CN1772136A - 一种用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物，该药物组合物由如下重量份的原料药制成：三七1～50份，虎杖1～50份，川乌1～50份，天南星1～50份，独活1～50份，当归1～50份，续断1～50份，干姜1～50份，辣椒1～50份，丁香罗勒油1～50份，松节油1～50份，薄荷脑1～50份，樟脑1～50份，冰片1～50份。本发明的药物组合以及制成的制剂具有活血散瘀，疏经活络，消肿止痛等功效，用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病引起的肿胀疼痛等症，且所制成的药物呈淡黄色半固体，气清香，膏体细腻，易于涂布，易于清洗，不会污染衣物。

Description

一种用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于治疗肿胀疼痛等症的药物组合物及其制备方法。

背景技术

骨伤科软组织损伤及骨关节病变，常以局部肿胀疼痛为主要特征，是中医常见痛证，常由运动不当，跌打损伤，工作劳伤及风寒湿邪侵袭筋脉骨肉等引起，在日常生活中经常发生。随着交通、建筑、工矿业的迅猛发展，人们生活节奏的加快，各种扭挫伤、骨折、脱位的发病率逐年增加，软组织损伤的病例日渐增加。据统计软组织损伤的病人以每年6～9％的速度增加，给患者个人及国家造成巨大的经济损失。因此，患者对软组织损伤的药物有着迫切的需要。

中医对骨伤科软组织损伤及骨关节病变的治疗药物的剂型主要为黑膏药，生产时应用铅丹等重金属，污染环境，近几年已无法安排生产。近年制成的橡皮硬膏剂，在生产时应用汽油作为溶剂，生产易爆，需防爆车间进行生产，也污染环境，应用时透气性不好，常致过敏。现有的其他外用剂型也存在着膏体色黑粗，不易涂布，且污染衣物，不易清洗的缺点。因此，开发用于治疗骨伤科软组织损伤及骨关节病作用的新剂型药物具有广阔的市场前景和巨大的社会效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种涂布方便、色淡味清、易于清洗且不会污染衣物的用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物及制备方法。

为达上述目的，本发明的药物组合物由下列重量份的原料药制成：

三七1～50份，虎杖1～50份，川乌1～50份，天南星1～50份，独活1～50份，当归1～50份，续断1～50份，干姜1～50份，辣椒1～50份，丁香罗勒油1～50份，松节油1～50份，薄荷脑1～50份，樟脑1～50份，冰片1～50份。

本发明的优选方案是，所述的原料药的重量份为：

三七25份，虎杖25份，川乌20份，天南星20份，独活16份，当归10份，续断10份，干姜10份，辣椒10份，丁香罗勒油10份，松节油16份，薄荷脑26份，樟脑13份，冰片13份。

方中以三七，川乌二药为君，三七甘苦而温，入肝经，功能化瘀止血，活血定痛，既能止血又能散瘀，有止血而不留瘀，化瘀而不伤正之特点，用于各种血证，尤以有瘀滞者为宜，乃活血化瘀止痛之要药；川乌辛苦而温，入心肝肾经，功能祛风除湿，散寒止痛，《本草纲目》：“主大风顽痹。”是治寒湿痹痛之要药。二药合用，一以活血化瘀止血而止痛，用于跌打损伤，局部扭挫所致的瘀肿疼痛；一以祛风散寒除湿而止痛，用于风寒湿侵，凝滞经脉所致的重着疼痛。配以丁香油，当归，独活三药为臣，其中丁香油，辛温发散，芳香走窜，行气止痛，是寓活血先行气，气行则血行之意；当归味甘辛苦而性温，入心肝脾经，既能助三七活血消肿止痛之力，又能补血生肌，有祛瘀而不伤正之妙，又是血中气药，使气行血畅；独活辛苦而温，归肝及膀胱经，既能苦燥骨节之风寒湿邪，又善辛散外透，使风寒湿邪从足太阳经外解，与川乌同用则祛风除湿，散寒止痛之功益甚；方中虎杖苦寒，归肝胆肺经，有活血祛瘀止痛之功；天南星苦辛而温，归肺肝脾经，外用消肿散结止痛，亦有祛风解痉之功；续断甘辛微温，归肝肾经，能通行血脉，消肿止痛而治风湿痹痛，又能补肝肾，强筋骨，疗伤续折，用于肝肾不足，腰痛脚弱，及跌扑损伤，骨折，肿痛等；干姜辛热燥烈，归脾胃心肺经，温中散寒，回阳通脉，取其能“发诸经之寒气”以助川乌独活祛邪之力；辣椒亦为辛热散寒止痛之品，以上五味共为佐药用之。松节油，芳香辛散，祛风散寒，通络止痛；樟脑，薄荷脑为樟树及薄荷之精华，芳香走窜，善达肌腠，畅营卫，透骨节，既可祛风散邪又可疏畅腠理，通经达络，而起消肿止痛之效；冰片为龙脑香之结晶，内服芳香开窍，外用消肿止痛，善治各种疼痛，以上四味，辛温发散而散寒除湿，芳香走窜而疏经通络，透达腠理而疗伤止痛，亦为佐药用之。此外冰片，薄荷脑取其芳香透达，疏通营卫，引药直达病所，故兼为使药之用。综观全方，以活血化瘀通络与祛风散寒除湿并重，活血不忘行气，祛邪不忘扶正，君臣有序，配伍严谨，诸药合用，共奏活血化瘀，疏经通络，消肿止痛之功，使之营卫通达，气血调和，邪去正安，则瘀肿自消，疼痛乃平，诸症皆除矣。

