[go: up one dir, main page]

CZ309967B6 - Léčivý přípravek ve formě zubního gelu - Google Patents

Léčivý přípravek ve formě zubního gelu Download PDF

Info

Publication number
CZ309967B6
CZ309967B6 CZ2021-369A CZ2021369A CZ309967B6 CZ 309967 B6 CZ309967 B6 CZ 309967B6 CZ 2021369 A CZ2021369 A CZ 2021369A CZ 309967 B6 CZ309967 B6 CZ 309967B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
cannabidiol
weight
cbd
preparation
squalane
Prior art date
Application number
CZ2021-369A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2021369A3 (cs
Inventor
Jan STORCH
Storch Jan Ing., Ph.D.
Jan VACEK
Vacek Jan prof. Ing., Ph.D.
Lenka Průšová
Lenka Ing. Průšová
Original Assignee
Cb21 Pharma, S.R.O.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cb21 Pharma, S.R.O. filed Critical Cb21 Pharma, S.R.O.
Priority to CZ2021-369A priority Critical patent/CZ309967B6/cs
Priority to US18/580,273 priority patent/US20250082653A1/en
Priority to CA3222474A priority patent/CA3222474A1/en
Priority to AU2022325388A priority patent/AU2022325388B2/en
Priority to PCT/CZ2022/050057 priority patent/WO2023016589A1/en
Priority to EP22741689.8A priority patent/EP4380550A1/en
Publication of CZ2021369A3 publication Critical patent/CZ2021369A3/cs
Publication of CZ309967B6 publication Critical patent/CZ309967B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/658—Medicinal preparations containing organic active ingredients o-phenolic cannabinoids, e.g. cannabidiol, cannabigerolic acid, cannabichromene or tetrahydrocannabinol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/01—Hydrocarbons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/0063—Periodont
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Předkládané řešení poskytuje léčivý přípravek pro dentální použití, který obsahuje účinnou složku kanabidiol a rozpouštědlo skvalan, přičemž přípravek je ve formě zubního gelu. Přípravek může dále obsahovat účinnou složku kyselinu hyaluronovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl. Přípravek je určen pro léčbu a/nebo prevenci chronického zánětu gingivy a/nebo parodontitidy.

