[go: up one dir, main page]

CZ20023330A3 - Konjugáty kamptotecinu a polyglutamové kyseliny a způsoby přípravy - Google Patents

Konjugáty kamptotecinu a polyglutamové kyseliny a způsoby přípravy Download PDF

Info

Publication number
CZ20023330A3
CZ20023330A3 CZ20023330A CZ20023330A CZ20023330A3 CZ 20023330 A3 CZ20023330 A3 CZ 20023330A3 CZ 20023330 A CZ20023330 A CZ 20023330A CZ 20023330 A CZ20023330 A CZ 20023330A CZ 20023330 A3 CZ20023330 A3 CZ 20023330A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
camptothecin
polyglutamic acid
composition
conjugate
cpt
Prior art date
Application number
CZ20023330A
Other languages
English (en)
Inventor
J. Peter Klein
Jack W. Singer
Robert A. Lewis
John Tulinsky
Vries Peter De
Rama Bhatt
Original Assignee
Cell Therapeutics, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cell Therapeutics, Inc. filed Critical Cell Therapeutics, Inc.
Publication of CZ20023330A3 publication Critical patent/CZ20023330A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
    • C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
    • C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polyamides (AREA)

Description

Oblast techniky
Předložený vynález se týká kompozic (přípravků) obsahujících polymery na bázi polyglutamové kyseliny, které jsou kovalentně konjugovány s kamptothecinem, resp. sjeho biologicky aktivními analogy kamptothecinu. Předložený vynález se dále týká přípravy a farmaceutického použití takových přípravků.
Dosavadní stav techniky
Kamptothecin je ve vodě nerozpustný, opticky aktivní alkaloid získaný ze stromu Camptotheca acuminata. 20(S)-kamptothecin a 20(S)-kamptothecinová analoga jsou cytotoxické agens, a předpokládá se, že stabilizují jednořetězcové zlomy indukované topoizomerázou I ve fosfodiesterovém hlavní řetězci DNA, a tím zabraňují religaci. Tento mechanizmus vede k produkci zlomu ve dvouřetězové DNA během replikace, a pokud není DNA opravena, má za následek apoptózu. 20(S)-Kamptothecin a 20(S)-kamptothecinová analoga jsou ve vodě nerozpustná. Velký počet těchto léčiv má vynikající protinádorovou aktivitu proti lidským rakovinovým buněčným liniím a in vivo zvířecím xenoimplantátům. Nicméně díky jejich nerozpustnosti ve vodě, je podání těchto léčiv velmi obtížné. Farmakologicky důležitý laktonový kruh 20(S)kamptothecinu a jeho analog je v přítomnosti lidského plazmového albuminu nestabilní, což vede ke konverzi aktivního léčiva na inaktivní karboxylátovou formu, která se váže na albumin. Jeden přístup řešící tyto farmaceutické a farmakokinetické problémy 20(S)-kamptothecinu a 20(S)-kamptothecinových analog spočívá v jejich kovalentní vazbě na neutrální polymery, např. polyethylenglykol (viz např. odkaz 1 a 2 níže). Použitím tohoto přístupu může být rozpustnost ve vodě nejaktivnějších kamptothecinů zlepšena takovým způsobem, že konjugované polymery mohou být parenterálně podávány ve vodném médiu.
• · • * • · · · · 4
Je zde stálá potřeba nových polymerních konjugátů, které jsou schopné solubilizovat větší množství 20(S)-kamptothecinu a 20(S)-kamptothecinových analog na polymerovém řetězci, a tím snížit celkovou hmotnost polymeru potřebného k podání příslušné dávky aktivního léčiva. Navíc je zde také stálá potřeba nových polymerních konjugátů, které mohou mít výjimečné vlastnosti jako protinádorová agens, kde tyto vlastnosti nemohou být zjištěny u nekonjugováných ve vodě rozpustných proléčiv a analog 20(S)-kamptothecinu. Literatura patřící ke stavu techniky:
1. US Patent No. 5,646,159
2. Greenwald et al., Bioorg. Med. Chem. 6: 551 - 552 (1998)
3. US Patent No. 5,545,880
4. Conover et al. Cancer Chemother. Pharmacol. 42·. 407 - 414 (1998)
5. PCT Application WO99/17804
6. Hesswijk et al. J. Cont. Re. 7: 312 (1985)
7. US Patent No. 5,880,131
8. US Patent No. 5,892,043
9. US Patent No. 5,837,673
10. US Patent No. 5,854,006
11. US Patent No. 5,340,817
12. US Patent No. 4,943,579
13. Singer et al., Ann. NY Acad. Sci. 922:136 - 150 (2000)
Definice
Termín „polyglutamová kyselina“ nebo „polymer na bázi polyglutamové kyseliny“, jak je používán v předloženém vynálezu, zahrnuje póly (1-glutamovou kyselinu), póly (d-glutamovou kyselinu), póly (dl-glutamovou kyselinu), póly (1gamma glutamovou kyselinu), póly (d-gamma glutamovou kyselinu) a póly (dlgamma glutamovou kyselinu). Výhodně zahrnuje polymer na bázi polyglutamové kyseliny alespoň 50% jejich aminokyselinových zbytků jako glutamovou kyselinu, výhodněji 100%. Polymer na bázi polyglutamové kyseliny může být substituován až 50% přirozeně se vyskytujícími nebo chemicky modifikovanými aminokyselinami, výhodně hydrofilní aminokyseliny, za předpokladu, že pokud ·· ·· • · jsou konjugovány s terapeutickým agens, má substituovaný polymer na bázi polyglutamové kyseliny zlepšenou rozpustnost ve vodě a/nebo zlepšenou účinnost ve srovnání s nekonjugováným terapeutickým agens a je výhodně neimunogenní.
Molekulová hmotnost polymeru na bázi polyglutamové kyseliny používaného při přípravě konjugátu způsoby popsanými v předloženém vynálezu je typicky větší než 5000 daltonů, výhodně od 20 kD do 80 kD, výhodněji od 25 kD do 60 kD (jak je stanoveno podle viskozity). Odborná veřejnost se za jisté uvědomí, že molekulové hmotnosti se mohou v závislosti na zvolené metodě lišit. Tyto jiné metody zahrnují např. gelovou filtraci, spektroskopickopické metody (měření s malým úhlem rozptylu a úhel rozptylu laseru), index lomu a jejich kombinace.
Termín „PG“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na polymer na bázi polyglutamové kyseliny.
Termín „kamptothecin“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na 20(S)-kamptothecin a biologicky aktivní 20(S)-kamptothecinový analog.
Termín „CPT“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na 20(S)-kamptothecin mající strukturu uvedenou níže:
kde R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = H.
·· 99 .1
Termín „20(S)-kamptothecinový analog“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na biologicky aktivní 20(S)-kamptothecinový analog, kde jeden nebo více substituentů R na kamptothecinové struktuře uvedené výše je jiných než H. Viz např. Wang et al., Med. Res. Rev. 17: 367 - 425 (1997); Labergne and Bigg Bull. Cancer (Paris) 7: 51 - 8 (1998); a tabulka 2 zde uvedená.
Termín „konjugát na bázi polyglutamové kyseliny a kamptothecinu“ nebo „PG-kamptothecin“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na polymer na bázi polyglutamové kyseliny, který je kovalentně vázán na 20(S)kamptothecin nebo biologicky aktivní 20(S)-kamptothecinový analog přímou vazbou mezi skupinou karboxylové kyseliny polyglutamové kyseliny a funkční kyselinou terapeutického agens nebo nepřímou vazbou přes skupinu bifunkčního spaceru. Výhodné spacerové skupiny jsou takové, které jsou relativně stabilní vůči hydrolýze při cirkulaci, jsou biologicky odbouratelné a jsou netoxické při odštěpení od konjugátu. Je samozřejmé, že vhodné spacery nebudou interferovat s protinádorovými účinky konjugátů. Příklady spacerů zahrnují aminokyseliny (např. glycin, alanin, β-alanin, glutamová kyselina, leucin, izoleucin), -[NH(CHR')p-CO]n-, kde substituent R' je boční řetězec přirozeně vyskytující se aminokyseliny, n je celé číslo mezi 1 a 10, nejvýhodněji mezi 1 a 3; a p je celé číslo mezi 1 a 10, nejvýhodněji mezi 1 a 3; hydroxykyseliny obecného vzorce [O-(CHR')p-CO]n-, kde substituent R' je boční řetězec přirozeně vyskytující se aminokyseliny, n je celé číslo mezi 1 a 10, nejvýhodněji mezi 1 a 3; a p je celé číslo mezi 1 a 10, nej výhodněj i mezi 1 a 3 (např. 2-hydroxyoctová kyselina, 4hydroxybutyrová kyselina); dioly, aminothioly, hydroxythioly, aminoalkoholy a jejich kombinace. Výhodné spacery jsou aminokyseliny, výhodně přirozeně vyskytující se aminokyseliny, výhodněji glycin. Terapeutický agens může být připojen k polymeru nebo spaceru jakýmkoliv způsobem spojení, který vede k fyziologicky štěpitelné vazbě (tzn. vazba, která je štěpitelná enzymatickým nebo neenzymatickým mechanizmem, který se týká podmínek v živých zvířecích organizmech). Příklady výhodných vazeb zahrnují ester, amid, karbamát, karbonát, acyloxyalkylether, acyloxyalkylthioether, acyloxyalkylester,
I
acyloxyalkylamid, acyloxyalkoxykarbonyl, acyloxyalkylamin, acyloxyalkylamid, acyloxyalkylkarbamát, acyloxyalkylsulfonamid, ketal, acetal, disulfid, thioester, N-acylamid, alkoxykarbonyloxyalkyl, močovinu a N-sulfonylimidát. V současné době je nejvýhodnější amidová a esterová vazba.
Způsoby přípravy těchto vazeb jsou dobře známy v oboru organické syntézy a mohou být nalezeny ve standardní literatuře, např. March, Advanced Organic Chemistry, Wiley Interscience (1992).
Míra navázání kamptothecinu na PG může být vyjádřena jako množství molekul na polymerový řetězec na bázi polyglutamové kyseliny nebo výhodně jako % z celkové hmotnosti konjugátu („% navázání“). Optimální míra navázání pro příslušný konjugát a příslušné použití je stanoveno empiricky na základě požadovaných vlastností konjugátu (např. rozpustnost ve vodě, terapeutická účinnost, farmakokinetické vlastnosti, toxicita a dávkovači podmínky).
Procento navázaného konjugátu PG-kamptothecinu může být měřeno podle způsobu uvedeného níže v odstavci o způsobu přípravy.
Kamptothecin a kamptothecinová analoga musí být schopná se připojit na polymer pomocí funkčních skupin, které jsou již v nativní molekule přítomny nebo mohou být jinak zaveditelné standardními postupy v organické syntéze bez změny aktivity agens. V příkladech uvedených zde a jak je uvedeno v tabulce 3 je kamptothecin relativně ve vodě nerozpustný v nekonjugované formě a vykazuje výrazně zlepšenou rozpustnost po konjugaci. Nicméně se předpokládá, že i ve vodě rozpustná analoga a proléčiva (např. estery aminokyselin) mají výhody po své konjugaci na polyglutamovou kyselinu (např. zlepšenou farmakokinetiku a retenci v místě účinku v porovnání s nekonjugovaným agens, zvýšenou účinnost).
Reakcemi prováděnými za „standardních kopulačních podmínek“ je míněno provedení v inertním rozpouštědle (např. dimethylformamidu, dimethylsulfoxidu,
V-methylpyrrolidonu) při teplotě od -20°C do 150°C, výhodně od 0°C do 70°C, výhodněji od 0°C do 30°C, v přítomnosti kopulačního činidla a katalyzátoru. Je samozřejmé, že použitá teplota bude záviset na příslušných faktorech, např. stabilitě terapeutického agens a reaktivitě atakující skupiny. Vhodná kopulační činidla jsou dobře známa v organické syntéze a zahrnují, ale není to nikterak limitováno, karbodiimidy, alkylchloroformiát a triethylamin, pyridiniové solitributylamin, fenyldichlorofosfát, 2-chloro-l,3,5-trinitrobenzen a pyridin, di-2pyridylkarbonát, polystyryldifenylfosfin, (trimethylsilyl)ethoxyacetylen, Ι,Γkarbonylbis(3-methylimidazolium)triflát, diethylazodikarboxylát a trifenylfosfin, ΛζΥ’-karbonyldiimidazol, methansulfonylchlorid, pivaloylchlorid, atd. Vhodné katalyzátory pro alkoholovou kopulaci zahrnují, např. 4-N,Ndimethylaminopyridin a 4-pyrollidinopyridin. Termín „inertní rozpouštědlo“, jak je používán v předloženém vynálezu, znamená rozpouštědlo, které je inertní za podmínek reakce popsané výše [včetně např. benzenu, toluenu, acetonitrilu, tetrahydrofuranu („THF“), dimethylformamidu („DMF“), chloroformu („CHCI3“), methylenchloridu (nebo dichlormethanu nebo „CH2CI2“), diethyletheru, ethylacetátu, acetonu, methylethylketonu, dioxanu, pyridinu, dimethoxyethanu, ř-butylmethyletheru, atd. Pokud není uvedeno jinak, jsou rozpouštědla používaná v reakcích podle předloženého vynálezu inertní rozpouštědla.
Pokud se na kamptothecinu nacházejí různé funkční skupiny, bude selektivní připojení jednotlivých funkčních skupin na polymer na bázi polyglutamové kyseliny typicky vyžadovat použití vhodné chránící skupiny. Termín „chránící skupina“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na jakoukoliv skupinu, která, pokud je připojena k jednomu nebo více hydroxylů, thiolů, aminoskupin a karboxy lů sloučenin, zabraňuje reakcím na těchto skupinách a tato chránící skupina může být odstraněna standardními chemickými nebo enzymatickými postupy k obnovení hydroxylové, thiolové, amino nebo karboxylové funkce. Obecně viz Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, 1999 (John Wiley and Sons, N.Y.).
• · 44 * 4 4
4 ·
·· 4 4 • '· .1 .
Konkrétní použitelná odstranitelná chránící skupina není kritickým prvkem systému a výhodné odstranitelné hydroxyl chránící skupiny zahrnují standardní substituenty, např. allyl, benzyl, acetyl, chloroacetyl, thiobenzyl, benzylidin, fenacyl, /-butyl-difenylsilyl,/-butyldimethylsilyl, triethylsilyl, MOM (methoxymethyl), MEM (2-methoxyethoxymethyl) a jakékoliv další jiné skupiny, které mohou být zavedeny chemicky na hydroxylovou funkci a poté odstraněny buď chemickými nebo enzymatickými metodami za mírných podmínek slučitelných s charakterem produktu.
Výhodné odstranitelné amino chránící skupiny zahrnují standardní substituenty, např. /-butoxykarbonyl (/-BOC), benzyloxykarbonyl (CBz), fluorenylmethoxykarbonyl (FMOC), allyloxykarbonyl (ALOC), trichloroethoxykarbonyl (TROC), atd., které mohou být odstraněny za standardních podmínek, jenž jsou slučitelné s charakterem produktu. Výhodné karboxyl chránící skupiny zahrnují estery, např. methyl, ethyl, propyl, /-butyl, atd., které mohou být odstraněny za mírné hydrolýzy slučitelné s charakterem produktu.
Názvosloví
Konjugáty PG-kamptothecinu podle předloženého vynálezu jsou označeny způsobem, který je uveden pro názorné konjugáty v tabulce 1. Názvosloví používané v tabulce 1 může být také pochopeno v souvislosti s obrázkem 1.
Tabulka 1
sloučenina PG konjugát
1 PG-CPT (20-konjugovaný)
2 PG-(lO-OAc-CPT) (20-konjugovaný)
3 PG-(IO-OH-CPT) (20-konjugovaný)
4 PG-gly-CPT (20-vázaný)
5 PG-gly-gly-CPT (20-vázaný)
·· «· • · · • · · ·· • ·· · ♦ ·· · ·· · · to· ·· ► to · i to i
6 PG-gly-gly-gly-CPT (20-vázaný)
7 PG-ala-CPT (20-vázaný)
8 PG-(d-ala)-CPT (20-vázaný)
9 PG-(4-NH-butyryl)-CPT (20-vázaný)
10 PG-(2-O-acetyl-CPT (20-vázaný)
11 PG-(4-O-butyryl)-CPT (20-vázaný)
12 PG-(D-glu)-CPT (20-vázaný)
13 PG-(IO-O-CPT) (10-konjugovaný)
14 PG-gly-(lO-O-CPT) (10-vázaný)
15 PG-(9-NH-CPT) (9-konjugovaný)
16 PG-gly-(9-NH-CPT) (9-vázaný)
17 PG-gly-(lO-OH-CPT) (20-vázaný)
18 PG-gly-(7-Et-10-OH-CPT) (20-vázaný)
19 PG-gly-(7-t-BuMe2Si-10-OAc- CPT) (20-vázaný)
Přehled obrázků na výkresech
Na obrázku 1 jsou zobrazeny struktury konjugátů PG-kamptothecinu (PGCPT) uvedené v tabulce 1.
Detailní popis výhodných provedení
A. Konjugáty
Předložený vynález zahrnuje farmaceuticky aktivní konjugáty polyglutamové kyseliny-kamptothecinu, které jsou charakterizovány obecným vzorcem (I):
• 4 «4 • · * • · · ·· • · ·
4 4 » · 4 4 •· ·· * 4 4
4 4
4 4 •44 ♦» 4444 (Kamptothecin—X-)—PG * m ve kterém
PG je polymer na bázi polyglutamové kyseliny;
X je jednoduchá vazba, aminoacylový linker -[-OC-(CHR')p-NH]n- nebo hydroxyacylový linker
-[OC-(CHR')p-O]n-, kde substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny;
kamptothecin je 20(S)-kamptothecin nebo biologicky aktivní 20(S)kamptothecinový analog; m je kladné celé číslo od 5 do 65;
kamptothecin-X je kovalentně vázaný na karboxylovou skupinu uvedeného polymeru přes esterovou nebo amidovou vazbu; nje celé číslo mezi 1 a 10, nejvýhodněji mezi 1 a 3; a p je celé číslo mezi 1 a 10, nejvýhodněji mezi 1 a 3; a specifické vzorce (II) - (VII)
II;
kde substituenty R1, R2, R3 a R4 jsou každý H; nebo substituent R1 je -NH2 a substituenty R2, R3 a R4 jsou každý H; nebo substituent R1 je -NO2 a substituenty R2, R3 a R4 jsou každý H; nebo substituenty Rl, R3 a R4 jsou každý H a substituent R2 je -OH; nebo substituenty R1, R3 a R4 jsou každý H a substituent R2 je -O-C(O)-CH3; nebo substituenty R1 a R3 jsou každý H, substituent R4 je -SiMe2-í-Bu a substituent R2 je -OH.
tt tt * · 4 * t ttt * · · • · · to· «to
IH;
·· ·· * toto • ·
IV;
a • 0
0·0 ··»
Y je N nebo Ο;
substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny;
substituent R1 je -NH2 nebo H;
substituent R2 je -H, -OH nebo -0-0(0)-0¾;
substituent R3 je -H nebo alkylová skupina; a substituent R4 je -H, alkylová skupina nebo trialkylsilylová skupina.
