CZ20271U1 - Cyklobutan-1,1-di kar boxy látokomplexy platiny s deriváty N6- benzyladeninu - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložené technické řešení, spadající do oblasti léčiv nádorových onemocnění na bázi platiny, se týká platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů s deriváty Nó-benzyladeninu a jejich použití v lékařské praxi jako léčiv a farmaceutických kompozic, které tyto komplexy obsahují jako účinnou látku.

Dosavadní stav techniky

Cisplatina (a), czj-[Pt(NH3)2Cl₂], cw-diammin-dichloroplatnatý komplex, je jedním z nej známějších komplexů platiny používaných v boji proti rakovině (Rosenberg, B.; Camp, V. L.; Krigas, T. io Nátuře 1965, 205, 698-699). Od roku 1978 se využívá při chemoterapii proti zhoubným nádorům varlat, vaječníků, plic, krku, hlavy, popřípadě jiným druhům nádorového onemocnění (Weiss, R.

B.; Christian, M.C. Drugs 1993, 46, 360-365). Vlastní chemoterapie se však neobejde bez vedlejších negativních účinků na organismus, jako jsou nefrotoxicita či ototoxicita. Tato omezení vedla k přípravě nových platnatých komplexů s cílem zvýšit účinnost a selektivitu léčivých přípravků a zároveň potlačit negativní účinky na organismus {Abrams M. J.; Murrer B. A. Science 1993, 261, 725-730). Mezi nej významnější takto objevené sloučeniny řadící se mezi tzv. léčiva druhé generace je možno zařadit například karboplatinu (b), [Pt(NH₃)₂(cbdc)], diammin-cyklobutan-1,1dikarboxylátoplatnatý komplex, kde cbdc je cyklobutan-l,l-dikarboxylátový dianion. Jeho syntéza vychází z tetrachloroplatnatanu draselného, lyPtCLJ, který se nechá reagovat s tetramolámím nadbytkem jodidu draselného, KI, kde v první fázi vznikne tetrajodoplatnatan draselný, K₂[PtLi]. Působením NH4OH vznikne c/s-diammindijodoplatnatý komplex, cŤy-[Pt(NH₃)₂I₂], který poskytne s dusičnanem stříbrným, AgNO₃, v poměru 1:2 ve vodě dobře rozpustný komplex dusičnan cis-diammin-diaquaplatnatý, cw-[Pt(NH3)2(H₂O)₂](NO3)2. Ten se pak ve vodném prostředí kyseliny cyklobutan-l,l-dikarboxylové transformuje na karboplatinu (b) (US4273755 - Preparation of cis-diammindiiodoplatinum(II)). Je známa i modifikovaná možnost přípravy, která opět vychází z tetrachloroplatnatanu draselného s tetramolámím nadbytkem jodidu draselného, kde v první fázi vznikne tetrajodoplatnatan draselný. Působením NH4OH vznikne c/s-diammindijodoplatnatý komplex, který poskytne s dusičnanem stříbrným v poměru 1:2 ve vodě dobře rozpustný komplex dusičnan cíT-diammm-diaquaplatnatý, cw-[Pt(NH₃)2(H₂O)₂](NO3)2. Přidáním síranu stříbrného do tohoto vodného roztoku převedeme v temnu za 24 hodin kladně nabitou m-diammin-diaquaplatnatou komplexní částici, cw-[Pt(NH3)₂(H₂O)2]²⁺, na žlutý czs-diammin-aqua-sulfátoplatnatý komplex, cis-[Pt(NH₃)₂(H₂O)(SO4)]. Ve vodném roztoku po přidání sodné soli kyseliny cyklobutan1,1-dikarboxylové vzniká karboplatina (b) (Ali, M 5.; Thurston, J. H.; Whitmire, K. H.; Khokhar, A. R. Polyhedron 2002, 21, 2659-2665).

ΡιΎγ

H. O (C)

H_SN_X /Cl H₃N_x

Pt

Η,Ν^/ ^Cl

W

«0

H₃N_X /O Pt h₃n^{z x}o

- 1 CZ 20271 Ul

Další možnost přípravy tohoto komplexu je reakce cisplatiny, cw-[Pt(NH₃)₂Cl₂], která se po týdnu působení dusičnanem stříbrným ve vodném roztoku transformuje na dusičnan cis-diammin-diaquaplatnatý, cis-[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](NO₃)2. Substituce dusičnanového aniontu za hydroxylový je uskutečněna pomocí chromatografie na iontoměničích a vzniklý hydroxid ris-diammin5 diaquaplatnatý, dj-[Pt(NH₃)₂(H₂O)₂](OH)₂, vstupuje do reakce s kyselinou cyklobutan-l,l-dikarboxylovou za vzniku karboplatiny (b) (Branner, H.; Maiterth., F.; Treittinger, B. Chem. Ber. 1994, 127, 2141-2148). Molekulová a krystalová struktura je známa od roku 1980 (Neidle, S; ísmail, I. M.; Sadler, P. J. J. Inorg. Bioch. 1980, 13, 205-212), detailnější popis molekulové a krystalové struktury je z roku 1985 (Beagiey, B.; Cruickshank, D. řK J.; McAuliffe, C. A.; ío Pritchard, R. G.; Zaki, A. M.; 2 Beddoes, R. L; Cemik, R. d.; Mills, O. S. d. Mol. Str. 1985, 130, 97-102). Karboplatina (b) je účinná proti téměř stejným lidským nádorovým liniím jako cisplatina (a), a taktéž je podávána intravenózně (Hambley, T. W.; Dalton Trans. 2001,120, 2711-2718). Na rozdíl od cisplatiny se karboplatina vyznačuje výrazným snížením nežádoucích vedlejších efektů, především nižší toxicitou na organismus (Wilkinson, A. R; Cox, P. d.; dones, M.; Harrap,

K. R. Biochimie 1978, 60, 851-857). U karboplatiny bylo poprvé publikováno úspěšné stanovení in vivo cytotoxícké aktivity proti rakovině varlat, plic (V79) a prsnímu tumoru (MTG-B) (vystupuje pod označením JM8) již v roce 1985 (Peckham, M. d; Horwich, A.; Brada, M.; Drury, A.; Hendry, W. F. Canc. Treat. Rev. 1985, 12, 101-110, Douple, E. B.; Richmond, R. C.; O'Hara, d. A.; Coughlin, C. T. Canc. Treat. Rev, 1985, 12, 111-124) a v současnosti jsou publikovány vý20 sledky druhé fáze in vivo testování tohoto léčiva například v kombinaci s aplidinem (W02008 135793 - Combination of aplidine and carboplatin in anticancer treatments), paclitaxelem proti nádorům plic (WO2008 081927 - Methodfor treating cancer using anticancer agent in combination, EP1942884 - Methods of treating cancers with Saha, carboplatin and paclitaxel and other combination therapies) nebo nádoru vaječníků (lura, A.; Katsumata, N.; Kouno, T.;

Shimizu, C,; Ando, M.; Fujiwara, Y Int. d. Gynec. Obst. 2009, 105, 261-270, EP2076259 Methods of treating ovarian cancer).

