DE102012022234A1

DE102012022234A1 - Einstufiges Verfahren zur Reinigung von (Blut)Plasmaproteinen wie Albumin aus Gemischen

Info

Publication number: DE102012022234A1
Application number: DE201210022234
Authority: DE
Inventors: Dr. Müller Dirk
Original assignee: Instraction GmbH
Current assignee: Instraction GmbH
Priority date: 2012-11-14
Filing date: 2012-11-14
Publication date: 2014-05-15
Also published as: WO2014076202A2; WO2014076202A3

Abstract

Die Erfindung betrifft ein einstufiges Verfahren zur Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins aus einer Mischung, die dieses (Blut)Plasmaprotein enthält, umfassend das Aufbringen des (Blut)Plasmaproteins auf ein Sorbenz, umfassend ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit Pyridin-4-carboxamidoresten und 3-Carboxamidopropionsäureresten funktionalisiert ist, und das Eluieren des (Blut)plasmaproteins von dem Sorbenz. Die vorliegende Erfindung stellt ein einfaches und kostengünstiges Verfahren zur Reinigung entsprechender (Blut)Plasmaproteine zur Verfügung, wobei sich das Verfahren durch den zusätzlichen Vorteil einer im Wesentlichen vollständigen Abtrennung von Faktor XI und Faktor XIa aus dem (Blut)Plasmaprotein auszeichnet.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein einstufiges Verfahren zur Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins aus einer Mischung, die dieses (Blut)Plasmaprotein enthält, unter Verwendung eines Sorbenz, dessen Oberfläche mit zwei Rezeptormolekülen funktionalisiert ist, wobei das Sorbenz im Wesentlichen die im Blutplasmaprotein enthaltenen Verunreinigungen absorbiert und nicht das (Blut)Plasmaprotein selbst. Mit diesem Verfahren ist es möglich, Verunreinigungen, wie insbesondere IgA, IgM und Faktor XIa sowie Faktor XI aus entsprechenden (Blut)Plasmaproteinmischungen abzutrennen.
Hintergrund der Erfindung
Der Faktor XI (auch als Rosentalfaktor oder Plasma Thromboplasmin Antecedent bezeichnet) ist ein an der Blutgerinnung beteiligtes Enzym in Form einer Serinproteinase. Dieses Enzym wird von der Leber produziert und liegt im Blutplasma in seiner inaktiven Form als Homodimer vor, in dem zwei Einheiten über eine Disulphitbrücke miteinander verbunden sind. Das Monomer besitzt eine Molekülmasse von 800 kDa. Der Faktor XI wird durch den aktivierten Hageman-Faktor (Faktor XIIa) oder durch Thrombin aktiviert und dann als Faktor XIa bezeichnet. Es gehört zum intrinsischen Pfad der Blutgerinnung, die in Aktion tritt, wenn der Hageman-Faktor und andere Bestandteile auf negativ geladenes Collagen unter dem Endothel der Gefäßwand trifft. Der Faktor XIa aktiviert in der Gerinnungskaskade den Christmas-Faktor (Faktor IX) zu Faktor IXa.
Ein erhöhtes Faktor XI-Niveau im Blut wird heute mit der Verursachung von Thrombosen in Verbindung gebracht. In der jüngeren Vergangenheit wurde daher bei Blutplasmaproteinpräparaten starker Wert darauf gelegt, dass die enthaltenen Präparate möglichst frei von Faktor XI oder Faktor XIa sind, damit sich bei Gabe entsprechender Blutpräparate an Patienten bei diesen das Thromboserisiko nicht erhöht.
Die Abtrennung bzw. Aufreinigung von Faktor XI oder XIa wurde beispielsweise bereits in der US 5,252,217 beschrieben, wobei der Faktor säulenchromatographisch mit Hilfe von ”Sulphat-Sepharose-Gelen” isoliert wurde. Problematisch an diesem Verfahren ist allerdings, dass diese Gele nur mit einer relativ geringen Beladung (d. h., einem geringen Verhältnis von zu reinigender Substanz zu Chromatographie Material) betrieben werden können. Damit sind diese Verfahren zur Abtrennung von Faktor XI und/oder XIa aus großen Mengen an (Blut)plasmaproteinen relativ zeitaufwändig und kostspielig.