Termín „alkylová skupina“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na alifatickou uhlovodíkovou skupinu. Alkylová skupina má 1 až 20 atomů uhlíku (kdekoliv je zde citovaná, číselné rozmezí např. „1 až 20“ znamená jakékoliv číslo v daném rozmezí; např. „1 až 20 atomů uhlíku“ znamená, že alkylová skupina se může sestávát z 1 atomu uhlíku, ze 2 atomů uhlíku, ze 3 atomů uhlíku, atd., až a včetně 20 atomů uhlíku, ačkoliv zde uvedená definice také zahrnuje výskyt termínu „alkylová skupina“, kde není uvedeno číselné rozmezí). Výhodněji je alkylová skupina o „střední“ velikosti mající 1 až 10 atomů uhlíku. Nejvýhodněji je „nižší“ alkylová skupina mající 1 až 4 atomy uhlíku, např. methyl, ethyl, propyl, izopropyl, «-butyl, /erc-butyl, zzo-butyl. Alkylová skupina může být substituovaná nebo substituovaná. Pokud je substituovaná, substituent(y) je(jsou) výhodně jedna nebo více skupin jednotlivě a nezávisle vybrané z hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, merkaptoskupiny, alkylthioskupiny, halogenu, karbonylu, nitroskupiny y aminoskupiny.
Termín „trialkylsilylová skupina“, jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na skupinu —Si(alkyl)3, kde termín „alkylová skupina“ je definován výše.
Výhodná provedení tohoto vynálezu zahrnují konjugáty PGkamptothecinu, které vykazují výraznou protinádorovou aktivitu, zvýšenou rozpustnost ve vodě, sníženou toxicitu a zvýšené maximální tolerované dávky (MTD) v porovnání s nekonjugovaným kamptothecinem nebo kamptothecinovým analogem. Předpokládá se, že tyto konjugáty také vykazují unikátní farmakokinetické vlastnosti (např. zvýšenou permeabilitu a retenci v nádorové tkáni, postupné uvolňování aktivního agens, dlouhý biologický poločas) v porovnání s nekonjugovaným agens a stabilizaci laktonového kruhu proléčiva, o které je známo, že je rozhodující pro jejich aktivitu. Dále se předpokládá, že schopnost solubilizovat vysoce nerozpustná kamptothecinová analoga konjugací na mnohačetná dostupná konjugační místa na PG bude rozšiřovat rozmezí klinického použití kamptothecinových analog, která mohou být vysoce aktivní, ale která nemohou být používána v důsledku svých problémů s rozpouštěním. S odkazem na výše uvedené vzorce jsou konjugáty PG-kamptothecinu reprezentované obecným vzorcem (II) a vzorcem (VI) nej výhodnější, kde substituenty R , R1, R2, R3 a R4 jsou každý H;
substituenty R1, R3 a R4 jsou každý H a substituent R2 je -OH nebo -O-C(O)CH3;
substituent R1 je -NH2 a substituent R2, R3 a R4 jsou každý H;
a konjugát reprezentovaný obecným vzorcem (IV).
Polymer na bázi polyglutamové kyseliny používaný v konjugátu by měl být ve vodě rozpustný, biologicky degradovatelný a výrazně neimunogenní. Polymery na bázi polyglutamové kyseliny, které spadají do rozsahu předloženého vynálezu jsou popsány výše (viz oddíl definice). Molekulová hmotnost polymeru na bázi polyglutamové kyseliny je typicky větší než 5000 daltonů, výhodně od 20 kD do 80 kD, výhodněji od 25 kD do 60 kD (jak je stanoveno podle viskozity). Nejvýhodněji jsou polymery na bázi poly-(Lglutamové kyseliny) mající molekulovou hmotnost mezi 30 kD a 50 kD. Odborná
99
9 φ
9
9
9999 * · • · 99 • 9 9 • · · ·· · 9 9 9 • 9 9 9
99 veřejnost se zajisté uvědomí, že molekulové hmotnosti se mohou v závislosti na zvolené metodě lišit. Tyto jiné metody zahrnují např.gelovou filtraci, spektroskopickopické metody (měření s malým úhlem rozptylu a úhel rozptylu laseru), index lomu a jejich kombinace.
Pro přímé konjugáty podle předloženého vynálezu se % navázání pohybuje výhodně v rozmezí od asi 7% do asi 20%, výhodněji od asi 10% do asi 17% a ještě výhodněji od asi 12% do asi 15%. Pro konjugáty vázané nepřímo na PG přes aminokyselinový linker se % navázání pohybuje výhodně v rozmezí od asi 7% do asi 50%, výhodněji od asi 15% do asi 38% a nejvýhodněji od asi 20% do asi 38%.
B. Způsoby přípravy
Konjugáty polyglutamové kyseliny-kamptothecinu podle předloženého vynálezu jsou připraveny přímým nebo nepřímým nazáváním biologicky aktivního kamptothecinu na polymer na bázi polyglutamové kyseliny. Může být používán jakýkoliv kamptothecin za předpokladu, že obsahuje nebo může být funkcionalizován skupinou, která může být vázána na gamma-karboxylátovou skupinu PG, výhodně přes esterovou nebo amidovou vazbu. Viz např. Wang, et al. Med. Res. Rev. 17: 367 - 425 (1997). Labergne and Bigg, Bull. Cancer. (Paris) 7: 51 - 8 (1998) a tabulka 2 níže. Tudíž 20(S)-kamptothecin a biologicky aktivní 20(S)-kamptothecinová analoga mohou být vázána na PG přes 20(S)-hydroxylovou skupinu kamptothecinového jádra nebo přes další dostupnou funkční skupinu analoga.
Obecně jsou přímo vázané konjugáty polyglutamové kyselinykamptothecinu připraveny rozpuštěním kamptothecinu a polyglutamové kyseliny v dimethylformamidu nebo jiném inertním rozpouštědlem, ochlazením roztoku a přidáním do ochlazené směsi kopulačního činidla a přebytku aminové báze, např. dimethylaminopyridinu. Kupodivu bylo až nyní zjištěno, že použití chloridu bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfinové kyseliny (BOP-C1) nebo 2chlormethylpyridinium-jodidu jako kopulačních činidel umožňuje přípravu konjugátů s výrazně zvýšeným obsahem 20(S)-kamptothecinu nebo 20(S)-kamptothecinových analog (tzn. % navázání v rozmezí asi 10% - 20%) v porovnání s tím, co bylo dosud známo. Toto zjištění je velmi důležité, protože poskytuje přípravky s vysoce zvýšeným molárním poměrem aktivního léčiva na PG polymer, a tím snížení celkové hmotnosti polymeru potřebného k podání příslušné dávky léčiva pacientovi. Další výhody a nové charakteristiky těchto konjugátů jsou diskutovány v této přihlášce. Reakční směs se nechá ohřát a míchá po dostatečně dlouhou dobu k proběhnutí reakce z asi 70%. Výsledný konjugát může být izolován precipitací z roztoku přidáním přebytku vodného roztoku soli (např. NaCl, KCl, NH4CI), výhodně 10-15% roztok soli, za chlazení reakční směsi v rozmezí 0°C až 10°C a spojením konjugátu jako pevné látky ve své protonované formě.
Bylo zjištěno, že k dosažení vysokého stupně účinnosti přípravku podle předloženého vynálezu s minimální toxicitou je nezbytné odstranění nezreagovaného kamptothecinu z konjugátu. Nezreagovaný kamptothecin a další nečistoty mohou být extrahovány promyýtím pevného konjugátu organickým rozpouštědlem, ve kterém nezreagovný kamptothecin a další nečistoty (nikoliv konjugát) jsou rozpustné, např. 1 až 3% methanol-dichlormethan, 1 až 3% methanol-chloroform, chloroform, dichlorethan a další. Obecně přítomnost nezreagovaného kamptothecinu v konjugátovém produktu může být detegována sonikací konjugátu po dobu 3 hodin v 2% methanolu-dichlormethanu a analýzou kamptothecinu v organickém extraktu pomocí TLC. !H NMR spektrum konjugátu umožní potvrdit, že kamptothecin je kovalentně vázaný na PG (viz tabulka 3 NMR analýz vybraných názorných příkladů konjugátů).
Ke stanovení množství navázaného léčiva na polymer je část přímo konjugováného PG-kamptothecinu podrobena hydrolýze bází k uvolnění konjugovaného kamptothecinu, který také otevírá laktonový kruh na sůl volné karboxylové kyseliny. Po okyselení k opětovnému zavření karboxylátu na lakton se uvolněný kamptothecin extrahuje. Tímto způsobem získaný kamptothecin se srovnává se vzorkem pravého kamptothecinu na TLC a NMR. Procentuální navázání se vypočte z množství kamptothecinu, které je izolováno v extraktu a ♦: .:
• · •4 li
4 4
9 i
9 4
9 4
44- 4444 *· ♦ · • · ·
9 9 94 * 4 4 1
9 4 9
99 hmotnosti konjguvaného produktu. Procentuální navázání může být také stanoveno měření UV absorbance PG-kamptothecinu a vypočtením obsahu kamptothecinu ze kalibrační křivky kamptothecinu. Typicky je toto stanovení prováděno při vlnové délce 364 nm. Nicméně odborná veřejnost ví, že určit optimální vlnovou délku pro toto stanovení lze pouze rutinním experimentem. Pokud jsou rozmanité funkční skupiny dostupné pro připojení, může selektivní připojení konkrétní skupiny léčiva na polymer na bázi polyglutamové kyseliny vyžadovat použití vhodné chránící skupiny v závislosti na rozdílných reaktivitách skupin. Nikterak nelimitujícím příkladem vhodné chránící skupiny je acetylová skupina. Další vhodné chránící skupiny známé odborné veřejnosti jsou popsány např. v knize autorů Greena a Wutse, která je zde citována.
Reakce 20(S)-10-hydroxykamptothecinu s aktivním acylovým donorem, např. anhydrid kyseliny octové v přítomnosti pyridinu jako báze, probíhá výhradně pouze v poloze 10-hydroxylu. 10-Acetoxyderivát se pak připojí na PG přes 20(S)-hydroxyl. Acetát byl vybrán jako chránící skupina, protože se předpokládá, že bude hydrolyzován in vivo a je farmaceuticky přijatelný. Alternativně může být 10-hydroxyl chráněn odstranitelnou chránící skupinou (např. BOC) před konjugací na PG, pak odstraněním chránící skupiny trifluoroctovou kyselinou (viz příklad 3 níže). Za absence chránicí skupiny poskytne reakce 20(S)-10-hydroxykamptothecinu s PG pomocí chloromethylpyridinium-jodidu/4-dimethylaminopyridinu/PG-H v dimethylformamidu PG-(IO-O-CPT) jako výhradní produkt.
Kopulace 20(S)-9-aminokamptothecinu s PG za podmínek přímé konjugace (chloromethylpyridinium-jodid a 4-dimethylaminopyridin) probíhá na heteroatomovém substituenty aromatického A-kruhu a v tomto případě vzniká PG-9-NH-CPT jako výhradní produkt. Tento závěr byl odvozen na základě výsledků z analogické kopulace 20(S)-9-aminokamptothecinu s a-tercbutylesterem Boc-L-glutamové kyseliny, jenž poskytla produkt, jehož ’Η NMR spektrum vykazovalo charakteristické posuny signálů v důsledku 20(S)-9aminokamptothecinových aromatických protonů, zatímco signály v důsledku protonů ethylů laktonu nebyly posunuty.
• 9 ·· • * 9
9 9
9 9 • · 9 ♦ 9 9999
Konjugáty PG-kamptothecinu spadající do předloženého vynálezu mohou být také připraveny inzercí bifunkčního linkeru mezi 20(S)-kamptothecin nebo analogu 20(S)-kamptothecinu a alfa nebo gamma karboxyskupinu PG polymeru. Výhodné linkery jsou přirozeně se vysktytující aminokyseliny, β-aminokyseliny, gamma aminokyseliny nebo hydroxykyseliny, výhodněji glycinové linkery. Použití linkerů poskytuje účinné konjugáty s ještě větším % navázání 20(S)kamptothecinu a jeho analog než u přímých konjugátů. Nepřímé konjugáty jsou obecně získány připravením esteru aminokyseliny nebo hydroxyesteru 20(S)kamptothecinu nebo požadovaného analoga 20(S)-kamptothecinu podle známého způsobu (viz např. US Patent No. 5,646,159 a Greenwald et al., Bioorg. Med. Chem. 6: 551 - 562 (1998)) na alfa nebo gamma karboxyskupinu PG přes aminoskupinu aminokyseliny nebo hydroxyskupinu hydroxykyseliny za standardních kopulačních podmínek za vzniku amidové, resp. esterové vazby.
Konjugace 20(S)-10-hydroxykamptothecinu s PG přes glycinový linker připojený k 20(S)-hydroxylu se provede reakcí 20(S)-10-hydroxykamptothecinu s di-íerc-butyldikarbonátem a pyridinem za vzniku jedinného odpovídajícího 10O-Boc-derivátu, který se poté 20-O-acyluje Boc-glycinem pomocí karbodiimidového kopulačního činidla (např. diizopropylkarbodiimid, l-ethyl-3(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid) a 4-dimethylaminopyridin. Odstraněním Boc chránících skupin trifluoroctovou kyselinou a následně konjugací s PG se získá PG-gly-(lO-OH-CPT). PG-gly-(7-Et-10-OH-CPT) a PG-gly-(7-ř-BuMe2SÍ10-OAc-CPT) se připraví tímto způsobem.
Konjugace 20(S)-10-hydroxykamptothecinu na PG přes glycinový linker připojený k 10-hydroxylu se provede následujícími způsobem. Reakcí 20(S)-10hydroxykamptothecinu se symterickým anhydridem Boc-glycinu a pyridinem se získá pouze odpovídající ester 10-(V-Boc)-glycinátu, jehož reakcí s trifluoroctovou kyselinou se dosáhne odštěpení TV-Boc chránící skupiny. Výsledný ester 10-glycinátu 20(S)-hydroxykamptothecinu se konjuguje s PG pomocí 1,3-diizopropylkarbodiimidu a 4-dimethylaminopyridinu za vzniku PGgly-(lO-O-CPT)).
i
Μ «· • · 9 • · · ·♦ * 9 9 9 •99 · ·· ·· • · 9 • 9 *
9 · · 9 *♦ 9··<
Výhradní kopulace s α-aminoskupinou glycinu byla odvozena na základě analogické kopulace esteru 10-glycinátu 20(S)-10-hydroxykamptothecinu s aterc-butylesterem N-Boc-L-glutamové kyseliny za stejných reakčních podmínek. *H NMR spektrum tohoto reakčního produktu vykazovalo charakteristické posuny signálů v důsledku 20(S)-10-hydroxykamptothecinových aromatických protonů, zatímco signály v důsledku protonů ethylů laktonu nebyly posunuty.
První dva kroky konjugace 20(S)-9-aminokamptothecinu na PG přes glycinový linker připojený k 9-aminoskupíně mohou být provedeny podle způsobu popsaného ve Wall et al., J.Med. Chem. 36: 2689 - 2700 (1993). Konjugace trifluoroctové soli 20(S)-9-(glycylamino)kamptothecinu s PG se provádí v přítomnosti diizopropylkarbodiimidu a dimethylaminopyridinu za vzniku PG-gly-(9NH-CPT). Konjugace PG s 20(S)-kamptothecinem pomocí glycyl-glycinového (gly-gly; di-gly) linkeru se provádí nejprve reakcí trifluoroctové soli 20-O-(glycyl)kamptothecinu s N-(tercbutoxykarbonyl)glycinem v přítomnosti karbodiimidového kopulaěního činidla za vzniku 20-O-((N-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)glycyl)kamptothecinu, jenž se poté nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou za vzniku trifluoroctové soli 20O-(glycyl-glycyl)kamptothecinu, která se pak dále nechá reagovat s poly-Lglutamovou kyselinou v přítomnosti jV./V-dimethylaminopyridinu a 1,3diizopropylkarbodiimidu za vzniku PG-gly-gly-CPT.
Konjugace PG s 20(S)-kamptothecinu pomocí glycyl-glycyl-glycinového (gly-gly-gly; tri-gly) linkeru se provádí nejprve reakcí ((N-(tercbutoxykarbonyl)glycyl)glycyl)-glycinu s 20(S)-kamptothecinem v přítomnosti N,/V-dimethylaminopyridinu a 1,3-diizopropylkarbodiimidu za vzniku 20-0-(((//(terc-butoxykarbonyl)glycyl)glycyl)glycyl)kamptothecinu, jenž se poté nechá reagovat s trifluoroctovou kyselinou za vzniku trifluoroctové soli 20-O-(glycylglycyl-glycyl)kamptothecinu, která se pak dále nechá reagovat s poly-(Lglutamovou kyselinou) (956 mg) v přítomnosti /V,7V-dimethylaminopyridinu a
1,3-diizopropylkarbodiimidu za vzniku PG-gly-gly-gly-CPT.
Konjugáty PG-kamptothecinu podle předloženého vynálezu vykazují protinádorovnou aktivitu proti různým nádorům, včetně lidské plicní rakoviny, lidské nemalobuněěné plicní rakoviny, rakoviny prsu, ovariální rakoviny a melanomu (viz příklad 20). Předpokládá se, že tyto konjugáty budou aktivní proti širokému spektru savčích (včetně lidských) rakovin, včetně pevných nádorů (např. plicní rakovina, ovariální rakovina, rakovina prsu, rakovina gastrointestinálního traktu, rakovina tlustého střeva, rakovina slinivky, močového měchýře, jater, prostaty a mozku) a různých hematopoézních rakovin (např. Hodgkinova nemoc, nehodginův lymfom, leukémie). Předpokládá se, že tyto konjugáty mohou být také použitelné při ošetření rakovin rezistentních vůči léčivům.
