CN1500517A - 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents
一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1500517A CN1500517A CNA021489378A CN02148937A CN1500517A CN 1500517 A CN1500517 A CN 1500517A CN A021489378 A CNA021489378 A CN A021489378A CN 02148937 A CN02148937 A CN 02148937A CN 1500517 A CN1500517 A CN 1500517A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- water
- methanol
- ethanol
- adds
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 206010018367 Glomerulonephritis chronic Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 185
- 241000255791 Bombyx Species 0.000 claims abstract description 22
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000005325 percolation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 248
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 234
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 162
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 124
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 68
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 67
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 58
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 52
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 48
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 42
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 37
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 35
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 claims description 30
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 claims description 30
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 30
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 30
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 30
- TZJALUIVHRYQQB-XFDQAQKOSA-N Icariin Natural products O(C)c1ccc(C2=C(O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O3)C(=O)c3c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)c(C/C=C(\C)/C)c3O2)cc1 TZJALUIVHRYQQB-XFDQAQKOSA-N 0.000 claims description 29
- TZJALUIVHRYQQB-XLRXWWTNSA-N icariin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(O[C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C(CC=C(C)C)=C2O1 TZJALUIVHRYQQB-XLRXWWTNSA-N 0.000 claims description 29
- TZJALUIVHRYQQB-UHFFFAOYSA-N icariine Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CC=C(C)C)=C2O1 TZJALUIVHRYQQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 29
- 241001619461 Poria <basidiomycete fungus> Species 0.000 claims description 27
- 239000012567 medical material Substances 0.000 claims description 26
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 24
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 24
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 24
- SMDOOINVMJSDPS-UHFFFAOYSA-N Astragaloside Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)OC2C(C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(O)C(CO)O2)O)=C1 SMDOOINVMJSDPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- QMNWISYXSJWHRY-XWJCTJPOSA-N astragaloside Chemical compound O1[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@]34C[C@]4(CC[C@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO4)O)C4(C)C)C4[C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)CC3[C@]2(C)C[C@@H]1O QMNWISYXSJWHRY-XWJCTJPOSA-N 0.000 claims description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 23
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 22
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 22
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 241000522620 Scorpio Species 0.000 claims description 21
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 21
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 21
- 239000009490 scorpio Substances 0.000 claims description 21
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 claims description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 20
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 19
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 19
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical compound SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 241000446313 Lamella Species 0.000 claims description 12
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 12
- SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.ClC(Cl)Cl SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 12
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 12
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 8
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 8
- INYYVPJSBIVGPH-UHFFFAOYSA-N 14-episinomenine Natural products C1CN(C)C2CC3=CC=C(OC)C(O)=C3C31C2C=C(OC)C(=O)C3 INYYVPJSBIVGPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 claims description 6
- INYYVPJSBIVGPH-QHRIQVFBSA-N Sinomenine Chemical compound C([C@@H]1N(CC2)C)C3=CC=C(OC)C(O)=C3[C@@]32[C@@H]1C=C(OC)C(=O)C3 INYYVPJSBIVGPH-QHRIQVFBSA-N 0.000 claims description 6
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 claims description 6
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 6
- RARWEROUOQPTCJ-RBUKOAKNSA-N cepharamine Natural products C1CC2=CC=C(OC)C(O)=C2[C@@]2(CCN3C)[C@]13C=C(OC)C(=O)C2 RARWEROUOQPTCJ-RBUKOAKNSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 6
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate Substances CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 6
