[go: up one dir, main page]

CZ296908B6 - Antineoplastické peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití - Google Patents

Antineoplastické peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití Download PDF

Info

Publication number
CZ296908B6
CZ296908B6 CZ0184698A CZ184698A CZ296908B6 CZ 296908 B6 CZ296908 B6 CZ 296908B6 CZ 0184698 A CZ0184698 A CZ 0184698A CZ 184698 A CZ184698 A CZ 184698A CZ 296908 B6 CZ296908 B6 CZ 296908B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
nhch
nhc
xab
residue
och
Prior art date
Application number
CZ0184698A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ184698A3 (cs
Inventor
Amberg@Wilhelm
Barlozzari@Teresa
Bernard@Harald
Buschmann@Ernst
Haupt@Andreas
Hege@Hans-Guenther
Janssen@Bernd
Kling@Andreas
Lietz@Helmut
Ritter@Kurt
Ulrich@Martina
Weymann@Jürgen
Zierke@Thomas
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co. Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co. Kg
Publication of CZ184698A3 publication Critical patent/CZ184698A3/cs
Publication of CZ296908B6 publication Critical patent/CZ296908B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/10—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using coupling agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Antineoplastické peptidy obecného vzorce I R.sup.1.n.R.sup.2.n.N-CHX-CO-A-B-D-E-K (I), ve kterémR.sup.1.n. predstavuje methyl; R.sup.2.n. predstavuje methyl; A predstavuje valylový zbytek, B predstavuje N-methyl-valylový zbytek; D predstavuje prolylový zbytek; E predstavuje prolylový zbytek; a symbol K má specifický význam. Popisuje se rovnez zpusob prípravy peptidu vzorce I, pri kterém jsou peptidy sestaveny sekvencne z aminokyselin pocínaje od C-konce peptidu s R.sup.1.n.R.sup.2.n.N-CHX-CO a peptidový retezec je postupne rozsirován spojením C-konce karbonylu se zbytkem A, potom se zbytkem B, potom se zbytkem D a potom se zbytkem E, pricemz C-konec zbytku E je poprípade derivatizován skupinou K pred a po kopulaci nebo se vhodne spojí malé peptidové fragmenty.

