DE1073151B

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Publication number: DE1073151B
Application number: DENDAT1073151D
Authority: DE
Publication date: 1960-01-14

Description

Verfahren zur Herstellung von reinem Cyanocobalamin Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von reinem Cyanocobalamin aus einem Vitamin-Bl2-Konzentrat mit einem Gehalt von weniger als 95 °/o. Process for the preparation of pure cyanocobalamin The invention relates to a process for the production of pure cyanocobalamin from a vitamin B1 concentrate with a content of less than 95 ° / o.

Das Verfahren zeichnet sich durch sehr große Einfachheit der Ausführung aus und ist deshalb für die Anwendung in technischem Maßstab geeignet.The process is very easy to carry out and is therefore suitable for use on an industrial scale.

Das neue Verfahren läßt sich zur Isolierung von reinem Vitamin2 aus Konzentraten dieses Produkts anwenden, wie man sie nach bekannten Vorextraktions-und Vorreinigungsverfahren aus natürlichen Quellen, wie Kulturnüssigkeiten von Mikroorganismen, Abwässern und Leberextrakten mit einem Gehalt von mindestens 0, 5 °/oo Vitamin erhält. Die vorliegende Erfindung besteht darin, daß man eine wäßrige Lösung des Cyanocobalamins mit einem Gehalt von mindestens 0, 5 # Cyanocobalamin mit einer Menge eines Phenols, insbesondere eines Mono-, Di-oder Triphenols, die 2 bis 3 °/0 des Volumens der Lösung für Phenol selbst beträgt, behandelt, den hydratisierten, wohldefinierten Cyanocobalamin-Phenol-Komplex der allgemeinen Formel C63H88N14O14PCo-(R)n-(H2O)x in der n 2 oder 4, x eine Zahl zwischen 4 und 11 und R ein Phenol, insbesondere ein Mono-, Di-oder Triphenol, bedeutet, kristallisieren läßt, ihn absaugt, durch Auflösen in Wasser zerlegt und das Cyanocobalamin durch Zugabe eines mit Wasser mischbaren Lösungsmittels, wie Dioxan oder Aceton, ausfällt. The new process can be used to isolate pure vitamin2 Apply concentrates of this product as you would after known pre-extraction and Pre-cleaning processes from natural sources, such as culture liquids from microorganisms, Wastewater and liver extracts with a vitamin content of at least 0.5%. The present invention consists in making an aqueous solution of the cyanocobalamin With a content of at least 0.5 # cyanocobalamin with an amount of a phenol, in particular a mono-, di- or triphenol, which is 2 to 3% of the volume of the solution for phenol itself is, treated, the hydrated, well-defined cyanocobalamin-phenol complex of the general formula C63H88N14O14PCo- (R) n- (H2O) x in which n is 2 or 4, x is a number between 4 and 11 and R is a phenol, in particular a mono-, di- or triphenol, lets crystallize, it sucks, decomposed by dissolving in water and the cyanocobalamin by adding a water-miscible solvent such as dioxane or acetone, fails.

Die Fähigkeit verschiedener Phenole, entweder als solche oder im Gemisch mit verschiedenen Lösungsmitteln Cyanocobalamin aus wäßrigen Lösungen zu extrahieren, ist bekannt. The ability of various phenols, either as such or im Mixture with various solvents cyanocobalamin from aqueous solutions extract is known.

Aus Arbeiten von Friedrich und Bernhauer (Angewandte Chemie, 66, S. 776 bis 780 [1954] ; Z. fiir Naturforschung, 1954, S. 755 bis 761, entsprechend deutsche Auslegeschrift 1 016 898) ist es z. B. bekannt, daß das Behandeln einer wäßrigen Cyanocobalaminlösung mit einem monocyclischen Phenol, dessen Menge so zu wählen ist, daß die entstandene Lösung den Phenolsättigungsgrad fast erreicht oder sogar überschreitet, zu einer ölartigen Fällung führt, die aus einem Gemisch aus Cyanocobalamin und veränderlichen Phenolmengen besteht. From work by Friedrich and Bernhauer (Angewandte Chemie, 66, Pp. 776 to 780 [1954]; Z. fiir Naturforschung, 1954, pp. 755 to 761, accordingly German Auslegeschrift 1 016 898) it is z. B. known that treating a aqueous cyanocobalamin solution with a monocyclic phenol, the amount of which increases choose is that the resulting solution almost reaches the phenol saturation or even exceeds it, leads to an oily precipitation from a mixture Cyanocobalamin and variable amounts of phenol.