- 230000003760 hair shine Effects 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000079 presaturation Methods 0.000 claims description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 229930002966 sinomenine Natural products 0.000 claims description 6
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 6
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 5
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims description 5
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims description 4
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims description 4
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 claims description 4
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 claims description 4
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 claims description 4
- LSYBEKRLBPCVES-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate formic acid Chemical compound C(C)(=O)OCC.C(=O)O.C(=O)O LSYBEKRLBPCVES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 3
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FGZQMJNMPVEMMQ-UHFFFAOYSA-N butanal;hydrate Chemical compound O.CCCC=O FGZQMJNMPVEMMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 claims description 3
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 claims description 3
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 claims description 3
- -1 mixing Substances 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005550 wet granulation Methods 0.000 claims description 3
- KIBLEPZGKRYXBB-UHFFFAOYSA-N butan-2-one ethyl acetate formic acid hydrate Chemical compound O.OC=O.CCC(C)=O.CCOC(C)=O KIBLEPZGKRYXBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims 3
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical compound CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 241000049624 Alisma plantago-aquatica subsp. orientale Species 0.000 abstract 1
- 241000893536 Epimedium Species 0.000 abstract 1
- 244000248825 Peltandra virginica Species 0.000 abstract 1
- 235000001188 Peltandra virginica Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000008599 Poria cocos Nutrition 0.000 abstract 1
- 241001362832 Pyrrosia rupestris Species 0.000 abstract 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 abstract 1
- 229940107666 astragalus root Drugs 0.000 abstract 1
- 235000018905 epimedium Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 115
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 108
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 46
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 27
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 14
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 13
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 11
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 11
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 11
- 208000004883 Lipoid Nephrosis Diseases 0.000 description 10
- 206010018372 Glomerulonephritis membranous Diseases 0.000 description 9
- 201000008350 membranous glomerulonephritis Diseases 0.000 description 9
- 231100000855 membranous nephropathy Toxicity 0.000 description 9
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 5
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 5
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 5
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 5
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 4
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 4
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 101100434652 Rattus norvegicus Alb gene Proteins 0.000 description 2
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 2
- 244000144992 flock Species 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 2
- 230000003037 histogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003584 mesangial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 2
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 206010001580 Albuminuria Diseases 0.000 description 1
- 206010006100 Bradykinesia Diseases 0.000 description 1
- FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N Bromocresolgreen Chemical compound CC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C(=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000594182 Sarcophaga sigma Species 0.000 description 1
- 208000032023 Signs and Symptoms Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 208000031975 Yang Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000031971 Yin Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 208000019790 abdominal distention Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003725 endotheliocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002389 essential drug Substances 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000005086 glomerual capillary Anatomy 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003118 histopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。该组合物由黄芪、茯苓、淫羊藿、僵蚕、全蝎、泽泻、石韦、青风藤组成。该中药组合物制备时对不同组分采用渗漉、煎煮醇缩制成干颗粒的方法，达到使有效药物成分的充分发挥，同时本发明还提供了对该组合物采用成分鉴别、含量测定的质量控制方法。本组合物在治疗慢性肾炎上具有效果稳定、显著，无明显毒副作用的特点。
Description
发明领域
本发明涉及一种中药组合物，特别涉及用于治疗慢性肾炎的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和质量标准。
背景技术
慢性肾小球肾炎(简称慢性肾炎，CGN)，是由多种原因、多种病理类型组成原发于肾小球的一组疾病。临床特点为病程长，可以有一段时间的无症状期，呈缓慢进行性病程。尿常规检查有不同程度的蛋白尿，尿沉渣镜检常可见到红细胞，大多数患者有程度不等的高血压和肾功能损害，治疗困难，预后较差，它起病潜隐，临床表现可轻可重或时轻时重，但总的说来，是不停顿地逐渐发展至肾功能衰竭，而危及生命。