Mezi další významná protinádorová léčiva na bázi platnatých komplexů patří oxaliplatina (c), [/A,2Á-l,2-diammm-cyklohexan-N,N’]-(oxaláto-O,O’)-platnatý komplex, poprvé syntetizovaný v roce 1978 (Kidani, Y.; Inagaki, K; ligo, M.; Hoshi, A.; Kuretani, K d. Med. Chem. 1978, 21,

1315-1318, EP2029615 - A process for the preparation of an oxaliplatin, EP 1979369 - Preparation of platinum(II) complexes), jehož molekulová struktura byla vyřešena v roce 1984 (Bruck, M. A,; Bau, R.; Noji, M.; Inagald, K.; Kidani, Y. Inorg. Chim, Acta 1984, 92, 279-284), Používá se pri léčbě rakoviny konečníku a u nádorových liniích rezistentních na cisplatinu (Tashiro, T; Kawada, Y.; Sakurai, Y.; Kidani, Y. Biomed. Pharmacother. 1989, 43, 251-260, Kraker, A. d;

Moore, C. W. Cancer Res. 1988, 48, 9-13). Ve výčtu léčiv je třeba taktéž zmínit nedaplatinu, cís-diammin-glykolátoplatnatý komplex (d), poprvé syntetizovanou v roce 1986 (Totant, T; Aono, K; Komura, M.; Adachi, K; Chem. Lett. 1986, 3, 429-432), která se využívá např. pri léčbě nádorů konečníku, plicního a srdečního karcinomu, nádorů hlavy a krku (Furuse, K; Fukuota, M.; Ohshima, S. Proč. Am. Soc. Clin. Oncol. 1989, 8, 238-243, Inuyama, Y; Miyake,

H.; Horiuchi, M.; Hayasaki, K; Komiyama, S.; Ohta, K. dpn. d. Cancer Chemother. 1992, 19,

863-869). Na rozdíl od cisplatiny byly v preklinických testech zjištěny nižší nežádoucí účinky na organismus (Kameyama, Y.; Okazaki, 14.; Nakagawa, M.; Koshida, H; Nakamura, M.; Gamba, M. Toxicol. Lett. 1990, 52,15-24).

Předložené a připravené komplexy je možno řadit mezi deriváty odvozené od karboplatiny (b), [Pt(NH₃)₂(cbdc)], kde dva amino ligandy (NH₃) byly nahrazeny derivátem N6-benzyladeninu (L),

Tato sloučenina (L) patří do skupiny přírodních rostlinných růstových regulátorů nazývaných cytokininy (Skoog, F; Hamzi, H. Q.; Szweykowska, A. M.; Leopard, N. d.; Carraway, K. L.; Fujii, T.; Helgeson, d. P.; Loeppky, R. N. Phytochem. 1967, 6, 1169-1192). V obecné rovině je však možno konstatovat, že mnohé rozmanitě substituované deriváty purínu nebo adeninu mohou být připraveny i laboratorně (Mok, D. W. S.; Mok, M. C. Ann. Rev. Planí Physiol. Planí Mol. Biol. 2001, 52, 89-118, Roelen, H.; Veldman, N; Spek, A. L.; Von Frijtag Drabbe Kunzel, d.; Mathot, R. A. A.; íjzerman, A. P. d. Med. Chem. 1996, 39, 1463-1471, Holmes, R. E.; Robins, R. K. d. Am. Chem. Soc. 1960, 82, 3773-3779, Moravec, d.; Kryštof, V; Hanuš, d; Havlíček, L.; Moravcová, D.; Fuksová, K; Kuzma, M.; Lenobel, R.; Otyepka, M.; Strnad, M. Bioorg. Med.

CZ 20271 Ul

Chem. Letí 2003, 13, 2993-2996). Vhodnou substitucí základního skeletu N6-benzyladeninu je možno získat velmi účinné inhibitory cyklin-dependentních kináz, tedy látek ovlivňujících buněčný cyklus (Brun, V.; Legraverend, M.; Grierson, D. S. Tetrahedr. Letí. 2001, 42, 8161-8164, Brun, V.; Legraverend, M.; Grierson, D. S, Tetrahedr. Letí. 2001, 42, 8165-8167). Syntéza, cha5 rakterizace a především biologické, farmaceutické, popřípadě jiné využití těchto látek je možno najít v následujících českých spisech pod čísly CZ 1999-273 AI (Substituované dusíkaté heterocyklické deriváty, způsob jejich přípravy, tyto deriváty pro použití jako léčiva, farmaceutická kompozice a kombinovaný farmaceutický přípravek tyto deriváty obsahující a použití těchto derivátů pro výrobu léčiv), CZ 294535 (Heterocyklické sloučeniny na bázi N6-substituovaného ade10 ninu, způsoby jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující), CZ 2002-2353 AI (Deriváty purinu, způsob jejich přípravy a jejich použití), CZ 294538 (Substituční deriváty N6-benzyladenosinu, způsob jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující) a CZ 2007-691 AI (Substituované 6(alkylbenzylamino)purinové deriváty pro použití jako antagonisté cytokininových receptoru a přípravky obsahující tyto sloučeniny). Dosud je v Cambridgské strukturní databázi (CSD) uloženo 21 platnatých komplexů odvozených od karboplatiny obsahující základní motiv [Pt(La)₂(cbdc)] (a = 1 až 4), kde (cbdc) je cyklobutan-l,l-dikarboxylátový dianion a (La) repre20 zentuje libovolný monodentátní ligand koordinovaný na centrální atom přes atom dusíku: LI = hexamethylenimin (Ali, AIS.; Thurston, J.H.; Whitmire, K.H.; Khokhar, A.R; Polyhedron 2002, 21, 2659-2665), L2 = aminoethanol (Meelich, K; Galanski, M.; Arion, V.B.; Keppler, B.K. Eur.