Diese nicht definierten Gemische, deren Zusammensetzung je mit den verwendeten Phenolmengen wechselt und die man als » Komplexe « vermutet hatte, dürften wahrscheinlicher gemäß der von Klo s a (»Die Pharmazie«, 1955, S. 102, 103) geäußerten ansicht und der durch eigene Untersuchungen beigebrachten Bestätigung, als adsorptive Fällungen betrachtet werden. These undefined mixtures, their composition depending on the The amount of phenol used changes and that were suspected to be "complexes" more likely according to that of Klo s a ("Die Pharmazie", 1955, pp. 102, 103) view and the confirmation provided by our own investigations, as adsorptive Precipitations are considered.

Bei Anwendung des Phenols beginnt die Fällung bei einer Mindestkonzentration von 6"/o. Die Änderungen der Zusammensetzung der oligen Fällung bei zunehmenden Phenolkonzentrationen ergeben sich wie folgt, wenn man von einer Cyanocobalaminlösung, die 10 mg Cyanocobalamin pro cm3 enthält, ausgeht. °/0 Phenol Zusammensetzung der öligen Fällung Cyanocobalamin (Phenol 6. 34, 80/0 550/o 7 27, 8 °/0 57 olo 8 23-"/. 67% Die so erhaltene ölige Fällung liefert, mit Aceton gewaschen, durch Lösen des Phenols, das Ausgangs-Cyanocobalamin.When the phenol is used, the precipitation begins at a minimum concentration of 6 "/ o. The changes in the composition of the oily precipitation with increasing phenol concentrations result as follows, assuming a cyanocobalamin solution containing 10 mg cyanocobalamin per cm3. ° / 0 Phenol Composition of the oily precipitation Cyanocobalamin (phenol 6. 34, 80/0 550 / o 7 27.8 ° / 0 57 olo 8 23 - "/. 67% The oily precipitate thus obtained, washed with acetone, gives the starting cyanocobalamin by dissolving the phenol.

Zum Vergleich des kristallisierten Komplexes nach der Erfindung mit der öligen Fällung nach der deutschen Auslegeschrift 1 016 898 wurden beide mit Aceton gewaschen und vor und nach der Behandlung mit Aceton analysiert. Die erhaltenen Resultate sind im folgenden. wiedergegeben : 1. Kristallisierter Komplex nach der Erfindung Der nach Beispiel 1 der vorliegenden Erfindung erhaltene Komplex wurde in Aceton bei Raumtemperatur suspendiert, mit Aceton gewaschen und im Vakuum getrocknet. To compare the crystallized complex according to the invention with the oily precipitation according to the German Auslegeschrift 1 016 898 were both with Acetone washed and analyzed before and after treatment with acetone. The received Results are in the following. reproduced: 1. Crystallized complex after the Invention The complex obtained in Example 1 of the present invention was suspended in acetone at room temperature, washed with acetone and dried in vacuo.

Analyse : 1 Cyanocobalamin 4 CsH50H 5 H20 Gehalt an Vitamin B12, spektrophotometrisch gemessen, vor Behandlung mit Aceton : berechnet............. 74, 4 °/0, gefunden............. 74, 6 °/o ; nach Behandlung mit Aceton : berechnet............. 74, 4°/0, gefunden............. 75,1% ; Gehalt an Phenol, colorimetrisch bestimmt, vor Behandlung mit Aceton : berechnet............. 20, 650/,, gefunden ........................... 18, 7 °/o ; nach Behandlung mit Aceton : berechnet............. 20, 65 °/o, gefunden............. 19, 0 °/0.Analysis: 1 cyanocobalamin 4 CsH50H 5 H20 content of vitamin B12, spectrophotometric measured, before treatment with acetone: calculated ............. 74.4 ° / 0, found ............. 74.6%; after treatment with acetone: calculated ............. 74.4 ° / 0, found ............. 75.1%; Phenol content, determined colorimetrically, before treatment with acetone: calculated ............. 20.650 / ,, found ........................... 18.7%; after treatment with Acetone: calculated ............. 20.65%, found ............. 19.0 ° / 0.