按照全国中医肾病专业委员会制定的慢性肾炎辨证分型标准，在统计了200例慢性肾炎的证型中，脾肾气虚证有96例，占48％：气阴两虚证有77例，占38.5％； 肝肾阴虚证有23例，占11.5％；脾肾阳虚证有4例，占2％。脾肾气虚证是慢性肾炎最常见的证型，开发治疗慢性肾炎脾肾气虚证的新药，对于提高慢性肾炎治疗效果有积极意义。
目前西药在治疗慢性肾炎上没有很好的办法，中医中药在治疗慢性肾炎上有其独特的效果，但在《国家基本用药目录》中治疗慢性肾炎脾肾气虚证的类似中成药仅有肾炎四味片和肾炎消肿片。肾炎四味片，其效果一般。肾炎消肿片由于疗效不理想，市场上近二年已没有销售。因此，临床医生需要、患者治疗需要、市场供销需要尽快开发出治疗慢性肾炎脾肾气虚证有效且无副作用的中成药。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种新的治疗慢性肾炎的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开一种新的治疗慢性肾炎的中药组合物的制备方法；本发明的第三个目的在于公开一种新的治疗慢性肾炎的中药组合物的质量控制方法。
本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：
黄芪700-1000重量份 茯苓300-500重量份
淫羊藿100-300重量份 僵蚕200-500重量份
全蝎30-50重量份 泽泻100-300重量份
石韦300-600重量份 青风藤700-1000重量份
本发明药物组合物的原料药黄芪优选生黄芪；本发明药物组合物制剂每0.35g，相当于原药材3.48g。
本药物组合物的制备方法：
1.青风藤粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1-2倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加6-10倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得青风藤浓缩液；
2.黄芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，得黄芪、茯苓、淫羊藿浓缩液；
3.僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得僵蚕、全蝎浓缩液；
4.石韦、泽泻一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，加90-96％的乙醇，使含醇量达65-80％，充分搅拌，e静置10-14小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.20-1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；
5.将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，得混合物A；
6.将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，得混合物B；
7.将上述两种A、B混合物混合得本发明药物组合物，该药物组合物，经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型，如片剂、口服液体制剂、胶囊、颗粒剂。
本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。
鉴别方法包括下列方法中的一种和/或几种：
(a).取本组合物制剂3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加热回流1.5-3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(b).取本组合物制剂3.5g，，加60-80％乙醇40-60ml，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-11ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-3次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(c).取本组合物制剂5.3g，加乙醚20-35ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚30-50ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和10-20分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(d).取本组合物制剂1.8g，加乙醇14-18ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定方法包括下列方法中的一种和/或几种：
(a).黄芪甲苷，取本组合物制剂，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次40-60ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-60％乙醇洗脱，弃去30-60％乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇100-140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每0.35g含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计不得少于0.18mg；
(b).淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以25-40∶60-80的乙腈-水为流动相，检测波长260-280nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物3.5g，研细，取0.5g，精密称定，加60-80％乙醇25ml，超声处理0.5-2小时，滤过，滤渣用适量60-80％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水8-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次15-25ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于0.20mg。
本组合物在治疗慢性肾炎气虚证中，可显著降低血肌酐、血尿素氮，升高血浆白蛋白，降低胆固醇和甘油三酯，有明显的利尿作用，极大地改善病人的临床症状，具有标本兼治的特点，并且无毒、无任何副作用。
下面实验例用于进一步说明本发明。下列材料与仪器适用于各实验例。
1药物
本组合物制剂(健肾片干粉)，由江苏康缘药业股份公司提供，批号010310。每克干粉含生药9.94克，成人日用量为42g/60Kg。临用前用蒸馏水配制成0.14g/ml、0.28g/ml、0.56g/ml三种浓度的混悬液(均按生药量计算)。肾炎四味片，荆州市制药厂(原湖北沙市制药厂)出品，ZZ-4326一鄂卫药准字(1981)第001544号，批号：991002，规格：每片0.36克，成人日用量8.64g/60Kg。该药主要成分为胡枝子、黄芪、黄芩、石韦。将该药粉碎过120目筛，加蒸馏水配制成0.05g/ml浓度的肾炎四味片混悬液(均按生药量计算)。 嘌吟霉素(Puromycin，造模药物)：Sigma化学公司，批号10278。
2主要试剂
无水乙二胺，上海试剂一厂，批号：000210；碳化二亚胺，美国Sigma公司，批号：1531H；牛血清白蛋白，美国Amresc。公司，批号：051 7H：弗氏不完全佐剂，Gibco公司，批号：1079128：生理盐水，南京小营制药厂，批号：000823；肌酐液体试剂(碱性苦味酸法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000406；尿素试剂盒(尿素酶法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000401；白蛋白液体试剂盒(溴甲酚绿法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：990908；胆固醇试剂盒(CHOD-PAP法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000502；甘油三酯试剂盒(GPO-PAP法)，北京中生生物工程高技术公司，批号：000510；尿蛋白试剂盒(化学比色法)，英国RANDOX公司，批号：3971H；羊抗鼠免疫荧光抗体(FITC)IgG，北京中山生物技术有限公司，批号：45501；兔抗人免疫荧光抗体(FITC)C3补体，北京中山生物技术有限公司，批号：038(101)。
3主要仪器
REVCO-80℃超低温冰箱，MILLIPORE纯水净化系统，TGL-16G台式高速离心机，DKB-8A型电热恒温水槽(上海精密实验设备有限公司)，HG75-3A型电热恒温两用箱(南京实验仪器厂)，LDZ5-2型离心机(北京医用离心机厂)。筒形大白鼠固定器(江苏省张家港市医用生理器械厂)。SHANDON冷冻切片机，AO荧光显微镜，JEM-1200EX透射电镜。
4动物
雄性健康Wistar大鼠，清洁级，体重180±20克，购自中国科学院上海实验动物中心，合格证：中科院动管会003号。
5饲料
饲料为南京江浦实验动物饲料厂生产的标准大鼠全价颗粒饲料。
6实验条件
实验过程中大鼠自由摄食、饮水，室内温度控制在18～24℃，相对湿度保持在40-70％。工作照度为150～300Lux，尽夜明暗交替时间(h)：10/14。
7统计方法
采用最小显著差法(LSD法)和方差分析法(F检验)进行统计分析。
实验例1：本发明药物组合物制成的片剂(健肾片)对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)所致大鼠膜性肾病的影响
1.分组及用药剂量
正常对照组：雄性Wistar大鼠10只，灌服蒸馏水3ml，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射生理盐水1ml，隔日一次。
模型对照组：雄性Wistar大鼠10只，灌服蒸馏水3ml，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次，肾炎四味片对照组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量0.79g/Kg，相当于人体用药量的5.5倍，以0.05g/ml的肾炎四味片混悬液灌胃，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。健肾片低剂量组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量2.1g/Kg，相当于人体用药量的3倍，制成0.14g/ml健肾片混悬液灌胃，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。
健肾片中剂量组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量4.2g/Kg，相当于人体用药量的6倍，以0.28g/ml的健肾片混悬液灌胃，每日一次。灌胃1小时后尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。
健肾片高剂量组：雄性Wistar大鼠10只，每日用药剂量8.4g/Kg，相当于人体用药量的12倍，以0.56g/ml健肾片混悬液灌胃，每日一次。灌胃后1小时尾静脉注射C-BSA4mg，将C-BSA用生理盐水配制成4mg/ml浓度的溶液尾静脉注射，隔日一次。
大鼠用药量均按文献方法换算。健肾片治疗组剂距比1∶2∶4。
1.2、给药时间：连续给药4周。
1.3、检测指标
1.4.1用药前及用药2周、4周分别收集24小时尿标本，测定尿量，检测24小时尿蛋白定量(UTP)、24小时尿肌酐(Ucr)。