In der WO 2005/049070 sind Verfahren zur Abtrennung von Faktor XI beschrieben, die auf Affinitätschromatographie beruhen. Dabei werden mit Faktor XI-Antikörpern modifizierte Säulenmaterialien oder mit Heparin, L-Arginin oder Benzamidin-modifizierte Materialien vorgeschlagen. Weitere Verfahren zur Abtrennung von Faktor IX basieren auf Ionenaustauschchromatographie, Größenausschlusschromatographie, elektrophoretischen Verfahren oder unterschiedlicher Löslichkeit der Faktoren in den Präparaten. Die WO 2005/0949070 beschreibt zudem ein sequentielles Chromatographieverfahren, umfassend eine Kationaustauschchromatographie, eine hydrophobe Wechselwirkungschromatographie und eine abschließenden Behandlung mit Hydroxylapatit, wobei sehr reiner Faktor XI erhalten werden soll.
In der EP 2 102 335 A2 ist schließlich für die Aufreinigung von Faktor XI ein hydrophobes Ladungsinduktionschromatographiematerial beschrieben, das u. a. einen Pyridinring aufweist. Dabei wird Faktor IX zunächst bei neutralem pH (wobei der Pyridinring ungeladen vorliegt) an das Chromatographiematerial gebunden. Nach Erhöhung des pHs auf etwa 4, was zur Protonierung des Pyridinrings führt, wird der Antikörper anschließend wieder freigesetzt.
Die beschriebenen Verfahren zielen jedoch allesamt auf die Reinigung von Faktor XI ab, und beschäftigen sich nicht mit der Abtrennung des Faktors aus (Blut)plasmaproteingemischen, bei denen eine möglichst reine (Blut)plasmaproteinfraktion erhalten werden soll. Demzufolge ist unklar ob diese Verfahren mit Ausgangsprodukten durchgeführt werden können, bei denen der Faktor XI nur in gegenüber den übrigen Proteinen geringen Anteilen vorhanden ist.
Ein weiteres in (Blut)Plasmaproteinpräparaten unerwünschtes Nebenprodukt ist das Immunoglobulin A, welches Allergien in Patienten verursachen kann.
Es besteht daher ein Bedarf an einem möglichst einfachen und kostengünstigen Reinigungsverfahren, mit dessen Hilfe es möglich ist, (Blut)Plasmaproteine von Verunreinigungen, wie insbesondere Immunoglobulin A und M, sowie Faktor XI und Faktor XIa zu reinigen. Die vorliegende Erfindung löst diese Probleme.
Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft ein einstufiges Verfahren zur Reinigung eines (Blut)Plasmaproteins aus einer Mischung, die dieses (Blut)Plasmaprotein enthält, umfassend das Aufbringen des (Blut)Plasmaproteins auf ein Sorbenz, umfassend ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit Pyridin-4-carboxamido-Resten und 3-Carboxamidopropionsäure-Resten funktionalisiert ist, und das Eluieren des (Blut)Plasmaproteins von dem Sorbenz.
Wenn im Vorstehenden von einem einstufigen Verfahren die Rede ist, bezieht sich die Bezeichnung ”einstufig” nur auf die Schritte zur Behandlung des (Blut)Plasmaproteins an sich, d. h., das Verfahren kann dennoch weitere Schritte oder Stufen umfassen, die sich mit der Vor- oder Nachbehandlung des Sorbenzes befassen. Das einstufige Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung umfasst jedoch nicht mehr als einen Behandlungsschritt für das (Blut)Plasmaprotein.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist vorzugsweise vorteilhaft ausgestaltet, indem das Sorbenz das zu reinigende (Blut)Plasmaprotein im Wesentlichen nicht bindet oder absorbiert. Das heißt, dass sich nach dem Auftragen oder Aufbringen des (Blut)Plasmaproteins auf das Sorbens das zu reinigende Blutplasmaprotein im Wesentlichen mit der Fließmittelfront durch das Sorbenz bewegt, und mit dieser von der Säule zurückgewonnen werden kann. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es demzufolge bevorzugt, wenn das (Blut)Plasmaprotein nach Zugabe der fünffachen Menge, vorzugsweise der dreifachen Menge, und besonders bevorzugt der zweifachen Menge an Fließmittel, bezogen auf das Sorbenzvolumen, auf das Sorbenz im Wesentlichen vollständig, d. h., zu mindestens 80%, vorzugsweise mindestens 90% und besonders bevorzugt mindestens 93% von dem Sorbenz zurückgewonnen werden kann.
