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CN119120283A - 一种含功能菌的生物有机鱼肥及其制备方法与应用 - Google Patents

一种含功能菌的生物有机鱼肥及其制备方法与应用 Download PDF

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CN119120283A
CN119120283A CN202411256409.XA CN202411256409A CN119120283A CN 119120283 A CN119120283 A CN 119120283A CN 202411256409 A CN202411256409 A CN 202411256409A CN 119120283 A CN119120283 A CN 119120283A
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papm
fish
bailii
fermentation
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孙中涛
刘丽英
史庆华
辛寒晓
孙国科
陈君君
任慧慧
卞荣超
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Shandong Zoeticland Biological Technology Co ltd
Shandong Agricultural University
Original Assignee
Shandong Zoeticland Biological Technology Co ltd
Shandong Agricultural University
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Abstract

本发明公开了一种含功能菌的生物有机鱼肥及其制备方法与应用。本发明首先从土壤中分离到一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)PAPM‑H‑7，该菌株已于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCCNo.27682。该菌株具有拮抗辣椒疫霉等病原菌和产IAA、产胞外多糖、分解蛋白和脂肪多种有益特性。以该菌株发酵与酶解鱼皮、鱼排、鱼内脏等低值鱼制备的生物有机鱼肥，兼具鱼肥和菌肥的功能，具有促进作物生长、改良土壤、防治辣椒疫病等作用。