Description

Oblast techniky
Vynález se týká antineoplastických peptidů, způsobu jejich přípravy a jejich použití.
Dosavadní stav techniky
Nárokované deriváty peptidů nabízejí potenciálně vylepšené terapeutické použití při léčbě neoplastických onemocnění, ve srovnání s dolastatinem-10 a -15 jak popisuje dokument US 4 879 276 a US 4 816 444 a se sloučeninami popsanými ve spise WO 93/23424.
Podstata vynálezu
Sloučeniny podle předloženého vynálezu popisují neoplastické peptidy. Podstatou vynálezu jsou peptidy obecného vzorce I
RW-CHX-CO-A-B-D-E-K (I), ve kterém
R1 představuje methyl;
R2 představuje methyl;
A představuje valylový zbytek,
B představuje N-methyl-valylový zbytek;
D představuje prolylový zbytek;
E představuje prolylový zbytek;
X představuje isopropyl;
K představuje
-NHC(CH3)3, -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)C(CH3)3, -N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3, -N(CH3)OCH(CH3)2, -N(CH3)O(CH2)3CH3, -N(CH3)OCH2C6H5,
-NHC(CH3)2C6H5, -NHC(CH3)2CH2CH3, -NHC(CH3)(CH2CH3)2, -NHCH[CH(CH3)2]2,
-NHC(CH3)2CN, -NHCH(CH3)CH(OH)C6H5, -NH-C(CH3)2CH=CH2, -NHC(CH3)2C=CH, -NHC(CH2CH3)2C=CH, -NHC(CH3)2CH2CH2OH, -NHC(CH3)2CH2CH2CH3,
-NHC(CH3)2CH2C6H5, -N(OCH3)CH(CH3)2, -N(OCH3)CH2CH3, -N(OCH3)CH2CH2CH3, -N(OCH3)CH2C6H5, -N(OCH3)C6H5, -N(CH3)OC6Hs, N(OCH3)CH2CH2CH2CH3, -NHCH(CH3)CH2CH3, -NHcyklohexyl, -NHcykloheptyl.
nebo K představuje
NHCH(CH2CH3)2, NHCH(CH3)CH(CH3)2, NHC(CH3)2CH(CH3)2, NHCH(CH2CH2CH3)2 a NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3, NHCH(CH3)2 nebo K představuje
-1 CZ 296908 B6
nebo K představuje
—NH
-NH
CHjCBj oť
CONFh
CHj —WH - — CO —’ NH— CH-r- ch2— ch3
CHS a jeho sole s fyziologicky přijatelnými kyselinami.
Předmětem vynálezu je i použití výše uvedené sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné sole pro přípravu léčiva k léčení nemocí, kde nemocí je rakovina.
Dalším předmětem vynálezu je způsob přípravy peptidů obecného vzorce I, kdy peptidy jsou sestaveny sekvenčně z aminokyselin počínaje od C-konce peptidu s R’R2N-CHC-CO a peptidový řetězec je postupně rozšiřován spojením C-konce karbonylu se zbytkem A, potom se zbytkem B, potom se zbytkem D a potom se zbytkem E, přičemž C-konec zbytku E je popřípadě derivatizován skupinou K před a po kopulaci;
nebo se vhodně spojí malé peptidové fragmenty, kde symboly A, B, D, Ε, X, R1 a R2 mají význam uvedený výše.
Není-li uvedeno jinak, jsou významy zkratek použitelných vtextu následující:
Ph fenyl
Z benzyloxykarbonyl
Boc t-butoxykarbonyl
Fmoc N-alfa-(9-fluorenylmethyloxykarbonyl)
EDCI hydrochlorid 1 -ethyl-3-(3 '-dimethylaminopropyljkarbodiimidu
DCC 1,3-dicyklohexylkarbodiimid
DID N,N'-diisopropylkarbodiimi
EEDQ Ethyl-2-ethoxy-l,2-dihydro-l-chinolinkarboxylát
-2CZ 296908 B6
PPA cyklický anhydrid kyseliny 1-propanfosfonové
BOP-C1 Bis(2-oxo-3-oxozonilidyl)-fosfonium chlorid
PyBrop brom-tris-pyrrolidino-fosfonium hexafluorfosfát
BOP benzotriazol-l-yloxytris(di-dimethylamino)fosfonium hexafluorfosfát
PyBop l-benzotriazolyloxytris(pyrrolidino)fosfonium hexafluorfosfát
DPPA kyselina dipalmitoylfosfatidová
HBTU 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-l, 1,3,3-tetramethyluronium hexafluorfosfát
HATU O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l, 1,3,3-tetramethyluronium hexafluorfosfát
DEPCN diethylfosforylkyanid
HOTDO 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxythiofen dioxid
CDI N,N'-karbonyldiimidazol
DMAP (dimethylamino)pyridin
HOBt monohydrát N-hydroxybenzotriazolu
HOOBt 3,4—dihydro-3-hydroxy-4-oxo-l ,2,3-benzotriazin
HOSu N-hydroxysukcinimid
EDCI hydrochlorid l-ethyl-3-(3'-dimethylaminopropyl)karbodiimidu
HOBt monohydrát N-hydroxybenzotriazolu
Pd/C paládium na uhlíku.
Tento vynález též poskytuje metody přípravy sloučenin o vzorci I, farmaceutických sloučenin obsahujících takovéto sloučeniny společně s farmaceuticky přijatelným nosičem a metody použití těchto sloučenin pro léčbu rakoviny u savců.
Tyto nové sloučeniny mohou být přítomné jako soli fyziologicky tolerantních kyselin jakými jsou: kyselina chlorovodíková, kyselina citrónová, kyselina vinná, kyselina mléčná, kyselina fosforečná, kyselina methansulfonová, kyselina octová, kyselina mravenčí, kyselina maleinový, kyselina fumarová, kyselina jablečná, kyselina jantarová, kyselina malonová, kyselina sírová, kyselina L-glutamová, kyselina L-aspartová, kyselina pyrohroznová, kyselina slizová, kyselina benzoová, kyselina glukoronová, kyselina šťavelová, kyselina askorbová a acetylglycin.
Nové sloučeniny lze připravit známými metodami peptidové chemie. Tak např., peptidy lze sestavit sekvenčně z aminokyselin nebo spojením malých peptidových fragment. V sekvenčním spojování se začíná s C-konce a peptidový řetězec je postupně rozšiřován přidáváním jedné aminokyseliny. V fragmentovém spojování je možné spojovat dohromady fragmenty o rozdílných délkách a tyto fragmenty lze naopak získat sekvenčním spojováním z aminokyselin nebo fragmentovým spojováním ještě menších fragmentů.
Jak v sekvenčním spojování tak i ve spojování fragmentovém je nutný jednotlivé jednotky spojovat vytvářením amidové vazby. Pro toto jsou vhodné enzymatické i chemické metody.
Chemické metody tvoří amidovou vazbu jsou podrobně popsány Muellerem, Methoden der organischen Chemie Vol. XV/5, str. 1-364, Thieme Verlag, Sutgart, 1974; Stewart, Young, Solid Phase Peptide Synthesis., str. 31-34, 71-82, Pierce Chemical Company, Rockford, 1984; Bodanszky, Klausner, Ondetti, Peptide Synthesis, str. 85-128, John Wiley & Sons, New York, 1976; The Practice of Peptide Synthesis, M. Bodanszky, A. Bodanszky, Springer - Verlag, 1994 a další standardní práce pojednávající i peptidové syntéze. Speciálně jsou používány azidová metoda, metoda symetrických a smíšených anhydridů, metoda esterů generovaných in šitu nebo
-3CZ 296908 B6 esterů aktivních, použití urethanu chráněného N-karboxyanhydridy aminokyselin a vytváření amidové vazby užitím spojovacích prostředků, speciálně pak dicyklohexylkarbodiimídu (DCC), diisopropylkarbodiimidu (DIC), l-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinu (EEDQ), pivaloylchloridu, hydrogenchloridu l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (EDCI), anhydridu kyseliny n-propanfodfonové (PPA), N,N-bis(2-oxo-3-oxazolodinyl)-amido fosforylchloridu (BOP-C1), bromo-tris-pyrrolidinofosfonium hexafluorofosfátu (PyBrop), difenylfosforylazidu (DPPA), Castrova činidla (BOP, PyBop), O-benzotriazolyl-N,N,N',N'-tetramethyluroniových solí (HBTU), 0-azabenzotríazolyl-N,N,Nř,N'-tetramethyluroniových solí (HATU), diethylfosforylkyanidu (DEPCN), 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxythiofenoxidu (Steglichovo činidlo; HOTDO) a l,l'-karbonyldiimidazolu (CDI). Spojovací činidla lze použít samostatně nebo v kombinaci s přídavnými látkami jakými jsou N,N-dimethyl-4-aminopyridin (DMAP), N-hydroxybenzotriazol (HOBt), N-hydroxybenzotriazin (HOOBt), azabenzotriazol, N-hydroxysukcinimid (HOSu) nebo 2-hydroxypyridin.