Description

Léčivý přípravek ve formě zubního gelu
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká léčivého přípravku ve formě zubního gelu, vhodného zejména pro podpůrnou terapii hojení chronického zánětu gingivy a parodontu.
Dosavadní stav techniky
Zvýšená tvorba zubního plaku a jeho kalcifikace vede k tvorbě supra/sub-gingiválního zubního kamene. Akumulací zubního kamene dochází k narušení dentogingiválního uzávěru, což je příčinou nebakteriálního zánětu gingivy (gingivitidy). U jedince s oslabenou imunitní ochranou, vrozenou genovou dispozicí, psychickými problémy nebo špatně prováděnou ústní hygienou dochází k narušení orální ekologie a změnám ve složení ústní mikroflóry a osídlení gingivy parodontopatogenními anaerobními bakteriemi Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis, Pravotela intermedia, Tannerella forsythia a Treponema denticola a fakultativně anaerobními bakteriemi Streptococcus oralis, S. mitis, S. sanguis a S. mutans. Virulentní a prozánětlivé faktory těchto bakterií aktivují makrofágy a neutrofily/leukocyty, klíčové buňky imunitního systému tkáně dutiny ústní, k masivní produkci prozánětlivých cytokinů a chemokinů (Pandit N, Changela R, Bali D, Tikoo P, Gugnani S. Porphyromonas gingivalis: Its virulence and vaccine. J Int Clin Dent Res Organ 2015;7:51-8). Zánětlivý proces, vyvolaný periopatogeny, ničí jak tyto bakterie, tak působí destrukci tkáně parodontu, zejména fibroblastů parodontálních ligament, cementoblastů dentinu a osteoblastů alveolární kosti. Toto stadium zánětu a onemocnění gingivy je klasifikováno jako akutní nebo chronická parodontitida (Kinane DF, Mobelli A. Periodontal disease. Frontiers of oral biology Vol. 15. S. Karger AG, Basel 2012, ISBM 978-3-8055-9833-0).
Gingivitida resp. parodontitida je zdravotním problémem, který se týká 20 až 50 % světové populace (Nazir MA. Prevalence of periodontal disease, its association with systemic diseases and prevention. Int J Health Sciences 2016;1:1-9). Přípravky ústní hygieny (zubní pasty, gely a ústní vody) by měly obsahovat syntetické nebo přírodní látky s účinky na zpomalení tvorby bakteriálního biofilmu a následnou kalcifikaci zubního plaku, mít protizánětlivý a hojivý účinek na gingivu, bakteriostatický nebo baktericidní účinek na patogenní bakterie s malým vlivem na komenzální bakterie ústní mikroflóry. Použití takových přípravků v denně prováděné ústní hygieně může významně snížit riziko nebo průběh onemocnění parodontu (závěsného aparátu zubu, dentinu a kosti zubního lůžka) (Pihstrom BL, Michalowicz BS, Johnson NW. Periodontal diseases. Lancet 2005;366:1809-1820).
K chemoprofylaxi dutiny ústní jsou v kosmetických/zdravotních přípravcích aktivními komponentami anorganické soli jako např. fluorid sodný, chlorid/síran zinečnatý, fluorid cínatý nebo laktát hlinitý. Ze syntetických organických sloučenin to jsou aminfluorid, cetylpyridinium chlorid, hexetidin a problematický triklosan. Nejčastěji zastoupeným chemoprofylaktikem v přípravcích ústní hygieny, používaným jak pacienty, tak zubními lékaři, je chlorhexidin a jeho soli chlorhexidin glukonát nebo diglukonát (Shapiro S, Guggenheim B, Chemoprophylaxis in the oral cavity: „plus on change les choses, plus elles devraient rester les memes“ v Oral Biology at the Turn of the Centure. (Edits. Guggenheim B, Shapiro S) S. Karger AG. Str. 226-238. Zurich 1998). Chlorhexidin patří k silným („hard“) chemoprofylaktikům, která působí proti širokému spektru gram-pozitivních a gram-negativních bakterií, kvasinkám, některým plísním a virům. Jeho aplikace ve formě gelu (1%) může být doprovázena řadou nežádoucích účinků, jako jsou zvýšená tvorba zubního kamene, hyperkeratóza chuťových buněk jazyka, deskvamace epidermis ústní sliznice a zbarvení zubní skloviny (James P, Worthington HV, Parnell C, Harding M, Lamont T, Cheung A, Whelton H, Riley P. Chlorhexidine mouthrinse as an adjunctive treatment
- 1 CZ 309967 B6 for gingival health. Cochrane Database of Systematic Reviews 2017, Issue 3. Art. No.: CD008676. DOI: 10.1002/14651858.CD008676.pub2.).
Častou složkou v prostředcích ústní hygieny jsou komplexní extrakty léčivých rostlin nebo jednotlivá fytoceutika s protizánětlivými účinky, antimikrobiálními účinky vůči gram-pozitivním a/nebo gram-negativním bakteriím a antiadherenčním účinkem na tvorbu bakteriálního biofilmu na sliznici a pevných strukturách v dutině ústní (Groppo FC, Bregamaschi CdeCC, Cogo K, Franz-Montan M, Motta RH, de Andrade ED. Use of phytotherapy in dentistry. Phytother Res. 2008;22:993-998.; Petti S, Scully C. Polyphenols, oral health and diseases: A review. J Dentistry 2009;37“413-423; Hirasawa M, Takada K, Otake S. Inhibition of acid production in dental plaque bakteria by the green tea catechins. Carries Res. 2006;40:265-270; Feghali K, Feldman M, Vu Dang La, Santos J, Grenier D. Cranberry proanthocyanidins: Natural Weapons against periodontal diseases. J Agric Food Chem 2012; 60: 5728-35.).
Fytoceutikem, o kterém je dosud málo klinických údajů o jeho účinku na gingivu a parodont je kanabidiol (CBD), nepsychotropní majoritní sloučenina komplexního extraktu rostlin rodu Cannabis. CBD je agonista CB2 receptoru endokanabinoidního systému, který po aktivaci tlumí tvorbu prozánětlivých cyto- a chemokinů, makrofágů a neutrofilů/leukocytů slizničního imunitního systému (Gu Z, Singh S, Niyogi RG, Lamont GJ, Wang H, Lamont RJ, Scott DA. Marijuana-Derived Cannabinoids Trigger a CB2/PI3K Axis of Suppression of the Innate Response to Oral Pathogens, Front Immunol 2019; 10: Article 2288). Protizánětlivé působení CBD na měkké tkáně modulací imunitní odpovědi může být prospěšné pro pacienty po stomatochirurgickém zásahu nebo u pacientů s parodontologickými problémy či na snížení resorpce alveolární kostní tkáně. V nedávné době bylo prokázáno, že CBD snižuje u P. gingivalis tvorbu membránových váčků, inhibuje komunikaci mezi bakteriemi a tím tvorbu biofilmu s komenzálními bakteriemi hostitele (Kosgodage US, Matewele P, Awamaria B, Kraev I, Warde P, Mastroianni G, Nunn AV, Guy GW, Bell JD, Inal JM, Lange S. Cannabidiol Is a Novel Modulator of Bacterial Membrane Vesicles. Front Cell Infect Microbiol 2019; 9: Article 324).
Na druhou stranu bylo nedávno pozorováno, že zdravotním problémem pro měkké tkáně parodontu je užívání konopí a konopných přípravků, které obsahují CBD, nebo jeho kombinaci s \9-THC. Je prokázáno, že CBD způsobuje edém gingivy, stomatitidy a uvulitidu (a. Rawal SY, Tatakis DN, Tipton DA. Periodontal and oral manifestations of marijuana use. J Tenn Dent Assoc 2012;92:26-31, b. Park JB, Jung KM, Piomelli D, J. Periodontal Implant. Sci. 2020, 50, 355). CBD je také toxický pro některé bakterie v dutině ústní, čímž dochází k narušení orální ekologie a změnám ve složení ústní mikroflóry a osídlení gingivy parodontopatogenními anaerobními bakteriemi a fakultativně anaerobními bakteriemi. Protizánětlivý efekt CBD dále utlumí imunitní odpověď organizmu proti těmto patogenům. Následkem toho dochází k neřízenému rozvoji zánětlivého procesu, či progresi již existujícího.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu je léčivý přípravek pro dentální použití, který obsahuje účinnou složku sestávající z kanabidiolu (CBD) a pomocné látky skvalanu. Skvalan má v přípravku nezastupitelnou roli, která se projevuje v efektivním prostupu CBD skrz sliznici/pokožku, čímž je umožněno jeho vstřebávání do gingiválních fibroblastů. Tímto mechanismem je snížena jeho koncentrace na povrchu dásně a výsledkem je významná redukce negativních účinků kanabidiolu na složení ústní mikroflóry. Tento přípravek je s výhodou ve formě zubního gelu.
