CN87103560A - 药物组合物 - Google Patents

Abstract

一种口服时，适于施用药理有效量的一种药剂组合物，包括(a)一种药剂；(b)一种类脂涂层材料；及(c)肠溶涂层材料，并且任意地包括溶水性涂层材料；乳化剂和加溶剂；粘合剂；稳定剂和酶抑制剂、表面活性剂和抗菌剂。该组合物也能包括低密度脂蛋白组合物和脂解酶。

Description

药物组合物

概括地说，本发明是关于口服生物活性蛋白质物质用的组合物及制备该组合物的方法和设备，更具体地说，本发明是关于通过口服胰岛素来治疗糖尿病的组合物。

很多的药品、药剂和疗法是非肠道给药，其原因是它们在胃和肠道中降解或不能很好地吸收，因此不能口服。如在以下讨论的，胰岛素就是通过皮下注射给很多糖尿病患者施药。

糖尿病是造成脂肪碳水化合物和蛋白质新陈代谢的一种慢性失调疾病。它的特征是由于胰岛素分泌反应缺少或不足引起高血糖和糖尿。它有两种主要的病（变）态。仅在美国诊断为糖尿病的患者估计有一千万，确信这个数字将以每年6%的速度递增。

一种约占所有突发性糖尿病百分之十的变态，是与胰岛素有关的糖尿病（“IDDM”）或者在年青时开始发作的糖尿病。这种变态经常在年青时第一次发生，其特征表现是胰岛素内分泌的功能逐步消失，而这种功能是通过胰岛的β-细胞来进行的。因此，为了维持糖的新陈代谢，就要逐步“依赖”外原的胰岛素。这种特征是非突发性的，即继发性的糖尿病人共有的，这种糖尿病人的失调具有胰脂病的原发性。第二种突发性糖尿病变态是指与胰岛素无关的糖尿病（“NIDDM”），或在成年期开始发作的糖尿病，它占突发性糖尿病总数的70%。

所有的糖尿病人，不考虑他们的遗传性、生活环境或发生该病的年龄，共同地都表现出胰岛素不足或胰岛素的功能不强。因为从血液中向肌肉和脂肪组织中输送葡萄糖是依赖于胰岛素的，而糖尿病人缺乏充分利用葡萄糖的能力。进而，由于糖原分解作用一般是被胰岛素抑制，所以在糖尿病人体内糖原分解的速度增高。这两种新陈代谢“紊乱”都导致葡萄糖在血中的积累（高血糖），以致于使到达胃中葡萄糖的再吸收能力过负荷引起了糖尿。因此，糖尿病人的主要能源变成从贮存在脂肪组织中的三酸甘油酯得到的脂肪酸。

在肝中，脂肪酸被氧化成循环的酮体，并且作为能源被组织利用。在IDDM的患者和NIDDM的患者中，形成酮体的速度超过了利用它们的速度，随着新陈代谢的酸中毒酮病就可能发生。由于组织缺乏葡萄糖，所以饮食和组织中的蛋白源被用来合成葡萄糖。如糖源、三酸甘油酯和蛋白质的合成等组成过程被“消耗”而得到分解活性，它包括葡萄糖分解、葡萄糖的合成和脂肪的代谢。因此，纯碎缺乏胰岛素的原发性糖尿病导致了对身体几乎所有器官和组织的病理学的长期影响。实际上，糖尿病是可以引起心肌梗塞、肾衰竭、脑血管疾病、动脉粥样硬化心脏病和全身感染死亡的最初病因之一。

糖尿病的高血糖和糖尿情况可以通过饮食、控制体重和调节生理活性加以改变。在一些糖尿病患者中，特别是NIDDM患者，其高血糖和糖尿情况可以通过口服抗高血糖剂，如磺酰脲衍生物、磺胺、双胍和其它的化合物加以控制。对于IDDM和深度的NIDDM患者可以集中投用外原胰岛素。

胰岛素是胰中胰岛上产生的多肽。最初合成的胰岛素分子是单个多肽链，但是它的活性形式是由两个半胱氨酸二硫化物键相连的两个氨基酸链组成。其中一个链由于第三个二硫化物链本身可以折回。整个分子的分子量为5734并且它取决于维持它的生物活性形态的二硫化物键。

过去，外原胰岛素最初是来自猪和牛，但近年来，由于DNA重组技术，可以得到“人造”的胰岛素。已证实这种由重组而得到的“人造”胰岛素大大有利于用动物源中得到胰岛素有过敏反应的这些糖尿糖人。

尽管如此，对于胰岛素治疗的最大难题不仅是其来源问题，更为重要的是如何引入身体的问题。胰岛素最普通的给药方法是皮下注射。但这种方法不方便、痛苦，甚至可使病情加重。皮下注射胰岛素会使局部有关的组织积累大量的胰岛素，而通过肝循环和体内胰岛素活性的初期中心的胰岛素的量比较低，在局部组织大量胰岛素的聚集会引起血管的疾病（例如，血管的收缩和渗透性的变化）和引起周围组织的病理效应，例如，糖尿视网膜病。皮下注射胰岛素对局部循环组织的“糟糕”的影响甚至是减少了胰岛素向肝循环的量，因此，为了达到理想的新陈代谢效应则需要增加剂量。由于这些理由，长期以来都在探寻一种替代胰岛素注射的方法。

作为替代胰岛素注射的方法，一些人致力于研究采用胰岛素栓剂直肠内给药的方法。U.S2373625中Brahn揭示了含有与表面活性剂相结合的弱有机酸如乳酸或柠檬酸的胰岛素栓剂。

在已知的技术中，胰岛素栓剂使用了各种拼料，如皂角甙、玉米油、聚氧乙烯-9-十二烷基醇和聚氧乙烯十二烷基醚。胰岛素也可以封装在丙烯酸为主的可溶于水的凝胶中，装入含有表面活性剂的软质凝胶胶囊中。尽管胰岛素直肠内给药法表明其有希望，但是生物利用试验前后不重复，而且这种方法是不方便的。

Ishida等人在Chem.Pharm.Bull.，29，810上描述了通过口颊粘液膜投用胰岛素的方法。在给药之前，胰岛素与可可脂碱和表面活性剂混合。用狗进行的试验表明这样投用胰岛素只有很少的生物效用。

其它的一些人致力于肺内投用胰岛素的研究。Wigley等人在Diabetes，20，552（1971）上描述了以500U/ml的速率用喷雾器投用胰岛素的方法，其粒子存在的空间直径为2米。在按30U/Kg体重给药（指示出总的生物效用约为7～16%）后，观察到低血糖反应。Yoshida等人在J.Pharm.Sci.68，670（1979）中描述了在肺内引入胰岛素，该胰岛素与乳糖和乙酰丙三醇单硬脂酸酯相混合后溶解在氟代乙烷中。对兔子用药量为2.5U/Kg兔重时，将出现低血糖反应。

已证明有希望的另一种投用胰岛素的方法是通过鼻内投用胰岛素。Hirai等人在Int.J.Pharm，9，165（1981）上描述述了鼻内投用胰岛素的方法，该胰岛素与表面活性剂如甘胆酸钠溶液合用。Nagai等人在Journal    of    controlled    Release，1，15（1984）中描述了当对狗进行鼻内投药时，胰岛素有高生物效用。在这种方法中结晶胰岛素溶解在预先加入了表面活性剂的0.1NHcl溶液中，然后另用0.01NNaHcl溶液来调节该溶液pH值到7.4并冷冻干燥。在鼻道给药前，该溶液与晶体纤维素混合。

在胰岛素给药方法的研究中，口服胰岛素受到了最大的重视，口服胰岛素方法之所以大有希望是由于该法安全、简便和舒服，并且克服了胰岛素注射等方法的不足之处。尽管如此，在口服胰岛素中还存在着两个主要困难，限制了口服胰岛素法的推广。

推广口服疗法的第一个困难是，胰岛素多肽在胃肠道中，由于酶，如胰蛋白酶、糜蛋白酶和其它松解酶的作用而失去活性。胰岛素多肽是比较简单的，在胃和肠道的苛刻条件下，其上的两个二硫化物键极容易降解。

口服胰岛素的第二个困难是即使可以避免多肽在胃和肠道中的降解，但通过肠道膜的吸收是很少的，而且吸收量不稳定。由于它的生物利用低，为了保证低血糖反应，必须加大药剂量。因为胰岛素的有效用量不恒定，在这情况下，过量的胰岛素可能比完全没有胰岛素对健康的危害更大，这一事实则可能使口服方法弊大于利。

人们认为下面的几条途径有助于克服胰岛素口服给药所存在的困难，这些途径包括使造成胰岛素的功能减活的肠道溶解酶减活，或者是提供胰岛素的类似物来阻止被这些酶减活。Sichiri等人在糖尿病（Japanese    Diabetes    Publication）18∶619，1975）中揭示了一种胰岛素类似物（β-萘基-偶氮-多硬脂酰基-胰岛素），当把它以150IU/Kg兔子的体重给兔子口服时，其减少了低血糖反应。其它人想通过加入三乙胺盐酸盐作为表面活性剂来制备胰岛素的烷基化合物。Teng在美国糖尿病协会会议，1983，5San    Antonio，Texas做了有关口服的介绍。

试图通过减弱溶解酶的活性来阻止胰岛素在肠道中降解的方法，已经取得了一些成绩。Danforth等人在内分泌学65，118（1959）中揭示了口服胰岛素组合物中可含有异丙基氟磷酸酯（是胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制剂）和吲哚-3-醋酸酯（酶的抑制剂，在肝中发现的胰岛素酶）。当小白鼠口服时，该组合物可以减少低血糖效应。其他人发现了胰岛素与胰的去活剂一起口服时，可以减弱低血糖效应（相当于3%胰岛素生物效用）（Laskowski，et    al.，Science，127，1115（1958））。另外的人发现了口服胰岛素后由于胃中胃蛋白酶的去活作用和通过肠膜难以吸收而降低了生物效用（Crane，et    al.，Diabetes，17，625（1968））。

人们也试图通过服用带有表面活性剂的胰岛素增加生物效用。表面活性剂的应用，如聚乙二醇-1000单乙酰醚和带有盐酸三乙胺的十二烷基硫酸钠，证明了在一定程度上可以增加胰岛素的生物效用。虽然口服35个单位的胰岛素对血糖量有影响，但其结果只相当于4个单位的静脉给药（Touitou，et    al.J.Pharm.Pharmacol.，32，108（1980））。

也有人试图采用与乳剂系结合的方法来口服胰岛素。一组试验（Sichiri，et    al，Acta，Diabet，Lat，15，175（1978））说明了他们观察到小白鼠服用加有胰岛素的水/油/水乳剂系时，出现了低血糖效应。250U/Kg体重的剂量产生的效应相当于肌内给药的10IU/Kg剂量。也可以通过利用脂溶性维生素的其它乳剂系来投用胰岛素，不过在动物身上，如狗，低血糖效应显示很少和无剂量反应。

增加口服胰岛素生物效用的一些非常有希望的研究在于研究胰岛素的微囊包封材料。胰岛素微囊封装在丙烯酸酯中（Sichiri，et    al.Acta.Diabet.Lat.，15，175（1978）），以及高分子聚合物的这一用途已经公开了。其他人把胰岛素微囊封装在各种脂类化合物的脂质体中。含有脂质体的胰岛素是与磷脂酰胆碱、胆甾醇和硬脂酰胺;二肉豆寇酰磷脂酰胆碱;二肉豆寇酰胆碱和胆甾醇;以及与卵磷脂和胆甾醇和其他物质这样的组合物成型的。

Dobre，etal，Rev.Roumanian    Med.-Encdoc-rinol    22，253（1984）中，公开了为了口服给药将胰岛素夹入脂质体中的方法。公开的脂质体的各种结构物质有蛋黄、磷脂酰胆碱、胆甾醇、硬脂酰胺和二棕榈酰磷酰胆碱。然而脂质体包衣不能完全保护封闭的胰岛素不被胃中盐酸和肠道中的酶（如胰蛋白酶和糜蛋白酶）降解。

Yoshlda等在EPA    140，085中公开了含有脂质泡胰岛素的制备，该脂质泡是由呈磷脂水溶液或悬浮液形式的内部含水相构成的。

本发明提供了这样的组合物，这些组合物在口服时适于投用具有药理疗效用量的蛋白质化合物。人们意外地发现，在肠道内对降解敏感并且通过肠道在人体内吸收能力不足的药剂可用这样的方法即给其涂层以致使其在人体内被吸收有效的药量。

改进的组合物包括：（a）药剂;（b）脂肪包衣物质并且可包括（c）肠溶性包衣物质。该药剂是通过含有脂肪包衣物质的内包衣和含有肠溶包衣物质的外包衣而包衣。该组合物可包括脂解酶，即可与脂解酶一道投用。该组合物另外还可以含溶于水的包衣物质、粘合剂、表面活性剂、乳化剂、稳定剂、杀菌剂和酶抑制剂。

在本发明的另一个实施方案中，改进的组合物包括：（a）药剂、（b）脂蛋白物质、（c）脂质包衣，并可包括（d）可溶于水的包衣及（e）肠溶包衣物质。该药剂与脂蛋白结合，而得到的产品可用溶于水的包衣被覆，然后用脂质内包衣被覆，该内包衣可用外肠溶衣被覆。该组合物可以包括脂解酶，即可与脂解酶一道服用。该组合物另外可包括粘合剂、表面活性剂、乳化剂、稳定剂、杀菌剂和酶抑制剂等。

在本发明的一个实施方案中，胰岛素与含有乳化剂/增溶剂、表面活性剂、酶抑制剂、消泡剂和杀菌剂的组合物混合。然后该混合物用含有聚乙二醇脂肪酸脂的脂质包衣被覆。然后，进一步用肠溶衣被覆和放在硬凝胶囊或片剂中，放在胶囊和片剂中后再被覆包衣。每片或每个胶囊重量为250mg，并含有16个国际单位的猪（Porcine）晶体胰岛素。

在本发明的另一个实施方案中胰岛素和至少含下列之一的组合物混合：脂肪、氨基酸、粘合剂、酶抑制剂、消泡剂和可溶于水的物质。然后该混合物用含有三酸甘油酯、磷脂和胆甾醇的脂质包衣被覆，把得到的该产物放入胶囊中并用肠溶衣被覆。

在本发明的另一实施方案中，口服胰岛素的剂型含有大约2.00mm大小的粒剂。最好用碳酸氢钠被覆柠檬酸颗粒以产生一种颗粒，然后该颗粒用脂肪被覆。该得到的颗粒用口服胰岛素被覆，然后用肠溶液被覆。