Jestliže je zcela možné odstranit chránící skupiny v enzymatické peptidové syntéze, tak reverzibilní ochrana reaktivních skupin nezahrnutých do tvorby amidové vazby je nutná pro oba reaktanty v chemické syntéze. Při peptidové syntéze je přednost dávána třem konvenčním technikám chránění: technika benzyloxykarbonylová (Z), t-butoxykarbonylová (Boc) a 9-fluorenylmethoxykarbonylová (Fmoc).
V každém případě je identifikována chránící skupina na alfa-aminoskupině jednotky rozšiřující řetězec. Detailní přehled chránících skupin aminokyselin loze nalézt v Mueller, Methoden der organischen Chemie Vol. XV/1 str. 20-906, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974. Jednotky používané pro spojování peptidového řetězce mohou reagovat v roztoku, suspenzi nebo pomocí metody popsané Merrifeldem v J. Amer. Chem. Soc. 85 (1963) 2149.
Vhodná rozpouštědla pro peptidovou syntézu v roztoku jsou všechna rozpouštědla, která jsou inertní za daných reakčních podmínek, speciálně pak voda, Ν,Ν-dimethylformamid (DMF), dimethylsulfoxid (DMSO), acetonitril, dichlormethan, (DCM), ethylacetát, 1,4-dioxan, tetrahydrofuran (THF), N-methyl-2-pyrrolidin (NMP) a lze též použít jejich směsi.
Peptidovou syntézu na polymerním nosiči lze provádět ve všech inertních organických rozpouštědlech, ve kterých jsou použití deriváty aminokyselin rozpustné. Avšak upřednostňovaná rozpouštědla mají též takové vlastnosti, že bobtnají pryskyřice, takovýmito rozpouštědly jsou DMF, DCM, NMP, acetonitril a DMSO a též směsi těchto rozpouštědel. Poté, co je syntéza dokončená, tak je peptid odštěpen od polymerního nosiče. Podmínky, za kteiých je odštěpení peptidu od rozdílných typů pryskyřic provedeno, jsou možné najít v literatuře. Nejčastěji používané odštěpující reakce jsou katalyzované kyselinami a paladiem, speciálně lze použít kapalný bezvodý fluorovodík, bezvodá kyselina trichlormethansulfonová, zředěná nebo koncentrovaná kyselina trifluoroctová, odštěpení katalyzované paladiem v THF nebo směsích THF-DCM lze provést v přítomnosti slabých bází jako je morfolin, odštěpení lze též provést ve směsích kyseliny octové/dichlormethanu/trifluorethanolu. V závislosti na chránící skupině, ty lze buď zachovat nebo za daných podmínek odštěpit.
Částečná sejmutí chránící skupiny peptidu může být užitečné, pokud mají být provedeny jisté derivatizační reakce.
Peptidy dialkylované na N-koncích lze připravit buď spojováním na vhodných N,N-di-alkylaminokyselinách v roztoku nebo na polymerním nosiči, reduktivní alkylaci peptidu vázaného na pryskyřici vDMF/1% kyselině octové sNaCNBH3 a vhodnými aldehydy, hydrogenací peptidu v roztoku v přítomnosti aldehydu nebo ketonu a Pd/C.
Různé aminokyseliny, které se nevyskytují v přírodě, právě tak i části rozdílných aminokyselin zde uvedených lze získat z komerčních zdrojů nebo mohou být syntetizovány z komerčně dostupných materiálů použitím metod, které jsou známé zkušeným v oboru. Např. stavební jednotky
-4CZ 296908 B6 aminokyselin se skupinami R1 a R2 lze připravit podle E. Wuensch, Meth. d. Org. Chem., Bd XV,
1, od str. 306, Thieme Verlag, Stuttgart 1974 a literatura tam citovaná.
Sloučeniny tohoto vynálezu lze použít k inhibování nebo k jinému druhu léčby pevných nádorů (např. nádory plic, prsu, tlustého střeva, prostaty, žlučníku, konečníku nebo endometriálních nádorů) nebo zhoubných nádorů krve (např. leukémie, nádory lymfatických uzlin) podáváním sloučeniny savci.
Velkou výhodou těchto nových sloučenin je, že jsou vysoce odolné vůči enzymatické degradaci a dají se též podávat ústně.
Podávání lze provádět jakýmkoliv prostředkem, který je běžný pro podávání léků, zvláště pak onkologických činidel, včetně orálních nebo parenterálních způsobů, jako subkutánně, intravenózně, intramuskulámě nebo intraperitoneálně.
Sloučeniny lze podávat samostatně nebo ve formě farmaceutických sloučení obsahujících sloučeninu o vzorci I společně s farmaceuticky přijatelným nosičem vhodným pro žádaný způsob podávání. Takováto farmaceutická složení mohou být kombinační produkty, tj. mohou obsahovat jiné terapeuticky aktivní ingredienty.
Dávka podávání savci obsahuje účinné množství aktivní složky, která inhibuje tumor, toto množství závisí na konvenčních faktorech včetně biologické aktivity použité sloučeniny; na způsobu podávání; na věku, zdraví a tělesné váze příjemce; povaze a rozsahu symptomu; frekvenci léčby; podávání ostatních terapií a žádaném vlivu. Typická denní dávka je okolo 0,05 až 50 miligramů na kilogram tělesné váhy při orálním podávání a asi 0,01 až 20 mg na kilogram váhy při parenterální m podávání.
Tyto nové sloučeniny lze podávat v konvenčních pevných nebo kapalných farmaceutických lékových formách, např. nepotažených nebo filmem potažených tabletách, kapslích, prášcích, granulích, čípkách nebo roztocích. Tyto jsou připravovány konvenčním způsobem. Aktivní látky lze pro tento účel zpracovat pomocí konvenčních farmaceutických pomůcek, jako jsou pojivá, plniva, ochranné látky, tabletové dezintegrátory, regulátoru prostupu, změkčovadla, smáčedla, dispergátory, emulgátory, rozpouštědla, sloučeniny pro trvalé spouštění, antioxidanty a/nebo hnací plyny (srov. H. Sucker et al.: Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978). Formy pro podávání tímto způsobem běžně obsahují 1-90 hm. % aktivní látky.
Smyslem následujících příkladů je ilustrovat tento vynález. Aminokyseliny budující proteiny jsou v následujícím textu označeny zkratkami za použití třípísmenkového kódu. Další použité zkratky: Me2Val = Ν,Ν-dimethylvalin, MeVal = N-methylvalin.
Příklady provedení vynálezu
A. Obecné postupy
I. Peptidy nárokované v nároku 1 jsou syntetizovány buď klasickou syntézou v roztoku za použití standardní Z- a Boc-metodologie, tak jak je popsáno výše nebo standardními metodami syntézy v pevné fázi za použití technik Boc a Fmoc chránících skupin.
