CN1398868A - 一种连翘酯甙提取工艺 - Google Patents

Abstract

一种连翘酯甙提取工艺，采用连翘壳或连翘叶粉为原料，用乙醇和水作为溶剂和洗脱剂，大孔吸附树脂为分离材料，活性碳为脱色剂进行提取连翘酯甙，提取后的连翘酯甙含量大于40％。本发明具有使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染，提取量大，可工业化生产，提取效率高的优点。

Description

一种连翘酯甙提取工艺

技术领域：

本发明涉及一种从天然药用植物连翘中提取其有效成分连翘酯甙的提取工艺。

背景技术：

连翘为木犀科连翘落叶灌木，果实入药，具有清热解毒、散结消肿、抗菌及抑制真菌等功能。连翘酯甙为其主要成分，它不仅对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌有极强的抑制作用，而且具有抑制磷酸二酯酶及抑制真菌作用。最近我们研究又发现它对弹性蛋白酶也有一定的抑制作用。鉴于它具有多种多样的生物活性功能，连翘酯甙在医药和食品领域作为天然药物、天然防腐剂及天然抗氧化剂有广泛的应用前景。至目前为止，尚未见有关从药用植物连翘中大量提取连翘酯甙的报道，基于以上原因，本发明对连翘酯甙的提取工艺进行了详细研究。

关于连翘酯甙的提取分离方法，国内外均有文献报道，采用的方法为：直接用水提取或水提物再用有机溶剂提取，提取物经硅胶制备薄层析或柱层析分离得到产物。如日本学者Sansel(Chem.Pharm.Bull，1982，32(12)，4548-4553)从连翘中提取连翘酯甙采用的方法是首先用水提取连翘，水提物再用甲醇提取，甲醇提取物用硅胶柱层析分离，以不同比例的甲醇、氯仿进行反复梯度淋洗，分离得连翘酯甙产物。梁文藻等(药物分析杂志，1986，6(5)，263-266)从连翘中提取连翘酯甙产物是采用化学分离方法，然后用制备性薄层板进行纯化，最后得到纯品。上述提取方法效率低、大量使用了有毒有机溶剂，并且所用分离材料也不易再生重复使用，因而不能移植放大为工业化生产。

发明内容：

本发明的目的是提供一种效率高、无污染且能工业化生产的连翘酯甙的提取工艺。

本发明的提取工艺包括如下步骤：

(1)将连翘壳或连翘叶粉碎至20～50目，用乙醇回流提取，合并浸取液，静置，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇，制得乙醇提取物浸膏；

(2)在提取温度为75℃以下，用水对乙醇提取物浸膏反复提取，至提取液薄层检测无连翘酯甙，合并提取液，静置，过滤；

(3)滤液减压浓缩，浓缩液用非极性、苯乙烯型、孔径为10～20nm的大孔吸附树脂进行柱层析分离。首先用水充分淋洗，至淋洗液由混浊变清、变为淡黄色，进而用20～30％乙醇淋洗，采用薄层层析检测至淋洗液中无连翘酯甙，合并含有连翘酯甙的淋洗液，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的产物；

(4)将棕黄色产物用醇含量大于90％的乙醇溶解，过滤除去残渣，按产物∶活性炭为1∶0.1～0.3的重量比加入活性炭，搅拌，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇、真空干燥即得浅黄色的连翘酯甙产品。

如上所述的薄层层析检测使用的展开剂为丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上层液。

如上所述的浓缩液的浓度是原滤液浓度的1-1.5倍。

如上所述的大孔吸附树脂饱和吸附量是每克干树脂一次分离4-6克药材。

如上所述的大孔树脂分离连翘酯甙时的淋洗速度为1-2ml/cm².min。

如上所述的大孔吸附树脂进行柱层分离过程可进行1-3次，以满足连翘酯甙含量的要求。

如上所述的大孔吸附树脂是D₁₀₁大孔吸附树脂。

如上所述的大孔吸附树脂的再生是用95％乙醇淋洗柱体既可使树脂再生，使用多次后，树脂也可用3％氢氧化钠浸泡淋洗，再用大量水淋洗再生。

本发明具有如下优点：

(1)本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染。

(2)本发明使用分离材料为大孔吸附树脂。大孔吸附树脂是近年来发展起来的一类有机高聚物吸附剂，它具有较好的吸附性能。为分离有机化合物尤其是极性大的化合物的有效手段，在天然产物化学成分的提取等方面显示了独特作用。它不仅理化性质稳定，不溶于酸，碱及有机溶媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响。并且易于洗脱再生，有益于多次利用。