J. Inorg. Chem. 2006, 2476-2483), L3 = 2-methylpyridin (Ming-Jin, X.; Yao, K; Wei-Ping, L.; Shu-Qian, H; Xizhu, C. Acta Crystallogr., Sect.E: Struct. Rep. Online 2007, 63, 2728), L4 = ethylamin (Rochon, F.D.; Grupa, L.M. Inorg. Chim. Acta 2000, 306, 193-204), a základní motiv [Pt(Lb)(cbdc)], kde b - 5-22, cbdc je cyklobutan-l,l-dikarboxylátový dianion a (L) reprezentuje libovolný bidentátní ligand koordinovaný na centrální atom přes dva atomy dusíku: L5 = ethylen1,2-diamin (Rochon, F. D.; Massarweh, G. Inorg. Chim. Acta 2006, 359, 4095-4104), L6 = butan-1,4-diamin (Alvarez-Valdes, A.; Perez, J. M; Lopez-Solera, I; Lannegrand, R.; Continente,

J.M.; Amo-Ochoa, P.; Camazon, MJ; Solans, X.; Font-Bardia, M.; Navarro-Ranninger, C. J.

Med. Chem. 2002, 45, 1835-1844), L7 - N,N,N',N',N”,N”-hexakis(2-pyridyl)-l,3,5tris(aminomethyl)benzen (Tu, C.; Lin, J.; Shao, Y. Guo, Z. Inorg. Chem. 2003, 42, 5795-5797), L8 = 4,4-bis(aminomethyl)tetrahydrofiiran (Bitha, P; Child, R.G.; Hlavka, J.J.; Lang, S.A.; Lin, Y.-L; Haltiwanger, R.C.; Pierpont, C.G. Inorg. Chim. Acta 1988, 151, 89-93), L9 = 1,3-díhyd35 roxy-2,2-bis(aminomethyl)propan (Bitha, P.; Child, R.G.; Hlavka, J.J.; Lang, S.A.; Lin, Y.-L; Haltiwanger, R.C.; Pierpont, C.G. Inorg. Chim. Acta 1988, 151, 89-93), L10 - bis(2-pyridyl)amin (7w, C.; Wu, X; Liu, Q.; Wang, X; Xu, Q.; Guo, Z. Inorg. Chim. Acta 2004, 357, 95102), Lil = trans-(-)-cyklohexan-l,2-diamin (Bitha, P.; Morton, G.O.; Dunne, T.S.; Santos, E.F.D.; Lin, Y.; Boone, S.R.; Haltiwanger, R.C.; Pierpont, C.G. Inorg. Chem. 1990, 29, 64540 652), L12 = bis(2-pyridyl)keton (Ferreira, A.D.Q.; Bino, A.; Gibbon, D, Inorg. Chim. Acta 1997,

265, 155-161), L13 = (3,6,9,12-tetraoxatetradekan-l,14-diyl-2,2'-bipyridyl-3,3^,-dikarboxylát (Yoo, J; Sohn, Y.S.; Do, Y. J. Inorg, Biochem. 1999, 73, 187-193), L14 = 2,3-bis(2-pyridyl)pyrazin (Ferreira, A.D.Q.; Bino, A.; Gibbon, D. Inorg. Chim. Acta 1997, 265, 155-161), LI5 “ (S)-N-(2-aminopropyl)cyklohexylamin (Lee, E.J.; Jun, M.J.; Sohn, M.S. Bull. Korean Chem.

Soc. 1999, 20, 1469-1474), LI 6 = l-methyl-2,3-diamino-2,3-dideoxy-L-xylopyranosid (Hanessian, S.; Wang, J. Canc. J. Chem. 1993, 7Ϊ, 886-895), L17 = 2-morfolinoethylamin (Chen, X; Xie, M,; Liu, M.; Ye, Q.; Yu, Y.; Hou, S.; Gao, W.; Liu, Y. Inorg. Chim. Acta 2007, 360, 28512856), LI 8 - (-)-(R)-2-(aminomethyl)pyrrolidin (Yonei, M.; Murata, H; Itoh, M.; Watanabe, Y.; Ochi, K; Honda, M.; Nawata, Y. Acta Crystallogr., Sect.C: Cryst. Struct. Commun. 1990, 46,

137-138), L19 = propan-1,2-diamin (Rochon, F.D.; Massarweh, G. Inorg. Chim. Acta 2006, 359,

4095-4104), L20 ~ 3-aminohexahydroazepin (Lee, S.S.; Jun, M.J.; Jung, O.-S.; Sohn, Y.S. Bull. Korean Chem. Soc. 1994, 15, 84-86), L21 = propan-l,3-diamin-2-ol (Xie, M.J.; Chen, X.Z.; Liu, W.P.; Yu, Y.; Ye, Q.S. Acta Crystallogr., Sect.E: Struct. Rep. Online 2007, 63, 1495-1497, Liu, W.; Chen, X; Xie, M.; Lou, L.; Ye, Q.; Yu, K; Hou, S. J. Inorg. Bioch. 2007, 102, 1942-1946),

L22 = cyklohexan-t,4-diamin (Shamsuddin, S.; Khokhar, A.R. J. Coord. Chem. 1994, 33, 83-91),

CZ 20271 Ul

Předložené píatnaté komplexy odvozené od karboplatiny s deriváty N6-benzyladeninu (L) navazují na již drive publikované komplexy platiny obecného složení [Pt(L23)Cl(H₂O)2], (Pt(Lc)Cl₃].H₂O, (Ld)[PtCl₆], [Pt(Le)Cl₅], c/s-[Pt(Ld)₂Cl₂]Cl₂, cw-[Pt(Lf)₂Cl₂].xH₂O a trans[Pt(Lg)₂Cl₂].xH₂O, kde c = 23-24, d = 23-26, e - 23, 26-38, f = 23-26, 39-43, g = 41-43, x = 1-3,

L23 = 2-[(3-(hydroxypropyl)amino]-6-(benzylamino)-9-isopropylpurin, L24 = 2-[(2-(hydroxyethyÍ)amino]-6-(benzylamino)-9-methylpurin, L25 - 2-(2-hydroxyethylamino)-6-benzylaminc-9isopropylpurin, L26 = 2-[(l-hydroxymethylpropyl)amino]-6-(benzylamino)-9-isopropylpurin, L27 = ó-(2-methoxybenzylamino)purin, L28 = 6-(3-methoxybenzylamino)purin, L29 = 6-(4methoxybenzylammo)purin, L30 = 6-(2-hydroxybenzylamino)purin, L31 - 6-(3-hydroxybenzylío amino)purin, L32 = 6-(4-hydroxybenzylamino)purin, L33 = 6-(2-fluorbenzylamino)purin, L34 = 6-(3-fluorbenzylamino)purin, L35 = 6-(4-fluorbenzylamino)purin, L36 = 6-(2-chlorbenzylamino)purin, L37 = 6-(3-chlorbenzylamino)purin, L38 = 6-(4-chlorbenzylamino)purin, L39 - 2[(l-hydroxymethylpropyl)amino]-6-(3-hydroxybenzylamino)-9-isopropylpurin, L40 = 2-[(l-hydroxymethylisobutyl)amíno]-6-(3-hydroxybenzylamíno)-9-isopropylpurin, L41 = 2-chloro-6-(ben15 zylamino)-9-isopropylpurm, L42 = 2-chloro-6-(2-methoxybenzylamino)-9-isopropylpurin, L43 2-chloro-6-(4-methoxybenzylamino)-9-isopropylpurin (Szučová, L.; Trávníček, Z.; Zatloukal, M.; Popa, 1. Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 479-491, Szučová, L.; Trávniček, Z.; Popa, I; Marek, J. Polyhedron 2008, 27, 2710-2720, Trávníček, Z.', Popa, L; Čajan, M.; Herchel, R.; Marek, J. Polyhedron 2007, 26, 5271-5282, Trávníček, Z.; Maloň, M.; Zatloukal, M.; Doležal, K; Strnad,