在再另一实施方案中，将被覆一层脂质包衣然后被覆肠溶衣的胰岛素颗粒放进带有脂酶和胆汁盐的被覆肠衣颗粒的胶囊中。最好在该胶囊中也加入碳酸氢钠和柠檬酸。

制备该组合物的设备包括一个带腔室的容器。在腔室的底部安装有一个带孔的转盘、空气流动设备和切粒器，在腔室底部上面有一个喷嘴。为了制备本发明组合物，把颗粒置于腔室的底部并用切粒器进行切割，空气流动设备是为了使室内的颗粒悬浮。药剂是通过喷嘴喷入以便使药剂粘合在颗粒上。在粘结药剂后，通过喷嘴对颗粒进行喷涂脂质包衣，在被覆脂质包衣后，也可继续用肠溶衣被覆。

图1是喷射磨剖面图。

图2是图1喷射磨剖视图。

图3是Spir-A-flow剖面图。

图4是例1的组合物的色谱图。

图5是例1组合物的显微图象。

图6是例1组合物的显微图象。

图7是两头猪的静脉血糖含量对比图表，一头猪给例1的组合物，另一头猪给Actrapid。给例1组合物的猪的静脉血糖含量用“O”表示，给Actrapid的猪的静脉血糖含量用“X”表示。图表中的X轴以分钟表示，Y轴以血糖的毫摩尔数表示。

图8是由例1的口服胰岛素（Tong-Shin胰岛素）和按照试验1-D的试验的胰岛素（Novo胰岛素）的对比图表。

图9是由例1的口服胰岛素和按照试验1-E的通用注射胰岛素的对比图表。

图10是由例1的口服胰岛素和按照试验2-B的例2的口服胰岛素的对比图表。

图11是由例1的口服胰岛素和按照试验2-B的例2的口服胰岛素的对比图表。

图12表明例6对血糖含量的影响。

图13是由例6与可注射的胰岛素的对比图表。

图14是例6与可注射的胰岛素的对比图表。

图15是例6与可注射的胰岛素的对比图表。

图16是表明例6对血糖含量的影响。

图17是表明例6对血糖含量的影响。

图18是表明例6对血糖含量的影响。

图19是例6与可注射的胰岛素的对比图表。

图20是例6与可注射的胰岛素的对比图表。

图21是例6与可注射的胰岛素的对比图表。

图22是例7的口服胰岛素和通用的可注射的胰岛素的对比图表。

图23表示一种CF成粒器的剖视图。

图24是例12的粒状口服胰岛素的示意图。

图25表示例12的胰岛素给狗服用在狗血中的胰岛素含量。

图26表明例12的粒状口服胰岛素对狗的血糖含量的影响。

图27表明例12的粒状口服胰岛素对狗的血糖含量的影响。

图28表明例11的口服胰岛素配方与例12的口服胰岛素配方对血糖的影响。

图29表明例13的口服胰岛素配方对血糖的影响。

本发明提供了一种适用口服选择的生物活性蛋白质化合物质的组合物。如上文讨论的，许多药品、药物和疗法都不能口服给药，这是因为它们有降解作用或者不能很好地在胃和/或胃肠系统中被吸收。这些药品的例子包括：尤其是：治疗糖尿病的胰岛素，治疗栓塞的尿激酶，治疗贫血症的基因Ⅷ，治疗晚期肿瘤的Leuprolid，改善神经系统的神经节甙酯，治疗癌症的长春新碱，治疗癌症的belomyein，治疗癌症的阿霉素，治疗心律不齐的利多卡因，和治疗传染病的头孢菌素。其它的药品，例如庆大霉素、红霉素、溴苄铵托西酸盐、西替地尔、环扁桃酯以及氯霉素等，当做口服药时，人体吸收很少。

对于大部分病人和一般的治疗方法来说，这些药的口服给药会更方便。本发明提供一种组合物，其能够使以前必须非肠道给药的蛋白质物质以药理学有效的剂量口服给药。

为此目的，在本发明的一个实施方案中，所说的组合物包括基本上是由固体乳化剂和表面活性剂组成的颗粒，具有选择的生物活性蛋白质物质用粘合剂粘结在颗粒表面上。然后，脂质包衣包在颗粒和蛋白质物质的表面上。颗粒平均直径大约1微米～1/2毫米，最好颗粒平均直径大约1～100微米。最好包在颗粒和蛋白质表面上的脂质包衣的厚度大约0.05～1.0微米。脂质包衣上也可再涂一层肠溶衣。

在本发明的另一个实施方案中，蛋白质物质粘结到脂蛋白颗粒上。颗粒平均直径1微米～1/2毫米，但优选的颗粒平均直径为1～100微米。该颗粒然后用一种水溶性物质涂敷，得到的产物包一层脂质包衣，最好脂质包衣的厚度约为0.1～0.3微米，所得的产物也可放在凝胶囊中，然后可包一层厚约0.1～0.3微米的肠溶衣。

在另一个实施方案中，蛋白质物质包在颗粒表面上。颗粒是涂敷一层碳酸氢钠而成型的，如果需要，少量的淀粉置于柠檬酸颗粒上，优选的柠檬酸颗粒大小为100～150克。一种含有蛋白质物质的配方被涂敷在颗粒上，然后所得的产物包肠溶衣，得到的颗粒最好大小是小于2.0mm。从生理上看，小于2.0mm的颗粒能迅速地落进十二指肠。与大胶囊相比，装在小硬胶囊中的颗粒在肠内的吸收能力也增加。当使用碳酸氢钠和柠檬酸时，无论是粒状的制品还是粉状的制品，都能促使在十二指肠中胶囊或颗粒迅速破裂而释放出蛋白质。当然，可使用其它化合物促使在十二指肠中的这种作用，例如，Sodium    Cityrate和其它的碳酸氢盐，如碳酸氢钾。

肠溶衣能保证这种组合物进入肠道系统而不会在胃中降解。在肠道系统内包衣溶解，脂质包衣保证这种组合物进入使用者的淋巴系统。为此目的，脂质包衣使组合物对Villae具有一种亲和力（在肠膜中淋巴系统的末端畅通）。如果药剂与脂蛋白质颗粒粘结，这些颗粒将会提高药剂进入人体组织的吸收能力。人们发现脂蛋白很容易穿过细胞膜，从而为把药剂带进使用者组织中提供了媒介。

人们相信，当药剂是胰岛素时，这时脂解酶也应被投用。脂解酶能够和上述的组合物结合使用，也能做成单独的药片或胶囊。脂解酶能够提高脂质包衣吸进Villae的吸收性能。

现在陈述用于本发明组合物的优选的配方：

蛋白质物质

生物活性蛋白质物质，即在本发明中使用的药剂可包括（不限于此），在胃肠系统中极易降解，或很难由胃肠系统吸收进人体中的这些药剂。这些药剂包括胰岛素（无论是由动物得到的或人造的），及尤其是包括尿激酶、基因Ⅷ、leuprolid、神经节甙酯、长春新碱、belomyein、利多卡因、头孢菌素、庆大霉素、溴苄铵托西酸盐、西替地尔、环扁桃酯、红霉素、氯霉素、阿霉素、链激酶这些其它药剂。

脂质包衣物质

本发明采用的脂质包衣物质包括类似Chyclomicron物质的物物质，它能很好地吸进小肠的Villae，这些物质包括（但不限于此）聚乙二醇脂肪酸酯类、甘油酸酯类、磷脂酰磷酸酯类、蛋黄卵磷脂、油酸、硬脂酸、软脂酸、胆甾醇、单甘油酯、双甘油酯及三甘油酯、胆甾醇酯、含有5～20%的磷脂酸的蛋黄卵磷脂、亚油酸、亚麻酸、十二烷酸、磷脂酰磷酸酯、甘油、酱油、豆油、芝麻油和氨基丁三醇。这些脂质包衣物质被涂敷在药剂表面上之后，不仅能对药剂起密封作用，而且能够提高粒状药剂对Villae的“亲和力”和吸收能力，即在肠膜处淋巴管末端畅通以便于吸收药剂进入淋巴系统。

人们发现，有令人满意的作用的脂质包衣组合物如下：

80～90%的脂质可以呈甘油单酯、甘油双酯、甘油三酯的形式;6～9%的磷脂;2%胆固醇酯;1%的游离胆固醇和小于1%的游离脂肪酸（NEFA）。大约2%的低分子蛋白质/氨基酸也可以加入。

胆甾醇酯是：

30%作为胆固醇亚油酸酯;

20%作为胆固醇油酸酯;

22%作为胆固醇软脂酸酯。

肠溶包衣物质

本发明采用的肠溶包衣物质包括这样的物质，其不仅能够在胃中抗降解而且能在肠道系统中容易分解以露出包的物质。这些肠溶包衣物质包括（但不限于此）下列各单独成分或其组合物：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚乙二醇-6000和片胶，它们能在溶剂中溶解，所说的溶剂包括二氯甲烷、乙醇和水、纤维素邻苯二甲酸酯或聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯。

优选的涂敷胰岛素的肠溶衣物质含有4.5分重量羟甲基纤维素、0.5分片胶、0.5分聚乙二醇-6000。把这种物质溶解在47.3分二氯甲烷和37.8分乙醇中。然后该肠溶包衣物质用水稀释到最佳浓度，涂敷在本发明的组合物上。

脂蛋白物质

本发明使用的脂蛋白物质包括由脂质和蛋白质共同形成的低密度脂蛋白。优选的低密度脂蛋白制品应和人体中低密度脂蛋白相一致。

脂质组分包括（但不限于此）胆固醇、油酸、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、含有卵磷脂的十二烷基硫酸钠、磷脂、软脂酸、磷脂磷酸酯胆碱。

蛋白质组分包括（但不限于此）任意氨基酸或低分子量蛋白质，最优选的氨基酸包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸和天冬氨酸。最优选的蛋白质是清蛋白和球蛋白。

优选的脂质是由低分子量蛋白质或氨基酸以1∶1～3∶1分子重量比组合而成，在一个优选的实施方案中，脂质和蛋白质是以1∶1的比例组合。

人们发现，脂质组合物包括胆固醇酯（46%）、游离胆固醇（14%）、磷脂（25%）、脂肪（14%）和1%的NEFA（FFA），当同20～25%（重量）的氨基酸共同组合时，可以得到令人满意的效果。

水溶性包衣物质

本发明中使用的水溶性包衣物质是能够提供一种亲水包衣的这些化合物，其包括（但不限于此）羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚乙二醇-6000、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、结晶纤维素和片胶，能溶解在二氯甲烷、乙醇、水、纤维素邻苯二甲酸酯和聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯中。如果蛋白质原料粘结到脂蛋白上，并用水溶性包衣涂敷，最好包衣厚度大约0.05～5微米。

粘结剂物质

本发明使用的粘结剂物质是这些化合物，这些化合物是将肽粘结到脂质或脂蛋白上。它们包括（但不限于此）微晶体纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基羟丙基纤维素凝胶体、聚乙烯吡咯酮、聚乙二醇脂肪酸酯基团。

脂解酶

本发明使用的脂解酶是能够促进脂质进入Villae中的吸收能力的，这些酶尤其是包括脂肪酶（包括胰脂肪酶）、淀粉酶、蛋白酶和胆汁盐。肠道吸收脂肪酸和脂质的能力是通过在胆汁盐中含的胰脂肪酶促进和提高的。因此，当蛋白质物质被涂上一层由胆汁盐中含的脂蛋白胰脂肪酶时，将能提高蛋白质物质的吸收能力。如果需要，脂解酶可以和组合物结合使用或单独做为片剂或胶囊给药。人们发现，当药剂是胰岛素时，一种脂解酶混合物有令人满意的效果，所说的脂解酶混合物包括胰脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和胆汁盐。

填充剂

如果蛋白质物质粘结到脂蛋白上，可以使用填充剂。填充剂可以用作也可以不用作药物粘结剂。填充剂可以包括（但不限于此）阿拉伯树胶、结晶纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。

表面活性剂物质

本发明使用的表面活性剂是这些化合物，它能促使更好地吸收到Villae中。它包括（但不限于此）阳离子、阴离子或非离子表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠、硬脂酸铵、聚甘油脂肪酸酯、聚乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯醚、脂肪酸单甘油酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酰胺和聚乙二醇脂肪酸酯。

乳化剂

本发明使用的乳化剂包括能在体内产生乳化的这些化合物，其包括（但不限于此）下列物质或其组合物，如胆固醇、硬脂酸、硬脂酸钠、软脂酸、软脂酸钠、油酸、油酸钠、单硬脂酸甘油酯、多氧40硬脂酸酯、聚乙烯50硬脂酸酯、多乙氧基醚20、多乙氧基醚40、多乙氧基醚60、多乙氧基醚80、丙二醇二乙酸酯和丙二醇单硬脂酸酯。乳化剂也可包括类似于人体血浆中发现的“低密度脂蛋白”的这些化学物质和组分，例如盐酸精氨酸、阿拉伯树胶、胆固醇、胆固醇酯、磷脂和脂肪酸。

稳定剂和酶抑制剂

在本发明中使用的稳定剂和酶抑制剂是这些化合物，它能钝化或阻止哺乳类动物酶的降解作用，所说的哺乳类动物酶有肽酶、蛋白酶、磷酸化酶、谷胱甘酞-胰岛素-转氢酶和胰岛素降解酶即胰岛素酶。稳定剂化合物包括（但不限于此）硬脂酰胺、硬脂酰醇、柠檬酸、乳酸、三乙基胺盐酸焦磷酸酯、三乙醇胺、卵类粘蛋白、乙二胺、四乙酸酯、碘乙酰胺、苯肼、羟胺和8-hydroquinoline。

杀菌剂

在本发明中使用的杀菌剂是这些化合物，它们能防止药物和与药物有关的粘合剂、涂层和添加剂的微生物污染和降解。在选择杀菌剂时，必须解决药物中微生物的活性与药品其它组分的配伍性的矛盾以及解决与它对要治疗的机体的固有毒性的矛盾。满足这些要求的杀菌化合物一般包括（但不限于此）羟苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、酚、脱氢乙酸、苯乙基醇、苯甲酸钠、山梨酸、麝香草酚、乙基汞硫代水杨酸钠、脱氢乙酸钠、苄基醇、对羟基苯甲酸丁酯、甲酚、对氯间甲酚、氯代丁醇、乙酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞和苄基酮鎓氯化物。

通过下述的实施例将对本发明进一步阐述。

实施例1：

在这个例子中，按照本发明制备一种适用于口服投用胰岛素的组合物。平均直径大约50μm的颗粒是由胆固醇、十二烷基硫酸钠以及作为杀菌防腐剂的羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯（pH6）混合物而制成的。使用Treund    International    Ltd.Tokgo，Japan的喷射磨而制成颗粒。

