CN119530327A - 一种花胶低聚肽的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种花胶低聚肽的制备方法，包括以下步骤：将花胶粉碎，得到花胶粉，称取一定量的花胶粉，加入纯水并加热，得到花胶粉溶液，向花胶粉溶液中加入蛋白酶进行多步酶解反应，得到酶解液，向酶解液中加入组合物并搅拌均匀，所述组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液，将加入组合物后的酶解液进行灭酶过滤处理，得到粗过滤液，对粗过滤液进行脱色脱臭处理，经过滤后得到精过滤液，对精过滤液进行浓缩干燥处理，得到花胶低聚肽，本申请的花胶低聚肽分子量更低，具有更优的生理活性，具有抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤的能力。

Description

一种花胶低聚肽的制备方法及应用

技术领域

本申请涉及生物活性肽技术领域，特别涉及一种花胶低聚肽的制备方法及应用。

背景技术

花胶，又名鱼胶、鱼肚等，自古就被认为是一种优良的滋补品，被誉为“八珍”之一。现代营养学研究发现花胶中含有84.2%的蛋白质且多为高级胶原蛋白，0.2%的脂肪，还富含钙、锌、铁、硒等多种微量元素，是一种高蛋白低脂肪的健康食品。随着生活水平提高，花胶市场规模逐渐扩大，市场上涌现出不同品类的花胶类产品以满足不同人群的需求。

利用生物酶解技术将花胶制备成花胶肽，应用到液体饮料、固体饮料、凝胶软糖等各类产品中，可更好地满足不同人群、不同场景的需求，创造更高的经济价值。

但实际生产中发现采用生物酶解技术直接将花胶制成的花胶肽在应用于偏酸性的口服饮品中时易产生沉淀，限制了此类花胶肽的应用。

此外，研究表明，低分子量肽在胃、肠消化过程中更稳定，短链肽相比长链肽也更不易被肠上皮细胞的肽酶降解，且短链肽比长链肽、小分子量肽比大分子量肽更易吸收。而目前市售的花胶肽分子量均较大，肽链较长，在消化吸收过程中容易被降解而无法发挥应有的活性作用。

因此，开发分子量较小、活性更优、能在偏酸性的口服饮品中保持稳定的花胶低聚肽显得尤为必要。

发明内容

本申请提出一种花胶低聚肽的制备方法，包括以下步骤：

S1：将花胶粉碎，得到花胶粉；

S2：称取一定量的花胶粉，加入纯水并加热，得到花胶粉溶液，向花胶粉溶液中加入蛋白酶进行多步酶解反应，得到酶解液；

S3：向酶解液中加入组合物并搅拌均匀，所述组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液；

S4：将加入组合物后的酶解液进行灭酶过滤处理，得到粗过滤液；

S5：对粗过滤液进行脱色脱臭处理，经过滤后得到精过滤液；

S6：对精过滤液进行浓缩干燥处理，得到花胶低聚肽。

其中，在步骤S2中，所述花胶粉和纯水的重量比为1：（10-20），加热温度为50-60℃。

其中，在步骤S2中，向加热温度为50-60℃的花胶粉溶液中加入碱性蛋白酶并反应0.5-2h，后加入风味蛋白酶继续反应0.5-2h，其中碱性蛋白酶的添加量为花胶粉重量的1-1.5%，风味蛋白酶的添加量为花胶粉重量的0.3-0.8%。

其中，在酶解反应过程中对反应溶液进行超声处理，得到酶解液。

其中，步骤S3中的所述组合物中鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液的重量比例为（2-3）：（0.1-0.5）：（5-10），所述组合物的添加量为花胶粉重量的2-5%。

其中，所述步骤S4中灭酶过滤处理的温度为85-90℃，灭酶时间为20-60min，灭酶后使用800目滤布进行过滤处理，得到粗过滤液。

其中，在步骤S5中，首先向粗过滤液中加入活性炭，活性炭的添加量为花胶粉重量的2-5%，在50-60℃条件下反应30-90分钟，并进行过滤处理。

其中，在步骤S5中过滤处理首先用800目滤布过滤得到过滤液，将过滤液进一步用滤膜过滤，得到精滤液。

其中，所述滤膜的孔径为0.22-1um。

本申请还提出一种花胶低聚肽在抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤方面的应用。

本申请的花胶低聚肽的制备方法，使用多步酶解法制备花胶低聚肽，同时采用组合物协同处理方式去除花胶低聚肽中易沉淀的部分，组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液，能够获得分子量更低的花胶低聚肽，且花胶低聚肽更加稳定，具有更优的生理活性，具有抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤的能力。

