CZ301093B6 - Zpusob detekce analytu v tekutém mlécném produktu a testovací zarízení k provádení zpusobu - Google Patents
Zpusob detekce analytu v tekutém mlécném produktu a testovací zarízení k provádení zpusobu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ301093B6 CZ301093B6 CZ20001059A CZ20001059A CZ301093B6 CZ 301093 B6 CZ301093 B6 CZ 301093B6 CZ 20001059 A CZ20001059 A CZ 20001059A CZ 20001059 A CZ20001059 A CZ 20001059A CZ 301093 B6 CZ301093 B6 CZ 301093B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- membrane
- analyte
- test
- dairy product
- detection
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 158
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 title claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims abstract 21
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 121
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 83
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 83
- 238000013508 migration Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000005012 migration Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 75
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 57
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 57
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 57
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 54
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical group N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 43
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims description 20
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 17
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 15
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- -1 monolactam Chemical compound 0.000 claims description 10
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 10
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 claims description 10
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 claims description 10
- 229960003326 cloxacillin Drugs 0.000 claims description 8
- LQOLIRLGBULYKD-JKIFEVAISA-N cloxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1Cl LQOLIRLGBULYKD-JKIFEVAISA-N 0.000 claims description 8
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims description 7
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims description 7
- ZBHXIWJRIFEVQY-IHMPYVIRSA-N ceftiofur Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC(=O)C1=CC=CO1 ZBHXIWJRIFEVQY-IHMPYVIRSA-N 0.000 claims description 7
- 229960005229 ceftiofur Drugs 0.000 claims description 7
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 claims description 6
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003460 beta-lactamyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 claims description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 claims description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 claims 1
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HSHGZXNAXBPPDL-HZGVNTEJSA-N 7beta-aminocephalosporanic acid Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C([O-])=O)N2C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H]12 HSHGZXNAXBPPDL-HZGVNTEJSA-N 0.000 claims 1
- WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N Antibiotic SQ 26917 Natural products O=C1N(S(O)(=O)=O)C(C)C1NC(=O)C(=NOC(C)(C)C(O)=O)C1=CSC(N)=N1 WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 claims 1
- 229940024554 amdinocillin Drugs 0.000 claims 1
- 229960003644 aztreonam Drugs 0.000 claims 1
- WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N aztreonam Chemical compound O=C1N(S([O-])(=O)=O)[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)\C1=CSC([NH3+])=N1 WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 claims 1
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 claims 1
- FUBBGQLTSCSAON-PBFPGSCMSA-N cefaloglycin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)COC(=O)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 FUBBGQLTSCSAON-PBFPGSCMSA-N 0.000 claims 1
- 229950004030 cefaloglycin Drugs 0.000 claims 1
- 229960001668 cefuroxime Drugs 0.000 claims 1
- JFPVXVDWJQMJEE-IZRZKJBUSA-N cefuroxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(N)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CC=CO1 JFPVXVDWJQMJEE-IZRZKJBUSA-N 0.000 claims 1
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 claims 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 claims 1
- BWWVAEOLVKTZFQ-ISVUSNJMSA-N chembl530 Chemical compound N(/[C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)=C\N1CCCCCC1 BWWVAEOLVKTZFQ-ISVUSNJMSA-N 0.000 claims 1
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 claims 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 claims 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 claims 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 claims 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 55
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 34
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 20
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 15
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 15
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- UQLLWWBDSUHNEB-CZUORRHYSA-N Cefaprin Chemical compound N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C(O)=O)C(=O)CSC1=CC=NC=C1 UQLLWWBDSUHNEB-CZUORRHYSA-N 0.000 description 9
- 229960004350 cefapirin Drugs 0.000 description 9
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 150000003952 β-lactams Chemical group 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010030 laminating Methods 0.000 description 5
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 5
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N cephalosporin C Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N 0.000 description 4
- YFAGHNZHGGCZAX-JKIFEVAISA-N dicloxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=C(Cl)C=CC=C1Cl YFAGHNZHGGCZAX-JKIFEVAISA-N 0.000 description 4
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N oxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1 UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N 0.000 description 4
- 229960001019 oxacillin Drugs 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 4
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 4
- 241000187362 Actinomadura Species 0.000 description 3
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 3
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 3
- 229960001585 dicloxacillin Drugs 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- GPXLMGHLHQJAGZ-JTDSTZFVSA-N nafcillin Chemical compound C1=CC=CC2=C(C(=O)N[C@@H]3C(N4[C@H](C(C)(C)S[C@@H]43)C(O)=O)=O)C(OCC)=CC=C21 GPXLMGHLHQJAGZ-JTDSTZFVSA-N 0.000 description 3
- 229960000515 nafcillin Drugs 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000030899 Serine-Type D-Ala-D-Ala Carboxypeptidase Human genes 0.000 description 2
- 108010004832 Serine-Type D-Ala-D-Ala Carboxypeptidase Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000002313 adhesive film Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 2
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000989 food dye Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- DEFJQIDDEAULHB-QWWZWVQMSA-N D-alanyl-D-alanine Chemical group C[C@@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C)C([O-])=O DEFJQIDDEAULHB-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052714 tellurium Inorganic materials 0.000 description 1
- PORWMNRCUJJQNO-UHFFFAOYSA-N tellurium atom Chemical compound [Te] PORWMNRCUJJQNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-ylideneazanium;chloride Chemical compound Cl.N=C1CCCS1 ATGUDZODTABURZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Testovací zarízení, které dovoluje detekovat prítomnost zkoumaných látek v tekutém mlécném produktu na základe kapilární tecné migrace uvedeného mlécného produktu, zahrnuje pevný nosic (1), který má první okraj a druhý okraj, na kterém jsou pripevneny, postupujíce postupne od prvního okraje, membrána (2) z netkaných polyesterových vláken dovolující purifikaci analyzované kapaliny, membrána (3), na které jsou imobilizovány jedna nebo více záchytných látek, a absorpcní membrána (4). Rešení se také týká zpusobu detekce analytu v tekutém mlécném produktu tímto testovacím zarízení.
Description
Vynález se týká testovacího zařízení pro provádění analýzy v tekutém mléčném produktu jako je mléko. Vynález se také týká způsobu provádění detekce a kvantitativního určování látek v mléku použitím uvedeného testovacího zařízení a testovací soupravy, obsahující uvedené testovací zářilo zení.
Dosavadní stav techniky
V současné době zdravotní předpisy mnoha zemí vyžadují pravidelnou kontrolu přítomnosti různých látek v mléčných produktech, jako jsou veterinární léky a hormony, běžně používané při chovu dobytka. Ze zřejmých lékařských důvodů se tyto produkty nesmí vyskytovat v mléčných produktech určených pro lidskou spotřebu.
V jiných případech je žádoucí mít k dispozici testy dovolující detekci endogenních látek v mléku pro optimalizaci způsobů chovu dobytka. Konkrétně rychlé určení úrovní hormonů v mléku dovoluje snadno identifikovat období vhodná pro reprodukci.
Ještě v dalších případech je potřeba praktických a spolehlivých způsobů kontroly původu mléč25 ných produktů získaných z mléka různých zvířecích druhů. Je proto potřeba způsobů, které dovolují identifikací přítomnosti proteinů v mléce, které jsou charakteristické pro jisté druhy ve srovnání s jinými druhy,
Z literatury jsou známy různé druhy testů pro analýzu biologických tekutin. Tyto testy obecně používají způsoby detekce, které jsou založeny na rozpoznávacím činidlu (receptory nebo protilátky), které specificky rozpoznávají hledanou látku nebo její analog a na značkovacím činidlu (radioaktivní prvek, enzym, fluorescenční činidlo a podobně), které jsou dále označovány jako detekční činidla. V závislosti na zvoleném způsobu se mluví o radioimunologickém testu (RIA), radioreceptorovém testu (RRA), enzymovém imunologickém testu (EIA) a podobně. Ve svém obecném principu tyto testy využívají minimální kombinací dvou výše uvedených prvků (detekčních Činidel), která umožní získat výsledek, jehož hodnota indikuje množství zkoumané látky, které je přítomno.
Je vhodné poznamenat, že v závislosti na použitém způsobu detekce může být označující činidlo spojeno buď s rozpoznávacím činidlem nebo s testovanou látkou nebo s látkou, která je analogická testované látce z hlediska rozpoznávání použitým rozpoznávacím činidlem. Existují také testovací způsoby, ve kterých rozpoznávací Činidlo nebo testovaná látka nebo látka analogická testované látce obsahují v sobě označovací Činidlo (například radioaktivně označená testovaná látka).
U mléčných produktů se nejčastěji popisované testy týkají detekce antibiotik. Je totiž dobře známo, že antibiotika pěstitelé používají pro léčbu jistých infekčních onemocnění dobytka.
Ze zřejmých lékařských důvodů mléko určené k lidské spotřebě musí v principu být prosté všech so antibiotik. Mimo jiné koncentrace penicilinu 0,005 U/ml nebo méně může mít Škodlivé důsledky v průběhu výroby produktů odvozených z mléka, jako je sýr, jogurt a podobně.
Může být předvídána řada situací. Například v prvním případě pro detekci přítomnosti antibiotik na farmě před převedením do kamionu, bude mít prioritu extrémně rychlý (méně než 5 minut) a jednoduchý test. Použití rychlého testu může být také vhodné jestliže například antibiotikum,
-1Cl 301093 B6 které bylo použito pro ošetření je známé a jestliže dále uvedený test dovoluje detekci uvažovaného antibiotika podle zákonné normy. V opačném případě, pokud na rychlost není dáván důraz, je důležité detekovat většinu nebo všechna antibiotika v zákonných normách.
Zákonné úpravy některých zemí stanoví přesně stanovené kvalitativní normy. Například americké úřady vyžadují, aby koncentrace šesti dále uvedených antibiotik v mléku nepřekračovaly přesně určené hodnoty: penicilín, 5*10“9; ampicilin, 10-ΚΓ9; amoxicilin, 10-10 , cloxacilin, 10*10“9; cefapirin, 20· KT9; ceftiofur, 50-10 9. Evropské společenství také stanoví normy kvality: penicilín 4-10“9; amoxicilin 4-10'9; ampicilin 4-10^ cloxacilin 30* 10“9; dicloxacilin 304 O'9; oxacilin 30-10'9; cefapirin 10-10'9; ceftiofur 100-10 9; cefchinon 20-1O9; nafcilin 30-10’9; cefazolin 50-10'9.
Může proto být užitečné mít k dispozici test, kteiý dovoluje detekci většiny antibiotik. Kromě toho v mlékárenském průmyslu může být užitečné mít k dispozici test, který má všechny vlast15 nosti rychlosti, citlivosti a jednoduchosti, test, který dovoluje vázat tyto tri parametry co nejlepším způsobem a to i pokud nejsou úplně pokryty.