1.4.2用药2周、4周分别眼眶静脉丛采血检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
1.4.3用药结束后每组随机取5只大鼠新鲜肾组织做免疫荧光检查。
1.4.4每组按从小到大编号顺序取2份，肾组织标本分别进行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光镜检查，并做超薄切片进行电镜检查。
2结果
2.1一般状况及尿量变化
表1健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠体重的影响(g，X±S)
| 组别 | 剂量(g/Kg体重) | 给药前体重 | 给药后体重 | |||
| 1周 | 2周 | 3周 | 4周 | |||
| 正常对照组 | - | 219.5±20.77 | 234.5±20.34 | 249.0±19.83 | 265.0±20.55 | 279.5±19.92 |
| 模型对照组 | - | 221.5±14.54 | 225.0±15.47 | 231.0±15.24 | 238.1±14.87* | 244.4±14.00* |
| 肾炎四味片组 | 1.33 | 219.0±20.25 | 228.0±20.03 | 238.5±19.01 | 249.0±19.69 | 258.5±22.37 |
| 健肾片I组 | 2.1 | 221.0±14.30 | 226.5±15.10 | 233.0±16.70 | 240.0±15.81* | 251.5±15.64* |
| 健肾片II组 | 4.2 | 220.5±17.55 | 227.5±19.18 | 237.0±20.58 | 248.5±20.96 | 262.0±23.59 |
| 健肾片III组 | 8.4 | 218.5±19.73 | 227.0±20.03 | 238.0±21.11 | 252.5±21.25 | 268.5±21.86Δ |
与正常对照组比较：*p＜0.05。
与模型对照组比较：P＜0.05。
表2健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠尿量的影响(ml/24h，±S)
组别 剂量 给药前 给药后2周 4周
(g/Kg体重)
正常对照组 - 7.40±3.99 8.63±3.21 7.31±3.90
(10) (10) (10)
模型对照组 - 7.35±1.85 13.47±6.58** 5.81±2.82
(10) (10) (8)
肾炎四味片组 1.33 7.34±1.15 8.15±3.47ΔΔ 10.52±8.00Δ
(10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 7.30±1.20 17.30±16.50Δ 17.29±12.84ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 7.47±2.87 15.16±9.44 11.19±4.26ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 7.36±2.62 10.80±6.62 12.28±6.86ΔΔ
(10) (10) (10)
与正常对照组比较：*p＜0.05，**p＜0.01。
与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔP＜0.01。
()内为动物数。
造模各组大鼠，造模后均出现精神不振，反应迟钝，喜拱背扎堆，毛发欠光泽，饮食减少，活动量少，体重增长缓慢，大便稀溏等。模型对照组大鼠有的出现腹胀大，会阴部水肿，有的处死时剖腹可见有大量腹水。治疗组与模型对照组相比程度要轻，一般状况要好于模型对照组。治疗组体重增加高于模型对照组，健肾片III组体重明显高于模型对照组，P＜0.05。造模后，模型对照组大鼠尿量先增加后减少，给药4周后，健肾片I、II、III组尿量明显大于模型对照组，P＜0.01。
实验过程中，模型对照组大鼠死亡2只。其中1只因采血不慎致失血过多而死亡，另1只死亡大鼠肤色苍白，形体瘦弱，死亡后解剖见腹腔有大量腹水，肾脏及其它脏器未见明显异常。
2.2 24小时尿蛋白定量的变化
结果见表3。
表3健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠24小时尿蛋白的影响(mg/24h，X±S)
组别 剂量 给药前 给药后2周 4周
(g/Kg体重)
正常对照组 - 3.57±2.07 5.73±2.03 8.20±3.65
(10) (10) (10)
模型对照组 - 3.87±2.36 58.74±39.6** 266.4±103.3**
(10) (10) (8)
肾炎四味组 1.33 3.65±1.48 39.83±22.31ΔΔ 70.6424.62ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 3.82±1.99 33.97±15.2ΔΔ 47.51±24.23ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 3.36±1.08 31.03±6.30ΔΔ 42.01±12.74ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 3.79±1.36 26.39±11.83ΔΔ 29.60±11.06ΔΔ
(10) (10) (10)
与正常对照组比较： *P＜0.01。
与模型对照组比较：ΔΔP＜0.01。
()内为动物数。
造模后，大鼠尿蛋白明显升高，模型组与正常组比较P＜0.01。健肾片I、II、III组组尿蛋白明显低于模型对照组(P＜0.01)。给药2周时即起效，4周非常明显。
2.3血肌酐和尿素氮的变化
表4健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠血肌酐和尿素氮的影响(X±S)
组别 剂量 Scr(μmmol/L) BUN(mmol/L)
(g/Kg体重) 2周 4周 2周 4周
正常对照组 - 105±2.11 102±8.01 4.33±0.73 4.14±1.51
(10) (10) (10) (10)
模型对照组 - 144±39.26** 125±7.5** 9.62±4.01* 10.5±2.98**
(10) (8) (10) (8)
肾炎四味片组 1.33 115±11.1ΔΔ 119±10.9 7.52±1.75ΔΔ 6.51±1.38ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 130±28.5Δ 123±14.4 7.80±1.25Δ 6.66±0.85ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 122±8.65ΔΔ 115±8.09ΔΔ 7.01±1.56Δ 6.40±1.17ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 115±9.03ΔΔ 115±9.03ΔΔ 6.38±1.14Δ 5.52±2.41ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔΔ＜0.01
()内为动物数。
表4表明，大鼠造模后血肌酐、尿素氮升高，健肾片组两者数值低于模型组。给药4周后，健肾片II、III组血肌酐明显低于模型组(P＜0.01)，健肾片I、II、III组血尿素氮含量低于模型组(P＜0.01)。
2.4血浆白蛋白的变化
表5健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠血浆白蛋白的影响(g/L X±S)
组别 剂量 2周 4周
(g/Kg体重)
正常对照组 - 36.4±0.52 38.3±0.82
(10) (10)
模型对照组 - 29.6±1.35** 29.0±1.51**
(10) (8)
肾炎四味片组 1.33 35.3±6.4ΔΔ 2.8±1.81ΔΔ
(10) (10)
健肾片I组 2.1 32.3±1.49Δ 32.0±1.05Δ
(10) (10)
健肾片II组 4.2 34.3±5.26ΔΔ 32.1±0.74Δ
(10) (10)
健肾片III组 8.4 36.4±7.43ΔΔ 33.4±1.65ΔΔ
(10) (10)
与正常对照组比较：**P＜0.01。
与模型对照组比较：ΔP＜0.05。ΔP＜0.01。()内为动物数。
从表5可以看出，大鼠造模后血浆白蛋白下降，模型组与正常组比较差异显著(P＜0.01)。给药2周、4周时，健肾片I、II、II工组血浆白蛋白均明显高于模型组(P＜0.05、0.01)。
2.5胆固醇与甘油三酯的变化
表6健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠胆固醇、甘油三酯的影响(mmol/L，X±S)
组别 剂量 CHO TG
(g/Kg体重) 2周 4周 2周 4周
正常对照组 - 1.89±0.10 1.45±0.10 1.15±0.14 2.06±0.21
(10) (10) (10) (10)
模型对照组 - 3.25±0.51** 4.42±0.74** 2.76±0.66** 4.04±1.65**
(10) (8) (10) (8)
肾炎四味片组 1.33 1.57±0.57ΔΔ 2.51±0.34ΔΔ 1.26±0.51ΔΔ 2.09±0.38ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 1.20±0.36ΔΔ 2.15±0.18ΔΔ 1.21±0.40ΔΔ 65±0.47ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 1.62±0.40ΔΔ 2.16±0.26ΔΔ 0.88±0.35ΔΔ 50±0.50ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 1.31±0.41ΔΔ 2.02±0.32ΔΔ 1.12±0.67ΔΔ 33±0.22ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
与正常对照组比较：*P＜0.05，*P＜0.01。
与模型对照组比较：ΔΔP＜0.01。()内为动物数。
从表6可知，造模后模型组大鼠胆固醇、甘油三酯均升高，与正常组比较P＜0.01。给药4周后，健肾片I、II、III组CHO、TG均明显低于模型组(P＜0.01)。
2.6尿肌酐、内生肌酐清除率的变化
表7健肾片对C-BSA所致膜性肾病大鼠Ucr、Ccr的影响(X±S)
组别 剂量 Ucr(μmol/L) Ccr(ml/24h)
(g/Kg体重) 给药前 给药后2周 4周 给药后2周 4周
正常对照组 - 5634±1579 3976±1279 4215±1940 298±67 241±64.4
(10) (10) (10) (10) (10)
模型对照组 - 5717±2336 3350±1755* 3631±1251* 245±29.3* 149±49*
(10) (10) (8) (10) (8)
肾炎四味片组 1.33 5027±1898 3992±1440ΔΔ 5158±2939ΔΔ 268±141 307±94
(10) (10) (10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 5091±1739 3513±1852 3801±2592 286±99.6 310±92.1
(10) (10) (10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 5947±1653 4269±2572ΔΔ 4187±1635Δ00 357±95.2ΔΔ 363±50.5ΔΔ
(10) (10) (10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 5023±1572 4888±2434ΔΔ 4887±2709ΔΔ 362±96.8ΔΔ 388±40.4ΔΔ