上述药物组合物可以加入促皮吸收剂、基质和防腐剂等辅料或赋形剂制成临床可接受的剂型如外用膏剂、雾化剂、搽剂、膜剂、凝胶剂等，上述的药物组合物还可以添加适当的辅料制成散剂。

本发明的药物组合物的制备方法包括以下步骤：

a)、取以上十四味原料药中的独活、当归、干姜，粉碎成20～60目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与10～80份甘油、1～10份苯甲酸钠、10～50份卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将5～50份氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得到半固体状药物。

本发明的原料药通过以上制备工艺。

以下分别说明本发明的药物组合物各种常用剂型的制剂过程：

(1)、外用软膏剂的制备：取所得的半固体状药物，称重，加适量的辅料，混匀，得到外用软膏。通常使用的辅料为纯化水。

(2)、雾化剂的制备：取所得的半固体状药物，称重，加适量的辅料，制成雾化剂。通常使用的辅料为抛射剂。

(3)、搽剂的制备：取得到的半固体状药物，加入适量辅料，制成搽剂。通常使用的辅料为40～80％浓度的乙醇。

(4)、膜剂的制备：取得到的半固体状药物，加入适量的辅料，制成膜剂。通常使用的辅料为聚乙烯醇、丙烯酸树脂类、纤维素及其它天然高分子材料。

(5)、凝胶剂的制备：取得到的半固体状药物，加入适量的辅料，制成凝胶剂。通常使用的辅料是卡波姆。

(6)、散剂的制备：a)、取以上十四味药，将其中的独活、当归、干姜、虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒粉碎成100～200目细粉；

b)、将氮酮与松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油等混合，成油相；

c)、将油相与药材细粉混匀，制成散剂。

本发明的优点是：所制成的药物呈淡黄色半固体，气清香，膏体细腻，易于涂布，易于清洗，不会污染衣物。

本发明的药物组合物具有以下药理作用：对醋酸腹腔注射以及热刺激所致小鼠疼痛均有明显的镇痛作用。对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高以及大鼠角叉菜胶足趾肿胀、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀等急性炎症模型均有明显抑制作用；对大鼠棉球肉芽肿的亚急性炎症模型也有一定的抑制作用。能促进小鼠皮下血斑吸收，显著减少血斑面积并缩短血斑消失时间，并能缩短大鼠创伤性瘀斑消褪时间。可降低血瘀模型大鼠全血粘度和血浆粘度；且能明显扩张家兔耳廓静脉血管口径，具有改善微循环作用；本药物组合物以上药理作用为其临床用于软组织损伤及骨关节病引起的肿胀疼痛提供了实验依据。

下面结合一些试验进一步来说明本发明的效果：

实验一、镇痛试验

1.1试验材料

1.1.1受试药物：本发明的药物组合物的外用软膏剂：其中0.224g生药/g 软膏；批号：BN20040809；由广州中医药大学新药中心提供。正骨水：广西玉林制药有限责任公司生产，批号421117。硫化钡：上海国药集团化学试剂有限公司，批号：F20040529；空白对照药：空白基质，由广州中医药大学新药中心提供。

1.1.2试验剂量：本发明的药物组合物的外用软膏剂(0.224g生药/g)，成人临床每日4次，一次2g，即每天最大用量为1.79g生药/d，以成人体重60kg计，平均用药剂量为0.0299g生药/kg/d。本试验小鼠低、中、高三个剂量组，分别设为0.3、0.6、1.2g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的10、20、40倍(按体重计算)。

1.1.3动物：NIH小鼠，(合格证号20030001)，由广州中医药大学实验动物中心提供。SPF级，正常饲养3天后供试。

1.2方法和结果

1.2.1对热刺激所致小鼠疼痛的影响(热板法)

