DE1617794A1

DE1617794A1 - Verfahren zur Herstellung eines atmungsfoerdernden Praeparates

Info

Publication number: DE1617794A1
Application number: DE19661617794
Authority: DE
Inventors: Karl-Heinz Dr Med Jaeger
Original assignee: Solco Basel AG
Current assignee: ICN Switzerland AG
Priority date: 1965-07-26
Filing date: 1966-07-15
Publication date: 1971-07-29
Also published as: BE684367A; NL159884C; GB1103683A; NL6610501A

Description

PATENTANWÄLTE DR₁-ING-HOGER DIPL.-ING. STELLRECHTM-.Se. * 1617794

DIPL₁-PHYS₁DR-GRIESSBACh DIPL-PHYS.·-: ..<ER : · .

7STUTTGART-LUHLAWDSTR₁Is "... ."... r ,-

A 35 264 ■ 14* Juli 1966

Solco Basel AG. " Basel (Schweiz)

Es wird die Priorität der Sohweieer Patentanmeldung Ur. 10 439/65 vom 26. Juli 1965 in Anspruch genomaen·

Verfahren zur Keratelluns eines atoungofardamden Pr&parates Es ist z.B. au3 der Schwoiser Patentschrift Nr. 5^5 ^3 ein atciunsa-

förderrjäea Präparat belamnt, »olohos derart hergestellt wird» dass

κβη Blut oder Blutplaona oder Blutzollen Insbesondere Junger Tiere durch ensyriatlschen Abbau und/oder durch Behandlung mit einem nieder* molekularen Alkohol odor mit Sauren enteiwelsat, · . -

Dieses Prliparat csnthUlt lediglich niedoroolekulare Substanzen Bit βίϊκκη Atoir^ewleht von maximal etwa 3000} «s ist eiwei·»- und allergen· frei und enthält «uoh keine Blutsruppen-pÄrtialantieene. Hit irgendeinem bisher bekannten Wirketoff let dal Präparat nicht, identiechj es konnte naohsewieaen nerdejn« dass die enalytlaeh naehcowieaenon Subatanzon, die Sm Blut vorhanden aind und Mlbatverst&ndlieh «la • niedermolekular la dieses PrUparat Übersehen nüssen» wie AminoaKuren, Zucker und Derivate« Spurenelement· usw. nichts Bit dem eigentlichen

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aktiven VJirlcungsprinsip au tun haben. Als Test für den Nachweis dieses Prinzips dient die von VJarburs beacliriebsne Technik dor Sauerstoff« Aufnahme von isolierten C-owsben, Gewebc-Hososenate-n, riitochondrien usw. * wit deren Hilfe nachgewiesen werden konnte, dass keine bisher bekannte Substans dio atisunssfördöKide Wirkung das in. donr^snsmten Patent beschriebenen"Prinzips erreicht. Die Wirksamkeit des in der zitierten Patentschrift beschriebenen Präparates konnte durch Erhitzen auf 100⁰C für 10 - 20 Minuten teilweise- zerstört werden; der übrigbleibende Anteil des Wirkungsprinzips wirkt Jedoch überraschenderweise in der Warburs-Apparatur vorwiegend nur dann; wenn Mitochondrion, I-losiogenate,.- auch Hefen und aerobe EakterienstSnHie als TGStorsaiii£nen benutzt wurden; wenn je3och isolierte Organs in Grenscchnittdicke, 2.B. Ratten- oder Käuce-Zuerchfeil, isolierte, aber sonst intalite Muslisln, v;ie der Musculus soleus der Ratte, der ebenfalls etna Grenzschnittdicke besitzt, benutzt werden, nicht· Der thercolablle Ar.ieil des Präparates war unso leichter zerstörbar, Je saurer die IteaktionsflUssigkeit war, in der die Erhitzung stattfand·