V případě syntézy v pevné fázi, kyseliny Ν,Ν-dialkypenta nebo hexapeptidů jsou uvolněny z pevného nosiče a dále spojeny v roztoku s příslušnými C-terminálními aminy. BOP-C1 aPyBrop byly použity jako činidla pro spojování aminokyselin, které následují N-methylaminokyseliny. Reakční časy byly odpovídajícím způsobem zvyšovány. Za účelem redukční alkylace N-konce byla odchráněna peptidová pryskyřice a byla provedena redukce s trojnásobným molárním přebytkem aldehydy nebo ketonu v DMF/1% kyselině octové přidáním
-5CZ 296908 B6 ekvivalentů NaCNBH3. Po skončení reakce (negativní Kaiserův test) byla pryskyřice několikrát promyta vodou, isopropanolem, DMF a dichlormethanem.
Při syntézách probíhajících v roztocích je nejvýhodnější použít bud’ Boc-chráněnou aminokyselinu NCAS (N-tórc.butyloxykarbonylaminokyselina-N-karboxyanhydridy), Zchráněnou aminokyselinu NCAs ((N-benzyloxykarbonyl-aminokyselina-N-karboxyanhydridy) nebo použít pivaloylchlorid jako kondenzující činidlo pro spojování aminokyseliny následující N-methylaminokyseliny. Reduktivní alkylace N-konců lze např. dosáhnout reakcí peptidů s odchráněnými N-konci nebo aminokyselin s odpovídajícími aldehydy nebo ketony za použití NaCNBH3 nebo vodíku, Pd/C.
Π. Čištění a charakterizace peptidů
Čištění bylo prováděno gelovou chromatografií (SEPHADEX G-10, G-15/10% HOAc, SEPHADEX LH20/MeOH), střednětlakovou chromatografií (stacionární fáze: HD-SIL C18, 20-45 mikron, 100 Angstroem; mobilní fáze: gradient s A=0,l% TFA/MeOH, B = 0,1% TFA/voda) nebo preparativní HPLC (stacionární fáze: Waters Delta-Pak C-l 8, 15 mikron, 100 Angstroem; mobilní fáze: gradient s A=0,l% TFA/MeOH, B=0,l% TFA/voda).
Čistota výsledných produktů byla určena analytickou HPLC (stacionární fáze: 100 2,1 mm VYDAC C-l 8, 5 1, 300 A; mobilní fáze: gradient acetonitril-voda s 0,1% TFA, 40 °C).
Charakterizace byla založena na analýze aminokyselin a hmotnostní spektroskopií s rychlým odstřelováním.
B. Specifické postupy (SEK ID Č: 1)
Příklad 1 (SEK ID Č: 1)
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
a) Z-MeVal-Pro-OMe
66,25 g (250 mmol) Z-MeVal-OH bylo rozpuštěno ve 250 ml suchého dichlormethanu. Po přidání 36,41 ml (262,5 mmol) triethylaminu byla reakční směs ochlazena na -25 °C a bylo přidáno 32,27 ml (262,5 mmol) pivaloylchloridu. Po míchání po dobu 2,5 h bylo přidáno 41,89 g (250 mmol) H-Pro-OMe x HC1 ve 250 ml dichlormethanu, který byl neutralizován 36,41 ml (262,5 mmol) triethylaminu při 0 °C. Míchání pokračovalo po dobu 2 h při 25 °C a dále přes noc při obyčejné teplotě. Reakční směs byla zředěna dichlormethanem a řádně promyta nasyceným vodním roztokem NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5% kyselinou citrónovou (3x) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla vysušena síranem sodným a odpařena do sucha. Zbytek (91,24 g) byl míchán přes noc v petroletheru a zfiltrován. Bylo získáno 62,3 g produktu.
b) H-MeVal-Pro-OMe
48.9 g (130 mmol) Z-MeVal-Pro-Ome bylo rozpuštěno ve 490 ml methanolu. Po okyselení
10.9 ml (130 mmol) koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a přidání 2,43 g 10% paladium/aktivní uhlí byla reakční směs hydrogenována. Filtrace a odpaření do sucha poskytly 36,43 g produktu.
-6CZ 296908 B6
c) Z-Val-MeVal-Pro-Ome
18,1 g (65 mmol) H-MeVal-Pro-Ome, 21,6 g (78 mmol) Z-Val-N-karboxyanhydridu a 22,8 ml (130 mmol) diisopropylethylaminu bylo mícháno ve 110 ml DMF při 40 °C po dobu dvou dní. Po odpaření DMF byl přidán dichlormethan a organická fáze byla promyta nasyceným vodním roztokem NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5% kyselinou citrónovou (3x) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla vysušena síranem sodným a odpařena do sucha. Produkt (29,3 g) byl získán ve formě viskózního oleje.
d) H-Val-MeVal-Pro-Ome
29,3 g (61,6 mmol) Z-Val-MeVal-Pro-Ome bylo rozpuštěno ve 230 ml methanolu. Po přidání 1,15 g 10% palladium/aktivní uhlí byla reakční směs hydrogenována. Filtrace a odpaření do sucha poskytly 21,96 g produktu.
e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe
15,29 g (61 mmol) Z-Val-OH a 21,96 g (61 mmol) H-Val-MeVal-Prt^Ome byly rozpuštěny v 610 ml dichlormethanu a směs byla ochlazena na 0 °C. Po přidání 8,16 ml (73,2 mmol) N-methylmorfolinu, 2,77 g (20,3 mmol) HOBt a 11,74 g (61 mmol) EDCI byly reakční směs míchána při obyčejné teplotě přes noc, zředěna dichlormethanem a řádně promyta nasyceným vodním roztokem NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5% kyselinou citrónovou (3x) a nasyceným roztokem NaCl. Organická fáze byla vysušena síranem sodným a odpařena do sucha za poskytnutí 31,96 g produktu.
f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH
31.96 g (57 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe bylo rozpuštěno ve 250 ml methanolu. Bylo přidáno 102,6 ml 1 N roztoku LiOH a směs se nechala míchat při obyčejné teplotě přes noc. Po přidání 500 ml vody byla vodní fáze třikrát promyta ethylacetátem, pH bylo nastaveno na 2 při 0 °C a třikrát extrahována ethylacetanem. Organická fáze byla vysušena síranem sodným a odpařena do sucha. Produkt (30,62 g) byl získán ve formě bílé tuhé látky.
g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,664 g (3,35 mmol) H-Pro-NHCH(CH3)2 bylo rozpuštěno ve 34 ml suchého dichlormethanu. Po ochlazení na 0 °C bylo přidáno 1,35 ml (12,11 mmol) N-methylmorfolinu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDCI a reakční směs byla míchána při obyčejné teplotě přes noc. Bylo přidáno 80 ml dichlormethanu a organická fáze byla řádně promyta nasyceným vodním roztokem NaHCO3 (3 x), vodou (lx), 5% kyselinou citrónovou (3x) a nasyceným roztokem NaCl (lx). Organická fáze byla vysušena síranem sodným a odpařena do sucha za poskytnutí 1,96 g produktu, který byl použit v další reakci bez dalšího čištění.
h) Me2Va1-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
1.96 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 bylo rozpuštěno v 11 ml methanolu. V dusíkové atmosféře bylo přidáno 0,054 g 10% Pd/C a reakční směs byla hydrogenována při obyčejné teplotě po dobu 4 h. Po přidání 0,86 ml (11,24 mmol) 37% vodního roztoku formaldehydu a 0,281 g 10% Pd/C hydrogenace pokračovala ještě 5 h. Filtrace a odpaření poskytly 2,77 g surového produktu. Další čištění bylo dosaženo rozpuštěním peptidu ve vodě, nastavením pH na 2 a extrahováním vodní fáze třikrát pomocí ethylacetátu. U vodní směsi bylo pH upraveno na 8-9 a tato fáze byla čtyřikrát extrahována dichlormethanem. Organická fáze byla vysušena síranem sodným za poskytnutí 1,37 g přečištěného produktu