2. Produkt nach der deutschen Auslegeschrift 1 016 898 106 mg an kristallisiertem Vitamin B12 werden in 15 ccm Wasser gelost. Man fügt 8% Phenol (1, 5 ccm einer 80% igen Lösung) hinzu. Das sich abscheidende rote Ö1 wird durch Zentrifugieren isoliert (Gewicht 490mg) und dann in 10 ccm Aceton suspendiert. Man beobachtet eine sofortige Auflösung des Öles und das Auftreten eines roten, mikrokristallinen Festkörpers. Man wäscht zweimal mit 10 ccm Aceton und trocknet im Vakuum.2. Product according to German Auslegeschrift 1 016 898 106 mg of crystallized Vitamin B12 are dissolved in 15 cc of water. 8% phenol (1.5 ccm of an 80% own solution). The red oil which separates out is isolated by centrifugation (Weight 490 mg) and then suspended in 10 cc of acetone. One observes an instant Dissolution of the oil and the appearance of a red, microcrystalline solid. It is washed twice with 10 cc of acetone and dried in vacuo.

Analyse : Gehalt an VitaminBl2, spektrophotometrisch gemessen, vor Behandlung mit Aceton......... 23 °/o nach Behandlung mit Aceton .............. 97, 2 °/0 Gehalt an Phenol, colorimetrisch gemessen, vor Behandlung mit Aceton........... 67 °/o nach Behandlung mit Aceton......... 0 °/0 Es ergibt sich ein grundlegender Unterschied zwischen beiden Produkten.Analysis: content of vitaminBl2, measured spectrophotometrically, before Treatment with acetone ......... 23% after treatment with acetone .............. 97.2% phenol content, measured colorimetrically, before treatment with acetone ........... 67% after treatment with acetone ......... 0 ° / 0 There is a fundamental one Difference between both products.

Das Produkt nach der vorliegenden Erfindung ist gegen Aceton stabil ; es handelt sich um einen Komplex mit Bindungen zwischen dem Vitamin B12 und dem Phenol. The product according to the present invention is stable to acetone ; it is a complex with bonds between the vitamin B12 and the Phenol.

Das Produkt nach der deutschen Auslegeschrift 1016 898 dissoziiert durch Zusatz von Aceton ; es handelt sich nicht um einen Komplex und es existieren keine Bindungen zwischen dem Vitamin B12 und dem Phenol. The product according to the German Auslegeschrift 1016 898 dissociates by adding acetone; it is not a complex and it does exist no bonds between the vitamin B12 and the phenol.

Das Produkt verhält sich wie eine Lösung von Vitamin B12 in Phenol, die sich aus einer gesättigten Lösung von Phenol in Wasser ausscheidet. Dieses Ol ist in mit Wasser nicht mischbaren chlorhaltigen Lösungsmitteln, wie beispielsweise Chloroform, Trichloräthylen oder Tetrachloräthan, in Gegenwart von Phenol leicht löslich.The product behaves like a solution of vitamin B12 in phenol, which is precipitated from a saturated solution of phenol in water. This oil is in water-immiscible chlorine-containing solvents such as Chloroform, trichlorethylene or tetrachloroethane, easily in the presence of phenol soluble.

Auf Grund seines physikalischen Zustandes weist es den Nachteil auf, keine ausreichend wirksame Reinigungsstufe zu sein, da es die Rolle eines dritten Lösungsmittels spielt und somit einen großen Teil der Verunreinigungen mit sich führt.Due to its physical condition, it has the disadvantage not to be a sufficiently effective purification stage as it plays the role of a third party Solvent plays a major role in the contamination leads.

Abgesehen von ihrem physikalischen Zustand sind die erfindungsgemäßen Kristallisate klar durch ihre Löslichkeitsverhältnisse gekennzeichnet. So sind beispielsweise die Komplexe mit Phenol selbst in Wasser mit 2 °/o Phenol, in Dichloräthan bzw. Trichloräthylen und selbst in Dichloräthan bzw. Trichloräthylen mit 10% Phenol unlöslich, von Aceton werden sie nicht zerlegt, was die Komplexbildung zwischen Phenol und Cyanocobalamin, i n Gegensatz zu den früheren öligen Fällungen, bestätigt. Apart from their physical state, those are according to the invention Crystals clearly identified by their solubility ratios. So are for example the complexes with phenol even in water with 2% phenol, in dichloroethane or Trichlorethylene and even insoluble in dichloroethane or trichlorethylene with 10% phenol, they are not broken down by acetone, which leads to the formation of a complex between phenol and Cyanocobalamin, in contrast to the earlier oily precipitations, was confirmed.