图1和2是喷射磨10的简图，要制备的颗粒通过振动进料器送入进料室11，然后进料室的颗粒由通过空气喷嘴13喷出的空气流带进研磨室12，通过喷嘴14喷一股与上述携带悬浮颗粒的空气流动方向相反的空气流，空气流动的方向在图中用箭头表示。结果在循环研磨室12中产生了颗粒的研磨作用，控制穿过喷嘴的空气流以调节在研磨室12中的研磨作用。把颗粒研磨达到符合要求的直径，然后送到研磨室中心的抽气通道15。分离器6控制研磨好的颗粒以便装入收集瓶7，与此同时空气由空气排出口8排出。

使用一种含有8%（重量）羟丙基纤维素、0.005M的十二烷基硫酸钠、0.005M盐酸三乙胺和0.005M柠檬酸的溶液将晶体单组分的猪胰岛素（由Novo，Bagarvaerd，Denmark得到）粘结到颗粒上，在表面涂上一层胰岛素的颗粒再涂上一层溶液，所说的溶液含有6%（重量）聚乙二醇单硬脂酸酯（由日本KAO，TOKYO获得的EMA    NON-3199）形成厚度大约0.1微米的脂质包衣，肠溶衣溶液是将4.5%（重量）的羟甲基纤维素邻苯二甲酸酯（Hpc-55）和0.5%（重量）聚乙二醇-6000（Shin-Wha    Yakuhin，Japan）溶于含有47.3分（体积）的二氯甲烷和37.8分（体积）乙醇的溶液中而制备的。然后，该溶液用水稀释到最佳浓度，脂质包覆的颗粒再涂一层厚度大约0.1微米的肠溶包衣。然后把250毫克有肠溶包衣的颗粒人工装入硬质胶囊中。

利用一种改型的“Freund”Spir-A-Flow，SFC-Mini-S型样机（由Freund    International，Tokyo，Japan可买到）来制备该组合物，该机的参数为220伏、60赫芝、3马力。标准的Spir-A-Flow样机改型如下，因为人们发现在旋转器中的筛孔太大，因此增加了两种附加的筛孔环，筛孔环是定向的以致于颗粒不会通过其掉下来。

把Spir-A-Flow改型，使得泵送的空气干燥，并且使所有的油粒子去除。空气干燥到20%绝对湿度。气流压力也增加到920升/分，并且调整气流使得它通过底部向上充气。

此外，利用四个进气口而不是利用底部的一个空气进气口，这些进气口定位在底部的0°、90°、180°、270°。

袋袋滤器和脉冲过滤器也减到其长度的二分之一。

此外，调整罐底部三个喷嘴而不是位于罐底部的一个喷嘴。第四个涂层喷嘴也位于罐上部。用底部喷嘴粘合，上部喷嘴涂敷。

图3说明Spir-A-Flow装置20。简单地说，Spir-A-Flow装置20的功能如下：颗粒放在旋转园盘22上，旋转园盘22包括筛孔31。切粒器29和搅拌器21与旋转园盘22一起操作，形成规定体积的颗粒。然后打开空气流并且颗粒悬浮在罐26中。产生了两种类型的空气流，狭缝气和流体气。狭缝气流通过小孔33进入，而流体气通过小孔32进入。然后可从底部的喷嘴27喷涂一种粘合液可以涂敷悬浮的颗粒。虽然在改型的Spir-A-Flow    20中仅说明一个底部的喷嘴27，可是利用了三个底部的喷嘴27。当颗粒一被涂敷就落回到园盘22上。一旦所有的颗粒涂敷上粘合剂，空气流就增加，涂敷的颗粒可再被涂敷等等。如同在下文中讨论的，从上部的喷嘴28喷涂的溶液也能涂敷颗粒。

由于粉状颗粒在粘合和涂敷中往复运动，颗粒被很好地混合、润湿、搅拌，有效的翻滚并且非常迅速地变成高质量的颗粒。热空气流通过园盘多孔区有效地干燥颗粒。如果粉末状物质生成，并且上升到顶部，通过袋过滤器24收集这种粉末。需要时用空气清洗喷嘴25把过滤器收集的粉末状物质送回底部园盘22。

旋转园盘22和切粒器29一起，形成球形园滑表面的颗粒，这种颗粒机械强度高、堆积密度高和颗粒粒径分布窄。为了制造这种实施例的组合物，通过入口，把固体增溶乳剂、表面活性剂、杀菌防腐剂放入罐里。当粉状原料放进罐里时，通过旋转园盘多孔部分和转盘与容器（罐）内壁间的环形空隙吹入轻度的空气流，该空气流防止原料通过空隙和多孔部分下落。

加进原料后，启动旋转园盘22、搅拌器21和切粒器29。为了制造实施例1的组合物，回转器以300转/分（rpm）旋转（因此多孔园盘旋转），切粒器以2000转/分旋转，搅拌器以500转/分旋转。32°到35℃温度的空气流通过回转器的开口（“流体空气”）以每分钟8～10升流速，通过回转器的孔隙，以每分钟7～8升流速通过回转器和壁之间的狭缝（“狭缝气”）。混合的颗粒干燥30分钟。

晶体胰岛素（Novo单组分猪结晶胰岛素，Batch    NO.833115，Lot    NO.69195-01）完全溶解在含有羟丙基纤维素、十二烷基硫酸钠、柠檬酸和盐酸三乙胺，PH＝2.0的溶液里。

当通过“狭缝气”和“流体气”，在涂敷和粘合装置的器壁内把颗粒向上吹时，通过双喷嘴以3.0公斤/平方米的喷涂空气压力及10升/分的气流速度把粘合溶液喷成细雾。

凝固的胰岛素固体乳化的颗粒而后用脂质涂料以10升/分的喷涂气流速度及以3.0公斤/M_Z喷涂空气压力涂敷，脂质涂料包括一种聚乙二醇脂肪酸酯（KAO SEKKEN，日本，EMANON 3199，Lot NO.12744y）溶液。

然后把上述涂敷的凝固的固体乳化的颗粒放入硬质凝胶囊中，而后把这些胶囊涂敷。

每350毫克胶囊产物（350mg胶囊）中含有：

胆固醇（Fuluka，A.G.;瑞士，Lot    NO    24657-784）

-6.76×10^-4M，

十二烷基硫酸钠（yakuri，Kagaku，日本，S316-06）

-1.377×10^-4M，

盐酸三乙胺（Wako    Sei-yaku日本）

-4.089×10^-6M，

柠檬酸（yakuri Kagaku，日本，K_A9105）

-5.965×10^-6M，

L-羟丙基纤维素（Shin-Wayakuhin，日本，191184）

-1.234×10^-2GM，

聚乙二醇脂肪酸酯（KAO    Sekken，日本;

EMANON3199，12744y）-1.543×10^-2GM，

胰岛素（NOVO）    8单位。

柠檬酸用作胰岛素钝化酶的抑制剂及胰岛素稳定剂和pH调节剂。盐酸三乙胺用作胰岛素稳定剂和消泡剂。

试验1-A

在这个试验中，把实施例1的口服胰岛素组合物与Actripid静脉注射胰岛素溶液（NOVO）试样进行化学分析比较。用超声波发声器发声5分钟，把根据实施例1制备的含8个国际单位（I.U.）的NOVO单组分猪结晶胰岛素的口服胰岛素组合物胶囊溶解在水中。用逆相色谱法分析一半（1/2）溶液一含4个国际单位口服胰岛素组合物。用逆相色谱法也分析4个国际单位NOVO    actrapid胰岛素。分析结果表明两种试样含有等量的化学当量胰岛素（见图4）。

试验1-B

在这个试验中，用扫描电子显微镜拍摄实施例1口服胰岛素组合物的显微照片。用含47.3份二氯甲烷（按体积计）和水中含37.8份乙醇（按体积计）的溶剂除去颗粒的肠和脂质涂层。颗粒的显微照片在500X放大率时显示较小的胰岛素颗粒（平均直径约5～10微米）和羟丙基纤维素粘合剂材料连接到较大的胆固醇和十二烷基硫酸钠材料颗粒上（平均直径约50微米）（见图5）。在放大率3000X时可以看到棒状胰岛素晶体包含在羟丙基纤维素颗粒内（见图6）。

试验1-C

在这个试验中，实施例1的口服胰岛素组合物与在生物测定中的Actripid静脉注射胰岛素溶液（NOVO）相比较。两头yorkshire猪忌食过夜，一头猪用8国际单位Actripid胰岛素静脉注射，另一头猪在15分钟内给以8国际单位实施例1的溶解在50毫升水中的口服胰岛素静脉注射液。从这两头猪中取血测定血糖含量。虽然实施例1的组合物的低血糖作用时期稍微比Actripid胰岛素长，但两头猪静脉血糖量约以相等的程度降低（见图7）。

试验1-D

在这个试验中，实施例1的口服胰岛素组合物与NOVO单组分猪结晶胰岛素和在静脉内家兔生物测定中通用的可注射胰岛素-40（Tong-Shin药物公司）相比较。每只重1.8公斤的三只白兔忌食过夜，在10分钟内用4国际单位静脉注射液治疗，静脉注射液或是NOVO胰岛素、Tong-Shin胰岛素-40或是含实施例1的口服胰岛素组合物乳液。在胰岛素液注射前30分钟，并且在注射完成后的0、15、30、45、60、75、90和105分钟从每只兔子耳血管收集静脉血样。

三种胰岛素都在注射开始的30分钟内出现低血糖发作，其显示约同样的低血糖效果。测定的NOVO胰岛素最大低血糖作用时间是在注射结束后30分钟内，而对于Tong-Shin胰岛素-40是在60分钟内。实施例1的口服胰岛素组合物乳液最大低血糖活性在NOVO和Tong-Shin胰岛素之间（见图8）。

试验1-E

在这个试验中，实施例1的口服胰岛素组合物给两个健康男子口服。服用口服胰岛素引起的低血糖效果和皮下注射等量的可注射胰岛素（Tong-Shin）引起的低血糖效果相差不大。

参与试验的两个健康男子年龄是37和38，体重52和54公斤。每个试验对象在试验期间接受16国际单位剂量实施例1的口服胰岛素组合物，与服用实施例1的口服胰岛素组合物的同时，每个试验对象接受两粒脂解酶胶囊。每个胶囊的组成（每350毫克胶囊）如下：

胰脂酶    1000单位

淀粉酶    7500单位

蛋白酶    7500单位

胆汁盐    40毫克

用玉米淀粉作“填料”。

酶胶囊制作如下：胰脂酶用0.1～0.3微米厚的羟丙基纤维素涂层涂敷，并用实施例1的肠溶衣涂敷。然后加淀粉酶和蛋白酶。生成的组合物然后用0.1微米厚的羟丙基纤维素涂敷。用0.1微米厚羟丙基纤维素涂敷的胆汁盐而后加到带有胰脂酶生成物的硬质凝胶囊上。

在试验的当天早晨7∶30，每个参与试验的男子吃标准的早饭，早饭包括两个煎蛋、两片腊肉、两片炸黑面包、一汤匙黄油和一杯黑咖啡。两个人在早晨10∶00口服实施例1的胰岛素组合物。口服胰岛素以胶囊进药，胶囊包含16国际单位NOVO单组分猪结晶胰岛素。在12∶00两个试验对象吃标准的午饭，午饭包括180克牛排、一份带有油和醋调料的新鲜油拌沙拉、一片黑面包和一杯黑咖啡。

在10∶00、13∶00和16∶00从两个试验对象收集血样分析血糖含量。血样表明口服胰岛素组合物三个小时后对两个试验对象产生强烈的低血糖效果，但是6小时后血糖量已恢复到他们治疗前的水平。

服用胰岛素后三小时，两个试验对象的血糖量都明显下降。在约10∶45第一个试验对象开始反映视力模糊、不能集中且恶心。在11∶20，同一试验对象胳臂和腿开始痉挛和发抖并且出冷汗。第二个试验对象也反映大体上类似的症状但是程度轻。在11∶30给两个试验对象250毫升纯桔汁，并且第一个试验对象另外饮250毫升软饮料。

一周后，两个试验对象同时吃标准的早饭（即试验第一天给的早饭）。在10∶00给两个试验对象皮下注射16国际单位Tong-Shin通用的可注射胰岛素-40。在大约10∶30两个试验对象开始经受延续约两小时的低血糖反应。在11∶20供给两个试验对象纯桔汁，12∶00供给两个试验对象标准的午饭。在10∶00、13∶00和16∶00测定的血糖量表明给药后约三小时注射的胰岛岛素产生最高低血糖效应，同时表明类似实施例1的口服胰岛素组合物给药后约6小时低血糖效应消失（见图9）。

试验1-F

在这个试验中，把实施例1的口服胰岛素组合物给5个患与胰岛素有关的糖尿病（IDDM）患者和5个患与胰岛素无关的糖尿病（NIDDM）患者给药。试验之前，IDDM患者在医院最少照看三天，通过特定的医院饮食和一组通用的胰岛素Tong-Shin的皮下注射调节他们的血糖量。NIDDM病人的血糖量通过医院的饮食和通过口服降低血糖剂如氯磺丙脲（Pfizer药剂分厂制造的Diabinase，New    york，N.y）的口服药剂进行控制。

试验的第一天早晨，每个病人吃规定的早饭，但不给病人口服低血糖剂和胰岛素皮下注射剂。而让病人接受实施例1的口服胰岛素组合物的适当剂量和试验1-E中陈述的两粒脂解酶组合物的胶囊。在口服胰岛素组合物前立即从这些人身上取血样，并且在服药后两小时和四小时取血样。测定这些血样的血糖量。口服胰岛素组合物给药后两小时给每个病人供给标准的医院午饭。

表1中列出了试验结果。

表1

平均每日需求量

试验    疾病    性别    年龄    通用的胰岛素    NPH    Diabinase

对象    类型    （I.U.）    （I.U.）    （Mg.）

A    IDDM    M    49    40    80    0

B    IDDM    M    59    60    145    0

C    IDDM    M    54    30    30    0

D    IDDM    M    48    90    110    0

E    IDDM    F    44    40    70    0

F    NIDDM    F    41    0    0    250

G    NIDDM    F    57    0    0    250

H    NIDDM    M    52    0    0    250

I    NIDDM    M    63    0    0    250

J    NIDDM    F    65    0    0    375

表1（续）

平均每日需求量

试验    实施例1组合物    血糖值（Mg%）

对象    剂量（I.U.）    0小时    2小时    4小时

A    24    252    103    140

B    32    227    153    220

C    32    201    137    177

D    32    199    140    197

E    32    203    163    212

F    32    290    170    117

G    32    276    201    109

H    24    189    188    132

I    24    156    121    130

J    32    241    171    120

如表1所示，在服用口服胰岛素组合物和两小时之后的期间所有病人的血糖量都显著地下降。但是IDDM病人的血糖量在两小时和四小时期间又明显地升高，并在五个病人中的三个病人血糖量大约等于或超过治疗前的量。另一方面，在患NIDDM的五个病人中的四个人的血糖量在2小时和4小时之间继续减少。第五个病人血糖量在2小时和4小时之间升高，但没有达到治疗前的水平。

