, vorzugsweise einem ELISA, unterworfen werden.Another object of the present invention relates to a Methods for the detection of autoimmune diseases, in particular from rheumatoid arthritis (RA) and other autoimmune arthri Forms such as SLE (Systemic Lupus Erythematosus), MCTD (Mixed collagenosis) and PSS (progressive scleroderma), wherein either the polypeptide defined above or the first Antibodies defined with a mammalian serum an enzyme immunoassay, preferably an ELISA.
Beispielsweise hat der Nachweis von Autoantikörpern gegen Me tallproteasen im ELISA gegenüber anderen Diagnoseverfahren bei rheumatoider Arthritis, wie Röntgenuntersuchung oder Gelenk punktion, die Vorteile, nicht-invasiv und erheblich kostengün stiger zu sein. Außerdem können Autoantikörper aufgrund der Empfindlichkeit des Immunsystems auf bereits geringe Mengen Au toantigen schon nachweisbar sein, wenn bildgebende Verfahren noch keine Beschädigung des Gelenkes anzeigen. Es ist auch mög lich, daß spezifische Inhibitoren der Metallprotease in pharma zeutischen Formulierungen zur Therapie im Gelenk eines Rheuma patienten verwendet werden können.For example, the detection of autoantibodies against Me tall proteases in ELISA compared to other diagnostic methods rheumatoid arthritis, such as X-ray examination or joint puncture, the advantages, non-invasive and considerably inexpensive to be stiger. In addition, autoantibodies due to Immune system sensitivity to even small amounts of Au toantigen already be detectable when imaging show no damage to the joint yet. It is also possible Lich that specific inhibitors of the metal protease in pharma formulations for therapy in the joint of a rheumatism patients can be used.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein dia gnostischer Kit zum Nachweis einer Autoimmunkrankheit, der mindestens entweder das vorstehend definierte Polypeptid oder den vorstehend definierten Antikörper enthält.Another object of the present invention is a slide Gnostic kit for the detection of an autoimmune disease, the at least either the polypeptide defined above or contains the antibody defined above.
Fig. 1 zeigt die 3222 bp lange DNA-Sequenz, die für die Me tallprotease MPRS aus der Synovialmembran eines Rheumapatienten kodiert (Herkunft: Synovialmembran eines RA-Patienten; Eigen schaften der Sequenz: Translationsstart ATG an pos. 82 mit charakteristischer eukaryontischer Startsequenz, Translations stop TGA an pos. 1606, autoantigener Bereich zwischen pos. 1110 und pos. 2206 (kursiv); 88% Identität zur repetitiven alu J-Subfamilie im untranslatierten Bereich von pos. 1480-1590). Fig. 1 shows the 3222 bp long DNA sequence which codes for the metal protease MPRS from the synovial membrane of a rheumatism patient (origin: synovial membrane of an RA patient; properties of the sequence: translation start ATG at pos. 82 with characteristic eukaryotic start sequence, translations stop TGA at item 1606, autoantigenic area between item 1110 and item 2206 (italics); 88% identity to the repetitive alu J subfamily in the untranslated area from item 1480-1590).
Fig. 2 (A) ist die 508 AS lange Primärsequenz der Metallpro tease MPRS, die von der in Fig. 1 gezeigten DNA-Sequenz ko diert wird (Molekulargewicht, errechnet aus cDNA-Sequenz: 57,4 kDa). Fig. 2 (B) zeigt strukturelle Eigenschaften dieser Me tallprotease. Fig. 2 (A) is the 508 aa long primary sequence of the metal protease MPRS, which is encoded by the DNA sequence shown in Fig. 1 (molecular weight, calculated from the cDNA sequence: 57.4 kDa). Fig. 2 (B) shows structural properties of this metal protease.
Fig. 3 ist ein Coomassie Blau-gefärbtes SDS-Polyacrylamidgel mit aus mononucleären Blutzellen isolierter rekombinanter MPRS und ihrem RASED-Fragment, das von einer RA-Patientin stammt. Figure 3 is a Coomassie blue stained SDS polyacrylamide gel with recombinant MPRS isolated from mononuclear blood cells and its RASED fragment derived from an RA patient.
Fig. 4 zeigt das Ergebnis einer Immunpräzipitation der zell frei translatierten MPRS durch Seren von Patienten (RA = Rheumatoide Arthritis, Patientenserum; c = Kontroll-Xeno serum; N1, N2 = "Normalserum", human, als Kontrolle; MCTD = Mischkollagenose, Patientenserum; SLE = Systemischer Lu pus Erythematodes, Patientenserum). Fig. 4 shows the result of immunoprecipitation of the cell-free translated MPRS by sera from patients (RA = rheumatoid arthritis patient serum; c = control Xeno serum; N1, N2 = "normal serum", human, as a control; MCTD = mixed connective tissue disease, patient serum ; SLE = Systemic Lu pus Erythematosus, Patient Serum).