-7CZ 296908 B6 ve formě bílé pěny. Sloučenina byla dále přečištěna použitím kapalinové chromatografie o středním tlaku (10-50 % A za 10 min.; 50-90 A za 320 min). Frakce obsahující produkt byly spojeny, lyofilizovány, znovu rozpuštěny ve vodě a PH bylo pomocí LiOH nastaveno na 9. Po extrakci s dichlormethanem byla organická fáze vysušena síranem sodným a odpařena do sucha. Lyofílizace vedla k 500 g čistého produktu, který byl charakterizován hmotnostní spektroskopií s rychlým ostřelováním ([M+H]+ = 593).
Příklad 2 (SEK ID Č.l)
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
i) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,692 g (3,35 mmol) H-Pro-NHCH(CH3)2 bylo rozpuštěno ve 34 ml suchého dichlormethanu. Po ochlazení na 0 °C bylo přidáno 1,35 ml (12,1 mmol) N-ethylmorfolinu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDCI a reakční směs byla míchána při obyčejné teplotě přes noc. Bylo přidáno 80 ml dichlormethanu a organická fáze byla řádně promyta nasyceným vodním roztokem NaHCO3 (3 x), vodou (lx), 5% kyselinou citrónovou (3x) a nasyceným roztokem NaCl (lx). Organická fáze byla vysušena síranem sodným a odpařena do sucha za poskytnutí 1,8 g produktu, který byl použiti v další reakci bez dalšího čištění.
k) Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
1,8 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 bylo rozpuštěno v 10 ml methanolu. V dusíkové atmosféře bylo přidáno 0,049 g 10% Pd/C a reakční směs byla hydrogenována při obyčejné teplotě po dobu 4 h. Po přidání 0,86 ml (11,24 mmol) 37% vodního roztoku formaldehydu a 0,252 g 10% Pd/C hydrogenace pokračovala ještě 5 h. Filtrace a odpaření poskytly 1,82 g surového produktu. Sloučenina byla dále přečištěna použitím kapalinové chromatografie o středním tlaku (10 - 50 % A za 10 min.; 50-90 % A za 320 min). Frakce obsahující produkt byly spojeny, lyofilizovány, znovu rozpuštěny ve vodě a pH bylo pomocí LiOH nastaveno na 9. Po extrakci s dichlormethanem byla organická fáze vysušena síranem sodným a odpařena do sucha. Lyofílizace vedla k 547 g čistého produktu, který byl charakterizován hmotnostní spektroskopií s rychlým ostřelováním ([M+H]+ = 607).
-8CZ 296908 B6
Podle příkladů 1 a 2 lze připravit následující sloučeniny:
3. Xaa val Xab Pro Xac
4. Xaa val Xab Pro Xad
5. Xaa Val Xab Pro Xae
6. Xaa val Xab Pro Xaf
7. Xaa Val Xab Pro Xag
8. Xaa val xab Pro xah
9. Xaa Val Xab Pro Xai
10. Xaa val Xab Pro Xak
11. Xaa Val Xab Pro xai
12. Xaa Val Xab Pro Xam
13. Xaa Val Xab Pro Xan
14. Xaa Val Xab Pro Xao
15. Xaa Val Xab Pro Xap
16. Xaa Val xab Pro Xaq
17. Xaa Val Xab Pro Xar
18. Xaa Val Xab Pro Xas
19. xaa Val Xab Pro Xat
20. Xaa Val Xab Pro Xau
21. Xaa Val Xab Pro Xav
22. Xaa Val Xab Pro Xaw
23. Xaa val Xab Pro Xax
24. Xdd Val Xab Pro Xay
25. Xaa val Xab Pro Xaz
26. Xaa Val Xab Pro Xba
27. Xaa Val Xab Pro Xbb
-9CZ 296908 B6
28. Xaa Val Xbc Pro Xay
29. Xaa Val Xab Pro Xbd
30. Xaa Val Xab Pro Xbe
31. Xaa Val Xab Pro Xbf
32. Xaa Val Xab Pro Xbg
33. Xaa Val Xab Pro Xbh
34. Xaa Val Xab Pro Xbi
35. Xaa Val Xab Pro Xbk
36. Xaa Val Xab Pro Xbl
37. Xaa Val Xab Pro Xbm
38. Xaa val Xab Pro Xbn
39. Xaa Val Xab Pro Xbo
40. Xaa Val Xab Pro Xbp
41. Xaa Val Xab Pro Xbq
42. Xaa Val Xab Pro Xbr
43. Xaa Val Xab Pro Xbs
44. Xaa Val Xab Pro Xbt
45. Xaa val Xab Pro Xbu
46- Xaa val Xab Pro Xbv
47. Xaa Val Xab Pro Xbw
48. Xaa val Xab Pro Xbx
49. Xaa Val Xab Pro Xby
50. Xaa val Xab Pro Xbz
51. Xaa Val Xab Pro Xca
52. Xaa Val Xab Pro Xcb
53. Xaa Val Xab Pro Xcc
54. Xaa Val xab Pro Xcd
55. Xaa Val Xab Pro Xce
56. Xaa Val Xab Pro Xcf
57. Xaa Xdf Xab Pro Xay
58. Xaa val xab Pro Xch
59. Xaa Val xab Pro Xci
60. Xaa Val Xab Pro xck
61. Xaa Val Xab Pro Xcl
62. Xaa Val Xab Pro Xcm
63. Xaa Val Xab Pro Xcn
64. Xaa Val Xab Pro Xco
65. Xaa Val Xab Pro Xcp
66. Xaa Val Xab Pro Xcq
67. Xaa Val Xab Pro Xcr
68. Xaa Val Xab Pro Xcs
69. Xaa Val Xab Pro Xct
70. Xaa Val Xab Pro Xcu
71. Xcw Val Xab Pro Xcv
72. Xcx Val Xab Pro Xcv
73. Xaa Val Xab Pro Pro Xcy
74. Xaa Val Xab Pro Pro Xcz
-10CZ 296908 B6
75. Xaa Val Xda Pro XCV
76. Xaa Xdb Xab Pro Xcv
77, Xde Val Xab Pro Xcv
78. Xaa Ile Xab Pro Xcv
79. Xdd Val Xab Pro Xcv
80. Xde Val Xab Pro XCV
81. Xaa Xdf Xab Pro XCV
82. Xaa Val Xab Pro Xcg
83. Xaa Val Xab Pro Pro Xdg
84. Xaa Val Xab Pro Pro Xdh
85. Xaa Val Xab Pro Pro Xdi
86. Xaa Val Xab Pro Pro Xdk
87. Xaa Val Xdl Pro Xcv
88. Xde Val Xab Pro Xay
89. Xaa Val Xdl Pro Xay
90. Xaa Val Xab Pro Xdm
91. Xaa Val Xab Pro Xdn
92. Xaa val Xab Pro Xdo
93. Xaa Val Xab Pro Xdp
94. Xaa Val Xab Pro Xdq
95. Xaa val Xab Pro Pro Xdr
96. Xaa val Xab Pro Xds
97. Xaa val Xbc Pro Xcv
98. Xaa Ile Xab Pro Xay
99. Xcw val Xab Pro Xay
100. Xaa Val Xbc Pro Xal
101. Xaa Val Xdl Pro Xal
102. Xaa Xdf Xab Pro Xal
103. Xaa ile Xab Pro Xal
104.Xdd Val Xab Pro Xal
105. Xde Val Xab Pro Xal
106. Xcx Val Xab Pro xcy
107. Xcw Val Xab Pro Xal
108. Xcx Val Xab Pro Xal
109. Xcw Val Xab Pro Xav
110. Xcx Val Xab Pro Xav
111.Xcw Val Xab Pro Xaw
112. Xcx Val Xab Pro Xaw
113. Xab Val Xab Pro Xay
114. Xab Val Xab Pro Xcv
115. Xab Val Xab Pro Xal
116. Xab Val Xab Pro Xam
117. Xab val Xab Pro Xan
118. Xab Val Xab Pro Xao
119. Xab Val Xab Pro Xav
120. Xab Val Xab Pro Xaw
121. Xab Val Xab Pro Xat
-11 CZ 296908 B6
122. Xab Val Xab Pro Xau
123. Xab Val Xab Pro Xbf
124. Xab Val Xab Pro Xbm
12 5. Xab val Xab Pro Xbn
126. Xab val Xab Pro Xbo
127. xab Val Xab Pro Xch
128. Xaa val Xab Pro Xdt
129. Xaa Val Xab Pro Xdu
130. Xaa Val Xab Pro Xdv
131. Xaa Val Xab Pro Xdw
132. Xaa val Xab Pro Xdx
133. Xaa Val Xab Pro Xdy
134. xaa Val Xab Pro Xdz
135. Xaa Val Xab Pro Xea
136. Xaa Val Xab Pro Xeb
137. Xaa Val Xab Pro Xec
138. Xaa Val Xab Pro Xed
139. xaa Val Xab Pro Xef
140. Xaa Val xab Pro Xeg
141. Xaa val xab Pro Xeh
142. Xaa Val Xab Pro Xei
143. Xaa Val Xab Pro Xek
144. Xaa Val Xab Pro Xel
145. Xaa val Xab Pro Xem
146. Xaa Val Xab Pro Xen
147. Xaa Val Xab Pro Xeo
148. Xaa Val Xab Pro Xep
149. Xaa val Xab Pro Xeq
150. Xaa Val Xab Pro Xer
151. Xaa Val Xab Pro Xcg
Příklady charakterizací nových sloučenin pomocí Ms jsou udány v následující tabulce.
Příklad Analýza MS rychlým ostřelováním atomů [č.] [Mol. hmotnost - (měřená)]
3.
4.
5.
ío 6.
7.
8.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
565
579
593
607
621
635
607
607
621
649
635
635
- 12CZ 296908 B6
17. 635
18. 635
19. 621
20. 621
5 21. 635
22. 635
25. 633
26. 647
27. 661