Farmaceutické přípravky obsahující konjugáty PG-kamptothecinu podle předloženého vynálezu spadají rovněž do rozshanu vynálezu. Tyto farmaceutické přípravky mohou obsahovat jakékoliv množství konjugátu, které je účinné z hlediska protinádorové aktivity in vivo. Odborné veřejnosti je zřejmé, že dávka, jenž je podávána pacientovi, bude záviset na věku, váze a fyzickém stavu pacienta, způsobu podání, konkrétní rakovině, která je ošetřována, stadiu nádoru, atd. Pro jakýkoliv konkrétní subjekt by specifické dávkovači režimy (dávka i frekvence podání) měly být upraveny podle příslušného pacienta lékařem. Rozsah dávky, který by měl být účinný (výhodně parenterální nebo intravenózní podání), se pohybuje 0,1 - 100 mg kamptothecinu nebo kamptothecinového analoga na kg tělesné váhy denně, výhodně 1-60 mg kamptothecinu nebo kamptothecinového analoga na kg tělesné váhy denně. Farmaceutické přípravky obsahují farmaceuticky účinné množství konjugátu PG-kamptothecinu ve farmaceuticky přijatelné nosiči nebo ředícím roztoku. Stanovení účinného množství farmaceutického přípravku spadá do kompetencí odborné veřejnosti. Přijatelné nosiče nebo ředící roztoky pro terapeutické použití jsou také dobře známy ve farmaceutickém oboru a jsou popsány např. v Remingtonů Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985). Konzervační prostředky, stabilizátory, barviva a další prostředky mohou být také ve farmaceutickém přípravku. Do rozsahu předloženého vynálezu rovněž spadá podání konjugátů PG-kamptothecinu v kombinační terapii s dalšími léčivy, včetně, ale není to nikterak limitováno, dalších protinádorových léčiv, a radioterapií.
V závislosti na specifických podmínkách, při kterých probíhá ošetření, mohou být tyto farmaceutické přípravky připraveny a podávány systematicky nebo lokálně. Techniky formulace a podání mohou být nalezeny v Remingtonů Pharmaceutical Sciences výše. Vhodné způsobymohou zahrnovat perorální, rektální, transdermální, vaginální, transmukózní nebo intestinální podání; parenterální podání, včetně intramuskulárního, subkutánního intramedulární injekce, jakož i intratekální, přímé intraventrikulární, intravenózní, intraperitoneální, intranazální nebo intraokulární injekce.
Pro injekci mohou být farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu připraveny ve vodných roztocích, výhodně ve fyziologicky slučitelných pufrech, např. fyziologický pufr. Použití farmaceuticky přijatelných nosičů k přípravě farmaceutických přípravků uvedených v předloženém vynálezu pro provedení podle vynálezu v jednotkových dávkách vhodných pro systémové podání spadá rovněž do rozsahu vynálezu.
Předložený vynález je dále ilustrován na následujících příkladech, které nemají jakýmkoliv způsobem limitovat rozsah předloženého vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
V následujících příkladech jsou molekulové hmotnosti používané polyglutamové kyseliny k přípravě konjugátů stanoveny dodavatelem (Sigma) na základě měření viskozit. Dále číslo příkladu odpovídá číslu sloučeniny na obrázku 1.
Příklad 1
PG-CPT (způsob 1)
Do směsi 20(S)-kamptothecinu (132 mg, 0,38 mmol) a poly-(L-glutamové kyseliny) (33 kD, 530 mg), předem sušené za vakua po dobu 4 hodin, se přidá • 0 ·· 00
0 • 0
0 •00 000 >0 00 > 0 0
0· • · 0 • · · 0« * *0 • 0 0 ·♦ 00
0000 bezvodý dimethylformamid (20 ml). Roztok se ochladí v ledové lázni a přidá se chlorid bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfinové kyseliny (174 mg, 0,68 mmol), N,Ndimethylaminopyridin (167 mg, 1,37 mmol) a diizopropylethylamin (74 mg, 0,57 mmol). Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 2 denním míchání se směs ochladí v ledové lázni a přidává se 10% vodný roztok chloridu sodného (45 ml) po dobu 25 minut. Tato směs se okyselí na pH 2,5 přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové (3,5 ml) a míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Precipitát se filtruje, promyje vodou (4 x 50 ml) a suší za vakua po dobu 12 hodin. Pevný podíl se rozetře na prášek a suspenduje v 2% methanoldichlormethanu (10 ml). Po 3 hodinovém míchání se pevný podíl separuje centrifugaci a supernatant se dekantuje. Tento promývací proces se opakuje čtyřikrát kvůli úplnému odstranění nezreagovaného kamptothecinu. Pevný podíl se suší za vakua po dobu 2 dnů, čímž se získá PG-CPT (521 mg, 87 % látková bilance vypočtená z hmotnosti izolovaného 20(S)-kamptothecinu (64, 5 mg)).
‘H NMR (300 MHz v DMSO-d6): δ 12,10 (s,-COOH), 6,90-8,80 (m), 5,15-5,8 (m), 3,10-4,35 (m), 1,42-2,62 (m,), 0,90 (br s, 19-CH3).
Hmotnostní procento navázaného 20(S)-kamptothecinu v tomto vzorku PG-CPT se se stanoví následujícím způsobem. Do suspenze PG-CPT (100 mg) v methanol-vodě (1:1,4 ml) se přidá 1 M vodný roztok hydroxidu sodného (2 ml). Žlutý roztok se míchá po dobu 16 hodin, okyselí na pH 5 přidáním IM kyseliny chlorovodíkové a extrahuje dichlormethanem (4 x 20 ml). Spojené organické extrakty se suší nad síranem hořečnatým a koncentrují za sníženého tlaku, čímž se získá 20(S)-kamptothecin (13 mg). *H NMR a TLC tohoto vzorku je shodné s pravým 20(S)-kamptothecinem. Na základě těchto výsledků je hmotností procento navázání 20(S)-kamptothecinu v tomto vzorku PG-CPT 13%.
PG-CPT (způsob 2)
Do směsi 20(S)-kamptothecinu (64 mg, 0,18 mmol) a poly-(L-glutamové kyseliny) (50 kD, 256 mg), sušené za vakua po dobu 6 hodin, se přidá bezvodý dimethylformamid (15 ml). Po ochlazení roztoku na -5°C v lázni z ledu a soli se přidá 2-chlormethylpyridinium-jodid (85 mg, 0,33 mmol) a N,N• «9
9 9 « 9 >
•49 •9 99*9
999 9
ÍÍ4
4 · 99 · « « ·· 99 dimethylaminopyridin (81 mg, 0,66 mmol) pod atmosférou argonu. Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 4 denním míchání se směs ochladí na teplotu 0°C a přidává se 10% vodný roztok chloridu sodného (35 ml) po dobu 25 minut. Směs se okyselí na pH 2,5 přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové (3,5 ml) a míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Precipitát se filtruje, promyje vodou (4 x 30 ml) a suší za vakua. Pevný podíl se rozetře na prášek a suspenduje v 2% methanol-dichlormethanu (10 ml). Po míchání po dobu 3 hodin se pevný podíl separuje centrifugací a supernatant dekantuje. Tento promývací proces se opakuje čtyřikrát kvůli úplnému odstranění nezreagovaného kamptothecinu. Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-CPT (295 mg, 97% látková bilance vypočtená z hmotnosti izolovaného 20(S)-kamptothecinu (13 mg)). !H NMR (300 MHz v DMSO-d6): δ 12,10 (s,
-COOH), 6,90-8,80 (m), 5,15-5,8 (m), 3,10-4,35 (m), 1,42-2,62 (m), 0,90 (br s, 19 -CH3). Procentuální hmotnost navázaného 20(S)-kamptothecinu v tomto vzorku PG-CPT je 16% podle způsobu popsaného výše při syntéze PG-CPT způsobem 1.
Příklad 2
PG-(lO-OAc-CPT)
20(S)-10-acetoxykamptothecin se připraví podle způsobu popsaného v patentu US 4,545,880 (Miyasaka et al), který je jako celek zde uveden ve formě odkazu.
Suspenze poly-(L-glutamové kyseliny) (50 kD, 235 mg) a 10-acetoxykamptothecinu (53 mg, 0,13 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) se rozpustí za mírného ohřívání. Po ochlazení výsledného roztoku na pokojovou teplotu se postupně přidá roztok chlormethylpyridinium-jodidu (75 mg, 0,29 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) a roztok 4-dimethylaminopyridinu (73 mg, 0,60 mmol) v dimethylformamidu (2 ml). Po 18 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a za intenzivního míchání po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (30 ml). Po okyselení na pH 1-2 pomalým přidáním 0,5M kyseliny chlorovodíkové se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dalších 30 minut. Pevný podíl se spojí centrifugací a • 4 »
4 ** ··· • · 4 • 4 444 • 4 4 4 • 4 4 4
4·
4 «
• 4
4
4444 supernatant dekantuje. Pevný podíl se suspenduje ve vodě (200 ml) a znovu izoluje po centrifugaci. Tento promývací proces se opakuje 2 x a pevný podíl se suší za vakua. Suspenze pevného podílu v 2% methanol-chloroformu (25 ml) se podrobí ultrazvuku (90 minut) a filtruje. Tento promývací proces se opakuje a pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG -(10-OAc-CPT) (174 mg, 61 % látková bilance) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz, de-DMSO) u5 7,28,5 (mnohačetné široké signály, Ar-H), 5,45, 5,20 (br s, C-17, C-5 CH2), 0,85 (br triplet, C-l8 CH3),
Příklad 3
PG-(IO-OH-CPT)
Do roztoku 20(S)-10-hydroxykamptothecinu (317 mg, 0,87 mmol) v dimethylformamidu (8 ml) a pyridinu (1,5 ml) se přidá roztok di-řerc-butyldikarbonátu (328 mg, 1,5 mmol) v dimethylformamidu (2 ml). Po 3 hodinovém míchání při pokojové teplotě se směs rozdělí mezi chloroform (100 ml) a vodu (100 ml). Chloroformová fáze se promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml), suší nad síranem sodným, filtruje a koncentruje za vakua. Pevný podíl se rekrystalizuje (chloroform-hexan), čímž se získá 20(S)-10-řercbutoxykarbonyloxykamptothecin (358 mg, 91 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,34 (s, 1 H), 8,23 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 2 Hz, 1 H), 7,67 (s, 1 H), 7,66 (dd, J = 8, 2 Hz, 1 H), 5,75 (d, J = 17 Hz, 1 H), 5,31 (d, J = 17 Hz, 1 H), 5,27 (s, 2 H), 1,91 (sep„ J = 6 Hz, 2 H), 1,62 (s, 9 Η), 1 ,06 (t, J = 6 Hz, 3 H). Suspenze poly-(L-glutamové kyseliny) (507 mg, 3,9 mmol volného karboxylátu) a 20(S)-10-terc-butoxykarbonyloxykamptothecinu (103 mg, 0,23 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se rozpustí za mírného ohřívání po ochlazení výsledného roztoku na pokojovou teplotu a postupně se přidá roztok chlormethylpyridinium-jodidu (129 mg, 0,5 mmol) v dimethylformamidu (2,5 ml) a roztok 4-dimethylaminopyridinu (131 mg, 1,1 mmol) v dimethylformamidu (2,5 ml). Po 80 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a za intenzivního míchání se po dobu 30 minut přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (65 ml). Po okyselení na pH 1-2 pomalým přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po ·· · · * · ·· ·· • ♦ · ·· ·· ··· ····· · · · · · • · · · · · ···· · ···· · · · · · ·· ·· ··· ··· ·« ···· dalších 30 minut. Pevný podíl se spojí centrifugací a supernatant dekantuje.
Pevný podíl se suspenduje ve vodě (200 ml) a znovu izoluje po centrifugací.
Tento promývací proces se opakuje dvakrát a pevný podíl se suší za vakua. Suspenze pevného podílu v 2% methanol-chloroformu (25 ml) se podrobí ultrazvuku (90 minut) a filtruje. Tento promývací proces se opakuje a pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-(10-íercbutoxykarbonyloxykamptothecin) (20-konjugovaný) (471 mg, 78% látková bilance) ve formě žlutého prášku. Procentuální navázání je 10%, vypočteno z hmotnosti 20(S)-10-/erc-butoxykarbonyloxykamptothecinu (53 mg) izolovaného z methanol-chloroformových promývacích roztoků. ’H NMR (300 MHz, deDMSO) δ 7,2-8,5 (mnohačetné široké signály, Ar-H), 5,45, 5,20 (br, s, C-17, C-5 CH2), 1,55 (s, 10-O-Boc), 0,85 (brs, C-18 CH3).
PG-(lO-Zerc-butoxykarbonyloxykamptothecin) (20-konjugovaný) (288 mg) se přidává ve čtyřech podílech do trifluoroctové kyseliny (50 ml) po dobu 30 minut. Po 24 hodinovém míchání se směs koncentruje za vakua, čímž se získá PG-(IO-OH-CPT) (251 mg, 87% látková bilance). Podle lH NMR je hmotnostní procento návázaní 5%. !H NMR (300 MHz, TFA-t/) δ 9,15 (br, s, Ar-H); 7,2-8,5 (mnohačetné široké signály, Ar-H); 5,6-6,0 (mnohačetné signály, C-17, C-5 CH2); 1,05 (br, triplet, C-18 CH3).
Příklad 4
PG-gly-CPT
Do směsi 20(S)-kamptothecinu (17,0 g, 48,8 mmol), N-(tercbutoxykarbonyl)-glycinu (12,82 g, 73,2 mmol) a bezvodého dimethyformamidu (170 ml), ochlazeného v ledové lázni (4-6°C) se po částech po dobu 15 minut přidává 4-dimethylaminopyridin (7,75 g, 63,5 mmol), poté l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimid (14,03 g, 73,2 mmol) po částech po dobu 20 minut. Po 3,5 hodinovém míchání při teplotě 5 - 10°C (vodní lázeň z ledu a vody) se směs ochladí v ledové lázni (4°C) a za intenzivního míchání se přidává po dobu 30 minut voda (275 ml). Po dalším 15 minutovém míchání se pevný podíl filtruje, promyje vodou (2 x 150 ml), ledově studenou 0,1 M kyselinou • * chlorovodíkovou (300 ml) a vodou (3x 100 ml). Po 20 hodinové lyofilizaci se pevný podíl rekrystalizuje z ethylacetát-methanolu (1:4, 500 ml). Po filtraci se pevný podíl promyje ledově studeným methanolem (2 x 100 ml) a suší, čímž se získá 20-č>-(A-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)kamptothecin (22,5 g, 91 % výtěžek). Protonovým NMR se potvrdí, že jde o látku shodnou s originálním vzorkem. Do suspenze 2O-0-(A-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)kamptothecinu (48,6 g, 93,6 mmol) v bezvodém ethylacetátu (125 ml), chlazené v ledové lázni, se po dobu 30 minut přidává trifluoroctová kyselina (250 ml). Po 3,5 hodinách se rozpouštědla odpařují za sníženého tlaku. Rekrystalizací z hexan-methanolethylacetátu (1:2:20, 575 ml) se získá pevný podíl, který se filtruje, promyje ethylacetátem (150 ml), suší za vakua, čímž se získá trifluoroctová sůl 20-0(glycyl)kamptothecinu (46, 4 g, 93% výtěžek) ve formě žlutého prášku. NMR (TFA-J): δ 9,35 (s, 1H), 8,25-8,45 (m, 3H), 8,05 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,80 (d, J=18,l Hz, 1H), 5,70 (s, 2H), 5,55 (d, >18,1 Hz, 1H), 4,42 (d, J=17,6 Hz, 1H), 4,30 (d, J=17,6 Hz, 1H), 2,10-2,30 (m, 2H), 1,00 (t, J= 7,4 Hz, 3H). Do roztoku poly-(L-glutamové kyseliny) (1,24 g) v bezvodém dimethylformamidu (31 ml) se přidá trifluoroctová sůl 20-O-(glycyl)kamptothecinu (1,0 g, 1,9 mmol). Po ochlazení na teplotu 0°C se po částech přidává dimethylaminopyridin (707 mg, 5,79 mmol), poté roztok 1,3-diizopropylkarbodiimidu (292 mg, 2,32 mmol) v dimethylformamidu (1 ml), který se přidává po dobu 20 minut. Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po míchání po dobu 2 dnů se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (75 ml). Směs se okyselí na pH 2,5 přidáním IM kyseliny chlorovodíkové. Po 1 hodinovém míchání při pokojové teplotě, se pevný podíl filtruje, promyje vodou (4 x 100 ml) a suší za vakua. Pevný podíl se suspenduje v 2% methanoldichlormethanu (75 ml), míchá po dobu 1 hodiny a filtruje. Tento promývací proces se opakuje třikrát s 2% methanol-dichlormethanem, jednou acetonitrilem (100 ml) a jednou vodou (100 ml). Pevný podíl se suší za vakua po dobu 2 dnů, čímž se získá PG-gly-CPT (1,88 g, 93% látková bilance) ve formě žlutého prášku. 'H NMR (300 MHz v TFA-cř) δ 9,45 (s, C-7H), 8,30-8,52 (m, aromatické protony), 8,27 (t, J = 6,6 Hz, aromatické protony), 7,95 (s, aromatický proton), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,72 (s, 5-Hz) 5,60 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,80 (br s), 4,30-4, 70 (m, protony glycinového methylenu), 2,00-2,70 (m), 1,10 (br s).
Příklad 5
PG-gly-gly-CPT
Po míchání směsi trifluoroctové soli 20-O-(glycyl)kamptothecinu (2,60 g, 5,0 mmol) a 7V-(/erc-butoxykarbonyl)glycinu (2,63 g, 15,0 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (50 ml) po dobu 30 minut) se směs ochladí v ledové lázni a přidá se 4-dimethylaminopyridin (1,83 g, 15,0 mmol). Po dobu 30 minut se přidává diizopropylkarbodiimid (1,89 g, 15,0 mmol) a reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 16 hodinovém míchání se směs nechá reagovat s vodou (100 ml) a extrahuje dichlormethanem (3x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodou (100 ml), 0,lM kyselinou chlorovodíkovou (100 ml), vodou (100 ml) a suší nad bezvodým síranem sodným. Po koncentraci za sníženého tlaku se zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 4% methanol-dichlormethanu, čímž se získá 20-O-((2V(/ercbutoxykarbonyl)glycyl)glycyl)kamptothecin (1,30 g, 45 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. lH NMR (CDC13): δ 8,35 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,38 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 8,07, 1 H), 7,76-7,85 (m, 1 H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,70 (d, J = 17,25 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1H), 5,25 (s, 2H), 5,10 (brs, 1H), 3,70-4,45 (m, 4H), 2,05-2,30m (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Roztok 20-O-((V-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)glycyl)kamptothecinu (1,20 g, 2,10 mmol) v trifluoroctové kyselině-dichlormethanu (1:1, 4 ml) se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Po odpaření rozpouštědel za sníženého tlaku se zbytek trituruje ethylacetátem (50 ml). Pevný podíl se filtruje, promyje dichlormethanem (40 ml) a suší za vakua, čímž se získá trifluoroctová sůl 20-0(glycyl-glycyl)kamptothecinu (1,0 g, 82% výtěžek) ve formě žlutého prášku. !H NMR (TFA-í/): δ 9,45 (s, 1H), 8,10-8,50 (m, 3H), 7,95 (s, 1 H), 5,90 (d, J = 18,3 Hz, 1 H), 5,80 (s), 5,65 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 4,10-4,60 (m, 4H), 2,20-2,50 (m, 2H), 1,10 (t, J= 7,4 Hz, 3H).