(10) (10) (10) (10) (10)
与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。 ()内为动物数。
由表7可知，造模后大鼠Ucr、Ccr下降，与正常组比较P＜0.05。给药4周后，健肾片II、III组Ucr、Ccr较模型对照组升高，P＜0.05、0.01。
2.7病理形态学改变
2.7.1免疫荧光检查
在荧光显微镜下放大400倍观察，记录荧光强度，并用柯达400(27定)胶卷摄片，曝光指数设定为800，测定自动曝光时间(秒)。每个标本分别测定5个肾小球，求出平均值。结果见下表。
表8 4周时大鼠肾组织免疫荧光曝光时间的比较(秒，X±S)
组别 剂量 IgG C3
(g/Kg体重)
模型对照组 - 0.76±0.06 1.43±0.83
肾炎四味片组 1.33 1.85±0.40 4.76±1.69Δ
健肾片I组 2.1 5.98±0.58Δ 6.92±1.10Δ
健肾片II组 4.2 10.25±0.97Δ 11.19±1.56Δ
健肾片III组 8.4 15.84±1.97ΔΔ 21.35±2.19ΔΔ
与模型对照组比较： P＜0.05。 AAP＜0.01。
正常对照组：在荧光显微镜下，肾小球毛细血管壁无IgG、C3沉积。
模型对照组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁呈耀眼的弥漫性的细颗粒状沉积，荧光强度为+++～++++。放大400倍摄片时自动曝光时间最短。
肾炎四味片组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁呈细颗粒状沉积，荧光强度为++～+++。摄片时自动曝光时间较模型组延长。见图3-4。
健肾片I组：IgG、C3沿肾小球毛细备管壁呈细颗粒状沉积，荧光强度++～+++，自动曝光时间较模型对照组延长，P＜0.05。见图5-6。
健肾片II组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁呈细颗粒状沉积，荧光强度+～++，亮度较模型组明显减弱，自动曝光时间较模型对照组延长，P＜0.05。健肾片III组：IgG、C3沿肾小球毛细血管壁似乎可见有细颗粒状沉积，荧光强度±～+，自动曝光时间明显延长，与模型对照组比较P＜0.01。
2.7.2光镜检查
参照章友康[2]等方法测量肾小球直径和肾小球内细胞数。光镜下放大400倍，肾小球直径为每张切片中5个最大肾小球直、横径的平均值，肾小球细胞数为每张切片中5个最大肾小球细胞数的平均值。结果见下表。
表9 4周时大鼠肾小球直径和肾小球细胞数的比较(X±S)
组别 剂量 肾小球直径 肾小球细胞数
(g/Kg体重) (μm) (个/肾小球)
正常对照组 - 89.10±3.12 43.50±5.81
模型对照组 - 107.21±6.34* 76.47±6.20*
肾炎四味片组 1.33 103.54±5.79 59.20±7.24
健肾片I组 2.1 105.46±7.01 62.32±8.15
健肾片II组 4.2 97.50±6.03 56.78±5.38
健肾片III组 8.4 92.14±6.40Δ 51.54±4.36Δ
与正常对照组比较：*P＜0.05。
与模型对照组比较：ΔP＜0.05。
正常对照组：HE染色肾小球结构正常分布均匀，肾小球毛细血管袢开放，基底膜无增厚，上皮细胞足突形态正常，系膜细胞及基质无增殖，肾小球直径为89.10±3.12llm，肾小球细胞数为43.50±5.81个/肾小球，肾小管、间质无异常。PAS、PAM、Masson染色无异常。
模型对照组：在HE、PAS、PAM、MASSON染色下，肾小球体积增大，细胞数增加，肾小球直径为107.21±6.34llm，肾小球细胞数为76.47±6.20个/肾小球，与正常组比较P＜0.05。基质增多，基底膜无明显增厚现象。
肾炎四味片组、健肾片I、I.I、III组：肾小球体积增大，细胞数略增多，健肾片III组肾小球直径为92.14±6.40lim，肾小球细胞数为51.54±4.36个/肾小球，与模型对照组比较P＜0.05。基底膜无明显增厚。
2.7.3电镜检查
正常对照组：肾小球细血管袢开放，内皮细胞分布均匀，基底膜厚度100～150，无增厚，无电子致密物沉积，三层结构清晰，上皮细胞无肿胀，足突清晰无融合，系膜区无扩大，未见系膜细胞增生基质增多。见图17-18。
模型对照组：肾小球毛细血管基底膜较正常组增厚，厚度为200～300，上皮细胞下见少量电子致密物沉积，上皮细胞广泛足突融合，有明显的假绒毛样改变。
肾炎四味片组：肾小球毛细血管基底膜无明显增厚，上皮细胞下无电子致密物沉积，上皮细胞足突融合、有假绒毛样改变。见图23-24。
健肾片工组：肾小球毛血血管基底膜无明显增厚，上皮细胞足突融合，假绒毛样改变仍存在，未见电子致密物沉积。健肾片II组：肾小球毛细血管基底膜无明显增厚，未见电子致密物沉积，上皮细胞足突融合，有假绒毛样改变。
健肾片III组：肾小球超微结构接近正常，肾小球毛细血管壁基底膜无增厚，无电子致密物沉积，上皮细胞足突融合及假绒毛样改变明显减轻。
3试验结论
用C-BSA制作大鼠MN模型已被广泛用于药理药效学研究。由于抗原的理化或免疫学特性，可预先种植或结合于肾小球，后来在肾脏原位形成IC，最后导致肾炎的产生。[2]本实验用C-BSA复制大鼠膜性肾病模型，与文献报道变化一致。采用健肾片干粉高、中、低剂量组灌服MN大鼠连续4周，结果表明：健肾片I、II、III组对大鼠删的尿蛋白有明显的降低作用，并能降低血肌酐、尿素氮，提高内生肌酐消除率，升高血浆白蛋白，降低胆固醇、甘油三酯，且具有明显的利尿作用。肾脏组织学观察提示，健肾片I、II、III剂量组能减轻删大鼠肾小球毛细血管基底膜的增厚和C3、IgG的沉积的荧光反应，及上皮电子致密物的沉积，健肾片组病理损害明显轻于模型对照组。
实验例2：对嘌呤霉素所致大鼠微小病变型肾病的影响
1、分组及用药剂量
同实验例1。
1.3给药时间
从第一次注射嘌吟霉素起，连续给药4周。
1.4检测指标
1.4.1用药前及用药2周、4周分别收集24小时尿标本，测定尿量，检测24小时尿蛋白定量(UTP)、24小时尿肌酐(Ucr)。
1.4.2用药2周、4周分别眼眶静脉丛采血检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。
1.4.3每组按从小到大编号顺序取2份，肾组织标本分别进行邢染色、PAS染色、PAM染色、Masson染色做光镜检查，并做超薄切片进行电镜检查。
病理组织学检查由江苏省中医院病理科、南京军区总院病理科电镜室承担。
2结果
2.1一般状况及尿量变化
表10 健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠体重的影响(g，X±S)
组别 剂量 给药前体重 给药后体重
(g/Kg体重) 1周 2周 3周 4周
正常对照组 - 199.0±14.87 212.5±16.71 228.0±17.98 244.5±16.91 262.5±18.45
模型对照组 - 200 5±14.62 204.5±15.54 210.0±16.50 216.0±18.23* 226.5±20 69*
肾炎四味片组 1.33 200.0±13.74 206.0±13.50 206.5±14.54 229.0±18.07 246.5±20.55
健肾片I组 2.1 199.5±16.41 204.0±18.38 211.5±18.57 221.5±20.56 233 5±22.49*
健肾片II组 4.2 201.0±13.29 208.5±15.64 219.5±17.71 233.0±19.61 248.5±22.24
健肾片m组 8.4 198.5±15.64 205.5±16.95 217.5±18.61 234.0±22.09 251.5±24.16Δ
与正常对照组比较：*p＜0.05。
与模型对照组比较：P＜0.05。
表11 健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠尿量的影响(ml/24h，X±S)
组别 剂量 给药前 给药后2周 4周
(g/kg体重)
正常对照组 - 12.57±3.47 13.13±5.74 12.44±2.74
(10) (10) (10)
模型对照组 - 3.29±5.06 8.63±3.21** 7.31±3.90**
(10) (10) (10)
肾炎四味片组 1.33 13.02±4.95 8.58±4.69 9.65±3.53
(10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 2.86±3.87 14.50±8.96ΔΔ 13.22±4.68ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 13.85±4.24 12.48±3.02Δ 12.95±3.02ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 12.73±3.62 10.25±4.98 9.38±3.46
(10) (10) (10)
与正常对照组比较：*p＜0.05，**P＜0.01
与模型对照组比较：P＜0.05，P＜0.01，()内为动物数。
造模大鼠腹腔注射嘌呤霉素后，出现饮食减少、大便稀溏，懒动，喜拱背扎堆，体重增长减慢等变化。各治疗组与模型对照组相比，程度要轻，体重增长高于模型对照组，其中健肾片工II组体重明显高于模型对照组，P＜0.05。造模后模型对照组大鼠尿量在2周、4周时均减少，与正常组比较P＜0.01。健肾片I、II组尿量在2周、4周时比模型对照组明显增加，P＜0.01，P＜0.05。
2.2 24小时尿蛋白定量的变化
表12健肾片对嘌吟霉素所致微小病变型肾病大鼠UTP的影响(mg/24h X±S)
组别 剂量 给药前 给药后2周 4周
(g/Kg体重)
正常对照组 - 8.15±3.21 7.37±2.03 8.20±3.65
(10) (10) (10)
模型对照组 - 7.90±2.06 1783±288** 1805±413**
(10) (10) (10)
肾炎四味片组 1.33 7.69±2.64 781±204ΔΔ 983±276ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 8.12±2.12 803±147ΔΔ 1121±387ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 7.85±2.24 794±245ΔΔ 811±319ΔΔ
(10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 7.86±2.33 431±67ΔΔ 625±127ΔΔ
(10) (10) (10)
与正常对照组比较： *P＜0.01
与模型对照组比较：“P＜0.01，()内为动物数
从表12可以看出，造模后大鼠尿蛋白明显增加，2周、4周时模型组尿蛋白与正常组比较均有非常显著差异，P＜0.01。健肾片I、II、III组和肾炎四味片组2周、4周时尿蛋白均明显低于模型对照组，P＜0.01。
2.3血肌酐和尿素氮的变化
表13 健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠Scr和BUN的影响(X±S)
组别 剂量 Scr(μmmol/L) BUN(mmol/L)
(g/Kg体重) 2周 4周 2周 4周
正常对照组 - 99±8.46 102±8.87 3.51±0.92 3.83±1.42
(10) (10) (10) (10)
模型对照组 - 130±5.61** 122±15.19** 8.99±4.03** 9.29±3.11**
(10) (8) (10) (10)
肾炎四味片组 1.33 105±4.67ΔΔ 119±12.94 8.47±2.21 6.51±1.31ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 116±13.55ΔΔ 121±15.52 7.62±±4.70 6.95±1.30Δ