Ve výhodném provedení je součástí účinné složky také kyselina hyaluronová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl. Funkcí kyseliny hyaluronové je snižovat cytotoxicitu kanabidiolu. Tím lze navýšit jeho koncentraci ve finálním preparátu až o dva řády, v porovnání s IC50 hodnotami pro lidské gingivální fibroblasty.
- 2 CZ 309967 B6
Léčivý přípravek podle předkládaného vynálezu je vhodný pro uživatele/pacienty s chronickým zánětem gingivy nebo parodontitidou způsobenou sníženou imunitní ochranou organismu, vrozenou dispozicí a/nebo špatným životním stylem (dietou, alkoholem, kouřením, stresem). Příznivý farmakologický účinek gelu je kombinací účinků CBD a pomocné látky skvalanu, a s výhodou i kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, a projevuje se ve zpomalení tvorby plaku, krvácivosti gingivy, hojení parodontálních chobotů a snížení (modulaci) počtu přítomných druhů parodontopatogenních bakterií subgingivální mikroflóry. V měkkých a tvrdých tkáních dutiny ústní má účinná složka regulační funkci v zánětlivé odpovědi organismu vyvolané mechanicky nebo parodontopatogenními bakteriemi.
Přípravek nevykazuje žádné nežádoucí vedlejší účinky a je vhodný k dlouhodobé domácí chemoprofylaktické terapii doplňující odborná ošetření parodontologem. Vzhledem k přítomnosti velmi nízkého obsahu chlorhexidinu či jeho derivátů, pouze pro účely konzervace, nevykazuje přípravek nežádoucí účinky, které jsou s touto látkou spojené. Chlorohexidin a jeho deriváty jsou schváleny jako konzervační látky v kosmetických přípravcích do zastoupení 0,3 % hmotn. Výsledkem komplexního účinku jedné nebo obou aktivních komponent a skvalanu je významné zlepšení průběhu/oddálení návratu zánětu gingivy a parodontu.
S výhodou jsou kanabidiol a kyselina hyaluronová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl přítomny v hmotnostním poměru 20:1 až 1:1, výhodněji 20:1 až 5:1, ještě výhodněji 15:1 až 8:1.
Léčivý přípravek podle vynálezu obsahuje 0,1 až 5 % hmotn. kanabidiolu, výhodněji 0,5 až 2 % hmotn. kanabidiolu, a popřípadě do 0,3 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu.
Léčivý přípravek podle vynálezu může ve výhodném provedení obsahovat 0,1 až 5 % hmotn. kanabidiolu, 0,01 až 2 % hmotn. kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, a popřípadě do 0,3 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu.
Výhodněji může léčivý přípravek obsahovat 0,5 až 2 % hmotn. kanabidiolu, 0,05 až 1 % hmotn. kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
Kyselina hyaluronová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl má s výhodou nízkou až střední molekulovou hmotnost v rozmezí 200 až 1800 kDa.
Farmaceuticky přijatelnými solemi kyseliny hyaluronové jsou typicky sodná sůl a draselná sůl. Pro dentální gel je preferováno použití sodné soli kyseliny hyaluronové.
Dentální gel podle předkládaného vynálezu dále obsahuje alespoň jednu pomocnou látku. Pomocné látky zahrnují zejména gelující látky, rozpouštědla, vodu, stabilizátory a ochucovadla.
Gelující látkou může být například glycerin, polyethylen glykol, polymery na bázi akrylové kyseliny (carbomery), a směsi těchto gelujících látek.
Rozpouštědlem pro kanabidiol je skvalan. Skvalan je hydratující lipofilní látka, která dále napomáhá hojení a zklidnění dásní. Zároveň je skvalan vhodné rozpouštědlo pro kanabidiol a je vhodný pro jeho homogenizaci se zbytkem složek gelu. Skvalan dále snižuje jeho koncentraci na povrchu dásně. Hmotnostní poměr skvalanu ke kanabidiolu je v rozmezí 2:1 až 20:1, výhodněji do 10:1 nebo 3:1 až 5:1.
Léčivý přípravek podle vynálezu může obsahovat 0,1 až 5 % hmotn. kanabidiolu, 0,01 až 2 % hmotn. kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, 1 až 10 % hmotn. skvalanu, 5 až 40 % hmotnostních gelujících látek, a vodu v množství do 100 % hmotn.
- 3 CZ 309967 B6
Přípravek může dále obsahovat do 0,3 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu, s výhodou do 0,1 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu.
Výhodněji může léčivý přípravek obsahovat 0,5 až 2 % hmotn. kanabidiolu, 0,05 až 1 % hmotn. kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, 3 až 8 % hmotn. skvalanu, 5 až 20 % hmotnostních gelujících látek, a vodu v množství do 100 % hmotn.
Objasnění výkresů
Obr. 1. Cytotoxicita CBD vyjádřená jako procenta kontroly stanovená metodou MTT na modelu lidských gingiválních fibroblastů (n = 6) -příklad 2.
Obr. 2. Produkce IL-6 po 6/24 hodinové aplikaci CBD na lidských gingiválních fibroblastech příklad 2.
Obr. 3. Produkce IL-8 po 6/24 hodinové aplikaci CBD na lidských gingiválních fibroblastech příklad 2.
Obr. 4. Produkce MMP-2 po 6/24 hodinové aplikaci CBD na lidských gingiválních fibroblastech - příklad 2.
Obr. 5. Nárůst koncentrace CBD pozorovaný v lyzátech lidských gingiválních fibroblastů po jejich 6 h a 24 h inkubaci s 0,5 μΜ CBD. Stanoveno metodou UHPLC/MS. CBD nebyl v kultivačním médiu detegován - příklad 5.
Obr. 6. Permeace CBD ze zubních gelů s obsahem lipofilní složky (2. a 3. sloupec) a bez lipofilní složky (1. sloupec) skrz syntetickou lidskou kůži Strat-M® po 24 h. Stanoveno metodou UHPLC/MS - příklad 6.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1. Složení a příprava zubního gelu
Složka hmotn. %
Carbopol Ultrez 10 NF polymer 0,50
Glycerin 10,00
Skvalan 4,00
Kanabidiol 1,00
Hyaluronát sodný 0,10
Chlorhexidin diglukonát 0,02
Čištěná voda 84,38
1. Postup přípravy zubního gelu: V části vody (cca 10 % z celkového množství vody) se rozpustí hyaluronát sodný, vznikne transparentní roztok.
2. Ve zbylém množství vody se smočí Carbopol Ultrez 10 NF polymer, vznikne lehce bílá suspenze.
3. Do suspenze z bodu 2. se přidá glycerin, chlorhexidin diglukonát a roztok z bodu 1, směs se promíchá.
- 4 CZ 309967 B6
4. Trietylaminem se adjustuje pH směsi získané v bodě 3. na hodnotu pH = 6,0, vytvoří se transparentní gel.
5. Ve skvalanu se rozpustí CBD záhřevem na max. 60 °C.
6. Rozpuštěné CBD ve skvalanu se nalije do gelu (viz bod 4.) a směs se promíchá.
7. Pro dokonalou dispergaci CBD v gelu lze doporučit homogenizaci při otáčkách min 3000 minutu - cca 15 sekund.
Příklad 2. Výsledky testování kanabidiolu na lidských gingiválních fibroblastech.