• 4
Do směsi trifluoroctové soli 20-O-(glycyl-glycyl)kamptothecinu (220 mg, 0,38 mmol) a poly-L-glutamové kyseliny (532 mg) v bezvodém dimethylformamidu (14,5 ml), chlazené v ledové lázni, se přidá N,Ndimethylaminopyridin (140 mg, 1,15 mmol). Roztok 1,3diizopropylkarbodiimidu (58 mg, 0,46 mmol) v dimethyformamidu (0,5 ml) se přidává po dobu 20 minut a směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 35 hodinovém míchání pod atmosférou argonu se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (35 ml). Po 1 hodinovém míchání se směs okyselí na pH 2,5 přidáním 1M kyseliny chlorovodíkové. Pevný podíl se filtruje, promyje vodou (3 x 75 ml), suší za vakua, promyje 2% methanol-dichlormethanem (4 x 50 ml), suší za vakua, promyje acetonitrilem (100 ml), promyje vodou (100 ml), suší za vakua, čímž se získá PG-gly-gly-CPT (625 mg, 88% látková bilance) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz v TFA-ď): δ 9,45 (s, C-7H), 7,85-8,6 (aromatické protony), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s) 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,20-5,10 (m), 32,10-2,90 (m), 1,00 (s).
Příklad 6
PG-gly-gly-gly-CPT
Do roztoku ((jV-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)glycyl)glycinu (1,99, 6,88 mmol) a 20(S)-kamptothecinu (1,20 g, 3,44 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (20 ml), chlazeném na teplotu 0°C, se přidá N,Ndimethylaminopyridin (630 mg, 5,16 mmol), poté se pomalu 1,3diizopropylkarbodiimid (0, 96 g, 7,6 mmol) a reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 16 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni, nechá reagovat s vodou (55 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 50 ml). Spojené organické extrakty se promyjí postupně 0,lM kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml) a vodou (2 x 50 ml) a suší nad síranem sodným. Po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku se zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 4% methanoldichlormethanu, čímž se získá 20-O-(((/V-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)glycyl)glycyl)kamptothecin (1, 52 g, 71 % výtěžek) ve formě světle žlutého
prášku. 'H NMR (CDCb): δ 8,40 (s, 1 H), 8,25 (d, J = 8,38 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 8,07, 1 II), 7,76-7,85 (m, 1 H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 7,05 (br s, 1 H), 5,65 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 5,15 (br s, 1 H), 3,70-4,45 (m, 6H), 2,15-2,35 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Roztok 20-O-(((V-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)glycyl)glycyl)kamptothecinu (1,50 g, 2,42 mmol) v trifluoroctové kyselině-dichlormethanu (1:
1,5 ml) se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Po odpaření rozpouštědel za sníženého tlaku se zbytek trituruje ethylacetátem (30 ml). Pevný podíl se filtruje, promyje dichlormethanem (50 ml) a suší za vakua, čímž se získá trifluoroctová sůl 20-O-(glycyl-glycyl-glycyl)kamptothecinu (1,3 g, 85% výtěžek) ve formě žlutého prášku. !H NMR (DMSO-de): δ 8,78 (s, 1H), 7,708,65 (m, 4H), 7,10 (s, 1H), 5,55 (s, 2H), 3,95-4,30 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,51 (s, 2H), 2,10-2,25 (m, 2H), 0,95 (t, J= 7,4 Hz, 3H).
Do směsi trifluoroctové soli 20-O-(glycyl-glycyl-glycyl)kamptothecinu (940 mg, 1,49 mmol) a poly-(L-glutamové kyseliny) (956 mg) v bezvodém dimethylformamidu (29,5 ml), chlazené v ledové lázni, se přidá N,Ndimetbylaminopyridin (545 mg, 4,47 mmol). Po dobu 20 minut se přidává roztok l,3-diizopropylkarbodiimidu (275 mg, 1,78 mmol) v dimethyformamidu (0,5 ml). Po 3 denním míchání pod atmosférou argonu se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (69 ml). Po 1 hodinovém míchání se směs okyselí na pH 2,5 přidáním 1M kyseliny chlorovodíkové. Pevný podíl se filtruje, promyje vodou (3 x 75 ml), suší za vakua, promyje 2% methanol-dichlormethanem (3 x 50 ml), suší za vakua, promyje acetonitrilem (100 ml), promyje vodou (100 ml) a suší za vakua, čímž se získá 1’G-gly-gly-gly-CPT (1,50 g, 87% látková bilance) ve formě žlutého prášku. TI NMR (300 MHz v TFA-cř): δ 9,45 (s, C-7H), 7,85-8,50 (aromatické protony), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s) 5, 62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,10-5,00 (m), 2,05-2,75 (m), 1,05 (s).
Příklad 7
PG-ala-CPT
Do roztoku 77-(/erc-butoxykarbonyloxy)alaninu (568 mg, 3,0 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8 ml), chlazeném na teplotu 0°C, se přidá 20(S)kampto/iecin (348 mg, 1,0 mmol) a dimethylaminopyridin (244 mg, 2,0 mmol).
1,3-Dii7opropylkarbodiimid (379 mg, 3,0 mmol) se pomalu přidá a reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 16 hodinovém míchání se směs nechá reagovat s vodou (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (4 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyjí postupně 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml), vodou (2 x 50 ml), 0,1 M vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a vodou (2 x 50 ml). Po sušení nad síranem sodným se rozpouštědlo odpařuje za sníženého tlaku a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 2% methanol-dichlormethanu, čímž se získá 20-O-(N(terc-bmoxykarbonyloxy)-alanyl)kamptothecin (420 mg, 81 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (CDC13): δ 8,35 (s, 1 H), 8,22 (d, J = 8,38 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 8,07, 1H), 7,76-7,85 (m, 1H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 5,70 (d, J = i 7,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 4,95 (br s, 1 H), 4,45 (b: t, 1 H), 2,05-2,30m (m, 2H), 1,55 (d, 3H), 1,45 (s, 9H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 311).
Roztok 20-<9-(7V-(/erc-butoxykarbonyloxy)alanyl)kamptothecinu (300 mg, 0,57 mmol) v trifluoroctové kyselině-dichlormethanu (1:1, 2 ml) se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Po odpaření rozpouštědel za sníženého tlaku se zby;ek triturujě 10% methanol-chloroformem (12 ml). Filtrací se získá trifluoroctová sůl 20-O-(alanyl)kamptothecinu (318 mg, 87% výtěžek) ve formě žlutého prášku, který se ihned používá v následující reakci.
Do míchané suspenze trifluoroctové soli 20-č>-(alanyl)kamptothecinu (114 mg, 0,21 mmol), poly-(L-glutamové kyseliny) (280 mg) a N,Ndimethy laminopyridinu (77 mg, 0,63 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8,5 ml) se po dobu 20 minut přidává roztok 1,3-diizopropylkarbodiimidu (34,5 mg, 0,273 mmol) v dimethylformamidu (0,5 ml). Směs se míchá pod atmosférou •to ·· ► · · argonu po dobu 2 dnů. Po ochlazení v ledové lázni se po dobu 30 minut přidává 10% \'dný roztok chloridu sodného (21 ml). Po 1 hodinovém míchání se směs upraví na pH 2,5 přidáním IN kyseliny chlorovodíkové. Pevný podíl se filtruje, promyje vodou (5 x 25 ml) a suší za vakua. Pevný podíl se promyje 2% methanol-dichlormethanem (4 x 50 ml) a suší za vakua, čímž se získá PG-alaCPT (330 mg, 81 % látková bilance) ve formě žlutého prášku. !H NMR (300 MHz v TFA-čZ): δ 9,45 (s, C-7H), 7,85-8,6 (aromatické protony), 5,92 (d, J =
18,3 II/, proton laktonu), 5,70 (s) 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,806,05 (n>, 3,80-4,50 (m), 1,20-2,80 (m), 1,70 (br s), 1,00 (s).
Příklad 8
PG-(P-a’.a)-CPT
Do roztoku TV-terc-butoxykarbonyl-P-alaninu (568 mg, 3,0 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8 ml), chlazeném na teplotu 0°C, se přidá 20(S)kamptoihecin (348 mg, 1,0 mmol) a dimethylaminopyridin (244 mg, 2,0 mmol). Pomalu se přidává 1,3-diizopropylkarbodiimid (379 mg, 3,0 mmol) a reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 16 hodinovém míchání se směs zředí vodou (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (4 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyjí postupně 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml), vodou (2 x 50 ml), 0,1 M vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a vodou (2 x 50 ml). Po sušení nad síranem sodným se rozpouštědlo odpařuje za sní zeného tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu mobilní fází 2% methanol-dichlormethanu, čímž se získá 20-O-(7V/erc-buioxykarbonyl-P-alanyl)kamptothecin (431 mg, 83% výtěžek) ve formě světle žlutého prášku. *H NMR (CDC13); δ 8, 35 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,38 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 8,07, 1 H), 7,76-7,85 (m, 1 H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,26 (s, 1 H), 5,70 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 5,15 (br s, I H), 3,30-3,50 (m, 2H), 2,55-2,80m (m, 2H), 2,15-2,25 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Roztok 20-G-(A-/erc-butoxykarbonyl-P-alanyl)kamptothecinu (250 mg,
0,48 nunol) ve směsi trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (1:1, 2 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku se zbytek trituruje směsí methanolu, hexanů a dichlormethanu (1:2:7). Filtrací se získá trifluoroctová sůl 20-G-(p-alanyl)kamptothecinu (241 mg, 94% výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (DMSO-dg): δ 8,78 (s, 1 H), 8,05-8,50 (m, 2H), 7,60-7,94 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,55 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 2,80-3,60 (m, 4H), 2,15-2,25 (m, 2H), 1,00 (t, J= 7,4 Hz, 3H). Do míchané směsi trifluoroctové soli 20-O-(P-alanyl)kamptothecinu (241 mg, 0,45 mmol), poly-L-glutamové kyseliny (326 mg) a Λζ/V-dimethylaminopyridinu (165 mg, 1,35 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (12,5 ml) se po dobu 20 minut přidává roztok 1,3-diizopropylkarbodiimidu (74 mg, 0,59 mmol) v dimethyformamidu (0,5 ml). Po 2 denním míchání pod atmosférou argonu se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (30 ml). Po 1 hodinovém míchání se směs okyselí na pH 2,5 přidáním 1M kyseliny chlorovodíkové. Pevný podíl se filtruje, promyje vodou (5 x 25 ml) a suší za vakua. Pevný podíl se promyje směsí 2% methanolu a dichlormethanu (4 x 50 ml) a suší za vakua, čímž se získá PG-(P-ala)-CPT (485 mg, 94% látková bilance) ve formě žlutého prášku. JH NMR (300 MHz v TFAd): δ 9,45 (s, C-7H), 7,85-8,6 (aromatické protony), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s) 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,70-5,10 (m), 3,65-3,90 (m), 2,00-3,10 (m), 1,00 (s).
Příklad 9
PG-(4-NH-butyryl)-CPT
Do roztoku 4-(/erc-butoxykarbonylamino)butyrové kyseliny (203 mg, 3,0 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8 ml), chlazeném na teplotu 0°C, se přidá 20(S)-kamptothecin (348 mg, 1,0 mmol), Α,/V-dimethylaminopyridin (244 mg, 2,0 mmol), poté 1,3-diizopropylkarbodiimid (379 mg, 3,0 mmol), který se přidává pomalu. Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 16 hodinovém míchání se směs nechá reagovat s vodou (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (4 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyjí s 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml), vodou (2 x 50 ml), 0,1 M vodným ·· * 9
roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a vody (2 x 50 ml). Po sušení nad síranem sodným se rozpouštědlo odpařuje za sníženého tlaku a zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 2% methanolu v dichlormethanu, Čímž se získá 20-<9-(4-(/erc-butoxykarbonylamino)butyryl)kamptothecin (432 mg, 81 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (CDC13): δ 8,35 (s, 1 H), 8,22 (d, J = 8,38 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 8,07, 1 H), 7,767,85 (m, 1 H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 5,70 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 4,85 (brs, 1 H), 3,05-3,30 (m, 2H), 2,40-2,60 (m, 2H), 2,05-2,30 m (m, 2H), 1,75-1,90 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Roztok 20-O-(4-(Zerc-butoxykarbonylamino)butyryl)kamptothecinu (400 mg, 0,75 mmol) ve směsi trifluoroctové kyseliny a dichlormethanu (1:1, 2 ml) se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Po odpaření rozpouštědel za sníženého tlaku se zbytek trituruje 10% methanolem v dichlormethanu (12 ml). Filtrací se získá trifluoroctová sůl 20-<9-(4-aminobutyryl)kamptothecinu (331 mg, 83% výtěžek) ve formě žlutého pevného podílu. JH NMR (DMSO-de): δ 8,78 (s, 1 H), 8,05-8,45 (m, 2H), 7,65-7,94 (m, 2H), 7,05 (s, 1 H), 5,55 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 2,60-2,85 (m, 4H), 2,00-2,25 (m, 2H), 1,70-1,90 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Do suspenze trifluoroctové soli 20-č?-(4-aminobutyryl)kamptothecinu (250 mg, 0,46 mmol), poly-(L-glutamové kyseliny) (414 mg) a N,Ndimethylaminopyridinu (168 mg, 1,38 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (13,5 ml) se po dobu 20 minut přidává roztok 1,3-diizopropylkarbodiimidu (75 mg, 0,6 mmol) v dimethyformamidu (0, 5 ml). Po 2 denním míchání pod atmosférou argonu se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (35 ml). Po dalším 1 hodinovém míchání se směs okyselí na pH 2,5 přidáním 1M kyseliny chlorovodíkové a filtruje. Pevný podíl se promyje vodou (5 x 25 ml), suší za vakua, promyje směsí 2% methanolu v dichlormethanu (4 x 50 ml) a suší za vakua, čímž se získá PG-(4-NH-butyryl)CPT (574 mg, 94% látková bilance) ve formě žlutého prášku. lH NMR (300 MHz v TFA-í/) δ 9,45 (s, C-7H), 8,30-8,52 (m, aromatické protony), 8,27 (t, J = 6,6 • ·
• • 9 ♦ • · • • ♦ · ·· ♦ 4 •
• • ·· • · •
• • • • • • • ·
·· 49 4 4 4 · • · 4 · ·
Hz, aromatické protony), 7,95 (s, aromatický proton), 7,20 (s, aromatický proton), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s), 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,70-5,05 (m), 3,45-3,70 (m), 2,02-3,00 (m), 1,05 (br s),
Příklad 10
PG-(2-0-acetyl)-CPT
2O-0-(2-hydroxyacetyl)kamptothecin se připraví podle způsobu popsaného v Greenwald et al, Bioorg. Med. Chem. 6: 551-562 (1998). Do roztoku 20-0-(2hydroxyacetyl)kamptothecinu (80 mg, 0,20 mmol) a poly-(L-glutamové kyseliny) (411 mg) v dimethylformamidu (20 ml) se postupně přidá chlormethylpyridinium-jodid (163 mg, 0,64 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (89 mg, 0,73 mmol). Po 18 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a v průběhu 1 hodiny se přidá 10% vodný roztok chloridu sodného (50 ml). Hodnota pH výsledné směsi se sníží na 2 pomalým přidáním 0,1 M kyseliny chlorovodíkové. Precipitát se spojí po centrifugací a suspenduje ve vodě (25 ml) a znovu spojí po centrifugací. Tento postup se opakuje ještě dvakrát a pevný podíl se suší za vakua. Pevný podíl se následně suspenduje ve směsi chloroformu a methanolu (95:5, 10 ml) a po dobu 90 minut podrobí ultrazvuku. Směs se filtruje a pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-(2-0-acetyl)-CPT (404 mg, 86% látková bilance) ve formě světle žlutého pevného podílu. 15% Hmotnostní navázání se potvrdí na základě hmotnosti izolovaného 20-0-(2hydroxyacetyl)kamptothecinu. *H NMR (300 MHz, dó-DMSO) δ 7,6-8,7 (mnohačetné široké signály CPT Ar-H), 7,15 (s, CPT Ar-H), 4,8-5, 6 (široké signály, CPT lakton, C5-CH2-), 3,7-4,3 (široký signál, PG α-CH), 3,1-3,4 (široký singlet, PG), 1,7-2,4 (široké signály, PG), 1,0 (br signál, CPT-CH2CH3).
Příklad 11
PG-(4-O-butyryl)-CPT
Do směsi 20(S)-kamptothecinu (300 mg, 0,86 mmol) a 4benzyloxybutyrové kyseliny (501 mg, 2,58 mmol) v bezvodém • ·♦· dimethylformamídu (12 ml) chlazeném na teplotu 0°C se přidá N,Ndimethylaminopyridin (210 mg, 1,72 mmol). Pomalu se přidá 1,3diizopropylkarbodiimid (326 mg, 2,58 mmol) a reakční směs se pak nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 15 hodinovém míchání se směs nechá reagovat s vodou (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (4 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml), vodou (2 x 50 ml) a suší nad síranem sodným. Po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku se zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 2% methanoiu v dichlormethanu, čímž se získá 20-<9-(4-benzyloxybutyryl)kamptothecin (432 mg, 81 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (CDCI3): δ 8,35 (s, 1 H), 8,22 (d, J = 8,38 Hz 1 H), 7,91 (d, J = 8,07, 1 H), 7,76-7,85 (m, 1H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 7,20-7,40 (m, 6H), 5,70 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 4,52 (brs, 2H), 3,45-3,60 (m, 2H), 2,60-2,75 (m, 2H), 1,90-2,35 (m, 4H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Do směsi 20-O-(4-benzyloxybutyryl)kamptothecinu (1,0 g, 1,90 mmol) a 10% palladia na aktivním uhlí (50% vody, 200 mg) suspendovaného v ethanol1,4-dioxanu (4:1, 20 ml) se přidá cyklohexen (0,78 g, 9,5 mmol). Po 15 hodinovém zahřívání při mírném refluxu se směs ochladí a katalyzátor se odstraní filtrací. Po koncentraci za sníženého tlaku se pevný zbytek krystalizuje methanolem (8,0 ml), čímž se získá 2O-0-(4-hydroxybutyryl)kamptothecin (679 mg, 82% výtěžek) ve formě světle žlutého prášku. *H NMR (CD3OD): δ 8,40 (s, 1 H), 8,05 (d, J = 8,38 Hz 1 H), 7,91 (d, J = 8,07, 1 H), 7,76-7,85 (m, 1 H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 5,70 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 3,50 (t, 3H), 2,50 (t, 2H), 1,70-2,30 (m, 4H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Do směsi 20-č?-(4-hydroxybutyryl)kamptothecinu (114 mg, 0,26 mmol) a poly-(L-glutamové kyseliny) (265 mg, 1,8 mmol) v bezvodém dimethylformamídu (7,5 ml) se přidá dimethylaminopyridin (6 mg, 0,052 mmol), pak se pomalu přidá 1,3-diizopropylkarbodimid (43 mg, 0,34 mmol) a reakční směs se míchá pod argonem po dobu 5 hodin. Po ochlazení v ledové lázni se po kapkách přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (18 ml). Hodnota pH se
upraví na 2,5 přidáním IN kyseliny chlorovodíkové. Po 1 hodinovém míchání při pokojové teplotě se směs filtruje, pevný podíl promyje vodou (3 x 30 ml) a suší za vakua. Prášek se promyje směsí 2% methanolu v dichlormethanu (4 x 30 ml) a suší za vakua, ěímž se získá PG-(4-O-butyryl)-CPT (360 mg, 95 % látková bilance) ve formě žlutého prášku. ’H NMR (300 MHz v TFA-cř): δ 9,45 (s, C7H), 8,30-8,52 (m, aromatické protony), 8,27 (t, J = 6,6 Hz, aromatický proton), 7,95 (s, aromatický proton), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s,) 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,90 (br s), 4,40 (s), 2,00-2,90 (m), 1,10 (br s).