Vynález US 4.239.852 popisuje mikrobiologický způsob detekce antibiotik s β-laktamovým jádrem v mléku. Podle tohoto způsobu se vzorek mléka inkubuje na jedné straně v přítomnosti částí buněk mikroorganismu, který je velmi citlivý na antibiotika, obzvláště Bacillus stearothermophilus a na druhé straně v přítomnosti antibiotika označeného radioaktivním prvkem nebo enzymem. Inkubace se provádí za podmínek dovolujících, aby antibiotika, popřípadě přítomná ve vzorku a označené antibiotikum se vázaly k částem buněk.
Po ukončení inkubace se částí buněk oddělí ze směsi a potom promývají. Potom se množství označených antibiotik vázaných na části buněk určí a porovnává se standardem. Množství označených antibiotik, vázaných ke zbytkům buněk je nepřímo úměrné koncentraci antibiotik, přítomných ve vzorku analyzovaného mléka.
Tento způsob vyžaduje relativně jemné manipulace, zejména během separace částí buněk ze směsi. Mimoto ve své nejcitlivější verzi tento způsob používá antibiotikum označené radioaktivním prvkem ( 4C nebo 129I). V tomto případě určení množství antibiotika, které je popřípadě přítomno v mléku vyžaduje použití speciálního přístroje, jako je například scintilační počítač. Kromě toho manipulace s radioaktivními produkty, a to i v případě použití velmi malých množ35 ství, není zcela prostá nebezpečí pro osobu, která provádí analýzu.
Evropská přihláška vynálezu 593.112 popisuje jiný způsob, dovolující detekci antibiotik v mléku. Tento způsob používá protein izolovaný z mikroorganismu citlivého na antibiotika, jako je například Bacillus stearothermophilus. Tento protein se kromě jiného označí enzymem jako je peroxi40 dáza.
Test postupuje následujícím způsobem: vzorek mléka se inkubuje ve zkumavce v přítomnosti označeného proteinu; po inkubaci se mléko přenese do druhé zkumavky, na jejíchž stěnách bylo imobilizováno referenční antibiotikum; provede se druhá inkubace, potom se odstraní obsah zku45 mavky; stěny druhé zkumavky se třikrát promývají promývacím roztokem, který se také odstraní. Potom se rezidua, přítomná na stěnách druhé zkumavky přenesou na savý papír; dále se do druhé zkumavky přidá barevný substrát, který se znovu inkubuje, potom se přidá roztok, který zastaví vývin barvy; zabarvení zkumavky se porovná se zabarvením, kterého bylo dosaženo v paralelně prováděném identickém testu na standardním vzorku antibiotika. Množství označeného proteinu, [mobilizovaném na nosiči, tedy také intenzita zabarvení, je nepřímo úměrné množství antibiotika, přítomného v analyzovaném vzorku mléka.
Podle příkladu 1 předložené přihlášky vynálezu tento test dovoluje detekovat penicilín G až do koncentrací, které jsou řádu 5Ί09 a dovoluje detekci amoxicilinu (5-10“9), ampicilinu (10Ί0“9), cefapirinu (5-10~9) a ceftioťuru (5' 10 9).
Nicméně test je značně náročný na provádění, obzvláště nekvalifikovaným personálem. Tento test totiž zahrnuje množství etap, v to počítaje etapy přelévání kapaliny a reziduí a několik etap promývání.
Vzhledem k počtu a povaze etap požadovaných v tomto testu je získání spolehlivého výsledku závislé silně na schopnostech osoby, který test provádí.
Mimo to interpretace výsledku si vyžaduje provedení dvou souběžných testů, což ještě více náso10 bí a komplikuje operace.
Jsou také známy další typy enzymatických způsobů, které umožňují určení slabých koncentrací antibiotik v mléku (J. M. FRERE a kol., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 18(4), 506510 (1980), a také vynálezy EP 85.667 a EP 468.946), které jsou založeny na použití specifické15 ho enzymu, totiž exobuněčné rozpustné D-alanyl-D-alanin-carboxypeptidázy, kterou produkuje Actinomadura R39 (dále označovaná jako „enzym R39“). Enzym R39 má specifickou aktivitu hydrolýzy skupin D-alanyl-D-alanin u různých peptidů a je také schopný hydrolyzovat konkrétní thioestery.
Kromě jiného enzym R39 reaguje s antibiotiky s p-laktamovým jádrem za velmi rychlého vytvoření equimolámího komplexu enzym-antibiotikum, který je neaktivní a v zásadě ireverzibilní.
V nejnovější verzi tohoto testu (EP 468 946) se určený objem vzorku kapaliny určení k testování inkubuje s určeným množstvím enzymu R39 za podmínek, které dovolují, aby β-laktamové anti25 biotikum, které je popřípadě přítomno ve vzorku, reagovalo s enzymem pro vytvoření ekvimolárního komplexu enzym-antibiotikum, který je neaktivní a v zásadě ireverzibilní.
Potom se určené množství substrátu typu thioesteru inkubuje s produktem získaným v první etapě za podmínek, dovolujících hydrolýzu substrátu reziduálním enzymem R39, který dosud nekom30 plexoval s antibiotikem během první inkubace. Množství takto vytvořené kyseliny merkaptoalkanové se potom určí kolorimetrickou metodou pomocí reaktantů, který je schopný vytvářet zabarvení s volnou skupinou SH kyseliny merkaptoalkanové. Intenzita zabarvení se porovnává s etanolem, kteiý byl předem vytvořen ze vzorků obsahujících známá množství antibiotik. Kvantitativní určení může být provedeno měřením pomocí spektrofotometrie; v případě mléka může být nutné provést nejprve zprůhlednění vzorku.
Je zřejmé, že tento test zahrnuje méně etap a je jednodušší k provádění než test popsaný v přihlášce vynálezu EP 593 112. Nicméně tento test je omezen na detekci antibiotik s p-laktamovým kruhem a u těchto antibiotik navíc do prahu dostupné detekce pomoct enzymu R39. Jako takový tento test nemůže být používán s dalšími receptory antibiotik a nemůže přímo sloužit jako základ pro detekci dalších druhů látek v mléku.
Jelikož současné testy vykazují ještě další nevýhody, přihlašovatelé si stanovili jako cíl hledat nové způsoby detekce látek v tekutých mléčných produktech, přičemž hledané způsoby by měly dovolovat spolehlivé určení různých druhů zkoumaných látek, výhodně v okamžiku odběru na farmě. Přihlašovatelé tedy hledali způsob, který by dovoloval velmi rychle získat spolehlivé a citlivé výsledky po provedení omezeného počtu jednoduchých kroků, které by nevyžadovaly obzvláštní dovednosti v provádění experimentů. Kromě toho přihlašovatelé hledali způsob, který by dával výsledky snadno zjistitelné vizuálně a dovolovaly mimoto provádět kvantitativní analý50 zu pomocí měření přístroji.
Přihlašovatelé nyní zjistili, že tohoto cíle je možno dosáhnout díky použití nového testovacího zařízení, které dovoluje snadno zjišťovat přítomnost zkoumaných látek v tekutých mléčných produktech, konkrétně v mléce,
Ί
Podstata vynálezu
Vynález se týká testovacího zařízení, které dovoluje detekovat přítomnost zkoumaných látek v tekutých mléčných produktech na základě kapilární tečné migrace uvedeného mléčného pro5 duktu. Testovací zařízení podle předloženého vynálezu zahrnuje pevný nosič (1), který má první okraj a druhý okraj, na kterém jsou připevněny, postupujíce od prvního konce, membrána (2), umožňující analyzované kapaliny;
membrána (3), na které jsou imobilizovány jedna nebo více záchytných látek; a absorpční membrána (4), ío přičemž membrána (2) je schopná zadržovat látky, přítomné v mléčném produktu, která zabraňují migrací zkoumaných látek, popřípadě přítomných v mléčném produktu a detekčních reagentů použitých v prováděném způsobu, testovacím zařízením, a to během kapilární tečné migrace vzorku po navlhčení prvního konce testovacího zařízení v analyzovaném mléčném produktu.
V konkrétním provedení předloženého vynálezu testovací zařízení podle předloženého vynálezu obsahuje dále membránu (5), na které je nanesen alespoňjeden detekční reagent a tento detekční reagent je schopen se rychle rozpouštět v přítomnosti uvedeného mléčného produktu. V tomto konkrétním provedení membrána (5) musí být umístěna před membránou (3). Může být umístěna například buď před membránou (2) na prvním konci zařízení a nebo mezi membránou (2) a membránou (3) nebo také pod nebo nad membránou (2).
Různé membrány použité v testovacím zařízení podle předloženého vynálezu se překrývají na svých koncích tak, aby zajišťovaly kontinuální migraci mléčného produktu z jedné oblasti do druhé. Výhodně je membrána (3) umístěna tak, aby její blízký okraj byl umístěn pod membránou (2) a její vzdálený okraj byl umístěn pod membránou (4), Membrány mohou být popřípadě udržovány v kontaktu jedna s druhou díky adhezivní plastové fólii (6). V tomto případě se adhezivní plastová fólie volí tak, aby neovlivňovala migraci kapaliny testovacím zařízením.
Možnost zakrýt testovací zařízení adhezivní plastovou fólií přináší dvě výhody: zajišťuje doko30 nalý kontakt membrán v místě překrývání a představuje ochranu zařízení. Adhezivní plastová fólie (6) může buď úplně zakrývat membrány (2), (3), (4) a (5) nebo částečně zakrývat jednotlivé membrány. Výhodně adhezivní plastová fólie (6) nezakrývá prvních několik milimetrů prvního konce, tak aby byla umožněna rychlejší migrace kapaliny membránou (2) testovacího zařízení.
Pevný nosič (1) přítomný v testovacím zařízení podle předloženého vynálezu je vyroben ze skla nebo plastu, výhodně z plastu. V případě nosiče z plastu je jeho tloušťka obecně v rozmezí od 0,05 do 1 mm, s výhodou od 0,1 do 0,6 mm. Membrány jsou připevněny na pevném nosiči (1) přilepením.
Membrána (2) může být různých typů. Na jedné straně musí být schopna zadržovat látky přítomné v mléčném produktu, které zabraňují migraci zkoumaných látek, popřípadě přítomných v mléčném produktu a detekčních reagentů použitých v prováděném způsobu, testovacím zařízením. Na druhé straně musí dovolovat rychlou migraci zkoumaných látek a detekčních reagentů testovacím zařízením, přičemž musí zachovávat aktivitu těchto zkoumaných látek a detekčních reagentů během uvedené migrace. Neomezující příklady membrán, dovolujících získat tyto výsledky jsou Cytosep 1663 a Leukosorb LK4 (dodávané společností Pall Gelman Sciences), GF/D, GF/DVA, 17CHR (dodávané společností Whatmann) a skleněná vlákna typu GF141 (dodávaná společností Alstrom).
so Výhodně používaná membrána Leukosorb je membrána vyráběná z netkaných polyesterových vláken, určená na zadržování leukocytů z klinických vzorků krve, moči, slin a cerebrospinální tekutiny. K zadržování leukocytů dochází filtrací tekutiny při jejím transversálním prostupu membránou.