Für das Verfahren ist es zweckmäßig, wenn das (Blut)Plasmaprotein für das Aufbringen auf das Sorbenz in einem Puffer gelöst wird. Der Puffer sollte vorzugsweise einen pH-Wert im Bereich von 4 bis 6,5 aufweisen, wobei als Puffer sämtliche Puffer mit einem pKa-Wert in diesem Bereich in Frage kommen. Als Puffer kann vorzugsweise ein Kohlensäure-Silikat-Puffer, Essigsäurepuffer, Citratpuffer, Phosphatpuffer und/oder 2-(N-Morpholino)ethansulphonsäure(MES)-Puffer ausgewählt werden. Ein im Rahmen der Erfindung besonders bevorzugter Puffer ist ein Citratpuffer.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es weiterhin bevorzugt, wenn das Sorbenz so lange mit dem Puffer gespült wird, bis das zu reinigende (Blut)Plasmaprotein im Wesentlichen vollständig (d. h., vorzugsweise zu mindestens 80%, besonders bevorzugt zu mindestens 90%, noch mehr bevorzugt zu mindestens 93%, und am meisten bevorzugt zu mindestens 95%) vom Sorbenz eluiert ist.
Hinsichtlich des Verhältnisses des aufzureinigenden (Blut)Plasmaproteins in der Mischung zum Volumen des Sorbenz ergeben sich keine besonderen Beschränkungen. Es hat sich jedoch gezeigt, dass entsprechende Blutplasmaproteine auch bei hohen Verhältnissen von Blutplasmaprotein zu Sorbensvolumen eine ausgezeichnete Reinigungsleistung aufweisen. So ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung bevorzugt, wenn das Blutplasmaprotein in einer Menge von ≥ 25 mg/ml Sorbenzvolumen, bevorzugt ≥ 50 mg/ml Sorbenzvolumen auf das Sorbenz aufgetragen wird. Besonders bevorzugt ist es, wenn das (Blut)Plasmaprotein in einer Menge im Bereich von 120 bis 250 mg/ml Sorbensvolumen aufgetragen wird. Bei diesen Verhältnissen ergibt sich eine sehr gute Reinigungs- und Trennleistung des Materials bei gleichzeitig sehr hoher Auftragsmenge des zu reinigenden Produkts, wodurch sich der Durchsatz und damit die Kosten des Verfahrens signifikant reduzieren lassen.
Bei dem zu reinigenden (Blut)Plasmaprotein handelt es sich zweckmäßig um ein (Blut)Plasmaprotein, das durch das Sorbenz im Wesentlichen nicht absorbiert wird. Bevorzugt handelt es sich bei dem (Blut)Plasmaprotein um Albumin, vorzugsweise menschliches Albumin. Bei Albumin konnte zudem beobachtet werden, dass sich im Gegensatz zu kommerziell erhältlichen Ionentauschern, Immunoglobulin X Verunreinigungen (d. h. insbesondere IgG, IgA, IgE und IgM) und Faktoren (XI und XIa) in einem chromatographischen Schritt von Albumin im Wesentlichen vollständig (d. h. zu mehr als 98 Gew.-%) abtrennen lassen. Vorzugsweise sollte das aufzureinigende Albumin kein Transferrin oder nur geringe Mengen davon, d. h. weniger als 10 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht des Gemischs, enthalten.
Als (Blut)Plasmaproteinmischung können ebenfalls vorgereinigte (Blut)Plasmaproteinmischungen, besonders bevorzugt vorgereinigten Albuminmischungen, eingesetzt werden, in denen das Albumin vorzugsweise mindestens 80 Gew.-%, besonders bevorzugt mindestens 85 Gew.-%, noch mehr bevorzugt mindestens 90 Gew.-%, und am meisten bevorzugt 92 bis 98 Gew.-% des (Blut)Plasmaproteingemisches, jeweils bezogen auf das Trockengewicht des Gemischs, ausmacht. Eine im Rahmen der vorliegenden Erfindung besonders bevorzugte (Blut)Plasmaproteinmischung ist eine vorgereinigte Albuminlösung mit einem Albumingehalt (bezogen auf das Trockengewicht der Albuminmischung) von 92 bis 98 Gew.-%.