实施例2

在这个实施例中，根据实施例1的一般方法制备延长作用的口服胰岛素组合物。制备含胆固醇、十二烷基硫酸钠和羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯的颗粒，并且用含NOVO单组分猪胰岛素与羟丙基纤维素（600ml水中含40gm羟丙基纤维素;6.07%溶液）、十二烷基硫酸钠、盐酸三乙胺和柠檬酸粘合在一起的颗粒涂敷。这些表面上粘合有胰岛素的颗粒然后用聚乙二醇单硬脂酸酯涂敷，与实施例1的组合物约0.1微米厚的包衣相比，形成一层围绕颗粒约0.3微米厚的脂质包衣。然后把这些颗粒用含有实施例1组合物所用的同样物质的肠溶衣涂敷，涂层厚度约0.1微米。

试验2-A

在这个试验中，把实施例2的延长作用的口服胰岛素组合物进药给三个患IDDM和三个患NIDDM的试验对象（由试验1-F的对象A、D、E、G、I和J）。在试验的早晨，每个试验对象吃规定的早饭而不服用口服低血糖剂和不使用正常治疗部分的皮下胰岛素注射液，而用实施例2的口服剂量的组合物和在试验1-E中陈述的脂解酶组合物的两粒胶囊治疗这些试验对象。在口服胰岛素组合物服药时取血样，并在以后的不同时间取血样。服胰岛素组合物后四小时供给试验对象标准的医院午饭。

各种血样血糖量的分析表明实施例2的组合物比实施例1的组合物产生更延长的低血糖效应。带有较厚的脂质包衣和肠溶衣的组合物在4到6小时后产生最大的低血糖效应，并且这种效应延续到7小时，这是试验的整个期间（见表2）。

表2

平均日需要量

疾病    实施例组合物

试验对象    类型    性别    年龄    剂量（I.U.）

A    IDDM    M    49    32

D    IDDM    M    48    40

E    IDDM    F    44    48

G    NIDDM    F    57    32

I    NIDDM    M    63    24

J    NIDDM    F    65    32

表2（续）

平均日需要量

血糖量（Mg%）

试验对象    0小时    2小时    3小时    4小时    6小时    7小时

A    274    240    …    145    126    132

D    277    230    …    135    …    168

E    285    184    …    126    118    126

G    301    306    …    109    112    200

I    270    130    …    114    129    …

J    252    …    135    122    …    140

试验2-B

在这个试验中，实施例1的口服胰岛素组合物和实施例2的延长作用的口服胰岛素组合物进行对照试验。三个IDDM病人和三个NIDDM病人既服用实施例1的组合物也服用实施例2的组合物，隔日与试验1-E陈述的两粒脂解酶胶囊一起服用。每次口服胶囊量定为两粒胶囊。每个试验对象忌食过夜、不供给早饭并且也不给他们抗糖尿病的常规治疗剂。在口服组合物服药时和以后的不同时刻检验每个试验对象的血糖量。

对IDDM试验对象服用实施例1和实施例2的组合物的结果表明实施例1的组合物在服药后两小时内产生很强低血糖效应，但也表明四小时后血糖量回到大约其基线标准。然而，实施例2的组合物说明较平缓的效应，直到4至6小时才产生它们的最大低血糖效应。但是即使在7小时后它们仍能产生明显的低血糖效应。

对NIDDM试验对象服药结果表明两种组合物之间的差别是不太明显的。尽管实施例2的组合物比实施例1的组合物可能有更长的效应，但是约4小时后两种组合物都出现最大低血糖效应。两种组合物产生“正常血糖（normoglycemic）”条件在NIDDM试验对象比在IDDM试验对象持续的时期长。

有人提出实施例1的组合物的低血糖效应在IDDM病人时期较短可能是由于在实施例1的组合物中的胰岛素比实施例2的组合物中的胰岛素释放的速率快，但是也有人提出：由于在IDDM病人中常常发现存在抗胰岛素抗体，所以在IDDM病人中胰岛素以较快速率失去活性（见图10和11）。

实施例3

在这个实施例中，根据实施例1的主要步骤生产另一种延长效用的口服胰岛素组合物。从胆固醇、十二烷基硫酸钠和羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯类的混合物制备平均直径约50微米的颗粒。然后把NOVO结晶单组分胰岛素用粘合剂粘合到颗粒上，该粘合剂含有羟丙基纤维素、十二烷基硫酸钠、盐酸三乙胺和柠檬酸。然后把表面上粘合有胰岛素的颗粒用聚乙二醇单硬脂酸酯涂敷两次，每一涂层0.15微米厚。而后把有双层脂质涂层的颗粒根据实施例1的组合物用肠溶衣涂敷0.1微米厚。

试验3-A

在这个试验中，对三个患IDDM的试验对象服用实施例3的延长效用的胰岛素组合物。治疗是根据后面的临床试验1中通用的治疗方案进行，其中试验对象忌食过夜并且不给他们常规的低血糖治疗。试验对象吃标准的医院早饭并且服用实施例3的口服剂量的胰岛素组合物和两粒试验1-E中陈述的脂解酶组合物胶囊。试验对象服用实施例3口服胰岛素组合物后三小时吃标准的医院午饭。

在服用口服胰岛素后的不同时间，从试验对象收集静脉血样测定试验对象的血糖量。表3的数据表明延长的低血糖效应在4和6小时之间产生最大低血糖效应而且低血糖活性延续达9小时。

患NIDDM的一名试验对象也用实施例3的组合物和试验1-E陈述的脂解酶治疗。这名对象试验前忌食过夜，并且整个试验期间都忌食。在早晨10∶00治疗NIDDM对象，并且她的血糖量在全部5个半小时的试验期间持续下降。

表3

日平均需要量

试验对象    疾病类型    性别    年龄    实施例组合物剂量（I.U.）

C    IDDM    M    54    32

K    IDDM    F    20    32

L    IDDM    M    31    32

M    NIDDM    F    58    48

表3（续）

日平均需要量

血糖量（Mg%）

试验对象    0小时    2小时    3小时    6小时    8小时    7小时

C    190    -    208    144    -    163

K    291    -    138    268    -    193

L    180    181    -    149    176    -

M    389    -    241    159    -    -

实施例4

在这个实施例中，制造类似于实施例1的口服胰岛素组合物的口服胰岛素。通过改变脂质涂层改变实施例1的组合物。改变脂质涂层以使另外把聚乙二醇单硬脂酸酯、磷脂酰磷酸酯（足以使最后浓度0.046×10^-2gm的量）、磷脂（足以使最后浓度0.046×10^-2gm的量）和胆固醇（足以使最后浓度2.628×10^-4mol的量）加到该脂质涂层物质上。这种脂质涂层涂敷在胰岛素和颗粒上，其厚度为0.3微米厚。然后把240mg口服胰岛素产物手工包裹到硬质凝胶胶囊中。用实施例1的肠溶衣涂敷凝胶胶囊。

实施例5

在这个实施例中，制造类似于实施例3口服胰岛素组合物的口服胰岛素。改进该口服胰岛素以致使盐酸胆固醇-精氨酸结合取代实施例3的胆固醇。盐酸胆固醇-精氨酸提供了一种组合物，这种组合物很象体内低密度脂蛋白组合物。而且脂质涂层物质也改变。用类似于实施例4的脂质涂层以0.15微米的厚度涂敷该组合物后，再涂第二脂质涂层。第二脂质涂层包括油酸（足以使最后浓度8.776×10^-6mol的量）和氨基丁三醇（足以使最后浓度8.764×10^-6mol的量），作为液体涂膜的“硬化剂”和“增塑剂”。

简要地说，这个实施例的口服胰岛素包括作为基础的“类似低密度类脂蛋白”固体乳化剂。NOVO单组分结晶猪胰岛素粘合到乳化剂上，产物用0.1微米厚的羟丙基甲基纤维素水溶涂层涂敷，而后用脂质涂层物质涂敷两次，最后膜厚为0.3微米（每层脂质涂层0.15微米），加“稳定剂氨基丁三醇”，而后把产物手工包裹入硬质凝胶胶囊（以使每个胶囊含240mg该组合物）。该胶囊而后用实施例1的肠溶包衣物质涂敷。该水溶性的涂层允许盐酸胰岛素-胆固醇精氨酸用脂质涂层涂敷。

试验5-A

在一组IDDM和NIDDM病人中研究胰岛素的生物效用和实施例4和实施例5口服胰岛素制剂相应的低血糖效应。在两个正常的健康男子身上也研究了实施例4口服胰岛素。在5-A陈述的所有试验中，试验对象都接受试验1-E的每一剂量口服胰岛素和两个胶囊脂解酶。至少在研究病人前12或24小时，不给病人服用常用抗糖尿病治疗剂。忌食过夜并且整个试验期间忌食后口服实施例4或实施例5的口服胰岛素制剂。

把静脉取样导管放进静脉中，通常放在肘前静脉血管。服用药剂后在0、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0和/或5.0小时取血样。用Gilfordx400测量血糖，用免疫酶的邻苯二胺（OPD）方法和WAKO（日本）的胰岛素-B试验仪器分析血胰岛素。所有的测量都做两次。

如上所述，年龄38和31岁的两个健康男子参与试验，一名男子在两周内两次接受实施例4的口服胰岛素，每周一次，按每公斤0.20到0.27国际单位服用口服胰岛素。从服药时开始，在3小时时试验对象的血糖量从基线平均值111.0mg/dl减少到平均值80.5mg/dl。在两种情况药物吸收作用后，在1.5小时时出现血胰岛素达到最高每毫升20微单位。服用口服胰岛素后45分钟时，试验对象诉说视力模糊、出冷汗、烦躁和不能专心。

第二个试验者皮下注射接受10国际单位通用的可注射胰岛素-40（南朝鲜汉城Tong-Shin药品公司）。通用的胰岛素注射后72分钟观察典型的引起胰岛素休克症状，那时血糖是47mg/dl。试验者饮一杯鲜桔汁，一小时内，他的血糖量升高到约115mg/dl。

五名IDDM病人完成了试验5-A所有三个方面的研究，即：第一星期，用皮下注射，他们接受了10国际单位通用的可注射胰岛素-40（南朝鲜汉城Tong-Shin药品公司）;一周后，他们接受实施例4的一剂口服剂量（0.544国际单位/公斤平均剂量）;再一周后他们接受了实施例4的9个连续剂量（平均剂量是0.544国际单位/公斤），间隔时间为6小时。

把实施例4的口服胰岛素给所有八个IDDM病人（10名试验者（两名重复研究）和七名NIDDM病人（11名试验者）（四名病人重复研究）服用。

口服一剂实施例5的口服胰岛素制剂后七名IDDM病人完成了该项研究。

这项研究表明，实施例4口服胰岛素与通用的胰岛素相比，在IDDM和NIDDM两种病人中显然都有较缓慢的发作，但表现较长期的“低血糖”作用。实施例4组合物胰岛素的生物效用大约是通用胰岛素的三倍;然而通过调节胰岛素剂量，生物效用大约相同（见表4）。

这项研究也表明实施例5的胰岛素组合物产生低血糖发作并且整个试验期间低血糖，其大体上类似皮下注射通用的胰岛素后所观察到的症状。实施例5的口服吸收胰岛素的生物效用比实施例4大。

表4n药品公司）;一周后，他们接受实施例4和5的组合物与通用胰岛素标准条件注射后胰岛素的生物效用和低血糖效应：

Co＝血糖基值;Cmin＝血糖最小值;Tc-min＝观察血糖最小值的时间;T₁₀₀＝达到克的100mg/dl时间;血糖;dc/d_T＝血糖量减少速率。I_o＝血浆胰岛素基值;I_max＝胰岛素最大值;T_1-max＝达到最大血浆胰岛素值的时间;T_1-0＝达到血浆胰岛素基值的时间;d_I/d_T＝血浆胰岛素值的升高速率;AUC＝整个（试验）期间在血浆胰岛素值曲线下的面积。（^＊在血浆胰岛素值的双峰）

实施例6

如实施例1描述的，用胆固醇十二烷基硫酸钠颗粒粘合胰岛素（NOVO单组分）制造实施例5的组合物。粘合胰岛素固体乳化颗粒而后用含聚乙二醇脂肪酸酯的涂层溶液和有5%磷脂酸的蛋黄卵磷脂涂敷（足以使最后350毫克胶囊产物含0.309×10^-2gm的量）。使用在乙醇中溶解含5%磷脂酸的蛋黄卵磷脂。

试验6

在朝鲜一个朝鲜研究小组和美国研究小组在一组IDDM和NIDDM病人中进行了防治研究。这些病人口服一剂实施例6的组合物。在朝鲜分析朝鲜研究小组的血试验，在美国同样的试验室作美国研究小组的血试验。隔日某些病人也给10国际单位通用的可注射的胰岛素（Tong-Shin）。在研究期间并且在前一天夜里每个病人忌食。不给病人进行所有其它形式的糖尿病治疗。分析血样的血糖量。结果（见图12-21）说明实施例6的组合物在IDDM和NIDDM病人中都是一种口服有效的胰岛素。此外，这些结果说明两个实验室有类似的结果。

参考图12-21，实线是朝鲜研究小组进行的试验，虚线是美国研究小组进行的试验。X轴是时间（小时），Y轴是血糖mg/dl。图9说明46岁的女子服6粒实施例6的胶囊的结果。在图10中，试验对象（38岁的NIDDM男子）使用10单位用X表示的通用的注射胰岛素，然后服用实施例6的6粒胶囊（24单位）。

在图11中，47岁的IDDM男实验对象使用（〔〕）表示的10单位注射胰岛素，在第二天服用实施例6（X）的6粒胶囊（24单位）。在图11中，一名IDDM45岁的男试验对象使用10单位可注射胰岛素（〔〕），第二天服用实施例6（X）的8粒胶囊（32单位）。

在图12中，一名47岁的NIDDM女子服用实施例6的6粒胶囊（24单位）。在图13中，一名IDDM服用实施例6的14粒胶囊（56单位）。在图14中，一名IDDM服用实施例6的12粒胶囊（48单位）。在图15中，一名38岁男IDDM使用可注射胰岛素（〔〕）10单位，在第二天服用实施例6（X）的10粒胶囊（40单位）。在图16中，一名47岁男IDDM使用10单位通用的注射胰岛素（〔〕），第二天服用实施例6（X）的8粒胶囊（32单位）。在图17中，一名49岁男IDDM使用10单位通用的注射胰岛素（〔〕），第二天服用实施例6（X）的6粒胶囊（24单位）。