NIH小鼠60只，雌性，体重18～22g，选取基础痛阈在5～30s之间的小鼠60只(从将小鼠置于热板温度为55±0.5℃上至小鼠开始舔后足的时间作为基础痛阈)随机分成5组，即空白基质对照组、正骨水阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组，每天涂药1次(给药前一天用8％硫化钡脱毛)，空白对照组涂等量的基质，连续3天，末次给药后，测量药后0.5、1.0、2.0h的小鼠痛阈，计算痛阈提高百分率，比较各组间差异。结果见表1。

表1结果表明：本发明的药物组合物的外用软膏高剂量可显著提高0.5～2h小鼠痛阈提高百分率(P＜0.05～0.01)，中剂量可显著提高药后1～2h小鼠痛阈提高百分率(P＜0.05～0.01)，低剂量则可提高药后1h小鼠痛阈提高百分率(P＜0.05)；正骨水可显著提高药后0.5～2h小鼠痛阈提高百分率(P＜0.05～0.01)。提示本发明的药物组合物的外用软膏剂具有镇痛作用。

               表1本发明的药物组合物软膏对热刺激所致小鼠疼痛的影响( x±s)

组别	动物数只	剂量g生药/kg	痛阈提高百分率(％)
						0.5h	1h	2h
			空白正骨水本发明软膏本发明软膏本发明软膏	1212121212	-10ml0.30.61.2				6.95±5.2312.85±7.98*11.13±5.5814.75±12.6518.15±11.42**	7.21±4.0122.28±15.70**12.45±6.29*18.21±9.83**22.13±13.05**	15.30±11.4238.31±27.19*26.94±14.6328.66±15.15*31.91±19.18*

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

1.2.2对醋酸所致小鼠疼痛的影响(扭体法)

选取健康雄性小鼠60只，体重为18～22g，随机分成5组，即空白基质对照组、正骨水阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组，每天涂药1次(给药前一天用8％硫化钡脱毛)，空白对照组涂等量的基质，连续3天，末次涂药后(实验时，小鼠先禁食12小时)1小时腹腔注射0.8％醋酸生理盐水溶液0.2ml/只，观察记录当注射醋酸到出现扭体的时间及20分钟内小鼠的扭体次数，比较各组差异。结果见表2。

                   表2本发明软膏对醋酸所致小鼠疼痛的影响( x±s)

组别	动物数只	剂量g生药/kg	出现时间(秒)	20分钟扭体次数
					空白正骨水本发明软膏本发明软膏本发明软膏	1212121212	-10ml0.30.61.2	243.83±48.46286.17±32.01*277.33±30.15284.33±28.59*320.42±83.58*	41.25±7.331.25±12.10*34.83±7.73*33.33±7.80*32.33±11.70*

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05

从表2结果可见，本发明软膏低、中、高剂量均能显著减少醋酸所致小鼠扭体次数(P＜0.05)及中、高剂量能延长扭体出现的时间(P＜0.05)；正骨水亦能显著减少小鼠的扭体次数及延长扭体出现的时间(P＜0.05)。提示本发明软膏具有镇痛作用。

实验二、抗炎试验

2.1试验材料

2.1.1受试药物：本发明软膏：0.224g生药/g 软膏；批号：BN20040809；由广州中医药大学新药中心提供，阳性对照药：肤轻松软膏：规格：2.5mg/10g，由天津药业集团有限公司生产，批号04086005。空白对照药：空白基质，由广州中医药大学新药中心提供；二甲苯：化学纯，广州化学试剂厂，批号：0203428；角叉菜胶：为Sigma公司产品，伊文思蓝：Sigma公司产品；醋酸：上海试剂一厂生产，批号：0103521。

2.1.2试验剂量：本发明软膏(0.224g生药/g)，成人临床每日4次，一次2g，即每天最大用量为1.79g生药/d，以成人体重60kg计，平均用药剂量为0.0299生药/kg/d。本试验小鼠低、中、高三个剂量组，分别设为0.3、0.6、1.2g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的10、20、40倍(按体重计算)；大鼠低、中、高三个剂量组，分别设为0.15、0.3、0.6g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的5、10、20倍(按体重计算)。

2.1.3动物：NIH小鼠(合格证号20030001)；SD大鼠(合格证号20030001)，均由广州中医药大学实验动物中心提供。SPF级，正常饲养3天后供试。

2.1.3仪器：BS110S电子天平：Sartorius公司产品；722光栅分光光度计：上海精密科学仪器有限公司。毛细管放大法测量装置。

2.2方法和结果

2.2.1对小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

取NIH小鼠60只，体重18～22g，雄性，随机分成5组，即空白基质对照组、肤轻松阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组，每天涂药1次(给药前一天用8％硫化钡脱毛)，空白对照组涂等量的基质，连续3天，末次给药后1h，各鼠尾静脉注射2％伊文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g体重，立即腹腔注射0.8％醋酸生理盐水溶液0.2ml/只，20min后脱臼处死小鼠，剖开腹腔，用5ml生理盐水冲洗数次，收集洗液，离心，取上清液在分光光度计590nm处测OD值，比较各组间差异。结果见表3。