M.; Marek, J. J. Inorg. Bioch. 2003, 94, 307-316, Maloň, M.; Trávníček, Z; Marek, R.; Strnad,

M. J. Inorg. Bioch. 2005, 99, 2127-2138), u kterých kromě fyzikálně-chemické charakterizace byla studována i in vitro cytotoxická aktivita na některých lidských nádorových liniích (K-562 = lidská erytroleukemie, MCF7 = lidský prsní adenokarcinom, HOS - lidský osteosarkom, G-361 = lidská chronická myelogenní leukemíe). Některé z výše zmíněných komplexů byly v in vitro testech aktivnější než zmíněná kancerostatika cisplatina, oxaliplatina nebo karboplatina.

Podstata technického řešení

Cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexy platiny v oxidačním stupni +11 a jejich krystalosolváty zahrnující strukturní motiv I nebo obecného vzorce II vyjádřeného strukturním vzorcem [Pt(L)₂(cbdc)] nebo obecného vzorce III vyjádřeného strukturním vzorcem [Pt(L)(L')(cbdc)]> kde symboly L a L' představují deriváty N6-benzyladeninu obecného vzorce IV vázaného na atom platiny základního motivu V přes libovolný atom dusíku adeninu nezávisle vybraný z atomů NI, N3, N6, N7 nebo N9, v závislosti na míře substituce molekul, kde jsou substituenty Rl, R2, R3 a R4 nezávisle vybrány ze skupiny:

(0 00 (IH)

R1

R3 (IV)

CZ 20271 Ul atom vodíku, halogen, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl, substituovaný heteroaryl, funkční skupina N5 R'R, v níž R a R nezávisle na sobě symbolizují atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl, substituovaný heteroaryl a funkční skupinu, kde termín:

- halogen představuje atom fluoru, bromu, chloru, nebo jodu,

- alkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 18, především pak z 1 až 8 atomů uhlíku,

- alkenyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 2 až 18, především pak ze 2 až 8 atomů uhlíku, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,

- alkynyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 2 až 18, především pak ze 2 až 8 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi atomy uhlíku,

- cykloalkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8 atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl a heteroaryl,

- cykloheteroalkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,

- cykloalkenyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,

- cykloheteroalkenyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,

- aryl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje skupinu obsahující alespoň jeden aromatický kruh,

- heteroaryl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje pěti- až dvanáctičlenný, především pak pěti- až Šestičlenný aromatický kruh s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra, a to heteroarylu kondenzovaného s jedním nebo více cykly nezávisle vybranými ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl a heteroaryl,

-funkční skupina jako taková nebo jako součást jiné skupiny představuje amino, alkylamino, dialkylamino, alkenylamino, cykloalkylamino, cykloheteroalkylamino, cykloalkenylamino, cykloheteroalkenylamino, arylamino, heteroarylamino, acylamino, hydroxy, alkylhydroxy, alkoxy, aryloxy, kyano, kar-5CZ 20271 Ul boxy, alkylkarboxy, karboxyalkyl, arylkarboxy, karboxyaryl, hydroxyamino, acyl, nitro, amido, nitroso, sulfonyl, sulfinyl, sulfamido, thio, alkylthio, arylthio, merkapto, karbamoyl,

- substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl jako takové nebo jako součásti jiných skupin představují alkyl, alkenyi, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl a heteroaryl substituované substituenty z množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl a funkční skupina.

io Další podstatou technického řešení jsou krystalosolváty platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů, kde u sloučenin obecného složení [Pt(L)₂(cbdc)] . xSolv nebo [Pt(L)(L')(cbdc)] . xSolv udává (x) počet krystalových molekul, především 1 až 6, a (Solv) je konkrétní molekula použitého rozpouštědla a/nebo některá z reakČních komponent, obvykle vybrána ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, Λζ/V-dimethylformamid (DMF), dimethylsul15 foxid (DMSO), chloroform, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to bud’ samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

Nedílnou podstatou technického řešení je farmaceutický nebo farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů nebo farmaceutickou kompozici platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů s jedním či více přijatelných nosičů a pomocných látek pro použití v lékařství jako léčiva pro léčbu nádorových onemocnění,

V dalším jsou nové sloučeniny obecného vzorce II nebo ΠΙ a způsob jejich přípravy a použití osvětleny na konkrétních příkladech, které mají pouze ilustrační charakter a nijak neomezují rozsah technického řešení, který je jednoznačně určen definicí nároků na ochranu.

Přehled obrázků na připojených výkresech

Konkrétní příklady provedení technického řešení jsou doloženy připojenými výkresy, kde:

- obr.l je ¹³C NMR spektrum bis(2-chloro-6-(3,4-dichlormethyl)benzylamino-9-isopropylpurino)-cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(L₂)₂(cbdc)], s interpretací jednotlivých atomů uhlíku, které byly identifikovány pomocí ¹³C, APT, *H-¹³C gs-HMQC a ¹H-^Í3C gs30 HMBC experimentů.

- obr.2 je FT IR spektrum bis(2-chloro-6-(2-fluor-6-brom)benzylamino-9-isopropylpurino)cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(Li)₂(cbdc)], v oblasti 400-4000 cm'¹ s přiřazením maxim charakteristických pro jednotlivé atomové skupiny.

- obr.3 je FT IR spektrum bis(2-chloro-6-(2-fluor-6-brom)benzylamino-9-isopropylpurino)35 cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(Li)₂(cbdc)], v oblasti 150-400 cm'¹ s přiřazením maxim charakteristických pro vibrace Pt-N a Pt-O,

- obr.4 je Ramanovo spektrum bis(2-(3-hydroxypropylamino)-6-benzylamino-9-isopropylpurino)-cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(L₈)₂(cbdc)] v oblasti 150-4000 cm'¹ a přiřazení maxim charakteristických pro vybrané atomové skupiny.