V in vitro studii účinku kanabidiolu (CBD) byly použity lidské gingivální fibroblasty (HGF) izolované z gingivy odebrané dobrovolníkům na Klinice ústní, čelistní a obličejové chirurgie Fakultní nemocnice a Lékařské fakulty Univerzity Palackého Olomouc schválené Etickou komisí Fakultní nemocnice a Lékařské fakulty Univerzity Palackého Olomouc (2019). V první fázi experimentu byla stanovena bezpečná koncentrace CBD na základě výsledků z měření MTT, což je test sledující redukci 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromidu (MTT) na odpovídající formazan. Test byl prováděn podle M.D. Maines, L.G. Costa, D.J. Reed, et al. Current protocols in toxicology. New York: John Wiley & Sons. (1998). Výsledky testu jsou znázorněny na obrázku 1.
K buňkám vysetým na 96-ti jamkové desce v koncentraci 3 χ 104 buněk/ml a 100 μl/jamku, které byly ponechány 24 h adherovat a po následné 24 h inkubaci s CBD v koncentračním rozmezí 25 až 0,78 μmol/l se přidalo 100 μl MTT (0,5 mg/mL v kultivačním médiu bez séra) směs na dobu 2 h. Po uplynutí inkubační doby a odsátí MTT směsi byl přidáno 100 μl DMSO (dimethylsulfoxidu) s NH3 (1%, v/v). Absorbance byla změřena při 540 nm.
Dle hodnot MTT byly zvoleny dvě subtoxické koncentrace CBD (0,25 a 0,5 μmol/l), které byly použity pro stanovení/ověření jeho protizánětlivého účinku. Zánět na HGF byl indukován lipopolysacharidem (LPS) P. gingivalis podle How K.Y., Song K.P., Chan K.G., Porphyromonas gingivalis: An Overview of Periodontopathic Pathogen below the Gum Line. Front Microbiol 2016;7:53. HGF byly vysety na 6ti jamkové desky nechány narůst pro dosažení konfluence. Buňky byly opláchnuty 1 ml PBS a poté byl přidán LPS (1pg/ml, 2 ml/jamku) v kultivačním médiu bez séra, který byl aplikován na 24 hod. Část buněk byla ponechána bez předchozí aplikace LPS. Po uplynutí inkubační doby bylo přidáno CBD do kultivačního média bez séra v koncentracích 0,25 a 0,5 μmol/l (2 ml/jamku) na 6 a 24 hodin a to jak na buňky kultivované s LPS tak na buňky bez předchozí aplikace LPS (tj. bez indukovaného zánětu). V námi zvolených časových intervalech bylo kultivační médium odsáto a zamraženo na -80 °C pro další analýzu. V kultivačním médiu byla stanovena hladina prozánětlivých interleukinů IL-6, IL-8 (Human ELISA Development Kit, k.č. 900-K16 a 900-K18, PeproTech, Baria, Česká republika) a matrixové metaloproteinázy (MMP-2) (Duo Set ELISA Development System, k.č. DY902, R&D, Bio-Techne, UK) metodou ELISA. Zvolené parametry hrají hlavní úlohu při patologických procesech a plní významnou roli při onemocněních parodontu (Noh K.M., Jung M., Kim S.H., Lee S.R., Park K.H., Kim D.H., Kim H.H., Park Y.G. Assessment of IL-6, IL-8 and TNF-α levels in the gingival tissue of patients with periodontitis. EXP Ther Med 2013; 6(3):847-851). První ze stanovovaných cytokinů IL-6, hraje úlohu při zánětlivé odpovědi. V případě přetrvávajícího zánětu dochází k zvýšení hladiny MMP-2, což výrazně přispívá k destrukci tkáně. Mediátor zánětu IL-8 působí také jako chemoatraktant. V experimentu po indukci zánětu LPS a následné aplikaci kanabidiolu byl zjištěn pokles hladiny IL-6 (obrázek 2) a IL-8 (obrázek 3). U stanovované hladiny MMP-2 nedocházelo k výraznějším změnám (obrázek 4). Závěrem lze říci, že naše experimenty potvrdily protizánětlivý účinek obou dávek kanabidiolu, a to především/prokazatelně v delší časové perspektivě 24-h inkubace.
- 5 CZ 309967 B6
Příklad 3. Testování antimikrobiálních účinků kanabidiolu.
K testování byly vybrány kmeny Streptococcus mutans CCM 7409 a Porphyromonas gingivalis CCM 3985. Oba z České sbírky mikroorganizmů (Brno). Ke kultivaci .S', mutans bylo použito médium BHI+kh - Mozko-srdcová infůze (Oxoid, UK) obohacená s vitamínem K (0,001 mg/ml) a heminem (5 mg/ml) a pro P. gingivalis médium WCHA - Wilkins-Chalgren agaru (HiMedia, India), se 7 % ovčích erytrocytů a vitamínem K (0,001 mg/ml).
Citlivost vybraných mikrobů k testovaným substancím byla ověřena mikrodiluční metodou dle Clinical and Uaboratory Standards Institute (Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria. 9th ed. CUSI standard Mil. Wayne, PA: Clinical and Uaboratory Standards Institute; 2018). Pro lepší růst P. gingivalis bylo Brucella growth medium nahrazeno BHI+kh (Blaskovich MAT, Kavanagh AM, Elliott AG, Zhang B, Rámu S, Amado M et al. The antimicrobial potential of cannabidiol. Commun Biol 2021;4(l): 1-18).
Z testovaných látek byly ředěním v DMSO připraveny základní pracovní roztoky. Tyto pracovní roztoky jednotlivých látek pak byly dále ředěny médiem BHI+kh [Mozko-srdcová infůze (Oxoid, UK) obohacená vitamínem K (0,001 mg/ml) a heminem (5 mg/ml)] tak, aby podíl DMSO byl minimálně 1:100 a neinhiboval tak růst mikrobů. Sériovým ředěním, ředicí faktor 1:2, pak byly připraveny požadované koncentrace jednotlivých substancí. 135 μΐ každého ředění bylo napipetováno do jamek 96 jamkové mikrotitrační deštíčky z tvrzeného polystyrenu s kulatým dnem (Gamma České Budějovice, a.s.).
Z čerstvých kultur testovaných kmenů na Wilkins-Chalgren agaru (WCHA; HiMedia, India), se 7 % ovčích erytrocytů a vitamínem K, byly připraveny suspenze v BHI+kh o optické denzitě odpovídající 0,5 stupni McFarlandovy zákalové stupnice (po odečtení optické denzity média). Suspenze byly následně ředěny v poměru 1:15 (výsledná koncentrace inokula 5xl06 CFU/ml).
Jednotlivé jamky s 135 μΐ naředěnými substancemi i kontrolními jamkami byly inokulovány 15 μΐ připraveného inokula.
Inokulované mikrotitrační destičky byly inkubovány v Anaerobic Work Station (Ruskinn Technology, UK) s anaerobní atmosférou (80 % N2, 10 % CO2 and 10 % H2) při teplotě 37 °C. Inkubace trvala v případě P. gingivalis 60 hod., v případě .S', mutans 24 hod.
Sterilita média byla kontrolována přenesením 150 μΐ BHI+kh do tří jamek mikrotitrační destičky. Tři jamky na každé destičce obsahující pouze s 135 μΐ BHI+kh a 15 μΐ připraveného inokula sloužily jako kontrola růstu testovaného mikroba.
Po odečtu MIC byl obsah jamek s nejvyšší koncentrací příslušné substance a s viditelným mikrobiálním růstem vy očko ván na WCHA. Stejně bylo vyočkované samotné inokulum. Po 48 hod. (.S', mutans) či 14 dnech (P. gingivalis) inkubace v anaerobní atmosféře byla hodnocena čistota narostlé mikrobiální kultury. V případě kontaminace byl výsledek považovaný za nevalidní.
V jednotlivých jamkách mikrotitrační destičky byl sledován růst mikroba, který se projevil zákalem média nebo jako sediment na dně jamky mikrotitrační destičky. Při inhibici růstu mikroba zůstalo médium čiré, bez viditelné sedimentace nebo zákalu. Minimální inhibiční koncentrace (MIC) byla stanovena jako nejnižší koncentrace příslušné substance, při které nebyl pozorovaný růst mikroba. Stanovení MIC kanabidiolu bylo u obou testovaných mikrobů provedeno ve třech nezávislých experimentech, v každém se třemi opakováními.
Výsledky jsou shrnuty v tabulce 1.
-6CZ 309967 B6
Tabulka 1: Hodnoty minimální inhibiční koncentrace CBD pro P. gingivalis a S. mutans.
P. gingivalis S mutans
MIC medián [gg/ml] MIC rozsah [gg/ml] MIC medián [gg/ml] MIC rozsah [gg/ml]
CBD 1.5 1-2 16 16
Příklad 4. Výsledky z randomizované, dvojitě zaslepené klinické zkoušky kontrolované placebem „Pilotní studie vlivu kanabidiolu na parodontitis chronica“ schválené Etickou komisí Fakultní nemocnice a Lékařské fakulty Univerzity Palackého (2020).
Studie byla provedena se vzorky zubních gelů následujícího složení:
