CN1626075A - 一种药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了由红花黄色素和总丹参酚酸组成的药物组合物，其中红花黄色素含有≥50％、＜100％的羟基红花黄色素A，总丹参酚酸含有≥50％、＜100％的丹参酚酸B或其盐。本发明还提供了该药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病中的药物中的应用。

Description

一种药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种由红花黄色素和总丹参酚酸组成的药物组合物，还涉及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。

背景技术

红花黄色素是从红花中提取的有效成分，具有扩张冠状动脉、降压、抗血栓、耐缺氧、免疫抑制等多种药理学功效，见【红花黄色素的现代研究概述，王会玲，中国中医药科技，1998年第5卷第5期】。

总丹参酚酸是丹参的水溶性成分，其具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改善微循环及抗氧化损伤作用和多途径发挥心肌保护作用，见【丹参制剂的研究现状及对开发的几点思考，张军等，中草药，2001年第32卷第10期】。

本发明人通过大量的实验研究，提供了一种由红花黄色素、总丹参酚酸组成的药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用，该药物组合物在用于心脑血管疾病时具有协同作用。

发明内容

本发明提供了一种由红花黄色素、总丹参酚酸组成的药物组合物，其中红花黄色素和总丹参酚酸的重量比为1∶19～19∶1，优选为1∶4～4∶1，更优选为1∶3；红花黄色素中含羟基红花黄色素A≥50％、＜100％，总丹参酚酸中含丹参酚酸B≥50％、＜100％，丹参酚酸B还可以以金属盐的形式存在，优选为镁盐。

本发明提供了含羟基红花黄色素A≥50％的红花黄色素和含丹参酚酸B≥50％的总丹参酚酸的制备方法。

本发明提供了由红花黄色素、总丹参酚酸组成的药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。

本发明提供了该药物组合物在制备治疗或预防脑损伤的药物中的应用。

本发明提供了该药物组合物在制备治疗或预防心肌缺血的药物中的应用。

本发明提供的药物组合物可以根据制剂需要，加入相应辅料，以片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂、霜剂、软膏、喷雾剂、口嚼剂或贴剂形式存在，优选为冻干粉针。本发明提供的各种剂型均可以采用药学常规方法制备而成。

本发明提供的药物组合物在用于心脑血管疾病时，其使用剂量范围是35mg-1000mg，优选为50mg-400mg。

本发明提供的药物组合物，以制剂形式存在时，其有效成分的含量为35-400mg。

本发明所述的红花黄色素是从红花中提取分离获得，优选采用水提取方法，与大孔吸附树脂柱层析法和聚酰胺吸附法组合，获得红花黄色素。本发明所述的总丹参酚酸是从丹参中提取分离获得，优选采用水提取方法，与大孔吸附树脂柱层析法精致，获得总丹参酚酸。

本发明人进行了下列试验来证实由红花黄色素和总丹参酚酸组成的药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的作用，具有协同作用。

具体实施方式：

制备例1：红花黄色素、总丹参酚酸的制备

取红花药材5kg，30倍量水渗漉，过滤，用大孔吸附树脂吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱2个柱体积，然后继续用去离子水洗脱5个柱体积，收集洗脱液，再用聚酰胺吸附，先用去离子水洗至无色，然后用偏碱性的95％乙醇洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发器上浓缩除去乙醇，冷冻干燥得到红花黄色素，其中含羟基红花黄色素A 75.8％。

取丹参药材5kg，粉碎，30倍量酸水渗漉提取，过滤，用大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱3-5柱体积，再用30％的乙醇溶液洗脱5个柱体积，收集洗脱液，调节pH值为2-5，浓缩乙醇，冻干，得总丹参酚酸，其中含丹参酚酸B 80.4％。

制备例2：红花黄色素、总丹参酚酸的制备

取红花药材5kg，30倍量水渗漉，过滤，用大孔吸附树脂吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱2个柱体积，然后继续用去离子水洗脱5个柱体积，收集洗脱液，浓缩后以葡聚糖凝胶为固定相，以去离子水洗脱进行分离，收集羟基红花黄色素A成分，旋转蒸发器上浓缩，冷冻干燥得到红花黄色素，其中含羟基红花黄色素A 77.5％。