(10) (10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 103±4.04ΔΔ 118±17.20 6.51±3.15Δ 6.40±1.12ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 101±4.25ΔΔ 117±8.47Δ 8.30±2.56 6.93±1.87Δ
(10) (10) (10) (10)
与正常对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
与模型对照组比较：P＜0.05，P＜0.01，()内为动物数。
表13说明，造模后模型组大鼠血肌酐、尿素氮升高，与正常组比较有非常显著差异，P＜0.01。各治疗组大鼠血肌酐、尿素氮较模型组降低。其中2周时健肾片I、II、III组和肾炎四味片组血肌酐明显低于模型对照组，P＜0.01，健肾片II组尿素氮低于模型组，P＜0.05；4周时健肾片I、II组血肌酐与模型组比较有显著差异，P＜0.05；4周时健肾片III组血肌酐与模型组比较有显著差异，P＜0.05，健肾片II组和肾炎四味片组尿素氮与模型组比较P＜0.01，健肾片I、III组尿素氮与模型组比较P＜0.05。
2.4血浆白蛋白的变化
结果见表14。
表14健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠ALB的影响(g/L，±S)
组别 剂量 2周 4周
(g/Kg体重)
正常对照组 - 36.40±0.84 38.5±0.97ΔΔ
(10) (10)
模型对照组 - 33.26±0.23** 32.5±0.44**
(10) (10)
肾炎四味片组 1.33 35.25±0.36Δ 34.25±0.73
(10) (10)
健肾片I组 2.1 34.40±0.73 33.05±0.12
(10) (10)
健肾片II组 4.2 36.53±0.24ΔΔ 36.97±0.23ΔΔ
(10) (10)
健肾片III组 8.4 36.01±0.52ΔΔ 35.92±0.38Δ
(10) (10)
与正常对照组比较： **P＜0.01
与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01
表14显示，造模后模型组大鼠ALB明显下降，与正常组比较有非常显著差异，P＜0.01。健肾片II、III组较模型组升高，比较有显著差异和非常显著差异，P值分别＜0.05，＜0.01。
2.5胆固醇与甘油三酯的变化
表15健肾片对嘌呤霉素所致微小病变型肾病大鼠CHO、TG的影响(mmol/L，X±S)
组别 剂量 CHO TG
(g/Kg体重) 2周 4周 2周 4周
正常对照组 - 1.97±0.16 1.46±0.10 1.14±0.19 2.14±0.34
(10) (10) (10) (10)
模型对照组 - 2.91±1.00** 3.06±2.06** 1.67±0.70* 2.79±0.69*
(10) (10) (10) (10)
肾炎四味片组 1.33 1.75±0.47Δ 2.52±0.37 1.50±0.95 2.14±0.55Δ
(10) (10) (10) (10)
健肾片I组 2.1 2.00±0.99 2.67±0.67 1.56±0.98 2.25±1.22
(10) (10) (10) (10)
健肾片II组 4.2 1.80±1.01Δ 2.62±0.82 1.28±0.52Δ 1.90±0.82Δ
(10) (10) (10) (10)
健肾片III组 8.4 1.65±0.65Δ 2.29±0.61Δ 1.28±0.78Δ 1.46±0.50ΔΔ
(10) (10) (10) (10)
与正常对照组比较：*P＜0.05，**p＜0.01
与模型对照组比较：ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，()内为动物数。
由表15可知，造模后模型组大鼠CHO、TG均升高，与正常组比较分别P＜0.01和P＜0.05。各治疗组CHO、TG较模型组降低，2周时健肾片II、III组CHO、TG与模型组比较P＜0.05；4周时健肾片II组TG与模型组比较P＜0.05，健肾片III组CHO、TG与模型组比较P＜0.05，P＜0.01。
2.6病理形态学改变
2.6.1光镜检查：
模型组：HE染色示近曲小管严重破坏，小管内皮损伤，小管上皮细胞有泡沫样变性，局部小管有坏死。PAS染色示肾小管刷状缘破坏明显。
肾炎四味片组，健肾片I、II、III剂量组：HE染色示肾组织已基本达到正常水平，PAS染色刷状缘修复比较明显。
2.6.2电镜检查：
模型组：肾小球基底膜外侧上皮细胞足突肿大，细胞质内空泡变性，溶酶体增多，间质细胞增多，近曲小管微绒毛受损伤，远曲小管刷状缘有病变。
肾炎四味片组，健肾片I、II、III剂量组：病理改变轻于模型组，上皮细胞足突基本正常，溶酶体仍多，但空泡变性减少，间质空隙增大，细胞减少，近曲小管内膜恢复正常，远曲小管微绒毛正常。见图33。健肾片I、II、III剂量组的病理改变又轻于肾炎四味片组。
2.6.3组织免疫检查：
光镜见模型组在破坏的肾小管内，有较多的补体C3；各治疗组随着肾小管组织的修复，补体C3大肾组织内在大减少，但修复的组织内仍见有补体C3。免疫电镜示模型组损伤绒毛区、管腔内有绒毛碎片，内含大量C3补体，而各治疗组损伤片断仍有，内含C3补体量减少。
3试验结论
现已发现在众多的动物肾病模型中，嘌吟霉素连续注射于大鼠可获得类似于人类的微小病变肾病。嘌呤霉素所致肾病的机理，多数学者认为是嘌呤霉素对肾，特别是对肾小球直接损害所致。在本次实验中用嘌呤霉素制作大鼠微小病变型肾病模型，与文献报道变化一致。采用健肾片干粉高、中、低剂量组灌服微小病变型肾病大鼠连续4周，结果表明：健肾片I、II、III组对大鼠微小病变型肾病的尿蛋白有显著的降低作用；并能降低血肌酐、尿素氮，升高血浆白蛋白，降低胆固醇、甘油三酯，且健肾片I、II组具有明显的利尿作用，与模型对照组对比P＜0.01。肾脏组织学检查提示：健肾片I、II、III剂量组能减轻肾小球基底膜外侧上皮细胞足突肿大，减少细胞质内的空泡变性，病理损害明显轻于模型对照组。
本发明下列实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1：
黄芪(生)875g 茯苓437.5g 淫羊藿233g 僵蚕350g
全蝎 43.7g 泽泻233g 石韦437.5g 青风藤875g
青风藤过20目筛粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，即得青风藤浓缩液；
黄芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，得黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液；
僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录I0流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.25，即得僵蚕、全蝎浓缩液；
石韦、泽泻一起加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，加95％的乙醇，使含醇量达70％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；
将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，湿法制粒，80℃风热干燥，得干颗粒；
将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，加入10％药用糊精拌匀，80℃风热干燥，100目筛粉碎，加入5％的药用淀粉和1％的微晶纤维素，混匀，制粒，整粒，得干颗粒；
将两种颗粒和0.5％的药用硬脂酸镁混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得；每片重0.35g，相当于原药材3.48g。
实施例2：
黄芪(生)890g 茯苓422.5g 淫羊藿240g 僵蚕334g
全蝎 45.7g 泽泻240g 石韦422.5g 青风藤890g
制备方法：
青风藤过20目筛粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1.5倍量PH值为8.0～9.0的78％的乙醇浸渍7～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的78％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～75℃的条件下回收乙醇，再浓缩至75℃下相对密度为1.35，即得青风藤浓缩液；
黄芪(生)、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，得黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液；
僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量78％的乙醇照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至75℃下相对密度为1.25，即得僵蚕、全蝎浓缩液；
石韦、泽泻一起加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，加95％的乙醇，使含醇量达70％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至75℃相对密度为1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；
将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，湿法制粒，75℃风热干燥，得干颗粒；
将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，加入10％药用糊精拌匀，75℃风热干燥，100目筛粉碎，加入5％的药用淀粉和1％的微晶纤维素，混匀，制粒，整粒，得干颗粒；
将两种颗粒加常规赋型剂糊精适量，制成胶囊1000粒，即得组合物的胶囊，每粒装0.35g，相当于原药材3.48g。
实施例3：本组合物片剂的质量控制方法：
鉴别：(1)取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)取本组合物制成的片剂15片，除去薄膜衣后，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)取本组合物制成的片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
(1)黄芪甲苷取本组合物制成的片剂20片，除去薄膜衣后，研细，取细粉39，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水15ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，其内径1.5cm，长12cm，，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇100ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每片含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计不得少于0.18mg；
(2)淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以30∶70的乙腈-水为流动相，检测波长270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，取0.5g，精密称定，加70％乙醇25ml，超声处理1小时，滤过，滤渣用适量70％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于0.20mg.
