CN1817900A - 一种调控植物落粒性的转录因子及其编码基因与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一个调控植物落粒性的转录因子及其编码基因与应用,其目的是提供一个调控植物落粒性的转录因子及其编码基因与其在调控植物落粒性中的应用。该转录因子具有下述氨基酸残基序列之一:1)序列表中的SEQ ID №:1或SEQ ID №:5;2)将序列表中SEQ ID №:1或SEQ ID №:5的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有调控植物落粒性的蛋白质。该转录因子及其编码基因对于落粒分子机制的研究,以及培育落粒性提高的水稻、草坪草及其它作物新品种具有重要的理论及实际意义。本发明在农业领域具有广阔的应用和市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及调控植物落粒性状的转录因子及其编码基因与应用,特别是涉及一个来源于水稻的调控植物落粒性的转录因子及其编码基因与其在调控植物落粒性状中的应用。
背景技术
野生稻的自然落粒性是其区别于栽培稻的最重要的特性之一。在野生稻中,当籽粒成熟时,籽粒会立即落下,这样就可以避免被一些小动物(特别是鸟类)吃掉,从而为野生稻的正常繁衍提供了保证。在驯化过程中,野生稻的这种落粒习性被选择掉了,这样人类便能方便地收获水稻籽粒,减少了产量损失。在栽培稻中,籼稻和籼稻在落粒性上存在着明显的差异,一般而言,粳稻比籼稻难落粒;有些粳稻极难落粒,给收获带来极大不便,而有些籼稻很容易落粒,又造成产量上的很大损失。因此,如何调控落粒性来获得落粒性适中的品种是一个重要的课题。同时,可将优良的落粒基因应用于一些易落粒作物,如草坪作物,从而提高种子的收获量。
籽粒的脱落一般可分为两步:一、离区细胞的分化;二、脱落信号的启动和离区细胞的分离。脱落信号包括很多种:发育信号(如授粉),环境信号(如旱、涝、高温、低温等)和生物胁迫信号(如病虫的侵害)等。植物激素在脱落信号的传导中起到重要作用。对许多植物的离区组织的研究结果表明乙烯是脱落的推动剂,而生长素是抑制剂,并且乙烯是保证植物脱落及时脱落的首要激素。水稻的落粒性与离层的发育密不可分,离层形成于外稃的基部,由一群细小的细胞组成。离层出现在抽穗期前,在抽穗期时离层的细胞的直径达到最大(Jin,I.,Inouye,J.(1981).On the degreeof grain shedding of Japonica-Indica hybrid rice bred in Korea.Jpn.J.CropSci.50,181-185.)。籼稻中花梗的离层出现得早,明显。目前,通过传统的和现代分子生物学的方法对水稻的落粒性进行研究发现水稻的落粒性是由多个基因控制(Kennard,W.C.,Phillips,R.L.,Porter,R.A.(2002).Genetic dissectionof seed shattering,agronomic,and color traits in American wild rice(Zizaniapalustris var.interior L.)with a comparative map.Theor.Appl.Genet.105,1075-1086.;Thomson,M.J.,Tai,T.H.,McClum,A.M.,Lai,X.H.,Hinga,M.E.,Lobos,K.B.,Xu,Y.,Martinez,C.P.,McCouch,S.R.(2003).Mappingquantitative trait loci for yield,yield components and morphological traitsin an advanced backcross population between Oryza rufipogon and Oryza sativacultiar Jefferson.Theor.Appl.Genet.107,479-493.),其中,位于第1染色体和第4染色体的两个落粒基因起着主要作用(Cai,H.W.,Morishima,H.(2000).Genomic regions affecting seed shattering and seed dormancy in rice.Theor.Appl.Genet.100,840-846.)。这两个基因都是显性基因,第1染色体上的落粒基因已被证实控制水稻离层细胞的分裂,即控制脱落的第一步(Oba,S.,Sumi,N.,Fujimoto,F.,Yasue,T.(1995).Association between grain shattering habitand formation of abscission layer controlled by grain shattering gene sh-2in rice(Oryza sativa L.).Jpn.J.Crop Sci.64,607-615.;Watanabe,K.,Oba,S.,Horiuchi,T.(2003).Allelic test of rice shattering genes sh1 and sh2in an F sub(2)population derived from the cross between Momigaredatsu andDee-Geo-Woo-Gen(Oryza sativa L.)SABRAO J.Breed.Genet.35,57-64.);本发明人经研究认为第4号染色体上的落粒基因的功能是控制脱落的第二步,即控制离层细胞的分离。
发明内容
本发明的目的是提供一个调控植物落粒性的转录因子。
本发明所提供的调控植物落粒性的转录因子,名称为SHATTERING1(简称SHA1),来源于云南元江野生稻(O.rufipogon Griff.),具有下述氨基酸残基序列之一:
1)序列表中的SEQ ID №:1或SEQ ID №:5;
2)将序列表中SEQ ID №:1或SEQ ID №:5的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有调控植物落粒性的蛋白质。