Příklad 12
PG-(y-glu)-CPT
Do roztoku 2V-(terc-butoxykarbonyl)glutamyl-y-terc-butylesteru (910 mg, 3,0 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (8 ml), chlazeném na teplotu 0°C, se přidá 20(S)-kamptothecin (348 mg, 1,0 mmol) a N,N-dimethylaminopyridin (244 mg, 2,0 mmol), poté se pomalu přidává 1,3-diizopropylkarbodiimid (379 mg, 3,0 mol) a reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 16 hodinové míchání se směs nechá reagovat s vodou (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (4 x 40 ml). Spojené organické extrakty se promyjí postupně 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml), vodou (2 x 50 ml), 0,1 M vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 25 ml) a vodou (2 x 50 ml). Po sušení nad síranem sodným se rozpouštědlo odpařuje za sníženého tlaku. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 2% methanolu v dichlormethanu, čímž se získá a-/erc-butylester 20-č>-(7V-(/erc-butoxykarbonyl)y-glutamyl)kamptothecinu (432 mg, 81 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. lH NMR (CDCis): δ 8,40 (s, 1 H), 8,22 (d, J = 8,38 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 8,07, 1H), 7,65-7,85 (m, 2H), 7,26 (s, 1H), 5,70 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 17,25 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 5,05 (br d, 1 H), 4,10 (brs, 1H), 1,85-2,70 (m, 6H), 1,45 (s, 18H), 0,95 (t, J = 7,47 Hz, 3H).
Roztok /erc-butylesteru 20-O-(/V-(/erc-butoxykarbonyl)glutamyl)kamptothecinu (300 mg, 0,47 mmol) ve směsi dichlormethanu a trifluoroctové kyseliny (1:1, 1
* 0 *0 0 »0
• 0 0 • · 0 0 • 0 0
« · • 00 0 0 0 0 0
0 • 0 · • 0 0 0 0
• 0 • 0 »0 0 00 0 0 0 0 0 0 0
ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 20 minut. Po odpaření rozpouštědel za sníženého tlaku se zbytek trituruje směsí methanolu, dichoromethanu a hexanů (1:2:2, 10 ml). Filtrací se získá trifluoroctová sůl α-terc-butylesteru 20-0-(γglutamyl)kamptothecinu (239 mg, 79% výtěžek) ve formě žlutého pevného podílu. *H NMR (DMSO-d6): δ 8,78 (s, 1 H), 7,70-8,20 (m, 3H), 7,05 (s, 1 H), 5,55 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), (brs, 1H), 1,90-2,85 (m, 6H) 1,50 (s, 9H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Do směsi trifluoroctové soli α-terc-butylesteru 20-G-(yglutamyl)kamptothecinu (239 mg, 0,37 mmol), poly-(L-glutamové kyseliny) (395 mg, 2,69 mmol) a 7V,/V-dimethylaminopyridinu (135,6 mg, 1,11 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (12,5 ml) se přidá roztok 1,3diizopropylkarbodiimidu (61 mg, 0,48 mmol) v dimethyformamidu (0,5 ml) po dobu 20 minut. Po 2 denním míchání pod atmosférou argonu se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (30 ml). Po 1 hodinovém míchání se směs okyselí na pH 2,5 přidáním 1 M kyseliny chlorovodíkové. Pevný podíl se filtruje, promyje vodou (4 x 30 ml) a suší za vakua, promyje směsí 2% methanolu v dichlormethanu (4 x 50 ml) a suší za vakua, čímž se získá α-terc-butylester PG-(y-glu)-CPT (556 mg, 94% látková bilance) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz v TFA-d): δ 9,45 (s, C7H), 7,90-8,60 (m, aromatické protony), 7,25 (s, aromatický proton), 5,92 (d, J =
18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s), 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,60-5,0 (m), 2,05-3,00 (m), 1,55 (s), 1,10 (br s).
Roztok α-terc-butylesteru PG-(y-glu)-CPT (550 mg) v trifluoroctové kyselině (5 ml) se míchá při pokojové teplotě po dobu 16 hodin. Po koncentraci za sníženého tlaku se zbytek promyje vodou (100 ml) a suší za vakua, čímž se získá PG-(y-glu)-CPT (460 mg) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz v TFA-J): δ 9,45 (s, C-7H), 7,90-8,60 (m, aromatické protony), 5,92 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 5,70 (s), 5,62 (d, J = 18,3 Hz, proton laktonu), 4,60-5,0 (m), 2,05-3,00 (ri), 1,05 (br s).
•9 *» « · » řř 1* 9 β « * «99
9 994 « 9 «99
9*9*9 9 9*9« ·
9999 9 9 99* *· 99 999 »99 *9 99*9
Příklad 13
PG-(IO-O-CPT)
Suspenze sodné soli poly-(L-glutamové kyseliny) (50 kD, 740 mg) v dimethylformamidu (30 ml) se ochladí v ledové lázni, pak se přidá methansulfonová kyselina (0,3 ml, 4,6 mmol) a směs se míchá po dobu 30 minut. Následně se postupně přidá 10-hydroxykamptothecin (166 mg, 0,45 mmol), chlormethylpyridinium-jodid (190 mg, 0,74 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (168 mg, l,4 mmol). Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá intenzivně po dobu 20 hodin, ochladí v ledové lázni a za intenzivního míchání se po dobu 45 minut přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (100 ml). Po okyselení na pH l-2 pomalým přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dalších 30 minut. Pevný podíl se spojí centrifugací a supernatant dekantuje. Pevný podíl se suspenduje ve vodě (200 ml) a znovu izoluje po centrifugací. Tento promývací proces se opakuje dvakrát a pevný podíl se suší za vakua. Suspenze pevného podílu v 2% methanolu v chloroformu (25 ml) se podrobí ultrazvuku (90 minut) a filtruje.
Tento promývací proces se opakuje a pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-(IO-O-CPT) (674 mg, 93% látková bilance) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz, dó-DMSO) δ 7,2-8,6 (mnohačetné široké signály, Ar-H), 5,45,
5,20 (br s, C-17, C-5 CH2), 0,85 (br triplet, C-18 CH3). Procentuální navázání je 13%, vypočteno z hmotnosti 20(S)-l0-hydroxykamptothecinu izolovaného ze směsi methanolu v chloroformu promývacích roztoků.
Alternativně se PG-(IO-O-CPT) připraví podle způsobu popsaného výše, ale použije se poly-(L-glutamová kyselina) místo sodné soli poly-(L-glutamové kyseliny) a methansulfonové kyseliny.
Příklad 14
PG-gly-(lO-O-CPT)
Roztok A-Zerc-butoxykarbonylglycinu (603 mg, 3,4 mmol) v dimethylformamidu (IO ml) se nechá reagovat s diizopropylkarbodiimidem (0,27 • · ml, 1,7 mmol). Po 15 minutovém míchání se tento roztok přidá do roztoku 20(S)10-hydroxykamptothecinu (406 mg, 1,11 mmol) a pyridinu (0,9 ml) v dimethylformamidu (10 ml). Po 4 hodinovém míchání se směs nalije do vody (300 ml) a extrahuje s chloroformem (4 x 75 ml). Spojené chloroformové extrakty se promyjí 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml), poté nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 100 ml), suší nad síranem sodným, filtrují a koncentrují za vakua. Zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 2% methanolu v chloroformu, čímž se získá 20(S)-10-(7Vr-/erc-butoxykarbonylglycyloxy)kamptothecin (247 mg, 43%) ve formě světle žlutého prášku. 'H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8, 32 (s, 1 H), 8,21 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,70 (d, J = 3 Hz, 1 H), 7,64 (s, 1 H), 7,56 (dd, J =
8,3 Hz, 1 H), 5,73 (d, J = 15 Hz, 1 H), 5,28 (d, J = 15 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2 H), 5,17 (m, 1 H), 4,26 (d, J = 7 Hz, 2 H), 1,88 (sep., J = 6 Hz, 2 H), 1,49 (s, 9 H), 1,04 (t, J = 6 Hz, 3 H),
Roztok 20(S)-10-(7V-/erc-butoxykarbonylglycyloxy)kamptothecinu (206 mg, 0,39 mmol) v dichlormethanu (10 ml) a trifluoroctové kyseliny (5 ml) se míchá po dobu 90 minut. Po koncentraci za vakua se zbytek rozpustí v chloroformu (50 ml) a koncentruje za vakua. Zbytek se rozpustí v toluenu (50 ml) a koncentruje za vakua, čímž se získá 20(S)-10-(glycyloxy)kamptothecin.
Roztok 20(S)-10-(glycyloxy)kamptothecinu v dimethylformamidu (10 ml) se přidá do roztoku poly-(L-glutamové kyseliny) (50 kD, 641 mg) v dimethylformamidu (20 mi), poté se přidá 4-dimethylaminopyridin (151 mg, 1,2 mmol) a diizopropylkarbodiimid (0,08 ml, 0,5 mmol). Po intenzivním 60 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a za intenzivního míchání se po dobu 1 hodiny přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (75 ml). Po okyselení na pH 1-2 pomalým přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 30 minut. Pevný podíl se spojí centrifugací a supernatant dekantuje. Pevný podíl se suspenduje ve vodě (200 ml) a znovu izoluje po centrifugací. Tento promývací proces se opakuje dvakrát a pevný podíl se suší za vakua. Suspenze pevného podílu v 2% methanolu v chloroformu (25 ml) se podrobí ultrazvuku (90 minut) a filtruje.
Tento promývací proces s 2% methanolem v chloroformu se opakuje. Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-gly-(lO-O-CPT) (560 mg, 70%) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 7,2-8,8 (mnohačetné široké signály, Ar-H), 5,45, 5,20 (br s, C-17, C-5 CH2), 0,9 (br s, C-18 CH3).
Příklad 15
PG-(9-NH-CPT)
Do směsi 20(S)-9-aminokamptothecinu (157 mg, 0,43 mmol) a poly-(Lglutamové kyseliny) (38 kD, 628 mg), sušené za vakua po dobu 4 hodin, se přidá bezvodý dimethylformamid (35 ml). Po ochlazení v ledové lázni se přidá 2chlormethylpyridinium-jodid (199 mg, 0,78 mmol) a A,A-dimethylaminopyridin (200 mg, 1,64 mmol) a směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu. Po 2 denním míchání se směs ochladí na teplotu 0°C a po dobu 25 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (82 ml). Směs se okyselí na pH 2,5 přidáním 1M kyseliny chlorovodíkové (3,5 ml) a míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Precipitát se filtruje, promyje vodou (4 x 50 ml) a suší za vakua. Pevný podíl se rozetře na prášek a suspenduje v 2% methanolu v dichlormethanu (10 ml). Po 3 hodinovém míchání se pevný podíl separuje centrifugaci a supernatant dekantuje. Tento promývací proces se opakuje čtyřikrát kvůli úplnému odstranění nezreagovaného 20(S)-9-aminokamptothecinu. Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-(9-NH-CPT) (592 mg, 80% látková bilance vypočtená z hmotnosti izolovaného 20(S)-9-aminokamptothecinu (45 mg)). *H NMR (300 MHz v DMSO-dé): δ 12, 10 (s, -COOH), 8,80 (s), 6,50-8,5 (m), 5,15-5,8 (m), 3,10-4,35 (m), 1,42-2,62 (m,), 0,90 (br s, I9-CH3). Procentuální hmotnost navázaného 20(S)-9-aminokamptothecinu v tomto vzorku PG-(9-NH-CPT) je 14%, vypočteno z hmotnosti spotřebovaného 20(S)-9-aminokamptothecinu (115 mg) během kopulační reakce.
Příklad 16
PG-gly-(9-NH-CPT) • · * · • · · ·
20(S)-9-(N-íerc-butoxycabonylglycylamino)kamptothecin se připraví modifikací způsobu popsaného Wall et al, J. Med. Chem. 1993, 36, 2689-2700. Do roztoku W-Zerc-butoxykarbonylglycinu (526 mg, 3,0 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (10 ml) se po dobu 30 minut přidává 20(S)-9aminokamptothecin (363 mg, 1,0 mmol), poté 1,3-diizopropylkarbodiimid (379 mg, 3,0 mmol). Po 12 hodinovém míchání pod atmosférou argonu se směs nechá reagovat s vodou (50 ml) a extrahuje dichlormethanem (3 x 100 ml). Spojené organické extrakty se promyji vodou (50 ml), 0,1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml), 0,1 M nasyceným vodný roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou (50 ml). Roztok se suší nad síranem sodným a koncentruje za sníženého tlaku, zbytek se krystalizuje (methanol-chloroform (1:9)), čímž se získá 20(S)-9(ŮMerc-butoxycabonylglycylamino)-kamptothecin (354 mg, 68% výtěžek) ve formě žlutého prášku. ’H NMR (DMSO-d6): δ 10,10 (s, IH), 8,79 (s, IH), 8,03 (d, J = 7 Hz, 1 H), 7,85 (t, J = 7 Hz, IH), 7,79 (d, J = 7 Hz, IH), 7,37 (s, IH), 7,19 (t, J = 6 Hz, IH), 6,53 (s, 1 H), 5,44 (s, 2H), 5,29 (s, 2H), 3,92 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 0,89 (t, J = 7Hz, 3H).
Roztok 20(S)-9-(7V-terc-butoxycabonylglycylamino)kamptothecinu (80 mg, 0,15 mmol) ve směsi trifluoroctové kyseliny dichlormethanu (1:1, 4 ml) se míchá po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě, rozpouštědla se odpařují za sníženého tlaku a pevný podíl rekrystalizuje (dichlormethan-diethylether (3:7, 50 ml), čímž se získá trifluoroctová sůl 20(S)-9-(glycylamino)-kamptothecinu (78 mg, 82 % výtěžek) ve formě nahnědlého žlutého prášku.
Do míchané suspenze trifluoroctové soli 20(S)-9-(glycylamino)kamptothecinu (78 mg, 0,15 mmol), poly-(L-glutamové kyseliny) (38 kD, 222 mg) a W,W-dimethylaminopyridinu (46 mg, 0,37 mmol) v bezvodém dimethylformamidu (5,5 ml) se po dobu 20 minut přidává roztok 1,3diizopropylkarbodiimidu (17 mg, 0,14 mmol) v dimethyformamidu (0,5 ml). Po 2 denním míchání pod atmosférou argonu se směs ochladí v ledové lázni a po dobu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (15 ml). Po dalším 1 hodinovém míchání se směs okyselí na pH 2,5 přidáním 1 M kyseliny chlorovodíkové (1,5 ml) a filtruje. Pevný podíl se promyje vodou (5 x 25 ml), ·· ·« • · 0 • · • 0 • · · suší za vakua, promyje 2% methanoldichlormethanem (3 x 50 ml) a suší za vakua, čímž se získá PG-gly-(9-NH-CPT) (255 mg, 92% látková bilance) ve formě nahnědlého žlutého prášku. Hmotnostní procento navázaného 20(S)-9aminokamptothecinu v tomto vzorku PG-gly-(9-NH-CPT) je 20%, vypočteno z hmotnosti spotřebovaného 20(S)-9-aminokamptothecinu při kopulační reakci.
Příklad 17
PG-gly-(lO-OH-CPT)
Do roztoku 20(S)-10-/erc-butoxykarbonyloxykamptothecinu (350 mg, 0,77 mmol), yV-Zerc-butoxykarbonylglycinu (403 mg, 2,3 mmol) a 4dimethylaminopyridinu (283 mg, 2,3 mmol) v dichlormethanu (20 ml) se přidá diizopropylkarbodiimid (0, 36 ml, 2,3 mmol). Po 20 hodinovém míchání se směs zředí chloroformem (150 ml) a promyje 1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 100 ml), poté nasyceným vodný roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou (1:1, 2 x 50 ml). Organická fáze se suší nad síranem sodným, filtruje a koncentruje za vakua, zbytek čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu v mobilní fází 1 % methanolu v chloroformu, čímž se získá 20-O-(N-tercbutoxykarbonylglycyl)-10-(/erc-butoxykarbonyloxy)-kamptothecinu (250 mg, 52% výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz, CDCb) 8,34 (s, 1 H), 8,23 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,74 (d, J = 2 Hz, 1 H), 7,67 (dd, J = 8,2 Hz, 1 H), 5,70 (d, J = 17 Hz, 1 H), 5,41 (d, J = 17 Hz, 1 H), 5,27 (s, 2 H), 4,96 (m, 1 H), 4,29-4,03 (m, 2 H), 2,23 (d, sex, J = 31,6 Hz, 2 H), 1,63 (s, 9 H), 1,43 (s, 9 H), 1,00 (t, J = 6Hz, 3H).