Fig. 5 zeigt einen Homologie-Vergleich der erfindungsgemäßen, in Fig. 2 gezeigten Metallprotease mit bisher bekannten Me tallproteasen. Fett hervorgehobene Aminosäuren markieren stark konservierte Bereiche. Die für Metallproteasen typischen Domä nen (hydrophobes Signalpeptid, abspaltbares Propeptid, kataly tische Domäne mit Zn2+-Bindestelle, "Hinge"Region und Hemopexin ähnliche Domäne) sind aus der Abbildung zu entnehmen (vgl. Bir kedal-Hansen, H. et al. (1993) Crit. Rev. Oral. Biol. Med.). Die MTMMP-Sequenz stammt aus der "genbank"-Datenbank (NCBI, USA), alle anderen Sequenzen sind aus der Proteindatenbank "Swissprot" entnommen (STRO1 = Stromyelisin-1 Precursor (MMP- 3); STRO2 = Stromyelisin-2 Precursor (MMP-10); STRO3 = Stromyelisin-3 Precursor (MMP-11); 92KD = 92 kD Type IV Collagenase Precursor (MMP-9); 72KD = 72 kD Type IV Collagenase Precursor (MMP-2); MME = Macrophage Metalloelastase Precursor (MMP-12); NEUCOLL = Neutrophil Collagenase Precursor (MMP-8); INTCOLL = Interstital Collagenase Precursor (MMP-1); PUMP- 1 = Matrylisin Precursor (MMP-7); MTMMP-1 = Membrane Type Ma trix Metalloproteinase). Fig. 5 shows a homology comparison of the inventive metal protease shown in Fig. 2 with previously known metal proteases. Amino acids highlighted in bold mark highly conserved areas. The domains typical for metal proteases (hydrophobic signal peptide, cleavable propeptide, catalytic domain with Zn 2+ binding site, "hinge" region and hemopexin-like domain) can be seen in the figure (cf. Bir kedal-Hansen, H. et al (1993) Crit. Rev. Oral. Biol. Med.). The MTMMP sequence comes from the "genbank" database (NCBI, USA), all other sequences are taken from the "Swissprot" protein database (STRO1 = Stromyelisin-1 Precursor (MMP-3); STRO2 = Stromyelisin-2 Precursor (MMP -10); STRO3 = Stromyelisin-3 Precursor (MMP-11); 92KD = 92 kD Type IV Collagenase Precursor (MMP-9); 72KD = 72 kD Type IV Collagenase Precursor (MMP-2); MME = Macrophage Metalloelastase Precursor ( MMP-12); NEUCOLL = Neutrophil Collagenase Precursor (MMP-8); INTCOLL = Interstital Collagenase Precursor (MMP-1); PUMP-1 = Matrylisin Precursor (MMP-7); MTMMP-1 = Membrane Type Ma trix Metalloproteinase).
Durch das nachfolgende Beispiel wird die vorliegende Erfindung näher erläutert.The present invention is illustrated by the following example explained in more detail.
Die Isolation von mRNA aus Synovialmembran-Zellen einer RA- Patient in erfolgt nach im Stand der Technik bekannten Ver fahren und eine Expressions-cDNA-Bank wird mit dem Expressi onsvektor lambda Zap II (Fa. Stratagene) hergestellt. Das Absuchen ("Screening") der cDNA-Bank wird mit gereinigtem Immunglobulin G der RA-Patientin durchgeführt.Isolation of mRNA from synovial membrane cells of an RA Patient in takes place according to Ver known in the prior art drive and an expression cDNA bank with the Expressi onsvektor lambda Zap II (from Stratagene). The Screening of the cDNA bank is carried out with purified Immunoglobulin G performed by the RA patient.
Mit dem vorstehend beschriebenen Verfahren wurde ein primä rer Klon "Rased", der ein Fragment von 1106 bp der Metall protease (MPRS)-mRNA umfaßt, aus der cDNA-Bank (3×10⁵ Klone/µg mRNA) erhalten, wobei dieses Fragment aufgrund des Screenings mit Immunglobulin G der RA-Patientin ein autoan tigenes Epitop enthält.With the method described above, a primary rer clone "Rased", which is a fragment of 1106 bp of metal protease (MPRS) mRNA comprises, from the cDNA library (3 × 10⁵ Clones / µg mRNA) obtained, this fragment due to the Screenings with immunoglobulin G of the RA patient an autoan tigenic epitope contains.