Ueberraschenderweise wurde nun gefunden» dass sowohl die Wirkung unf den Intakten Muskel in Grenzschnittdicke als auch auf den isolierten Meerschweinchendara In der Kiisnuß-Apparatur nicht nur wiederhergestellt werden konnte, sondern sogar eine Steigeruns auf das zwei- bic dreifache des AussangeprSparates eintrat, wenn man gewisse Eiuelsskörper darauf

einwirken lässt»

das bekannte Prüparat in der Warburg-Apparatur soine Wirksas)·

.,'.' · ." '- - .. BAD ORIGINAL-

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keit/ yo^rfisäond an HöSc^cxiaten, also freies Eiv:eiss enthaltendsn Systems/entfaltet, ist das erfindtuissgeaSss erhältliche Produkt in der Lage, eine Eiiisbuns der Sauerstoff aufnähme euch in intslsten "Organen mit Grcnsschnittöicke zu fcewirficn, mit anderen Horten also, die Passage des Prodiü:tc-G durch die intc^te lebende j-'enbran au besolileunisen vr;d au erhöhaa. ~ ' ..'."': . - '

Die Srfindiuis betrifft d^ior ein Verfahren zur Herstellung, einos

::cribrancn bocchleijnist und vermehrt passierenden, ateo^sf Pr'iparates,,. das dacureh eckennseiohiiot ist, dass ττ^η oin co3 Blut, Blutzöllen, Blutplasma oder hlänolysiertea; Blut Junger Tleire εεΐ·:οηηΰκ • tsnd von Eitisies, insbsccndere von PolsTpeptidsn nit eir.331 ^000 übor-Kolekularssviicht bsfreites Präparat settle .alle-rger-- und uzaneitiQiss aufeinander durch Intubation einwiri:en

bis 100 as/nl cn Trockensubstanz eineast» . ..

Bio InliubaUon, wird vorsusssieise bsi iß>rperte.-n5eratur, also 55 durchsfführt· JMsat man z.3. auf ein bei Ρ«2 erhitztes, bsi dieser Temperatur Hxsaanalbuain, Hus^^erum oder ^

, so erhUlt man β3.ήβ *>ψ* dreifach© Steiseruns der dea Produktes! diese Zeit beträft iiiindestens 10, nicht über 40 Minuten} nach dieser Zeit nirast die Bildung des wirksamen Prinzips wieder ab»

AIa Baamneiweiss «ißetien sich s #B. ausser hämolysiertea nenschlichea Blut Insbesondere Blutsarua sowie Hucanalbuniin, menschliche* ^Globulin,

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wobei die genauere Analyse der im wesentlichen in Betracht kommenden Bestandteile ergab, daß es sich um Polypeptide mittlerer Kettenlänge handelt, wie sie z. B. in der Fraktion IV nach Cohn vorliegen (J.Ä. Chem. Soc, 72, 465 (1950) ), und unter Einwirkung eines elektrischen Feldes elektrophoretisch wandern.

An sich läßt sieh ein im Warburg-Versuch und im Versuch am isolierten Darm gleich wirksames Produkt auch durch eine Inkuba ion mit tierischem Eiweiß und dessen Fraktionen herstellen, aber ein für therapeutische Zwecke brauchbares Präparat muß mit Humaneiweiß hergestellt werden, um Antigen-Antikörper-Reaktionen am Menschen zu vermeiden.

Die verwendbaren Eiweiß-Substanzen unterscheiden sich insofern in Bezug auf ihre verstärkende Wirkung auf das Ausgangspräparat, als entsprechend ihrem Anteil an Polypeptiden größere oder kleinere Mengen zugesetzt werden müssen, derart, daß die Eiweißquelle in einem umso größeren Überschuß erforderlich ist, je weniger Polypeptide sie enthält. Die in Frage kommenden Relationen schwanken zwischen dem drei- bis zehnfachen, aber auch 50-fachen, bezogen auf das Trockengewicht des vorher getesteten Ausgangspräparates. Der Überschuß an Eiweiß ist deswegen notwendig, weil die chemische Bindung nur an bestimmte freie Valenzen des Eiweißmoleküls, vorwiegend an niedermolekulare Eiweiße (Polypeptide), erfolgt.

Während das z. B. aus Kälberblut gewonnene Ausgangspräparat eiweiß- und allergenfrei ist, ist das erfindungsgemäß erhältliche Produkt

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zwar eiweißhaltig, enthält aber kein Alergen, läßt sich also ohne Abtrennung der überschüssigen höhermolekularen Eiweißstoffe als Arzneimittel verwenden, gleichgültig, ob es lyophilisiert oder in anderer Weise getrocknet wird.