取丹参药材粉碎，15倍量60％丙酮进行渗漉，收集渗漉液，浓缩，至无丙酮味，用水进行稀释后，进行大孔吸附树脂吸附(药材量与树脂量1∶1)，用去离子水洗脱3-5柱体积，再用30％的乙醇溶液洗脱5个柱体积，收集洗脱液，浓缩乙醇，冻干，得总丹参酚酸，其中含丹参酚酸B镁盐72.8％。

制备例3：制备由红花黄色素和总丹参酚酸组成的冻干粉针

在洁净条件下，取红花黄色素190g、总丹参酚酸10g，溶于1000ml注射用水，加入100g甘露醇，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按冻干粉针工艺冻干，制成含红花黄色素190mg、总丹参酚酸10mg的冻干粉针。

制备例4：制备由红花黄色素和总丹参酚酸组成的冻干粉针

在洁净条件下，取红花黄色素10g、总丹参酚酸190g，溶于1000ml注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按冻干粉针工艺冻干，制成含红花黄色素10mg、总丹参酚酸190mg的冻干粉针。

制备例5：制备由红花黄色素和总丹参酚酸组成的冻干粉针

在洁净条件下，取红花黄色素20g、总丹参酚酸80g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按冻干粉针工艺冻干，制成含红花黄色素20mg、总丹参酚酸80mg的冻干粉针。

制备例6：制备由红花黄色素和总丹参酚酸组成的冻干粉针

在洁净条件下，取红花黄色素80g、总丹参酚酸20g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按冻干粉针工艺冻干，制成含红花黄色素80mg、总丹参酚酸20mg的冻干粉针。

制备例7：制备由红花黄色素和总丹参酚酸组成的冻干粉针

在洁净条件下，取红花黄色素25g、总丹参酚酸75g，溶于1000ml注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按冻干粉针工艺冻干，制成含红花黄色素25mg、总丹参酚酸75mg的冻干粉针。

试验例1：不同剂量红花黄色素、总丹参酚酸、组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响

(1)材料：

红花黄色素、总丹参酚酸、组合物：按制备例1制备。

红四氮唑：美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液。

实验动物：普通级SD大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。

(2)方法与结果：

动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，尼莫地平组(Nim，1.0mg/kg)，红花黄色素小剂量组(1.5mg/kg)，红花黄色素中剂量组(3.5mg/kg)，红花黄色素大剂量组(45mg/kg)，总丹参酚酸小剂量组(2mg/kg)，总丹参酚酸中剂量组(3.5mg/kg)，总丹参酚酸大剂量组(60mg/kg)，组合物小剂量【红花黄色素(1.5mg/kg)+总丹参酚酸(2mg/kg)】，组合物大剂量【红花黄色素(45mg/kg)+总丹参酚酸(60mg/kg)】每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成右侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。术后各组动物静脉注射相应药物。24小时后按文献【刘小光，徐理纳，一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型，药学学报，1995，30：662】所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍：(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(B)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。

行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。数据用 x±SD表示，以组间F检验进行统计学处理。

结果如表1所示，缺血24小时后，模型组大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25％左右。

1.5mg/kg红花黄色素与2mg/kg总丹参酚酸组未能改善大鼠行为障碍、减少缺血面积；3.5mg/kg红花黄色素与3.5mg/kg总丹参酚酸组均在一定程度上改善了大鼠行为障碍、减少缺血面积。

组合物小剂量组【红花黄色素(1.5mg/kg)+总丹参酚酸(2mg/kg)】非常显著地改善大鼠行为障碍、减少缺血面积，与模型组比较p＜0.01，而且与3.5mg/kg红花黄色素、3.5mg/kg总丹参酚酸比较亦有显著性差异(P＜0.05)。提示组合物中红花黄色素和总丹参酚酸具有协同作用。组合物大剂量【红花黄色素(45mg/kg)+总丹参酚酸(60mg/kg)】极其显著地改善大鼠行为障碍、减少缺血面积，与模型组比较P＜0.001。

表1  红花黄色素、总丹参酚酸、组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响

组别                      行为障碍            缺血面积(％)