Přihlašovatelé neočekávaně zjistili, že tento typ membrán také dovoluje zajistit funkci, která je velmi důležitá pro detekci hledaných látek v mléčném produktu pomocí testovacího zařízení podle předloženého vynálezu, totiž zadržování látek přítomných v mléčných produktech, které zabraňují dobrému průběhu testu detekce, prováděného kapilární tečnou migrací mléčného pro5 duktu na uvedeném testovacím zařízení, přičemž současně dovoluje rychlou migraci hledaných látek a detekčních reagentů.
K tomu aby mohla fungovat tímto optimálním způsobem, membrána (2) musí být dostatečně dlouhá, aby dovolila eliminaci všech látek přítomných v mléčných produktech, které zabraňují io rychlé migraci hledaných látek a detekčních reagentů testovacím zařízením.
Membrána (3) musí dovolovat imobilizaci jedné nebo více záchytných látek a musí dovolovat rychlou migraci vzorku mléčného produktu po průchodem membránou (2). S výhodou je membrána (3) vytvořena na neporézním nosiči typu polyesteru. Neomezující příklady vhodných is membrán podle předloženého vynálezu jsou nitrocelulózové membrány se zvýšenou kapilární rychlostí jako jsou membrány Hi-Flow (dodávané společností Míllipore), výhodně membrány
Hi-Flow typu SX nebo ST. Tyto membrány dávají optimální výsledek spolu s membránami (2), které byly popsány výše.
Jedna nebo více záchytných látek se imobilizuje na membráně (3). Typ imobilizované záchytné látky závisí pochopitelně na způsobu použitém pro detekci hledaných látek; záchytné látky jsou schopné imobilizovat selektivně alespoň jednu složku přítomnou v tekutině, migrující na testovacím zařízením, jako je například jeden z detekčních reagentů nebo produkt vzniklý vytvořením komplexu mezi hledanou látkou nebo látkou analogickou této hledané látce a alespoň jedním detekčním reagentem nebo také produkt vzniklý vytvořením komplexu více detekčních reagentů. Záchytná látka může také být jedním z detekčních reagentů. Záchytné látky se umístí koncentrovaným způsobem na přesně definované jedné části nebo více částech membrány (3), jako jsou tenké kruhy nebo pásy nebo jakýkoliv jiný motiv vhodný pro danou aplikaci. Ať je zvolený motiv jakýkoli, musí umožňovat zřetelné odečtení výsledku.
Co se týče rozměrů, membrána (3) musí mít dostatečnou délku k tomu, aby obsahovala všechny použité záchytné látky a to v pořadí a v množství požadovaném použitým způsobem detekce.
Typ membrány, použitý pro membránu (4) není příliš důležitý, dokud je tato membrána schopna absorbovat a uchovávat kapalinu po jejím průchodu předchozími membránami. Membrána (4) má dostatečně velkou velikost k absorpci kapaliny po jejím průchodu membránou (3), ale také z praktického hlediska takovou, aby dovolovala snadnější uchopení testovacího zařízení.
Testovací zařízení podle předloženého vynálezu může také popřípadě zahrnovat membránu (5), na které je nanesen alespoň jeden detekční reagent. Membrána (5) musí dovolovat migraci mléčného produktu a přitom dovolovat solubilizaci a uvolňování detekční reagent (nebo detekčních reagentů) během průchodu proudu mléčného produktu. Neomezující příklady membrán, které mohou být vyhovující k tomuto účelu jsou: membrány na bázi pryskyřic ve skelných vláknech jako jsou membrány T5NM (dodávané společností Míllipore), membrány F075-14 nebo F01545 17 nebo GF/C (dodávané společností Whatman), membrána Cytosep 1663 (dodávaná společností
Pall Gelman Sciences), membrány na bázi pryskyřic v polyesterových vláknech jako jsou membrány Accuwick (dodávané společností Pall Gelman Sciences), celulózový papír 3 mm (dodávaný společností Whatman) nebo nakonec membrány typu Release Matrix PT-R2 (dodávané společností Advances Micro Devices). Výhodně se používají membrány na bázi pryskyřic v polyesterových vláknech, jako jsou membrány Accuwick. Membrána (5) má délku dostatečnou pro požadované množství detekčního reagentů.
Testovací zařízení podle předloženého vynálezu jsou vyráběna způsoby známými odborníkům. Je možné například připravit desky pomocí komerčně dostupných laminačních zařízení. Použité záchytné látky se nanášejí na membránu (3) ve formě roztoků, před nebo po sestavení karet.
Nanášení těchto roztoků může být prováděno velice přesnými způsoby s použitím komerčně dostupných zařízení, jako je například Dispenser X-Y Platform Biojet Quanti-3000 společnosti
Bio Dot, lne. Tyto nanesené roztoky se okamžitě odpaří, například umístěním karty do proudu teplého vzduchu. Pro výrobu ve velkém měřítku je možno také připravovat role. Nakonec se karty a role nesoucí požadované záchytné látky nastříhaj i na pásky a každý z těchto pásků představuje testovací zařízení podle předloženého vynálezu.
Pokud testovací zařízení zahrnuje membránu (5), detekční reagent nebo reagenty mohou být naneseny před sestavením karet nebo rolí prostým ponořením membrány (5) do roztoku obsah υιό jícího detekční reagent nebo reagenty. Alternativně mohou být naneseny po sestavení karet nebo rolí způsoby analogickými způsobům použitým pro nanášení záchytných látek na membránu (3).
V alternativním provedení předloženého vynálezu, se zařízení umístí do plastového obalu, který má dva otvory: první s okraji ve tvaru misky, se nachází přímo nad membránou (2) a dovoluje příjem kapaliny, určené k analýze; druhý je okénko, které umožňuje vizualizaci výsledků na membráně (3). V tomto případě testovací zařízení neobsahuje adhezivní plastovou fólii (6).
Testovací zařízení podle předloženého vynálezu dovoluje detekovat přítomnost hledaných látek v tekutém mléčném produktu, obzvláště v mléku.
Z uvedených důvodů se předložený vynález také týká způsobu detekce látek v tekutém mléčném produktu, používajícího testovací zařízení podle předloženého vynálezu a detekční reagenty, který sestává z následujících kroků:
a) uvedení určeného objemu mléčného produktu do kontaktu s testovacím zařízením podle předloženého vynálezu, přičemž k tomuto kontaktu dochází na prvním konci testovacího zařízení,
b) tečná migrace mléčného produktu na testovacím zařízení na základě kapilarity taková, že hledané látky a detekční reagenty, kteréjsou popřípadě přítomné v mléčném produktu procházejí postupně membránou (2), potom membránou (3) tak, že složky mléčného produktu, so které nejsou zastaveny membránami (2) a (3) skončí v membráně (4), a
c) určení fixace na membráně (3).
Způsob podle předloženého vynálezu dovoluje detekovat hledané látky v tekutém mléčném produktu, například mléce, syrovátce, podmáslí apod. Předložený vynález se týká obzvláště detekce látek jako jsou veterinární léčiva, hormony nebo proteiny, o kterých se předpokládá, že jsou přítomny v mléku.
Detekční reagenty použité ve způsobu podle předloženého vynálezu mohou být použity v různém počtu a mít odlišnou povahu v závislosti na způsobu provedení předloženého vynálezu, který vychází z použité detekční metody. Způsob podle předloženého vynálezu používá alespoň dva detekční reagenty. První detekční reagent je rozpoznávací činidlo, které specificky rozpoznává hledanou látku a bude nadále nazýván „identifikační činidlo“. Druhý detekční reagent je činidlo, používané pro označení a bude nadále nazýván „označovací činidlo“. Je třeba podotknout, že v závislosti na zvoleném způsobu provedení mohou být jisté detekční reagenty presentovány na membráně (3) nebo na membráně (S). V závislosti na povaze látky, kteráje určována, a na použitých detekčních reagentech se může stát, že je nutno přidat jeden nebo více dalších detekčních reagentů před krokem uvedení mléčného produktu do kontaktu s testovacím zařízením podle předloženého vynálezu a udržovat směs v podmínkách inkubace, které dovolují vytvoření komplexu detekčních reagentů a hledané látky nebo látky analogické hledané látce. V závislosti na so použitém způsobu mohou být identifikační činidlo a označovací činidlo spojeny nebo mohou představovat tutéž látku.
Na druhé straně může být použito více identifikačních činidel a/nebo označovacích činidel.
Identifikační činidlo dovoluje detekci přítomnosti typu hledané látky díky svojí schopnosti rozpoznávat specificky tuto hledanou látku nebo látku analogickou této hledané látce. Může se jednat o receptor schopný vytvářet selektivně stabilní a v zásadě ireverzibilní komplex s hledanou látkou nebo o monoklonální nebo polyklonální protilátky specifické k hledané látce nebo látce analogické hledané látce. Pro detekci antibiotik může být identifikační činidlo zvoleno ze souboru, zahrnujícího specifické monoklonální nebo polyklonální protilátky nebo receptory získané z mikroorganismů citlivých na antibiotika, jako jsou receptory získané z druhů Bacillus (Bacillus stearothermophílus, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, ...) Streptococcus (Streptococcus thermophilus,...), Actinomycetes (Actinomadura R39,...).
Ve výhodném provedení předloženého vynálezu se používá identifikační činidlo, které zahrnuje receptor citlivý na antibiotika s β-laktamovým kruhem získaný z Bacillus licheniformis, jako je například receptor BlaR nebo receptor BlaR-<TD. Izolace a peptidová sekvenace proteinu BlaR jsou popsány v Y. ZHU a kol., J. Bacteriol., 1137-1141 (1990); receptor BlaR-CTD je karboxy15 terminální oblast BlaR, jehož izolace a peptidová sekvence jsou popsány v B. JORIS a kol., FEMS Microbiology Letters, 107-114 (1990).
Použití receptorů BlaR nebo BlaR-CTD podle předloženého vynálezu pro detekci antibiotik s βlaktamovým kruhem přináší významné výhody ve srovnání s rozpoznávacími činidly používa20 nými do současné doby. Receptory BlaR a BlaR-CTD jsou totiž schopny komplexovat velmi rychle s velkým množstvím antibiotik a to při teplotách inkubace nižších než jsou teploty nutné pro známá rozpoznávací činidla, jako jsou například receptory získané z Bacillus stearothermophilus.
Druhý typ použitého detekčního reagentu je označovací činidlo, které dovoluje vizualizaci a přímou nebo nepřímou kvantifikaci přítomnosti hledané látky v mléčném produktu. Označovací činidla, použitelná ve způsobu podle předloženého vynálezu mohou být částicová, fluorescenční, radioaktivní, luminescenční nebo enzymatická. Konkrétní označovací činidlo se výhodně zvolí tak, aby poskytovalo snadno detekovatelný vizuální signál, dokonce i pokud je přítomno v malém množství. Jako neomezující příklady je možno uvést kovové koloidní částice (platina, zlato, stříbro a podobně), koloidní částice selenu, uhlíku, síry, teluru nebo dále obarvené syntetické latexové koloidní částice. Obzvláště výhodné jsou koloidní částice zlata o průměru částic v rozmezí od 1 do 60 nm; tyto částice poskytují silné růžovo-červené zabarvení, které je snadno detekovatelné.