序列表中的SEQ ID №:1和SEQ ID №:5由390个氨基酸残基组成,自氨基端(N端)第59-139位氨基酸残基为Myb DNA-binding结构域,自氨基端第215-274位氨基酸残基为富含脯氨酸区域(proline_rich region)。
编码本发明调控植物落粒性的转录因子的基因(SHATTERING1,简称SHA1),其cDNA是下述核苷酸序列之一:
1)序列表中SEQ ID №:8或SEQ ID №:9的DNA序列;
2)编码序列表中SEQ ID №:1或SEQ ID №:5的DNA序列;
3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №:8或SEQ ID №:9限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
所述高严谨条件为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1%SDS的溶液中,65℃条件下杂交并洗膜。
序列表中的SEQ ID №:8由1173个碱基组成,其编码序列为自5’端第1-1173位碱基,编码具有序列表中SEQ ID №:1的氨基酸残基序列的蛋白质,自5’端第175-417位碱基编码Myb DNA-binding结构域,自5’端第643-822位碱基编码富含脯氨酸区域;序列表中的SEQ ID №:9由1173个碱基组成,其编码序列为自5’端第1-1173位碱基,编码具有序列表中SEQ ID №:5的氨基酸残基序列的蛋白质,自5’端第175-417位碱基编码Myb DNA-binding结构域,自5’端第643-822位碱基编码富含脯氨酸区域。
其基因组基因,是下述核苷酸序列之一:
1)序列表中SEQ ID №:6或SEQ ID №:7的DNA序列;
2)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №:6或SEQ ID №:7限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
所述高严谨条件为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1%SDS的溶液中,65℃条件下杂交并洗膜。
序列表中的SEQ ID №:6由2037个碱基组成,自5′端第1-835位碱基为该基因组基因的第一个外显子,自5′端第836-1699位碱基为该基因组基因的第一个内含子,自5′端第1700-2037位碱基为该基因组基因的第二个外显子,自5′端第1-3位碱基为该基因组基因的起始密码子ATG,自5′端第2035-2037位碱基为该基因组基因的终止密码子TGA;序列表中的SEQ ID №:7由2036个碱基组成,自5′端第1-835位碱基为该基因组基因的第一个外显子,自5′端第836-1699位碱基为该基因组基因的第一个内含子,自5′端第1700-2036位碱基为该基因组基因的第二个外显子,自5′端第1-3位碱基为该基因组基因的起始密码子ATG,自5′端第2034-2036位碱基为该基因组基因的终止密码子TGA。
含有本发明基因的表达载体、转基因细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。
扩增SHATTERING1中任一片段的引物对也在本发明的保护范围之内。
本发明的另一个目的是提供一种调控植物落粒性的方法。
本发明所提供的调控植物落粒性的方法,是将所述编码调控植物落粒性转录因子的基因SHATTERING1导入植物组织或细胞,植物落粒性获得调控。
所述编码调控植物落粒性转录因子的基因SHATTERING1可通过含有SHATTERING1的植物表达载体导入外植体;用于构建所述植物表达载体的出发载体可为任意一种双元农杆菌载体或可用于植物微弹轰击的载体等,如pBI121、pBin19、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300或其它衍生植物表达载体。
使用SHATTERING1构建植物表达载体时,在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子,如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、泛生素基因Ubiquitin启动子(pUbi)等,它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用;此外,使用本发明的基因构建植物表达载体时,还可使用增强子,包括翻译增强子或转录增强子,这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等,但必需与编码序列的阅读框相同,以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的,可以是天然的,也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。
为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选,可对所用植物表达载体进行加工,如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、GFP基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑,可不加任何选择性标记基因,直接以逆境筛选转化植株。
携带有本发明编码调控植物落粒性转录因子的基因SHATTERING1的植物表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织,并将转化的植物细胞或组织培育成植株。被转化的植物宿主可为草坪草、水稻、小麦、大豆、烟草、玉米、油菜、高粱、棉花、苜蓿、葡萄或番茄等植物。
本发明提供了一个调控植物落粒性的转录因子及其编码基因。该转录因子及其编码基因对于落粒分子机制的研究,以及培育落粒性提高的水稻、草坪草及其它作物新品种具有重要的理论及实际意义。本发明在农业领域具有广阔的应用和市场前景。
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
附图说明
图1为扫描电镜下BC3F4-100-5和特青的籽粒脱落断面的结构
图2为BC3F4-100-5和特青的表型