Nachfolgend werden die Wirkungen eines Ausgangspräparates mit derjenigen eines erfindungsgemäß erhaltenen Präparates miteinander verglichen:

Sauerstoffaufnähme im Hattenzwerchfeil, gemessen im Warburg-Apparat

Kontrolliert;-- , ' 22 ml nach 60 min.

Wert nach Zusatz des erfindungsgemäß erhaltenen

Produktes^ . 33 ml nach 60 min.

Die Aktivierung des Ausgangspräparates, gemessen imMagnsu-Apparat (Kontraktion des Meerschweinchen-Darmes) beträgt mindestens das 5-, meistens das 10-fache. Werden die Konzentrationen des ursprünglichen Produktes so gewählt, daß überhaupt keine Kontraktion des Meerschweinchendarmes erfolgt, dann bringt das erfindungsmässig'erhaltene Produkt eine starke Kontraktion zustande.

Eine Modifikation des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, daß man clen thermolabilen Anteil des Äusgangspräparates mit Humaneiweiß inkubiert und das Reaktionsprodukt dem Äusgangspräparat zusetzt, derart, daß das Gesamt-Trockengewicht etwa 40 mg/ml nicht tiberschreitet. Auf diese Weise wird eine weitere Wirkungssteigerung erzielt, die dadurch gemessen und standardisiert werden kann, .daß die Differenz zwischen dem Kontrollmuster in Grenzschnittdicke und dem mit dem Präparat versetzten Muster bestimmt wird.

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Kein anderer Organextrakt gewinnt durch die Inkubation mit Eiweißlösungen nach vorheriger Erhitzung eine Wirksamkeit, wie sie das erfindungsgemäß erhältliche Produkt aufweist.

.Beispiel

3 ml eines nach dem Verfahren der Schweizer Patentschrift Nr. 365 483 hergestellten Produktes mit einem Trockengewicht von durchschnittlich 40 mg/ml werden bei 37° C mit 9 ml menschlichen Serums für 20 min. inkubiert, anschließend auf Normaltemperatur gebracht und steril ampulliert. Das beschriebene Reaktionsprodukt kann auch lyophilisiert werden, Von etwa auftretenden Niederschlägen, Trübungen usw. wird nach Beendigung der Inkubation abfiltriert. Das erhaltene Produkt hat ein Trockengewicht von etwa βθ mg/ml.

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Claims

"⁷V ^r 11 itf er

Patent ans p r ü c h e

1. Verfahren zur HerSteilung eines Membranen beschleunigt und vermehrt paassierenden, /atmungsfördernden Präparates, dadurch gekennzeichnet, dass tnan ein aus Blut, Blutzellen» Blurplasnia oder h'ämolysiertern Blut junger Tiere gewonnenes und von Eiwelss befreites Präparat sowie allergen- und antigenfreies Humaneiweiss aufeinander durch Inlcubation einwirken lässt und das Produkt der Inkubation.auf eine " Konzentration von kO bis 100 mg/ml an Trockenstsbczanz uinengt. ■ . . ■ ■.-■-- - : -' ■ ; ■ - ..-'"·

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass

san die Inkubation bei eihei· Temperatur von 35-^O°C minde- · stens IC und höchstens ^O Minuten lang durchfuhrta

■3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet,

dass die Konzentration der vereinigten Ausgangsstoffe j

oOmg/inl an Trockensubstanz nicht übersteigt. :

k. Verfahren nach einem dfer Ansprüche 1 bis 3»^ dadurch gekennzeichnet, dass als Humaneiweiss die Cohnfraktion IV ver wendet wird.

5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3* dadurch gekennzeichnet, dass Hiimanalbumin Verwendet wird.

O¹

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- 3

6. Verfahren nach einen der Ansprüche 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, dass Kuman-γ-Globulin verwendet wird.

■*. Verfahren nach ei nee der Ansprüche 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, dass häraolysiertes menschliches Blut verwendet wird. -

B. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, dass menschliches Blutserum verwendet wird.

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