Man stellt diese neuen hydratisierten phenolischen Komplexe her, indem man einem Vitamin-B12 Konzentrat mit einem Gehalt von weniger als 95 °/0 in wäßriger Lösung eine Menge eines Phenols, die unterhalb der Löslichkeitsgrenze des betreffenden Phenols in Wasser liegt, zusetzt, kristallisieren läßt und filtriert. Die so erhaltenen Komplexe dissoziieren beim Suspendieren in Wasser, und das in Freiheit gesetzte VitaminBl2 löst sich. Es genügt dann, dieser Lösung ein mit Wasser mischbares Lösungsmittel, in dem das Vitamin B12 nicht löslich ist, zuzusetzen, um kristallisiertes Cyanocobalamin in hohem Reinheitsgrad zu erhalten. Die an Phenol zuzusetzende Menge beträgt beispielsweise für Phenol selbst weniger als 3 0/, und vorzugsweise etwa 2"/o des Volumens der wäßrigen Lösung. These new hydrated phenolic complexes are made by taking a vitamin B12 concentrate containing less than 95 ° / 0 in aqueous solution an amount of a phenol which is below the solubility limit of the Phenol in question is in water, added, allowed to crystallize and filtered. The complexes obtained in this way dissociate when suspended in water, and that in VitaminBl2 set free dissolves. It is then sufficient to mix this solution with water add a miscible solvent in which the vitamin B12 is not soluble, to obtain high purity crystallized cyanocobalamin. The one on phenol The amount to be added is, for example, for phenol itself less than 30 /, and preferably about 2 "/ o the volume of the aqueous solution.

Bekanntlich bestehen wäßrige Lösungen von unreinem Vitamin2 aus einem Gemisch von Cyanocobalamin, Dicyanocobalamin und Hydroxocobalamin, die zusammen ausfallen, wenn man nicht den pEI-Wert sehr sorgfältig auswählt. Es wurde nun gefunden, daß das Dicyanocobalamin keine kristallisierten Hydrate der Phenolkomplexe liefert und bei dem Verfahren nach der Erfindung gelöst verbleibt, was einen zusätzlichen Vorteil darstellt. It is well known that aqueous solutions of impure vitamin2 consist of one Mixture of cyanocobalamin, dicyanocobalamin and hydroxocobalamin that together fail if one does not choose the pEI value very carefully. It has now been found that the dicyanocobalamin does not provide any crystallized hydrates of the phenol complexes and remains solved in the method according to the invention, which is an additional Represents advantage.

Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens genügt es, zur Erzielung quantitativer Ausbeuten in einem Konzentrat mit einem Gehalt von wenigstens 0, 5°/00 Vitamin B12 das Hydrat des Phenolkomplexes durch Zugabe der gewünschten Menge des Phenols, z. B. für Phenol selbst etwa 2%, bezogen auf das Volumen des Konzentrats, zu bilden. Das Verfahren läßt sich selbstverständlich auf reichere Konzentrate sowie auf Lösungen des reinen Produkts anwenden, das man so wiedergewinnen will. Wenn man mit Konzentraten mit einem Gehalt unterhalb von 0, 5 # Vitamin B12 arbeitet, ist die Kristallisation schwieriger. When carrying out the method according to the invention, it is sufficient to achieve quantitative yields in a concentrate with a content of at least 0.5 ° / 00 vitamin B12 hydrate the phenol complex by adding the desired Amount of phenol, e.g. B. for phenol itself about 2%, based on the volume of the Concentrate to form. The process can of course be applied to richer Apply concentrates as well as solutions of the pure product that can be recovered in this way want. If you start with concentrates with a content below 0.5 # vitamin B12 crystallization is more difficult.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. Man kann die Quelle der Vitamin-Bl2-Lösung sowie deren Konzentration, die Konzentration an Phenol, die zum Lösen des hydratisierten Phenolkomplexes des Vitamins B12 verwendeten Wassermengen und die Art des für die Ausfällung des Vitamins B12 verwendeten Lösungsmittels oder die Reihenfolge der Zugabe verändern, ohne aus dem Bereich der Erfindung zu gelangen. The following examples illustrate the invention. One can be the source the vitamin Bl2 solution as well as its concentration, the concentration of phenol, the amounts of water used to dissolve the hydrated phenolic complex of vitamin B12 and the type of solvent used for the precipitation of vitamin B12 or change the order of addition without departing from the scope of the invention.