- obr.5 představuje molekulovou strukturu hydrátu 2-chloro-6-(2-methoxy)benzylamino-9isopropylpurino)-(dimethylsulfoxid-S)-cyklobutan-1,1 -dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(DMSO)(L7)(cbdc)] . H₂O, vyřešenou pomocí monokiystalové rentgenové strukturní analýzy. Všechny nevodíkové atomy byly znázorněny formou teplotních elipsoidů s 50% pravděpodobností. Vodíkové atomy nebyly pro přehlednost zobrazeny.

Příklady provedení technického řešení

V následující části je technické řešení doloženo, nikoli však limitováno, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah technického řešení je pak jednoznačně limitován nároky na ochranu.

a

CZ 20271 Ul

V příkladech 1, 2 a 3 pak může být derivát L' z chemického a strukturního hlediska vzhledem k derivátu L:

a) chemicky a strukturně totožný, jako je L, vázaný na atom platiny základního motivu V přes totožný atom dusíku N(6)-benzyladeninu, jako je tomu u L;

b) chemicky a strukturně totožný, jako je L, vázaný na atom platiny základního motivu V pres odlišný atom dusíku N(6)-benzyladeninu, jako je tomu u L;

c) chemicky a strukturně odlišný derivát N(6)-benzyladeninu, než je L, vázaný na atom platiny základního motivu V přes jakýkoliv z atomů dusíku derivátu N(6)-benzyladeninu.

Technické řešení dále využívá sloučenin cw-[Pt(DMSO)₂Cl₂] a [Pt(DMSO)₂(cbdc)], kde cbdc je ío dianion kyseliny cyklobutan-1,1 -dikarboxylové, jako meziproduktů pro přípravu cyklobutan-1,1 dikarboxylátokomplexů platiny obecného vzorce II nebo III, které se připraví reakcí chloridu platnatého, PtCl₂₎ v prostředí dimethylsulfoxidu (DMSO), kdy vzniká při zvýšené teplotě komplex o složení cw-[Pt(DMSO)₂Cl₂] (Rochon, F. D.; Massarweh, G. Inorg. Chim. Acta 2006, 359,

4095-4104, Príce, J. H.; Williamson, A. N.; Schramm, R. F; Wayland, B, B. Inorg. Chem. 1972, 15 11, 1280-1284). Po nutné purifikaci je meziprodukt rozpuštěn a je k němu přidáno ekvimolámí množství kyseliny cyklobutan-1,1-dikarboxylové, respektive její sodné, draselné nebo stříbrné soli. ReakČní směs je poté míchána v temnu a za snížené teploty po několik dnů. Poté se vyloučí komplex o složení [Pt(DMSO)₂(cbdc)] (viz Schéma 1). Podrobný popis přípravy uvedeného meziproduktu je uveden v následující literatuře (Bitha, P; Morton, G. O.; Dunne, T. S.; Santos, E.

F. D.; Lin, Y; Boone, S, R.; Haltiwanger, R. C.; Pierpoint, C. G. Inorg. Chem. 1990, 29, 645652).

pw,

0M8O

0«80^ a Rjdxic

DMSO / -X_a R.H.N^K,^ ««O

R3

Schéma 1

-7CZ 20271 Ul

V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fyzikálněchemickými metodami;

- elementární analýza s procentovým zastoupením prvků C, H a N,

- měření molámí vodivosti roztoků komplexů v DMF,

- infračervená spektroskopie (FT IR), kde oblast 400 až 4000 cm'¹ provedena technikou KBr tablet a oblast 150 až 600 cm'¹ provedena Nujolovou technikou,

- nukleární magnetická rezonance (NMR) - ’H, ^I3C, ^I95Pt, ‘Η-'Η gs-COSY, *H-^I3C gs-HMQC, ’Η-¹^ gs-HMBC a gs-HMBC experimenty,

- monokrystalová rentgenová strukturní analýza.

Technické řešení využívá bis(dimethylsulfoxid-S,S')-cyklobutan-l,l-dikarboxyláto-0,0' platnatý komplex, [Pt(DMSO)₂(cbdc)], jako výchozí platnatou sloučeninu. Uvedená sůl není komerčně dostupná, lze ji však přiravit postupem uvedeným v dostupné literatuře (Bitka, P.; Morton, G. O.; Dunne, T. S.; Santos, E. F. D.; Lin, Y.; Boone, S. R.; Haltiwanger, R, C.; Pierpoint, C. G. Inorg. Ckem. 1990, 29, 645-652, Schéma 2). Procentové zastoupení prvků C, H, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro PtS20₆CioH₁₈: C, 24,3 (23,9); H, 3,7 (3,9) %. IR (vNujol/cm’¹); 326, 378, 471. IR (vKBr/cm¹): 2924, 1663, 1613, 1353,1160, 1130.

PtC^

DMSO

DMSO ci

DMSO Cl

R^cbdc

R = H, Na. K, Ag

DMSO^

DMSO^

Schéma 2

Příklad 1: Příprava bis(2-chlor-6-(3,4-dichlonnethyl)benzylammo-9-isopropylpurmo)-cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(L2)2(cbdc)]

V 15 ml destilované vody bylo za laboratorní teploty rozpuštěno 0,1 g (0,2mmol) [Pt(DMSO)₂(cbdc)], připraveného dle (Bitka, P.; Morton, G. O.; Dunne, T. S; Santos, E. F. D.; Lin, Y.; Boone, S. R>; Haltiwanger, R. C.; Pierpoint, C. G. Inorg. Ckem. 1990, 29, 645-652.). Do vzniklého roztoku byl přidán roztok 0,148 g (0,4mmol) 2-chloro-6-(3,4-díchIonnethyl)benzylamino-9-isopropylpurinu (L₂) ve 20 ml isopropanolu. Směs byla míchána po dobu dvou dnů při teplotě 90 °C, až vznikl světle šedý produkt, který byl odfiltrován, promyt studenou destilovanou vodou a vysušen v exsikátoru nad silikagelem (Schéma 3) ^{30 * * * *}

Schéma 3

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě; vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro PtCafftíNioOíCls: C, 40,1 (39,8); H, 3,1 (3,1); N, 13,0 (13,2) %. IR (vNujol/cm¹); 421 (m,

Pt-O), 563 (vs, Pt-N). IR (vKBr/cm¹): 1169 (m, C-Cl), 1323 (vs, COO), 1586 (m, COO), 1633 (vs, C=N), 2980 (m, C-H), 3424 (w, N-H). Raman (vKBr/cm¹): 261 (w, Pt-N), 479 (w, Pt-O),