表3本发明软膏对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响( x±s)

组别	动物数只	剂量g生药/kg	OD值
				空白基质肤轻松本发明软膏本发明软膏本发明软膏	1212121212	-1.25mg0.30.61.2	0.391±0.1450.242±0.077.**0.289±0.058*0.260±0.063**0.253±0.064**

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表3结果表明：本发明软膏高、中、低剂量组能显著抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高(P＜0.01～0.05)，并呈量效关系；肤轻松亦可显著抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高(P＜0.01)。提示本发明软膏有抑制炎症渗出作用。

2.2.2对大鼠角叉菜胶足趾肿胀的影响

选取SD大鼠50只，雄性，体重为150～160g，随机分成5组，即空白基质对照组、肤轻松阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组，试验前每鼠左后足踝关节处用记号笔作一清晰横线，用毛细管放大法测量大鼠足趾容积。然后每天涂药1次(给药前一天用8％硫化钡脱毛)，空白对照组涂等量的基质，连续3天，末次给药1h后每鼠左后足跖皮下注射1％角叉菜胶0.1ml，分别于1、2、3、4、5小时各测鼠足趾容积1次，计算足肿胀度，比较各组的差异。结果见表4。

足肿胀度(ml)＝肿胀后各时间点足容积(ml)-肿胀前足容积(ml)

                                              表4本发明软膏对角叉菜胶大鼠足肿胀的影响( x±s)

组别	动物数(只)	剂量(g生药/kg)	足肿胀度(ml)
								1h	2h	3h	4h	5h
			空白肤轻松本发明	101010	-0.625mg0.15	0.40±0.080.29±0.100.38±0.06	0.51±0.100.40±0.08*0.49±0.07						0.54±0.090.43±0.07**0.54±0.08	0.51±0.090.36±0.08**0.50±0.08	0.42±0.110.31±0.06**0.46±0.07

软膏本发明软膏本发明软膏

1010

0.30.6

0.38±0.080.35±0.07

0.42±0.07*0.41±0.06*

0.45±0.10*0.43±0.07**

0.43±0.07*0.38±0.08**

0.35±0.080.33±0.09*

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表4结果表明：本发明软膏中剂量组可显著抑制1～4h的足肿胀度(P＜0.05)，高剂量可显著抑制1～5h时间点的足肿胀度(P＜0.05～0.01)；肤轻松亦可显著抑制2～5小时各时间点的足肿胀度(P＜0.05～0.01)。提示本发明软膏具有抗炎消肿作用。

2.2.3对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

取NIH小鼠65只，体重18～22g，雄性，随机分成5组，即空白基质对照组、肤轻松阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组，然后每天涂药1次(给药前一天用8％硫化钡脱毛)，空白对照组涂等量的基质，连续3天，末次给药1h后，将二甲苯50μl滴于小鼠右耳两面，左耳不涂作为对照，0.5h后将小鼠脱颈椎处死，用直径6mm打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，精密称重，以左、右耳片重量之差作为肿胀度，比较各组间差异。结果见表5。

      表5本发明软膏对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响( x±s)

组别	动物数只	剂量(g生药kg)	耳肿胀度(mg)
				空白肤轻松本发明软膏本发明软膏本发明软膏	1313131313	-1.25mg0.30.61.2	6.12±2.474.25±1.61*5.15±1.164.59±0.97*4.62±0.56*

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05

表5结果表明：本发明软膏中、高剂量能显著减轻二甲苯致炎小鼠的耳廓肿胀度(P＜0.05)。肤轻松亦能显著减轻小鼠的耳肿胀度(P＜0.05)。提示本发明软膏具有抗炎消肿作用。

2.2.4本发明软膏对大鼠棉球肉芽肿的影响

取50只雄性SD大鼠，体重140～160g，随机分成5组，即空白基质对照组、肤轻松阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组。在乙醚浅麻醉下，腹部去毛消毒，将灭菌棉球(每个棉球重10±0.5mg，高压灭菌，各加入氨苄青霉素每个1mg/0.1ml，50℃烘干)植入大鼠皮下，而后缝合。术后当天开始涂药1次，空白对照组涂等量的基质，连续7天，第八天脱臼处死，取出棉球，在60℃烘干12h后称重，为棉球肉芽肿重量，并计算抑制率，结果见表6。

                 表6本发明软膏对大鼠棉球肉芽肿的影响( x±s)