Bei dem im vorstehend beschriebenen Verfahren verwendeten Sorbenz handelt es sich um ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit mindestens zwei Rezeptormolekülen funktionalisiert ist. Besonders bevorzugt besteht das Trägermaterial aus einem porösen Grundmaterial, das zur Einlagerung und Vernetzung einer Polyaminverbindung zunächst mit dieser Aminverbidung in mindestens einer Lage überzogen wird und anschließend unter Anknüpfung von funktionalisierten Rezeptormolekülen unter Ausbildung kovalenter Bindungen zwischen den Rezeptormolekülen und dem Polyamin funktionalisiert wird. Bei dem porösen Grundmaterial handelt es sich zweckmäßig um ein poröses Polystrol. Als Polyaminverbindung hat sich die Verwendung von Polyvinylamin als besonders zweckmäßig erwiesen. Das Trägermaterial wird durch die Zugabe eines Vernetzungsmittels, beispielsweise einem Diepoxid, vernetzt. Die Herstellung des Trägermaterials kann durch Beschichtung des porösen Grundmaterials mit einer Schicht einer Polyaminverbindung erfolgen, es ist jedoch auch möglich, das Grundmaterial mit zwei oder mehreren Schichten zu überziehen. Vor dem Aufbringen der jeweils weiteren Schicht erfolgt zweckmäßig eine Vernetzung der aufgebrachten Polyaminverbindung, beispielsweise mit einem Vernetzungsmittel, wie vorstehend beschrieben.
Die Herstellung von Trägermaterialien die mit Polyvinylamin überzogen sind, ist bereits im Stand der Technik, zum Beispiel in EP 1 141 038 und EP 1 232 018 beschrieben worden.
Anschließend wird das so erhaltene mit Polyamin beschichtete Sorbenz mit zwei organischen Resten funktionalisiert. Dabei hat sich insbesondere die Verwendung von Säure-funktionalisierten Rezeptormolekülen oder Derivaten davon, bei denen nach Umsetzung mit dem Polyvinylamin Amid-Verknüpfungen ausgebildet werden, als besonders zweckmäßig erwiesen.
Es ist möglich, die im Sorbenz vorhandenen Amingruppen vollständig mit organischen Resten zu funktionalisieren. In der Praxis der vorliegenden Erfindung ist es aber erwünscht, dass nur etwa 15 bis 98% der freien Amingruppen des Polyamins mit Rezeptormolekülen umgesetzt werden.
Für das Sorbenz hat es sich gezeigt, dass zum einen Rezeptormoleküle mit einem Pyridinring (-C₅H₄N) deren Wasserstoffatome substituiert sein können und Carboxylgruppen (-COOH) zu besonders selektiven Sorbenzien führen. Dabei können sowohl der Pyridinring als auch die Carboxylgruppe über einen kovalent gebundenen Linker mit dem Polyaminmaterial verbunden sein. Falls ein Linker vorhanden ist, ist dieser vorzugsweise konformationell flexibel, damit sich das Rezeptormolekül in die für die Bindung des Peptids oder Proteins günstigste Position drehen kann.
Für die Verknüpfung der Rezeptormoleküle mit dem festen Trägermaterial kommen alle bekannten Verfahren zur Verknüpfung von Aminen mit anderen funktionellen Gruppen in Betracht, insbesondere Verfahren zur Bildung von Amidbindungen, Sulfonamidbindungen oder die Umsetzung der Amine mit Aldehyden unter reduktiven Bedingungen. Wird eine Säurefunktionalität zur Verknüpfung mit den Aminresten des Trägermaterials verwendet, wird nach der Umsetzung in der Regel eine Amidfunktionalität erhalten mit der das Rezeptormolekül an das Trägermaterial gebunden ist. Zur Bildung solcher Amidverknüpfungen kommen alle im Stand der Technik beschriebenen Reaktionsarten in Betracht, die dem Fachmann geläufig sind.