Beispiel 1 Bildung des hydratisierten Komplexes Vitamin B12-Phenol aus einer Lösung von reinem Vitamin Bl2 und Wiedergewinnung des Vitamins B12 Eine Lösung von 100 mg kristallisiertem reinem Vitamin B12 in 10 ccm Wasser versetzt man mit 0, 2 ccm verflüssigtem Phenol. Es tritt zunächst vollständige Lösung ein. Falls erforderlich, bringt man die Kristallisation durch Kratzen der Gefäßwandung mit einem Glasstab in Gang und läßt die Kristallisation dann bis zum nächsten Morgen bei Zimmertemperatur bis zur Vollständigkeit fortschreiten. Example 1 Formation of the hydrated complex vitamin B12-phenol from a solution of pure vitamin Bl2 and recovery of vitamin B12 one Solution of 100 mg of crystallized pure vitamin B12 in 10 ccm of water one with 0.2 cc of liquefied phenol. First complete solution occurs. If necessary, crystallization is brought about by scratching the wall of the vessel with a glass rod and then let the crystallization until the next morning progress to completion at room temperature.

Man saugt die Kristalle des Hydrats des gebildeten Phenolkomplexes ab, wäscht sie mit Aceton, im welchem sie unlöslich sind, und trocknet sie bei Zimmertemperatur im Vakuum. Ausbeute : 105 bis 110 mg hexagonaler, lebhaft roter Kristalle. Das Produkt ist in Methanol und in 80 °/ igem Phenol lös] ich, in Aceton, Dichloräthan und Dichloräthan mit 10 °/0 Phenol unlöslich. Seine Löslichkeit in phenolhaltigem Wasser ist in der Abbildung graphisch dargestellt. Bei Behandlung mit einer wäßrigen Lösung von Kaliumcyanid löst es sich selbst in Gegenwart eines Überschusses von Phenol auf Grund der Bildung von Dicyanocobalamin wieder auf. Auch vorher hergestelltes Dicyanocobalamin gibt keinen Komplex. The crystals of the hydrate of the phenol complex formed are sucked off wash them with acetone, in which they are insoluble, and dry them at room temperature in a vacuum. Yield: 105 to 110 mg of hexagonal, vivid red crystals. The product is soluble in methanol and 80% phenol, in acetone, dichloroethane and dichloroethane insoluble with 10% phenol. Its solubility in phenolic water is in the Figure shown graphically. When treated with an aqueous solution of potassium cyanide it dissolves due to formation even in the presence of an excess of phenol of dicyanocobalamin again. There is also pre-made dicyanocobalamin no complex.

Durch Lösen von 100 mg des erhaltenen Komplexes in 10 ccm Wasser und Ausfällen mit 100 ccm Dioxan gewinnt man nach Absaugen und Trocknen etwa 90 mg Vitamin Bl2 purissimum. By dissolving 100 mg of the complex obtained in 10 cc of water and precipitation with 100 cc of dioxane is recovered after suction and drying about 90 mg of vitamin Bl2 purissimum.

Analyse des Hydrats des Phenolkomplexes : 1 Cyanocobalamin : C87H112N14O18PCO#5H2O Molekulargewicht : 1 821, 89 Berechnet.. C 57, 35%, H 6, 75 °/o, N 10, 76 °/o ; gefunden.... C 57, 1 °/0, H 6, 7 °/0, N 10, 7 %.Analysis of the hydrate of the phenol complex: 1 Cyanocobalamin: C87H112N14O18PCO # 5H2O Molecular weight: 1,821.89 calculated. C 57.35%, H 6.75%, N 10.76%; found .... C 57.1 ° / 0, H 6.7 ° / 0, N 10.7%.

