CN201368876Y - 应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片 - Google Patents
应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片 Download PDFInfo
- Publication number
- CN201368876Y CN201368876Y CNU2009200317660U CN200920031766U CN201368876Y CN 201368876 Y CN201368876 Y CN 201368876Y CN U2009200317660 U CNU2009200317660 U CN U2009200317660U CN 200920031766 U CN200920031766 U CN 200920031766U CN 201368876 Y CN201368876 Y CN 201368876Y
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tissue
- monoclonal antibody
- chip
- distance
- tissue samples
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000002493 microarray Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract 4
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 abstract description 12
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- GTDOPRQDTRLYAL-UHFFFAOYSA-N hydrogen peroxide;methanol Chemical compound OC.OO GTDOPRQDTRLYAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本实用新型公开了一种应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，该芯片包括一载玻片，在载玻片上分布有32个来源于相同组织的小组织样本，构成一个4行×8列的微阵列，每行中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。每列中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。本实用新型可大大提高免疫组织化学染色的效率，大大减少染色需要的人力和时间，从而满足筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤的培养上清的需要。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种生物芯片，特别涉及能筛选用于免疫组织化学染色的分泌单克隆抗体的杂交瘤的培养上清的大间距组织芯片。
背景技术
随着“人类基因组计划”的完成，人类已经进入“功能基因组计划”，蛋白质组学是“功能基因组计划”的重要研究内容。蛋白质结构和功能的多样性决定了蛋白质组学研究的复杂性，尤其是新基因所编码的蛋白质的表达分布规律、结构和功能的揭示对生物学家来说是极富挑战性的。研究蛋白质的表达分布规律最常用的方法是免疫组织化学染色技术，它是利用特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项技术。单克隆抗体由于其识别表位的均一性和特异性以及制备抗体质量的稳定性，在免疫组织化学染色中的应用越来越受到重视。免疫组织化学染色技术把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测目的蛋白质。免疫组织化学技术中最为重要的是可特异识别目的蛋白质的第一抗体，最常用的组织切片是石蜡切片。由于石蜡切片制备过程中需要经过福尔马林固定、脱水及浸蜡等过程，蛋白质的空间构像常常发生改变，所以用酶联免疫吸附试验、流式细胞术等方法筛选到的单克隆抗体常常不能识别这种改变的构像，故不能应用于免疫组织化学染色。因此，要获得能应用于免疫组织化学染色的单克隆抗体，最好选用免疫组织化学染色的方法来筛选，而常规的大体切片的染色需要消耗大量的人力和时间，远远不能满足单克隆抗体筛选的需要。
发明内容
为了克服上述现有技术不足，本实用新型的目的在于提供一种应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，该芯片可大大提高免疫组织化学染色的效率，大大减少染色需要的人力和时间，从而满足筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤的培养上清的需要。
本实用新型采取以下的技术方案：一种大间距组织芯片，包括32个来源于相同组织的小组织样本，每个样本直径为1.5毫米，这些小组织样本构成一个4行×8列的微阵列，在每行或每列中相邻组织样本之间的间距均为4毫米。
该组织芯片技术是将32个直径1.5毫米的小组织样本，以4×8阵列方式包埋于一块25mm×50mm的石蜡蜡块中，然后进行切片。该实用新型可将组织样本集中于一张芯片上，有利于实验条件的标准化，有效避免主观原因造成的实验误差。
本实用新型明显减少每个组织样本的处理时间，使得在较短时间内完成大量组织样本的免疫组织化学染色成为可能，从而使数量众多的、不同克隆的单克隆抗体的筛选和阳性克隆的克隆化可以在同一天内进行；将免疫组织化学染色条件包括抗原修复、温度、洗涤时间及所用试剂浓度均加以标准化，保证了实验结果的准确可靠；由于每张芯片上有32个组织样本，可大大减少组织切片管理的工作量；由于4行×8列的微阵列排列方式与单克隆抗体制备中使用的96孔板的布局相同，故96孔板中的单克隆抗体上清可以很方便地加在芯片的相应的组织样本上，最大限度地减少样品间混淆的可能性。
附图说明
图1是本实用新型大间距组织芯片结构示意图，A、组织样本，B、4毫米组织样本列间距，C、4毫米组织样本行间距；
图2是用PAP疏水笔分隔每个组织样本的示意图，图中的标号为，D、组织样本，E、PAP疏水线；
图3是大间距组织芯片应用示意图，F、拟筛选的培养杂交瘤的96孔板，G、32种(4列×8行)待测上清编号，H、加完待测上清后的大间距组织芯片。
以下结合附图对本实用新型的内容作进一步的详细说明。
具体实施方式
参见图1、图2、图3所示，本实用新型的一种大间距组织芯片，包括32个来源于相同组织的小组织样本，每个样本直径为1.5毫米，这些小组织样本构成一个4行×8列的微阵列，在每行或每列中相邻组织样本之间的间距均为4毫米，可以很方便的用PAP疏水笔分隔每个组织样本，使得一张芯片足够检测32个不同的单克隆抗体待测上清。
大间距组织芯片可用于免疫组织化学染色的能分泌单克隆抗体的杂交瘤的培养上清的筛选，其方法和步骤是：
1)将大间距组织芯片脱蜡至水并进行抗原修复，抗原修复完成后以PAP疏水笔分隔每个组织样本(图2)；
2)0.3％甲醇-双氧水浸泡30分钟消除内源性过氧化物酶活性后用羊血清封闭30分钟；
3)将96孔板中的待测杂交瘤上清移入一块新的96孔板，并依顺序加在大间距组织芯片相应的位置(图3)；
4)依次滴加生物素标记的第二抗体和ABC复合物，DAB显色后用苏木素衬染，中性树胶封片后显微镜下观察，确定阳性结果，将阳性克隆用有限稀释法进行克隆化。
Claims (3)
1.一种应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，包括一载玻片，其特征在于，在载玻片上分布有32个来源于相同组织的小组织样本，构成一个4行×8列的微阵列，每行中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。
2.根据权利要求1所述的应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，其特征在于，每列中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。
3.根据权利要求1所述的应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，其特征在于，每个小组织样本直径为1.5毫米。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNU2009200317660U CN201368876Y (zh) | 2009-01-20 | 2009-01-20 | 应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNU2009200317660U CN201368876Y (zh) | 2009-01-20 | 2009-01-20 | 应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN201368876Y true CN201368876Y (zh) | 2009-12-23 |
