CN1253714C - 黄杨宁片中环维黄杨星d含量及含量均匀度高效液相色谱测定法 - Google Patents
黄杨宁片中环维黄杨星d含量及含量均匀度高效液相色谱测定法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法。该方法色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂，流动相采用磷酸氢二钾一乙腈体系；进样前待测样品先调节pH至2～6，再调节pH至10～13，然后以萃取用有机溶剂萃取3～8次进行提取分离。该方法灵敏度高、专属性强，能很好地将“黄杨宁”中与主成分“环维黄杨星D”结构相似的几种生物碱有效地分开，从而能测定它们各自的含量，并能保证较高的准确度，利用该方法还可以测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量均匀度。
Description
技术领域
本发明涉及黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度测定法，特别是涉及黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法。
背景技术
以黄杨生物碱总碱(有效部位)为原料生产的制剂黄杨宁片，其《中国药典》2000年版一部所载的方法是酸性染料比色法，该方法虽然简便、灵敏度高，但专属性差，所以测得的是生物碱总碱，不能测定其中环维黄杨星D的含量。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵敏度高、专属性强的黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法。
本发明的目的可以通过下列措施来实现：
一种黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度的高效液相色谱测定法，其色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂；流动相采用磷酸氢二钾—乙腈体系。
本发明的目的还可以通过下列措施来实现：
所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法，进样前待测样品先调节pH至2～6，再调节pH至10～13，然后以萃取用有机溶剂萃取3～8次进行提取分离。
所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法中萃取用有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、叔丁基甲醚、苯、环己烷、醋酸乙酯。
本发明的优点：
本发明采用高效液相色谱技术，测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量，不但灵敏度高，对毫克数量级所测误差不大于5％，而且专属性强，能很好地将“黄杨宁”中与主成分“环维黄杨星D”结构相似的几种生物碱有效地分开，从而能测定它们各自的含量，利用该方法还可以测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量均匀度，很好地满足药典含量及含量均匀度测定的要求。该方法利用氨基柱、特定的流动相和检测波长是其关键。本方法中提取分离方法能将零点几毫克的检测成分提取分离出来，这就保证了方法的准确度。
附图说明：
图1为黄杨宁高效液相色谱法210nm波长测定的色谱图；
图2为黄杨宁高效液相色谱法200nm波长测定的色谱图；
图3为黄杨宁高效液相色谱法220nm波长测定的色谱图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明。
黄杨宁片中环维黄杨星D含量及含量均匀度高效液相色谱测定法，以黄杨宁规格为0.5mg/片测定举例，色谱柱采用江苏汉邦科技有限公司产品(Lichrospher NH2，4.6×250mm，5μm)。
实施例1
含量测定照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)检查。
色谱条件与系统适应性固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)-乙腈(体积比为30∶70)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为210nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品(对照品标准：对照品中环维黄杨星D在含量测定项下记录的色谱图中，其峰面积应大于总峰面积的98％，下同)7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取黄杨宁片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于环维黄杨星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，超声处理10分钟，加水10ml，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理20分钟，并不时适当振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用20、10、10、10ml氯仿萃取四次，合并氯仿层，置50ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入流动相5ml，超声，涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的20％。再取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为标示量的73.5480％。
含量均匀度取黄杨宁片10片，分别置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超声处理5分钟，加9ml水，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理10分钟，并不时振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用10、5、5、5ml氯仿萃取四次，合并氯仿层，置25ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入含量测定的流动相2ml，超声、涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，得每片的含量，比较即得含量均匀度。
实施例2
含量测定 照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)检查。
色谱条件与系统适应性固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)-乙腈(体积比为25∶75)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为200nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于环维黄杨星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，超声处理10分钟，加水10ml，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理20分钟，并不时适当振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用20、20、10ml二氯甲烷萃取三次，合并二氯甲烷层，置50ml量瓶中，加二氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入流动相5ml，超声，涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录量程的20％。再取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为标示量的62.4219％。
含量均匀度取本品10片，分别置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超声处理5分钟，加9ml水，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理10分钟，并不时振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用10、10、5ml醋酸乙酯萃取三次，合并醋酸乙酯层，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入含量测定的流动相2ml，超声、涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，得每片的含量，比较即得含量均匀度。
实施例3
含量测定 照高效液相色谱法(中华人民共和国药典2000年版一部附录VI D)检查。
色谱条件与系统适应性固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)-乙腈(体积比为20∶80)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为220nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于环维黄杨星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，超声处理10分钟，加水10ml，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理20分钟，并不时适当振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用10、10、5、5、5、5、5、5ml叔丁基甲醚萃取八次，合并叔丁基甲醚层，置50ml量瓶中，加叔丁基甲醚至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入流动相5ml，超声，涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。
测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的20％。再取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图3，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为标示量的80.7239％。
含量均匀度取本品10片，分别置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超声处理5分钟，加9ml水，超声处理5分钟，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超声处理10分钟，并不时振摇，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥洁净的4#垂熔漏斗滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氢氧化钠溶液8ml，摇匀，静置10分钟，用5、5、3、3、3、2、2、2ml环己烷萃取八次，合并环己烷层，置25ml量瓶中，加环己烷至刻度，摇匀，精密量取10ml，置10ml具塞离心管中，40℃水浴，用温和氮气流吹干，精密加入含量测定的流动相2ml，超声、涡旋处理各5分钟，得供试品溶液。照含量测定项下的方法测定，按外标法以峰面积计算含量，得每片的含量，比较即得含量均匀度。
Claims (4)
1、一种黄杨宁片中环维黄杨星D含量高效液相色谱测定法，其柱温为40℃，流速为1ml/min，检测器为紫外吸收检测器，检测波长为200～220nm，供试品溶液色谱图中环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离，理论塔板数按环维黄杨星D峰计算应不低于1000，进样前待测样品进行预处理后用流动相溶解成供试品溶液，其特征在于色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂；流动相采用磷酸氢二钾—乙腈体系。
2、根据权利要求1所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量高效液相色谱测定法，其特征在于进样前待测样品先调节pH至2～6，再调节pH至10～13，然后以萃取用有机溶剂萃取3～8次进行提取分离。
3、根据权利要求2所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量高效液相色谱测定法，其特征在于萃取用有机溶剂为氯仿、二氯甲烷、叔丁基甲醚、苯、环己烷或醋酸乙酯。
4、根据权利要求1所述的黄杨宁片中环维黄杨星D含量高效液相色谱测定法，其特征在于流动相中磷酸氢二钾与乙腈体积比为20-30∶70-80。
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