Označovací činidlo dovoluje určit přítomnost hledané látky ve vzorku mléčného produktu díky své vazbě najeden nebo více detekčních reagentu, hledaných látek nebo látek analogických hledané látce.
Vazba mezi označovacím činidlem a detekčním reagentem může být dosažena způsoby známými odborníkům v oboru. Pokud se používá částicové označovací činidlo, k označování může docházet buď přímou adsorpcí na částicích, nebo nepřímo na základě chemického zakotvení, jako je například komplex biotin/anti-biotik. K této vazbě může dojít buď v etapě uvedené mléčného produktu do kontaktu s testovacím zařízením podle předloženého vynálezu nebo během migrace mléčného produktu na testovacím zařízení podle předloženého vynálezu.
V konkrétním provedení předloženého vynálezu se používá třetí typ detekčního reagentu, dále označovaný jako „referenční činidlo“. Jedná se o látku, přidanou ve známém množství do analyzovaného vzorku, která se fixuje na specifickou záchytnou látku imobilizovanou na membráně (3). Referenční činidlo vytváří pruh, jehož intenzita slouží jako reference pro kvantifikaci hledané látky.
Ke kontaktu mléčného produktu s testovacím zařízením podle předloženého vynálezu (etapa a) způsobu podle předloženého vynálezu) dochází umístěním testovacího zařízení podle předloženého vynálezu do recipientu, najehož dně se nachází analyzovaný vzorek. Testovací zařízení se vloží v zásadě vertikálně do nádoby, tak aby první okraj zařízení byl v kontaktu se směsí.
rt
V provedení vynálezu, vc kterém se používá testovací zařízení uložené v plastovém obalu, se testovací zařízení vloží horizontálně a uvedení do kontaktu se provádí nanesením alikvotu analyzovaného vzorku do otvoru s okraji ve tvar misky, který se nachází nad membránou (2).
Pro provedení kroku migrace b) se kapalina ponechá migrovat prostřednictvím kapilarity na testovacím zařízení podle předloženého vynálezu. Kapalina, která migruje prostřednictvím kapilarity na testovacím zařízení podle předloženého vynálezu se setká nejprve s membránou (2), která umožňuje zadržet látky, které se nachází v mléčném produktu a které zabraňují migraci hledané látky nebo látek, které jsou popřípadě přítomny v mléčném produktu a detekčních reagentů na io testovacím zařízení. Hledané látky a detekční reagenty migrují potom na membráně (3), na které je i mobilizována jedna nebo více záchytných látek. Záchytné látky selektivně imobilizují alespoň jednu složku, která se nachází v analyzované kapalině. V konkrétním provedení předloženého vynálezu se používá záchytná látka umístěná na konec dráhy migrace kapaliny na membráně (3), která je schopná fixovat všechna označovací činidla, která nebyla zastavena předcházejícími záchytnými látkami. Tato záchytná látka dovoluje kompletovat kvantitativní informace, pocházející od předcházejících záchytných látek.
Určení fixace na membráně (3) (etapa c) způsobu podle předloženého vynálezu) se provádí jednoduše určením přítomnosti označovacích činidel v této oblasti. Toto určení je možné snadno vizuálním způsobem. Nicméně pokud je požadováno získání přesných hodnot intenzity pozorovaných signálů, je možno použít zařízení, které umožňuje přesné stanovení intenzity pozorovaných signálů. Pokud se používá referenčního činidla, je toto fixováno specifickou záchytnou látkou, která dává vnitrní referenci pro měření intenzity pozorovaných signálů.
Interpretace získaného výsledku závisí na použitém způsobu detekce, to jest na použitých detekčních reagentech a záchytných látkách.
Ve srovnání se způsoby detekce látek v mléku, které byly dříve popsány v literatuře má způsob podle předloženého vynálezu následující výhody. Především je tento způsob velmi rychlý a extrémně jednoduchý pro provádění: v zásadě sestává ze dvou etap jednoduché manipulace, které nevyžadují žádných zvláštních experimentálních dovedností. Poté následující kvalitativní a kvantitativní zhodnocení výsledku je okamžité a nevyžaduje dodatečné zvláštní operace, jako jsou operace, které jsou nutné pokud se detekce provádí enzymatickými barvivý a/nebo označovacími činidly. Mimoto je způsob přímo použitelný pro detekci různých typů hledaných látek.
Nakonec, v provedení, které používá referenční činidlo, je výsledek přímo interpretovatelný a kvantifikovatelný, aniž by bylo třeba používat jeden nebo více referenčních testů.
Předložený vynález se týká také testovací soupravy pro detekci látek v mléčných produktech, která zahrnuje testovací zařízení podle předloženého vynálezu. V případě potřeby testovací sou40 prava podle předloženého vynálezu může také obsahovat detekční reagenty, které se přidávají do vzorku před jeho uvedením mléčného produktu do kontaktu s testovacím zařízením.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázky 1 až 3 ilustrují příklady testovacích zařízení podle předloženého vynálezu, přičemž obrázky la, 2 a 3 představují pohled zpředu a obrázek lb představuje pohled v podélném řezu.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady ilustrují různé předměty a způsoby provedení předloženého vynálezu, aniž by jeho rozsah jakýmkoli způsobem omezovaly.
Příklad 1. Výroba testovacího zařízení. Obecné způsoby provedení.
1.1. Sestavení membránových karet.
Karty o velikosti 300 x 76,2 mm se napřed sestaví použitím laminačního zařízení typu Chlamshell Lamínator (dodávané společností Bio Dot, lne.) postupujíce následujícím způsobem:
Vyřízne se obdélník z plastového nosiče typu ArCare 8565 (dodávaného společností Adhesive Research) o rozměrech 300 x 76,2 mm (pevný nosič (1)). Potom se vyřízne obdélník membrány ío Leukosorb LK4 (dodávané společností Pall Gelman Sciences) o rozměrech 300 x 20 mm (membrána (2)), obdélník membrány Hi-Flow SX (dodávané společností Millipore) o rozměrech 300 x mm (membrána (3)), obdélník membrány z celulózy 3 mm (dodávané společností Whatmann) o rozměrech 300 x 40 mm (membrána (4)) a obdélník membrány Accuwick (dodávané společností Pall Gelman Sciences) o rozměrech 300 x 0,8 mm (membrána (5)).
Membrány (2) a (4), potom (5) a potom (3) se postupně uloží na specifické místo spodní formy laminačního zařízení. Pevný nosič (1) pokrytý lepidlem je sám o sobě uchováván vpříklopu tohoto zařízení. Lepivá strana nosiče je vystavena na vzduchu. Membrány uložené v spodní formě se uvedou do kontaktu s lepivým nosičem uzavřením laminačního zařízení; membrány se udržují přesně na svých místech pomocí podtlaku vytvářeného vývěvou. Po přerušení vytváření podtlaku se vyjme karta, tvořená pevným nosičem (1), na kterém jsou připevněny membrány (2), (3), (4) a (5).
1.2. Nanesení záchytných látek na membránu (3).
Nanesení záchytných látek na membránu (3) se provádí před nebo po provedení sestavení karty podle příkladu 1.1.
Připraví se vodný roztok, obsahující záchytnou látku. Roztok se nanese na membránu (3) mem30 bránové karty, připravené v příkladu 1.1. prostřednictvím nanášecího zařízení typu X-Y Platform Biojet Quanti-3000 společnosti Bio Dot, lne.
Nanesené roztoky se okamžitě odpaří umístěním souboru karty na několik minut do proudu vzduchu o teplotě 60 °C.
1.3. Nanesení označovací látky na membránu (5).
a) Před sestavením podle příkladu 1.1.
Připraví se vodný roztok obsahující označovací látku. Membrána (5) se vnoří do tohoto roztoku.
Potom se membrána odkape, a potom suší při teplotě okolí za podtlaku 0,5 baru.
b) Po sestavení podle příkladu 1.1.
Postupuje se způsobem, který byl popsán v příkladu 1.2. pro nanášení záchytných látek.
1.4. Připevnění adhezivní plastové fólie (6).
Vystřihne se obdélník adhezivní fólie typu ArCare 7759 (dodávané společností Adhesive Research) o rozměrech 300 x 20 m pro částečné zakrytí nebo a 300 x 71,2 mm pro zakrytí všech membrán.
Karta získaná v příkladu 1.1 se umístí do spodní formy laminačního zařízení a adhezivní fólie se umístí do příklopu laminačního zařízení, přičemž lepivá strana je vystavena do vzduchu. Adhezivní plastová fólie se uvede do kontaktu s membránovou kartou po uzavření zařízení.
n
I. 5. Vystřižení pásků.
Karty získané výše popsaným sestavením se nastříhají na pásky pomocí zařízení typu guilotiny nebo pomocí rotačního zařízení (dodávané společností Bio Doot, Kinematic nebo Akzo). Pásky vzniklé z konců karet jsou vyhozeny, ostatní pásky jsou připraveny k použití.
Pro uchovávání se testovací zařízení podle předloženého vynálezu umístí do neprůhledné a hermeticky uzavřené nádoby v přítomnosti vysušovacího činidla (Silgelac, Francie).
ίο 1.6. Uložení do plastového obalu.
Testovací zařízení se umístí do plastového obalu, který má dva otvory: první, s okraji ve tvaru misky, se nachází přímo nad membránou (2) a dovoluje přijímat kapalinu určenou k analýze; druhým je okénko, které dovoluje vizuální odečítání výsledků na membráně (3).
Příklad 2. Detekce antibiotik s β-laktamovým kruhem v mléku pomocí enzymu R39.
2.1. Identifikační činidlo.
Identifikační Činidlo použité v tomto příkladu je rozpustná exobuněčná D-alanyl-D-alanin-karboxypeptidáza produkovaná organismem Actinomadura R39, získaná způsobem, který popsali
J. -M. FRERE a kol., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 18(4), 506-510 (1980).
2.2. Vazba identifikačního činidla na označovací činidlo.
2.2.1. Biotinylace identifikačního činidla.
250 μί vodného roztoku enzymu R39 o koncentraci 1 mg/ml se dialyzuje po 24 hodin proti
5 00 ml pufru HNM (Hepes 10 mM, pH 8, NaCl 10 mM, MgCl2 5 mM), Do tohoto roztoku dialyzovaného enzymu R39 se potom přidají 2 ml hydrogenuhličitanového pufru (0,1 M hydrogenuhličitanu sodného, pH 9) a 250 μί roztoku N-hydroxy-sukcinimidového esteru kyseliny 6-(biotinamido)kapronové 5 mg/ml v bezvodém DMF. Tento roztok se jemně míchá ve válcovém míchači s rotační osou typu LABINCO (dodávaný společností VEL, Belgie) rychlostí 2 otáčky za minutu po dobu 3 hodin při teplotě okolí a chráněný před světlem. Takto získaný roztok se potom dialyzuje proti pufru HNM (Hepes 100 mM; pH 8, NaCl 100 mM, MgCl2 50 mM) po dobu 24 hodin. Tímto způsobem se získá roztok biotinylovaného enzymu R39, který se zředí v pufru HNM-BSA (Hepes 500 mM; pH 8, NaCl 500 mM, MgCl2 250 mM, BSA 10 mg/ml) až do dosažení koncentrace 100 pg enzymu R39 na ml pufru. Tento roztok se uchovává při teplotě -20 °C.