组别	动物数(只)	剂量(g生药kg)	肉芽肿重量(mg)	抑制率(％)
					空白肤轻松本发明软膏本发明软膏本发明软膏	1010101010	-0.625mg0.150.30.6	25.04±3.8020.24±5.12*22.42±1.6921.71±2.36*21.12±2.77*	19.1710.4613.3015.65

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05

表6结果表明：本发明软膏高、中剂量能显著减轻肉芽组织重量(P＜0.05)，提示本发明软膏能抑制炎症增殖期肉芽组织的形成。

实验三、祛瘀消肿实验

3.1试验材料

3.1.1受试药物：本发明软膏：0.224g生药/g 软膏；批号：BN20040809；由广州中医药大学新药中心提供；阳性对照药：正骨水：广西玉林制药有限责任公司生产，批号421117；空白对照药：空白基质，由广州中医药大学新药中心提供；肝素：徐州万邦生化制药有限公司生产，批号：0206108；硫化钡：上海国药集团化学试剂有限公司，批号：F20040529。

3.1.2试验剂量：本发明软膏(0.224g生药/g)，成人临床每日4次，一次2g，即每天最大用量为1.79g生药/d，以成人体重60kg计，平均用药剂量为0.0299生药/kg/d。本试验小鼠低、中、高三个剂量组，分别设为0.3、0.6、1.2g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的10、20、40倍(按体重计算)；大鼠低、中、高三个剂量组，分别设为0.15、0.3、0.6g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的5、10、20倍(按体重计算)。

3.1.3动物：NIH小鼠(合格证号20030001)；SD大鼠(合格证号20030001)，均由广州中医药大学实验动物中心提供。SPF级，正常饲养3天后供试。

3.2方法和结果

3.2.1本发明软膏对大鼠创伤性瘀斑的影响

取SD大鼠50只，体重180～200g，雌雄兼用，随机分成5组，即空白基质对照组、正骨水阳性对照组、本发明软膏高、中、低剂量组。实验前一天将大鼠背部用8％硫化钡脱毛，然后用老虎钳夹皮肤，造成皮下出血(面积4cm×4cm)，一小时后出现瘀斑，随即将药液均匀地涂于瘀斑处，每天两次，每天观察瘀斑消退情况，结果见表7。

             表7本发明软膏对大鼠创伤性瘀斑的影响( x±s)

组别	动物数(只)	剂量(g生药/kg)	瘀斑消退天数
				空白正骨水本发明软膏本发明软膏本发明软膏	1010101010	-5ml0.150.30.6	8.2±0.796.9±1.10**7.3±0.95*7.2±1.03*7.0±1.05**

注：与空白基质组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表7结果表明：本发明软膏能显著缩短瘀斑消散天数，并呈明显的量效关系。提示本发明软膏具有祛瘀消肿作用。

3.2.2本发明软膏对小鼠血瘀模型实验

制备皮下血斑模型：用脱毛剂(8％硫化钡)将各鼠背部脱毛2cm×3cm，1天后，眼眶取血0.4ml，用50u/ml肝素生理盐水0.1ml抗凝，皮下注射于背部脱毛处，形成皮下血斑。将制成皮下血斑模型的60只NIH小鼠，雌雄各半，随机均分5组，即空白基质组、本发明软膏低、中、高剂量组三个剂量组、正骨水阳性组。4小时后，测定血斑面积，作为给药前血斑面积。立即给药，每日在血斑上部涂药，一天两次，连续7天。并每天测定血斑面积1次，直至血斑消失，7天仍未消失者，按7天计。第4天开始即有部分小鼠的血斑消失。故只比较血斑消失时间和第1、第2、第3、第4天的血斑面积，结果见表8。

                            表8本发明软膏对小鼠皮下血斑吸收的影响( X±S n＝13)

组别	剂量g生药/g	血斑面积(mm2)					血斑消失时间(d)
								给药前	1d	2d	3d	4d
		空白基质正骨水本发明软膏本发明软膏本发明软膏	-10ml0.30.61.2	47.32±8.5848.81±7.4750.49±12.0553.18±7.8046.38±10.79	50.45±7.8449.29±6.9944.40±11.70*49.76±8.5343.85±9.33	48.98±6.2843.60±5.68*41.82±11.0143.07±7.87*40.37±9.21*							40.56±9.1232.18±8.35*32.36±10.05*32.37±9.78*31.75±7.25*	28.66±12.0319.00±6.25*19.71±7.67*19.33±7.21*18.70±4.70*	6.2±0.85.5±0.8*5.7±0.65.5±0.8*5.4±0.5**