Vitamini-B12-Gehalt durch Spektrophotometrie : B12 Berechnet.............. 74, 4% ; gefunden.............. 74, 6 °/o.Vitamini B12 content by spectrophotometry: B12 calculated .............. 74.4%; found .............. 74.6 ° / o.

Phenolgehalt durch Colorimetrie : C. H. OH Berechnet.............. 20, 65%, gefunden ........................... 18,7 %.Phenol content by colorimetry: C. H. OH Calculated .............. 20, 65%, found ........................... 18.7%.

Beispiel 2 Herstellung des hydratisierten Komplexes Vitamin B12-Phenol aus einem Vitamin Bl2 mit einem Gehalt von weniger als 95 °/0 und Gewinnung des reinen Vitamins B12 Man löst 100 mg Vitamin Bl2 (nach Codex 72 % Gehalt ; H20 9, 6°/0) in 9, 8 ccm Wasser, setzt 0, 2 ccm verflüssigtes Phenol zu, leitet die Kristallisation durch Impfen mit einigen Kristallen des gemäß Beispiel 1 erhaltenen hydratisierten Komplexes ein, läßt 24 Stunden bei gewöhnlicher Temperatur kristallisieren und saugt die Kristalle ab. Diese Kristalle des Hydrats werden in 10 ccm Wasser gelöst und zur Kristallisation des reinen Cyanocobalamins mit 100 ccm Dioxan versetzt. Man erhält 73 mg Vitamin B12 mit 12 °/0 Wasser (nach Codex Gehalt 99, 0 °/0), was einer Ausbeute von 97 entspricht. Example 2 Preparation of the hydrated complex vitamin B12-phenol from a vitamin Bl2 with a content of less than 95% and extraction of the pure vitamin B12 Dissolve 100 mg vitamin Bl2 (according to Codex 72% content; H20 9, 6 ° / 0) in 9.8 cc of water, adds 0.2 cc of liquefied phenol, initiates crystallization by inoculating some crystals of the hydrated one obtained in Example 1 Complex, leaves to crystallize for 24 hours at ordinary temperature and sucks the crystals off. These crystals of the hydrate are dissolved in 10 cc of water and 100 cc of dioxane are added to crystallize the pure cyanocobalamin. Man receives 73 mg of vitamin B12 with 12 ° / 0 water (according to Codex content 99.0 ° / 0), which is a Yield of 97 corresponds.

Beispiel 3 Bildung des hydratisierten Komplexes Vitamin B12-Orcin In 20 ccm einer wäßrigen Lösung von 200 mg Cyanocobalamin bringt man 800 mg Orcin ein und erwärmt bis zur Lösung ganz schwach. Man läßt über Nacht im Eisbad stehen, saugt ab und trocknet im Vakuum bei gewöhnlicher Temperatur. Die so erhaltenen Kristalle werden mit Äther gewaschen, um einen gegebenenfalls vorhandenen Überschuß an Orcin zu entfernen, und erneut im Vakuum bei gewöhnlicher Temperatur getrocknet. Die so erhaltenen dunkelroten Kristalle (271 mg) sind in Aceton und Äther unlöslich und in Alkohol löslich. Sie dissoziieren in Wasser unter Freisetzung von Vitamin Bl2. Sie enthalten 70, 1°/o Vitamin Bis. Beim Trocknen im Vakuum bei 60°C verlieren sie 9, 9% ihres Gewichts an Wasser. Das so getrocknete Produkt enthält 76 °/0 Vitamin B12, was darauf hinweist, daß es sich um eine Kombination von 4 Molekülen Orcin mit einem Molekül Vitamin B12 handelt. Example 3 Formation of the hydrated complex vitamin B12-orcin 800 mg of orcin are placed in 20 cc of an aqueous solution of 200 mg of cyanocobalamin one and warms up to the solution very weakly. It is left to stand in an ice bath overnight, sucks off and dries in a vacuum at ordinary temperature. The crystals thus obtained are washed with ether to remove any excess orcin to remove, and dried again in vacuo at ordinary temperature. The so obtained dark red crystals (271 mg) are insoluble in acetone and ether and soluble in alcohol. They dissociate in water, releasing vitamin Bl2. They contain 70.1 per cent of vitamin bis. They lose when they are dried in vacuo at 60 ° C 9.9% of their weight in water. The product dried in this way contains 76% vitamin B12, indicating that it is a combination of 4 molecules of orcin acts with a molecule of vitamin B12.