2.2.2. Označovací činidlo.
Jako označovací činidlo se používají částice zlata, které mají průměr 40 nm, na které byly naneseny kozí protilátky proti biotinu ve formě suspenze ve vodném roztoku tetraboritanu sodného
2 mM při pH 7,2, stabilizované nitridem sodným 0,1% (dodáváno společností BRITISH
BIOCELL (Ref. GAB40). Optická hustota této suspenze při 520 nm je zhruba 10 a koncentrace proteinu je zhruba 24 pg/ml.
2.2.3. Vazba biotinylovaného identifikačního činidla k označovacímu činidlu.
Roztok A pro rychlý test
Roztok biotinylovaného enzymu R39, připraveného v příkladu 2.2.1. se zředí 25 násobně pufrem
HNM-BSA (Hepes 500 mM, pH 8, NaCl 500 mM, MgCl2 250 mM, BSA 10 mg/ml). Při teplotě okolí se smíchá 17,5 objemových částí tohoto zředěného roztoku biotinylovaného enzymu R39,
9,27 objemových částí suspenze částic zlata, sloužících jako označovač enzymu R39 a objemových částí suspenze referenčních částic zlata (viz příklad 2.3).
Roztok B pro citlivý test
Roztok biotinylovaného enzymu R39, připraveného v příkladu 2.2.1. se zředí 50 násobně pufrem HNM-BSA (Hepes 500 mM, pH 8, NaCl 500 mM, MgCl2 250 mM, BSA 10 mg/ml). Při teplotě okolí se smíchá 17,5 objemových částí tohoto zředěného roztoku biotinylovaného enzymu R39, 9,27 objemových částí suspenze částic zlata, sloužících jako označovač enzymu R39 a io 6 objemových částí suspenze referenčních Částic zlata (viz příklad 2.3).
2.3. Referenční činidlo
Jako referenční činidlo se použijí částice zlata o průměru 40 nm na které byly naneseny kozí 15 protilátky proti králičímu imunogiobulinu. Tyto částice jsou dodávány společností BRITISH
BIOCELL (Ref. GAR40) ve formě suspenzí ve vodném roztoku tetraboritanu sodného 2 mM při pH 7,2, stabilizované nitridem sodným 0,1%. Optická hustota této suspenze při 520 nm je zhruba 3 a koncentrace proteinu je zhruba 6 pg/ml.
2.4. Záchytné látky.
2.4.1. První záchytná látka.
ml roztoku obsahujícího 213 mg lidského gamaglobulinu (G4386, Sigma) a 8,6 mg hydro25 chloridu 2-iminothiolanu (Aldrich, 33056-6) v pufru uhličitanu sodného (100 mM, pH9) se inkubují po jednu hodinu při teplotě 25 °C.
Odděleně se inkubuje po jednu hodinu při teplotě 25 °C 20 ml roztoku obsahujícího 119,8 mg cefalosporinu-C a 54 mg sulfosukcinimidyl 4-{N-maIeimÍdomethyl)cykiohexan-l-karboxylátu (sSMCC, 22322 Pierce) v pufru uhličitanu sodného (100 mM, pH 9).
Dva roztoky, které byly připraveny dříve se potom smíchají. pH vzniklého roztoku se upraví na 7,1 přidáním 3 ml NaH2PO4 500 mM a inkubuje se po dvě hodiny při teplotě 25 °C. Směs získaná po inkubaci se dialyzuje třikrát proti 1 litru pufru fosforečnanu sodného (10 mM, pH 7,5).
Vzniklý roztok se filtruje na filtru 0,22 pm, potom se alikvotuje a zmrazí při teplotě -20 °C až do použití.
Při použití se alikvoty rozmrazí a přidá se potravinářské barvivo před uskutečněním nanesení na membrána aby byla v každém okamžiku zaručena přesná poloha nanesení a kvalita stopy.
První záchytná látka dovoluje fixaci identifikačních Činidel vázaných na volná označovací činidla přítomná v přebytku vzhledem k množství antibiotik přítomných ve vzorku.
2.4.2. Druhá záchytná látka.
Jako druhá záchytná látka se používá roztok králičího imunogiobulinu (Sigma I 5006) v koncentraci 0,5 mg/ml imunogiobulinu v pufru fosforečnanu sodného 10 mM, pH 7,5, lidský gammaglobulin 5 mg/ml. Tato druhá záchytná látka zachytává referenční činidlo během migrace kapaliny na testovacím zařízení.
2.5. Testovací zařízení.
Používá se testovací zařízení, obsahující membrány (2), (3) a (4), sestavené způsobem, který byl popsán v příkladu 1.1. Membrána (3) tohoto zařízení nese na blízkém konci záchytnou látku popsanou v příkladu 2.4.1. a na vzdáleném konci záchytnou látku popsanou v příkladu 2.4.2.
Záchytné látky jsou naneseny způsobem, který byl popsán v příkladu 1.2.
2.5.1. Test 1 - Rychlý test
Připraví se sedm vzorků mléka, které obsahují postupně 0; 2; 4; 5; 6; 8 a 10-10“9 penicilinu G. Každý z těchto roztoků je potom analyzován následujícím způsobem.
Odebere se alikvot 200 μΐ vzorku mléka a 32,8 μΐ roztoku A připraveného v příkladu 2.2.3, které io se umístí do Eppendorfovy trubice. Tato směs se inkubuje po 3 minuty při teplotě 47 °C. Potom se testovací zařízení umístí vertikálně do Eppendorfovy trubice tak, aby byl první konec testovacího zařízení v kontaktu se směsí. Směs se ponechá migrovat testovacím zařízením a soubor se nechá inkubovat po 2 minuty při teplotě 47 °C.
Níže uvedená Tabulka 1 udává výsledky získané pro 7 vzorků, které byly testovány. Detekovaným pruhům byla přiřazena intenzita v rozmezí od 0 do 10, přičemž hodnota 10 znamená nejintenzivnější pruh a hodnota 0 znamená nejméně intenzivní pruh. V této stupnici byla hodnota 6 přiřazena referenčnímu pruhu. Intenzita signálu pozorovaného v prvním detekčním pruhu je nepřímo úměrná množství penicilinu G, který je přítomen ve vzorku.
Tabulka 1
| Penicilín G | Intenzita | |
| (x IO’9) | 1. pruh | 2. pruh |
| 0 | 10 | 6 |
| 2 | 8 | 6 |
| 4 | 5 | 6 |
| 5 | 3 | 6 |
| 6 | 2 | 6 |
| 8 | 1 | 6 |
| 10 | 0 | 6 |
V tomto příkladu pokud byl první pruh méně intenzivní než referenční pruh, byl test považován za pozitivní. Výsledky uvedené v Tabulce 1 ukazují, že test dovoluje detekovat do 5 minut až do koncentrace 4-10 9 penicilinu G ve vzorku mléka.
2.5.2. Test 2 - Citlivý test.
Bylo připraveno šest vzorků mléka obsahujících postupně koncentrace 0; 2; 2,5; 3; 4 a 510“9 penicilinu G. Každý z těchto roztoků byl potom analyzován následujícím způsobem:
Odebere se alikvot 200 μΐ vzorku mléka a 32,8 μΙ roztoku B připraveného v příkladu 2.2.3, které se umístí do Eppendorfovy trubice. Tato směs se inkubuje po 5 minut při teplotě 47 °C. Potom se testovací zařízení umístí vertikálně do Eppendorfovy trubice tak, aby první konec testovací zařízení byl v kontaktu se směsí. Směs se ponechá migrovat na testovacím zařízení za inkubace souboru po 2 minuty při teplotě 47 °C.
Tabulka 2 uvedená níže udává výsledky získané pro 7 vzorků, které byly testovány. Detekova50 ným pruhům byla přiřazena intenzita v rozmezí od 0 do 10, přičemž hodnota 10 znamená nej intenzivnější pruh a hodnota 0 znamená nejméně intenzivní pruh. V této stupnici byla hodnota 6 přiřazena referenčnímu pruhu. Intenzita signálu pozorovaného v prvním detekčním pruhu je nepřímo úměrná množství penicilinu G, který je přítomen ve vzorku.
Tabulka 2
| Penicilín G | Intenzita |
| (x io-9) | 1. pruh 2 |
| 0 | 10 |
| 2 | 7 |
| 2,5 | 5 |
| 3 | 4 |
| 4 | 1 |
| 5 | 0 |
V tomto příkladu pokud byl první pruh méně intenzivní než referenční pruh, byl test považován za pozitivní. Výsledky uvedené v Tabulce 2 ukazují, že test dovoluje detekovat do 7 minut až do koncentrace 2,5T0”9 penicilinu G ve vzorku mléka.
Příklad 3. Určení antibiotik s β-laktamovým jádrem v mléku pomocí BlaR.
Tento příklad ilustruje detekci antibiotik s β-laktamovým jádrem, které jsou kontrolovány hygie20 nickými úřady, v mléku. Test popsaný v tomto příkladu používá receptor BlaR-CTD vázaný na kuličky zlata, které slouží jako označovací činidlo a používá nosič, vytvořený ve formě testovacího zařízení zahrnujícího pevný nosič, na kterém jsou připevněny membrány.
3.1. Vazba BlaR-CTD (identifikační činidlo) na kuličky zlata (označovací činidlo).
3.1.1. Biotinylace BlaR-CTD.
3,79 ml vodného roztoku rozpoznávacího činidla BlaR-CTD o koncentraci 6,6 mg/ml se vyjme pufrem fosforečnanu sodného 20 mM pH 1. Do tohoto roztoku BlaR-CTD se potom přidá
41,71 ml hydrogenuhličitanového pufru (0,1 M hydrogenuhličitanu sodného, pH 9) a 2 ml roztoku N-hydroxy-sukcinimidového esteru kyseliny 6-(biotinamido)kapronové 2,23 mg/ml také v hydrogenuhličitanovém pufru. Tento roztok se jemně míchá ve válcovém míchači s rotační osou typu LABINCO (dodávaný společnosti VEL, Belgie) iychlostí 2 otáčky za minutu po dobu 2 hodin při teplotě okolí a chráněný před světlem. 2,5 ml roztoku pufru Tris 1 M pH 8 se inku35 buje s reakční směsí za stejných podmínek po 30 minut. Takto získaný roztok se potom dialyzuje proti pufru HNM (Hepes 100 mM; pH 8, NaCI 100 mM, MgCl2 50 mM) po dobu 24 hodin. Tímto způsobem se získá roztok biotinylovaného BlaR-CTD, který se zředí v pufru HNM-BSA (Hepes 500 mM; pH 8, NaCI 500 mM, MgCl2 250 mM, BSA 10 mg/ml) až do dosažení koncentrace 250 pg BlaR-CTD na ml pufru. Tento roztok se uchovává při teplotě
-20 °C,
3.1.2. Označovací činidlo.
Jako označovací činidlo se používají částice zlata, které mají průměr 40 nm, na které byly nane45 seny kozí protilátky proti biotinu ve formě suspenze ve vodném roztoku tetraborítanu sodného 2mM při pH 7,2, stabilizované nitridem sodným 0,1% (dodáváno společností BRITISH BIOCELL (Ref. GAB40). Optická hustota této suspenze při 520 nm je zhruba 10 a koncentrace proteinu je zhruba 24 pg/ml.
so 3.1.3. Vazba biotinylovaného BlaR-CTD na kuličky zlata.