Description

一种含功能菌的生物有机鱼肥及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及农业生物技术领域，涉及一种含功能菌的生物有机鱼肥及其制备方法与应用。
背景技术
低值鱼是一类存量丰富的渔业资源，既包括商品价值较低的小杂鱼，也包括鱼深加工过程中产生的鱼皮、鱼排、鱼内脏等副产物。低值鱼除作为鱼粉用于饲料工业外，也可用于生产生物有机鱼肥等附加值较高的新型肥料。因富含蛋白质、肽和氨基酸，生物有机鱼肥的应用效果比以糖蜜、玉米浆和酵母粉等其他原料制备的生物有机水溶肥更好，对作物生长的促进作用和对作物品质的改善作用更加显著，是一种极具发展潜力的高品质生物有机水溶肥。
以低值鱼为原料生产水溶肥主要有两种方法：酶解法和发酵法。酶解法是采用工业酶制剂(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶等)水解低值鱼，将蛋白质等大分子物质水解成肽和氨基酸等小分子物质，增加其水溶性。因酶制剂价格较高，专一性强，不仅生产成本高，鱼蛋白水解度也较低，特别是脂肪酶，因价格较高在生产很少采用，低值鱼的脂肪未水解直接进入产品，影响产品质量。发酵法是采用产酶微生物对低值鱼进行发酵，利用微生物产生的蛋白酶、脂肪酶等水解酶类对鱼蛋白和鱼脂肪进行水解，不仅水解度高，也降低了生产成本，是一种更经济有效的生产方法。但目前采用的发酵微生物主要是产酶菌株，极少采用具有抗病促生等有益功能的菌株。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种含功能菌的生物有机鱼肥及其制备方法与应用。本发明首先自土壤中分离、筛选到一株具有拮抗辣椒疫霉等病原菌、产蛋白酶、脂肪酶、胞外多糖和IAA等有益功能的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)PAPM-H-7。采用其对鱼皮、鱼排、鱼内脏等低值鱼进行发酵和酶解，不仅可将鱼蛋白质和脂肪等大分子物质降解为肽、氨基酸和脂肪酸等小分子物质，还可产生胞外多糖和IAA等有益成分。同时，所制备生物鱼肥还含有大量贝莱斯芽孢杆菌，兼具鱼肥和菌肥的功能，具有改良土壤、促进作物生长和防治辣椒疫病等作用。
本发明首先自土壤中分离到一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)PAPM-H-7，该菌株已经于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.27682。该菌株具有拮抗辣椒疫霉等病原菌、产IAA和胞外多糖、分解蛋白和脂肪等有益功能。
本发明提供了上述贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的发酵培养方法，包括菌种活化、三角瓶种子制备、液体种子罐菌种制备和液态发酵罐培养，其中，菌种活化采用LB培养基试管斜面，培养温度为32-37℃，培养时间为20-24h；三角瓶种子制备和液体种子罐菌种制备均采用LB液体培养基，培养温度为32-37℃，培养时间18-30h；液态发酵罐培养采用发酵培养基，接种量为2％-4％，培养温度为32-37℃，培养时间24-36h，即获得贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液。
其中，发酵培养基的配方为：低值鱼(鲜重)200g/L、麦芽糊精100g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、初始pH6.5-7.5。所述液态发酵培养基的制备方法为：低值鱼绞碎后，磨浆，按组方量配制培养基，升温至121℃灭菌15-30min。
本发明还提供了一种以上述贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液为主要成分的生物有机鱼肥，其特征是，其主要原料及质量份数为：发酵液40-60份，鱼皮、鱼排、鱼内脏等低值鱼40-60份。优选的，以质量份数计，发酵液50份，低值鱼50份。
其制备方法为：将低值鱼与发酵液混合，绞碎，磨浆，升温至50-55℃酶解60-120min，获得均匀浆液，降温至40℃以下，加入防腐剂，搅拌均匀，即为本发明所述生物有机鱼肥，其有效成分含量为：贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7活菌数≥1×109cfu/mL、有机质含量≥100g/L。
本发明还公开了上述生物有机鱼肥的使用方法：用于辣椒等作物栽培时，以重量份数计，用水稀释100-1000倍后冲施或滴灌，每亩用量5-10Kg。
本发明的优势是：
1、本发明获得的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7具有拮抗辣椒疫霉等病原菌、产IAA和胞外多糖、分解蛋白和脂肪等多种有益功能，采用该菌株通过发酵与酶解相结合的生产工艺制备的生物有机鱼肥既含有鱼的酶解物，还含有贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7及其代谢产物，具有促进作物生长、改良土壤和防治辣椒疫病等作用。
2、本发明以鱼皮、鱼排、鱼内脏等低值鱼为原料，采用发酵与酶解相结合的生产工艺制备生物有机鱼肥，不仅降低了生物有机水溶肥的生产成本，还拓宽了原料来源，有利于低值鱼的资源化和高值化利用。
附图说明
图1为贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的菌落形态图；
图2为贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的菌体形态图；
图3是基于16SrDNA部分序列构建的系统发育树。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的筛选
分离时间：2020年9月；分离地点：山东省平阴县安城镇，山东佐田氏生物科技有限公司。
采用平板涂布法从土壤中分离细菌。称取10g土壤，加入到90mL无菌水中，在恒温振荡器上180r/min振荡30min。然后放入超净工作台中，采用无菌水进行系列稀释。选用10-3、10-4和10-5等3个稀释度涂布平板。每个稀释度涂布3个平板。平板培养基采用LB培养基。将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养12-24h。根据菌落大小、颜色、光泽、表面质地等特征，挑取不同菌落进行划线纯化。将纯化好的菌株进行编号，并保存于4℃冰箱中，用于进一步筛选拮抗菌。
以辣椒疫霉(Phytophthora capsici)为靶标菌，采用平板对峙培养法筛选其拮抗菌。首先用灭好菌的接种环挑取病原菌的菌丝放置到PDA平板中心，在PDA平板的背面标记十字线进行分区，在距平板中心2-2.5cm等距离处分别接种从土壤中筛选出的不同细菌，每个处理3次重复。平板放置在28℃恒温培养箱中培养7d后，观察对峙生长情况。根据拮抗菌对辣椒疫霉生长的抑制程度，筛选出1株拮抗效果最佳的细菌，即为PAPM-H-7菌株。
实施例2：贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的鉴定
(1)形态与生理生化特征
所述贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7菌株的形态及生理生化特征为：在LB培养基上于35℃培养24h，菌落为圆形，乳白色，不透明，表面呈干燥褶皱状，凸起，不产生色素，培养基颜色没有明显变化(图1)。通过在光学显微镜(1000×)下观察，菌体为杆状，革兰氏染色呈阳性，有椭圆形芽孢(图2)。生理生化特征为(+，阳性；-，阴性)：接触酶试验+；甲基红试验+；淀粉水解试验+；反硝化试验+；产氨试验+；乳糖发酵试验-；蔗糖发酵试验+；木糖发酵试验+；阿拉伯糖试验+；水杨苷试验-；蜜二糖发酵试验+；鼠李糖发酵试验-；甘露醇发酵试验+；葡萄糖发酵试验+。