(3)采用本发明从药用植物连翘中提取分离连翘酯甙，提取量大，可工业化生产。

(4)采用本发明从药用植物连翘中提取分离连翘酯甙，连翘酯甙含量大于40％，提取效率高。

具体实施方式：

实施例1：

称取500g连翘，粉碎过20目筛，用80％的乙醇溶液3升、2升、2升分三次回流提取，首次回流2.5小时，二次、三次分别回流2.0小时。合并提取液。冷藏静置12小时。过滤，滤液减压浓缩得乙醇提取物，乙醇提取物用水分别提取四次，每次300ml，提取两小时，温度保持在75℃。合并水提取液，静置过滤、减压浓缩，浓缩液上柱分离，其柱高为63cm，柱径为3.3cm，柱填料为D₁₀₁大孔吸附树脂。首先用水淋洗至流出液变清后，改用25％乙醇淋洗，淋洗速度为：20ml/min，薄层层析检测流出液，展开剂为：丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯(4∶3∶1∶1∶2)的上层液，收集含有连翘酯甙的部分，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的连翘酯甙产品22.5g，提取率为：4.5％。用95％乙醇将上述棕黄色产物热溶解，过滤除去残渣，加入2.5g活性炭，温度控制在60℃，搅拌0.5小时，趁热过滤，滤液减压浓缩回收乙醇、真空干燥即得浅黄色的连翘酯甙产品。经高压液相分析，连翘酯甙含量为：43.1％。

实施例2：

称取1Kg连翘，粉碎过20目筛，用85％的乙醇溶液5升、4升、4升分三次回流提取，首次回流2.5小时，二次、三次分别回流2.0小时。合并提取液。冷藏静置12小时。过滤，滤液减压浓缩得乙醇提取物，乙醇提取物用水分别提取四次，每次500ml，提取两小时，温度保持在75℃。合并水提取液，静置过滤、减压浓缩，浓缩液上柱分离，其柱高为60cm，柱径为5.4cm，柱填料为D₁₀₁大孔吸附树脂。首先用水淋洗至流出液变清后，改用30％乙醇淋洗，淋洗速度为：25ml/min薄层层析检测流出液，展开剂为：丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯(4∶3∶1∶1∶2)的上层液，收集含有连翘酯甙的部分，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的连翘酯甙产品51g，提取率为：5.1％。用95％乙醇将上述棕黄色产物热溶解，过滤除去残渣，加入5.5g活性炭，温度控制在60℃，搅拌0.5小时，趁热过滤，滤液减压浓缩回收乙醇、真空干燥即得浅黄色的连翘酯甙产品。经高压液相分析，连翘酯甙含量为：41％。

实施例3：

称取1.5Kg连翘，粉碎过20目筛，用82％的乙醇溶液6升、5升、5升分三次回流提取，首次回流2.5小时，二次、三次分别回流2.0小时。合并提取液。冷藏静置12小时。过滤，滤液减压浓缩得乙醇提取物，乙醇提取物用水分别提取四次，每次800ml，提取两小时，温度保持在75℃。合并水提取液，静置过滤、减压浓缩，浓缩液上柱分离，其柱高为75cm，柱径为5.4cm，柱填料为D₁₀₁大孔吸附树脂。首先用水淋洗至流出液变清后，改用30％乙醇淋洗，淋洗速度为：25ml/min薄层层析检测流出液，展开剂为：丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯(4∶3∶1∶1∶2)的上层液，收集含有连翘酯甙的部分，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的连翘酯甙产品79g，提取率为：5.3％。用95％乙醇将上述棕黄色产物热溶解，过滤除去残渣，加入16g活性炭，温度控制在60℃，搅拌0.5小时，趁热过滤，滤液减压浓缩回收乙醇、真空干燥即得浅黄色的连翘酯甙产品。经高压液相分析，连翘酯甙含量为：42.5％。取上述产物20克用水热溶，二次上柱分离得产物12克，连翘酯甙含量为：66％。

Claims (7)

1.一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于提取工艺包括如下步骤：

(1)将连翘壳或连翘叶粉碎至20～50目，用乙醇回流提取，合并浸取液，静置，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇，制得乙醇提取物浸膏；

(2)在提取温度为75℃以下，用水对乙醇提取物浸膏反复提取，至提取液薄层检测无连翘酯甙，合并提取液，静置，过滤；

(3)滤液减压浓缩，浓缩液用非极性、苯乙烯型、孔径为10～20nm的大孔吸附树脂进行柱层析分离。首先用水充分淋洗，至淋洗液由混浊变清、变为淡黄色，进而用20～30％乙醇淋洗，采用薄层层析检测至淋洗液中无连翘酯甙，合并含有连翘酯甙的淋洗液，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的产物；

(4)将棕黄色产物用醇含量大于90％的乙醇溶解，过滤除去残渣，按产物∶活性炭为1∶0.1～0.3的重量比加入活性炭，搅拌，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇、真空干燥即得浅黄色的连翘酯甙产品。

2.如权利要求1所述的一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于所述的薄层层析检测使用的展开剂为丁酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水∶苯＝4∶3∶1∶1∶2的上层液。

3.如权利要求1所述的一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于所述浓缩液的浓度是原滤液浓度的1-1.5倍。

4.如权利要求1所述的一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于所述大孔吸附树脂饱和吸附量是每克干树脂一次分离4-6克药材。

5.如权利要求1所述的一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于所述的大孔树脂分离连翘酯甙时的淋洗速度为1-2ml/cm².min。

6.如权利要求1所述的一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于所述的大孔吸附树脂进行柱层分离过程可进行1-3次。

7.如权利要求1所述的一种连翘酯甙提取工艺，其特征在于所述的大孔吸附树脂是D₁₀₁大孔吸附树脂。