Zubní gel s účinnou látkou CBD a skvalanem:
Složka % hmotn.
Carbopol Ultrez 10 NF polymer 0,50
Glycerin 10,00
Skvalan 4,00
Kanabidiol 1,00
Methylparaben sodný 0,15
Čištěná voda 84,35
Postup přípravy zubního gelu:
1. Ve vodě se smočí Carbopol Ultrez 10 NF polymer, vznikne lehce bílá suspenze.
2. Do suspenze z bodu 1. se přidá glycerin a methylparaben sodný, směs se promíchá.
3. Trietylaminem se adjustuje pH směsi získané v bodě 2. na hodnotu pH = 6,0, vytvoří se transparentní gel.
4. Ve skvalanu se rozpustí CBD záhřevem na max. 60 °C.
5. Rozpuštěné CBD ve skvalanu se nalije do gelu (viz bod 3.) a směs se promíchá.
6. Pro dokonalou dispergaci CBD v gelu lze doporučit homogenizaci při otáčkách min 3000 minutu - cca 15 sekund.
Placebo směs
Složka % hmotn.
Carbopol Ultrez 10 NF polymer 0,50
Glycerin 10,00
Skvalan 4,00
- 7 CZ 309967 B6
Methylparaben sodný 0,15
Čištěná voda 85,35
Postup přípravy zubního gelu:
1. Ve vodě se smočí Carbopol Ultrez 10 NF polymer, vznikne lehce bílá suspenze.
2. Do suspenze z bodu 1. se přidá glycerin a methylparaben sodný, směs se promíchá.
3. Trietylaminem se adjustuje pH směsi získané v bodě 2. na hodnotu pH = 6,0, vytvoří se transparentní gel.
4. Skvalan se nalije do gelu a směs se promíchá.
Nábor pacientů a provedení studie: Po náboru pacientů (muži a ženy ve věku 35 až 65 let) následovalo několik návštěv. 1) Při první návštěvě (0 den) byl pacientům, kteří splňují kritéria pro přijetí do studie, zhotoven set i.o. fotografií, proveden mikrobiologický odběr z parodontálního chobotu, odstraněn zubní kamen a plak a proveden výplach H2O2. Dále byl proveden odběr vzorku gingivy k histopatologickému vyšetření a proběhla hygienická instruktáž. 2) Při druhé návštěvě (7. den) byla u pacienta proveden kontrola dodržování správné ústní hygieny, pořízen set i.o. fotografií a byl aplikován CBD gel (nebo identické placebo bez CBD) do chobotů a na gingivu (5 min. působení). Proběhlo předání zubních gelů obsahujících CBD nebo placebo přípravků. Pacient jimi substituoval svoji běžnou zubní hygienu po dobu studie. 3) Při třetí návštěvě (37. den) byl pořízen set i.o. fotografií. V případě ukončení terapie byl proveden odběr vzorků gingivy k histopatologickému vyšetření. Byl proveden mikrobiologický odběr z parodontálního chobotu. V případě pokračování terapie proběhla hygienická reinstruktáž a opakovaná aplikace CBD gelu do chobotů a na gingivu (5 min. působení). 4) Během poslední návštěvy byl pořízen set i.o. fotografií, byl proveden mikrobiologický odběr z parodontálního chobotu a odběr vzorku gingivy k histopatologickému vyšetření. Celková doba trvání studie byla stanovena na 67 dní.
Vstupní kritéria: 1) diagnóza parodontitis chronica, 2) věk 35 až 65 let, 3) počet vlastních zubů 16 a více, 4) podepsaný informovaný souhlas, 5) bez fyzického nebo mentálního hendikepu.
Vylučovací kritéria: 1) chronická onemocnění (diabetes mellitus, onkologické onemocnění), 2) zvýšená krvácivost (medikace - antikoagulancia, antiagregancia, hemoragické diatézy), 3) těhotné a kojící ženy, kuřáci, uživatel konopí či konopných produktů, 4) ATB v posledních 3 měsících, 5) paralelní účast na jiné klinické zkoušce, 6) pacient se snímatelnou náhradou.
Použité metody, vyšetřovací postupy a způsob zpracování výsledků: V klinické studii byl hodnocen parodontální index dle Russella, index plaku (Silness a Loe), gingivální index (Loe a Silness, 1963), index krvácivosti gingivy (Ainamo a Bay, 1975), modifikovaný gingivální index (Lobene et al., 1986). Dále byl proveden mikrobiologický odběr z parodontálního chobotu pro vyšetření dle metodiky VariOr-Dento. Asi u 20 % subjektů byl standardně proveden odběr vzorku gingivy k histopatologickému vyšetření. Z neinvazivních vyšetření byl pořízen set i.o. fotografií.
Z výsledku vyplývá, že užívání CBD přípravku vedlo k významnému zlepšení parodontálních indexů (pacient B) ve srovnání s pacientem, který užíval přípravek (placebo) (pacient A), viz tabulka 2. Taktéž došlo u pacienta B k redukci počtu patogenních bakterií v dutině ústní; srovnej tabulky 3 a 4.
Tabulka 2: Hodnoty parodontálních indexů u pacienta A užívající přípravek (placebo) a pacienta B užívajícího přípravek s obsahem CBD.
- 8 CZ 309967 B6
Pacient A 1. návštěva 5. návštěva Hodnocení
Plakový index 1,24 1,04 Beze změny
Modifikovaný gingivální index 0,68 0,92 Beze změny
Index gingiválního krvácení 0,52 0,48 Beze změny
Gingivální index 1,32 1,40 Beze změny
Periodontální index 2,64 2,96 Beze změny
Pacient B 1. návštěva 5. návštěva Hodnocení
Plakový index 0,72 0,83 Beze změny
Modifikovaný gingivální index 1,16 0,62 Změna ze střední formy zánětu na mírnou
Index gingiválního krvácení 0,60 0,33 Snížení krvácivosti o cca 50%
Gingivální index 1,48 1,04 Změna ze střední formy zánětu na mírnou
Periodontální index 5,92 5,83 Beze změny
Tabulka 3: Příklad osídlení parodontálních chobotů u pacienta A užívající přípravek (placebo) v odběru 1. (start studie) a 5. (ukončení studie) návštěvy. Bez zjevného zlepšení z hlediska 5 osídlení patogenními bakteriemi.
1. návštěva:
Komplex Patogeny Zkratka Nález
Aa Aggregatibacter actinomycetemcomitans Aa --
Červený Porphyromonas gingivalis Tannerella forsythia (Bacteroides forsythus) Treponema denticola Pg Tf Td +++ +++
+++
Oranžový Parvimonas micra Prevotella intermedia Fusobacterium nucleatum Pm Pi Fn +++ -- +++
Asociován s oranž. Campylobacter rectus Eubacterium nodatum Cr En + +++
Zelený Eikenella corrodens Capnocytophaga sp. Ec Cs +++ --
Rezistence kβ-laktamovým ATB -
Celkové riziko resorpce závěsného aparátu Vysoké
- 9 CZ 309967 B6
5. návštěva:
Komplex Patogeny Zkratka Nález
Aa Aggregatibacter actinomycetemcomitans Aa --
Červený Porphyromonas gingivalis Tannerella forsythia (Bacteroides forsythus) Treponema denticola Pg Tf Td Pm Pi Fn +++ +++
++ +++ --
Oranžový Parvimonas micra Prevotella intermedia Fusobacterium nucleatum
+++
Asociován s oranž. Campylobacter rectus Eubacterium nodatum Cr En +
++
Zelený Eikenella corrodens Capnocytophaga sp. Ec Cs +
+
Rezistence kβ-laktamovým ATB -
Celkové riziko resorpce závěsného aparátu Vysoké
Tabulka 4: Příklad osídlení parodontálních chobotů u pacienta B užívající přípravek (s obsahem CBD) v odběru 1. (start studie) a 5. (ukončení studie) návštěvy. S významnou redukcí počtu patogenních bakterií.
1. návštěva:
Komplex Patogeny Zkratka Nález
Aa Aggregatibacter actinomycetemcomitans Aa --
Červený Porphyromonas gingivalis Tannerella forsythia (Bacteroides forsythus) Treponema denticola Pg Tf Td +++ ++
+
Oranžový Parvimonas micra Prevotella intermedia Fusobacterium nucleatum Pm Pi Fn +++ -- +++
Asociová n s oranž. Campylobacter rectus Eubacterium nodatum Cr En --
++
Zelený Eikenella corrodens Capnocytophaga sp. Ec Cs ++
+++
Rezistence kβ-laktamovým ATB -
Celkové riziko resorpce závěsného aparátu Vysoké
5. návštěva:
Komplex Patogeny Zkratka Nález
Aa Aggregatibacter actinomycetemcomitans Aa --
Červený Porphyromonas gingivalis Tannerella forsythia (Bacteroides forsythus) Treponema denticola Pg Tf Td --
--
--
Oranžový Parvimonas micra Prevotella intermedia Fusobacterium nucleatum Pm Pi Fn +++ -- +++