所有试验对象在服用每一剂量实施例6的组合物时，还服用试验1-E的两粒脂解酶胶囊。

实施例7

为了生产实施例7的组合物，在罐子里充分混合胆固醇（Fuluka，A.G.，瑞士）和盐酸L-精氨酸（Wako    Jun-Yaku，Japan;KWJ3778），混合比是2比1。阿拉伯树胶（Yakuri-Kagaku，日本;A₀₀₁＝03）用作填充剂。

脂质（胆固醇）和氨基酸（盐酸L-精氨酸）与含有胰岛素（NOVO单组分猪结晶胰岛素）的羟丙基纤维素粘合。柠檬酸用作胰岛素钝化酶的抑制剂和pH调节剂。盐酸三乙胺用作消泡剂及胰岛素稳定剂。

把胰岛素粘合到颗粒上的方法与实施例1相同，其喷雾气流速度为12L/min，气流压力2.5Kg/m²。

脂类和氨基酸颗粒用结晶胰岛素粘合，用水溶性含有羟丙基甲基纤维素的膜（Shiu-Etsu-Kagaku，日本）涂敷。用水溶性膜涂敷的上述胰岛素粘合的脂质氨基酸颗粒用一种脂质涂层涂敷，该脂质涂层含有聚乙二醇脂肪酸酯，含有5%的磷脂酸的蛋黄卵磷脂和油酸（Sigma    Chem.，St.Louis）。使用氨基丁三醇作硬化剂。

生成的组合物放进硬质凝胶胶囊和在实施例1的涂肠溶包衣的胶囊中。

生成物每240mg胶囊含有：

胆固醇 2.011×10^-4M

十二烷基硫酸钠 7.982×10^-5M

盐酸精氨酸 2.575×10^-4M

盐酸三乙胺 2.060×10^-6M

柠檬酸 6.563×10^-3M

油酸 1.901×10^-2M

氨基丁三醇（Fuluka瑞士） 1.902×10^-2M

阿拉伯胶（Yakuri Kagaku，日本） 2.147×10^-2GM

L-羟丙基纤维素 0.733×10^-2GM

羟丙基甲基纤维素 0.458×10^-2GM

蛋黄卵磷脂（5%磷脂酸） 0.299×10^-2GM

胰岛素（NOVO）    8单位

羟苯甲酸甲酯 5.780×10^-5M

对羟苯甲酸丙酯 1.245×10^-5M

硅胶 0.458×10^-2GM

实施例7的组合物产生的活性类似于在人体皮下注射的通用的胰岛素。

人们认为根据实施例7制得的组合物能利用下面的数值范围。每一得到的240mg胶囊可包括：

胆固醇 （1.609～2.413）×10^-4M

十二烷基硫酸钠 （5.587～9.978）×10^-5M

盐酸精氨酸 （1.931～3.219）×10^-4M

盐酸三乙胺 （1.545～2.575）×10^-6M

柠檬酸 （4.266～8.860）×10^-3M

油酸 （1.426～2.376）×10^-4M

氨基丁三醇 （1.331～2.568）×10^-2M

阿拉伯胶 （1.825～2.576）×10^-2GM

L-羟丙基纤维素 （0.115～0.298）×10^-2GM

羟丙基甲基纤维素 （0.275～0.641）×10^-2GM

蛋黄卵磷脂（5%磷脂酸） （0.115～0.298）×10^-2GM

加入NOVO单组分猪结晶胰岛素或其它胰岛素使得每一胶囊含4到40国际单位/容量胰岛素。^＊＊＊羟苯甲酸甲酯（3.179～7.803）×10^-5M，对羟苯甲酸丙酯（0.809～1.618）×10^-5M和硅胶（0.275～0.641）×10^-2GM可以加到最后粉末状的、涂敷的口服胰岛素颗粒上。

最后涂敷的口服胰岛素粉剂可以放进硬质凝胶胶囊、软质凝胶胶囊，或放进压制的硬片中。这些形式可以涂肠溶衣。

实施例8

按照实施例7的制剂制造组合物，然而生成的制剂变更如下：

每240mg上述胶囊可以包括：

胆甾醇 2.413×10^-4M

十二烷基硫酸钠 8.081×10^-5M

盐酸精氨酸 2.592×10^-4M

盐酸三乙胺 2.073×10^-6M

柠檬酸 3.024×10^-3M

三乙醇氨基乙烷 8.764×10^-6M

阿拉伯树胶 2.119×10^-2GM

L-羟基丙基纤维素 0.737×10^-2GM

羟基丙基甲基纤维素 0.461×10^-2GM

卵黄卵磷脂（5%磷脂酸） 0.115×10^-2GM

胰岛素（NOVO）    8单位

羟苯甲酸甲酯 5.815×10^-5M

对羟苯甲酸丙酯 1.153×10^-5M

硅胶 0.461×10^-2GM

油酸 2.376×10^-4M

试验8

七位与胰岛素相关的糖尿病（IDDM）患者，六男一女，年龄在24至47岁（平均34.4岁）之间，体重在48和68公斤之间（平均58.6公斤）。患者头一天晚上及整个研究过程中禁食后，服用32到48（平均42.6）国际单位（IU）实施例7的口服胰岛素制剂。

五位男性IDDM患者在前一天夜里禁食后，输注规定的皮下注射胰岛素（Tong-Shin）0.172IU/Kg并在整个研究过程中。另外五位男性IDDM患者口服实施例7口服胰岛素制剂降低血糖标准方面总的效应类似于规定注射的胰岛素（参见表22）。

剂量    血糖（Mg/dl）

制剂

（IU/Kg） C_oCmin T_c-minT₁₀₀dc/d_T

规定胰岛素    0.172    271    94.5    4.0    2.1    59.16

口服胰岛素    0.649    237    98.9    3.0    2.5    59.08

0914型

C_o＝糖的基值;

C_min＝观察的糖的最小值;

T_c-min＝观察的最低糖标准时间;

T₁₀₀＝达到100mg/dl的时间;

dc/d_T＝低血糖作用速率。

在两个IDDM患者中，口服实施例7（0.63IU/Kg）的胰岛素制剂后，测量胰岛素生物利用率（血清中胰岛素标准）。

与5位IDDM患者皮下注射规定胰岛素比较，胰岛素的“药物动力学和生物利用率”如下：

在试验8中每个试验对象随每一剂量口服胰岛素服用两胶囊试验1-E中陈述的脂解酶组合物。

临床研究表明：在糖尿病人中，口服实施例7的口服胰岛素制剂单剂量0.630IU/Kg胰岛素，与另一组与胰岛素有关的糖尿病患者皮下注射0.172IU/Kg规定可注射的胰岛素（Tong-Shin）一样，能产生同样的“低血糖”效应（或，降低血糖的效应）。在我们被研究的与胰岛素有关的七名糖尿病患者中四人经历了胰岛素休克，通过口服摄入糖水和新鲜桔汁给予补偿。

与皮下注射0.172IU/Kg规定可注射的胰岛素（Tong-Shin）相比，0.630IU/Kg实施例7的口服胰岛素制剂的药物动力学和生物利用率数据表明：口服胰岛素后，胰岛素吸收速率比注射规定胰岛素后快2倍。口服胰岛素（0.630IU/Kg）后，胰岛素生物利用率（AUC）几乎是皮下注射规定的胰岛素（0.172IU/Kg）的4.7倍。口服胰岛素后，调节服药胰岛素剂量后的AUC为2，264.8/IU，在皮下注射规定胰岛素后AUC为1，775.0/IU。对于给定的胰岛素剂量，实施例7的口服胰岛素制剂生物利用率等于或大于规定可注射胰岛素的生物利用率。

口服实施例7胰岛素制剂后，在糖尿病人降低血糖标准中，实施例7口服胰岛素制剂的效应和在糖尿病人中胰岛素生物利用率是极好的，并且与依赖于胰岛素的糖尿病患者皮下注射规定的胰岛素情况类似。

实施例9

在这个实施例中，脂解酶是类脂和肠溶涂复的并且能与口服胰岛素制剂结合形成胶囊或片剂。

A    胰脂肪酶

胰脂肪酶颗粒按如下方法制备，把下面组分放入前面描述过的改进的Spir-A-Flow里

原料 数量 公司/组^＃（如可用）

胰脂肪酶    700GMS    Sigma，St.Louis：No-L-

3126（Lot^＃74F-0470）

玉米淀粉    148.7Gms    Shinwa    Yakuhin，Japan

（S8285）

羟苯甲酸甲酯    12.0Gms    Sigma（32F-0511）

对羟苯甲酸丙酯    1.5Gms    June-Sei，Japan

9L1202

组分放置在Splr-A-Flow园盘上，在约30至32℃温度范围干燥，同时转子以每分钟300转（rpm）的速度旋转，搅拌器转速500rpm，切粘器转速2000rpm，因此产生组分的微细干燥颗粒。颗粒由加热至30至32℃的空气由底盘底部吹起，加热空气通过转子和罐壁之间狭缝（缝隙空气）通过转子园盘上的微细孔（液体空气）吹入。缝隙空气和液体空气均保持100至450mmH₂O空气压力。组分微细颗粒由缝隙空气和液体空气悬浮在Spir-A-Flow罐中，而后涂复如下涂层溶液：

化学组分    数量    公司/组（如可用）

L-羟丙基甲基    12.5Gms    Shinwa    Yakuhin，Japan

纤维素（L-HPMC）    （191184）

化学组分    数量    公司/组（如可用）

十二烷基硫酸钠    360.5Mgs    Yakuri    Kagaku，Japan

（S316-06）

水    加到化学组分里直到总溶液250ml

为了用涂层溶液涂复颗粒，当颗粒在罐内悬浮时把涂层溶液喷涂到组分颗粒上。喷涂速率10ml/min，压力为1.0到5.0Kg/M²、喷涂120分钟（喷嘴间断地“开”20至40秒，而后“关”60至90秒）。

这样胰脂肪酶颗粒涂复并罩上水溶性的HPMC-L薄膜层。接着用如下肠溶衣溶液涂复附着L-HPMC薄膜的胰脂肪酶颗粒：

化学组分 数量 公司/组^＃（如可用）

L-羟基丙基甲基    4.5%    Shinwa    Yakuhin，Japan

纤维素    （191184）

聚乙二醇-6000    0.5%    Kao    Sekken，Japan

二氯甲烷    47.3%

乙醇    37.8%

水    9.4%

上述肠溶衣溶液pH值接近5.2到5.6。

此外，也能利用市售牌号称为EUDRAGIT^RL-100-55（或L-100）或EUDRAGIT^R-L30-D-55的丙烯酸树脂涂复颗粒。

化学组分 数量 公司/组^＃（如可用）

EUDRAGIT^R12.5%溶液按 Rohm Pharma

-L-100-55    重量计480份    Weiterstadt，W.Germany

乙醇或    502份

异丙醇

聚乙二醇-6000    6份    Kao    Sekken，Japan

硬脂酸镁    12份

1000份或

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

EUDRAGIT^R30%溶液， Rohm Pharma

-L30-D55    按重量计1000份    Weiterstadt，W.

Germany

聚乙二醇-6000    30份    Kao    Sekken，Japan

水    898份

硅乳液    2份

滑石    70份

1000份

当颗粒在罐中再悬浮时，使用第一次提到的肠溶衣涂层溶液，通过喷涂把肠溶涂层溶液喷涂在已涂复过胰脂酶颗粒的L-HPMC上。喷涂速率10ml/min，压力2.5Kg/M²、时间3到4小时。喷嘴“开”20到40秒“关”60到120秒。生成的产物在“胃液”和“十二指肠液”中提供了溶解它们所需要的时间。

B    胆汁盐

通过用Spir-A-Flow，胆汁盐和阿维塞尔用涂层溶液和用于涂复上述胰脂酶第一次提到的肠溶涂层溶液涂复，生成胆汁盐颗粒。胆汁盐和阿维塞尔如上面A陈述的涂复。使用胆汁盐和阿维塞尔组分如下

原料 数量 公司/组^＃（如可用）

胆汁盐    406.6Gms    Dilco（714720）

阿维塞尔    69.1Gms    Shinwa    Yakuhin，Japan

C    口服胰岛素制剂

生产的口服胰岛素制剂如下。在Spir-A-Flow中混合下列组分。

组分    数量    公司/组号（如可用）

胆甾醇    220.5Gms    Kaksan，Kagaku    Japan

（D850134）

盐酸精氨酸    110.2Gms    Furuka，Switzerland

阿拉伯树胶    24.0Gms

甘氨酸    31.2Gms

十二烷基硫酸钠    48.0Gms

对羟苯甲酸丙酯    3.3Gms    June-Sei，Japan（9L1202）

各组分在Spir-A-Flow罐中充分混合和干燥。在Spir-A-Flow中使用下列参数：转子定为350rpm;搅拌器为500;切粒器定为2000rpm;缝隙空气压力在100到300mmH₂O之间;流体气压为100至350mmH₂O;空气温度为24至31℃。在这样的条件参数下，组分在Spri-A-Flow中混合和干燥近30分钟。而后经过充分混合和干燥后的各组分悬浮在罐里的气流中，以如下粘合剂溶液粘合：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

L-羟丙基纤维素    16.0Gms    Shinwa    Yakuhin，Japan

（L-Hpc）    （191184）

十二烷基硫酸钠    1.0815Gms    Yakuri-Kagaku，Japan

（S316-06）

三乙基胺    0.8150Gms    Wako    Kagaku，Japan

柠檬酸    1.2608Gms    Yakuri-Kagaku，Japan

（KA9105）

结晶胰岛素    如所需克数    （SIGMA    Bovine    Insulin

Crystalline）

水    220ml    溶液PH约2.0到3.5

为了涂复上述产生的颗粒，通过位于Spir-A-Flow顶部的喷嘴喷涂粘合溶液，参看图3中的28。在喷涂前和喷涂过程中，粘合溶液放在园筒中，然后浸在冰冷的烧杯中冷却。粘合溶液涂复在微细的、空气悬浮的颗粒上，喷涂速率10到14ml/min，气压1.0到2.0Kg/M²并且空气体积15到25L/min，时间约2小时，直到所有的粘合溶液用完。喷嘴间断地变换，“开”20至40秒，“关”30至90秒。整个过程中，使用在25到32℃温度时悬浮颗粒的空气，保持产物温度。生成具有结晶胰岛素的颗粒然后立即溶在水里，温度约24℃。生成的乳液含有粘合胰岛素的微细颗粒，溶化液PH值约4.2到5.4。