附图说明

通过参考附图阅读下文的详细描述，本公开示例性实施方式的上述以及其他目的、特征和优点将变得易于理解。在附图中，以示例性而非限制性的方式示出了本公开的若干实施方式，并且相同或对应的标号表示相同或对应的部分，其中：

图1是本申请一实施例中制备的溶液灭菌后的状态图；

图2是本申请一对比例中制备的溶液灭菌后在37℃下储存7d的状态图；

图3是本申请实施例中UVR诱导HaCaT细胞内ROS含量柱状图；

图4是本申请实施例中UVR诱导HaCaT细胞内GSH-Px活性柱状图；

图5是本申请实施例中UVR诱导HaCaT细胞内SOD活性柱状图；

图6是本申请实施例中UVR诱导HaCaT细胞线粒体膜电位柱状图；

图7是本申请实施例中UVR诱导HaCaT细胞ATP生成量柱状图。

具体实施方式

下面将结合本公开实施例中的附图，对本公开实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本公开一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本公开中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本公开保护的范围。

本申请提出一种花胶低聚肽的制备方法，包括以下步骤：

S1：将花胶粉碎，得到花胶粉；

该步骤为前处理步骤，使用花胶粉碎机或其他粉碎装置将花胶粉粹，得到超微花胶粉后备用。

S2：称取一定量的花胶粉，加入纯水并加热，得到花胶粉溶液，向花胶粉溶液中加入蛋白酶进行多步酶解反应，得到酶解液；

该步骤中，纯水的加入量可根据花胶粉的重量确定，花胶粉和纯水的重量比可以为1：（10-20），具体根据实际混合情况选择。加入纯水后，将温度升至50-60℃，加入蛋白酶进行多步酶解反应。

向加热温度为50-60℃的花胶粉溶液中加入碱性蛋白酶并反应0.5-2h，后加入风味蛋白酶继续反应0.5-2h，其中碱性蛋白酶的添加量为花胶粉重量的1-1.5%，风味蛋白酶的添加量为花胶粉重量的0.3-0.8%。

在多步酶解反应过程中，可以对反应体系进行超声处理，即将反应液放入超声装置中，保证酶解反应更加充分，其中，超声功率为200-500w/m²。

S3：向酶解液中加入组合物并搅拌均匀，所述组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液；

所述鸡卵黄提取物以鸡卵黄为原料，经破碎、均质、部分水解、干燥后获得，其中含有卵磷脂、磷酸化蛋白等成分；所述壳寡糖又叫壳聚寡糖、低聚壳聚糖，是聚合度为2-20的糖链，水溶性较好，是自然界中唯一带正电荷阳离子碱性氨基低聚糖；所述生姜提取液中含有多种黄酮类、多糖类、酶类物质。

所述组合物中鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液的重量比例为（2-3）：（0.1-0.5）：（5-10），所述组合物的添加量为花胶粉重量的2-5%。

S4：将加入组合物后的酶解液进行灭酶过滤处理，得到粗过滤液；

其中，灭酶过滤处理的温度为85-90℃，灭酶时间为20-60min，灭酶后使用800目滤布进行过滤处理，得到粗过滤液。

S5：对粗过滤液进行脱色脱臭处理，经过滤后得到精过滤液；

首先向粗过滤液中加入活性炭，活性炭的添加量为花胶粉重量的2-5%，在50-60℃条件下反应30-90分钟，并进行过滤处理。

过滤处理首先用800目滤布过滤得到过滤液，将过滤液进一步用滤膜过滤，得到精滤液。所述滤膜的孔径为0.22-1um。

S6：对精过滤液进行浓缩干燥处理，得到花胶低聚肽。

在浓缩干燥过程中，首先用双效浓缩器浓缩精滤液至固形物28-36%，获得浓缩液，使用冷冻干燥干燥浓缩液，即得本申请的花胶低聚肽。

本申请中的所述鸡卵黄提取物中的卵磷脂是具有磷酸基团头部和脂肪酸尾链的脂类物质，其中磷酸基团具有亲水性，脂肪酸尾链具有疏水性，当其存在于溶液中时，磷酸基团对外、脂肪酸尾链对外形成微小的包裹体，同时由于脂肪酸尾链的疏水性，更容易包裹花胶肽中较不亲水的杂质；磷酸化蛋白具有多个磷酸基团，磷酸基团带有负电荷，多个磷酸基团会形成腔体，可以与花胶多肽中的多种金属离子进行配位反应，使金属离子从溶液中脱去，阻止金属离子导致的非酶促反应。