Asociová n s oranž. Campylobacter rectus Eubacterium nodatum Cr En ++
++
Zelený Eikenella corrodens Capnocytophaga sp. Ec Cs ++
++
Rezistence kβ-laktamovým ATB -
Celkové riziko resorpce závěsného aparátu Střední
- 10 CZ 309967 B6
Legenda:
(--) nedetekován, odpovídá počtu bakterií <103 (+) slabě pozitivní, odpovídá počtu bakterií 103 - 104 (++) středně pozitivní, odpovídá počtu bakterií 104 - 105 (+++) silně pozitivní, odpovídá počtu bakterií >105
Příklad 5. Vstup CBD do gingiválních fibroblastů
Gingivální fibroblasty (izolované ze tří různých pacientů) byly vysety na 6-jamkové desce (plocha jamky 9,6 cm2) a nechány narůst do druhého dne (konfluence). Na buňky byl aplikován CBD v koncentraci 0,5 μΜ po dobu 6 a 24 hodin. Po uplynutí inkubační doby bylo 250 μl média smícháno s 250 μl methanolu s 1% HCl a buňky byly opláchnuty 2 x PBS (1 ml), seškrábány ze 4 jamek do PBS (fosfátový pufr, 1 ml), centrifugovány 5 minut při 3000 ot/min. Po centrifugaci bylo odstraněno PBS a přidáno 0,5 ml methanolu s 1% (hmotn./hmotn.) HCl a buňky byly sonikovány (cyklus 0.5, amplituda 50, 10 krát). Poté byly vzorky centrifugovány 2 min při 8000 ot./min. a supernatant byl přepipetován do čisté zkumavky a podroben UHPLC/MS analýze.
UHPLC/MS analýzy byly prováděny na kapalinovém chromatografu ACQUITY I Class (Waters, Milford, MA, USA). Jedná se o modulární systém tvořený chromatografickou pumpou (Binary Solvent Manager), autosamplerem (Sample Manager) a termostatem kolony (Column Manager). Jako analytická kolona byla použita Kinetex Polar C18 (100 x 2,1 mm i.d., 2,6 μm; Phenomenex, CA, USA). Systém pracoval s gradientovou elucí mobilní fáze (MFA 0,1% kyseliny mravenčí ve vodě, MFB 0,1% kyselina mravenčí v acetonitrilu) při průtoku 0,6 ml/min a teplotě 25 °C. Gradientová eluce měla následující parametry: 0 až 11 min 50 až 70% MFB, 11 až 12,5 min 70 až 100% MFB, 12,5 až 13 min. 100 až 50% MFB, 13 až 16 min 50% MFB. Objem nástřiku byl 2 pl.
Pro metabolickou studii byl použit hmotnostní spektrometr Synapt G2-S s vysokým rozlišením (Waters Corp., Manchester, UK), který byl připojen k systému UPLC přes rozhraní elektrosprejové ionizace (ESI). Iontový zdroj pracoval v režimu pozitivní ionizace s kapilárním napětím 3,0 kV a vzorkovacím kuželem (sample cone) 30 V. Teplota zdroje a teplota desolvatačního plynu byly nastaveny na 120 °C a 320 °C. Průtok desolvatačního plynu byl 900 l/hod. Rozsah sběru dat byl 50 až 1200 Da s dobou skenování 0,2 s v režimu MSE (funkce skenování umožňující současné získávání hmotnostních spekter s nízkou kolizní energií (2 eV) a vysokou kolizní energií (15 až 30 eV) v rámci jednoho experimentu). Přístroj byl kalibrován pomocí aduktů mravenčanu sodného v acetonitrilu s korekcí pro měření přesné hmoty s využitím externího standardu (roztok leucin-enkefalin, 20 pg/l ve směsi voda: acetonitril: kyselina mravenčí (100: 100: 0,2, v/v/v), průtok 5 pl/min). Jako ovládací software pro sběr a vyhodnocení dat byl použit MassLynx V4.1 (Waters) a následné zpracování dat bylo provedeno pomocí MetaboLynx XS Application Manager (Waters).
Z výsledků vyplývá, že CBD je poměrně rychle vstřebáváno gingiválními fibroblasty, což je potvrzeno také tím, že nebylo detegováno v kultivačním médiu, ale pouze ve vyšetřovaných gingiválních fibroblastech (obrázek 5). Po 24 h kultivaci nebyly identifikovány žádné metabolity CBD, což je v souladu s tím, že gingiva není tkáň s biotransformačním potenciálem. To, že CBD není metabolizováno gingiválními fibroblasty, také přispívá k prodloužení jeho protizánětlivému účinku.
Příklad 6. Permeace zubních gelů s CBD na modelu syntetické kůže Strat-M®
Studie byla provedena se vzorky zubních gelů následujících složení.
Zubní gel s účinnou látkou CBD a skvalanem:
- 11 CZ 309967 B6
Složka % hmotn.
Carbopol Ultrez 10 NF polymer 0,50
Glycerin 10,00
Skvalan 4,00
Kanabidiol 1,00
Methylparaben sodný 0,15
Čištěná voda 84,35
Postup přípravy zubního gelu:
1. Ve vodě se smočí Carbopol Ultrez 10 NF polymer, vznikne lehce bílá suspenze.
2. Do suspenze z bodu 1. se přidá glycerin a methylparaben sodný, směs se promíchá.
3. Trietylaminem se adjustuje pH směsi získané v bodě 2. na hodnotu pH = 6,0, vytvoří se transparentní gel.
4. Ve skvalanu se rozpustí CBD záhřevem na max. 60 °C.
5. Rozpuštěné CBD ve skvalanu se nalije do gelu (viz bod 3.) a směs se promíchá.
6. Pro dokonalou dispergaci CBD v gelu se směs homogenizuje při otáčkách 3000 ot/min cca 15 sekund.
Zubní gel s účinnou látkou CBD a slunečnicovým olejem:
Složka % hmotn.
Carbopol Ultrez 10 NF polymer 0,50
Glycerin 10,00
Slunečnicový olej 4,00
Kanabidiol 1,00
Methylparaben sodný 0,15
Čištěná voda 84,35
Postup přípravy zubního gelu:
1. Ve vodě se smočí Carbopol Ultrez 10 NF polymer, vznikne lehce bílá suspenze.
2. Do suspenze z bodu 1. se přidá glycerin a methylparaben sodný, směs se promíchá.
3. Trietylaminem se adjustuje pH směsi získané v bodě 2. na hodnotu pH = 6,0, vytvoří se transparentní gel.
4. Ve slunečnicovém oleji se rozpustí CBD záhřevem na max. 60 °C.
5. Rozpuštěný CBD v oleji se nalije do gelu (viz bod 3.) a směs se promíchá.
6. Pro dokonalou dispergaci CBD v gelu se směs homogenizuje při otáčkách 3000 ot/min cca 15 sekund.
- 12 CZ 309967 B6
Zubní gel s účinnou látkou CBD:
Složka % hmotn.
Carbopol Ultrez 10 NF polymer 0,50
Glycerin 10,00
Kanabidiol 1,00
Methylparaben sodný 0,15
Čištěná voda 88,35
Postup přípravy zubního gelu:
1. Ve vodě se smočí Carbopol Ultrez 10 NF polymer, vznikne lehce bílá suspenze.
2. Do suspenze z bodu 1. se přidá glycerin a methylparaben sodný, směs se promíchá.
3. Trietylaminem se adjustuje pH směsi získané v bodě 2. na hodnotu pH = 6,0, vytvoří se transparentní gel.
4. CBD se nasype do gelu (viz bod 3.) a směs se promíchá.
6. Pro dokonalou dispergaci CBD v gelu se směs homogenizuje při otáčkách 3000 ot/min cca 15 sekund.
Experimenty byly prováděny ve vertikálních Franzových celách o objemu 50 ml a difuzní ploše 2,5 cm2. Na horní plochu bylo naneseno 5 g vzorku. Experimenty byly prováděny ve třech opakováních při 37 °C a 400 ot/min. po dobu 24 h. Receptorovým mediem byl fosfátový pufr o pH 7,4 s 5 % BSA (hovězí sérový albumin) napodobující fyziologické podmínky. Pro experimenty byl použit transdermální difuzní testovací model Strat-M® [T. Uchida, W. Kadhum, S. Kanai, T. Oshizaka, H. Todo, K. Sugibayashi Prediction of skin permeation by chemical compounds using the artificial membrane Strat-M®. Eur. J. Pharm. Sci. 2015; 67:113-118.]. Po 24 h byl z receptorového prostoru odebrán 1 ml vzorku a analyzován pomocí UHPLC/MS dle podmínek specifikovaných v příkladu 5.
Z výsledků vyplývá, že CBD nejlépe difunduje přes model syntetické kůže z formulace obsahující jako rozpouštědlo skvalan. Slunečnicový olej jako solubilizační medium byl o více než 90 % horší, nejhůře pak dopadla formulace bez obsahu lipofilní složky.
Průmyslová využitelnost
Přípravek podle technického řešení lze v různých formách použít jako účinný prostředek ústní hygieny spojený s pravidelnou péčí o chrup zajišťující ochranu před akutním zánětem gingivy vyvolaným zvýšenou formou tvorby biofilmu.