随后，乳化液中含有的粘合胰岛素的颗粒立即用如下产生的类脂涂层溶液涂复。以下的组分包括喷涂在胰岛素粘合颗粒上的类脂涂层。

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

卵黄卵磷脂    24.0Gms    Sigma，St.Louis

聚乙二醇脂肪    18.7Gms    Kao    Sek-Ken，Japan

酸酯    （Emanon3199;LotNo

12744Y）

水    加至最后体积

200ml

生成的溶液PH值约为5.5至6.5。

通过位于罐顶部的喷嘴28喷涂类脂涂层溶液。Spir-A-Flow参数如下：转子定为250到300rpm;搅拌器500;切粒器2500到3000。在气压1.2到1.5Kg/M²时，空气体积15到20L/min时喷嘴和它的喷涂速率为12.0ml/min并且产物温度约在30到34℃间。此外，产物温度由Spir-A-Flow的热调节器保持，以使进入罐的空气具有所需的温度。喷涂类脂涂层溶液60分钟。喷嘴间断地“开”20秒钟，“关”60到90秒。

用一种重涂复的类脂涂层溶液重新涂复生成的类脂涂复过的颗粒。涂复的类脂涂层溶液含如下组分：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

油酸    7.5Gms    Junsei-Japan

胆甾醇    3.0Gms    Furuka，A.G.（246537-784）

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

三甲醇氨基甲烷    2.5Gms    Pharmacia，Sweden

乙醇    到100ml    （混合其他组分前，加温80-90℃）

从Spir-A-Flow罐侧面喷涂重涂复的类脂溶液。喷涂速率12ml/min，空气压力1.0到1.5Kg/M²并且空气体积15到20L/min。转子定为300到350rpm、搅拌器为500、切粒器3000到3500rpm并且保持产物温度约31到35℃。喷嘴间断地“开”20到40秒，“关”60到90秒。

如果需要，重涂复的类脂溶液中能去掉三甲醇氨基甲烷。然而，去掉三甲醇氨基甲烷将导致干燥时间增加并且需要极其小心，以防止颗粒的“过量脂和潮湿”。三甲醇氨基甲烷列在美国和欧州Pharmacopea上。

重新涂复类脂溶液步骤后，涂复过的干燥颗粒或者放入硬质凝胶胶囊或压制成片剂。口服胰岛素粘合涂复的颗粒能够单独制成胶囊或片剂或者与前面描述过的类脂和胆汁盐肠溶涂复的颗粒混合。生成的胶囊或片剂能肠溶衣涂复。

另外，涂复了类脂粘合的口服胰岛素颗粒本身可肠溶涂复。涂复类脂涂层口服胰岛素颗粒的肠溶涂层溶液包括以下组分：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

EUDRAGIT^R1000份 Rohm Pharma GmbH

-L30D    （30%溶液）    West    Germany

聚乙二醇-6000    30份

滑石（粉）    70份

硅乳化液    2份

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

水    898份

生成溶液PH值约为5.5到6.5

为了产生肠溶衣涂复过的、类脂涂复口服胰岛素颗粒，通过Spir-A-Flow罐顶部的喷嘴28喷涂肠溶涂层溶液。喷涂速率对于约500克涂复类脂粘合口服胰岛素颗粒来说，每分钟每公斤1克。间断地，喷涂颗粒5秒而后干燥5秒，直到达到肠溶衣所需要的厚度。

为了以百分数测定干燥漆物质施用的肠溶衣的量（肠溶衣溶液）（“Q”），用涂复颗粒的表面积（SA）mm²，与每Cm²需要的干漆（L）mg mg/Cm²（涂层厚度）相乘，再被口服胰岛素粘合颗粒重量（W）mg除。于是通过下面方程式计算干漆物质百分数“Q”：

Q＝（SA×L）/W

最好，口服胰岛素肠溶衣涂复颗粒直径约为0.1到0.8mm（表面积范围变化在0.314至2.0mm²之间）。我们发现通过把上面肠溶衣涂层溶液约120到150ml喷涂在重量约450gms的口服胰岛素颗粒上，当它们放进PH值约1.2（胃液）的溶液里，至少10分钟时，生成的涂复颗粒将不溶解。然而，在PH值约6.8（十二指肠溶液）的溶液里，涂复的颗粒在30秒内溶解和扩散。据此，我们得到一种理想的口服胰岛素肠溶衣。

D    口服胰岛素颗粒/脂酶/胆汁盐胶囊

在这个实施例中，制造包括口服胰岛素涂复颗粒、涂复类脂和涂复胆汁盐的胶囊。为此，对于每一粒1^＃大小的硬质凝胶胶囊，混合在一起的有：肠溶衣涂复的口服胰岛素颗粒（如上述C中描述的制备）、肠溶衣涂复脂酶颗粒（如上述A中描述的制备）和肠溶涂层胆汁盐颗粒（如上述B中描述的制备）并以下述比例放入硬质凝胶胶囊内：

200Mg（12IUS）口服胰岛素

28Mg（1，000）单位胰脂肪酶

25Mg胆汁盐

50Mg碳酸氢钠（烘干）和

50Mg柠檬酸作为填充剂。

碳酸氢钠和柠檬酸起绽开效应，使硬质凝胶胶囊在胃中打开，释放出小于1mm的口服胰岛素、脂酶和胆汁盐肠溶衣涂复颗粒。由于它们的大小和组成，这些颗粒能迅速地通过幽门进入十二指肠。碳酸氢钠和柠檬酸的另一个作用是调节肠内PH值趋于碱性、增加在胆汁盐存在下胰脂肪酶的活性。

E.C制剂口服胰岛素与D制剂口服胰岛素临床对比研究

在六位糖尿病患者中（3位与胰岛素有关另三位与胰岛素无关，五男一女）参与对比研究。研究的是带有4胶囊脂解酶C口服胰岛素制剂和D口服胰岛素制剂间进行比较。每胶囊含1000单位脂酶和25Mg胆汁盐，口服。即在硬质凝胶胶囊中，将C口服胰岛素制剂与脂酶涂层A涂层B胆汁盐、碳酸氢钠和柠檬酸结合。

每位患者隔天服用每一制剂的胰岛素。因此，研究的第一天口服48IU的口服胰岛素及4粒含4000IU脂酶和100Mgs胆汁盐的胶囊。研究的第二天口服4粒48IU的口服胰岛素及4000IU酯酶和100mgs胆汁盐的胶囊。研究的第三和第四天重复上述过程。

通常，无论是单独地服用而不是随口服胰岛素（48IU），胶囊一起服用脂解酶胶囊，还是脂解酶与口服胰岛素包含在同一胶囊内以复合胶囊形式服用，口服胰岛素在血糖和降血糖作用效应方面总的效应是相同的。

F、口服胰岛素/脂酶/胆汁盐片剂

在A、B、C部分中描述的非肠溶衣涂复颗粒可以复合压制成片剂。为此混合下列组分。胰岛素/脂酶/胆汁盘颗粒（如上文D中陈述的同样比例）126.35Gm

碳酸氢钠    50.0Gm

碳酸氢钾    32.0Gm

柠檬酸    17.65Gm

滑石    500Mg

阿维塞尔    500Mg

乳糖    45.0Gm

玉米淀粉    28.0Gm

上述混合物制成约220毫克大小的硬压片剂（如果需要，片剂可大些或可小些）。如果在C部分制剂中替代结晶胰岛素，每片能含6IU的胰岛素。如果需要，胰岛素剂量可增至40IU。

产生的片剂用EUDRAGIT^R-E-100涂复有约0.1到0.15mm厚度的“膜涂层”我们发现这样涂复的片剂在30秒或更少的时间内，溶解在PH值5.0的胃液中，即口服胰岛素，脂酶和胆汁盐由此释放。由于这些颗粒已肠溶衣涂复，因此仅易溶于PH6.0或6.0以上的溶液中。然而颗粒小于1mm，容易通过幽门，溶解在十二指肠中。在十二指肠中，颗粒被乳化并且悬浮微脂球颗粒，该颗粒粘合有胰岛素（其大小小于1微米）和/或“涂复的类脂层”粘合微脂球的胰岛素（大小小于50微米）。相应地，颗粒将悬浮在十二指肠空腔内所形成的乳化液中，这些颗粒通过肝，从肠粘膜的Villae较佳地被吸收。

在三位与胰岛素有关的糖尿病患者中进行口服胰岛素/脂酶/胆汁盐的片剂临床研究，结果如下：

使用肠溶衣溶液，例如EUDRAGIT^R-L100或L-30涂复口服胰岛素颗粒、胆汁盐颗粒和脂酶颗粒，产生具有如下特性的被涂复的颗粒：

1.抗胃液性;

2.保护胃壁，防颗粒产生任何腐蚀;

3.隔离配合禁忌的药物;

4.改进产品储存期;

5.隔绝吸湿核蕊;

6.保护颗粒，防空气影响。

如上陈述，EUDRAGIT^R防止了胃壁经受任何腐蚀效应，胆汁盐也改进了处方制剂。该处方储存期短、极其不稳定并且吸潮。

实施例10

按照本实施例，制备口服胰岛素制剂。在Spir-A-Flow罐内放下列组分。

组分    数量    公司/组号（如可用）

胆甾醇    250-350Gms    Koksan    Kagaku，Japan

（D850134）

盐酸精氨酸    120-180Gms    Junsei    Chem、Co.，Japan

（1A1527）

氨基乙酸    30-50Gms    Yakuri    Kagaku，Japan

（171092）

十二烷基碳    36-60Gms    Yakuri    Kagaku，Japan

酸钠    （S316＝05）

组分    数量    公司/组号（如可用）

对羟苯甲酸    5-10Gms    Junsei    Chem.Co.，

丙酯    Japan（9L1202）

这些粉状组分使用前文描述的Jet    Mill（参见图1和图2）研磨成小于50微米的颗粒。然后在Spir-A-Flow罐中充分混合、干燥。采用以下参数：

转子（rpm）（转速/每分钟）＝250-300流体空气压力＝

40-50mmH₂O

搅拌器（rpm）＝500-700缝隙空气压力＝

25.35mmH₂O

切粒机（rpm）＝4000-5000供气压力＝

900-1000mmHg

通过增加缝隙空气压力和流体空气压力约达50到100mmH₂O，在罐里悬浮充分混合的和被干燥的组分（颗粒）。悬浮的、微细的干燥颗粒而后用下面溶液涂复：

组分    数量    公司/组号（如可用）

L-羟丙基甲基    15-25Gms    Shinwa    Yakuhin，

纤维素    Japan（191184）

三乙胺    0.5-1.0Gms    Wako    Kagaku，Japan

柠檬酸    0.05-0.10M    Yakuri    Kagaku，

Japan（KA9105）

十二烷基硫酸钠    1.00-1.500Gms    Yakuri    Kagaku，

Japan（S316＝05）

组分    数量    公司/组号（如可用）

胰岛素晶体    根据需要    Eli    lilly（Bovine    Insulin）

从8-20IU

水    最终体积400ml，温度约10到12℃;

最终PH约1.2到2.5

粘合溶液从位于罐顶部的喷嘴喷涂以使涂复到颗粒上。含有结晶胰岛素的粘合溶液粘合到微细、干燥的颗粒上，采用以下参考数据：

转子＝200-300rpm    喷涂泵流速＝12.0-15.0ml/min

搅拌器＝500-700rpm 喷涂空气压力＝1.2-1.5Kg/Cm²

切粒器＝2800-3500rpm    喷涂空气体积＝20-40L/Min

流体空气压力＝50-80mmH₂O

缝隙空气压力＝50-90mmH₂O

主要供气压力＝800-1500mmHg

产物温度＝26.7-28.5℃。

约在90至120分钟期间内，间断地喷涂颗粒，直到全部体积的溶液用完。在间断周期中，喷涂约5秒钟，干燥约22秒钟。

用胰岛素晶体溶液粘合的颗粒（粘合颗粒）而后用第一涂层溶液涂复。第一涂层溶液包括如下：

卵黄卵磷脂    15-24.0Gms    Sigma    Chemical

聚乙二醇脂肪酸    12-16.0Gms    Kao    Sekken，Japan

酯（Emanon）    （Emanon    3199;12744Y）

吐温-80    1-5.0Gms    Hayashi    Pure    Chemical

Osaka，Japan（Tween

-80    IFMO9818）

水    到最终体积500ml;温度25到26℃;

PH4.5到6.5。

上述粘合的颗粒而后悬浮在Spir-A-Flow中并且用上述第一涂层溶液涂复。条件如下：

转子＝220到300rpm    喷涂泵流速＝12.0-15.0ml/min

搅拌器＝500-800rpm 喷涂空气压力＝1.2-2.0Kg/Cm²

切粒器＝2，800-4，000rpm    喷涂空气体积＝20-40L/min

流体空气压力＝50-100mmH₂O

缝隙空气压力＝50-100mmH₂O

主要供气压力＝900-1，000mmHg

产物温度＝32.0-33.8℃

粘合颗粒喷涂约5到10秒钟，干燥约20到22秒钟。

被涂复过的粘合颗粒而后用第二涂层溶液再涂复。第二涂层溶液含以下组分：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

油酸    10-15.0Gms    Junsei    Chemical，Japan

（9D4034）

吐温-80    4-6.0Gms    Hayashi    Pure    Chemical，

Japan（IFMO9818）

乙醇    最终体积500ml，温度28-30℃;

PH6.0到7.2

由位于罐侧面的喷嘴喷涂第二涂层溶液到悬浮的、涂复过的粘合颗粒上。使用以下参数：

转子＝250-300rpm    喷涂泵流速＝12.0-15.0ml/min

搅拌器＝500-700rpm 喷涂空气压力＝1.2-15Kg/Cm²

切粒器＝3，000-4，500rpm

喷涂空气体积＝20-40L/Min

流体空气压力＝60-110mmH₂O

缝隙空气压力＝60-110mmH₂O

主要供气压力＝900-1，000mmHg

产物温度＝30-32.5℃

生成涂复过的粘合颗粒，包括胰岛素并且用类脂涂复，可制成小于2mm直径的微细颗粒（用NaHCO₃：柠檬酸比是3∶1作为用淀粉涂复的“种”，也就是用一种涂层涂复，上述描述过的胰岛素粘合化学颗粒作为外层等等，而后肠溶涂复）或每500到600grams最后制剂重量中与按重量计20到30%碳酸氢钠、按重量计10-20%柠檬酸和3到6grams硅胶混合，并且放入4号大小的硬质胶囊内。生成的胶囊而后用下述肠溶衣溶液肠衣涂复：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