通过酶解获得的花胶肽是复杂的混合物，当其在溶液中时以分子、离子、活性基团等多种形式存在，其中以离子存在的部分由于带有电荷，更易因静电作用与其他杂质相互吸引发生反应，从而变质沉淀，同时花胶肽中含有较多的羧基与氨基，倾向于电离出氢离子然后以阴离子的形式存在，加入带有阳离子的壳寡糖可与不稳定的花胶肽进行结合，从而去除。

所述生姜提取液中的黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团，而短肽类物质可于这些官能团接枝而改性，改变短肽的稳定性；生姜提取液中同时含有各种酶类物质，共同作用，使短肽类物质进一步发生改变。

本申请中的鸡卵黄提取物能够改变溶液环境，稳定花胶肽溶液的金属离子的同时进一步除杂，与壳寡糖共同作用去除花胶肽中不稳定的部分，生姜提取液改变花胶肽的部分性质，影响花胶肽的稳定性，鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液共同配合使得花胶肽更加稳定，同时由于花胶肽不稳定的部分被脱去，其活性进一步被提高。

需要说明的是，本申请中的鸡卵黄提取物和壳寡糖为市售，生姜提取液为生姜破碎、均质后按生姜质量的1~5%1:1加入果胶酶和纤维素酶酶解2-4小时后过滤获得。

需要进一步说明的是，肽类物质由蛋白质分解而来，来源广泛，其中具有功能活性的又被称为活性多肽，分子量小于1000Da的被称为低聚活性肽，低聚活性肽一般由2-6个氨基酸组成，具有速度转运快、耗能低、不易饱和等特点，能更快更好地到达细胞内，与细胞内活性位点结合，从而具有更好的功能活性。

采用本申请方法制备得到的花胶低聚肽，使用多步酶解法制备得到，同时采用组合物协同处理方式去除花胶低聚肽中易沉淀的部分，组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液，能够获得分子量更低的花胶低聚肽，且花胶低聚肽更加稳定，具有更优的生理活性，具有抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤的能力，可满足不同的需求。

本申请还提出一种花胶低聚肽在抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤方面的应用，所述花胶低聚肽由本申请中花胶低聚肽的制备方法制备得到。

具体实施例及对比例

实施例1中的花胶低聚肽的制备方法，包括以下步骤：

S1：使用花胶粉碎机花胶粉碎，得到花胶粉，其中，花胶采用白玉花胶（巴沙鱼鱼胶），产自越南；

S2：称取一定量的花胶粉，加入纯水并加热，花胶粉和纯水的重量比可以为1：15，得到花胶粉溶液，向加热温度为50-60℃的花胶粉溶液中加入碱性蛋白酶并反应1h，后加入风味蛋白酶继续反应1h，其中碱性蛋白酶的添加量为花胶粉重量的1%，风味蛋白酶的添加量为花胶粉重量的0.3%；对反应体系进行超声处理，超声功率为300w/m²。

S3：向酶解液中加入组合物并搅拌均匀，所述组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液，所述组合物中鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液的重量比例为2：0.1：5，所述组合物的添加量为所述花胶粉重量的3%。

S4：将加入组合物后的酶解液进行灭酶过滤处理，灭酶过滤处理的温度为85-90℃，灭酶时间为20-60min，灭酶后使用800目滤布进行过滤处理，得到粗过滤液。

S5：向酶解液中加入活性炭，活性炭的添加量为花胶粉重量的3%，在50-60℃条件下反应60分钟，并进行过滤处理。其中，过滤处理首先用800目滤布过滤得到过滤液，将过滤液进一步用滤膜过滤，得到精滤液。所述滤膜的孔径为0.5um。

S6：用双效浓缩器浓缩精滤液至固形物28-36%，获得浓缩液，使用冷冻干燥干燥浓缩液，得到本实施例的花胶低聚肽。

实施例2-3及对比例1-9与实施例1中制备花胶低聚肽的步骤及参数一致，其中，碱性蛋白酶、风味蛋白酶、鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液的含量不同，具体见表1。