CZ 20271 Ul

890 (m, C-H), 1339 (vs, N-H), 1586 (s, C=N), 2942 (s, C-H2), 3064 (s, C-H). ^lH NMR (DMFí/7, tetramethylsilan-SiMe₄, ppm): δ 9,44 (t, 1H, 6,4, N6H), 9,32 (s, 1H, C8H), 7,68 (d, 1H, 1,8, Cl 1H), 7,58 (dd, 1H, 8,4, 1,8, C14H), 7,53 (d, 1H, 8,4, C15H), 4,96 (d, 2H, 6,2, C9H), 4,84 (sep, 1H, 6,8, C16H), 2,90 (m, 2H, C22Ha, C23Ha), 2,80 (q, 1H, 7,7, C24Ha), 1,67 (m, 2H, C22Hb,

C23Hb), 1,47 (m, 1H, C24Hb). ^,3C NMR (DMF^7, SiMe₄, ppm): δ 177,61 (C19, C20), 155,17 (C6), 153,9 (C2), 150,3 (C4), 143,86 (C8), 140,94 (CIO), 132,08 (C12), 131,14 (C15), 130,60 (Cl3), 130,04 (Cil), 128,54 (Cl4), 116,71 (C5), 56,79 (C21), 49,84 (Cl6), 44,15 (C9), 31,41 (C22, C23), 22,10 (C17, C18), 15,83 (C24). ¹⁵N NMR (DMF-J7, ppm); δ 232,7 (NI), 225,3 (N3), 185,2 (N9), 129,3 (N7), 96,3 (N6). ^l95Pt NMR (DMF-J7, K₂PtCl₄, ppm): δ -1622,45.

ίο Příklad 2; Příprava bis(2-chlor-6-(2-fluoro-6-bromo)benzyíamino-9-isopropylpunno)-cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(L|)₂(cbdc)]

V 15 ml destilované vody bylo za laboratorní teploty rozpuštěno 0,1 g (0,2 mmol) [Pt(DMSO)₂(cbdc)] a do vzniklého roztoku přidán roztok 0,16 g (0,4 mmol) 2-chloro-6-(2-fluor6-brom)benzylamino-9-isopropylpurinu (Li) ve 20 ml isopropanolu. Směs byla míchána po dobu dvou dnů při teplotě 90 °C, až vznikl světle Šedý produkt, který byl odfiltrován, promyt studenou destilovanou vodou a vysušen v exsikátoru nad silikagelem (Schéma 4). Na základě CHN chemické analýzy, infračervené (střední a vzdálená oblast), Ramanovy a *H, ¹³C a ¹⁹⁵Pt NMR spektroskopie bylo potvrzeno složení komplexu.

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro PtC₃₆H₃4N_l0O₄Cl₂F₂Br₂: C, 38,1 (37,7); H, 3,0 (2,8); N, 12,3 (12,6) %. IR (vNujol/cm'¹): 432 (w, Pt-O), 554 (m, Pt-N). IR (vKBr/cm'¹): 1171 (m, C-Cl), 1322 (s, COO), 1586 (m, COO), 1621 (s, C-N), 2980 (w, C-H), 3427 (s, N-H). Rarnan (vKBr/cm'¹): 262 (w, Pt-N), 478 (w, Pt-O), 887 (m, C-H), 1339 (vs, C-O), 1586 (s, C=N), 2942 (s, C-H2), 3064 (s, C-H). Ή NMR (DMF-e/7, tetramethylsilan-SÍMe₄, ppm): δ 9,38 (t, 1H, 6,4, N6H), 9,08 (s, 1H, C8H), 7,59 (s, 1H, C15H), 7,49 (d, 1H, 8,4, C13H), 7,32 (d, 1H, 7,7, C12H) 4,96 (d, 2H, 6,0, C9H), 4,87 (sep, 1H, 6,7, C16H), 2,86 (m, 2H, C22Ha, C23Ha), 1,80 (m, 1H, C24Ha), 1,67 (m, 2H, C22Hb, C23Hb), 1,63 (d, 6H, 6,8, C17H, C18H), 1,57 (m, 1H, C24Hb). ^I3C NMR (DMF-t/7, SiMe₄, ppm): δ 177,41 (C19, C20), 155,27 (C6), 153,75 (C2), 150,07 (C4), 143,98 (C8), 141,94 (CIO), 132,28 (Cil),

130,84(04), 130,60 (C12), 129,74 (C13), 128,84 (C15), 116,51 (C5), 56,82 (C21), 49,86 (C16), 44,35 (C9), 31,41 (C22, C23), 22,14 (07, 08), 15,86 (C24). ¹⁹⁵Pt NMR (DMF-í/7, K₂PtCl₄, ppm): δ-1626,23.

Příklad 3: Příprava bis(2-(3-hydroxypropylamino)-6-benzylamino-9-isopropylpurino)-cyklo35 butan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(Lg)2(cbdc)]

V 15 ml destilované vody bylo za laboratorní teploty rozpuštěno 0,1 g (0,2 mmol) [Pt(DMSO)₂(cbdc)J a do vzniklého roztoku přidán roztok 0,136 g (0,4 mmol) 2-(3-hydroxypropylamino)-6-benzylamino-9-isopropylpurinu (Lg) ve 20 ml ethylacetátu. Směs byla míchána po dobu dvou dnů při teplotě 90 °C, až vznikl světle šedý produkt, který byl odfiltrován, promyt studenou destilovanou vodou a vysušen v exsikátoru nad silikagelem (Schéma 5). Na základě

-9CZ 20271 Ul

OMSO^

DMSO

CHN chemické analýzy, infračervené (střední a vzdálená oblast), Ramanovy a ^]H, ¹³C a ^19íPt NMR spektroskopie bylo potvrzeno složení komplexu.

Procentové zastoupení prvků C, Η, N ve formě: vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro PtC₄₂H₅₄N_l2O₆: C, 49,6 (49,9); H, 5,3 (5,3); N, 16,5 (16,1) %. IR (vNujol/cm¹): 449 (w, Pt0), 557 (m, Pt-N). IR (vKBr/cm¹): 1346 (s, COO), 1551 (m, COO), 1621 (s, C-N), 2970 (w, CH). Raman (vKBr/cm’'): 253 (w, Pt-N), 477 (w, Pt-O), 814 (m, C-H), 1328 (vs, C-O), 1611 (s, C=N), 2938 (s, C-H2), 3057 (s, C-H). *H NMR (DMF-í/7, tetramethylsilan-SiMe₄, ppm): δ 8,74 ío (s, 1H, C8H), 8,66 (bs, 1H, N6H), 7,51 (dd, 2H, 7,3, 1,5, Cl 1H, C15H), 7,27 (tt, 2H, 7,3, 1,5, C12H, C14H), 7,20 (dd, 1H, 7,3,1,5 C13H), 6,72 (t, 1H, 6,2, N2H), 4,74 (d, 2H, 6,0, C9H), 4,72 (sep, 1H, 6,8, C16H), 4,49 (bs, 1H, O21H), 3,59 (t, 2H, 6,2, C21H), 3,42 (q, 2H, 6,2, C19H), 2,89 (t, 2H, 8,2, C24H), 1,77 (t, 2H, 8,2, C25H), 1,75 (t, 2H, 6,4, C20H), 1,54 (d, 6H, 6,8, C17H, C18H). ¹³C NMR (DMF-í/7, SiMe,, ppm); δ 177,70 (C19, C20), 160,58 (C2), 153,53 (C6),