Roztok 20-č?-(2V-Zerc-butoxykarbonylglycyl)-10-(Zerc-butoxykarbonyloxy) kamptothecinu (250 mg, 0,4 mmol) v dichlormethanu (40 ml) a trifluoroctové kyselině (10 ml) se míchá po dobu 60 minut. Po koncentraci za vakua se zbytek rozpustí v methanolu (10 ml), pak se přidá toluen (50 ml) a roztok koncentruje za vakua. Tato procedura se opakuje dvakrát, čímž se získá 20-0-glycyl-10hydroxy-kamptothecin. 20-G-glycyl-10-hydroxykamptothecin, připravený v předešlém kroku, se rozpustí v dimethylformamidu (5 ml) a nechá reagovat s • · · • · · · · ·
A,N-diizopropylethylaminem (0,2 ml, 1,1 mmol). Tento roztok se přidá do roztoku poly-(L-glutamové kyseliny) (37,7 kD, 640 mg) a diizopropylkarbodiimidu (0,1 M, 0,64 mmol) v dimethylformamidu (25 ml). Po 18 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a za intenzivního míchání se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (75 ml). Po okyselení na pH 1-2 pomalým přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové se směs nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 1 hodiny. Pevný podíl se spojí centrifugací a supernatant dekantuje. Pevný podíl se suspenduje ve vodě (200 ml) a znovu izoluje po centrifugací. Tento promývací proces se opakuje dvakrát a pevný podíl suší za vakua. Suspenze pevného podílu v 2% methanolu v chloroformu (25 ml) se podrobí ultrazvuku (90 minut) a filtruje. Tento promývací proces se opakuje, pevný podíl pak suší za vakua, čímž se získá PG-gly-(lO-OH-CPT) (663 mg, 83% látková bilance) ve formě žlutého prášku: *H NMR (300 MHz, d6DMSO) δ 7,1-8,5 (mnohaěetné široké signály, Ar-H), 5,45, 5,20 (br s, C-17, C-5 CH2), 0,9 (br s, C-I8CH3).
Příklad 18
PG-gly-(7-Et-10-OH-CPT)
20(S)-7-Ethyl-10-hydroxykamptothecin (SN 38) (333 mg, 0,85 mmol) se rozpustí ve směsi dimethylformamidu (6 ml) a pyridinu (2 ml). Přidá se roztok di-Zerc-butyl-dikarbonátu (294 mg, 1,35 mmol) v dimethylformamidu (2 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 19 hodin, koncentruje za vakua a zbytek se čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází chloroform-methanol (99:1), čímž se získá 20(S)-10-řerc-butoxykarbonyloxy-7ethylkamptothecin (337 mg, 80% výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,24 (d, J = 12 Hz, 1 H), 7,88 (d, J = 4 Hz, 1 H), 7,63-7,70 (m, 2 H), 5,75 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5,31 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5,27 (s, 2 H), 3,28 (q, J = 7 Hz, 2 H), 1,90 (sep, J = 8 Hz, 2 H), 1,61 (s, 9 H), 1,43 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1,08 (t, J = 8 Hz, 3 H).
I ·· · · ·· ·· • · · * · · · · · · • · · · · · · ·· • · · · « · ···· · ···♦ · · · · · ·· ·· ··· ··· ·· ···
Hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (192 mg,
1,0 mmol) se přidá do roztoku 10-/erc-butoxykarbonyloxy-7-ethylkamptothecinu (150 mg, 0,30 mmol), V-(/erc-butoxykarbonyl)glycinu (178 mg, 1,0 mmol) a 4dimethylaminopyridinu (137 mg, 1,1 mmol) v dichlormethanu (15 ml). Po 24 hodinovém míchání se směs zředí chloroformem (75 ml) a promyje 1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 50 ml) a nasyceným vodným roztokem uhličitanu sodného a vodou (1:1, 2 x 50 ml). Organická fáze se suší nad síranem sodným, filtruje a koncentruje za vakua, zbytek se čistí zrychlenou chromatografii na sloupci silikagelu v mobilní fází chloroform-methanol (99:1), čímž se získá 20-0-(/V-(íerc-butoxykarbonyl)glycyl)-10-íerc-butoxykarbonyloxy7-ethylkamptothecin (41 mg, 20% výtěžek) ve formě žlutého prášku. *H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,27 (d, J = 9 Hz, 1 H), 7,90 (d, J = 3 Hz, 1 H), 7,68 (dd, J = 9,3 Hz, 1 H), 5,72 (d, J = 17 Hz, 1 H), 5,42 (d, J = 17 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2 H),
4,96 (m, 1 H), 4,29-4,03 (m, 2 H), 3,17 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2,23 (d, sex, J = 31,6 Hz, 2 H), 1,63 (s, 9 H), 1,48-1,38 (m, 12 H), 1,00 (t, J = 6 Hz, 3 H).
2O-0-(7V-(/erc-butoxykarbonyl)glycyl)-lO-/erobutoxykarbonyloxy-7-ethylkamptothecin (40 mg, 0,06 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (25 ml) a přidá se trifluoroctová kyselina (15 ml). Po 1 hodinovém míchání se směs koncentruje za vakua, zbytek se rozpustí v methanolu (20 ml) a přidá se toluen (20 m). Roztok se koncentruje za vakua. Tato procedura se opakuje ještě dvakrát.
Výsledný pevný podíl se rozpustí v dimethylformamidu (3 ml) a nechá reagovat s MV-diizopropylethylaminem (0,03 ml, 0,17 mmol). Tento roztok se přidá do roztoku poly-(L-glutamové kyseliny) (168 mg) a diizopropylkarbodiimidu (0,02 ml, 0,13 mmol) v dimethylformamidu (6 ml). Po 21 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a za intenzivního míchání po dobu 60 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (30 ml). Hodnota pH směsi se pak sníží na 1-2 pomalým přidáním 0,5 M kyseliny chlorovodíkové. Směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá dalších 60 minut, centrifuguje a supernatant se dekantuje. Pevný podíl se suspenduje ve vodě (75 ml) a znovu separuje centrifugací. Tento postup se opakuje ještě dvakrát a pevný podíl se suší za vakua po dobu 24 hodin. Pevný podíl se suspenduje v chloroform-methanolu (92:2, 25 ml) a výsledná kašovitá směs se podrobí ultrazvuku (90 minut). Směs
9 « 9 · • 9 9 · • ··· 9 • 9 9 9 9 9 • 99 99 • «9 9 9 ·
• 9 9 · 9 9 9 9
• · • · 9 · · • · · 9* 9999
se filtruje a postup opakuje. Pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-gly(7-Et-lO-OH-CPT) (112 mg, 54% látková bilance) ve formě žlutého prášku. Podle *H NMR spektra činí hmotnostní návázaní 12%. *H NMR (300 MHz, dTFA) δ 8, 5-7,7 (mnohaěetné široké signály, Ar-H), 6,0-5,6 (br, signály, C-17, C-5 CH2), 4,6 (m, gly CH2), 3,5 (m, 7-ethyl CH2), 1,6 (br, t, 7-ethyl CH3), 0,9 (br t, C-18 CH3).
Příklad 19
PG-gly-(7-t-BuMe2Si-10-OAc-CPT)
Do roztoku 20(S)-7-(Zerc-butyldimethylsilyl)-10-hydroxykamptothecinu (DB 67; Bom et al, J. Med. Chem. 43: 3970-80 (2000)) (38 mg, 0,08 mmol) ve směsi dichlormethanu (0,5 ml) a pyridinu (0,1 ml, 1,2 mmol) se přidá anhydrid octové kyseliny (0,04 ml, 0,42 mmol). Po 20 hodinovém míchání se reakční směs koncentruje za vakua, zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu mobilní fází chloroform-methanol (99:1), čímž se získá 10-acetoxy-7(Zerc-butyldimethylsilyl)kamptothecin (29 mg, 70%) ve formě žlutého prášku. !H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8, 23 (d, 1 H, J = 10 Hz), 8,08 (d, 1 H, J = 2 Hz), 7,67 (s, 1 H), 7,53 (dd, 1 H, J = 10,2 Hz), 5,75 (d, 1 H, J = 15 Hz), 5,34 (s, 2 H), 5,30 (d, 1 H, J = 15 Hz), 2,39 (s, 3 H), 1,88 (hep, 2 H, J = 9 Hz), 1,06 (t, 3 H, J = 9 H), 0,98 (s, 9 H), 0,69 (s, 6 H).
Hydrochlorid l-(3-(dimethylamino)propyl)-3-ethylkarbodiimidu (35 mg, 0,18 mmol) se přidá do roztoku 10-acetoxy-7-(íerebutyldimethylsilyl)kamptothecinu (30 mg, 0,058 mmol), N-{tercbutoxykarbonyl)glycinu (33 mg, 0,19 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (16 mg, 0,13 mmol) v dichlormethanu. Po 20 hodinovém míchání se směs zředí dichlormethanem (25 ml) a výsledný roztok se promyje 1 M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 20 ml). Organická fáze se suší nad síranem sodným, filtruje a koncentruje za vakua, zbytek čistí zrychlenou chromatografií na sloupci silikagelu v mobilní fází 1 % methanol-chloroformu, čímž se získá 10-acetoxy20-O-(A-(íerc-butoxykarbonyl)glycyl)-7-(řerc-butyldimethylsilyl)kamptothecin
• 4 44 • 4
4 4 4 t (24 mg, 61 % výtěžek) ve formě žlutého prášku. ‘H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,23 (d, 1 H, J = 10 Hz), 8,11 (d,lH,J = 2 Hz), 7,56 (dd, 1 H, J = 10,2 Hz), 7,22 (s, 1 H), 5,68 (d, 1 H, J = 15 Hz), 5,40 (d, 1 H, J = 15 Hz), 5,29 (s, 2 H), 4,95 (br s, 1 H), 4,27-4,00 (m, 2 H), 2,40 (s, 3 H), 2,36-2,13 (m, 2 H), 1,43 (s, 9 H), 1,01-0,95 (m, 12 H), 0,70 (s, 6 H).
Do roztoku 10-acetoxy-20-O-(N-( Jerc-butoxykarbonyl)glycyl)-7-(íercbutyldimethylsilyl)kamptothecinu (21 mg, 0,031 mmol) v dichlormethanu (5 ml) se přidá trifluoroctová kyselina (2,5 ml). Po 90 minutovém míchání se směs koncentruje za vakua, zbytek rozpustí v methanol-toluenu (1:1, 4 ml). Roztok se koncentruje za vakua. Tato procedura se opakuje ještě dvakrát, čímž se získá trifluoroctová sůl 10-acetoxy-7-(/erc-butyldimethylsilyl)-20-0(glycyl)kamptothecinu, která se použije v následujícím kroku bez dalšího čištění. ’H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8, 21-8,11 (m, 2 H), 7,68-7,63 (m, 1 H), 7,42 (s, 1 H), 5,69-5,38 (m, 4 H), 4,22 (q, 2 H, J = 18 Hz), 2,39 (s, 3 H), 2,33-2,20 (m, 2 H), 1,07 (t, 3 H, J = 8 Hz), 1,00 (s, 9 H), 0,75 (s, 6 H).
4-Dimethylaminopyridin (12 mg, 0,098 mmol) a diizopropylkarbodiimid (0,37 ml z 0,1 M roztoku v dimethylformamidu) se přidá postupně do roztoku trifluoroctové soli 10-acetoxy-7-(Zerc-butyldimethylsilyl)-20-0(glycyl)kamptothecinu (0,03 mmol) a poly-(L-glutamové kyseliny) (64 mg) v dimethylformamidu (5 ml). Po 20 hodinovém míchání se směs ochladí v ledové lázni a v průběhu 30 minut se přidává 10% vodný roztok chloridu sodného (20 ml). Hodnota pH směsi se sníží na 2 pomalým přidáním 0,1 M kyseliny chlorovodíkové. Precipitát se spojí centrifugací. Pevný podíl se suspenduje ve vodě (10 ml) a po centrifugací znovu izoluje. Tato sekvence se opakuje ještě dvakrát a pevný podíl se suší za vakua. Pevný podíl se pak suspenduje v 5% methanol-chloroformu (10 ml) a podrobí ultrazvuku (90 minut). Směs se filtruje a spojený pevný podíl se suší za vakua, čímž se získá PG-gly-(7-í-BuMe2Si-10OAc-CPT) (69 mg, 84% látková bilance) ve formě světle žlutého pevného podílu. Podle *H NMR činí hmotnostní navázání 15%. *H NMR (300 MHz, CF3CO2D) δ 8,71 (br s CPT Ar-H), 8,17 (s, CPT Ar-H), 7,99-7,91 (m, CPT ArH), 6,00-5,58 (m, CPT lakton, C5-CH2-), 5,00-4,77 (m, PG a-CH), 3,84 (s, Gly ·· ·4 • · · • · · • · · · • · · ·♦ 4 4 4 4 ♦ » *· ř · · » · · · · > · · ··· ♦
CH2), 2,78-2,59 (m, PG-CH2-), 2,38-2,05 (m, PG-CH2-), 1,30 (br s, CPT CH2CH3), 1,12 (br s, CPT (CH3)3CSi(CH3)2), 0,88 (br s, CPT (CH3)3CSi(CH3)2).
Příklad 20
In vivo biologické aktivity
A. Kamptothecinové konjugáty
Maximální tolerovaná dávka (MTD) a relativní účinnost PG-CPT konjugátů byla nejprve testována pomocí jednotlivých IP injekcí na C57BL/6 myšších majících subkutánní B16 melanomy. Ačkoliv B16 melanom je pouze nepatrně citlivý na 20(S)-kamptothecin, je tento model používán ke screeningu různých sloučenin pro předběžné stanovení účinnosti díky reprodukovatelnosti a schopnosti stanovit sloučeninu v krátkém době. Nádory byly vytvořeny ve svalu pravé interskapulární oblasti subkutánní injekcí 1,0 χ 105 buněk myššího melanomu (B-16-F0; ATTC CRL-6322) v objemu 0,2 ml PBS suplementovaném 2% FBS. Testované sloučeniny a kontrola byly podávány (0,5 ml na 20 g tělesné hmotnosti) 7 nebo 8 dnů po implantaci nádorových buněk, kdy nádory dorostly do objemu 5 ± 1 mm3. Konjugáty kamptothecinu byly rozpuštěny v 0,1 M roztoku Na2HPO4 sonikací při teplotě 45°C po dobu 45 - 60 minut. Nativní kamptotheciny byly rozpuštěny ve směsi 8,3% Cremophor EL/8,3% ethanolu v 0,75% fyziologickém roztoku. Veškeré injekce byly podávány intraperitoneálně (IP). Každá ošetřovaná skupina se sestávala z 10 myšší náhodně rozdělených do skupin. Objem nádoru byl vypočten podle vzorce (délka x šířka x výška)/2. Myši, jejichž nádory dosahovaly nebo byly větší než 2000 mm3, byly euthanazovány cervikální dislokací. Účinnost testovaných sloučenin proti nádoru byla stanovena vypočtením zpoždění růstu nádoru (TGD): průměrná doba nádorů v dnech u ošetřované skupiny potřebná k dosažení fixního objemu mínus průměrná doba nádorů v dnech u kontrolní skupiny potřebná k dosažení stejného objemu. Pro stanovení statistických rozdílů byl proveden nepárový studentův test. Ke stanovení MTD sloučenin byly sloučeniny testovány v různých koncentracích. MTD je maximální tolerovaná ekvivalentní dávka kamptothecinu. Bylo zjištěno, že MTD pro konjugáty PG-20(S)-kamptothecinu je ·· ·· • · · • · · • · · · • · · • * · · · · přibližně dvakrát větší než pro volný 20(S)-kamptothecin, tudíž umožňuje podání vyšších dávek kamptothecinu majících za následek zvýšenou protinádorovou účinnost. Pro přímo kopulovaný 20(S)-kamptothecin, PG-CPT, bylo maximální navázání přibližně 14% (hmotnost 20(S)-kamptothecinu/celková hmotnost konjugátu). Glycinový linker (PG-gly-CPT) umožňoval až 39% navázání a zvýšenou rozpustnost ve vodě.
B. Účinek různých konjugátů PG-kamptothecinu na růst nádoru u zvířecích modelů
Obecně bylo zjištěno, že PG-glycinové konjugáty 20(S)-kamptothecinu byly lepší než konjugáty PG-CPT připravené s dalšími linkery (biologicky, tj. účinnost a toxicita a/nebo vzhledem k rozpustnosti ve vodném médiu a snadnosti syntézy a množství kamptothecinu, který by mohl být navázán na hlavný řetězec PG) a lepší než srovnatelné PG-gly-konjugáty sestávající se z 20(S)-9aminokamptothecinu, 20(S)-10-hydroxykamptothecinu, 20(S)-7-ethyl-10hydroxykamptothecinu (SN 38) a 20(S)-10-acetoxy-7-(řercbutyldimethylsilyl)kamptothecinu (10-O-acetyl DB 67). Data podporující tento nárok jsou shrnuta níže. V některých experimentech byly PG konjugáty srovnávány s nekonjugovaným 20(S)-kamptothecinem nebo komerčně a klinicky dostupným topotecanem. Ve všech případech vykazovaly PG-konjugáty lepší protinádorovou účinnost než volná léčiva. Navíc studie účinnosti jednotlivé dávky na dvou dalších modelech nádorů (MCA-4 rakoviny prsu a OSA-1 ovariální rakoviny) demostrovaly, že PG-CPT buď přímo kopulovaný nebo pomocí glycinového linkeru měl rovněž zvýšenou účinnost v porovnání s nativním 20(S)-kamptothecinem a jeho MTD, a že MTD konjugátů PG byla přibližně dvojnásobně vyšší než MTD pro naivní CPT. Kromě výše uvedených modelů byl používán ještě jeden další syngenní model viz. LL/2 Lewisova plíce (ATTC CRL-1642) a 2 xenogenní modely viz. lidské NC1-H460 plicní karcinomy (ATTC HTB-177) a HT-29 lidské karcinomy tlustého střeva (ATTC HTB-38). Na těchto xenogenních modelech byly místo imunokompetentních C57BL/6 myší používány imunokompromitované atymické ncr nu/nu myši. S výjimkou • · « φ • · · · · • · φ · ·· ·* ···· množství nádorových buněk implantovaných k vytvoření nádorů byly experimentální protokoly a postupy stejné jako u B-16/F0 modelu.
K vytvoření PG konjugátů 20(S)-kamptothecinu bylo používáno celkem 6 jiných linkerů než glycin. Ve všech konjugátech byl PG ze stejné šarže a měl průměrnou molekulovou hmotnost 50 kD. Byly testovány různé konjugáty a srovnávány s PG-gly-CPT v mnoha experimentech naB-16 modelu. Jako první bylo demonstrováno, že glycinové konjugáty jsou účinnější než konjugáty 2hydroxyoctové kyseliny (glykolová kyselina) u všech tří testovaných koncentracích 20(S)-kamptothecinu. Za druhé bylo demostrováno, že glycinové konjugáty byly výrazně účinnější u B-16 modelu než konjugáty připravené s: glutamovou kyselinou (glu), alaninem (ala), β-alaninem (β-ala) a 4aminobutyrovou kyselinou.
Navázání těchto konjugátů bylo různé a pohybovalo se od 22% pro β-ala připojený 20(S)-kamptothecin až 37% pro gly-připojený 20(S)-kamptothecin.