Auch die Bindung von Rezeptormolekülen an Trägermaterialien wie sie vorstehend beschrieben sind, wurde bereits im Stand der Technik, insbesondere in WO 2004/085046 , beschrieben.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung kann es zweckmäßig sein, das Sorbenz vor dem Aufbringen des (Blut)Plasmaproteins auf das Sorbenz mit einer weiteren Flüssigkeit zu equilibrieren. Dazu wird vorzugsweise eine Flüssigkeit verwendet, die eine Lösung mit dem pH-Bereich von 4 bis 6,5, vorzugsweise ein Puffer mit einem pH im Bereich von 4 bis 6,5 ist. Für das Equilibrieren hat es sich als zweckmäßig herausgestellt, wenn der Puffer eine Konzentration im Bereich von 2 bis 350 mM und vorzugsweise 5 bis 15 mM aufweist. Weiterhin ist es zweckmäßig, einen Puffer auf demselben Säure/Salzsystem zu wählen, wie er für das anschließende Aufbringen des (Blut)Plasmaproteins auf das Sorbenz verwendet wird. Nach dem Equilibrieren ist es möglich, das Sorbenz vor dem Aufbringen der Mischung des (Blut)Plasmaproteins noch mit derselben Flüssigkeit zu spülen.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist es weiterhin möglich, wenn nach dem Isolieren des zu reinigenden (Blut)Plasmaproteins das Sorbenz nachgeschalteten Waschschritten unterzogen wird. Schließlich ist es möglich, das Sorbenz nach Abschluss des Waschens mit einer stark basischen Lösung zu regenerieren und von den auf dem Sorbenz verbleibenden (Blut)Plasmaproteinresten zu reinigen. Dabei beträgt der pH-Wert der stark basischen Lösung vorteilhaft mindestens 10, besonders bevorzugt wird ein pH-Wert von etwa 14 verwendet. Als Base kann jede kommerziell erhältliche Base verwendet werden, aus Kostengründen empfiehlt es sich aber, Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid zu verwenden. Vor der Regenerierung kann das Sorbenz weiterhin noch mit einer Säurelösung gespült werden, wobei diese insbesondere eine Konzentration im Bereich von 250 bis 1500 mM aufweisen kann.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft die Verwendung eines wie vorstehend beschriebenen Verfahrens zur Abtrennung von einem oder mehreren, ausgewählt aus IgA, IgM, Faktor XI und Faktor XIa, von einem (Blut)Plasmaprotein. Bei diesem Plasmaprotein handelt es sich vorzugsweise ebenfalls um Albumin, insbesondere um menschliches Albumin.
Schließlich betrifft ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung die Verwendung eines Sorbenzes, umfassend ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit Pyridin-4-carboxamidoresten und 3-Carboxamidopropionsäureresten funktionalisiert ist, zur Abtrennung von einem oder mehreren, ausgewählt aus IgA, IgM, Faktor XI und Faktor XIa, aus (Blut)Plasmaproteinen, bevorzugt aus Albumin und besonders bevorzugt aus menschlichem Albumin. Bezüglich von bevorzugten Ausführungsformen sind die vorstehenden Ausführungen zum Verfahren entsprechend auf die Verwendung übertragbar.
Wird im Rahmen der vorliegenden Erfindung Albumin, das Verunreinigungen aus Immunoglobulin G und Immunoglobulin M enthält, gereinigt, so ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung ebenfalls möglich, diese Nebenbestandteile in hoher Reinheit von dem verwendeten Sorbenz zu isolieren. Nach der Abtrennung des Albumins kann beispielsweise das Immunoglobulin G zweckmäßig mit einem Puffer eines pH-Werts im Bereich von 6 bis 8, vorzugsweise 7 bis 7,8 isoliert werden. Die Konzentration des Puffers sollte in diesem Fall vorzugsweise im Bereich von 50 bis 250 mM, besonders bevorzugt im Bereich von 80 bis 150 mM liegen. Ein besonders bevorzugter Puffer für die Isolierung von Immunoglobulin G ist ein Phosphatpuffer. Nach Isolation von Immunoglobulin G oder falls dieses in der Mischung nicht enthalten ist, kann in der Mischung enthaltenes Immunoglobulin M zweckmäßig durch Elution mit einem Puffer mit einem pH-Wert im Bereich von 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4 vom Sorbenz isoliert werden. Dieser Puffer weist vorzugsweise eine Konzentration im Bereich von 50 bis 1000 mM und besonders bevorzugt im Bereich von 80 bis 150 mM auf. Ein für die Elution von Immunoglobulin M besonders geeigneter Puffer ist ein Acetatpuffer.
Mit dem vorstehend beschriebenen Verfahren lassen sich (Blut)Plasmaproteine, insbesondere Albumin, in einem einzigen Schritt schnell und kostengünstig reinigen. Darüber hinaus ist es mit dem beschriebenen Verfahren möglich, unerwünschte Nebenbestandteile, wie IgA, IgM, Faktor XI und Faktor XIa, aus (Blut)Plasmaproteinmischungen zu entfernen.
Das folgende Beispiel dient der Illustration der beschriebenen Erfindung und soll deren Umfang nicht in irgendeiner Weise beschränken.