假手术组                  0                   0

模型对照组                11.50±1.31         25.41±4.22

Nim组                     7.15±2.66^**       17.33±5.68^**

红花黄色素小剂量组        10.22±3.16         22.38±8.95

红花黄色素中剂量组        8.80±1.07^*        19.23±2.45^*

红花黄色素大剂量组        6.86±3.17^**       12.91±4.32^**

总丹参酚酸小剂量组        10.03±3.58         23.14±6.27

总丹参酚酸中剂量组        8.79±2.42^*        19.56±3.75^*

总丹参酚酸大剂量组        6.58±1.96^**       12.37±4.48^**

组合物小剂量组            6.67±2.35^**#Δ          13.34±7.56^**#Δ

组合物大剂量组            5.03±1.55^***      10.22±2.56^***

与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

与红花黄色素中剂量组比较#P＜0.05

与总丹参酚酸中剂量组比较^ΔP＜0.05

试验例2：不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响

红花黄色素、总丹参酚酸、组合物：按制备例2制备。

红四氮唑：美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液。

实验动物：普通级SD大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。

(2)方法与结果：

动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，组合物A【红花黄色素(10mg/kg)+总丹参酚酸(0mg/kg)】，组合物B【红花黄色素(9.5mg/kg)+总丹参酚酸(0.5mg/kg)】，组合物C【红花黄色素(8mg/kg)+总丹参酚酸(2mg/kg)】，组合物D【红花黄色素(5mg/kg)+总丹参酚酸(5mg/kg)】，组合物E【红花黄色素(2mg/kg)+总丹参酚酸(8mg/kg)】，组合物F【红花黄色素(0.5mg/kg)+总丹参酚酸(9.5mg/kg)】，组合物G【红花黄色素(0mg/kg)+总丹参酚酸(10mg/kg)】每组10只。按实验例1所示方法制作大鼠局部脑缺血模型并进行神经行为评分、脑片染色。数据用 x±SD表示，以组间F检验进行统计学处理。

结果如表2所示，缺血24小时后，模型组大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25％左右。不同配比的药物组合物(10mg/kg)对大鼠脑缺血均具有显著的保护作用(P＜0.05或P＜0.01)。

表2  不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响

组别                   行为障碍              缺血面积(％)

假手术组               0                     0

模型对照组             10.6±1.1             25.6±4.5

组合物A                9.1±1.2^*            22.9±2.1^*

组合物B                8.4±1.1^**           22.5±2.1^*

组合物C                7.0±0.8^**#Δ                  18.2±1.8^**#Δ

组合物D                7.2±0.7^**#Δ                  20.1±1.4^**#Δ

组合物E                7.1±0.9^**#Δ                  21.2±1.3^**#Δ

组合物F                8.5±0.8^*            22.3±1.6^*

组合物G                8.9±0.7^*            22.6±1.1^*

与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01。

组合物A组比较#P＜0.05

组合物G组比较^ΔP＜0.05

试验例3：红花黄色素、总丹参酚酸、组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响

(1)材料：

红花黄色素、总丹参酚酸、组合物：按制备例2制备。

心血丹(复方丹参)注射液：贵州神奇制药有限公司。

氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)，由军事医学科学院药材供应站提供。

实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供。合格证号：鲁动质字200106005号。

(2)方法与结果：

动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，复方丹参注射液组(DS，10mg/kg)，红花黄色素小剂量组(1.5mg/kg)，红花黄色素中剂量组(3.5mg/kg)，红花黄色素大剂量组(45mg/kg)，总丹参酚酸小剂量组(2mg/kg)，总丹参酚酸中剂量组(3.5mg/kg)，总丹参酚酸大剂量组(60mg/kg)，组合物小剂量【红花黄色素(1.5mg/kg)+总丹参酚酸(2mg/kg)】，组合物大剂量【红花黄色素(45mg/kg)+总丹参酚酸(60mg/kg)】每组10只。禁食12小时后，ip乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，测肢体II导联心电图。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左缘1cm处，剪开胸壁肌肉及二条肋骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉，立即将心脏放回，排挤出胸腔空气，用止血钳闭合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。术后各组动物静脉注射相应药物。记录给药前及给药后1.5h、3h心电图，6h后取出心脏，以冷生理盐水洗净后，-20℃冰箱冷冻过夜。次日，将冷冻的心脏由结扎处至心尖部等厚切成5片，浸入新鲜配制的0.5％NBT磷酸缓冲液(pH7.4)中。37℃水浴振摇10～15min。用滤纸吸干切片表面的染色液，分离染色部分和未染色部分，称重，记算梗死面积。梗死面积(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。