Další testovaný linker a srovnávaný s gly byl 4-hydroxybutyrová kyselina. Dva konjugáty měly stejné množství navázání 20(S)-kamptothecinu (35%) a byly srovnávány v mnoha testech naB-16/F0, LL/2 a HT-29 modelech. Bylo demonstrováno, že glycinové konjugáty byly stejně nebo více účinné než konjugáty 4-hydroxybutyrové kyseliny. Navíc konjugáty 4-hydroxybutyrové kyseliny je obtížnější připravit, jsou méně rozpustné ve vodných roztocích než glycinové konjugáty a mohou mít nežádoucí účinky.
V mnoha experimentech byl na HT-29 a NC1-H460 modelech studován účinek délky linkeru. Byla srovnávána účinnost konjugátů sestávajících z gly (např. PG-gly-CPT), gly-gly (dimer) (např. PG-gly-gly-CPT) nebo gly-gly-gly (trimer) (např. PG-gly-gly-gly-CPT) jako linker s odpovídajícím navázáním 20(S)-kamptothecinu. Princip, teoreticky, spočíval v tom, že delší linker může vést ke stabilnější formě PG-CPT konjugátu. Zjistilo se, že konjugáty obsahující trimery byly účinnější než konjugáty obsahující monomer a dimer (které měly stejnou účinnost) při stejném procentuálním navázání 20(S)-kamptothecinu a ekvivalentních koncentracích 20(S)-kamptothecinu. Nicméně konjugáty • to * · <· • · · • · ··· to · · to · · obsahující trimer jsou toxičtější než mono-gly konjugáty při stejných ekvivalentních koncentracích 20(S)-kamptothecinu. Navíc syntéza konjugátů obsahujících dimer a trimer je daleko časově náročnější než u glycinových konjugátů a rozpustnost konjugátů obsahujících trimer ve vodě je výrazně nižší než u mono-gly konjugátů. Důležitými parametry, které by mohly determinovat účinnost a toxicitu konjugátů jsou mimo jiné molekulová hmotnost PG a procentuální navázání 20(S)-kamptothecinu. Bylo demonstrováno na B-16 a HT29 modelech, že konjugáty PG-gly-CPT připravené s PG o 50 kD jsou účinnější než konjugáty připravené s PG o 74 nebo 33 kD. Bylo rozhodnuto, že hlavní pozornost bude směřovat pouze na 50 kD PG-gly-konjugáty a stanovení protinádorového účinku různých navázaných 20(S)-kamptothecinů. Při prvotním experimentu s HT-29 karcinomy tlustého střeva byo zjištěno, že 35% navázání bylo zřetelně účinnější než 25%, 20% nebo 15% navázání konjugátů, přičemž myši obdržely stejné množství 20(S)-kamptothecinových ekvivalentů. Zvyšováním navázání z 35% na 37% a 39% se dále také zvyšovala účinnosti u HT-29 a také NC1-H460 modelu. Zvyšováním navázání na 47% nevedlo k lepší účinnosti, ve skutečnosti byla účinnost menší než látka s 35% navázáním. Rozpustnost konjugátů ve vodě se začala snižovat od 35% až 39%, přičemž látky s vyšším procentuálním navázáním byly čím dál, tím více nerozpustnější.
V jednom experimentu na HT-29 modelu bylo prokázáno, že účinnost jednorázové intraperitoneální (ip) dávky 50 kD PG-gly-CPT by mohla být zvýšena čtyřnásobným podáváním s týdenním intervalem pro celkovou akumulační dávku kamptothecinu (3 x) při jednorázové dávce. Myši tento dávkovači režim velmi dobře snášely. Ideální konjugát PG-gly-CPT se sestává z PG o průměrné molekulové hmotnosti 50 kD (podle měření vískozity), (mono)glycinu jako linkeru a 35 - 37% 20(S)-kamptothecinu. MTD u samčích ncr nu/nu myší je 40 mg/kg 20(S)-kamptothecinových ekvivalentů a je přibližně dvakrát vyšší než MTD pro volný 20(S)-kamptothecin.
• ft 49 • · * « « · • · * • · ♦ •ft ···· *» ♦» • 4 4 • · · · « • · · • · « ·
9 9
C. Další modely lidského nádoru
Byla studována protinádorová aktivita PG-gly-CPT (33 kD, 37% navázání) na NC1-H322 (ATTC CRL-5806) lidské plicní rakovině inokulované s.c. do samičích nahých myší. Léčivo bylo podáno i.v. v 9, 13, 17 a 21 den při ekvivalentní dávce 20(S)-kamptothecinu 40 mg/kg, přičemž nádory dosáhly v průměru 7-8 mm. TGD trvalo 40 dnů. Samičí nahé myší se subkutánním xenoimplantátem NC1-H460 lidské nemalobuněčné plicní rakoviny byly ošetřovány PG-gly-CPT v 1, 5, 9 a 13 den dávkou 40 mg/kg 20(S)kamptothecinu na injekci. Testovaná dávka 40 mg ekviv. 20(S)kamptothecinu/kg každý čtvrtý den x 4 mírně překročila MTD. Ačkoliv nebylo pozorováno žádné úmrtí, pohybovaly se váhové úbytky přibližně kolem 20% výchozí hmotnosti. Absolutní zpoždění růstu nádoru (definované jako denní rozdíl růstu nádorů od 8 mm do 12 mm mezi ošetřovanými a kontrolními skupinami) bylo u myší ošetřovaných PG-glyCPT 43 dnů. V druhém experimentu byl při stejném režimu testován přímo konjugovaný PG-CPT i.p., který také prokázal výrazné zpoždění růstu bez pozorovatelné toxicity.
Na nahých myších inokulovaných s.c. 1,5 x 106buněk/myší NC1-H1299 (ATTC CRL-5803) lidskými buňkami rakoviny plic byl také testován PG-glyCPT. Díky nadměrnému úbytku hmotnosti při 40 mg ekviv. 20(S)kamptothecinu/kg v předešlém experimentu na nahých myší, byla dávka snížena na 30 mg ekviv. 20(S)-kamptothecinu/kg každý čtvrtý den X 4. Tato dávka byla dobře tolerována a bylo pozorováno 32 denní TGD.
D. 10-Hydroxykamptothecinové konjugáty
PG-konjugáty 20(S)-10-hydroxykamptothecinu byly podrobeny předběžným studiím na B16 modelu. Nejaktivnější konjugát v těchto studiích je látka přímo konjugovaná nebo vázaná s glycinem přes 20-hydroxyl. V počátečních experimentech se přímo kopulovaná látka PG-(lO-OAc-CPT) projevovala jako aktivnější při 50 mg ekviv. 20(S)-10-hydroxykamptothecinu/kg než PG-gly-(lO-O-CPT). Nicméně tato dávka byla pod MTD u obou sloučenin a
0« • 0 • 000 ·· *
0 00 • · · 0
0 0
000
PG-(lO-OAc-CPT) roztok byl velmi viskózní a sloučenina vyprecipitovala z roztoku po přibližně 30 minutách, a tudíž se stala nepraktickou k použití.
Při 50 mg ekviv. 20(S)-10-hydroxykamptothecinu/kg vykazovala PG-(10OAc-CPT) TGD 5,3 dnů (p < 0,01 v porovnání s kontrolou). Je velmi zajímavé, že MTD u PG-(IO-OH-CPT) se pohybuje mezi 10 a 50 mg ekviv. 20(S)-10hydroxykamptothecinu/kg. Nicméně i při toxické dávce 50 mg/kg nebyl tak účinný jako PG-(lO-OAc-CPT) nebo PG-gly-(lO-OH-CPT).
Mělo se by se poznamenat, že v přímém srovnání na B-16/FO modelu byl 50 kD PG-gly-(lO-OH-CPT) konjugát přibližně dvakrát účinnější než PG-gly-(7Et-10-OH-CPT); při stejném procentuálním navázání a koncentraci SN 38. Stejné výsledky byly zjištěny při srovnání PG-gly-CPT s PG-gly-(7-t-BuMe2Si-10-OAcCPT) na HT-29 modelu. Obecně bylo zjištěno, že PG - 20(S)-10hydroxykamptothecinové konjugáty a PG konjugáty 10hydroxykamptothecinových derivátů nebo (7-t-BuMe2Si-10-OAc-CPT) nebyly tak účinné, dobře tolerované nebo snadno rozpustitelné ve vodných roztocích jako PG-gly-20(S)-kamptothecinové konjugáty; ikdyž byly přímo vázané nebo vázané glycinem nebo vázané v různých polohách.
E. 9-aminokamptothecinové konjugáty
Studie ukazují, že PG-9-NH-CPT je aktivní a má MTD větší než 25 mg ekviv. 20(S)-9-aminokamptothecinu/kg. Nicméně bylo také zjištěno, že 20(S)-9aminokamptothecinové konjugáty nejsou také účinné, dobře tolerované nebo snadno rozpustitelné ve vodných roztocích jako PG-gly-20(S)-kamptothecinové konjugáty; ikdyž byly přímo vázané nebo vázané glycinem nebo vázané v různých polohách.
F. Souhrn a srovnávací data
V přímých srovnáních s PG-gly-20(S)-CPT konjugátů ani PG konjugáty připravené s 20(S)-9-aminokamptothecinem ani ty připravené s 20(S)-10• · • · hydroxykamptothecinem nebyly tak účinné, dobře tolerované nebo snadno rozpustitelné ve vodných roztocích jako PG-giy-CPT konjugáty; ikdyž byly přímo vázané nebo vázané glycinem nebo vázané přes esterovou vazbu nebo amidovou vazbu (v případě 20(S)-9-aminokamptothecinu) nebo vázané v různých polohách.
Zatímco předložený vynález byl popsán s odkazy na jeho specifická provedení, mělo by být srozumitelné odborné veřejnosti, že mohou být provedeny různé změny a ekvivalenty mohou být nahrazeny bez vzdálení se od smyslu a rozsahu předloženého vynálezu. Navíc může být provedeno mnoho modifikací v konkrétních situacích, složení látek, způsobech, krocích. Veškeré tyto modifikace spadají rovněž do rozsahu patentových nároků. Všechny patenty, přihlášky vynálezů a publikace citované v předložené textu jsou zde uvedeno jako odkaz.
Tabulka 2
· ·· 4 4 4 4 4 4 ·«· · » · · · · ·
sloučenina R? R1 R2 R3
20(S)-kamptothecin H H H H
topotecan H CH2N(CH3)2 OH H
20(S)-9-amino-kamptothecin H nh2 H H
20(S)-9-nitro-kamptothecin H NO2 H H
1O-hydroxy-kamptothecin H H OH H
SN-38 CH2CH3 H OH H
20(S)-10,l1- methylendioxykamptothecin H H -CH2-O-CH2-
lurtotecan (GI 147211) -CH2-(N- methylpiperazin) H -O-CH2-CH2-O-
irinotecan (CPT-11) CH2CH3 H OCO-[1,4'- bipiperidinyl H
DX-8951F -CH2-CH2-CH(NH2)- ch3 F
DB67 -SiMe2t-Bu H -OH H
Tabulka 3
PG konjugát % CPT v konjugátu (w/w) rozpustnost ve vodě signály u 300 MHz 'H NMR spektra (DMSOd6) myší jedn. dávka MTD (IP mg. ekviv. CPT/kg
PG-CPT (20konjugovaný) 14 11 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 7,4 - 8,5 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,6 (široký singlet, lakton CH2-), 0,9 (široký signál, CPT CH2CH3) 60 - 80 mg ekviv. CPT/kg
PG-gly-CPT (20- konjugovaný) 37 25 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 7,4 - 8,5 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,6 (široký singlet, lakton CH2-), 0,9 (široký signál, CPT CH2CH3) 60 - 80 mg ekviv. CPT/kg
PG-(10-OAc-CPT (20konjugovaný) 13 10 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 7,2 - 8,6 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,4 (singlet, lakton -CH2-), 5,2 (singlet, C5H2), 0,9 (široký triplet, CPT CH2CH3) 10-20 mg ekviv. CPT/kg
PG-(10-OCPT) (10- konjugovaný) 13 10 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 7,2 - 8,6 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,4 (singlet, lakton -CH2-), 5,2 (singlet, C5H2), 0,9 (široký triplet, CPT CH2CH3) 50 mg ekviv. CPT/kg
PG-gly-(10O-CPT) (10vázaný) 20 > 10 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 7,2 - 8,8 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,4 (singlet, lakton -CH2-), 5,2 (singlet, C5H2), 0,9 (široký signál, CPT CH2CH3) > 10 < 50 mg ekviv. CPT/kg
PG-(10-OHCPT) (20- vázaný) 19 > 10 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 7,0 - 8,5 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,4 (singlet, lakton -CH2-), 5,2 (singlet, C5H2), 0,9 (široký signál, CPT CH2CH3) > 50 mg ekviv. CPT/kg
PG-(9-NH- CPT) (9- konjugovaný) 14 7 mg/ml δ 12,1 (široký singlet, PG γ-COOH), 8,8 (široký singlet, C7-H), 7,2 - 8,0 (mnohačetné široké signály, Ar - H), 5,4 (singlet, lakton -CH2-), 0,9 (široký signál, CPT CH2CH3) > 25 mg ekviv. CPT/kg
Z£)ť>2-J330

Claims (34)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje konjugát polyglutamové kyseliny-kamptothecinu mající obecný vzorec (Kamptothecin—X-4—PG * ' m ve kterém
    PG je polymer na bázi polyglutamové kyseliny;
    X je jednoduchá vazba, aminoacylový linker -[-OC-(CHR')p-NH]n- nebo hydroxyacylový linker
    -[OC-(CHR')p-O]n-, kde substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny;
    kamptothecin je 20(S)-kamptothecin nebo biologicky aktivní 20(S)kamptothecinový analog; m je kladné celé číslo od 5 do 65;
    kamptothecin-X je kovalentně vázaný na karboxylovou skupinu uvedeného polymeru přes esterovou nebo amidovou vazbu; n je celé číslo mezi 1 a 10; a p je celé číslo mezi 1 a 10.
  2. 2. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že X je jednoduchá vazba.
  3. 3. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že
    X je aminoacylový linker -[-OC-(CHR')p-NH]q- nebo hydroxyacylový linker -[OC-(CHR')p-O]q-, kde substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny; n je celé číslo mezi 1 a 10; a p je celé číslo mezi 1 a 10.
  4. 4. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnost od asi 5000 do asi 100000.
  5. 5. Kompozice podle nároku 4, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnost od asi 20000 do asi 80000.
  6. 6. Kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnost od asi 25000 do asi 60000.
  7. 7. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený kamptothecinový analog je vybrán ze skupiny sestávající se z 20(S)kamptothecinu, 20(S)-topotecanu; 20(S)-9-aminokamptothecinu; 20(S)-9nitrokamptothecinu; 20(S)-10-hydroxykamptothecinu; SN-38; 20(S)-10,llmethylenedioxykamptothecinu; lurtotecanu; irinotecanu; DX-8951 F nebo DB 67.
  8. 8. Kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedený kamptothecinový analog je vybrán z 20(S)-kamptothecinu, 20(S)-9aminokamptothecinu, 20(S)-9-nitrokamptothecinu, 20(S)-7-ethyl-10hydroxykamptothecinu, 20(S)-10-hydroxykamptothecinu a 20(S)-10acetoxykamptothecinu.
  9. 9. Kompozice podle nároku 2, vyznačující se tím, že uvedený konjugát polyglutamové kyseliny a kamptothecinu má obecný vzorec « · ·· to · · » ·· to·· «· ·· · · · • · · · · · · ·· · • •toto» * · · · · · «•to* · · toto· ·· ·· ··· ··· ·· ····
    II;
    a uvedený kamptothecin je vybrán z (a) 20(S)-kamptothecinu, kde substituenty R1, R2, R3 a R4 jsou každý H;
    (b) 20(S)-9-aminokamptothecinu, kde substituent R1 je -NH2 a substituenty R2, R3 a R4 jsou každý H;
    (c) 20(S)-9-nitrokamptothecinu, kde substituent R1 je -NO2 a substituenty R2, R3 a R4 jsou každý H;
    (d) 20(S)-10-hydroxykamptothecinu, kde substituenty R1, R3 a R4 jsou každý H a substituent R2 je -OH; nebo (e) 20(S)-10-acetoxykamptothecinu, kde substituenty R1, R3 a R4 jsou každý H a substituent R2 je -0-0(0)-0¾.
  10. 10. Kompozice podle nároku 9, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnost od asi 25000 do asi 60000.
  11. 11. Kompozice podle nároku 10, vyznačující se tím, že uvedený kamptothecin je 20(S)-kamptothecin a uvedený 20(S)-kamptothecin zahrnuje od asi 10% do asi 16% hmotn. konjugátu.
  12. 12. Kompozice podle nároku 3, vyznačující se tím, že uvedený konjugát polyglutamové kyseliny a kamptothecinu je vybrán ze sloučeniny obecného vzorce III, obecného vzorce IV nebo obecného vzorce V:
    •· 4 4 4 » 4 4 ··
    4*4 ·· * * * · ·
    4 4 4 4 4 4 · 9 9 · »•••4 4 4 4 4 4 4 «••4 4 « 4·4
    4» 4· 444 ·4· 4* 4444
    V;
    kde Υ je Ν nebo Ο.
  13. 13. Kompozice podle nároku 12, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnost od asi 30000 do asi 60000.
  14. 14. Kompozice podle nároku 13, vyznačující se tím, že uvedený kamptothecin zahrnuje od asi 10% do asi 16% hmotn. konjugátu.
  15. 15. Kompozice podle nároku 3, vyznačující se tím, že uvedený konjugát polyglutamové kyseliny a kamptothecinu je vybrán ze sloučeniny obecného vzorce VI nebo obecného vzorce VII:
    i ·· ·* • · * • · • · · · • · · • · · · ·
    VI;
    VII kde
    Y je N nebo O ;
    substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny;
    substituent R1 je -NH2 nebo H;
    substituent R2 je -H, -OH nebo -O-C(O)-CH3;
    substituent R3 je -H nebo alkylová skupina; a substituetn R4 je -H, alkylová skupina nebo triatkylsilylová skupina.
    • · *
    ·· ·· • ♦ 9 4 • · ♦··
    9 to · · · • · · · • · · · · ·· ··
  16. 16. Kompozice podle nároku 15, vyznačující se tím, že substituent R' je H.
  17. 17. Kompozice podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnost od asi 30000 do asi 60000.
  18. 18. Kompozice podle nároku 17, vyznačující se tím, že uvedený 20(S)kamptothecin zahrnuje do asi 10% do asi 50% hmotn. konjugátu.