与空白基质组比较：^*p＜0.05；^**p＜0.01；t检验

表8可见，本发明软膏能显著减少血斑面积并缩短血斑消失时间。并呈剂量依赖性。提示本发明软膏具有祛瘀消肿作用。

实验四、对血液流变学的影响

4.l试验材料

4.1.1药物与试剂

本发明软膏：0.224g生药/g 软膏；批号：BN20040809；由广州中医药大学新药中心提供。阳性对照药：正骨水：广西玉林制药有限责任公司生产，批号421117。盐酸肾上腺素注射液，北京市永康制药厂生产，批号：20010406。肝素：南京新百药业有限公司生产，批号：030101。

4.1.2试验剂量：本发明软膏(0.224g生药/g)，成人临床每日4次，一次2g，即每天最大用量为1.79g生药/d，以成人体重60kg计，平均用药剂量为0.0299生药/kg/d。本大鼠低、中、高三个剂量组，分别设为0.15、0.3、0.6g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的5、10、20倍(按体重计算)。

4.1.3动物：SD大鼠(合格证号：20030001)，由广州中医药大学实验动物中心提供。SPF级，正常饲养三天后供试。

4.1.4仪器：LBY-N6B旋转式血粘度计(普利生)

4.2方法与结果

取SD大鼠60只，随机分为6组，即正常对照组、血淤模型组对照组、正骨水阳性药物组、本发明软膏低、中、高剂量组。每天涂药一次，对照组给予等量空白基质，除正常对照组外，各组每天用冷开水灌胃(5ml/只)，连续7天。于第七天除正常对照外，其余各组皮下注射肾上腺素(0.08ml/100g)，共2次，间隔4h.在二次注射肾上腺素之间(前后各间隔2小时)将大鼠浸入冰水中5min，处置后禁食不禁水，于第八天各组动物眼眶取血，肝素抗凝，分别测定全血粘度、血浆粘度。结果见表9。

从表9可见，大鼠皮下注射肾上腺素后，全血粘度和血浆粘度均有所增高，这表明“血淤(高血液粘度)”模型的形成。本发明软膏不同剂量组均可降低全血粘度和血浆粘度。提示本发明软膏具有活血化淤作用。

                  表9本发明软膏对大鼠血液流变学的影响( X±S)

组别	剂量(g生药/kg)	动物数(只)	全血粘度	血浆粘度
					正常对照组模型正骨水本发明软膏本发明软膏本发明软膏	--10ml0.150.30.6	101010101010	17.83±1.5224.94±3.9420.31±2.63**20.35±5.1619.84±4.91*19.02±1.98**	1.06±0.051.39±0.111.15±0.07**1.28±0.11*1.11±0.08**1.14±0.07**

注：与正常对照组比较：^P＜0.05，^P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05  **P＜0.01，t检验

实验五、对微循环的影响

5.1试验材料

5.1.1药物与试剂

本发明软膏：0.224g生药/g 软膏；批号：BN20040809；由广州中医药大学新药中心提供。阳性对照药：正骨水：广西玉林制药有限责任公司生产，批号421117。

5.1.2试验剂量：本发明软膏(0.224g生药/g)，成人临床每日3次，一次2g，即每天最大用量为1.79g生药/d，以成人体重60kg计，平均用药剂量为0.0299生药/kg/d。本试验新西兰家兔低、中、高三个剂量组，分别设为0.15、0.3、0.6g生药/kg，上述剂量为临床用药剂量的5、10、20倍(按体重计算)。

5.1.3动物：新西兰家兔，由广州中医药大学实验动物中心提供，(合格证号：20030001)普通级。

5.2方法与结果

取体重1.2~1.5kg新西兰家兔50只，随机分为5组，即空白对照组、正骨水阳性药物组、本发明软膏低、中、高剂量组。将各组动物实验前用40％乌拉坦2ml/kg腹腔注射麻醉后，用医用橡皮膏贴在耳廓上去毛，将家兔腹向下固定在兔观察台上，耳廓表面滴加少许液体石蜡。将观察台置于解剖显微镜载物台上，在透射光下，用15×5倍镜观察耳廓涂抹本发明软膏前后同一部位耳廓微循环毛细管口径的变化。结果见表10。

                  表10本发明软膏对新西兰家兔耳廓静脉毛细管口径的影响( X±S，μm)

组别	剂量(g生药/kg)	动物数(只)	给药前	给药后
								5min	差值	10min	差值
				空白对照正骨水本发明软膏本发明软膏本发明软膏	-10ml0.521.042.08	1010101010	28.3±6.826.1±4.429.0±9.533.1±11.533.1±11.5					29.7±6.830.1±6.130.9±10.235.8±11.636.1±11.7	1.39±0.714.19±3.29*1.85±1.122.72±1.31*3.24±1.87**	29.3±6.929.8±5.530.5±9.735.4±11.635.8±11.7	1.03±0.393.72±2.89**1.46±0.662.28±1.15**2.95±1.52**