结果如表3所示，心肌缺血6小时后，模型组大鼠心肌出现明显的灶状缺血区，达到25％左右。1.5mg/kg红花黄色素与2mg/kg总丹参酚酸组未能改善大鼠心电、减少缺血面积；3.5mg/kg红花黄色素与3.5mg/kg总丹参酚酸组均在一定程度上降低由心肌缺血造成的肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积；组合物小剂量组【红花黄色素(1.5mg/kg)+总丹参酚酸(2mg/kg)】非常显著地降低肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积，与模型组比较P＜0.01，而且与3.5mg/kg红花黄色素、3.5mg/kg总丹参酚酸比较亦有显著性差异(P＜0.05)；组合物大剂量【红花黄色素(45mg/kg)总丹参酚酸(60mg/kg)】极其显著地降低肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积，与模型组比较P＜0.001。

    表3  红花黄色素、总丹参酚酸、组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响

                                                      J点升高(10×mv)

分组                  梗死面积(％)

                                          正常        1.5h              3h

模型对照组            25.6±4.3           0.8±0.6    6.7±2.3          6.1±1.4

丹参注射液组          17.8±6.2^*         0.8±0.6    6.0±1.5^*       5.1±1.3^*

红花黄色素小剂量组    22.5±8.5           0.7±0.6    6.5±1.3          5.8±1.9

红花黄色素中剂量组    19.4±3.5^*         0.7±0.5    5.8±1.4^*       5.2±1.8^*

红花黄色素大剂量组    12.8±4.5^**        0.7±0.7    5.0±1.6^**       4.3±2.0^**

总丹参酚酸小剂量组    23.3±6.4           0.8±0.7    6.4±1.5          5.7±2.1

总丹参酚酸中剂量组    19.7±3.5^*         0.7±0.6    5.7±1.8^*       5.1±1.7^*

总丹参酚酸大剂量组    12.6±4.5^**        0.8±0.6    4.9±2.1^**       4.1±1.8^**

组合物小剂量组        13.6±7.8^**#Δ            0.8±0.5    4.7±1.6^**#Δ          4.0±1.6^**#Δ

组合物大剂量组        10.5±2.7^***        0.7±0.6    4.3±1.7^***      3.7±1.9^***

与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

与红花黄色素中剂量组比较#P＜0.05

与总丹参酚酸中剂量组比较ΔP＜0.05

Claims (10)

1.一种药物组合物，由红花黄色素和总丹参酚酸组成，其重量比为1∶19～19∶1；其中红花黄色素中含羟基红花黄色素A≥50％、＜100％，总丹参酚酸中含丹参酚酸B≥50％、＜100％。

2.根据权利要求1所述的组合物，丹参酚酸B还可以以金属盐的形式存在。

3.根据权利要求2所述的组合物，丹参酚酸B盐优选为镁盐。

4.根据权利要求1所述的组合物，红花黄色素和丹参总酚酸的重量比优选为1∶4～4∶1。

5.根据权利要求4所述的组合物，红花黄色素和丹参总酚酸的更优选比为1∶3。

6.根据权利利要求1-5任一所述的组合物，红花黄色素是从红花中提取分离获得，优选采用水提取方法，与大孔吸附树脂柱层析法和聚酰胺吸附法组合，获得红花黄色素。

7.根据权利要求1-5任一所述的组合物，总丹参酚酸是从丹参中提取分离获得，优选采用水提取方法，与大孔吸附树脂柱层析法精致，获得总丹参酚酸。

8.权利要求1-7任一所述的组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，该组合物在制备治疗或预防脑损伤的药物中的应用。

10.根据权利要求8所述的应用，该组合物在制备治疗或预防心肌缺血的药物中的应用。