10 31. 623
32. 671
33. 667
35. 681
36. 655
15 37. 669
38. 621
39. 635
41. 649
42. 621
20 43. 633
44. 667
45. 607
46. 647
47. 668
25 48. 655
49. 669
50. 685
51. 629
52. 625
30 53. 721
55. 579
58. 623
61. 597
62. 621
35 63. 609
64. 625
65. 635
66. 591
67. 715
40 68. 685
69. 685
70. 591
71. 607
72. 621
45 74. 706
75. 579
76. 579
77. 579
78. 607
50 79. 607
80. 607
81. 607
82. 637
83. 692
55 84. 706
-13 CZ 296908 B6
85.
86.
87.
90.
92.
93.
94.
95.
128
131
139
151
706
706
607
635
659
617
636
678
671
625
625
637
Tabulka 1 - Identifikace sekvence sloučenin připravených podle příkladů 1 a 2
Číslo sloučeniny (sloučenin)
1-56, 58-72, 75, 77, 79, 80, 82
87-94, 96, 97, 99-101,104-151
73, 74, 83-86, 95
57, 76, 81, 102
78, 98, 103
Sekvenční ID číslo
-14CZ 296908 B6
Symboly Xaa ve shrnutí mají následující význam:
Xaa:
Xab:
N,N-dimethylvalin
N-methylvalin
Xac:
Xad;
Xae:
Xag:
-15CZ 296908 B6 xah:
O
Xai:
O
Xak:
O
Xai:
Xam:
Xan:
-16CZ 296908 B6
Xao:
xap:
Xaq:
xar:
Xas:
-17CZ 296908 B6
Xat:
Xau:
Xav:
ch3 ch3
Xaw:
Xax:
-18CZ 296908 B6
Xay:
Xba:
Xbb:
N-Methyl-isoleucin Xbc:
Xbd:
-19CZ 296908 B6
Xbe:
ch3
Xbg:
Xbh:
Xbi:
Xbk:
-20CZ 296908 B6
Xbl:
Xbn:
NH
Xbo:
NH
Xbp:
NH
-21 CZ 296908 B6
Xbq:
Xbr:
Xbs:
Xbt:
Xbu:
Xbv:
-22CZ 296908 B6
Xbx:
Xby:
Xbz:
Xca:
-23CZ 296908 B6
Xcb:
Prolin adamantyl(1)amid Xcc:
Xcd:
Xce:
Xcg:
-24CZ 296908 B6
Xch:
Xci:
Xck:
Xcl:
Xcrn:
Xcn:
/ CH3 o
-25 CZ 296908 B6
Xco:
Xcp:
Xcq:
Xcr:
Xcs:
-26CZ 296908 B6
XCt:
Xcu:
Xcv:
Xcw:
Xcx:
Xcy:
N-Methyl-N-ethyl-valin
Xcz:
Xda:
Xdb:
Xdc:
Xdd:
N-methyl-2-aminobutyroyl
2-aminobutyroyl
N,N-dimethyl-2-aminobutyroyl
N,N-dimethylisoleucin
-27CZ 296908 B6
Xde: N,N-dimethylisoleucin
Xdf: 2-ferc-butylglycin
Xdg: H3C^^CH3 0 ch3 ch3
Xdh: h3C\L^CH3 ^n^ynhy^cH3 0 ch3 ch3
Xdi: ^.n>^nh^ch3 0 ch3
Xdk:
-28CZ 296908 B6
Xdl:
N—Methyl—2—/erc—butylglycin
Xdm:
NH
Xdn:
Xdo:
Xdp:
Xdq:
Xdr:
Xds:
-29CZ 296908 B6
Xdt:
Xdu:
Xdv:
Xdw:
Xdx:
Xdy:
Xdz:
-30CZ 296908 B6
Xea:
Xeb:
Xec:
xed:
xee:
-31 CZ 296908 B6
Xeg:
Xeh:
xei:
Xek:
Xel:
xem:
Xen:
-32CZ 296908 B6
Xeo:
Xep:
Xeq:
Sloučeniny podle tohoto vynálezu lze testovat na jejich proti rakovinovou aktivitu pomocí konvenčních metod, včetně těch, které jsou popsány níže.
A. Metodologie in vitro
Cytotoxicita byla měřena použitím standardní metodologie pro přilnavé buněčné linie, touto metodologií může být mikrokulturový tetrazoliumový test (MTT). Podrobnosti tohoto testu byly publikovány (Alley, MC et al., Concer Research 48:589-601, 1988). Exponenciálně rostoucí kultury nádorových buněk jako je HT-29 karcionom kolonu nebo LX-1 plicní nádor se používají na přípravu mikrotiterových plotnových kultur. Buňky jsou naočkovány ve formě 3000 buněk na jednu sádku do 96 očkovacích ploten (ve 150 μΐ roztoku) a nechají se růst přes noc při 37 °C. Jsou přidány testované látky v 10ti násobných zředěných měnících se od 10'4 do 10'5 M. Buňky jsou potom inkubovány po dobu 72 hodin. Aby se stanovil počet životaschopných buněk v každé sádce, tak je přidáno barvivo MTT (50μ1 3 mg/1 roztoku 3-94,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyl tetrazolium bromid ve fyziologickém roztoku. Tato směs je inkubováno při 37 °C po dobu 5 hodin a pak je přidáno ke každé sádce 50 μΐ 25% SDS, pH = 2. Po inkubování přes noc se odečítá v každé sádce absorbance při 500 nm za použití čítače ELISA. Jsou vypočítány hodnoty průměru ± SD údajů z replikovaných sádek, použitím vzorce % TC (% zpracovaných životaschopných buněk / standard).
OD zpracovaných buněk --------------------- x 100 = % T/C OD kontrolních buněk
Koncentrace testované sloučeniny, která poskytuje T/C o hodnotě 50% inhibice růstu byla označena jako hodnota IC5o.
-33CZ 296908 B6
B. Metodologie in vivo
Sloučeniny tohoto vynálezu byly dále testovány v předklinických testech na aktivitu in vivo, která indikuje klinické využití. Takovéto testy byly prováděny s myšmi, do kterých byla transplantována (xenografována) rakovinová tkáň, přednostně pak lidského původu. Testované sloučeniny byly vyhodnocovány na protirakovinovou účinnost po podání myším nesoucím xenograft.
Specifičtěji se transplantují lidské nádory prsu (MX-1), které se nechaly růst v atomických myších, do nových myší, za použití 50 mg nádorových fragmentů. Den transplantace byl označen jako den 0. O šest až deset dní později byly myši léčeny testovanými sloučeninami, které byly podány ústně nebo intravenózně, každá dávka byla aplikována na skupinu 510 myší. Sloučeniny byly podávány každý další den po dobu 3 týdnů, v dávkách 1200 mg/kg tělesné váhy.
Průměry nádorů a tělesná váha byly měřeny dvakrát týdně. Objemy nádorů byly počítány za použití průměru měřených Vemiovým posuvným měřítkem a pomocí vzorce:
(délka x šířka)/2 = mm3 objemu nádoru.
Střední objemy nádorů byly počítány pro každou léčebnou skupinu a pro každou skupinu byly též stanoveny hodnoty T/C vzhledem ke standardním nádorům.
Nové sloučeniny vykazují dobré inhibující vlastnosti.
-34CZ 296908 B6
SEZNAM SEKVENCÍ (1) OBECNÉ INFORMACE (i) ŽADATEL:
(A) BASF, a.s.
(B) ULICE: Carl-Bosch-Strasse 38 (C) MĚSTO: Ludwigshafen (D) ZEMĚ: Spolková republika Německo (E) POŠTOVNÍ KÓD: D-67056 (F) TELEFON: 0621/6048526 (G) TELEFAX: 0621/6043123 (H) TELEX: 1762175170 (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: Nové peptidy, příprava a jejich využití (iii) POČET SEKVENCÍ: 4 (iv) FORMA ČTENÁ POČÍTAČEM:
(A) TYP MÉDIA: Disketa, 3,5 inch, 2DD (B) POČÍTAČ: IBM AT-kompatibilní, procesor 80286 (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: MS-DOS version 5.0 (D) SOFTWARE: WordPerfect (2) INFORMACE O SEK. ID. Č: 1:
(i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY (A) DÉLKA: 5 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid
-35CZ 296908 B6 (iii) POPIS SEKVENCE: SEK ID Č: 1:
XaaValXaaProXaa (2) INFORMACE O SEK. ID. Č: 2:
(i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY (A) DÉLKA: 6 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) POPIS SEKVENCE: SEK ID Č: 2:
Xaa Val Xaa Pro Pro Xaa (2) INFORMACE O SEK. ID. Č: 3:
(i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY (A) DÉLKA: 5 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) POPIS SEKVENCE: SEK ID Č: 3:
Xaa XaaXaaProXaa (2) INFORMACE O SEK. ID. Č: 4:
(i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY (A) DÉLKA: 5 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina
-36CZ 296908 B6 (C) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (iii) POPIS SEKVENCE: SEK ID Č: 4:
Xaa Ile Xaa Pro Xaa