Analyse : Vitamin B12 Orcin (für das wasserfreie Produkt) Berechnet... C 59, H 6, 53, N10, 58, B12 73,19%; gefunden.. C 58, 8, H 6, 6, N 11, 1, B12 76 %.Analysis: Vitamin B12 Orcin (for the anhydrous product) Calculated ... C 59, H 6.53, N10.58, B12 73.19%; found .. C 58.8, H 6,6, N 11,1, B12 76 %.

Hydratation, berechnet nach dem Verlust : 11 H2O Diese Verbindung ist in der Literatur noch nicht beschrieben worden.Hydration calculated according to the loss: 11 H2O this compound has not yet been described in the literature.

Durch Lösen in 100 Teilen Wasser und Zugabe von 10 Volumina Dioxan oder Aceton gewinnt man das kristallisierte Vitamin B12 mit einem Gehalt von über 95 0/, und in praktisch quarititativer Ausbeute zurück. By dissolving in 100 parts of water and adding 10 volumes of dioxane or acetone, the crystallized vitamin B12 is obtained with a content of over 95 0 /, and back in practically equivalent yield.

Bespiel 4 Bildung des hydratisierten Komplexes Vitamin B12-Phloroglucin Man arbeitet, wie im Beispiel 3 beschrieben, verwendet jedoch für 20 ccm einer wäßrigen Lösung von 200 mg Vitamin B12 200 mg Phoroglucin. Man erhält so 113 mg dunkelrote Kristalle, die in Aceton und Äther unlöslich und in Alkohol löslich sind. Sie dissoziieren in Wasser unter Freisetzung von Vitamin Bl2 und enthalten 83% Vitamin 812. Beim Trocknen im Vakuum bei 60°C verlieren sie 8, 8% ihres Gewichts an Wasser. Das so getrocknete Produkt enthält 90 °/0 Vitamin Bl2, was darauf hinweist, daß es sich um eine Kombination von 2 Molekülen Phloroglucin und 1 Molekül Vitamin BI. mit einem Gehalt von 8 bis 9 H2O handelt. Example 4 Formation of the hydrated complex vitamin B12-phloroglucinol The procedure is as described in Example 3, but an aqueous one is used for 20 ccm Solution of 200 mg vitamin B12 200 mg phoroglucinol. 113 mg of dark red are obtained in this way Crystals that are insoluble in acetone and ether and soluble in alcohol. You dissociate in water with the release of vitamin Bl2 and contain 83% vitamin 812. Beim Drying in vacuo at 60 ° C, they lose 8.8% of their weight in water. That so dried product contains 90 ° / 0 vitamin Bl2, which indicates that it is a combination of 2 molecules of phloroglucinol and 1 molecule of vitamin BI. with a Content of 8 to 9 H2O acts.

Analyse : Vitamin B12 Phloroglucin (für das wasserfreie Produkt) Berechnet.. C 56, 03, H 6, 27, N12, 19, B1284,33% ; gefunden.. C 56, H 6, 2, N 11, 9, B12 90 °/0.Analysis: Vitamin B12 Phloroglucinol (for the anhydrous product) Calculated. C 56.03, H 6, 27, N12, 19, B1284.33%; found .. C 56, H 6,2, N 11,9, B12 90 ° / 0.

Diese Verbindung ist in der Literatur noch nicht beschrieben worden. This connection has not yet been described in the literature.