Claims (17)
1、一种治疗慢性肾炎的中药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：
黄芪700-1000重量份 茯苓300-500重量份
淫羊藿100-300重量份 僵蚕200-500重量份
全蝎30-50重量份 泽泻100-300重量份
石韦300-600重量份 青风藤700-1000重量份
2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：
生黄芪875重量份 茯苓437.5重量份
淫羊藿233重量份 僵蚕350重量份
全蝎43.7重量份 泽泻233重量份
石韦437.5重量份 青风藤875重量份
3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：
生黄芪890重量份 茯苓422.5重量份
淫羊藿240重量份 僵蚕334重量份
全蝎45.7重量份 泽泻240重量份
石韦422.5重量份 青风藤890重量份
4.如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还可加入赋型剂制成临床可接受的剂型。
5.如权利要求1、2或3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
青风藤粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1-2倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的70-85％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得青风藤浓缩液；
生黄芪、茯苓、淫羊藿，加7-9倍量水煎煮2-3次，每次1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，得黄芪、茯苓、淫羊藿浓缩液；
僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加10-14倍量75-85％的乙醇照流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.20-1.35，即得僵蚕、全蝎浓缩液；
石韦、泽泻一起加5-7倍量水煎煮2次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，加90-96％的乙醇，使含醇量达65-80％，充分搅拌，静置10-14小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.20-1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；
将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，得混合物A；
将黄芪、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，得混合物B；
将上述两种A、B混合物混合得本发明药物组合物，该药物组合物，经过常规工序直接或加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型。
6、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：青风藤过20目筛粉碎成粗粉，在有盖容器中将药材和1.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇浸渍6～8小时，取出、分层，将润湿的药材松紧适度地装于渗漉筒中，药材装填好后，先打开浸液出口，再添加8.5倍量PH值为8.0～9.0的75％的乙醇，按每公斤药材每分钟1～3ml的速度进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液的PH值为弱碱性；渗漉液于75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，即得青风藤浓缩液；生黄芪、茯苓、淫羊藿，加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，离心，得离心液，再浓缩至80℃下相对密度为1.35，得黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液；僵蚕、全蝎粉碎成粗粉，加12倍量80％的乙醇流浸膏剂与浸膏剂下的方法渗漉，收集渗漉液，75～80℃的条件下回收乙醇，浓缩至80℃下相对密度为1.25，即得僵蚕、全蝎浓缩液；石韦、泽泻一起加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至适量，每毫升相当于原药材2g，加95％的乙醇，使含醇量达70％，充分搅拌，静置12小时，取上清液，在75～80℃的条件下回收乙醇，再浓缩至80℃相对密度为1.35，即得石韦、泽泻浓缩液；将浓缩液青风藤浓缩液和僵蚕、全蝎浓缩液混和，湿法制粒，80℃风热干燥，得干颗粒；将黄芪(生)、茯苓、淫羊藿浓缩液和石韦、泽泻浓缩液混和，加入10％药用糊精拌匀，80℃风热干燥，100目筛粉碎，加入5％的药用淀粉和1％的微晶纤维素，混匀，制粒，整粒，得干颗粒；将两种颗粒和0.5％的药用硬脂酸镁混匀，压制成1000片，包薄膜衣，即得。
7、权利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：
a.取本组合物制剂3.5g，加甲醇40-60ml，置水浴上加热回流1.5-3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.5-3ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以12-14∶5-7∶1.5-3的氯仿-甲醇-水在9-11℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b.取本组合物制剂3.5g，加60-80％乙醇40-60ml，加热回流0.5-1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水9-11ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取1-3次，每次15-25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-3次，每次20-40ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以9-11∶0.5-1.5∶0.5-1.5∶0.5-1.5醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
c.取本组合物制剂5.3g，加乙醚20-35ml，加热回流0.5-1.5小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚30-50ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，80-90∶14-16∶0.5-1.5的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和10-20分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
d.取本组合物制剂1.8g，加乙醇14-18ml，超声处理25-35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-8∶1-3∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
8、如利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：
a.取本组合物制剂3.5g，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b.取本组合物制剂3.5g，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
c.取本组合物制剂5.3g，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
d.取本组合物制剂1.8g，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
9、如利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法中的一种或几种：
a.黄芪甲苷，取本组合物制剂，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次40-60ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-60％乙醇洗脱，弃去30-60％乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇100-140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每0.35g含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；
b.淫羊藿苷∶色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以25-40∶60-80的乙腈-水为流动相，检测波长260-280nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制剂，研细，取0.5g，精密称定，加60-80％乙醇25ml，超声处理0.5-2小时，滤过，滤渣用适量60-80％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水8-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次15-25ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；
10、如利要求9所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法中的一种或几种：
a.黄芪甲苷：取本组合物制成的片剂20片，除去薄膜衣后，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水15ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，其内径1.5cm，长12cm，，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇100ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每片含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；
b.淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以30∶70的乙腈-水为流动相，检测波长270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本品10片，除去薄膜衣后，研细，取0.5g，精密称定，加70％乙醇25ml，超声处理1小时，滤过，滤渣用适量70％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；
11、如权利要求1、2或3所述的药物组合物的质量控制方法包括如下步骤：
鉴别：取本组合物制剂3.5g，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取本组合物制剂3.5g，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮一水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取本组合物制剂5.3g，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取本组合物制剂1.8g，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：取本组合物制剂，研细，取细粉3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水10-20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次15-30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次40-60ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过吸附树脂柱，以水40-60ml洗脱，弃去水液，再用30-60％乙醇洗脱，弃去30-60％乙醇洗脱液，继用60-80％乙醇100-140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以12-14∶5-7∶1-3的氯仿-甲醇-水在8-12℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得每0.35g含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以25-40∶60-80的乙腈-水为流动相，检测波长260-280nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制剂，研细，取0.5g，精密称定，加60-80％乙醇25ml，超声处理0.5-2小时，滤过，滤渣用适量60-80％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水8-12ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2-4次，每次15-25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次15-25ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；