Family
ID=41487768
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNU2009200317660U Expired - Fee Related CN201368876Y (zh) | 2009-01-20 | 2009-01-20 | 应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN201368876Y (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102157096A (zh) * | 2011-03-14 | 2011-08-17 | 毛静涛 | 教学(生物)芯片 |
| CN103344760A (zh) * | 2013-07-23 | 2013-10-09 | 成都安铂奥金生物科技有限公司 | 一种高通量免疫组化检测方法及多样品免疫组化检测板 |
| CN104034899A (zh) * | 2014-07-01 | 2014-09-10 | 上海理工大学 | 一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列 |
| CN104111329A (zh) * | 2013-04-17 | 2014-10-22 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒 |
| CN116773315A (zh) * | 2023-05-07 | 2023-09-19 | 中汉(江苏)医学科技有限公司 | 一种基于免疫组织化学技术的批量化抗体筛选方法 |
-
2009
- 2009-01-20 CN CNU2009200317660U patent/CN201368876Y/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102157096A (zh) * | 2011-03-14 | 2011-08-17 | 毛静涛 | 教学(生物)芯片 |
| CN104111329A (zh) * | 2013-04-17 | 2014-10-22 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒 |
| CN104111329B (zh) * | 2013-04-17 | 2016-05-25 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒 |
| CN103344760A (zh) * | 2013-07-23 | 2013-10-09 | 成都安铂奥金生物科技有限公司 | 一种高通量免疫组化检测方法及多样品免疫组化检测板 |
| CN103344760B (zh) * | 2013-07-23 | 2015-08-26 | 成都安铂奥金生物科技有限公司 | 一种高通量免疫组化检测方法及多样品免疫组化检测板 |
| CN104034899A (zh) * | 2014-07-01 | 2014-09-10 | 上海理工大学 | 一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列 |
| CN104034899B (zh) * | 2014-07-01 | 2015-12-30 | 上海理工大学 | 一种食源性致病菌杂交瘤细胞快速筛选抗原宏阵列 |
| CN116773315A (zh) * | 2023-05-07 | 2023-09-19 | 中汉(江苏)医学科技有限公司 | 一种基于免疫组织化学技术的批量化抗体筛选方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schiess et al. | Targeted proteomic strategy for clinical biomarker discovery | |
| CN103038645B (zh) | 用于妊娠的高血压疾病的生物标志物 | |
| CN201368876Y (zh) | 应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片 | |
| CN110870018A (zh) | 用于分析数据集的系统和方法 | |
| JP2011512125A (ja) | マイクロ流体画像サイトメトリ | |
| Agarwal et al. | Sperm proteomics: potential impact on male infertility treatment | |
| CN105154576A (zh) | 快速检测家蚕微孢子虫的引物对及其试剂盒和检测方法 | |
| JP5746328B2 (ja) | ヒト睾丸および副睾丸で発現される３０５種類の生殖関連精子局在タンパク質の検出方法 | |
| Frampton et al. | Aqueous two‐phase system‐mediated antibody micropatterning enables multiplexed immunostaining of cell monolayers and tissues | |
| Zhu et al. | iTRAQ‐based quantitative proteomic analysis of duck eggshell during biomineralization | |
| CN102132159B (zh) | 鱼类淋巴囊肿病毒免疫检测芯片及其制备方法与应用 | |
| Li et al. | Discovery of oogenesis biomarkers from mouse oocytes using a single-cell proteomics approach | |
| Maiques et al. | Multiplex chromogenic immunohistochemistry to stain and analyze paraffin tissue sections from the mouse or human | |
| JP2013533865A (ja) | モノクローナル抗体を生成し、検証し、そして使用するための方法およびシステム | |
| Richani et al. | Tissue microarray: an effective high-throughput method to study the placenta for clinical and research purposes | |
| CN103033631B (zh) | 利用卵黄脂磷蛋白抗体定性检测鱼类卵黄原蛋白的试剂盒 | |
| La et al. | Age-dependent changes in the expression and localization of LYZL4, LYZL6 and PCNA during testicular development in the Ashidan yak | |
| US20190324019A1 (en) | Calibration reagent and method | |
| CN106868117A (zh) | 珍稀水生生物水样环境dna优化‑养殖水样预检测方法 | |
| CN116539390A (zh) | 一种用于单个胚胎痕量蛋白提取的前处理方法 | |
| CN113125757B (zh) | 一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其用于母猪早期妊娠检测的方法 | |
| CN108318684A (zh) | 一种检测猪细小病毒抗体的可视化蛋白芯片制备方法和检测方法 | |
| CN104267189B (zh) | 牛奶中人α-乳清蛋白筛查试纸条及制备方法与应用 | |
| Sørensen et al. | Raising antibodies against circulating foetal cells from maternal peripheral blood | |
| CN201873667U (zh) | 一种包含转基因细胞样本的筛选芯片 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20091223 Termination date: 20120120 |