表1：实施例2-3及对比例1-9与实施例1中各组分参数对比。

对比例10：该对比例与实施例1中各组分参数一致，区别在于，步骤S2酶解反应过程中，先加入风味蛋白酶，后加入碱性蛋白酶。

对比例11：该对比例与实施例1中各组分参数一致，区别在于，步骤S2酶解反应过程中，不经超声处理。

对照组：采用市售的花胶肽作为对照。

具体试验例

试验例1

将实施例1-3、对比例1-11及对照组制备得到的花胶肽分别配置成溶液，溶液pH值约为4.0，具体组分为：花胶肽20g，浓缩柠檬汁6g，无水柠檬酸0.6g，麦芽糖醇8g，赤藓糖醇0.1g，纯水65.3g。

将配置好的溶液分装至30ml PP瓶中，置于杀菌锅中，在105℃温度下灭菌25分钟，待冷却至室温后观察溶液沉淀情况。再将冷却后的各溶液储存于37℃与55℃恒温培养箱，分别于1、3、5、7天取样观察各溶液沉淀情况，评价其稳定性。

具体见图1和图2，图1为实施例1中制备的溶液灭菌后的状态图，溶液清澈透明无沉淀，图2为对比例3中制备的溶液灭菌后在37℃下储存7d的状态图，溶液内有大量沉淀。

需要说明的是，溶液内形成的沉淀为悬浮的絮状物，不易沉降在溶液底部，也无法通过常规过滤工艺去除，当有沉淀存在于溶液内部时，十分影响消费者的体验。

关于实施例1-3和对比例1-11及对照组中各溶液沉淀情况见表2。

表2：实施例1-3、对比例1-11及对照组的溶液在不同阶段沉淀情况。

注：“/”表示无沉淀，溶液清澈透明，“*”表示溶液有少量沉淀，“**”表示溶液有明显沉淀，“***”表示溶液有大量沉淀。

根据表1可知，实施例1-3、对比例8-11均能获得稳定的花胶肽，说明本申请组合物协同处理能获得稳定的花胶肽，且具有较为广泛的适应性。对比例1说明不加组合物协同处理直接酶解获得的花胶肽不稳定；对比例2-7说明单独只加一种成分或少加一种成分的组合物协同处理均不能获得稳定的花胶肽，这可能是由于组合中的三种组分物协同作用于花胶肽，多种作用下才能获得稳定的花胶肽。

试验例2

按照GB 31645-2018附录A中分子量检测方法检测各实施例及对比例中花胶肽的分子量。

具体为采用高效体积排阻色谱法测定。即以多孔性填料为固定相，依据样品组分分子体积大小的差别进行分离，在肽键的紫外吸收波长220nm条件下检测，使用相对分子质量分布测定的专用数据处理软件(即GPC软件)，对标准品和样品的色谱图及其数据进行处理，根据相对分子质量校正曲线方程,计算得到胶原蛋白肽的相对分子质量大小及分布范围，具体分子量测试结果见表3。

表3 各实施例、对比例及对照组样品分子量分布(%)及平均分子量。

由平均分子量可以看出，实施例1-3所获得的花胶肽平均分子量分别为853.19Da、792.37Da、831.40Da，均明显小于各对比例所获得的花胶肽，且小于1000Da，可被称为花胶低聚肽。而市售花胶肽（对照组）分子量为2004.81Da，分子量较大，且>10000部分明显高于本发明提供的花低聚胶肽，而<500部分明显低于本发明提供的花胶肽，这可能是市售花胶肽的功能活性明显差于本发明提供的花胶低聚肽的原因。

由分子量分布可知，实施例1-3相对于对比例1-11，>10000和10000-5000部分明显降低，而500-189部分有明显上升，说明在组合物协同处理后，花胶肽中原本分子量较大的部分基本被去除，同时增加了分子量低于500的部分。根据现有研究报道，分子量小于500的肽多为2-5肽，相较于分子量更大、肽链更长的肽具有更好的活性的稳定性，这也是本发明获得的花胶低聚肽具有更好的稳定性和活性的原因。

试验例3

本试验例首先对细胞培养及处理。

人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）在含有10%FBS和1%链霉素溶液的DMEM培养基中进行常规传代和培养，并在含有5%的二氧化碳的37°C培养箱中生长。