MPRS-mRNA wird in peripheren mononucleären Blutzellen über reverse Transkription/Polymerasekettenreaktion nachgewiesen. Die Isolation der mRNA aus peripheren mononucleären Blutzel len und die Herstellung einer cDNA-Bank mit lambda Zap II wird wie vorstehend beschrieben durchgeführt. Das Screening der cDNA-Bank wird mit einer markierten, auf dem RASED-Klon basierenden DNA-Sonde durchgeführt.MPRS mRNA is expressed in peripheral blood mononuclear cells reverse transcription / polymerase chain reaction detected. Isolation of mRNA from peripheral mononuclear blood cells len and the production of a cDNA bank with lambda Zap II is carried out as described above. The screening The cDNA library is marked with a, on the RASED clone based DNA probe.
Mit dem vorstehend beschriebenen Verfahren wurde ein des vollständiger cDNA-Klon der MPRS erhalten, dessen vollstän dige Sequenzierung die in Fig. 1 gezeigte DNA-Sequenz und die davon abgeleitete, in Fig. 2 gezeigte Aminosäuresequenz ergab.With the method described above, one of the complete cDNA clone of the MPRS was obtained, the full sequencing of which gave the DNA sequence shown in FIG. 1 and the derived amino acid sequence shown in FIG. 2.
Der in Fig. 5 gezeigte Datenbankvergleich zeigt auf Pro teinebene zwischen 30 und 35% Identität (bei einer Ähnlich keit von über 50%) zu bekannten Metallproteasen, wobei die katalytische Domäne sowie die für Metallproteasen typische Domänenstruktur vorhanden sind.The database comparison shown in FIG. 5 shows, at protein level, between 30 and 35% identity (with a similarity of over 50%) to known metal proteases, the catalytic domain and the domain structure typical of metal proteases being present.
Die Expression und Reinigung von MPRS aus E. coli wird mit pET24 und mit N-terminalem oligo-Histidin-"tag" durchge führt. Die Expression und Reinigung von RASED aus E. coli wird mit pGEX 1 als Fusionsprotein mit Glutamin-S-Trans ferase durchgeführt. Die so erhaltenen Peptidkonstrukte wur den über ein SDS-Polyacrylamidgel elektrophoretisch aufge trennt und die aufgetrennten Peptidkonstrukte durch Coomas sie Blau-Färbung des SDS-Polyacrylamidgels nachgewiesen; vgl. Fig. 3.The expression and purification of MPRS from E. coli is carried out with pET24 and with N-terminal oligo-histidine "tag". The expression and purification of RASED from E. coli is carried out with pGEX 1 as a fusion protein with glutamine-S-transferase. The peptide constructs obtained in this way were electrophoretically separated on an SDS polyacrylamide gel and the separated peptide constructs were detected by Coomas blue staining of the SDS polyacrylamide gel; see. Fig. 3.
Die zellfreie Transkription/Translation von MPRS erfolgt in Retikulozytenlysaten. Die Immunpräzipitation der zellfrei translatierten MPRS wird mit Seren von Patienten durchge führt; vgl. Fig. 4.Cell-free transcription / translation of MPRS takes place in reticulocyte lysates. The immunoprecipitation of the cell-free translated MPRS is carried out with patient sera; see. Fig. 4.
Das in Fig. 4 zusammengefaßte Ergebnis zeigt deutlich, daß MPRS als starkes Autoantigen bei Patienten mit rheumatoider Arthritis und Systemischer Lupus Erythematodes wirkt.The result summarized in Fig. 4 clearly shows that MPRS acts as a strong autoantigen in patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus.
Claims (14)
- (a) das Polypeptid von Anspruch 7 oder 8, oder
- (b) der Antikörper von Anspruch 9
- (a) the polypeptide of claim 7 or 8, or
- (b) the antibody of claim 9
- (a) das Polypeptid von Anspruch 7 oder 8, oder
- (b) den Antikörper von Anspruch 9.