Claims (10)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Antineoplastické peptidy obecného vzorce I
    R1R2N-CHX-CO-A-B-D-E-K (I), ve kterém
    R1 představuje methyl;
    R2 představuje methyl;
    A představuje valylový zbytek,
    B představuje N-methyl-valylový zbytek;
    D představuje prolylový zbytek;
    E představuje prolylový zbytek;
    X představuje isopropyl;
    K představuje
    -NHC(CH3)3, -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)C(CH3)3, -N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3, -N(CH3)OCH(CH3)2, -N(CH3)O(CH2)3CH3, -N(CH3)OCH2C6H5,
    -NHC(CH3)2C6Hs, -NHC(CH3)2CH2CH3, -NHC(CH3)(CH2CH3)2, -NHCH[CH(CH3)2]2,
    -NHC(CH3)2CN, -NHCH(CH3)CH(OH)C6H5, -NH-C(CH3)2CH=CH2, -NHC(CH3)2C=CH, -NHC(CH2CH3)2C=CH, -NHC(CH3)2CH2CH2OH, -NHC(CH3)2CH2CH2CH3,
    -NHC(CH3)2CH2C6H5, -N(OCH3)CH(CH3)2, -N(OCH3)CH2CH3, -N(OCH3)CH2CH2CH3, -N(OCH3)CH2C6H5, -N(OCH3)C6H5, -N(CH3)OC6H5, N(OCH3)CH2CH2CH2CH3,
    -NHCH(CH3)CH2CH3, -NHcyklohexyl, -NHcykloheptyl.
    nebo K představuje
    NHCH(CH2CH3)2, NHCH(CH3)CH(CH3)2, NHC(CH3)2CH(CH3)2, NHCH(CH2CH2CH3)2 a NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3, NHCH(CH3)2 nebo K představuje
    -37CZ 296908 B6 nebo K představuje
    CONHa —NH
    CHj
    CHj
    CH2~-· CH2— CH3 a jeho sole s fyziologicky přijatelnými kyselinami.
  2. 2. Peptidy obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterém
    R1 představuje methyl;
    R2 představuje methyl;
    A představuje valylový zbytek,
    B představuje N-methyl-valylový zbytek;
    D představuje prolylový zbytek;
    E představuje prolylový zbytek;
    X představuje isopropyl;
    K představuje
    NHC(CH3)3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHCH(CH2CH3)2, NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2, NHCH(CH3)CH(CH3)2, NHCH(CH3)C(CH3)3, NHC(CH3)2CH2CH3, NHCH[CH(CH3)2]2, NHC(CH3)2CH(CH3)2, NHCH(CH2CH2CH3)2j NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3, NH-cyklohexyl, NH-cyklopheptyl, N(CH3)OCH2CH2CH3, NHC(CH3)2C6H5, NHC(CH3)(CH2CH3)2, NHC(CH3)2C=CH, NHC(CH3)2CH2CH2OH, NHCH(CH3)2 a N(OCH3)CH2C6H5 nebo K představuje
    -38CZ 296908 B6
  3. 3. Peptidy obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterém
    R1 představuje methyl;
    R2 představuje methyl;
    A představuje valyvový zbytek,
    B představuje N-methyl-valylový zbytek;
    D představuje propylový zbytek;
    E představuje prolylový zbytek;
    X představuje isopropyl;
    K představuje NHC(CH3)3.
  4. 4. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelné sole pro přípravu léčiva k léčení nemocí.
  5. 5. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 4, kdy nemocí je rakovina.
  6. 6. Způsob přípravy peptidů obecného vzorce I podle nároku 1,vyznačující se tím, že peptidy jsou sestaveny sekvenčně z aminokyselin počínaje od C-konce peptidu s R*R2NCHX-CO a peptidový řetězec je postupně rozšiřován spojením C-konce karbonylu se zbytkem A, potom se zbytkem B, potom se zbytkem D a potom se zbytkem E, přičemž C-konec zbytku E je popřípadě derivatizován skupinou E před a po kopulaci;
    nebo se vhodně spojí malé peptidové fragmenty, kdy symboly A, B, D, E, X, R1 a R2 mají význam uvedený v nároku 1.
  7. 7. Způsob přípravy podle nároku 6, vyznačující se tím, že zahrnuje fázi syntézy v prostoru a používá chránicí aminokyselinové skupiny vybrané ze souboru zahrnujícího Z, Boc a Fmoc.
  8. 8. Způsob přípravy podle nároku 7, vyznačující se tím, že kopulační činidla jsou vybrána ze souboru zahrnujícího EDCI, DCC, DIC, EEDQ, PPA, BOP-C1, PyBrop, BOP a PyBop, DPPA, HBTU, HATU, DEPCN, HOTDO, CDI a pivaloylchlorid.
  9. 9. Způsob přípravy podle nároku 8, vyznačující se tím, že kopulační činidla jsou vybrána ze souboru zahrnujícího DMAP, HOBt, HOOBt, azobenzotriazol HOSu a 2-hydroxypyridin.
    -39CZ 296908 B6
  10. 10. Způsob přípravy podle nároku 7, v y z n a č u j í c í se t í m , že se zahrnuje fázi syntézy v roztoku a používá Z-amino chránící skupinu, EDCI a HOBt jako kopulační činidla a sloučenina je zbavena ochranné skupiny pomocí Pd/C v dusíkové atmosféře.
CZ0184698A 1995-12-15 1996-12-11 Antineoplastické peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití CZ296908B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US57342295A 1995-12-15 1995-12-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ184698A3 CZ184698A3 (cs) 1998-09-16
CZ296908B6 true CZ296908B6 (cs) 2006-07-12