图3为BC3F4-100-5和特青的落粒率比较结果
图4为BC3F4-39-2和BC3F4-100-5的基因型示意图
图5为SHA1的精细定位图
图6为SHA1氨基酸残基序列的BLAST分析结果
图7为普通野生稻、四个籼稻和四个粳稻中SHA1的多态性分析结果
图8为灌浆期云南元江野生稻SHA1的表达模式分析结果
图9为受粉后当天、第5天和第10天云南元江野生稻SHA1的表达模式分析结果
具体实施方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法,所用引物及探针均由上海生工合成。
实施例1、野生稻落粒基因SHATTERING1的获得
首先构建一个以云南元江普通野生稻为供体,籼稻特青为受体,并含有383个单株的F2落粒分离群体,自然落粒的个体与不落粒个体的比例为293∶90,符合3∶1的比例,表明该落粒性状受单基因控制,将此单基因命名为SHATTERING1(简称SHA1);接着选择了1个落粒株与特青进行回交构建了一个高代回交群体(命名为BC3),为了精确描述这个落粒性状,比较其中BC3F4-100-5株系和特青(表型见图2)的落粒率,结果如图3所示,特青的落粒率比BC3F4-100-5降低了近95倍,为了揭示两者落粒率差异巨大的组织学上的原因,现对两者的离层组织进行了扫描电镜观察,如图1所示(A和A1为BC3F4-100-5,B和B1为特青)。在授粉后14天,BC3F4-100-5的籽粒便开始脱落,而特青的籽粒则需人为施加外力才能脱落,通过观察自然脱落和人为施加外力脱落的籽粒断面后发现BC3F4-100-5和特青均能产生离层,所不同的是特青离层细胞壁的强度比前者要大,在施加外力拉花梗时,可将副护颖连同花梗一并扯下,表明离层细胞壁的变异是两者落粒率差异巨大的原因。
为分离SHATTERING1,首先选择BC3F4-39-2,BC3F4-100-5这两个落粒系,两个系在落粒率和其它性状上均表现一致,并且在第4染色体的长臂端上均有元江普通野生稻的渗入片段(基因型见图4),这个片段位于RM348和RM131之间,因此推测SHA1位于第4号染色体上RM348与RM131之间。为了进一步定位这个基因,现以BC3F4-100-5为父本,特青为母本,构建一个大约包含15,000个体的F2群体,从中选择3089个表现为不落粒的个体用于定位。由于RM348与RM131的多态性较差,分别在这两个标记附近找到两个多态性好的标记SP33和RM1113用于定位,标记分析结果表明这两个标记与SHA1紧密连锁,并将其卡于这两个标记之间。接着我们又将SHA1定位于RM6441与RM1113之间,然后根据OSJNBa0043A12这个BAC克隆序列开发出三个标记19E,19K,19Q,并将这个基因压缩在大约50Kb的范围内。为了继续精细定位这个基因,利用19Q(正向引物F:5’-AGACGTGAATGTACGGTAAC-3’;反向引物R:5’-CTTGAGGGATACAACCTTAC-3’)与RM1113(正向引物F:5’-CGAAAGGTCGGCATCTTTC-3’;反向引物R:5’-ATGGCAATGATACGG AGGAG-3’)作为探针,从构建的元江普通野生稻BAC文库中筛选到一个覆盖了从19Q到RM1113这一区段的BAC克隆,命名为B-17-14-10。再用Shot-gun方法对B-17-14-10测序后,开发出了两个标记P1(正向引物F:5’-GTGTGTGGTGTGAATGATCG-3’;反向引物R:5’-CACCCGAGAAGAAAAAACGC-3’)和P2(正向引物F:5’-CCCAGGTTGGGTCTTATCTG-3’;反向引物R:5’-AAGTGCAGCCATGGCTTTCC-3’),最终将SHA1精细定位在5.5Kb的范围内,其精确定位见图5。在对这一区段注释后仅发现一个开放阅读框(ORF),具有序列表中的SEQ ID №:8的核苷酸序列,由1173个碱基组成,编码具有序列表中SEQID №:1的氨基酸残基序列的蛋白质,序列表中的SEQ ID №:1由390个氨基酸残基组成,将该蛋白命名为SHATTERING1(简称SHA1)。该新蛋白拥有一个MybDNA-binding结构域和一个富含脯氨酸区域(proline_rich region),分别位于自氨基端第59-139位氨基酸残基之间和自氨基端第215-274位氨基酸残基之间。对该蛋白的氨基酸残基序列进行BLAST分析(YD2-65、IRGC100204、YD2-0225和特青(Teqing)中相应蛋白的氨基酸残基序列分别为序列表中的SEQ ID №:2、3、4、5),分析结果如图6所示,该新蛋白与拟南芥中的一个表达蛋白(序列号:Atlg31310)高度同源。为了确认这个预测基因是否为目的基因,现比较四个普通野生稻(rufipogon)、四个籼稻(indica)和四个粳稻(japonica)中该假定基因的全长序列后发现了18个多态性位点,其中仅有一个单核苷酸(SNP1)多态性位点能够导致氨基酸残基的变化,并且能将野生型和突变型的这个等位点加以区分,见如图7中的图A。继续比较15个野生稻、23个籼稻和19个粳稻这个SNP1所在区域的序列后证实SNP1完全与这个野生稻野生型和栽培稻的突变型等位点保持一致,即野生型为G,突变型为T,分析结果见图7中的图B,充分说明该基因就是目的基因。通过比较SHA1的基因组DNA和cDNA,野生型稻SHA1的基因组基因具有序列表中SEQ ID №:6的核苷酸序列,栽培稻SHA1的基因组基因具有序列表中SEQ ID №:7的核苷酸序列,序列表中的SEQ ID№:6由2037个碱基组成,自5′端第1-835位碱基为该基因组基因的第一个外显子,自5′端第836-1699位碱基为该基因组基因的第一个内含子,自5′端第1700-2037位碱基为该基因组基因的第二个外显子,自5′端第1-3位碱基为该基因组基因的起始密码子ATG,自5′端第2035-2037位碱基为该基因组基因的终止密码子TGA;序列表中的SEQ ID №:7由2036个碱基组成,自5′端第1-835位碱基为该基因组基因的第一个外显子,自5′端第836-1699位碱基为该基因组基因的第一个内含子,自5′端第1700-2036位碱基为该基因组基因的第二个外显子,自5′端第1-3位碱基为该基因组基因的起始密码子ATG,自5′端第2034-2036位碱基为该基因组基因的终止密码子TGA,SNP1(AAG→AAT,自5’端第235-237位碱基)位于第一个外显子上,导致在Myb DNA-binding结构域内发生了由赖氨酸(K)到天冬氨酸(N)的变化,栽培稻SHA1的cDNA具有序列表中的SEQ ID №:9的核苷酸序列,由1173个碱基组成,编码具有序列表中SEQ ID №:5的氨基酸残基序列的蛋白质,序列表中的SEQ ID №:5由390个氨基酸残基组成。