注：与空白对照组比较：**P＜0.01，t检验

从表10可见，给本发明软膏后新西兰家兔耳廓静脉血管口径增大，与对照组比较有非常显著的差异。结果表明本发明软膏有明显改善新西兰家兔耳廓微循环的作用。

实验六、本发明软膏毒理研究

6.1、急性毒性实验

应用大鼠、小鼠进行急性毒性实验表明：大鼠正常皮肤、损伤皮肤给予最高浓度的本发明软膏局部用药4.48g生药/kg，一天2次(最大给药量为8.96g生药/kg/d，是临床成年人用量的600倍)，连续观察七天。结果表明各组动物全身反应均无异常，体重增长、摄食、饮水、活动均正常，无一动物死亡。小鼠口服灌胃本发明LD₅₀为4.93g生药/kg(95％可信限为4.02～6.04g生药/kg)，口服灌胃本发明后5分钟开始出现中毒症状，中毒症状表现为呼吸急促、步态不稳、翻正反射消失，中毒程度与剂量相关，动物最后因呼吸抑制而死亡，死亡时间多数在20～30分钟内，少数在1～2小时内，个别小鼠在24小时内。尸检未发现组织器官有明显异常。存活小鼠在观察期间内饮食、摄水、活动正常。本品临床应用为外用局部给药，给药量以及可吸收至全身的量较少，故可认为本品临床外用较安全。

6.2、慢性毒性实验

选用SD大鼠，给予不同浓度(0.6、1.8、3.6g生药/kg)的本发明软膏，每天背部皮肤涂搽一次，连续30天，末次给药后24小时各组活杀10只动物(雌雄各半)，其余10只动物继续观察2周后活杀。试验期间观察动物的外观、一般行为、体重变化，给药后30天和停药2周进行血液学(RBC、HCT、MCV、MCH、MCHC、HB、PLT、CT、WBC及分类、网织红细胞、凝血时间)和血清生化(AST、ALT、ALP、Glu、BUN、Crea、TP、T.BIL、ALB、GLOB、A/G、CHOL)、尿液生化、脏器系数、病理组织学等指标检查。试验结果表明：各组动物一般状态良好，外观体征、行为活动、体重增长均无异常变化；三个剂量组及对照组血液学检查、血液生化学、尿液生化检查均在正常范围，组间无显著差异；各组主要脏器组织未见与药物相关的病理学变化。上述指标停药2周后也未见改变。本试验用药剂量分别为临床用药剂量的120、60、20倍，根据试验结果表明：本发明软膏低、中、高三个剂量(0.6、1.8、3.6g生药/kg)连续30天给药对大鼠无明显影响，恢复期观察也未见延迟性毒性反应，提示本品临床应用的剂量安全性较高。

6.3、局部给药毒性试验

选用新西兰家兔和豚鼠，研究了本发明软膏对正常及破损皮肤刺激试验、过敏试验。结果表明：新西兰家兔给予本发明软膏，未发现组织异常，证明本发明软膏对家兔正常及破损皮肤无明显刺激性。同时豚鼠过敏实验结果也显示皮肤用药不引起过敏反应，提示本发明软膏临床用药较安全。

具体实施方式

实施例1：本发明的药物组合物的外用软膏剂的制备方法：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，干姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g共十四味原料药，取其中的独活、当归、干姜，粉碎成20目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与50g甘油、5g苯甲酸钠35g卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将30g氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得半固体状药物，称重，加纯化水适量，混匀，得到外用软膏。

实施例2：本发明的药物组合物雾化剂的制备：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，干姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g共十四味原料药，取其中的独活、当归、干姜，粉碎成40目粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与30g甘油、10g苯甲酸钠、40g卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将40g氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得半固体状药物，加入抛射剂，制成雾化剂。

实施例3：本发明的药物组合物搽剂的制备：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，干姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g共十四味原料药，取其中的独活、当归、干姜，粉碎成60目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与80g甘油、10g苯甲酸钠、50g卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将50g氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得半固体状药物，加入40～80％浓度的乙醇适量，制成搽剂。

实施例4：本发明的药物组合物散剂的制备：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，干姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g，其中的独活、当归、干姜、虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒粉碎成100目的细粉；

b)、将氮酮与松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油等混合，成油相；

c)、将油相与药材细粉混匀，制成散剂。

实施例5：本发明的药物组合物膜剂的制备：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，干姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g共十四味原料药，取其中的独活、当归、干姜，粉碎成60目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与80g甘油、10g苯甲酸钠、50g卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将50g氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得半固体状药物，加入适量聚乙烯醇或丙烯酸树脂或纤维素等高分子材料，制成膜剂。