Roztok biotinylovaného BlaR-CTD, připraveného v příkladu 3.1.1. se zředí 114,7 násobně pufrem HNM-BSA (Hepes 500 mM, pH 8, NaCI 500 mM, MgCl2250mM, BSA 10 mg/ml). Při teplotě okolí se smíchá 22,5 objemových částí tohoto zředěného roztoku biotinylovaného BlaR55 CTD, 7,5 objemových částí pufru HNM-BSA, 9,27 objemových částí suspenze částic zlata, slou
Cl 301093 B6 žících jako označovač biotinylovaného BlaR-CTD a 6 objemových částí suspenze referenčních částic zlata (viz příklad 3.1.4 uvedený dále).
3.1.4. Nezávislé referenční činidlo
Jako referenční činidlo se použije také referenční látka, která vytváří pruh, jehož intenzita dovoluje rychlé stanovení množství antibiotik, přítomných ve vzorku. Pro tento účel se použijí částice zlata o průměru 40 nm na které byly naneseny kozí protilátky proti králičímu imunoglobulinu. Tyto částice jsou dodávány společností BRITISH BIOCELL (Ref. GAR40) ve formě suspenzí ve io vodném roztoku tetraboritanu sodného 2 mM při pH 7,2, stabilizované nitridem sodným 0,1%.
Optická hustota této suspenze při 520 nm je zhruba 3 a koncentrace proteinu je zhruba 6 μg/ml.
3.2. Záchytné látky
3.2.1. První záchytná látka - referenční antibiotikum.
ml roztoku obsahujícího 213 mg lidského gamaglobulinu (G4386, Sigma) a 8,6 mg hydrochloridu 2-iminothiolanu (Aldrich, 33056-6) v pufru uhličitanu sodného (100 mM, pH 9) se inkubují po jednu hodinu při teplotě 25 °C.
Odděleně se inkubuje po jednu hodinu při teplotě 25 °C 20 ml roztoku obsahujícího 119,8 mg cefalosporinu-C a 54 mg sulfosukcinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyklohexan-l-karboxylátu (sSMCC, 22322 Pierce) v pufru uhličitanu sodného (100 mM, pH 9).
Dva roztoky, které byly připraveny dříve se potom smíchají. pH vzniklého roztoku se upraví na
7,1 přidáním 3 ml NaH2PO4 500 mM a inkubuje se po dvě hodiny při teplotě 25 °C. Směs získaná po inkubaci se dialyzuje třikrát proti 1 litru pufru fosforečnanu sodného (10 mM, pH 7,5). Vzniklý roztok se filtruje na filtru 0,22 pm, potom se alikvotuje a zmrazí při teplotě -20 °C až do použití.
Při použití se alikvoty rozmrazí a přidá se potravinářské barvivo před uskutečněním nanesení na membrána aby byla v každém okamžiku zaručena přesná poloha nanesení a kvalita stopy.
První záchytná látka dovoluje fixaci BlaR-CTD vázaného na kuličky zlata, přítomné v přebytku 35 vzhledem k množství antibiotik přítomných ve vzorku.
3.2.2. Druhá záchytná látka - látka schopná fixovat nezávislé referenční činidlo.
Jako druhá záchytná látka se používá roztok králičího imunoglobulinu (Sigma I 5006) 40 v koncentraci 0,5 mg/ml imunoglobulinu v pufru fosforečnanu sodného 10 mM, pH 7,5, lidský gammaglobulin 5 mg/ml. Tato druhá záchytná látka zachytává referenční činidlo během migrace kapaliny na testovacím zařízení,
3.3 Testovací zařízení.
Používá se testovací zařízení, obsahující membrány (2), (3) a (4), sestavené způsobem, který byl popsán v příkladu 1.1. Membrána (3) tohoto zařízení nese na blízkém konci záchytnou látku popsanou v příkladu 3.2. a na vzdáleném konci záchytnou látku popsanou v příkladu 3.2.2. Záchytné látky jsou naneseny způsobem, který byl popsán v příkladu 1.2.
3.4. Určení antibiotik v mléku.
3.4,1. Test ve 3 minutách - Rychlý test
Připraví se sedm vzorků mléka, které obsahují postupně koncentrace 0; 1; 2; 3; 4; 5 a 6109 penicilinu G. Každý z těchto roztoků je potom analyzován následujícím způsobem:
Odebere se alikvot 200 μΐ vzorku mléka a 45,27 μΐ roztoku připraveného v příkladu 3.1.3, které se umístí do skleněné baňky. Testovací zařízení se umístí vertikálně do baňky tak, aby byl první konec testovacího zařízení v kontaktu se směsí a aby druhý konec spočíval na stěně skleněné baňky. Směs se ponechá migrovat testovacím zařízením a soubor se nechá inkubovat po 2 minuty při teplotě 47 °C.
ío Níže uvedená Tabulka 1 udává výsledky získané pro 7 vzorků, které byly testovány. Detekovaným pruhům byla přiřazena intenzita v rozmezí od 0 do 10, přičemž hodnota 10 znamená nejintenzivnější pruh a hodnota 0 znamená nejméně intenzivní pruh. V této stupnici byla hodnota 6 přiřazena referenčnímu pruhu. Intenzita signálu pozorovaného v prvním detekčním pruhu je nepřímo úměrná množství penicilinu G, který je přítomen ve vzorku.
Tabulka 1
| Penicilín G | Intenzita | |
| (x 109) | 1. pruh | 2. pruh |
| 0 | 10 | 6 |
| l | 9 | 6 |
| 2 | 9 | 6 |
| 3 | 4 | 6 |
| 4 | 0 | 6 |
| 5 | 0 | 6 |
V tomto příkladu pokud byl první pruh méně intenzivní než referenční pruh, byl test považován za pozitivní. Výsledky uvedené v Tabulce 1 ukazují, že test dovoluje detekovat za 5 minut méně než 4109 penicilinu G ve vzorku mléka.
Testy byly také prováděny s dalšími antibiotiky s β-laktamovým jádrem za stejných podmínek. Tento test, trvající 3 minuty dovoluje detekovat amoxicilin až do koncentrace 510 9, ampicilin až do 5Ί09, cloxacilin méně než 1010“9, dicloxacilin méně než 20T09, oxacilin méně než 2010“9 a cefapirin až do 20* 10-9 ve vzorku mléka.
1.3.2. Test v 5 minutách
Bylo připraveno šest vzorků mléka obsahujících postupně koncentrace 0; 2; 4; 6; 8 a 10Ί0~9 cloxacilinu. Každý z těchto roztoků byl potom analyzován následujícím způsobem:
Odebere se alikvot 200 μΐ vzorku mléka a 45,27 μΐ roztoku připraveného v příkladu 3.1.3, které se umístí do skleněné baňky. Směs se inkubuje po 3 minuty při teplotě 47 °C. Testovací zařízení se umístí vertikálně do skleněné baňky tak, aby byl první konec testovacího zařízení v kontaktu se směsí a aby druhý konec spočíval na stěně skleněné baňky. Směs se ponechá migrovat testovacím zařízením a soubor se nechá inkubovat po 2 minuty při teplotě 47 °C.
Níže uvedená Tabulka 2 udává výsledky získané pro 6 vzorků, které byly testovány. Detekovaným pruhům byla přiřazena intenzita v rozmezí od 0 do 10, přičemž hodnota 10 znamená nejin50 tenzivnější pruh a hodnota 0 znamená nejméně intenzivní pruh. V této stupnici byla hodnota 6 přirazena referenčnímu pruhu. Intenzita signálu pozorovaného v prvním detekčním pruhu je nepřímo úměrná množství cloxacilinu, který je přítomen ve vzorku.
Tabulka 2
| Penicilín G | Intenzita | |
| (x ÍO“9) | 1. pruh | 2. pruh |
| 0 | 10 | 6 |
| 2 | 6 | 6 |
| 4 | 5 | 6 |
| 6 | 3 | 6 |
| 8 | 3 | 6 |
| 10 | 3 | 6 |
V tomto příkladu pokud byl první pruh méně intenzivní než druhý pruh, byl test považován za pozitivní. Výsledky uvedené v Tabulce 2 ukazují, že test dovoluje detekovat za 5 minut méně než
4 10 9 cloxacilinu ve vzorku mléka.
Testy byly také prováděny s dalšími antibiotiky s β-laktamovým jádrem za stejných podmínek. Tento test, trvající 5 minut dovoluje detekovat penicilín G až do koncentrace 3-10'9, amoxiciiin až do 4Ί0'9, ampicilin až do 410 9, dicloxacilin až do 8109, oxacilin až do 8-10“9, cefapirin až do 16-10'9, ceftiofur až do 100-10-9, cefchinon méně než 20‘ 10'9, nafcilin až do 20· 10-9 a cefazolin až do 60-10“9 ve vzorku mléka.
Tento test je obzvláště vhodný jako test před vypouštěním kamionů mléka do nádrží.
1,3,3. Test v 9 minutách
Bylo připraveno 6 vzorků čerstvého mléka obsahujících postupně koncentrace 0; 4; 6; 8; 10 a 12-109 cefapirinu. Každý z těchto roztoků byl potom analyzován následujícím způsobem.
Odebere se alikvot 200 μΐ vzorku mléka a 45,27 μΐ roztoku připraveného v příkladu 3,1.3, které se umístí do skleněné baňky. Směs se inkubuje po 7 minut při teplotě 47 °C, Testovací zařízení se umístí vertikálně do skleněné baňky tak, aby byl první konec testovacího zařízení v kontaktu se směsí a aby druhý konec spočíval na stěně skleněné baňky. Směs se ponechá migrovat testovacím zařízením a soubor se nechá inkubovat po 2 minuty při teplotě 47 °C.
Níže uvedená Tabulka 3 udává výsledky získané pro 6 vzorků, které byly testovány. Detekovaným pruhům byla přirazena intenzita v rozmezí od 0 do 10, přičemž hodnota 10 znamená nej intenzivnější pruh a hodnota 0 znamená nejméně intenzivní pruh. V této stupnici byla hodnota 6 přiřazena referenčnímu pruhu. Intenzita signálu pozorovaného v prvním detekčním pruhu je nepřímo úměrná množství cefapirinu, kterýje přítomen ve vzorku.