实施例2、SHA1的表达模式分析
分别在灌浆期,授粉后当天、第5天、第10天提取云南元江野生稻叶、茎、根的RNA,用RT-PCR法分析SHA1在穗子、叶、茎、根中表达情况,所用引物为SP(正向引物F:5’-CAGAACCAGTGCAATGACAAGTGGGACAAC-3’;反向引物R:5’-ATAATCCGATGCCTCGATCCATGCATCTCC-3’),以ACTIN为对照,灌浆期的检测结果如图8中所示(泳道P为花梗(带有离层),泳道R为根,泳道C为茎杆,泳道FL为旗叶),在灌浆期,SHA1在花梗(带有离层)中高表达,而在叶、茎、根中几乎不表达;授粉后当天、第5天和第10天的检测结果如图9所示(W为元江野生稻,M为特青),在水稻籽粒的发育过程中,授粉后第5天,SHA1在花梗中的表达量达到最高,而在授粉当天和授粉后第10天SHA1的表达量都很低。上述表达模式在野生型和突变型植株上是一致的。结合实施例1中的扫描电镜的观察结果,可以确认SHA1是一个控制落粒离层细胞壁发育的转录因子。
序列表
<160>9
<210>1
<211>390
<212>PRT
<213>云南元江野生稻(O.rufipogon Griff.)
<400>1
Met Ser Gly Ser Ser Ala Asp Pro Ser Pro Ser Ala Ser Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Val Ser Pro Leu Ala Leu Leu Arg Ala His Gly His Gly His
20 25 30
Gly His Leu Thr Ala Thr Pro Pro Ser Gly Ala Thr Gly Pro Ala Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ser Gly Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Arg Lys
50 55 60
Gly Asn Trp Thr Leu His Glu Thr Leu Ile Leu Ile Thr Ala Lys Arg
65 70 75 80
Leu Asp Asp Asp Arg Arg Ala Gly Val Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Ser Pro Pro Thr Pro Arg Ser Ala Glu Gln Arg Trp
100 105 110
Lys Trp Val Glu Asn Tyr Cys Trp Lys Asn Gly Cys Leu Arg Ser Gln
115 120 125
Asn Gln Cys Asn Asp Lys Trp Asp Asn Leu Leu Arg Asp Tyr Lys Lys
130 135 140
Val Arg Asp Tyr Glu Ser Arg Val Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ala Ala Ala Asn Ser Ala Pro Leu Pro Ser Tyr Trp Thr Met Glu
165 170 175
Arg His Glu Arg Lys Asp Cys Asn Leu Pro Thr Asn Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Val Tyr Asp Ala Leu Ser Glu Val Leu Ser Arg Arg Ala Ala Arg Arg
195 200 205
Gly Gly Ala Thr Ile Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Leu Ala Leu
210 215 220
Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Pro Lys Pro Leu Val Ala
225 230 235 240
Gln Gln Gln His His His His Gly His His His His Pro Pro Pro Pro
245 250 255
Gln Pro Pro Pro Ser Ser Leu Gln Leu Pro Pro Ala Val Val Ala Pro
260 265 270
Pro Pro Ala Ser Val Ser Ala Glu Glu Glu Met Ser Gly Ser Ser Glu
275 280 285
Ser Gly Glu Glu Glu Glu Gly Ser Gly Gly Glu Pro Glu Ala Lys Arg
290 295 300
Arg Arg Leu Ser Arg Leu Gly Ser Ser Val Val Arg Ser Ala Thr Val
305 310 315 320
Val Ala Arg Thr Leu Val Ala Cys Glu Glu Lys Arg Glu Arg Arg His
325 330 335
Arg Glu Leu Leu Gln Leu Glu Glu Arg Arg Leu Arg Leu Glu Glu Glu
340 345 350
Arg Thr Glu Val Arg Arg Gln Gly Phe Ala Gly Leu Ile Ala Ala Val
355 360 365
Asn Ser Leu Ser Ser Ala Ile His Ala Leu Val Ser Asp His Arg Ser
370 375 380
Gly Asp Ser Ser Gly Arg
385 390
<210>2
<211>390
<212>PRT
<213>江西东乡野生稻(O.rufipogon Griff.)