- (a) the polypeptide of claim 7 or 8, or
- (b) the antibody of claim 9.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19543265A DE19543265A1 (en) | 1995-11-20 | 1995-11-20 | Autoantigens and methods for diagnosing autoimmune diseases |
| PCT/DE1996/002094 WO1997019178A2 (en) | 1995-11-20 | 1996-11-04 | Autoantigenic metal proteases and methods of diagnosing autoimmune diseases |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19543265A DE19543265A1 (en) | 1995-11-20 | 1995-11-20 | Autoantigens and methods for diagnosing autoimmune diseases |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19543265A1 true DE19543265A1 (en) | 1997-06-05 |
Family
ID=7777951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19543265A Withdrawn DE19543265A1 (en) | 1995-11-20 | 1995-11-20 | Autoantigens and methods for diagnosing autoimmune diseases |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE19543265A1 (en) |
| WO (1) | WO1997019178A2 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0897426B1 (en) * | 1996-04-25 | 2006-06-28 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Matrix metalloprotease |
| WO1998040475A1 (en) * | 1997-03-11 | 1998-09-17 | Abbott Laboratories | Human matrix metalloprotease gene, proteins encoded therefrom and methods of using same |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995015374A1 (en) * | 1993-11-30 | 1995-06-08 | Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha | Novel metalloprotease and dna coding for the same |
| WO1995025171A2 (en) * | 1994-03-17 | 1995-09-21 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Dna sequences for matrix metalloproteases, their production and use |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH085920B2 (en) * | 1991-01-21 | 1996-01-24 | 富士薬品工業株式会社 | Anti-human stromlysin monoclonal antibody and enzyme immunoassay |
| EP1262493A1 (en) * | 1992-10-29 | 2002-12-04 | Bayer Corporation | Diagnostic assay for latent matrix metalloproteinase no. 9 |
-
1995
- 1995-11-20 DE DE19543265A patent/DE19543265A1/en not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-11-04 WO PCT/DE1996/002094 patent/WO1997019178A2/en active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995015374A1 (en) * | 1993-11-30 | 1995-06-08 | Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha | Novel metalloprotease and dna coding for the same |
| WO1995025171A2 (en) * | 1994-03-17 | 1995-09-21 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Dna sequences for matrix metalloproteases, their production and use |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1997019178A3 (en) | 1997-09-25 |
| WO1997019178A2 (en) | 1997-05-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69117949T2 (en) | PROTEIN ASSOCIATED WITH ACUTE PANCREATITIS, MEANS FOR DIAGNOSIS OF ACUTE PANCREATITIS | |
| DE69926480T2 (en) | ACPL DNA AND POLYPEPTIDES | |
| DE69737754T2 (en) | SUBSTANCES FOR PRESYMPTOMATIC RECOGNITION AND TARGETED THERAPY OF ALZHEIMER DISEASE IN HUMANS. | |
| DE69332163T2 (en) | Novel amyloid precursor proteins and methods of using them | |
| DE69521608T2 (en) | USE OF HUMANEM NEUTROPHIL LIPOCALINE (HNL) AS A DIAGNOSTIC MARKER AND ANTI-HNL ANTIBODY PREPARATION | |
| US10852302B2 (en) | Method for evaluation of function of phagocyte | |
| AT500379A2 (en) | TAU PROTEINS | |
| US20190119339A1 (en) | Novel human ulip/crmp protein and use thereof in diagnosis and treatment of cancers and paraneoplastic neurological syndromes | |
| EP1381628B1 (en) | Inflammation-specific peptides and the uses thereof | |
| Boulassel et al. | COCH5B2 is a target antigen of anti-inner ear antibodies in autoimmune inner ear diseases | |
| US20080107600A1 (en) | Gene Marker And Composition For Diagnosis And Treatment Of Neurological Disorders And Diseases And Use Of The Same | |
| EP0313156B1 (en) | Snrnp-a antigen and fragments thereof | |
| EP2149051B1 (en) | Method and immune absorbents for the specific detection and absorption of celiac disease- and herpetiform dermatitis-associated antibodies | |
| Popken-Harris et al. | Biochemical properties, activities, and presence in biologic fluids of eosinophil granule major basic protein | |
| EP1339742A2 (en) | Human protein differentially expressed in alzheimer's disease's brain | |
| DE60018279T2 (en) | DIAGNOSTIC USES OF ACETYLCHOLINESTERASE OR THEIR C-TERMINAL PEPTIDE-TREATED ANTIBODIES | |
| DE60113968T2 (en) | DIAGNOSIS OF BREAST CANCER USING BCMP-7 AS A MARKER | |
| DE19543265A1 (en) | Autoantigens and methods for diagnosing autoimmune diseases | |
| Plager et al. | A novel human homolog of eosinophil major basic protein | |
| Regelsberger et al. | Danon disease: case report and detection of new mutation | |
| JP4360902B2 (en) | Fusion protein | |
| JP4315257B2 (en) | Novel chondroitin sulfate proteoglycan, its core protein, DNA encoding it and antibody to it | |
| WO1998017800A1 (en) | Novel human cc chemokine larc | |
| EP3149485B1 (en) | Method for diagnosing a disease or a risk to develop a disease transmitted via the alternative pathway of the complement system | |
| WO2008043524A2 (en) | Autoantigens for improved diagnosis, prognosis and treatment of inflammatory neurological diseases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
| 8139 | Disposal/non-payment of the annual fee |