HaCaT细胞被播种在24孔板中（1×10⁶个细胞/孔，1mL培养基/孔）。在培养箱中培养24h后，弃去上清液，向每孔加入1mL含有相同浓度的不同实施例和对比例的花胶肽的培养基。培养2h后，UVR（UVA+UVB）照射，参数为300mJ/cm²，持续30min，并设置空白组和模型组，空白组不做照射处理，模型组给予照射。

本试验例进一步对细胞内ROS含量测试。

试验处理后，用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤三次以除去残留的和细胞外的染液，并通过荧光酶标仪分别在485nm处作为激发波长和535nm处作为发射波长的条件下测定每孔的荧光强度。

氧在细胞内的正常代谢的天然副产物是ROS，其在细胞信号传导和胞内平衡中发挥重要作用。研究发现在UVR的刺激下细胞内ROS水平显著提升产生过量的ROS，该现象会引起氧化应激造成细胞结构严重损害。而线粒体是细胞内的能量代谢中心，且线粒体中独特的mtDNA没有组蛋白的保护，使得线粒体相较于细胞中的其他结构更容易受到的过量ROS的损害造成线粒体的功能缺失。图3为各实施例和对比例处理对UVR诱导HaCaT细胞内ROS含量的影响，如图3所示，经花胶肽处理后的实验组均比模型组具有更低的ROS水平，说明花胶肽具有降低UVR诱导后的细胞产生的ROS的功能，且实施例1-3相较于对比例8-10明显更低，现有研究表明，酶制剂的用量和酶制剂的使用顺序深刻地影响着所获得的多肽的结构，进而影响着多肽的活性，这可能是本发明所提供的花胶低聚肽功能活性更好的原因。

本试验例对细胞内GSH-Px、SOD活性检测。

细胞内GSH-Px、SOD活性检测采用试剂盒检测HaCaT细胞中GSH-Px、SOD活性。

GSH-Px和SOD均为细胞内的过氧化酶，能清除细胞内的过量ROS，对维持细胞内的氧化还原稳态具有重要意义。而GSH-Px和SOD的活性降低会导致细胞内过量的ROS无法及时被清除，进一步加剧线粒体结构损坏和线粒体功能损害。如图4和图5所示，本发明提供的花胶低聚肽均能明显提升GSH-Px和SOD的活力，能进一步防止粒体结构被损坏。且实施例1-3相较于对比例5-7更能提升GSH-Px和SOD的活力，这表明单独使用组合物中的任一一种成分均无明显效果。

本试验例进一步进行线粒体膜电位检测。

将JC-1工作液加入各实施例和对比例处理后的细胞，孵育30min（37℃），离心4min。用PBS清洗收集的细胞并用荧光分光光度计分析结果。设置激发波长为515nm，发射波长为529nm，测JC-1单体荧光强度。设置激发波长585nm和发射波长590nm测JC-1聚合物荧光强度。通过计算JC1单体与聚合物荧光强度的比值评价线粒体膜电位变化。

需要说明的是，线粒体是由内外两层膜所构成的细胞器，且线粒体内的各种生理反应绝大多数均在线粒体内膜上发生，因此维持膜结构的稳定对维持线粒体正常功能具有重要意义。结构完整的线粒体膜内外具有不同的离子浓度导致膜内外具有不同的电势差，而线粒体膜结构被破坏后膜两侧的离子自由流动增加，电势差降低，因此，评价线粒体膜两侧的电势差能比较客观的评价线粒体膜结构的完整性，从而评价线粒体功能的完整性。

图6为各实施例和对比例处理对UVR诱导HaCaT细胞线粒体膜电位的影响，如图6所示，本发明提供的花胶肽能明显提高UVR诱导后的HaCaT细胞线粒体膜电位，表明本发明提供的花胶肽能维持UVR诱导后的HaCaT细胞线粒体膜结构的完整性。且实施例1-3相较于对比例2-4明显更高，这说明缺少组合物中的任意一种成分均会导致效果降低或无法达到效果，这与组合物种三种成分的协同作用有关。

本试验例进一步进行细胞内ATP生成量检测。

经各实施例和对比例分别处理后，加入Ripa裂解液进行裂解，收集细胞裂解物于1.5mL离心管中，12000g、4℃离心5min，取上清液，在黑色96孔板中加入100μL的ATP检测工作液，室温放置3-5min，在检测孔内加上20μL样品或标准品，迅速混匀，用多功能酶标仪测定RLU值，并根据浓度-RLU值曲线计算各组ATP含量。