<400>2
Met Ser Gly Ser Ser Ala Asp Pro Ser Pro Ser Ala Ser Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Val Ser Pro Leu Ala Leu Leu Arg Ala His Gly His Gly His
20 25 30
Gly His Leu Thr Ala Thr Pro Pro Ser Gly Ala Thr Gly Pro Ala Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ser Gly Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Arg Lys
50 55 60
Gly Asn Trp Thr Leu His Glu Thr Leu Ile Leu Ile Thr Ala Lys Arg
65 70 75 80
Leu Asp Asp Asp Arg Arg Ala Gly Val Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Ser Pro Pro Thr Pro Arg Ser Ala Glu Gln Arg Trp
100 105 110
Lys Trp Val Glu Asn Tyr Cys Trp Lys Asn Gly Cys Leu Arg Ser Gln
115 120 125
Asn Gln Cys Asn Asp Lys Trp Asp Asn Leu Leu Arg Asp Tyr Lys Lys
130 135 140
Val Arg Asp Tyr Glu Ser Arg Val Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ala Ala Ala Asn Ser Ala Pro Leu Pro Ser Tyr Trp Thr Met Glu
165 170 175
Arg His Glu Arg Lys Asp Cys Asn Leu Pro Thr Asn Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Val Tyr Asp Ala Leu Ser Glu Val Leu Ser Arg Arg Ala Ala Arg Arg
195 200 205
Gly Gly Ala Thr Ile Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Leu Ala Leu
210 215 220
Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Pro Lys Pro Leu Val Ala
225 230 235 240
Gln Gln Gln His His His His Gly His His His His Pro Pro Pro Pro
245 250 255
Gln Pro Pro Pro Ser Ser Leu Gln Leu Pro Pro Ala Val Val Ala Pro
260 265 270
Pro Pro Ala Ser Val Ser Ala Glu Glu Glu Met Ser Gly Ser Ser Glu
275 280 285
Ser Gly Glu Glu Glu Glu Gly Ser Gly Gly Glu Pro Glu Ala Lys Arg
290 295 300
Arg Arg Leu Ser Arg Leu Gly Ser Ser Val Val Arg Ser Ala Thr Val
305 310 315 320
Val Ala Arg Thr Leu Val Ala Cys Glu Glu Lys Arg Glu Arg Arg His
325 330 335
Arg Glu Leu Leu Gln Leu Glu Glu Arg Arg Leu Arg Leu Glu Glu Glu
340 345 350
Arg Thr Glu Val Arg Arg Gln Gly Phe Ala Gly Leu Ile Ala Ala Val
355 360 365
Asn Ser Leu Ser Ser Ala Ile His Ala Leu Val Ser Asp His Arg Ser
370 375 380
Gly Asp Ser Ser Gly Arg
385 390
<210>3
<211>391
<212>PRT
<213>印度野生稻(O.rufipogon Griff)
<400>3
Met Ser Gly Ser Ser Ala Asp Pro Ser Pro Ser Ala Ser Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Val Ser Pro Leu Ala Leu Leu Arg Ala His Gly His Gly His
20 25 30
Gly His Leu Thr Ala Thr Pro Pro Ser Gly Ala Thr Gly Pro Ala Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ser Gly Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Arg Lys
50 55 60
Gly Asn Trp Thr Leu His Glu Thr Leu Ile Leu Ile Thr Ala Lys Arg
65 70 75 80
Leu Asp Asp Asp Arg Arg Ala Gly Val Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Ser Pro Pro Thr Pro Arg Ser Ala Glu Gln Arg Trp
100 105 110
Lys Trp Val Glu Asn Tyr Cys Trp Lys Asn Gly Cys Leu Arg Ser Gln
115 120 125
Asn Gln Cys Asn Asp Lys Trp Asp Asn Leu Leu Arg Asp Tyr Lys Lys
130 135 140
Val Arg Asp Tyr Glu Ser Arg Val Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ala Ala Ala Asn Ser Ala Pro Leu Pro Ser Tyr Trp Thr Met Glu
165 170 175
Arg His Glu Arg Lys Asp Cys Asn Leu Pro Thr Asn Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Val Tyr Asp Ala Leu Ser Glu Val Leu Ser Arg Arg Ala Ala Arg Arg
195 200 205
Gly Gly Ala Thr Ile Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Leu Ala Leu
210 215 220
Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Pro Lys Pro Leu Val
225 230 235 240
Ala Gln Gln Gln His His His His Gly His His His His Pro Pro Pro
245 250 255
Pro Gln Pro Pro Pro Ser Ser Leu Gln Leu Pro Pro Ala Val Val Ala
260 265 270
Pro Pro Pro Ala Ser Val Ser Ala Glu Glu Glu Met Ser Gly Ser Ser
275 280 285
Glu Ser Gly Glu Glu Glu Glu Gly Ser Gly Gly Glu Pro Glu Ala Lys
290 295 300
Arg Arg Arg Leu Ser Arg Leu Gly Ser Ser Val Val Arg Ser Ala Thr
305 310 315 320
Val Val Ala Arg Thr Leu Val Ala Cys Glu Glu Lys Arg Glu Arg Arg
325 330 335
His Arg Glu Leu Leu Gln Leu Glu Glu Arg Arg Leu Arg Leu Glu Glu
340 345 350
Glu Arg Thr Glu Val Arg Arg Gln Gly Phe Ala Gly Leu Ile Ala Ala
355 360 365
Val Asn Ser Leu Ser Ser Ala Ile His Ala Leu Val Ser Asp His Arg
370 375 380
Ser Gly Asp Ser Ser Gly Arg
385 390
<210>4
<211>390
<212>PRT
<213>广西玉桂野生稻(O.rufipogon Griff)