  19. 19. Kompozice podle nároku 18, vyznačující se tím, že uvedený 20(S)kamptothecin zahrnuje od asi 15% do asi 38% hmotn. konjugátu.
  20. 20. Kompozice obsahující PG-gly-CPT, PG-gly-(lO-OH-CPT) nebo PGgly-(9-NH-CPT), vyznačující se tím, že uvedený PG má molekulovou hmotnost od asi 25000 do asi 60000 a uvedený 20(S)-kamptothecin zahrnuje od asi 10% do asi 50% hmotn. konjugátu.
  21. 21. Způsob přípravy kompozice obsahujícího konjugát polyglutamové kyselinykamptothecinu mající obecný vzorec (Kamptothecin—X-)—PG * m ve kterém
    PG je polymer na bázi polyglutamové kyseliny;
    X je jednoduchá vazba, aminoacylový linker -[-OC-(CHR')p-NH]n- nebo hydroxyacylový linker
    -[OC-(CHR')p-O]n-, kde substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny;
    kamptothecin je 20(S)-kamptothecin nebo biologicky aktivní 20(S)kamptothecinový analog; m je kladné celé číslo od 5 do 65;
    • · ·· ♦ · 4 • 4 · ··
    4 *4 «
    4 4 4 <
    4 4 ·· kamptothecin-X je kovalentně vázaný na karboxylovou skupinou uvedeného polymeru přes esterovou nebo amidovou vazbu; n je celé číslo mezi 1 a 10; a p je celé číslo mezi 1 a 10;
    přičemž uvedený způsob zahrnuje:
    (a) přípravu polymeru na bázi polyglutamové kyseliny majícího molekulovou hmotnost od asi 25000 do asi 60000 daltonů stanovenou podle viskozity a 20(S)kamptothecinu k jeho konjugaci s polymerem; a (b) kovalentně vázaný uvedený 20(S)-kamptothecin na uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny za podmínek, jenž jsou dostačující k připojení alespoň 5 molů 20(S)-kamptothecinu na mol polymeru, a tím vytvoření uvedeného konjugátu polyglutamové kyseliny-kamptothecinu.
  22. 22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že uvedený 20(S)kamptothecin je vybrán z 20(S)-9-aminokamptothecinu, 20(S)-10hydroxykamptothecinu nebo
    20(S)-kamptothecinu.
  23. 23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se tím, že 20(S)-kamptothecin zahrnuje od asi 10% do asi 16% hmotn. konjugátu.
  24. 24. Způsob přípravy přípravku obsahujícího konjugát polyglutamové kyseliny-kamptothecinu, vyznačující se tím, že zahrnuje (a) přípravu protonované formy polymeru na bázi polyglutamové kyseliny a 20(S)-kamptothecinu nebo biologicky aktivního 20(S)-kamptothecinového analoga k jeho konjugaci s polymerem;
    (b) reakci uvedeného polymeru na bázi polyglutamové kyseliny a uvedeného 20(S)-kamptothecinu v inertním organickém rozpouštědle v přítomnosti bis(2oxo-3-oxazolidinyl)fosfinové kyseliny za podmínek, které jsou dostatečné k vytvoření konjugátu polyglutamové kyseliny-kamptothecinu; a (c) precipitaci uvedeného konjugátu polyglutamové kyseliny-kamptothecinu z roztoku přidáním přebytku objemu vodného roztoku soli.
    • · · · • · • 99 99 999·
  25. 25. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že zahrnuje:
    (d) promytí uvedeného precipitátu k odstranění nezreagovaného 20(S)kamptothecinu.
  26. 26. Způsob podle nároku chloromethylpyridinium-jodid je
    24, vyznačující nahrazen za se tím, že bis(20-oxo-3oxazolidinyl)fosfinovou kyselinu v kroku (b).
  27. 27. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnosti od asi 25000 do asi 60000 daltonů podle měření viskozity.
  28. 28. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že uvedený 20(S)kamptothecin zahrnuje od asi 10% do asi 16% hmotn. konjugátu.
  29. 29. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje protinádorové a/nebo antileukemické účinné množství konjugátu polyglutamové kyseliny-kamptothecinu podle kteréhokoliv z nároků 1, 11 nebo 14 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelný nosič a/nebo ředící roztok.
  30. 30. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje protinádorové a/nebo antileukemické účinné množství konjugátu polyglutamové kyseliny-kamptothecinu podle nároku 20 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli a farmaceuticky přijatelný nosič a/nebo ředící roztok.
  31. 31. Způsob ošetření leukémie nebo pevného nádoru, vyznačující se tím, že zahrnuje podání, při potřebě takového ošetření, farmaceutického přípravku podle nároku 30 pacientovi, a tím dochází k ovlivnění léčby ošetření příslušné leukémie a pevného nádoru.
    • 4 44 « 4 4 • 9 ·
    4 · · *
    4 9 9
    4«
  32. 32. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát polyglutamové kyseliny-kamptothecinu připravený podle způsobu uvedeného v jednom z nároků 21 -28.
  33. 33. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát polyglutamové kyseliny-kamptothecinu mající obecný vzorec III, IV nebo V:
    III;
    I.
    I
    IV;
    _ * to········· * «·······>· * to········· • · · · · to · · · to · toto·· » · to · to to· ·· to·· ··· ·· ····
    V;
    kde
    PG je polymer na bázi polyglutamové kyseliny;
    Y je N nebo O.
    substituent R' je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny; n je celé číslo mezi 1 a 10; a p je celé číslo mezi 1 a 10; a kde uvedený polymer na bázi polyglutamové kyseliny má molekulovou hmotnosti od asi 30000 do asi 60000.
  34. 34. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje konjugát polyglutamové kyseliny-kamptothecinu mající obecný vzorec VI nebo VII:
CZ20023330A 2000-03-17 2001-03-19 Konjugáty kamptotecinu a polyglutamové kyseliny a způsoby přípravy CZ20023330A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19042900P 2000-03-17 2000-03-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20023330A3 true CZ20023330A3 (cs) 2003-02-12

Family

ID=22701317

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20023330A CZ20023330A3 (cs) 2000-03-17 2001-03-19 Konjugáty kamptotecinu a polyglutamové kyseliny a způsoby přípravy

Country Status (20)

Country Link
US (1) US20020016285A1 (cs)
EP (1) EP1267939A2 (cs)
JP (1) JP2003527443A (cs)
KR (1) KR20020082888A (cs)
CN (1) CN1429121A (cs)
AU (1) AU2001247513A1 (cs)
BR (1) BR0109272A (cs)
CA (1) CA2402643A1 (cs)
CZ (1) CZ20023330A3 (cs)
HU (1) HUP0204562A2 (cs)
IL (1) IL151685A0 (cs)
MX (1) MXPA02009082A (cs)
NO (1) NO20024421L (cs)
PL (1) PL358335A1 (cs)
RU (1) RU2002128610A (cs)
SI (1) SI21172A (cs)
SK (1) SK14822002A3 (cs)
TR (1) TR200202194T2 (cs)
WO (1) WO2001070275A2 (cs)
ZA (1) ZA200207423B (cs)

Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
MXPA02003719A (es) * 1999-10-12 2002-08-30 Cell Therapeutics Inc Fabricacion de congujados de poliglutamato-agente terapeutico.
US20030054977A1 (en) * 1999-10-12 2003-03-20 Cell Therapeutics, Inc. Manufacture of polyglutamate-therapeutic agent conjugates
US20020077290A1 (en) 2000-03-17 2002-06-20 Rama Bhatt Polyglutamic acid-camptothecin conjugates and methods of preparation
US6629995B1 (en) 2000-03-31 2003-10-07 Super Gen, Inc. Camptothecin conjugates
USRE48890E1 (en) 2002-05-17 2022-01-11 Celgene Corporation Methods for treating multiple myeloma with 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione after stem cell transplantation
US7393862B2 (en) 2002-05-17 2008-07-01 Celgene Corporation Method using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for treatment of certain leukemias
US7323479B2 (en) 2002-05-17 2008-01-29 Celgene Corporation Methods for treatment and management of brain cancer using 1-oxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-methylisoindoline
CN103494817A (zh) * 2002-05-17 2014-01-08 细胞基因公司 用于治疗和控制多发性骨髓瘤的方法及组合物
US7968569B2 (en) 2002-05-17 2011-06-28 Celgene Corporation Methods for treatment of multiple myeloma using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione
US11116782B2 (en) 2002-10-15 2021-09-14 Celgene Corporation Methods of treating myelodysplastic syndromes with a combination therapy using lenalidomide and azacitidine
CN1309763C (zh) * 2002-10-31 2007-04-11 日本化药株式会社 喜树碱的高分子衍生物
CN1735412A (zh) 2002-11-06 2006-02-15 细胞基因公司 利用选择性细胞因子抑制药物治疗和控制癌症和其它疾病的方法和组合物
US7723509B2 (en) * 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US8796436B2 (en) 2003-04-17 2014-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
EP2669377A3 (en) * 2003-04-17 2015-10-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
US8017762B2 (en) * 2003-04-17 2011-09-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
US7851615B2 (en) * 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
UA83504C2 (en) 2003-09-04 2008-07-25 Селджин Корпорейшн Polymorphic forms of 3-(4-amino-1-oxo-1,3 dihydro-isoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione
CA2562904C (en) 2004-04-27 2013-07-02 Wellstat Biologics Corporation Cancer treatment using viruses and camptothecins
US8614228B2 (en) 2004-08-11 2013-12-24 Arqule, Inc. Quinone prodrug compositions and methods of use
EP1877097B1 (en) 2004-08-11 2012-06-20 Arqule, Inc. Aminoacid conjugates of beta-lapachone for tumor targeting
BRPI0515573A (pt) * 2004-09-22 2008-07-29 Nippon Kayaku Kk copolìmero por blocos, preparação de micela e agente anticáncer contendo a mesma como o ingrediente ativo
US7767200B2 (en) 2005-07-14 2010-08-03 Wellstat Biologics Corporation Cancer treatment using viruses, fluoropyrimidines and camptothecins
ITPD20050242A1 (it) * 2005-08-03 2007-02-04 Fidia Farmaceutici Bioconiugati antitumorali dell'acido ialuronico o dei suoi derivati, ottenibili per coniugazione chimica diretta o indiretta, e loro impiego in campo farmaceutico
WO2007067417A1 (en) * 2005-12-05 2007-06-14 Nitto Denko Corporation Polyglutamate-amino acid conjugates and methods
US7462627B2 (en) * 2006-02-09 2008-12-09 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin for treatment of breast, colorectal, pancreatic, ovarian and lung cancers
US7671067B2 (en) * 2006-02-09 2010-03-02 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Treatment of non-hodgkin's lymphomas with multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamtothecin
WO2007111211A1 (ja) 2006-03-28 2007-10-04 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha タキサン類の高分子結合体
KR101394768B1 (ko) 2006-03-30 2014-05-21 드라이스 파마슈티컬스 아이엔씨 캄토테신-세포 투과 펩티드 결합체 및 이를 포함하는 약학 조성물
EP2019122A4 (en) 2006-05-18 2009-07-01 Nippon Kayaku Kk POLYMER CONJUGATE OF PODOPHYL LOTOXIN
CL2007002218A1 (es) 2006-08-03 2008-03-14 Celgene Corp Soc Organizada Ba Uso de 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-piperidina 2,6-diona para la preparacion de un medicamento util para el tratamiento de linfoma de celula de capa.
ES2584840T3 (es) * 2006-10-03 2016-09-29 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Compuesto de un derivado de resorcinol con un polímero
US8334364B2 (en) * 2006-11-06 2012-12-18 Nipon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight derivative of nucleic acid antimetabolite
JP5548365B2 (ja) * 2006-11-08 2014-07-16 日本化薬株式会社 核酸系代謝拮抗剤の高分子誘導体
US20080181852A1 (en) * 2007-01-29 2008-07-31 Nitto Denko Corporation Multi-functional Drug Carriers
CN101605539B (zh) * 2007-02-09 2013-01-02 安佐制药股份有限公司 用7-乙基-10-羟基喜树碱的多臂聚合缀合物治疗抵抗性或顽固性癌症
EP2144631A2 (en) * 2007-04-10 2010-01-20 Nitto Denko Corporation Multi-functional polyglutamate drug carriers
AU2008246067B2 (en) 2007-04-30 2011-10-20 Arqule, Inc. Hydroxy sulfonate of quinone compounds and their uses
EP2155255B1 (en) * 2007-05-09 2013-08-14 Nitto Denko Corporation Compositions that include a hydrophobic compound and a polyamino acid conjugate
EP2155253A2 (en) * 2007-05-09 2010-02-24 Nitto Denko Corporation Polyglutamate conjugates and polyglutamate-amino acid conjugates having a plurality of drugs
DK2155254T3 (da) * 2007-05-09 2013-03-04 Nitto Denko Corp Med platinlægemidler konjugerede polymere
WO2009041570A1 (ja) 2007-09-28 2009-04-02 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha ステロイド類の高分子結合体
CN104096236A (zh) * 2008-03-06 2014-10-15 日东电工株式会社 用于治疗癌症的聚合物紫杉醇结合物和方法
WO2009116509A1 (ja) 2008-03-18 2009-09-24 日本化薬株式会社 生理活性物質の高分子結合体
US9149540B2 (en) 2008-05-08 2015-10-06 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of folic acid or folic acid derivative
JP2011162569A (ja) 2008-05-23 2011-08-25 Nano Career Kk カンプトテシン高分子誘導体及びその用途
WO2010025337A1 (en) * 2008-08-29 2010-03-04 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Method of treating ras associated cancer
JP2012505906A (ja) * 2008-10-15 2012-03-08 日東電工株式会社 ポリグルタメートコンジュゲートの調製方法
AU2009307922A1 (en) * 2008-10-21 2010-04-29 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Treatment of neuroblastoma with multi-arm polymeric conjugates of 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin
EP2431403B1 (en) 2009-05-15 2016-09-28 Nipponkayaku Kabushikikaisha Polymer conjugate of bioactive substance having hydroxy group
US20110144315A1 (en) * 2009-12-16 2011-06-16 Nitto Denko Corporation Controlled synthesis of polyglutamic acid
KR20130008034A (ko) * 2010-03-11 2013-01-21 닛토덴코 가부시키가이샤 탄수화물-폴리아미노산-약물 접합체
EP4450523A3 (en) 2010-04-02 2025-03-12 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
EP2641605B1 (en) 2010-11-17 2018-03-07 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer derivative of cytidine metabolism antagonist
CN102649810A (zh) * 2011-05-19 2012-08-29 东北林业大学 喜树碱衍生物、其制备方法和用途
AU2012305405B2 (en) 2011-09-11 2016-01-14 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Method for manufacturing block copolymer
US9180203B2 (en) * 2012-10-23 2015-11-10 The Johns Hopkins University Self-assembling drug amphiphiles and methods for synthesis and use
HUE061382T2 (hu) 2014-08-22 2023-06-28 Celgene Corp Eljárás myeloma multiplex kezelésére immunomoduláló vegyületekkel, antestekkel kombinálva
EP3313818B1 (en) 2015-06-26 2023-11-08 Celgene Corporation Methods for the treatment of kaposi's sarcoma or kshv-induced lymphoma using immunomodulatory compounds, and uses of biomarkers
CN106267227A (zh) * 2016-08-12 2017-01-04 北京蓝贝望生物医药科技股份有限公司 抗肿瘤药物
WO2018064683A1 (en) * 2016-09-30 2018-04-05 If7Cure, Inc Process for the manufacture of a tumor-vasculature targeting antitumor agent
CN106831853B (zh) * 2017-02-15 2019-02-22 浙江海正药业股份有限公司 7-乙基-10-o-叔丁基二苯基硅基喜树碱-20-o-甘氨酸盐酸盐的制备工艺
CN108727581A (zh) * 2017-04-18 2018-11-02 华东师范大学 以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药及其制备方法和应用
JP2021095424A (ja) * 2018-03-28 2021-06-24 持田製薬株式会社 抗癌剤結合アルギン酸誘導体
AU2020397848A1 (en) 2019-12-04 2022-06-16 Dantari, Inc. Methods and compositions for synthesis of therapeutic nanoparticles

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4356166A (en) * 1978-12-08 1982-10-26 University Of Utah Time-release chemical delivery system
SI0932399T1 (sl) * 1996-03-12 2006-10-31 Pg Txl Co Lp Vodotopna paklitakselna predzdravila
US6441025B2 (en) * 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200207423B (en) 2003-12-17
RU2002128610A (ru) 2004-03-27
KR20020082888A (ko) 2002-10-31
WO2001070275A3 (en) 2002-01-03
MXPA02009082A (es) 2003-12-11
CA2402643A1 (en) 2001-09-27
US20020016285A1 (en) 2002-02-07
AU2001247513A1 (en) 2001-10-03
PL358335A1 (en) 2004-08-09
EP1267939A2 (en) 2003-01-02
CN1429121A (zh) 2003-07-09
SK14822002A3 (sk) 2003-05-02
NO20024421D0 (no) 2002-09-16
WO2001070275A2 (en) 2001-09-27
TR200202194T2 (tr) 2003-01-21
NO20024421L (no) 2002-11-15
SI21172A (sl) 2003-10-31
IL151685A0 (en) 2003-04-10
HUP0204562A2 (hu) 2003-04-28
BR0109272A (pt) 2004-06-29
JP2003527443A (ja) 2003-09-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ20023330A3 (cs) Konjugáty kamptotecinu a polyglutamové kyseliny a způsoby přípravy
US6328953B1 (en) Polymeric derivatives of camptothecins
ES2198421T3 (es) Derivados de la camptotecina unidos a polimeros.
AU781735B2 (en) Manufacture of polyglutamate-therapeutic agent conjugates
US7173041B2 (en) Polyglutamic acid-camptothecin conjugates and methods of preparation
WO1999053951A9 (en) Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
ES2759905T3 (es) Conjugados de liberación lenta de SN-38
JP2020531591A (ja) 相乗的抗癌活性を有する中間体薬剤およびポリエチレングリコール共役相乗的抗癌薬、ならびにその製造方法およびその使用
CN101948500A (zh) 喜树碱20位偶合胆酸的新衍生物
CN102516347A (zh) 喜树碱20位胆酸衍生物及其制备方法
CA2979527A1 (en) Conjugates of pyrrolobenzodiazepine (pbd) prodrugs for treating disease
CA3193485A1 (en) Peptidic conjugates of sn38 useful in the treatment of cancer
CN110772644B (zh) 聚乙二醇修饰的强心苷类化合物前药及其抗肿瘤用途
US20020183243A1 (en) Polyglutamic acid-camptothecin conjugates and methods of preparation
TW202325273A (zh) 靶向fap之中子捕獲劑及與其相關之用途及調配物
MXPA00003031A (en) Polymeric derivatives of camptothecins