Tabulka 3
| Penicilín G | Intenzita | |
| (x ÍO 9) | 1. pruh | 2. pruh |
| 0 | 10 | 6 |
| 4 | 6 | 6 |
| 6 | 5 | 6 |
| 8 | 4 | 6 |
| 10 | 3 | 6 |
| 12 | 3 | 6 |
V tomto příkladu pokud byl první pruh méně intenzivní než druhý pruh, byl test považován za pozitivní. Výsledky uvedené v Tabulce 3 ukazují, že test dovoluje detekovat za 9 minut až do
6-10’9 cefapirinu ve vzorku mléka.
Testy byly také prováděny s dalšími antibiotiky s β-laktamovým jádrem za stejných podmínek. Tento test, trvající 9 minut dovoluje detekovat penicilín G až do koncentrace 310-9, amoxicilin až do 4*109, ampicilin až do 4Ί0 , cloxacilin až do 4-109, dicloxacilin méně než 8·1(Γ9, oxacilin méně než 810”9, ceftiofur až do 80-10”9, cefchinon méně než 20· 10“9, nafcilin méně než 2010“9 a cefazolin až do 4510’9 ve vzorku mléka.
io
Tento test, prováděný za 9 minut tedy dovoluje detekovat všechna antibiotika kontrolovaná v současné době evropskými úřady a to až do zákonných limitů, stanovených těmito úřady.
1.3.4. Test ve 20 minutách
Bylo připraveno šest vzorků čerstvého mléka obsahujících postupně koncentrace 0; 20; 30; 40; 50 a 60-10-9 ceftiofuru. Každý z těchto roztoků byl potom analyzován následujícím způsobem:
Odebere se alikvot 200 μΐ vzorku mléka a 45,27 μΐ roztoku připraveného v příkladu 3.1.3, které se umístí do skleněné baňky. Směs se inkubuje po 18 minut při teplotě 47 °C. Testovací zařízení se umístí vertikálně do skleněné baňky tak, aby byl první konec testovacího zařízení v kontaktu se směsí a aby druhý konec spočíval na stěně skleněné baňky. Směs se ponechá migrovat testovacím zařízením a soubor se nechá inkubovat po 2 minuty při teplotě 47 °C.
Níže uvedená Tabulka 4 udává výsledky získané pro 6 vzorků, které byly testovány. Detekovaným pruhům byla přiřazena intenzita v rozmezí od 0 do 10, přičemž hodnota 10 znamená nej intenzivnější pruh a hodnota 0 znamená nejméně intenzivní pruh. V této stupnici byla hodnota 6 přiřazena referenčnímu pruhu. Intenzita signálu pozorovaného v prvním detekčním pruhu je nepřímo úměrná množství ceftiofuru, kterýje přítomen ve vzorku.
Tabulka 4
| Penicilín G | Intenzita | |
| (x io-9) | 1. pruh | 2. pruh |
| 0 | 10 | 6 |
| 20 | 6 | 6 |
| 30 | 5 | 6 |
| 40 | 4 | 6 |
| 50 | 3 | 6 |
| 60 | 3 | 6 |
V tomto příkladu pokud byl první pruh méně intenzivní než druhý pruh, byl test považován za pozitivní. Výsledky uvedené v Tabulce 4 ukazují, že test dovoluje detekovat za 20 minut až do
3 0 1 0“9 cefapirinu ve vzorku mléka. Tento test ve 20 minutách tedy dovoluje detekovat v jediném testu všechna antibiotika kontrolovaná v současné době evropskými a americkými úřady a to až do zákonných limitů, stanovených těmito úřady.
Příklad 4. Použití testovacího zařízení v plastovém obalu. Používá se testovací zařízení, které bylo popsáno v příkladu 1.6. V tomto případě se uvedení vzorku do kontaktu s testovacím zařízením provádí nanesením inkubované směsi otvorem ve tvaru misky, která byla k tomuto účelu vytvořena.
Claims (15)
1. Způsob detekce analytu v tekutém mléčném produktu testovacím zařízením, které zahrnuje pevný nosič (1), který má první okraj a druhý okraj, na kterém jsou připevněny, postupujíce od prvního okraje, membrána (2), umožňující purifikaci analyzované kapaliny; io membrána (3), na které jsou imobilizovány jedna nebo více záchytných látek; a absorpční membrána (4), vyznačující se tím, že zahrnuje následuj ící kroky:
uvedení analyzovaného mléčného produktu do kontaktu s detekčním činidlem, schopným specificky rozpoznávat analyt nebo látku analogickou analytu;
15 inkubaci směsí za inkubačních podmínek, které dovolují vytvoření stabilního a v zásadě ireverzibilního komplexu mezi analytem, který je přítomen v tekutém mléčném produktu, a detekčním činidlem;
umístění směsi na první okraj testovacího zařízení;
umožnění tečné kapilární migrace tekutiny testovacím zařízením; a
20 detekci analytu v tekutém mléčném produktu určením množství detekčního činidla komplexovaného s analytem a fixovaného na membráně (3).
2. Způsob podle nároku 1, ve kterém detekční činidlo navíc obsahuje alespoň jednu referenční substanci.
3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, ve kterém analytem je tetracyklin,
4. Způsob podle nároku 1 nebo 2, ve kterém analytem je buď exogenní protein tekutého mléčného produktu nebo endogenní protein mléčného produktu.
5. Způsob podle nároku 4, ve kterém analytem je hormon.
6. Způsob podle nároku 1 nebo 2, ve kterém analytem je antibiotikum s β-laktamovým kruhem.
7. Způsob podle nároku 1 nebo 2, ve kterém analyt je zvolen ze souboru zahrnujícího benzylpenicílin, penicilín G, ampicilin, amoxicilin, karbenicilin, methylcilin, cloxacilin, 6-APA, monolaktam, aztreonam, mecillinam, cefalexin, cefaloglycin, cefaloridin, nitrocefin, cefatoxim, cefuroxim, ceftiofur, cefapyrin, 7-ACA.
8. Způsob podle nároků 1 až 7, ve kterém detekční činidlo, schopné specificky rozpoznávat analyt nebo látku analogickou tomuto analytu, je zvoleno ze souboru zahrnujícího receptoiy schopné vytvoření stabilního a v zásadě ireverzibilního komplexu s analytem nebo látku analogickou tomuto analytu a monoklonální nebo polyklonální protilátky specifické pro analyt nebo
45 látku analogickou tomuto analytu.
9. Způsob podle nároku 8, ve kterém detekčním činidlem schopným specificky rozpoznávat analyt nebo látku analogickou tomuto analytu je receptor získaný z mikroorganismu citlivého na antibiotika, jako jsou receptory získané z organismů druhů Bacillus, Streptococus nebo
50 Actinomycetes,
10. Testovací zařízení umožňující detekování přítomnosti zkoumaných látek v tekutém mléčném produktu způsobem podle kteréhokoli z nároků 1 až 9 na základě kapilární tečné migrace uvedeného mléčného produktu, kde zařízení zahrnuje pevný nosič (1), který má první okraj a druhý okraj, na kterém jsou připevněny, postupujíce od prvního okraje,
5 membrána (2), umožňující purifikaci analyzované kapaliny;
membrána (3), na které jsou imobilizovány jedna nebo více záchytných látek; a absorpční membrána (4), vyznačující se tím, že membrána (2) je vytvořena z netkaných polyesterových vláken a je schopná zadržovat látky přítomné v mléčném produktu, které zabraňují migraci zkoumaných ío látek, popřípadě přítomných v mléčném produktu, a detekčních činidel, použitých v prováděném způsobu, testovacím zařízením, a to během kapilární tečné migrace vzorku po navlhčení prvního okraje testovacího zařízení analyzovaným mléčným produktem.
11. Testovací zařízení podle nároku 10, vyznačující se tím, že membrána (3) je is z nitrocelulózy.
12. Testovací zařízení podle nároku 10, vyznačující se tím, že membrána (4) je z celulózy,
20
13. Testovací zařízení podle nároků 10 az 12, vyznačující se tím, že obsahuje další membránu (5), na kterou bylo naneseno alespoň jedno detekční činidlo, přičemž membrána (5) je umístěna před membránou (3).
14. Testovací zařízení podle jakéhokoliv nároku 10ažl3, vyznačující se tím, že
25 membrány jsou úplně nebo částečně zakiyty adhezivní plastovou fólií (6).