<400>4
Met Ser Gly Ser Ser Ala Asp Pro Ser Pro Ser Ala Ser Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Val Ser Pro Leu Ala Leu Leu Arg Ala His Gly His Gly His
20 25 30
Gly His Leu Thr Ala Thr Pro Pro Ser Gly Ala Thr Gly Pro Ala Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ser Gly Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Arg Lys
50 55 60
Gly Asn Trp Thr Leu His Glu Thr Leu Ile Leu Ile Thr Ala Lys Arg
65 70 75 80
Leu Asp Asp Asp Arg Arg Ala Gly Val Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Ser Pro Pro Thr Pro Arg Ser Ala Glu Gln Arg Trp
100 105 110
Lys Trp Val Glu Asn Tyr Cys Trp Lys Asn Gly Cys Leu Arg Ser Gln
115 120 125
Asn Gln Cys Asn Asp Lys Trp Asp Asn Leu Leu Arg Asp Tyr Lys Lys
130 135 140
Val Arg Asp Tyr Glu Ser Arg Val Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ala Ala Ala Asn Ser Ala Pro Leu Pro Ser Tyr Trp Thr Met Glu
165 170 175
Arg His Glu Arg Lys Asp Cys Asn Leu Pro Thr Asn Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Val Tyr Asp Ala Leu Ser Glu Val Leu Ser Arg Arg Ala Ala Arg Arg
195 200 205
Gly Gly Ala Thr Ile Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Leu Ala Leu
210 215 220
Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Pro Lys Pro Leu Val Ala
225 230 235 240
Gln Gln Gln His His His His Gly His His His His Pro Pro Pro Pro
245 250 255
Gln Pro Pro Pro Ser Ser Leu Gln Leu Pro Pro Ala Val Val Ala Pro
260 265 270
Pro Pro Ala Ser Val Ser Ala Glu Glu Glu Met Ser Gly Ser Ser Glu
275 280 285
Ser Gly Glu Glu Glu Glu Gly Ser Gly Gly Glu Pro Glu Ala Lys Arg
290 295 300
Arg Arg Leu Ser Arg Leu Gly Ser Ser Val Val Arg Ser Ala Thr Val
305 310 315 320
Val Ala Arg Thr Leu Val Ala Cys Glu Glu Lys Arg Glu Arg Arg His
325 330 335
Arg Glu Leu Leu Gln Leu Glu Glu Arg Arg Leu Arg Leu Glu Glu Glu
340 345 350
Arg Thr Glu Val Arg Arg Gln Gly Phe Ala Gly Leu Ile Ala Ala Val
355 360 365
Asn Ser Leu Ser Ser Ala Ile His Ala Leu Val Ser Asp His Arg Ser
370 375 380
Gly Asp Ser Ser Gly Arg
385 390
<210>5
<211>390
<212>PRT
<213>特青(O.sativa ssp.Indica)
<400>5
Met Ser Gly Ser Ser Ala Asp Pro Ser Pro Ser Ala Ser Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Val Ser Pro Leu Ala Leu Leu Arg Ala His Gly His Gly His
20 25 30
Gly His Leu Thr Ala Thr Pro Pro Ser Gly Ala Thr Gly Pro Ala Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ser Gly Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Arg Lys
50 55 60
Gly Asn Trp Thr Leu His Glu Thr Leu Ile Leu Ile Thr Ala Asn Arg
65 70 75 80
Leu Asp Asp Asp Arg Arg Ala Gly Val Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Ser Pro Pro Thr Pro Arg Ser Ala Glu Gln Arg Trp
100 105 110
Lys Trp Val Glu Asn Tyr Cys Trp Lys Asn Gly Cys Leu Arg Ser Gln
115 120 125
Asn Gln Cys Asn Asp Lys Trp Asp Asn Leu Leu Arg Asp Tyr Lys Lys
130 135 140
Val Arg Asp Tyr Glu Ser Arg Val Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ala Ala Ala Asn Ser Ala Pro Leu Pro Ser Tyr Trp Thr Met Glu
165 170 175
Arg His Glu Arg Lys Asp Cys Asn Leu Pro Thr Asn Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Val Tyr Asp Ala Leu Ser Glu Val Leu Ser Arg Arg Ala Ala Arg Arg
195 200 205
Gly Gly Ala Thr Ile Ala Pro Thr Pro Pro Pro Pro Pro Leu Ala Leu
210 215 220
Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Pro Lys Pro Leu Val Ala
225 230 235 240
Gln Gln Gln His His His His Gly His His His His Pro Pro Pro Pro
245 250 255
Gln Pro Pro Pro Ser Ser Leu Gln Leu Pro Pro Ala Val Val Ala Pro
260 265 270
Pro Pro Ala Ser Val Ser Ala Glu Glu Glu Met Ser Gly Ser Ser Glu
275 280 285
Ser Gly Glu Glu Glu Glu Gly Ser Gly Gly Glu Pro Glu Ala Lys Arg
290 295 300
Arg Arg Leu Ser Arg Leu Gly Ser Ser Val Val Arg Ser Ala Thr Val
305 310 315 320
Val Ala Arg Thr Leu Val Ala Cys Glu Glu Lys Arg Glu Arg Arg His
325 330 335
Arg Glu Leu Leu Gln Leu Glu Glu Arg Arg Leu Arg Leu Glu Glu Glu
340 345 350
Arg Thr Glu Val Arg Arg Gln Gly Phe Ala Gly Leu Ile Ala Ala Val
355 360 365
Asn Ser Leu Ser Ser Ala Ile His Ala Leu Val Ser Asp His Arg Ser
370 375 380
Gly Asp Ser Ser Gly Arg
385 390
<210>6
<211>2037
<212>DNA
<213>云南元江野生稻(O.rufipogon Griff.)