Beispiel 1
Ein mit Pyridin-4-carboxamidoresten und 3-Carboxamidopropionsäureresten funktionalisiertes Sorbenz wird mit 10 mM-Citratpuffer (pH 5) equilibriert. Anschließend wird eine Mischung aus 40 g/l Albumin mit 1 g/l IgG, 1,4 g/l IgA und 0,4 g/l IgM gelöst in 10 mM Citratpuffer bei pH 5 auf das Sorbenz aufgebracht. Die Beladung des Sorbenzes betrug etwa 50 mg/ml. Das Albumin wurde in einer Ausbeute von > 93% isoliert, wobei die Verunreinigung an IgA in diesem Produkt < 25 mg/l, die von IgM < 5 mg/l und die von IgG < 1 mg/l betrugen. Die anschließende Elution von Immunoglobulin G vom Sorbenz mit einem 100 mM Phosphatpuffer (pH 7,4) lieferte Immunoglobulin G in einer Ausbeute > 95%, wobei die Menge an Verunreinigung von Albumin < 1 mg/l betrugen.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG
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Zitierte Patentliteratur

US 5252217 [0004]
WO 2005/049070 [0005]
WO 2005/0949070 [0005]
EP 2102335 A2 [0006]
EP 1141038 [0019]
EP 1232018 [0019]
WO 2004/085046 [0024]

Claims

Einstufiges Verfahren zur Reinigung eines (Blut)plasmaproteins aus einer Mischung, die dieses (Blut)plasmaprotein enthält, umfassend das Aufbringen des (Blut)plasmaproteins auf ein Sorbenz, umfassend ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit Pyridin-4-carboxamido-Resten und 3-Carboxamidopropionsäure-Resten funktionalisiert ist und das Eluieren des (Blut)plasmaprotein von dem Sorbenz.
Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Sorbenz das zu reinigende (Blut)plasmaprotein im Wesentlichen nicht absorbiert.
Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das (Blut)plasmaprotein für das Aufbringen auf das Sorbenz in einem Puffer, vorzugsweise mit einem pH im Bereich von 4 bis 6,5, und besonders bevorzugt in Citratpuffer, gelöst wird.
Verfahren gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Sorbenz so lange mit dem Puffer gespült wird, bis das zu reinigende (Blut)plasmaprotein im Wesentlichen vollständig von Sorbenz eluiert ist.
Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das (Blut)plasmaprotein in einer Menge von ≥ 50 mg/ml Sorbenzvolumen, vorzugsweise in einer Menge im Bereich von 120 bis 250 mg/ml Sorbenzvolumen, auf das Sorbenz aufgetragen wird.
Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das es sich bei dem (Blut)plasmaprotein um Albumin, vorzugsweise um menschliches Albumin, handelt.
Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Sorbenz vor dem Aufbringen des (Blut)plasmaproteins auf das Sorbenz mit einer weiteren Flüssigkeit equilibriert wird.
Verfahren gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die zum Equilibrieren verwendete Flüssigkeit eine Lösung mit einem pH im Bereich von 4 bis 6,5, vorzugsweise ein Puffer, ist.
Verfahren gemäß Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Lösung ein Citrat-Puffer mit einer Konzentration im Bereich von 2 bis 20 mM, vorzugsweise 5 bis 15 mM ist.
Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Sorbenz durch Spülen mit einer Lösung, die einen pH von mindestens 10, vorzugsweise im Bereich von etwa 14, aufweist, regeneriert wird.
Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass als festes Trägermaterial ein Material verwendet wird, das auf einem porösen Grundmaterial, vorzugsweise aus Polystyrol, beruht, welches mit einem Polymer, vorzugsweise einem Polyaminpolymer, in mindestens einer Lage überzogen, vernetzt und anschließend funktionalisiert wurde.
Verwendung eines Verfahrens gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11 zur Abtrennung von einem oder mehreren, ausgewählt aus IgA, IgM, Faktor XI und Faktor XIa, von einem (Blut)plasmaprotein.
Verwendung eines Sorbenz umfassend ein festes Trägermaterial, dessen Oberfläche mit Pyridin-4-carboxamido-Resten und 3-Carboxamidopropionsäure-Resten funktionalisiert ist, zur Abtrennung von einem oder mehreren, ausgewählt aus IgA, IgM, Faktor XI und Faktor XIa, aus (Blut)plasmaproteinen, bevorzugt aus Albumin.