151,01 (C4), 140,62 (CIO), 139,17 (C8), 128,82 (C12,14), 128,30 (Cil,15), 127,21 (03),

111,45 (C5), 60,17 (C21), 56,73 (C23), 48,30 (Cl6), 44,62 (C9), 39,45 (Cl9), 33,45 (C20), 31,38 (C24,25), 22,06 (C17, C18), 15,85 (C26). ^l,5Pt NMR (DMF-í/7, K₂PtCl„ ppm): -1611.

Příklad 4: Příprava dimethylsulfoxido-(2-chlor-6-(2-metíioxy)benzylammo-9-isopropylpurino)-cyklobutan-l,l-dikarboxylátoplatnatého komplexu, [Pt(DMSO)(L₇) (cbdc)]

V 15 ml destilované vody bylo za laboratorní teploty rozpuštěno 0,1 g (0,2mmol) [Pt(DMSO)2(cbdc)J a do vzniklého roztoku přidán roztok 0,08 g (0,2mmol) 2-chloro-6-(2methoxy)benzylamino-9-isopropylpurmu ve 20 ml isopropanolu. Směs byla míchána po dobu dvou dnů při laboratorní teplotě (Schéma 6). Vzniklý Šedý produkt byl odfiltrován, promyt studenou destilovanou vodou a vysušen v exsikátoru nad silikagelem. Z filtrátu byly stáním a vol25 ným odpařováním získány bezbarvé krystaly a pomocí monokrystalové rentgenostruktumí analýzy byla vyřešena molekulová a krystalová struktura komplexu [Pt(DMSO)(L7)(cbdc)] . H₂O. Molekulová struktura byla určena na přístroji Oxford Xcalibur diffractometer s detektorem CrysAlis CCD {Oxford Diffraction, 2002), redukce dat a určení mřížkových parametrů bylo provedeno pomocí CrysAlis RED (Oxford Diffraction, 2002), molekulová struktura byla řešena přímou metodou programem SHELXS97 (Skeldrick, G.M. SHELXS 97, Acta Cryst. A 1990, 46, 467), a další výpočty byly provedeny programem SHELXL97 (Sheldrick, G.M. SHELXL 97, Program for Crystal Structure Refinement, University of Gdttingen, Gdttingen, Germany, 1997). Jako software pro zobrazení molekulové struktury byl použit program Diamond (Brandenburg, K. DIAMOND, Release 3.1f, Crystal Impact GbR, Bonn, Germany, 2006).

0Μ8Ο_{χ χ0}. OMSO^X

Schéma 6

Příklad 5: In vitro cytotoxická aktivita nových derivátů karboplatiny [P^L^^cbdc)] (1-6) s ligandy odvozenými od 2-chloro-6-Á-benzylamino-9-isopropylpurinu (R - 2-fluors 6-brom L_h 3,4-dichlor L₂, 3-brom L₃, 2-trifluonnethyl L₄, 3-trifluormethyl L₅, 4trifluormethyl L₆).

Jedním z parametrů používaných jako základ pro stanovení in vitro cytotoxicity je metabolická aktivita životaschopných buněk. Například mikrotitraění analýza, kde se používá Calcein AM, je dnes rozšířena jako metoda kvantifikace buněčné proliferace a cytotoxicity. Tento test je využilo ván v programech pro screening léků a pro testy chemosensitivity. Testem se rozpoznají pouze životaschopné buňky. Množství zredukovaného Calceinu AM odpovídá počtu životaschopných buněk v kultuře.

Pro rutinní screening sloučenin a stanovení in vitro cytotoxické aktivity byly vybrány buněčné linie prsního karcinomu MCF-7 a buňky lidské erythroleukemie K562. Buňky byly udržovány v ís Nunc/Coming 80 cm² plastikových lahvích a pěstovány v mediu pro buněčné kultury (DMEM obsahující 5 g/1 glukózy, 2 mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10 % fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný), komplexy byly připraveny podle postupu popsaného v této žádosti.

Buněčné suspenze byly připraveny a naředěny podle typu buněk a podle očekávané konečné 20 hustoty buněk (10000 buněk na jamku na základě charakteristik buněčného růstu), pipetovalo se μΐ buněčné suspenze na 96-jamkové mikrotitraění destičky. Inokuláty byly stabilizovány 24 hodinovou preinkubací při 37 °C v atmosféře CO₂.

Jednotlivé koncentrace testovaných látek byly přidány v čase nula jako 20 μΐ alikvotní podíl do jamek mikrotitračních destiček. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v čtyřnásobné ředící řadě. Při rutinním testování byla nejvyšší koncentrace v jamce 25 μΜ, změny této koncentrace závisí na dané látce. Všechny koncentrace byly testovány v dubletu. Inkubace buněk s testovanými deriváty trvala 72 hodin při 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře CO₂. Na konci inkubaČní periody byly buňky analyzovány po přidání roztoku Calceinu AM (Molecular Probes) a inkubace probíhala další 1 hodinu. Fluorescence (FD) byla měřena pomocí Labsystem FIA readeru Fluo30 roskan Ascent (Microsystems). Přežití nádorových buněk (The tumor cell survival-TCS) bylo spočítáno podle následujícího vztahu: IC₅o = (FD_{jamka s d}erivtem / FDkontroiní jamka) x 100 %· Získaná hodnota IC₅₀ odpovídá koncentraci látky, kdy je usmrceno 50 % nádorových buněk.

Ke stanovení in vitro cytotoxicity připravených sloučenin vůči lidské nádorové linii HOS (osteosarkom) byl také použit MTT test. Metoda je založena na schopnosti metabolicky aktivních bu35 něk redukovat žlutou sůl 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromid (MTT) za vzniku modrého formazanového barviva. Jelikož k této přeměně dochází pouze v živých buňkách, lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek. V rámci buňky jsou za redukci zodpovědné mitochondriální dehydrogenasy. Vznikající formazanové barvivo je neroz1 1

CZ 20271 Ul pustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO s amoniakem za použití klasického spektrofotometru (ELISA reader).