<400>6
atgtcgggct cctctgccga cccctcgcca tccgcctcga ccgcgggggc ggcggtctcg 60
ccgctcgcgc tgctccgcgc gcacggccac ggccacgggc acctgactgc tacgccgccg 120
tcgggggcga cggggccggc gccgccgccg ccgtcgccgg cgtcggggtc ggcgccgcgg 180
gactaccgca aggggaactg gacgctgcac gagacgctca tcctcatcac cgccaagcgt 240
ctggacgacg accgccgcgc cggcgttggg ggcgcggcgg ctggtggcgg cggcgccggg 300
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gactacaaga aggtccgcga ctacgagtcc cgcgtcgccg ccgccgccgc caccggcggc 480
gcggccgccg ccaactccgc ccccctcccg tcgtactgga cgatggagcg gcacgagcgc 540
aaggactgca acctccccac caacctggcg ccggaggtct acgacgcgct ctccgaggtg 600
ctctcccgcc gcgcggcgcg acgcggcggc gccacgatcg cgcccacccc gccgccacca 660
ccgctcgcgc tgccgctgcc gccgccgccg ccgccctcgc cgccgaagcc tctcgtcgcg 720
cagcagcagc accaccatca cggccatcac caccacccac ctcctcctca gccgccgccg 780
tcgtcgctgc agctccctcc ggcggtcgtg gctccgccgc cggcgtccgt ttccggtaat 840
ggtcggtgcg cgcaccgtac acttaatact catagtagct gttacatccc ctcccctcca 900
aaccatttac tactgttctc tcacactgat atgtggggcc cacctcgcag cgagctgagc 960
tccgccacta tacgttatta aaagcccgcg ttatgattgg gctagttacg ttgatgagtt 1020
gagctggtcg taattattta ctaccgctac atttttttta cctttttacc gtggggttcg 1080
ggagagggtg gtcgcggtaa taataatgtc ctcaactcag gggttgggag aataaagctg 1140
cgtgcagtgt ggtgcagttc atgcatggga aaggtgatgc gaatccggat attttatggg 1200
ggtttaattg aaagatttac tccacgacga tactaccctc tactcctgcc atgctgcaag 1260
catgcgtaat gcgttacatt gcgaaatcac tcgctttgaa agaaaaaaaa gcctgaaact 1320
ttggagaaaa aaaaagcacc ttttgttttc tcctcgtgca tgcatgccgc gctgcgtatc 1380
ttgaactact ttggactttt gtatcgatca acaaaactat acctatatta gcagtaatta 1440
atactacatt tgtagatatc ctttgaccgt tctatcttat ttttgataat taaaaaaatt 1500
agttacattt aaaaatgcta tttatatttt attatctaat aacaataagt gtattagtta 1560
aatattaaac gttggatatg aatagtttaa aacgttggat atgaatagtt taaaactgta 1620
ttgttttggg gcggagtgag taattgattg atcgattaat taagtggttg actaatgtgt 1680
gtgtgattta tttgtgtagc ggaggaggag atgtcggggt cgtcggagtc gggggaggag 1740
gaggaggggt cgggcgggga gccggaggcg aagcggcggc ggctgagccg gctggggtcg 1800
agcgtggtga ggagcgcgac ggtggtggcg aggacgctgg tggcgtgcga ggagaagcgg 1860
gagcgccggc accgggagct gctgcagctg gaggagcggc ggctgcgcct cgaggaggag 1920
cgcaccgagg tccgccgcca gggcttcgcc ggcctcatcg ccgccgtcaa cagcctctcc 1980
tccgccatcc acgccctcgt ctccgaccac cgcagcggcg actcctccgg ccgatga 2037
<210>7
<211>2036
<212>DNA
<213>特青(O.sativa ssp.indica)
<400>7
atgtcgggct cctctgccga cccctcgcca tccgcctcga ccgcgggggc ggcggtctcg 60
ccgctcgcgc tgctccgcgc gcacggccac ggccacgggc acctgactgc tacgccgccg 120
tcgggggcga cggggccggc gccgccgccg ccgtcgccgg cgtcggggtc ggcgccgcgg 180
gactaccgca aggggaactg gacgctgcac gagacgctca tcctcatcac cgccaatcgt 240
ctggacgacg accgccgcgc cggcgttggg ggcgcggcgg ctggtggcgg cggcgccggg 300
tcgccgccga cgccgaggtc ggcggagcag cggtggaagt gggtggagaa ctactgctgg 360
aagaacggct gcctccgcag ccagaaccag tgcaatgaca agtgggacaa cctcctccgc 420
gactacaaga aggtccgcga ctacgagtcc cgcgtcgccg ccgccgccgc caccggcggc 480
gcggccgccg ccaactccgc ccccctcccg tcgtactgga cgatggagcg gcacgagcgc 540
aaggactgca acctccccac caacctggcg ccggaggtct acgacgcgct ctccgaggtg 600
ctctcccgcc gcgcggcgcg acgcggcggc gccacgatcg cgcccacccc gccgccacca 660
ccgctcgcgc tgccgctgcc gccgccgccg ccgccctcgc cgccgaagcc tctcgtcgcg 720
cagcagcagc accaccatca cggccatcac caccacccac ctcctcctca gccgccgccg 780
tcgtcgctgc agctccctcc ggcggtcgtg gctccgccgc cggcgtccgt ttccggtaat 840
ggtcggtgcg cgcaccgtac acttaatact catagtagct gttacatccc ctcccctcca 900
aaccatttac tactgttctc tcacactgat atgtgggccc acctcgcagc gagctgagct 960
ccgccactat acgttattaa aagcccgcgt tatgattggg ctagttacgt tgttgagttg 1020
agctggtcgt aattatttac taccgctaca ttttttttac ctttttaccg tggggttcgg 1080