15. Testovací zařízení podle nároku 14, vyznačující se tím, že plastová fólie (6) nezakrývá okraje nosiče (1).
30 16. Testovací zařízení podle jakéhokoliv nároku 10 až 13, vyznačující se tím, že je umístěno do plastového obalu, který obsahuje jeden otvor s okraji ve tvaru misky nad membránou (2) a jedno okénko nad membránou (3).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE9700807A BE1011487A3 (fr) | 1997-10-07 | 1997-10-07 | Dispositif d'essai pour la determination d'analytes dans un produit laitier liquide. |
| BE9800485A BE1012049A6 (fr) | 1998-06-25 | 1998-06-25 | Procede pour la determination d'antibiotique a noyau beta-lactame dans un liquide biologique. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20001059A3 CZ20001059A3 (cs) | 2000-09-13 |
| CZ301093B6 true CZ301093B6 (cs) | 2009-11-04 |
Family
ID=25663116
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20001059A CZ301093B6 (cs) | 1997-10-07 | 1998-10-06 | Zpusob detekce analytu v tekutém mlécném produktu a testovací zarízení k provádení zpusobu |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20020127737A1 (cs) |
| EP (1) | EP1023603B1 (cs) |
| JP (2) | JP2001519533A (cs) |
| KR (1) | KR100614632B1 (cs) |
| CN (1) | CN1126956C (cs) |
| AR (1) | AR013671A1 (cs) |
| AT (1) | ATE297016T1 (cs) |
| AU (1) | AU738143B2 (cs) |
| BR (1) | BR9812876B1 (cs) |
| CA (1) | CA2305774C (cs) |
| CZ (1) | CZ301093B6 (cs) |
| DE (1) | DE69830416T2 (cs) |
| DK (1) | DK1023603T3 (cs) |
| ES (1) | ES2244083T3 (cs) |
| IL (1) | IL134939A (cs) |
| NO (1) | NO20001817D0 (cs) |
| NZ (1) | NZ503430A (cs) |
| PL (1) | PL191687B1 (cs) |
| PT (1) | PT1023603E (cs) |
| RU (1) | RU2206093C2 (cs) |
| SI (1) | SI1023603T1 (cs) |
| TR (1) | TR200000921T2 (cs) |
| WO (1) | WO1999018439A1 (cs) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE1012049A6 (fr) * | 1998-06-25 | 2000-04-04 | Ucb Bioproducts | Procede pour la determination d'antibiotique a noyau beta-lactame dans un liquide biologique. |
| ATE553219T1 (de) | 1999-04-20 | 2012-04-15 | Illumina Inc | Erkennung von nukleinsäurereaktionen auf bead- arrays |
| US6447657B1 (en) | 2000-12-04 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Biosensor |
| CA2452948C (en) * | 2001-07-18 | 2010-09-21 | Siliang Zhou | A test strip for a lateral flow assay for a sample containing whole cells |
| CN1300586C (zh) * | 2003-09-30 | 2007-02-14 | 江西中德生物工程有限公司 | 展青霉素免疫层析检测试纸的制作方法与应用 |
| US20080227220A1 (en) * | 2004-01-29 | 2008-09-18 | Maartje-Maria Franse | Lateral Flow Binding Assay |
| US8003407B2 (en) * | 2004-07-29 | 2011-08-23 | Relia Diagnostic Systems, Llc | Lateral flow system and assay |
| CN100356171C (zh) * | 2005-09-13 | 2007-12-19 | 中国农业科学院畜牧研究所 | 一种检测鲜牛奶和巴氏牛奶中还原奶的方法 |
| FR2918460B1 (fr) * | 2007-07-02 | 2013-10-04 | Najim Chaibi | Nouveau dispositif permettant l'obtention des resultats des systemes abo,rhesus et autres pherotypes et systemes rares, rai. |
| US8005280B2 (en) * | 2007-12-12 | 2011-08-23 | Jadak, Llc | Optical imaging clinical sampler |
| NZ596163A (en) * | 2009-04-15 | 2014-01-31 | Relia Diagnostic Systems Inc | Diagnostic devices and related methods |
| CN102478573A (zh) * | 2010-11-29 | 2012-05-30 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种评价乳制品检测中庆大霉素试纸条有效性的方法 |
| JP5693938B2 (ja) * | 2010-12-10 | 2015-04-01 | 旭化成株式会社 | 乳汁中の特定物質を検出する方法 |
| CA2851984C (en) * | 2011-10-14 | 2020-10-27 | Universite De Liege | Method for measuring beta-lactam antibiotics |
| BR112014010718B1 (pt) * | 2011-11-16 | 2020-12-22 | Becton, Dickinson And Company | métodos, sistemas, dispositivos e kits para detecção de analito em amostra |
| JP6162370B2 (ja) * | 2012-05-30 | 2017-07-12 | 古河電気工業株式会社 | イムノクロマトグラフィー用試験片 |
| RU2617400C2 (ru) * | 2012-06-13 | 2017-04-24 | Асахи Касеи Кабусики Кайся | Способ детекции специфического вещества в молоке |
| KR101429193B1 (ko) * | 2013-05-10 | 2014-08-13 | 호서대학교 산학협력단 | 클로르테트라사이클린에 특이적으로 결합하는 핵산 앱타머 |
| CN103897046A (zh) * | 2013-05-23 | 2014-07-02 | 华中农业大学 | β-内酰胺类抗生素残留检测的受体分析法与试剂盒 |
| CN104198699B (zh) * | 2014-09-04 | 2016-06-15 | 深圳市领治医学科技有限公司 | 一种快速诊断试纸及其制备方法 |
| JP6254994B2 (ja) * | 2014-11-18 | 2017-12-27 | 株式会社ニチレイバイオサイエンス | 検査キット |
| JP6940417B2 (ja) | 2015-02-27 | 2021-09-29 | マスタプレックス・リミテッド | 細菌の同定及び抗菌剤感受性試験 |
| WO2017139587A2 (en) | 2016-02-11 | 2017-08-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Anti-dengue virus ns1 protein monoclonal antibodies |
| CN106568965A (zh) * | 2016-10-14 | 2017-04-19 | 广州安诺食品科学技术有限公司 | 金胺o胶体金检测卡及其制备方法 |
| CA3006958C (en) | 2016-12-28 | 2022-10-04 | Frank Eric Klein | Implement analyzing device and method for utilizing the same |
| USD834721S1 (en) | 2017-03-03 | 2018-11-27 | Neogen Corporation | Assay cartridge |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0408222A1 (en) * | 1989-07-12 | 1991-01-16 | Kingston Diagnostics, L.P. | Device and method for separation of fluid components |
| US5160486A (en) * | 1988-12-19 | 1992-11-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Test carrier utilizing reaction of two bioaffine binding partners |
| WO1996015453A1 (en) * | 1994-11-14 | 1996-05-23 | Spectral Diagnostics Inc. | Method and device for determination of proteins employing antigen/antibody reactions |
| US5591645A (en) * | 1987-03-27 | 1997-01-07 | Becton, Dickinson & Co. | Solid phase chromatographic immunoassay |
| CZ285509B6 (cs) * | 1993-11-12 | 1999-08-11 | Unipath Limited | Analytické zařízení a jeho použití |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4239852A (en) * | 1978-06-12 | 1980-12-16 | Penicillin Assays, Inc. | Antibiotic detection method |
| CA1185881A (en) * | 1982-02-01 | 1985-04-23 | Jacques Degelaen | ENZYMATIC PROCESS FOR THE DETERMINATION OF .beta.-LACTAM ANTIBIOTICS |
| US4786594A (en) * | 1986-05-14 | 1988-11-22 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Enzyme immunoassay |
| US4918025A (en) * | 1987-03-03 | 1990-04-17 | Pb Diagnostic Systems, Inc. | Self contained immunoassay element |
| US5234813A (en) * | 1989-05-17 | 1993-08-10 | Actimed Laboratories, Inc. | Method and device for metering of fluid samples and detection of analytes therein |
| GB9009692D0 (en) * | 1990-04-30 | 1990-06-20 | Ucb Bioproducts | An enzymatic method of determining beta-lactam ring antibiotics |
| US5648274A (en) * | 1991-05-29 | 1997-07-15 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Competitive immunoassay device |
| WO1993018398A1 (en) * | 1992-03-10 | 1993-09-16 | Quidel Corporation | Red blood cell separation means for specific binding assays |
| AU3483495A (en) * | 1994-09-28 | 1996-04-19 | Spectral Diagnostics Inc. | Method and device for determination of proteins |
| US5662813A (en) * | 1994-10-21 | 1997-09-02 | Bioseparations, Inc. | Method for separation of nucleated fetal erythrocytes from maternal blood samples |
| JPH08285849A (ja) * | 1995-04-14 | 1996-11-01 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 簡易測定装置およびこれを用いる測定方法 |
| US5712172A (en) * | 1995-05-18 | 1998-01-27 | Wyntek Diagnostics, Inc. | One step immunochromatographic device and method of use |
| AU709896B2 (en) * | 1995-05-02 | 1999-09-09 | Armkel Llc | A method of making a laminated substrate |
| CN1155827C (zh) * | 1995-05-09 | 2004-06-30 | 贝克曼考尔特公司 | 将血液的液体部分与血液的细胞成分分离的装置和方法 |
| US5981294A (en) * | 1995-11-29 | 1999-11-09 | Metrika, Inc. | Device for blood separation in a diagnostic device |
| US5821073A (en) * | 1996-05-09 | 1998-10-13 | Syntron Bioresearch, Inc. | Method and apparatus for single step assays of whole blood |
| US6001658A (en) * | 1996-09-13 | 1999-12-14 | Diagnostic Chemicals Limited | Test strip apparatus and method for determining presence of analyte in a fluid sample |
| US5958714A (en) * | 1996-10-02 | 1999-09-28 | Safety Associates, Inc. | Test kits for determining at least two specific analytes in foods and other complex matrices |
| ES2323540T3 (es) * | 1997-07-16 | 2009-07-20 | Charm Sciences Inc. | Metodo para detectar la presencia de un analito residual en una muestra. |
| US5985675A (en) * | 1997-12-31 | 1999-11-16 | Charm Sciences, Inc. | Test device for detection of an analyte |
-
1998
- 1998-10-06 KR KR1020007003770A patent/KR100614632B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 CN CN98809987A patent/CN1126956C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-06 EP EP98947242A patent/EP1023603B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-06 SI SI9830788T patent/SI1023603T1/sl unknown
- 1998-10-06 RU RU2000109556/13A patent/RU2206093C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 PL PL339901A patent/PL191687B1/pl unknown
- 1998-10-06 WO PCT/BE1998/000147 patent/WO1999018439A1/fr active IP Right Grant
- 1998-10-06 ES ES98947242T patent/ES2244083T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-06 AU AU94248/98A patent/AU738143B2/en not_active Ceased
- 1998-10-06 DK DK98947242T patent/DK1023603T3/da active
- 1998-10-06 IL IL13493998A patent/IL134939A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 JP JP2000515181A patent/JP2001519533A/ja not_active Withdrawn
- 1998-10-06 NZ NZ503430A patent/NZ503430A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 PT PT98947242T patent/PT1023603E/pt unknown
- 1998-10-06 DE DE69830416T patent/DE69830416T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-06 BR BRPI9812876-0A patent/BR9812876B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 CA CA2305774A patent/CA2305774C/fr not_active Expired - Fee Related
- 1998-10-06 CZ CZ20001059A patent/CZ301093B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 TR TR2000/00921T patent/TR200000921T2/xx unknown
- 1998-10-06 AT AT98947242T patent/ATE297016T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-10-06 US US09/297,196 patent/US20020127737A1/en not_active Abandoned
- 1998-10-07 AR ARP980104995A patent/AR013671A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-04-07 NO NO20001817A patent/NO20001817D0/no not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-11-07 US US10/702,507 patent/US20040096356A1/en not_active Abandoned
-
2009
- 2009-03-25 JP JP2009074530A patent/JP2009133877A/ja active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5591645A (en) * | 1987-03-27 | 1997-01-07 | Becton, Dickinson & Co. | Solid phase chromatographic immunoassay |
| US5160486A (en) * | 1988-12-19 | 1992-11-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Test carrier utilizing reaction of two bioaffine binding partners |
| EP0408222A1 (en) * | 1989-07-12 | 1991-01-16 | Kingston Diagnostics, L.P. | Device and method for separation of fluid components |
| CZ285509B6 (cs) * | 1993-11-12 | 1999-08-11 | Unipath Limited | Analytické zařízení a jeho použití |
| WO1996015453A1 (en) * | 1994-11-14 | 1996-05-23 | Spectral Diagnostics Inc. | Method and device for determination of proteins employing antigen/antibody reactions |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ301093B6 (cs) | Zpusob detekce analytu v tekutém mlécném produktu a testovací zarízení k provádení zpusobu | |
| US5126276A (en) | Method for the determination and measurements of more than one unknown material in a single surface of a multianalytic assay | |
| KR920009420B1 (ko) | 고체상 분석장치 및 이를 이용하는 방법 | |
| US20080090262A1 (en) | Method to simultaneously detect different antibodies and antigens in clinical alimentary and environmental samples | |
| EP0171150B1 (en) | Method and apparatus for assaying with optional reagent quality control | |
| US8106155B2 (en) | Test kit for determining process for determining antibiotics containing a beta-lactam ring in a biological fluid | |
| WO1994002850A1 (en) | Transparent assay test devices and methods | |
| BE1011487A3 (fr) | Dispositif d'essai pour la determination d'analytes dans un produit laitier liquide. | |
| CA2570383C (en) | Filter device, the method, kit and use thereof | |
| MXPA00003325A (en) | Testing device for determining analytes in a liquid dairy product | |
| CN108463726B (zh) | 检测分析物的方法 | |
| JP2004177321A (ja) | 微量検出方法及び装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20141006 |