Výsledky stanovení in vitro cytotoxicity za využití AM a MTT testu vyjádřené pomocí hodnoty IC₅₀ pro komplexy o složení [Pt(L ^(cbdc)] (1-6) s ligandy odvozenými od 2-chloro-6-/?-ben5 zylamino-9-isopropylpurinu (R = 2-fluoro-6-bromo L_b 3,4-dichloro I4, 3-bromo L_b 2-trifluoromethyl L₄, 3-trifluoromethyl L₅, 4-trifluoromethyl L₆) jsou uvedeny v tabulce 1, když látky byly testovány in vitro na 3 lidských nádorových liniích, a to MCF-7 prsní karcinom, K562 erythroleukemie, HOS osteosarkom. Hodnoty IC₅₀ byly pro karboplatinu nalezeny v (Carland, M.; Tan,

K. J,; White, J. Λ/.; Stephenson, J.; Murray, V.; Ďenny, W. A.; McFadyen, W. D. J. Inorg. Bioch.

2005, 99, 1738-1743)(1) a (Ghezzi, A. R.; Aceto, M.; Cassino, C.; Gabano, E.; Osella, D. J.

Inorg. Bioch. 2004, 98, 73-78)(2).

Tabulka 1

komplex | i	MCF-7 AM-test	MCF-7 MTTteet	K552 AMteet	HOS MTTteet
1	9.5	15.H8.8	9.0	17,412,0
2	4.8	13,β±5,2	4.3	14,512,1
3	5.0	22,1114,0	5,8	>50
4	94	25,119,3	9.0	>50
5	K1	38,9±3,0	21,0	>50
8	7.5	19,015,5	19,2	>50
dsptotina	11	19,514,3	5	34,215.4
karbopfatína	00·”	>1	250®	>1

CZ 20271 Ul

Claims (4)

1. NÁROKY NA OCHRANU

   L Cyklobutan-1,1-dikarboxylátokomplexy platiny v oxidačním stupni +Π a jejich krystalosolváty zahrnující strukturní motiv I nebo obecného vzorce II vyjádřeného strukturním vzorcem [Pt(L)Ácbdc)] nebo obecného vzorce III vyjádřeného strukturním vzorcem [Pt(L)(L')(cbdc)], kde

   5 (cbdc) je cyklobutan-1,1-dikarboxylátový dianion, kde symboly L a L' představují deriváty N6benzyladeninu obecného vzorce IV vázaného na atom platiny základního motivu V

   O

   0) (») (IV)

   R (V) přes libovolný atom dusíku adeninu nezávisle vybraný z atomů NI, N3, N6, N7 nebo N9, v závislosti na míře substituce molekul, a kde jsou

   10 - substituenty Rl, R2, R3 a R4 nezávisle vybrány ze skupiny:

   atom vodíku, halogen, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl, substituovaný heteroaryl, funkční skupina N15 R'-R, v níž R' a R nezávisle na sobě symbolizují atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, substituovaný alkenyl, alkynyl, substituovaný alkynyl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, cykloheteroalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, substituovaný cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, aryl, substituovaný aryl, heteroaryl, substituovaný heteroaryl a funkční skupinu,

   20 kde termín:

   - halogen představuje atom fluoru, bromu, chloru, nebo jodu,

   -alkyl . n.

   CZ 20271 Ul jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 1 až 18, především pak z 1 až 8 atomů uhlíku,

   - alkenyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodí5 kový řetězec z 2 až 18, především pak ze 2 až 8 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,

   - alkynyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z 2 až 18, především pak ze 2 až 8 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu trojnou io vazbu mezi atomy uhlíku,

   - cykloalkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cyklický uhlovodík ze 3 až 12, především pak ze 3 až 8 atomů uhlíku, a to včetně kondenzovaných cyklů nezávisle vybraných ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl a heteroaryl,

   15 - cykloheteroalkyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cykloalkyl s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra,

   - cykloalkenyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cykloalkyl obsahující alespoň jednu

   20 dvojnou vazbu mezi atomy uhlíku,

   - cykloheteroalkenyl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje cykloheteroalkyl obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi dvěma atomy uhlíku, atomem uhlíku a heteroatomem, nebo dvěma heteroatomy,

   25 - aryl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje skupinu obsahující alespoň jeden aromatický kruh,

   - heteroaryl jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje pěti- až dvanáctičlenný, především pak

   30 pěti- až šestičlenný aromatický kruh s alespoň jedním atomem uhlíku zaměněným za heteroatom ze skupiny dusík, kyslík, nebo síra, a to heteroarylu kondenzovaného s jedním nebo více cykly nezávisle vybranými ze skupiny cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl a heteroaryl,

   - funkční skupina

   35 jako taková nebo jako součást jiné skupiny představuje amino, alkylamino, dialkylamino, alkenylamino, cykloalkylamino, cykloheteroalkylamino, cykloalkenylamino, cykloheteroalkenylamino, arylamino, heteroarylamino, acylamino, hydroxy, alkylhydroxy, alkoxy, aryloxy, kyano, karboxy, alkylkarboxy, karboxyalkyl, arylkarboxy, karboxyaryl, hydroxyamino, acyl, nitro, amido, nitroso, sulfonyl, sulfinyl, sulfamido, thio, alkylthio, arylthio, merkapto, karbamoyl,

   40 - substituovaný alkyl, substituovaný alkenyl, substituovaný alkynyl, substituovaný cykloalkyl, substituovaný cykloheteroalkyl, substituovaný cykloalkenyl, substituovaný cykloheteroalkenyl, substituovaný aryl a substituovaný heteroaryl jako takové nebo jako součásti jiných skupin představují alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl a heteroaryl substituované substituenty z

   45 množiny halogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, cykloheteroalkyl, cykloalkenyl, cykloheteroalkenyl, aryl, heteroaryl a funkční skupina.
2. 2. Krystalosolváty platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů podle nároku 1, kde u sloučenin obecného složení [Pt(L)₂(cbdc)] . xSolv nebo [Pt(L)(L')(cbdc)] . xSolv udává x počet krystalových molekul, především 1 až 6, a Solv je konkrétní molekula použitého rozpouštědla

   1 Λ

   CZ 20271 Ul a/nebo některá z reakčních komponent, obvykle vybrána ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, aceton, AW-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, chloroform, díchlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

   5
3. 3. Farmaceutický nebo farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů podle nároku 1 nebo farmaceutickou kompozici platnatých cyklobutan-l,l-dikarboxylátokomplexů s jedním či více přijatelných nosičů a pomocných látek.
4. 4. Farmaceutický nebo farmakologický prostředek podle nároku 3 pro použití v lékařství.