实施例6：本发明的药物组合物软膏的制备：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，干姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g共十四味原料药，取其中的独活、当归、干姜，粉碎成60目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与60g甘油、5g苯甲酸钠、40g卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将40g氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得半固体状药物，称重，加适量纯化水，混匀，得到软膏。

实施例7：本发明的药物组合物凝胶剂的制备：

a)、取三七25g，虎杖25g，川乌20g，天南星20g，独活16g，当归10g，续断10g，于姜10g，辣椒10g，丁香罗勒油10g，松节油16g，薄荷脑26g，樟脑13g，冰片13g共十四味原料药，取其中的独活、当归、干姜，粉碎成60目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与60g甘油、10g苯甲酸钠、50g卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将50g氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得半固体状药物，称重，加卡波姆等辅料适量，混匀，得到凝胶剂。

实施例8：本发明的药物组合物散剂的制备：

a)、取三七5g，虎杖5g，川乌5g，天南星5g，独活6g，当归5g，续断5g，干姜5g，辣椒5g，丁香罗勒油5g，松节油5g，薄荷脑5g，樟脑5g，冰片5g，其中的独活、当归、干姜、虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒粉碎成200目的细粉；

b)、将氮酮与松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油等混合，成油相；

c)、将油相与药材细粉混匀，制成散剂。

实施例9：本发明的药物组合物散剂的制备：

a)、取三七45g，虎杖45g，川乌40g，天南星40g，独活46g，当归50g，续断50g，干姜50g，辣椒50g，丁香罗勒油50g，松节油50g，薄荷脑50g，樟脑50g，冰片50g，其中的独活、当归、干姜、虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒粉碎成200目的细粉；

b)、将氮酮与松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油等混合，成油相；

c)、将油相与药材细粉混匀，制成散剂。

Claims (10)

1.一种用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物，其特征在于：该药物组合物由如下重量份的原料药制成的：三七1～50份，虎杖1～50份，川乌1～50份，天南星1～50份，独活1～50份，当归1～50份，续断1～50份，干姜1～50份，辣椒1～50份，丁香罗勒油1～50份，松节油1～50份，薄荷脑1～50份，樟脑1～50份，冰片1～50份。

2.权利要求1所述的一种用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物，其特征在于：所述原料药的重量份为：三七25份，虎杖25份，川乌20份，天南星20份，独活16份，当归10份，续断10份，干姜10份，辣椒10份，丁香罗勒油10份，松节油16份，薄荷脑26份，樟脑13份，冰片13份。

3.如权利要求1或2所述的用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物，其特征在于：该药物组合物以及提取物或精制物可以加入促皮吸收剂、基质和防腐剂辅料或赋形剂制成临床可接受的外用膏剂、雾化剂、搽剂、膜剂或凝胶剂以及制成散剂。

4.一种制备如权利要求1所述的用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a)、取以上十四味原料药中的独活、当归、干姜，粉碎成20～60目的粗粉，用6～8倍量80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后，以每分钟2～5ml的速度渗漉，收集初漉液1～3倍量，另器保存，继续渗漉，收集续漉液，续漉液在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，用80％乙醇稀释至3倍量，得乙醇提取液，置洁净容器中备用；

b)、取虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒，用6倍量50～80％乙醇回流提取3次，每次0.5～1.5小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至50℃相对密度1.10～1.25的稠膏；

c)、取稠膏与独活、当归、干姜的乙醇提取液混合调整体积至3倍量，混匀；

d)、将上述混和液与10～80份的甘油、1～10份的苯甲酸钠、10～50份的卡波姆的水溶液混合，加热至60℃，成水相，用20％三乙醇胺水溶液调水相pH至6.5-7.0；

e)、将5～50份的氮酮和乳化剂聚山梨酯80混合，加热至60℃，成辅料油相，加入松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油混合成油相；

f)、将油相加入水相中搅拌至室温，得到半固体状药物。

5、如权力要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取所得的半固体状药物，称重，加适量辅料，混匀，得到外用软膏。

6、如权力要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取得到的半固体状药物，加入适量辅料，制成雾化剂。

7、如权力要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取得到的半固体状药物，加入适量辅料，制成搽剂

8、如权力要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取得到的半固体状药物，加入适量辅料，制成膜剂。

9、如权力要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取得到的半固体状药物，加入适量辅料，制成凝胶剂。

10、一种制备如权力要求1所述的用于治疗筋腱软组织损伤及骨关节病的药物组合物的制备方法，其特征在于：

a)、取以上十四味药，将其中的独活、当归、干姜、虎杖、三七、天南星、川乌、续断、辣椒粉碎成100～200目的细粉；

b)、将氮酮与松节油、薄荷脑、冰片、樟脑、丁香罗勒油等混合，成油相；

c)、将油相与药材细粉混匀，制成散剂。