根据BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书，在多功能酶标仪上检测各组样品在562nm处吸光度，并根据浓度-吸光度曲线计算待测样品蛋白浓度。

ATP含量表示方式如下：

ATP含量（nmol/mg蛋白）=实验组ATP含量/实验组蛋白含量

需要说明的是，线粒体是细胞中的能量代谢中心，专一性地生成ATP转运到其他细胞器中以满足正常生理活动的能量需求。因此，评估细胞中ATP的生成量能直观地评估线粒体的功能完整性。

如图7所示，本申请提供的花胶低聚肽能明显地提升UVR诱导后的HaCaT细胞的ATP生成量，说明本申请提供的花胶低聚肽能维持UVR诱导后的HaCaT细胞线粒体的功能完整性。且实施例1-3相较于对比例11明显更高，超声处理会在溶液中产生空化、破碎等多种作用，而这些作用对酶解过程、蛋白和多肽的结构均有影响，这是本发明实施例提供的花胶低聚肽相对对比例11活性更高的原因。

根据本试验例的上述试验结果可知，本申请提供的花胶低聚肽能降低UVR诱导后的HaCaT细胞内的ROS含量，提升细胞内GSH-Px、SOD的活性，维持细胞内线粒体的膜电位，增加细胞内的ATP生成量，说明本发明提供的花胶低聚肽具有抵御UVR诱导后的HaCaT细胞内线粒体损伤的功能。

本申请的花胶低聚肽的制备方法，使用多步酶解法制备花胶低聚肽，同时采用组合物协同处理方式去除花胶低聚肽中易沉淀的部分，组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液，能够获得分子量更低的花胶低聚肽，且花胶低聚肽更加稳定，具有更优的生理活性，具有抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤的能力。

本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可。

尽管已描述了本申请实施例的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本申请实施例范围的所有变更和修改。

最后，还需要说明的是，在本申请中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品中还存在另外的相同要素。

本申请中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本申请的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本申请的限制。

Claims (10)

1.一种花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将花胶粉碎，得到花胶粉；

S2：称取一定量的花胶粉，加入纯水并加热，得到花胶粉溶液，向花胶粉溶液中加入蛋白酶进行多步酶解反应，得到酶解液；

S3：向酶解液中加入组合物并搅拌均匀，所述组合物包括鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液；

S4：将加入组合物后的酶解液进行灭酶过滤处理，得到粗过滤液；

S5：对粗过滤液进行脱色脱臭处理，经过滤后得到精过滤液；

S6：对精过滤液进行浓缩干燥处理，得到花胶低聚肽。

2.根据权利要求1所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述花胶粉和纯水的重量比为1：（10-20），加热温度为50-60℃。

3.根据权利要求2所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，向加热温度为50-60℃的花胶粉溶液中加入碱性蛋白酶并反应0.5-2h，后加入风味蛋白酶继续反应0.5-2h，其中碱性蛋白酶的添加量为花胶粉重量的1-1.5%，风味蛋白酶的添加量为花胶粉重量的0.3-0.8%。

4.根据权利要求3所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，在酶解反应过程中对反应溶液进行超声处理，得到酶解液。

5.根据权利要求1所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，步骤S3中的所述组合物中鸡卵黄提取物、壳寡糖及生姜提取液的重量比例为（2-3）：（0.1-0.5）：（5-10），所述组合物的添加量为花胶粉重量的2-5%。

6.根据权利要求1所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中灭酶过滤处理的温度为85-90℃，灭酶时间为20-60min，灭酶后使用800目滤布进行过滤处理，得到粗过滤液。

7.根据权利要求1所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，在步骤S5中，首先向粗过滤液中加入活性炭，活性炭的添加量为花胶粉重量的2-5%，在50-60℃条件下反应30-90分钟，并进行过滤处理。

8.根据权利要求7所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，在步骤S5中过滤处理首先用800目滤布过滤得到过滤液，将过滤液进一步用滤膜过滤，得到精滤液。

9.根据权利要求8所述的花胶低聚肽的制备方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为0.22-1um。

10.一种花胶低聚肽在抵御UVR诱导的表皮细胞线粒体损伤方面的应用，所述花胶低聚肽由权利要求1-9任一方法制备得到。