CN1354261A - 单碱基延伸信号鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
一种单碱基延伸信号鉴别方法,包括把靶分子与固定于固体表面的SBE引物杂交,并进行SBE反应,然后对SBE反应后所采到的信号进行分析,其特征是所述的靶分子带有一种可识别的标记分子,SBE反应所用的双脱氧核糖核苷酸带有其他的标记分子,通过计算SBE反应所得的信号与同一位置中的靶分子中标记分子信号的比例,确定反应信号的真假。本发明的优点是排除了假阳性反应,不会发生误诊。
Description
本发明涉及一种单碱基延伸信号鉴别方法。
单碱基延伸(SBE)常用于测定核酸中特定位置的碱基成分。在进行SBE反应中，SBE引物与靶核酸样品杂交。在聚合酶和双脱氧核苷酸的作用下，SBE引物的3’末端以靶分子为模板延伸一个碱基。当被延伸的碱基附带着特异的标记分子时，与被延伸碱基互补的靶分子中的碱基成分可通过该特异性的标记分子的信号而推得。当把已知的SBE引物固定于固相物体上时，通过SBE反应后所得的信号可判断靶样品的存在与否及被测碱基的成分。但在许多情况下，SBE引物在未与靶分子杂交时也会以自身序列为模板进行延伸，因而产生假阳性反应。如SBE假阳性反应出现于遗传诊断中，就有发生误诊的可能性。
本发明的目的是提供一种SBE信号鉴别方法，以便降低SBE反应的假阳性结果。
一种单碱基延伸信号鉴别方法，包括把靶分子与固定于固体表面的SBE引物杂交，并进行SBE反应，然后对SBE反应后所采到的信号进行分析，其特征是所述的靶分子带有一种可识别的标记分子，SBE反应所用的双脱氧核糖核苷酸带有其他的标记分子，通过计算SBE反应所得的信号与同一位置中的靶分子中标记分子信号的比例，确定反应信号的真假。
本发明的优点是排除了假阳性反应，不会发生误诊。
下面通过实施例说明本发明。
把与地中海贫血症相关的分子探针也即SBE引物由其5’端固定于玻片上，做成诊断地中海贫血症的基因芯片。对病人进行诊断时，对病人的核酸样品中的相关片段用聚合酶链反应(PCR)进行扩增，并用一种荧光分子进行末端标记，再使标记后的靶分子与芯片上的SBE引物进行杂交，进行SBE反应，所用的四种双脱氧核糖核苷酸(ddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP)分别有不同于靶分子标记的荧光标记。反应完成后用缓冲液对芯片进行清洗，然后用激光扫描仪对芯片信号进行采集，计算SBE反应所得的信号与同一位置中的靶分子中标记分子信号的比例，具有靶分子信号的位点中的SBE信号为真信号(该比例在0.5-2的范围内)。在没有靶分子信号的位点上所采集的SBE信号为假信号。通过如上反应和分析，可对病人的基因型进行判断。
Claims (1)
1.一种单碱基延伸信号鉴别方法，包括把靶分子与固定于固体表面的SBE引物杂交，并进行SBE反应，然后对SBE反应后所采到的信号进行分析，其特征是所述的靶分子带有一种可识别的标记分子，SBE反应所用的双脱氧核糖核苷酸带有其他的标记分子，通过计算SBE反应所得的信号与同一位置中的靶分子中标记分子信号的比例，确定反应信号的真假。
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| CN1847852B (zh) * | 2006-05-10 | 2010-04-07 | 杭州优思达生物技术有限公司 | 单核苷酸多态性试纸条快速检测方法及其试纸条 |
| CN108239669A (zh) * | 2016-12-23 | 2018-07-03 | 深圳华大智造科技有限公司 | 检测可逆性阻断dNTP中非阻断杂质含量的方法和试剂盒 |
| CN118325894A (zh) * | 2024-06-14 | 2024-07-12 | 广东国盛医学科技有限公司 | 一种引物及检测dna聚合酶单碱基延伸能力的方法 |
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