12、如权利要求11所述的药物组合物的质量控制方法包括如下步骤：
鉴别：取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加甲醇50ml，置水浴上加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酚乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以10∶1∶1∶1的醋酸乙酯-甲酸-丁酮-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取本组合物制成的片剂15片，除去薄膜衣后，研细，加乙醚25ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加环乙烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取茯苓对照药材8g，加乙醚40ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶6薄层板上，以石油醚30-60℃下，84∶15∶1的石油醚-丙酮-醋酸乙酯为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取本组合物制成的片剂5片，除去薄膜衣，研细，加乙醇15ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取青藤碱对照品，加乙醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶2∶1的甲苯-醋酸乙酯-二乙胺为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试剂；供试品色谱中，在与对照晶色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
黄芪甲苷：取本组合物制成的片剂20片，除去薄膜衣后，研细，取细粉39，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，冷浸过夜，置水浴上加热回流提取至无色，提取液回收甲醇并浓缩至于，残渣加水15ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加水5～7ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，其内径1.5cm，长12cm，，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇100ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇120ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml约含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，精密吸取供试品溶液4μl，对照晶溶液2μl与6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13∶6∶2的氯仿-甲醇-水在10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得本品每0.35g含黄芪以黄芪甲苷计不得少于0.18mg；
淫羊藿苷：色谱条件与系统适应性实验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以30∶70的乙腈-水为流动相，检测波长270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500；对照品溶液的制备，精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备，取本组合物制成的片剂10片，除去薄膜衣后，研细，取0.5g，精密称定，加70％乙醇25ml，超声处理1小时，滤过，滤渣用适量70％乙醇洗涤，收集滤液与洗涤液，置水浴上蒸于，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，分取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，作为供试品溶液；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得本品每0.35g含淫羊藿以淫羊藿苷计不得少于0.20mg；
13、如权利要求1、2或3所述的药物组合物在制备治疗慢性肾炎的药物中的应用。
14、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指显著降低尿蛋白。
15、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指降低血肌酐、尿素氮，升高血浆白蛋白，降低胆固醇、甘油三酯。
16、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指具有明显的利尿作用。
17、如权利要求13所述的应用，其特征在于所述治疗慢性肾炎是指减轻肾小球基底膜外侧上皮细胞足突肿大，减少细胞质内的空泡变性。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB021489378A CN1261114C (zh) | 2002-11-12 | 2002-11-12 | 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB021489378A CN1261114C (zh) | 2002-11-12 | 2002-11-12 | 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1500517A true CN1500517A (zh) | 2004-06-02 |
| CN1261114C CN1261114C (zh) | 2006-06-28 |
Family
ID=34233405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB021489378A Expired - Lifetime CN1261114C (zh) | 2002-11-12 | 2002-11-12 | 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1261114C (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1839928B (zh) * | 2006-01-16 | 2010-11-17 | 重庆医药工业研究院有限责任公司 | 一种治疗慢性肾炎的中成药及其制备方法 |
| CN103463514A (zh) * | 2013-09-06 | 2013-12-25 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 治疗慢性肾炎蛋白尿的中药组合物及其制备方法和用途 |
| CN103656077A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-03-26 | 江苏省中医院 | 一种具有治疗慢性肾脏病的中药复方组合物 |
| CN104950068A (zh) * | 2015-06-03 | 2015-09-30 | 贵阳中医学院第二附属医院 | 补肾祛风更年合剂的质量检测方法 |
| CN105079014A (zh) * | 2014-04-23 | 2015-11-25 | 北京东方百奥医药开发有限公司 | 淫羊藿苷或淫羊藿次苷ⅱ用于防治肾脏疾病的用途 |
| CN105816659A (zh) * | 2016-04-13 | 2016-08-03 | 吉林省肾病研究中心 | 复方康肾片及其制备方法 |
| CN107782811A (zh) * | 2016-08-26 | 2018-03-09 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法及获得的芪苓健肾片指纹图谱 |
-
2002
- 2002-11-12 CN CNB021489378A patent/CN1261114C/zh not_active Expired - Lifetime
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1839928B (zh) * | 2006-01-16 | 2010-11-17 | 重庆医药工业研究院有限责任公司 | 一种治疗慢性肾炎的中成药及其制备方法 |
| CN103463514A (zh) * | 2013-09-06 | 2013-12-25 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 治疗慢性肾炎蛋白尿的中药组合物及其制备方法和用途 |
| CN103463514B (zh) * | 2013-09-06 | 2015-07-22 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 治疗慢性肾炎蛋白尿的中药组合物及其制备方法和用途 |
| CN103656077A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-03-26 | 江苏省中医院 | 一种具有治疗慢性肾脏病的中药复方组合物 |
| CN105079014A (zh) * | 2014-04-23 | 2015-11-25 | 北京东方百奥医药开发有限公司 | 淫羊藿苷或淫羊藿次苷ⅱ用于防治肾脏疾病的用途 |
| CN105079014B (zh) * | 2014-04-23 | 2019-02-22 | 苏州广奥医药开发有限公司 | 淫羊藿苷或淫羊藿次苷ⅱ用于防治肾脏疾病的用途 |
| CN104950068A (zh) * | 2015-06-03 | 2015-09-30 | 贵阳中医学院第二附属医院 | 补肾祛风更年合剂的质量检测方法 |
| CN105816659A (zh) * | 2016-04-13 | 2016-08-03 | 吉林省肾病研究中心 | 复方康肾片及其制备方法 |
| CN107782811A (zh) * | 2016-08-26 | 2018-03-09 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法及获得的芪苓健肾片指纹图谱 |
| CN107782811B (zh) * | 2016-08-26 | 2020-05-22 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1261114C (zh) | 2006-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101036774A (zh) | 一种复方斑蝥口服制剂的质量控制方法 | |
| CN1954840A (zh) | 一种由绞股蓝、西洋参和黄芪制成的药物组合物 | |
| CN1850249A (zh) | 一种具有止咳平喘作用的组合物及其制备方法 | |
| CN101062294A (zh) | 一种治疗脑中风及脉管炎的药物组合物的质量检测方法 | |
| CN1748740A (zh) | 枳实总黄酮及其制剂的制备方法和质量控制方法 | |
| CN1500517A (zh) | 一种治疗慢性肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN1245198C (zh) | 一种治疗糖尿病的中药组合物及其制备方法 | |
| CN1876039A (zh) | 治疗上呼吸道感染等疾病的药物制剂及制法和质控方法 | |
| CN1600365A (zh) | 十全大补膏的质量控制方法 | |
| CN1895438A (zh) | 一种治疗头痛的中药组合物及其制备方法 | |
| CN1626228A (zh) | 六味地黄汤提取物，其药物组合物及其医药用途 | |
| CN1814127A (zh) | 肾宝制剂及其制备方法质量控制方法 | |
| CN101041004A (zh) | 一种新的抗肿瘤复方药物 | |
| CN101049293A (zh) | 乙酰半胱氨酸或其药用盐和细辛脑的药物组合物 | |
| CN1509739A (zh) | 一种治疗慢性原发性肾小球肾炎的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN1799591A (zh) | 一种血府逐瘀胶囊的制备方法及其质量标准 | |
| CN1939433A (zh) | 一种中药复方制剂的质量控制方法 | |
| CN100341492C (zh) | 一种参芪降糖软胶囊及其制备检测方法 | |
| CN100350916C (zh) | 复方积雪草中药组合物有效成分的提取方法 | |
| CN1733279A (zh) | 一种治疗慢性肾衰的药物复合物 | |
| CN1253170C (zh) | 一种治疗肝炎的中药制剂及其制备检测方法 | |
| CN1709436A (zh) | 一种茵栀黄含片及其制备检测方法 | |
| CN1483327A (zh) | 含有二氢杨梅素和杨梅素的组合物的保健食品 | |
| CN100341536C (zh) | 一种茵栀黄分散片及其制备检测方法 | |
| CN100341490C (zh) | 一种参芪降糖分散片及其制备检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CX01 | Expiry of patent term | ||
| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20060628 |