L-羟基丙基甲基    4.5%    Shinwa    Yakuhin，Japan

纤维素

聚乙二醇-6000    0.5%    Kao    Sekken，Japan

二氯甲烷    47.3%    Yakuri    Kagaku，Japan

（224144）

乙醇    37.8%

水    9.4%    PH＝5.2到5.6

虫胶制剂    加入上述混合溶液每100ml0.2Gms并溶解（暗

褐色）PH＝5.2到5.6;在温度约30.0到

32.5℃时混合。

另外，能使用含下述组分的一种肠溶衣涂层溶液：

EUDRAGIT^R-L30-D55 30%溶液 Rohn Pharam，

1，000份    West    Germany

聚乙二醇-6000    按重量30份    Kao    Sekken，Japan

硅乳化液    2份

滑石    70份

水    898份

使用第一次指出的肠溶涂层溶液肠溶涂复填有粘合胰岛素颗粒的4^＃胶囊。我们发现在4^＃胶囊这样涂复含有粘合胰岛素的颗粒经过2小时或更长时间后仅溶解在PH约1.2的一种胃溶液中。然而在PH约近6.8的十二指肠溶液中，15分钟内或更少的时间这样的胶囊溶解（如由美国Pharmacopea说明）。如果胶囊用另一种肠溶衣溶液涂复，也发现有类似特征。

实施例11

为了制备实施例的口服胰岛素制剂，把下面的组分放进Spir-A-Flow罐中：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

胆甾醇    350-500Gms    Koksan    Kagaku，Japan

（D850134）

十二烷基硫酸钠    30-50Gms    Yakuri    Kagaku，Japan

（S316-05）

对羟苯甲酸丙酯    5-10Gms    Junesei    Chemical，

Japan（9L1202）

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

羟苯甲酸甲酯    5-10Gms    Junesei    Chemical，

Japan（OC1495）

在Spir-A-Flow罐里混合和干燥组分后，利用上面实施例10描述的参数，用含胰岛素粘合剂溶液粘合这些颗粒。含胰岛素粘合剂溶液含以下组分：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

L-羟丙基甲基    15-25Gms    Shinaw    Yakuhin，Japan

纤维素    （191184）

三乙胺    0.5-1.0Gms    Wako    Kagaku，Japan

柠檬酸    0.05-0.1M    Yakuri    Kagaku，Japan

（KA9105）

十二烷基硫酸钠    1.00-1.500    Yakuri    Kagaku，Japan

Gms    （S316＝05）

硅乳化液    0.3-1.0Gms

胰岛素    （根据需要得到最后胶囊有2到10IU）

水    最终体积400ml，PH约1.2到2.5。

混合的和干燥过的组分悬浮在罐中并且从位于罐顶部的喷嘴28喷涂含胰岛素的粘合剂溶液。喷涂粘合剂溶液用如上述实施例10陈述的条件操作Spri-A-Flow。

粘合胰岛素的颗粒而后用第一涂层溶液涂复。第一涂层溶液含以下化学组分

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

卵黄卵磷脂    15-24Gms    Sigma    Chemical

Emanon-3199    12-16Gms    Kao    Sekken，Japan

（12744Y）

吐温-80    1-5Gms    Hayashi    Pure

Chemical    Japan

（IFM09818）

水    最终体积500ml    PH4.0到6.2

涂复过的粘合胰岛素颗粒用上面实施例10描述过的第一涂层溶液涂复。

生成的涂复过的颗粒而后用第二涂层溶液再涂复。第二涂层溶液有以下组分：

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

油酸    10-15.0Gms    Junsei    Chemical，Japan

（9D4034）

吐温-80    4-6.0Gms    Hayashi    Pure    Chemical

Japan（IFMO9818）

乙醇    最终体积500ml    PH6.0到7.2。

在上述实施例10中描述的条件下从位于罐侧面喷嘴27喷涂第二涂层溶液。

生成的涂复过的颗粒能制成直径小于2mm的微细颗粒。包括以3∶1或1∶1比例的碳酸氢钠和柠檬酸的混合物作为种;淀粉作为nonpareil（模）用一种涂层涂复;粘合胰岛素颗粒作外层;用按重量计大约20到30%碳酸氢钠、按重量计大约10到20%的柠檬酸和按重量计0.5到2.0%的硅胶肠溶涂复或混合。生成的混合物而后能裹入4号硬质凝胶胶囊并肠溶涂复。

实施例12

在本实施例中，包括颗粒组成的直径小于2.0mm、且由实施例10和11制备的口服胰岛素制剂。使用CF-制粒机（参见图23）、实施例10或实施例11的口服胰岛素制剂小于0.5mm与碳酸钠/柠檬酸大约以3∶1的比例、结合，用作“nonpareil”。生成的颗粒用一种前面描述过的肠溶衣溶液肠溶涂复。已经发现，生成的颗粒在PH约1.2的胃液内，至少2小时不会溶解，而在PH约6.8的十二指肠液中，15分钟或更短的时间内便会溶解。通过日本、东京Freund工业公司买到CF-制粒机。CF制粒机如图23所示，设计成通过应用离心系统凝结、使成粒状并涂复。简单地说，CF制粒机40包括电源42、转子44、供气46和喷嘴48。

在CF制粒机中制造产物，供气温度大约28℃到34℃，转子速度大约130到200转/分，供气流速为30到50L/min，喷嘴喷涂速率在喷涂压力10到30L/min时为20到50ml/min。

制备碳酸氢钠/柠檬酸组合物，在Spir-A-Flow中，把110到150Gms的柠檬酸作为种，在柠檬酸上过量涂复约400到450Gms碳酸氢钠粉末，以及少量约10到50Gmsα-淀粉末，干燥30分钟。

使用柠檬酸作为种，碳酸氢钠和淀粉作为过量涂料（两者均为nonpareil）。通过使用醇中有6到20%（10%为佳）的羟丙基纤维素-L（HPC-L）把实施例10和11的口服胰岛素制剂与30%重量的淀粉予混过的粉剂涂复在（模）nonpareil颗粒上，转速大约为100到200rpm，供气20到50L/min，喷嘴流速在压力为10到30L/min时，为15到40ml/分，喷涂20到40分钟（温度约为25到30℃）。生成的颗粒在Spir-A-Flow中，温度约30到35℃时干燥30分钟。

生成的颗粒制剂直径大约在0.490到1.450mm之间，使用5%Hpc-甲基-邻苯二甲酸酯和溶于乙醇的聚乙二醇6000（0.5%）肠溶液肠溶涂复，也能使用前面陈述的其它肠溶溶液。转速大约150到250rpm、供气30到50L/min、15到30L/min压力、喷涂流速20ml/min、温度约为25°到30℃的条件下，用肠溶衣液涂复颗粒。生成的颗粒基本类似于图24阐明的结构。颗粒50包括核或种52、（模）nonpareil    54.L-HPC涂层56、胰岛素层58和肠溶衣59。在PH大约1.2的胃液中，这些颗粒至少2小时内不溶，但却在15分钟或更短时间内溶于PH大约6.8的十二指肠液中。

试验12a

生成的产物，大约0.9（0.69到1.07）IU/公斤，在试管内溶于10到20ml盐水里，通过Wallace-Diamond双腔试管服药到三条狗的十二指肠中。服药后，连续在0、60、80、100、180、240和300分钟时收集三条狗胃静脉血样。三条狗中一条雄性、两条雌性、平均每条重4.0Kg（大约3.0到5.6Kg），测定血糖标准和胰岛素标准（通过放射免疫测定和Wako的酶催免疫测定方法）。

大约80分钟后，观察到明显值得注意的低血糖度，持续约300分钟。同时，十二指肠内给药剂后约在100分钟时观察到最高的血胰岛素标准（参见图25和26）。

试验12b

如实施例12改进的实施例11制剂，约1.0IU/Kg十二指肠内进药给6.0Kg雌性狗。与十二指肠内施用规定可注射的胰岛素（novo    actrapid    insulin，1.0IU/Kg）和与静脉内注入规定可注射的胰岛素（novo    actrapid    insulin，0.5IU/Kg）比较制剂的低血糖作用。静脉输注1.26IU规定可注射的胰岛素后，血糖标准在20分钟内从102下降到23mg/ml，并且在3小时内回升到100mg/ml。而后在十二指肠内输注6IU规定可注射的胰岛素，在3小时内观察血糖标准没有改变。十二指肠内输注6IU制剂，观察到在血糖标准中明显的和持续地降低。输注药剂后约2小时，由于严重的低血糖（参见图27）导致狗死亡。

试验12c

进行一个24小时观察周期后，不用胰岛素或口服降糖剂，禁食一夜。三位与胰岛素有关和2位与胰岛素无关的患者服用如实施例12陈述改进的实施例10的胰岛素制剂，约0.64到0.73IU/Kg。每小时测量一次血糖标准、测量5小时，然而在一位IDDM和一位NIDDM病人中，由于研究前观察到较低禁食血糖标准，依赖胰岛素和不依赖胰岛素的患者吃标准早餐并且餐后继续研究。在这些患者中临床观察低血糖降低显著（参见下面表5）。

另外六名患者，4名IDDM、2名NIDDM患者，口服实施例12陈述改进的实施例11的制剂0.49到0.63IU/Kg。一名患者由于观察到较低禁食血糖标准，吃标准早餐继续研究。剩下的五名患者在禁食条件下进行研究，口服制剂后观察到低血糖效应明显的程度。（参见下面的表6）

表5

口服胰岛素制剂食入后血糖标准

名字    性别    年龄    体重    身高    口服胰岛素    糖尿病

（Kg）    （Cm）    剂量（IU/Kg）    人种类

LEEYS    M    55    161    0.73    IDDM

LEEKM    M    72    165    0.64    IDDM

KIMCS    F    46    150    0.66    IDDM

LEEJS    M    62    173    0.65    NIDDM

HONGCJ    F    52    160    0.65    NIDDM

表5续

研究时间（小时）的血糖（Mg/ml）

名字

0    1    2    3    4    5

LEEYS    173.5    163.5    144.0    136.0    127.0    103.5

LEEKM^＊183.0 137.0 85.0 96.0 76.5 -

KIMCS    216.5    178.5    177.5    162.0    149.5    -

LEEJS    156.0    152.5    126.0    118.0    89.5    86.5

HONGCJ^＊257.5 259.5 196.5 183.0 165.0 136.5

表6

名字    性别    年龄    体重    身高    口服胰岛素    糖尿病

（Kg）    （Cm）    剂量（IU/Kg）    人种类

LEEYS    M    64    165    0.63    IDDM

LEEJM    M    82    169    0.49    IDDM

MOONYJ    M    65    168    0.63    IDDM

SHINGS    M    66    169    0.49    IDDM

KIMCS    F    67    159    0.63    NIDDM

CHOIDS    M    59    165    0.63    NIDDM

表6续

研究时间（小时）的血糖（mg/ml）

名字

0    1    2    3    4    5

LEEYS^＊316.0 353.5 325.0 270.0 165.0 148.0

LEEJW    153.0    137.5    131.0    129.0    130.5    -

MOONYJ    329.0    247.0    158.0    -    -    -

SHINGS    333.5    378.5    265.6    238.0    170.5    -

KIMCS    157.0    152.0    137.0    134.0    130.5    -

CHOIDS    209.5    162.5    97.5    88.0    86.0    -

^＊吃早餐

12d    颗粒剂在糖尿病试验中的临床研究

一组糖尿病人两周内参与研究试验实施例10和11的制剂2次。在第一周内，每位患者服用肠溶衣涂复的实施例10或实施例11的口服胰岛素4^＃胶囊。一周后，这些患者服用实施例10或11的口服另一种粒剂。实施例11的粒剂口服平均每公斤体重0.145IU/公斤胰岛素剂量（每公斤体重0.11到0.18IU）并且在两小时测量期间，与口服实施例11制剂4^＃胶囊平均每公斤体重0.583IU（每公斤体重0.49到0.63IU）相比，前者引起血糖标准较快的降低，几乎是粒剂实施例11剂量的4倍。然而，4^＃胶囊实施例11制剂持续时间较长，并连续不断地显示出它的低血糖作用，服用2小时后仍有效（参见图28）。服用实施例10胰岛素（以制剂形式）一小时产生的低血糖程度略微大于以4^＃硬质凝胶胶囊服用形式。然而4^＃硬质凝胶胶囊的实施例10的口服胰岛素制剂与粒状实施例10口服胰岛素制剂相比，相对地具有时间更长的持续降血糖效应（参见图28）。

因而，颗粒形式实施例10制剂与4^＃硬质凝胶胶囊形结合，或者颗粒形实施例11制剂与4^＃硬质凝胶胶囊形结合，对糖尿病患者能引起快速的更加延续的降血糖作用。事实上通过服用颗粒形实施例11的口服胰岛素制剂（平均0.164IU/Kg）和4^＃硬质凝胶胶囊形（平均0.566IU/Kg），在这些糖尿病患者中观察到药物迅速发作和延续降血糖效应（参见图28）。

另一方面，口服实施例10或实施例11制剂（或者在此公开的任何其它口服胰岛素制剂）的CF制粒的和非颗粒形的胰岛素制剂可以按比例混合硬压制成片剂，以得到迅速发作和持续降糖作用的结合效果。

实施例13

在一组糖尿病人中，具有非常好的降血糖效应的口服胰岛素制剂制备如下：

向新鲜豆粉（抑制胰蛋白酶钠，钝化胰岛素）加入疏松（脂球的）化学材料（以上述实施例11陈述过的）。根据E.Fredricq和H.F.Deutsch（J.Biol.Chem.181：499，1949），由蛋白新制备的类卵粘蛋白与晶体胰岛素结合，溶于PH为7.2的水与醇的混合物（50到50比率）。加入2mm Cacl₂以改进中和胰岛素溶液的物理强度（J.Brange和S.Havelund;胰岛素溶液的性质;人工体系去除胰岛素（In Artificial Systems for Insulin Delivery）Ed.by P.BRUNETTI，etal，Raven Press，New York，pp.83到88）。由蛋白获得的类卵粘蛋白是有效的胰蛋白酶钠抑制剂。或者能用溶在乙醇里的新鲜蛋白。

将下列组分放入Spir-A-Flow罐中。

组分    数量    公司/组号（如可用）

胆甾醇    300-500Gms    Fluka    AG（CH-9470Bnchs）

十二烷基硫酸钠    20-40Gms    Yakuri    Kagaku，Japan

（S316＝05）

新鲜豆粉    15-30Gms

对羟苯甲酸丙酯    1-5Gms    Junsei    Chem.Co.，Japan

（9L1202）

羟苯甲酸甲酯    5-10Gms    Junsei    Chem.Co.，Japan

（OC1495）

这些粉末组分通过喷射研磨机（Jet    Mill）磨成小于50微米的颗粒。在Spir-A-Flow罐中，实施例10描述的条件，将颗粒充分混合和干燥。在罐中悬浮的干燥组分粉末与含有胰岛素、类卵粘蛋白（或蛋白）和柠檬酸以及表面活性剂的粘合溶液粘合。粘合溶液制备如下：