Beispiel 5 Bildung des hydratisierten Komplexes Vitamin B12-Hydrochinon Man arbeitet, wie im Beispiel 3 beschrieben, verwendet jedoch für 20ccm einer wäßrigen Lösung von 200 mg Vitamin B12 1 g Hydrochinon. Man erhält so 142 mg dunkelroter Kristalle, die in Aceton und Ather unlöslich und in Alkohol löslich sind und in Wasser unter Freisetzung von Vitamin Bl2 dissoziieren. Sie enthalten 72, 5% Vitamin B12. Beim Trocknen im Vakuum bei 60°C verlieren sie 7, 6°/o ihres Gewichts an Wasser. Das enthydratisierte Produkt enthält 78 °/0 Vitamin Bt2, was darauf hinweist, daß es sich um eine Kombination von 4Molekülen Hydrochinon und 1 Molekül Vitamin B12 handelt. Example 5 Formation of the hydrated complex vitamin B12 hydroquinone The procedure is as described in Example 3, but an aqueous one is used for 20ccm Solution of 200 mg of vitamin B12 1 g of hydroquinone. 142 mg of dark red color are obtained in this way Crystals insoluble in acetone and ether and soluble in alcohol and in Dissociate water releasing vitamin Bl2. They contain 72.5% vitamin B12. On drying in vacuo at 60 ° C., they lose 7.6% of their weight in water. The dehydrated product contains 78% vitamin Bt2, which indicates that it is a combination of 4 molecules of hydroquinone and 1 molecule of vitamin B12 acts.

Analyse : Vitamin B12 Hydrochinon Berechnet... C 58, 19, H 6, 28, N10, 92, B12 75,4% ; gefunden.. C 58, H 6,1, N 11, 2, B12 78 %.Analysis: Vitamin B12 Hydroquinone Calculated ... C 58, 19, H 6, 28, N10, 92, B12 75.4%; found .. C 58, H 6.1, N 11.2, B12 78%.

Dieses Produkt ist in der Literatur noch nicht beschrieben worden. This product has not yet been described in the literature.

Bei der Angabe der Formeln sowei der Analysenwerte wurde die neuerdings von Crowfoot Hodgkin und Mitarb. (Nature, 1956, 178, S. 65) für Vitamin2 aufgestellte Formel C63h88N14O14PCo zugrunde gelegt. When specifying the formulas and the analytical values, the by Crowfoot Hodgkin et al. (Nature, 1956, 178, p. 65) for Vitamin2 Formula C63h88N14O14PCo is used.

Beispiel 6 Zu 40 ccm einer wäßrigen Lösung von 585 y pro ccm reinem Cyanocobalamin fügt man 2 °/o Phenol hinzu und läßt 48 Stunden bei Raumtemperatur unter schwachem Animpfen mit einigen Kristallen des Komplexes stehen, worauf man den Niederschlag abtrennt, mit Aceton wäscht und trocknet. Man erhält 19 mg des kristallinen Komplexes, der, wie sich aus einer spectrophotometrischen Titrierung ergibt, 16, 3 mg reines Vitamin B12, d. h. 69 °/o, enthält. Die Mutterlaugen enthalten noch 180 y pro ccm, d. h. insgesamt 7, 2 mg B12 oder noch 30 °/0. Example 6 To 40 cc of an aqueous solution of 585 y per cc of pure 2% phenol is added to cyanocobalamin and the mixture is left at room temperature for 48 hours stand under weak inoculation with some crystals of the complex, upon which one the precipitate is separated off, washed with acetone and dried. 19 mg of des are obtained crystalline complex, as evidenced by a spectrophotometric titration yields 16.3 mg of pure vitamin B12, i.e. H. 69%. The mother liquors contain another 180 y per cc, d. H. a total of 7.2 mg B12 or another 30%.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the production of pure cyanocobalamin, characterized in that one aqueous solution of cyanocobalamin with a content of at least 0.50 / ,, cyanocobalamin with a phenol, in particular a mono-, di- or triphenol, stirred in an amount which is below the solubility limit of the phenol in question is in the vitamin Bl2 solution, and in the case of phenol (C6H5OH) 2 to 3% of the volume of the solution is the hydrated well-defined cyanocobalamin-phenol complex of the general formula C63H88N14O14PCo- (R) U- (H20) -in which n is 2 or 4, x is a number between 4 and 11 and R is a phenol, in particular a mono-, di- or triphenol, lets it crystallize, sucks it off, decomposed by dissolving in water and the cyanocobalamin by adding a water-miscible solvent such as dioxane or acetone, fails.

2. The method according to claim 1, characterized in that one is a Polyphenol, such as orcin, phloroglucinol or hydroquinone, is used.

Considered publications: Pharmazie, 10, pp. 102 to 103, 1955; Zeitschrift f. Naturforschung, 9b, pp. 755, 761, 1954.

Older patents considered: German Patent No. 1016 898.