Claims (9)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Léčivý přípravek pro dentální použití, vyznačující se tím, že obsahuje účinnou složku kanabidiol a rozpouštědlo skvalan, přičemž přípravek je ve formě zubního gelu, přičemž hmotnostní poměr skvalanu ke kanabidiolu je v rozmezí 2:1 až 20:1, a přípravek obsahuje 0,1 až 5 % hmotn. kanabidiolu.
  2. 2. Přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje 0,5 až 2 % hmotn. kanabidiolu, a popřípadě do 0,3 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu.
  3. 3. Přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 2, vyznačující se tím, že přípravek dále obsahuje účinnou složku kyselinu hyaluronovou nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl.
  4. 4. Přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že kanabidiol a kyselina hyaluronová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl jsou přítomny v hmotnostním poměru 20:1 až 1:1, výhodněji 20:1 až 5:1, ještě výhodněji 15:1 až 8:1.
  5. 5. Přípravek podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že kyselina hyaluronová nebo její farmaceuticky přijatelná sůl má nízkou až střední molekulovou hmotnost v rozmezí 200 až 1800 kDa.
  6. 6. Přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že dále obsahuje alespoň jednu pomocnou látku vybranou ze skupiny gelující látky, rozpouštědla, vodu, stabilizátory a ochucovadla.
  7. 7. Přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že obsahuje 0,1 až 5 % hmotn. kanabidiolu, 0,01 až 2 % hmotn. kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, 1 až 10 % hmotn. skvalanu, 5 až 40 % hmotnostních gelujících látek, popřípadě do 0,3 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu, a vodu v množství do 100 % hmotn.
  8. 8. Přípravek podle nároku 3, vyznačující se tím, že obsahuje 0,5 až 2 % hmotn. kanabidiolu, 0,05 až 1 % hmotn. kyseliny hyaluronové nebo její farmaceuticky přijatelné soli, 3 až 8 % hmotn. skvalanu, 5 až 20 % hmotnostních gelujících látek, popřípadě do 0,3 % hmotn. chlorhexidin glukonátu nebo diglukonátu, a vodu v množství do 100 % hmotn.
  9. 9. Přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8 pro použití pro léčbu a/nebo prevenci chronického zánětu gingivy a/nebo parodontitidy.
CZ2021-369A 2021-08-07 2021-08-07 Léčivý přípravek ve formě zubního gelu CZ309967B6 (cs)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2021-369A CZ309967B6 (cs) 2021-08-07 2021-08-07 Léčivý přípravek ve formě zubního gelu
US18/580,273 US20250082653A1 (en) 2021-08-07 2022-06-13 Therapeutic product in the form of a dental gel
CA3222474A CA3222474A1 (en) 2021-08-07 2022-06-13 Therapeutic product in the form of a dental gel
AU2022325388A AU2022325388B2 (en) 2021-08-07 2022-06-13 Therapeutic product in the form of a dental gel
PCT/CZ2022/050057 WO2023016589A1 (en) 2021-08-07 2022-06-13 Therapeutic product in the form of a dental gel
EP22741689.8A EP4380550A1 (en) 2021-08-07 2022-06-13 Therapeutic product in the form of a dental gel