组分    数量    公司/组号（如可用）

三乙胺    1.55-3.22Gms    Wako    Kagaku，Japan

柠檬酸    0.08M    Yakuri    Kagaku，Japan

（KA9105）

这些化学组分溶解在（100-200ml）乙醇里。

氨基乙酸    0.2M

吐温80    1.0-2.5Gms

L-羟丙基纤维素    5%

这些化学组分溶于大约100到200ml    PH为8.0的乙醇溶液磷酸酯缓冲液里，磷酸酯缓冲液、溶解的化学组分混合，加入胰岛素，调节溶液的PH至7.2。

生成的粘合溶液喷涂到微细、干燥、悬浮在半空的脂球粉末上。粉末由胆甾醇、表面活性剂、豆粉以及如实施例10中介绍的杀菌防腐剂组成。

充分干燥胰岛素粘合的脂球粉末后，用下面的涂层溶液涂复粉末。

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

大豆卵磷脂    24Gms

聚乙二醇-6000    15-40Gms    Kao    Sekken，Japan

Cacl₂2.5-5.8Gms

化学组分    数量    公司/组号（如可用）

油酸    20-35Gms

胆甾醇    1-5Gms

羟苯甲酸甲酯

上面的化学组分溶解在足够量的约150到400ml乙醇里，使化学组分溶解。

将上述类脂涂层液涂复到实施例12描述过的胰岛素粘合的脂球粉末上。

试验13    口服胰岛素制剂治疗降血糖效果

四名糖尿病患者，其中2男2女。平均年龄46.0（36-56）岁，平均重量60.3（50-74）公斤，平均身高164.3（158-168）Cm。禁食后服用实施例13平均0.573（0.46到0.68）IU/Kg的口服胰岛素制剂，观察到血糖标准降低到一个治疗上明显有效的程度。

应该认识到，这里描述的优选方案中各种变化和改进，对本领域的技术人员来说是显而易见的。这种变化和改进不违背本发明的精神不脱离本发明范围而且不减少附带的优点。因此在从属权和要求中概括了这些变化和改进。

Claims (69)

1、一种在生物活性类型中适于口服，选自蛋白质材料的组合物，所说的组合物包括：

(a)平均直径约为1至100微米，且主要由固体乳化剂和表面活性剂组成的颗粒；

(b)一种用粘合剂粘合于上述颗粒表面的选择性的生物活性蛋白质材料；

(c)类脂涂层粘合到颗粒表面上，厚度约0.05到1.0微米，颗粒含有上述蛋白质材料。

2、根据权利要求1的组合物还包括：

（d）一种在上述颗粒类脂涂层周围的肠溶衣层。

3、权利要求2的组合物，其中蛋白质材料是胰岛素。

4、根据权利要求1的组合物，其中固体乳化剂选自：胆甾醇、甘油-硬脂酸、油酸、聚乙烯50硬脂酸盐、聚氧40硬脂酸盐、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、丙二醇二乙酯、丙二醇一硬脂酸酯、盐酸精氨酸、阿拉伯树胶、胆甾醇酯、磷脂和脂肪酸。

5、根据权利要求1的组合物、其中表面活性剂选自：十二烷基硫酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸、脱水山梨醇-月桂酸酯、脱水山梨醇-硬脂酸酯和乳化蜡。

6、权利要求1的组合物，其中生物活性蛋白质组合物选自：胰岛素、尿激酶、组织凝血致活酶、Leuprolid、gangliocides、长春新碱、belomyein、利多卡因、庆大霉素、溴苄铵、Cetiedile、Cyclandelate、红霉素、氯霉素、阿霉素、链激素和Cephalosporidines（头孢菌素）。

7、根据权利要求1的组合物，其中粘合剂材料选自：羟甲基纤维素钠、阿维塞尔、乙基纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基纤维素。

8、根据权利要求1的组合物，其中类脂涂层材料选自：聚乙二醇脂肪酸酯、甘油磷酯、Phosphatidylophosphates、卵黄卵磷酯、油酸、一、二和三甘油酯、硬脂酸、软脂酸、胆甾醇、胆甾醇酯和thromethan。

9、根据权利要求2的组合物，其中肠溶衣层材料选自：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚乙二醇-6000紫胶、纤维素邻苯二甲酸酯和聚乙烯乙酸酯邻苯二甲酸酯。

10、根据权利要求1的组合物，其中上述颗粒还包括抗菌剂。

11、根据权利要求12的组合物，其中抗菌剂选自：脱氢乙酸、羟苯甲酸甲酯、羟苯甲酸乙酯、酚、苯乙醇、对羟苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、山梨酸、百里酚、乙基汞硫代水杨酸钠、脱氢乙酸钠、苯甲醇和羟苯甲酸丁酯。

12、权利要求1的组合物包括一种脂解酶。

13、权利要求12的组合物，其中脂解酶选自：脂肪酶、胰脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和胆汁盐。

14、根据权利要求1的组合物，其中还包括酶抑制剂。

15、根据权利要求14的组合物，其中酶抑制剂选自：硬脂酰胺、十八烷醇、盐酸三乙胺、柠檬酸、乳酸、焦磷酸酯、三乙醇胺、乙胺四乙酸酯、碘乙酰胺、苯肼、羟胺3和8-氢喹啉。

16、根据权利要求1的组合物，其中组合物还包含消泡剂。

17、根据权利要求16的组合物，其中消泡剂选自：十八烷醇和硅氧烷。

18、一种在生物活性类型中适于口服的胰岛素组合物，所说的组合物包括：

（a）平均直径为1到100微米，且主要由胆甾醇、十二烷基硫酸钠、羟苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯组成的颗粒;

（b）用一种主要由羟丙基纤维素、十二烷基硫酸钠、盐酸三乙胺和柠檬酸组成的溶液，粘合在上述颗粒表面的胰岛素;

（c）一种厚度约为0.1至0.3微米的类脂涂层;和

（d）一种肠溶衣层，包括羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、紫胶和PEG-600，厚度为0.1微米，粘合于附有聚乙二醇-硬脂酸酯涂层的颗粒上。

19、一种在生物活性类型上适于口服的选择性的蛋白质材料组合物的制备方法，包括

（a）制成平均直径为1微米到1/2毫米的颗粒，主要由固体乳化剂和表面活性剂组成;

（b）将选择性的生物活性蛋白质材料用一种粘合剂粘合到上述颗粒表面;

（c）用一种0.05到1.0微米厚的类脂涂层涂复到粘合有蛋白质材料的颗粒表面上。

20、根据权利要求19所说的方法，其步骤还包括：

（d）用肠溶衣涂复到上述颗粒的类脂涂层上。

21、根据权利要求19的方法，步骤还包括：

（d）在施用类脂涂层前，用一种水溶性涂层涂复颗粒。

22、权利要求19的步骤制备的产品。

23、权利要求20的步骤制备的产品。

24、权利要求21的方法制备的产品。

25、一种具有生物活性且适于口服胰岛素的组合物，包括：

平均直径大约1到100微米，主要由乳化剂和表面活性剂组成的颗粒;

粘合到颗粒表面的胰岛素;

一种类脂涂层粘合到涂有蛋白质材料颗粒表面上和

在类脂涂层周围涂上一种肠溶衣层。

26、一种口服胰岛素的方法，包括：

提供了一种口服用药的组合物，包括：粘合到固体乳化剂/可溶颗粒的胰岛素，用一种类脂涂层涂复胰岛素和颗粒，颗粒平均直径大约1到100微米，并用肠溶衣涂复类脂涂层。

27、一种口服胰岛素组合物的方法：

提供了一种口服用的组合物，包括：胰岛素粘合在脂蛋白颗粒上、用一种类脂涂层涂复胰岛素和颗粒并且用一种肠溶衣涂复类脂涂层。

28、权利要求27的方法包括服用脂解酶的步骤。

29、权利要求27的方法包括至少口服1/2粒含有一种以上脂解酶的胶囊。

30、一种在生物活性类型中适于口服的选择性的蛋白质材料组合物，所说的组合物包括：

（a）一种脂蛋白组合物;

（b）粘合在脂蛋白组合物表面的一种选择性生物活性蛋白质材料;

（c）一种在上述脂蛋白组合物和蛋白质材料周围的类脂涂层。

31、权利要求30的组合物包括一种在脂蛋白和蛋白质材料周围的水溶涂层，水溶涂层涂复类脂涂层。

32、权利要求30的组合物，其中脂蛋白是低密度的脂蛋白。

33、权利要求30的组合物，其中脂蛋白至少包括一种氨基酸。

34、权利要求30的组合物包括一种凝胶胶囊，类脂涂层材料被包入胶囊。

35、权利要求34的组合物，其中用肠溶衣涂复凝胶胶囊。

36、权利要求30的组合物，其中生物活性蛋白质组合物选自：胰岛素、尿激酶、组织凝血致活酶、leuprolid、ganliocides、长春新碱、belomyein、利多卡因、庆大霉素、溴苄铵、Celomyein、Cyclandelate、红霉素、氯霉素、阿霉素、链激素和Cephalosporidines（头孢菌素）。

37、权利要求30的组合物包括一种脂解酶。

38、权利要求37的组合物，其中脂解酶选自脂肪酶、胰脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和胆汁盐。

39、权利要求38的组合物，其中脂解酶包括脂肪酶和胆汁盐。

40、根据权利要求30的一种组合物，其中类脂涂层包括从下列化合物选择的材料：聚乙二醇脂肪酸酯、甘油磷酯、Phosphatidy-lophosphates卵黄卵磷酯、油酸、一、二、三甘油酯、硬脂酸、软脂酸、胆甾醇、胆甾醇酯和thromethan。

41、根据权利要求35的一种组合物，其中肠溶衣层包括从下列基团选择的材料：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚乙二醇-6000、紫胶、纤维素邻苯二甲酸酯和聚乙烯乙酸酯邻苯二甲酸酯。

42、根据权利要求30的一种组合物，其中所说的颗粒还包括杀菌剂。

43、根据权利要求42的一种组合物，其中杀菌剂选自：脱氢乙酸、羟苯甲酸甲酯、羟苯甲酸乙酯、酚、苯乙醇、对羟苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、山梨酸、百里酚、乙基汞硫代水杨酸钠、脱氢乙酸钠、苯甲醇和羟苯甲酸丁酯。

44、根据权利要求30的组合物，其中组合物还包括酶抑制剂。

45、根据权利要求44的一种组合物，其中酶抑制剂选自：硬脂酰胺、十八烷醇、盐酸三乙胺、柠檬酸、乳酸、焦磷酸酯、三乙醇胺、乙胺四乙酸酯、碘乙酰胺、苯肼、羟胺3和8一氢喹啉。

46、根据权利要求30的一种组合物，其中组合物还包括消泡剂。

47、根据权利要求30的组合物，其中脂蛋白包括一种类脂和一种氨基酸。

48、权利要求47的组合物，其中类脂选自：胆甾醇、油酸、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、磷脂、十二烷基硫酸钠和卵磷脂、软脂酸和磷脂磷酸盐胆碱。

49、权利要求47的组合物，其中氨基酸选自：精氨酸、赖氨酸、组氨酸和天冬氨酸。

50、根据权利要求46的一种组合物，其中消泡剂选自：十八烷醇和硅氧烷。

51、一种在生物活性类型中适于口服的胰岛素组合物，所说的组合物包括：

（a）平均直径为1微米到1/2毫米，且包括低密度脂蛋白组合物的颗粒;

（b）用粘合剂粘合到上述颗粒表面的胰岛素;

（c）一种水溶涂层，用于涂复颗粒和胰岛素;和

（d）一种类脂涂层，用于涂复水溶层、颗粒和胰岛素。

52、权利要求51的组合物包括一种脂解酶。

53、权利要求51的组合物包括一种用于涂复类脂层的肠溶衣层。

54、一种在生物活性类型中适于口服的选自蛋白质材料的组合物制备方法，包括步骤：

（a）制成平均直径为1微米到1/2毫米的低密度脂蛋白颗粒;

（b）将选择的生物活性蛋白质材料用粘合剂粘合到上述颗粒表面;

（c）用水溶涂层涂复颗粒和蛋白质材料;

（d）用类脂涂层涂复蛋白质材料粘合表面的水溶涂层涂复过的颗粒厚度为0.05到1.0微米。

55、根据权利要求54的一种方法，还包括步骤：

（e）在上述类脂涂层周围用一种肠溶衣涂复颗粒。

56、权利要求54的方法制得的产品。

57、权利要求55的方法制得的产品。

58、一种在生物活性类型中适于口服的胰岛素组合物，包括：

低密度脂蛋白颗粒;

粘合到颗粒表面的胰岛素;

一种在颗粒和胰岛素周围的水溶性涂层;

一种在水溶性涂层和表面粘合有胰岛素的颗粒周围的类脂涂层;

一种类脂涂层周围的胶囊;

一种胶囊周围的肠溶衣层。

59、一种治疗糖尿病的方法，包括步骤：

至少口服一粒胶囊，该胶囊含有一种组合物，它包括低密度的脂蛋蛋白、粘合在脂蛋白上的胰岛素，胰岛素和脂蛋白上的水溶性涂层及水溶涂层上的类脂涂层;以及至少口服一粒胶囊，该胶囊具有包含脂解酶和胆汁盐的组合物。

60、一种治疗糖尿病的方法，包括步骤：

至少口服一粒胶囊，该胶囊含有一种组合物，其组合物包括乳化剂/加溶剂颗粒，粘合到颗粒上的胰岛素，以及颗粒上的类脂涂层;至少口服一粒胶囊，该胶囊包含有脂解酶的组合物。

61、一种有效的适用于口服蛋白质化合物的组合物，包括选自胰脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和胆汁盐的脂解酶。

62、权利要求61的组合物，其中选择性的脂解酶是胰脂肪酶和胆汁盐。

63、一种适于口服的胰岛素组合物包括下列组分：

（a）胰脂肪酶颗粒;

（b）胆汁盐颗粒;

（c）粘合类脂颗粒的类脂涂复胰岛素;

（d）碳酸氢钠;和

（e）柠檬酸。

64、权利要求63的组合物，其中的组分放入硬质凝胶胶囊内。

65、权利要求63的组合物，其中的组分压成片剂。

66、权利要求63的组合物，其中碳酸氢钠与柠檬酸的重量百分比为3∶1到1∶1。

67、权利要求63的组合物，其中胰岛素粘合颗粒球形是小于1.5毫米。

68、权利要求63的组合物，其中胰脂肪酶和胆汁盐颗粒是肠溶涂复。

69、一种适于口服的胰岛素组合物，包括：以大约3∶1到1∶1比率混合的碳酸氢钠和柠檬酸，该混合物形成用一层胰岛素类脂混合物涂复的种，而后将生成的颗粒用肠溶衣涂复。

Images