Family

ID=24291935

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0184698A CZ296908B6 (cs) 1995-12-15 1996-12-11 Antineoplastické peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití

Country Status (30)

Country Link
EP (2) EP0866800B1 (cs)
JP (1) JP3939354B2 (cs)
KR (1) KR100463739B1 (cs)
CN (1) CN1127514C (cs)
AR (1) AR004382A1 (cs)
AT (2) ATE277076T1 (cs)
AU (2) AU731458B2 (cs)
BG (1) BG64563B1 (cs)
BR (1) BR9611987A (cs)
CA (1) CA2237721C (cs)
CO (1) CO4750840A1 (cs)
CZ (1) CZ296908B6 (cs)
DE (2) DE69638206D1 (cs)
DK (1) DK0866800T3 (cs)
ES (1) ES2229287T3 (cs)
HR (1) HRP960585A2 (cs)
HU (1) HU228275B1 (cs)
IL (2) IL124342A (cs)
MX (1) MX9803953A (cs)
MY (1) MY114327A (cs)
NO (1) NO319273B1 (cs)
NZ (1) NZ324691A (cs)
PL (1) PL186721B1 (cs)
PT (1) PT866800E (cs)
RU (1) RU2182911C2 (cs)
SK (1) SK285286B6 (cs)
TR (1) TR199801102T2 (cs)
TW (1) TW474946B (cs)
WO (1) WO1997022621A2 (cs)
ZA (1) ZA9610510B (cs)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143721A (en) 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
JP2002538151A (ja) 1999-03-02 2002-11-12 ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド カテプシンの可逆的インヒビターとして有用な化合物
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993023424A1 (en) * 1992-05-20 1993-11-25 Basf Aktiengesellschaft Derivatives of dolastatin
WO1995030691A1 (de) * 1994-05-06 1995-11-16 Basf Aktiengesellschaft Neuer peptidischer wirkstoff und dessen herstellung
WO1996040752A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Basf Aktiengesellschaft Novel dolastatin derivatives, their preparation and use
WO1997017364A1 (en) * 1995-11-09 1997-05-15 Basf Aktiengesellschaft Peptide derivatives of dolastatin 15 and their use

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4879276A (en) * 1983-12-19 1989-11-07 Uniroyal Chemical Ltd./Uniroyal Chemical Ltee Method for reducing serum uric acid levels
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
RU2132334C1 (ru) * 1992-12-16 1999-06-27 Басф Акциенгезельшафт Аналог долостатина
DE4415998A1 (de) * 1994-05-06 1995-11-09 Basf Ag Neue Tetrapeptide, ihre Herstellung Verwendung

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993023424A1 (en) * 1992-05-20 1993-11-25 Basf Aktiengesellschaft Derivatives of dolastatin
WO1995030691A1 (de) * 1994-05-06 1995-11-16 Basf Aktiengesellschaft Neuer peptidischer wirkstoff und dessen herstellung
WO1996040752A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Basf Aktiengesellschaft Novel dolastatin derivatives, their preparation and use
WO1997017364A1 (en) * 1995-11-09 1997-05-15 Basf Aktiengesellschaft Peptide derivatives of dolastatin 15 and their use

Also Published As

Publication number Publication date
PL186721B1 (pl) 2004-02-27
PT866800E (pt) 2005-01-31
EP0866800A2 (en) 1998-09-30
ES2229287T3 (es) 2005-04-16
NO982711L (no) 1998-06-12
IL124342A (en) 2005-06-19
AU731458B2 (en) 2001-03-29
ATE471944T1 (de) 2010-07-15
HUP0000172A3 (en) 2000-09-28
BR9611987A (pt) 1999-02-17
DK0866800T3 (da) 2005-01-17
SK76798A3 (en) 1999-02-11
CN1127514C (zh) 2003-11-12
PL327175A1 (en) 1998-11-23
IL166853A (en) 2013-03-24
CZ184698A3 (cs) 1998-09-16
CA2237721A1 (en) 1997-06-26
AR004382A1 (es) 1998-11-04
NO319273B1 (no) 2005-07-11
BG64563B1 (bg) 2005-07-29
DE69638206D1 (de) 2010-08-05
SK285286B6 (sk) 2006-10-05
EP1593686A1 (en) 2005-11-09
WO1997022621A2 (en) 1997-06-26
ZA9610510B (en) 1998-06-15
HRP960585A2 (en) 1998-02-28
MY114327A (en) 2002-09-30
WO1997022621A3 (en) 1998-02-26
RU2182911C2 (ru) 2002-05-27
BG102479A (en) 1999-06-30
HU228275B1 (en) 2013-02-28
IL124342A0 (en) 1998-12-06
TR199801102T2 (xx) 1998-12-21
AU1192597A (en) 1997-07-14
EP1593686B1 (en) 2010-06-23
JP2000502092A (ja) 2000-02-22
TW474946B (en) 2002-02-01
AU2004220772A1 (en) 2004-11-11
ATE277076T1 (de) 2004-10-15
MX9803953A (es) 1998-09-30
CA2237721C (en) 2008-01-29
DE69633457T2 (de) 2005-09-22
AU2004220772B2 (en) 2008-06-12
KR20000064400A (ko) 2000-11-06
DE69633457D1 (de) 2004-10-28
CO4750840A1 (es) 1999-03-31
JP3939354B2 (ja) 2007-07-04
EP0866800B1 (en) 2004-09-22
CN1204342A (zh) 1999-01-06
NO982711D0 (no) 1998-06-12
HUP0000172A2 (en) 2000-07-28
KR100463739B1 (ko) 2005-02-28
NZ324691A (en) 1999-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU725164B2 (en) Novel dolastatin derivatives, their preparation and use
CZ286752B6 (en) Peptide and pharmaceutical preparation containing thereof
CZ292612B6 (cs) Peptid s protirakovinnou aktivitou, jeho použití a farmaceutický prostředek s obsahem takového peptidu
CZ321199A3 (cs) Deriváty dolastatinu-15 v kombinaci s taxany
CZ296908B6 (cs) Antineoplastické peptidy, zpusob jejich prípravy a jejich pouzití
US8440626B2 (en) Antineoplastic peptides
AU775090B2 (en) Antineoplastic peptides
SK165497A3 (en) Peptides, preparation method thereof and pharmaceutical composition containing the same

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20141211