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2021-369A CZ309967B6 (cs) 2021-08-07 2021-08-07 Léčivý přípravek ve formě zubního gelu

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2021369A3 CZ2021369A3 (cs) 2023-02-15
CZ309967B6 true CZ309967B6 (cs) 2024-03-13

Family

ID=82557927

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2021-369A CZ309967B6 (cs) 2021-08-07 2021-08-07 Léčivý přípravek ve formě zubního gelu

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20250082653A1 (cs)
EP (1) EP4380550A1 (cs)
AU (1) AU2022325388B2 (cs)
CA (1) CA3222474A1 (cs)
CZ (1) CZ309967B6 (cs)
WO (1) WO2023016589A1 (cs)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160166498A1 (en) * 2014-12-16 2016-06-16 Axim Biotechnologies, Inc. Oral care composition comprising cannabinoids
US20200345657A1 (en) * 2019-05-02 2020-11-05 Betterlife Pharma Inc. Cannabinoid stock for formulation products
WO2021046130A1 (en) * 2019-09-04 2021-03-11 Omni Bioceutical Innovations, Inc. Compositions of fulvic acid and cannabinoid and uses thereof
WO2021092340A1 (en) * 2019-11-07 2021-05-14 Amyris, Inc. Compositions and methods for delivering cannabinoids to skin

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11607442B2 (en) * 2019-09-30 2023-03-21 Concept Matrix Solutions Topical antibiotic

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160166498A1 (en) * 2014-12-16 2016-06-16 Axim Biotechnologies, Inc. Oral care composition comprising cannabinoids
US20200345657A1 (en) * 2019-05-02 2020-11-05 Betterlife Pharma Inc. Cannabinoid stock for formulation products
WO2021046130A1 (en) * 2019-09-04 2021-03-11 Omni Bioceutical Innovations, Inc. Compositions of fulvic acid and cannabinoid and uses thereof
WO2021092340A1 (en) * 2019-11-07 2021-05-14 Amyris, Inc. Compositions and methods for delivering cannabinoids to skin

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A. Puisys et al: "Postoperative healing assessment using cannabinoids in oral surgery" EC Dental Science. London : Ecronicon Limited, 2019, 18(4) 569-575 https://www.ecronicon.com/ecde/pdf/ECDE-18-00953.pdf *
Kacey Culliney: "Colgate-Palmolive files trio of patents on ‘antibacterial’ CBD oral care blends" (15.4.2021), http://web.archive.org/web/20210416084306/https://www.cosmeticsdesign-europe.com/Article/2021/04/15/Colgate-patents-cannabinoid-CBD-oral-care-toothpaste-and-mouthwash-for-antibacterial-anti-inflammatory-properties *
M. A. T. Blaskovich et al.: "The antimicrobial potential of cannabidiol" Communications Biology 2021; 4(7): 1-18, Publ. online 2021 Jan 19. doi: 10.1038/s42003-020-01530-y, ISSN: 2399-3642 *
S.Y. Rawal et al: "Effect of cannabidiol on human gingival fibroblast extracellular matrix metabolism: MMP production and activity, and production of fibronectin and transforming growth factor β" J. Periodontal Res. 2012 Jun;47(3):320-9. doi: 10.1111/j.1600-0765.2011.01435.x. Epub 2011 Nov 17, ISSN: 1600-0765 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2022325388B2 (en) 2025-02-13
EP4380550A1 (en) 2024-06-12
US20250082653A1 (en) 2025-03-13
CA3222474A1 (en) 2023-02-16
AU2022325388A1 (en) 2024-01-18
WO2023016589A1 (en) 2023-02-16
CZ2021369A3 (cs) 2023-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9241885B2 (en) Oral care compositions comprising increased bioavailable levels of quaternary ammonium antimicrobials
Balanyk et al. Development of sustained-release antimicrobial dental varnishes effective against Streptococcus mutans in vitro
Lobo et al. Dose–response evaluation of a novel essential oil against Mutans streptococci in vivo
CN108464965A (zh) 一种含有天然活性成分的蜂胶漱口水及其制备方法
Neto et al. Dose-response evaluation of propolis dental varnish in children: a randomized control study
RU2699560C1 (ru) Стоматологический гель с фитопелоидной композицией
US20210161862A1 (en) Use of statins for periodontal disease and bone regeneration
Steinberg et al. Dental drug-delivery devices: local and sustained-release applications
Alghutaimel et al. Propolis use in dentistry: a narrative review of its preventive and therapeutic applications
KR101951024B1 (ko) D-갈락토오스를 포함하는 쿼럼센싱 저해제
ITMI971091A1 (it) Formulazioni farmaceutiche contenenti colostro e uso del colostro per il trattamento di affezioni del cavo orale
US20250082653A1 (en) Therapeutic product in the form of a dental gel
KR20020003413A (ko) 옥수수불검화 정량 추출물 및 후박 추출물을 함유하는치주질환 예방 및 치료제 조성물
CN113577243B (zh) 一种活性多肽-pdrn组合物及其在制备护理产品中的应用
JP2023097067A (ja) 口腔菌叢改善剤
KR19990003843A (ko) 잇몸질환의 예방 및 치료용 조성물
JP2004231602A (ja) 抗酸化活性を有する生薬抽出物を含む口腔内組成物
RU2817976C1 (ru) Гель стоматологический с антибактериальным эффектом
KR20160061852A (ko) 금속이온 봉쇄제와 이소프로필메틸페놀을 함유하는 구강 조성물
JP2013151442A (ja) 哺乳類が分泌する抗菌ペプチド分泌促進剤
RU2712121C1 (ru) Средство для ухода за полостью рта и горла
Tua-Ngam et al. Evaluation of newly formulated chlorhexidine mouthwash
RU2716501C1 (ru) Композиция для профилактики и лечения воспалительных заболеваний полости рта
Preethy et al. INTERNATIONAL JOURNAL OF RESEARCH IN PHARMACEUTICAL SCIENCES
Marwaha et al. Antimicrobial effectiveness of chlorhexidine chewing gums on Streptococcus mutans counts–An in vivo microbiological study