gagagggtgg tcgcggtaat aataatgtcc tcaactcagg ggttgggaga ataaagctgc 1140
gtgcagtgtg gtgcagttca tgcatgggaa aggtgatgcg aatccggata ttttatgggg 1200
gtttaattga aagatttact ccacgacgat actaccctct actcctgcca tgctgcaagc 1260
atgcgtaatg cgttacattg cgaaatcact cgctttgaat gaaaaaaaag cctgaaactt 1320
tggagaaaaa aaaagcacct tttgttttct cctcgtgcat gcatgccgcg ctgcgtatct 1380
tgaactactt tggacttttg tatcgatcaa caaaactata cctatattag cagtaattaa 1440
tactacattt gtagatatcc tttgaccgtt ctatcttatt tttgataatt aaaaaaatta 1500
gttacattta aaaatgctat ttatatttta ttatctaata acaataagtg tattagttaa 1560
atattaaacg ttggatatga atagtttaaa acgttggata tgaatagttt aaaactgtat 1620
tgttttgggg cggagtgagt aattgattga tcgattaatt aagtggttga ctaatgtgtg 1680
tgtgatttat ttgtgtagcg gaggaggaga tgtcggggtc gtcggagtcg ggggaggagg 1740
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<210>8
<211>1173
<212>cDNA
<213>云南元江野生稻(O.rufipogon Griff.)
<400>8
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ccgctcgcgc tgctccgcgc gcacggccac ggccacgggc acctgactgc tacgccgccg 120
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tcgccgccga cgccgaggtc ggcggagcag cggtggaagt gggtggagaa ctactgctgg 360
aagaacggct gcctccgcag ccagaaccag tgcaatgaca agtgggacaa cctcctccgc 420
gactacaaga aggtccgcga ctacgagtcc cgcgtcgccg ccgccgccgc caccggcggc 480
gcggccgccg ccaactccgc ccccctcccg tcgtactgga cgatggagcg gcacgagcgc 540
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ctctcccgcc gcgcggcgcg acgcggcggc gccacgatcg cgcccacccc gccgccacca 660
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cagctggagg agcggcggct gcgcctcgag gaggagcgca ccgaggtccg ccgccagggc 1080
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gaccaccgca gcggcgactc ctccggccga tga 1173
<210>9
<211>1173
<212>cDNA
<213>特青(O.sativa ssp.indica)
<400>9
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ctggacgacg accgccgcgc cggcgttggg ggcgcggcgg ctggtggcgg cggcgccggg 300
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ttcgccggcc tcatcgccgc cgtcaacagc ctctcctccg ccatccacgc cctcgtctcc 1140
gaccaccgca gcggcgactc ctccggccga tga 1173
Claims (9)
1、调控植物落粒性的转录因子,具有下述氨基酸残基序列之一:
1)序列表中的SEQ ID №:1或SEQ ID №:5;
2)将序列表中SEQ ID №:1或SEQ ID №:5的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有调控植物落粒性的蛋白质。
2、根据权利要求1所述的转录因子,其特征在于:所述转录因子具有序列表中SEQ ID №:1或SEQ ID №:5的氨基酸残基序列。
3、编码权利要求1所述的调控植物落粒性的转录因子的基因,其cDNA是下述核苷酸序列之一:
1)序列表中SEQ ID №:8或SEQ ID №:9的DNA序列;
2)编码序列表中SEQ ID №:1或SEQ ID №:5的DNA序列;
3)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №:8或SEQ ID №:9限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
4、根据权利要求3所述的基因,其特征在于:所述cDNA具有序列表中SEQ ID №:8或SEQ ID №:9的DNA序列。
5、编码权利要求1所述的调控植物落粒性的转录因子的基因,其基因组基因是下述核苷酸序列之一:
1)序列表中SEQ ID №:6或SEQ ID №:7的DNA序列;
2)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID №:6或SEQ ID №:7限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
6、含有权利要求3或4或5所述基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。
7、一种调控植物落粒性的方法,是将权利要求3所述的编码调控植物落粒性的转录因子的基因导入植物组织或细胞,植物落粒性获得调控。
8、根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述编码调控植物落粒性的转录因子的基因通过含有所述基因的植物表达载体导入外植体;用于构建所述植物表达载体的出发载体为pBI121、pBin19、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301或pCAMBIA1300。
9、根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述被转化的植物宿主为草坪草、水稻、小麦、大豆、烟草、玉米、油菜、高粱、棉花、苜蓿、大麦、葡萄或番茄。
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CN108588259A (zh) * | 2018-05-08 | 2018-09-28 | 中国农业大学 | 与非洲稻落粒相关的插入缺失片段及其应用 |
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2006
- 2006-03-15 CN CNB2006100598345A patent/CN100372868C/zh not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009145290A1 (ja) * | 2008-05-29 | 2009-12-03 | 独立行政法人農業生物資源研究所 | sh4遺伝子を含む、植物体の穀粒サイズを増大させた植物体 |
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