(2)16SrDNA序列分析
将PAPM-H-7菌株接种到LB液体培养基中，于37℃、200r/min摇床培养24h。收集菌体，提取总DNA，然后以其为模板，在原核生物16SrRNA基因的通用引物F27:5′-AGA GTT TGATCA TGG CTC AG-3′和F27:5′-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3′的引导下进行16SrDNA基因的PCR扩增。扩增条件为：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃复性1min，72℃延伸1.5min，共30个循环，72℃延伸10min。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离后，采用胶回收试剂盒回收，测序，所得序列如序列表SEQ No.1所示。将所测16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，进行多序列同源性分析，并构建系统发育树，如图3所示。
贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的16S rDNA序列(SEQ No.1)：
GCACGTGGCGGGCGTGCTATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGGACCGGT
通过形态及生理生化特征及16SrDNA序列分析，将菌株PAPM-H-7鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该菌株已经于2023年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.27682。
实施例3：贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的有益特性测定
(1)贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7胞外多糖产生能力
将贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7菌株接种到装有LB液体培养基的三角瓶中，置于恒温摇床中震荡培养16h，然后转接入产多糖发酵培养基中，接种量为2％，继续震荡培养48h。培养温度为35℃，摇床震荡转速为220r/min。发酵液于4800r/min离心20min，弃沉淀，取上清并加入4倍体积的无水乙醇，混合均匀，于4℃放置1h，使多糖沉淀下来。然后再于4800r/min离心20min，弃上清，留沉淀。向沉淀中加入适量蒸馏水，将其溶解，即为多糖粗提液，并用苯酚–硫酸法测定多糖含量。实验结果表明，贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7菌株发酵液的多糖含量为1.78g/L。
所述产多糖发酵培养基的配方为(g/L)：蔗糖25，蛋白胨5，NaNO3 0.5，K2HPO4 0.5，MgSO4 0.5，NaCl 10，pH 7.0-7.5。
(2)贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7及其胞外多糖对土壤团聚体形成的影响
将贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7菌株接种到装有LB液体培养基的三角瓶中，置于恒温摇床中震荡培养16h，然后转接入产多糖发酵培养基中，接种量为2％，继续震荡培养48h获得发酵液。培养温度为35℃，摇床震荡转速为220r/min。所述产多糖发酵培养基的配方为(g/L)：蔗糖25，蛋白胨5，NaNO3 0.5，K2HPO4 0.5，MgSO4 0.5，NaCl 10，pH 7.0-7.5。
取9个500mL的三角瓶，分成3组(CK、T1和T2)，每组3瓶，每瓶装入200g土壤(过0.25mm筛)。CK组每瓶加入20mL产多糖发酵培养基，混合均匀；T1组每瓶加入20mL贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7菌株发酵液，混合均匀；T2组每瓶加入20mL预灭活的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7菌株发酵液(121℃灭菌30min)，混合均匀。所有处理均在温室下进行培养，并定期补充水分以保持土壤表面湿润。培养30天后测定土壤水稳性团聚体(＞0.25mm)的比例。测定方法参照NY/T 1121.19-2008《土壤检测第19部分：土壤水稳性大团聚体组成的测定》所规定的方法。测定结果如表1所示。T1处理土壤水稳性团聚体比例最高，可达10.55％，比CK处理提高了46.3％；T2处理土壤水稳性团聚体比例次之，比CK处理提高了19.6％。这说明，贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7及其胞外多糖均可显著促进土壤团聚体的形成。
表1不同处理组中土壤水稳性团聚体(＞0.25mm)的比例
处理 CK T1 T2
水稳性团聚体(％) 7.21±0.65a 10.55±1.24c 8.62±0.43b
备注：表中数据标识不同字母代表差异显著(P＜0.05)。
(3)贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7产蛋白酶和脂肪酶的能力
将贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7接种(接种量3％)到液体产酶培养基中，于35℃、180-220rpm震荡培养48h，测定发酵液中蛋白酶和脂肪酶活力。所述液体产酶培养基的配制方法为：鳕鱼皮300Kg，磷酸二氢钾1Kg，水698Kg，绞碎，磨浆，调节初始pH6.5-7.5，121℃灭菌15-30min。蛋白酶活力的测定采用福林法，具体方法参照国家标准GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》。脂肪酶活力的测定采用动态滴定法，具体方法参照国家标准GB/T23525-2009。测定结果表明，发酵液中性蛋白酶活力可达1260U/mL，脂肪酶活力可达58U/mL。这说明贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7具有较强的产蛋白酶和脂肪酶能力，这有利于其对鱼蛋白和鱼脂肪的分解。
(4)贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7产IAA能力的测定
向LB液体培养基中加入L-色氨酸(200mg/L)，121℃灭菌15min，冷却后接入贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7，置于恒温摇床中35℃、200r/min震荡培养48h。取50μL发酵液滴于白色陶瓷板上，同时加50μL Salkowski比色液，于室温避光放置30min。阳性对照以50μL 50mg/LIAA代替发酵液。比色液颜色变红者表示受试菌株能够分泌IAA。实验结果表明，贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液的处理呈红色，与阳性对照颜色接近，说明该菌株具有分泌IAA的能力。所述的Salkowski比色液配方为：35％ HClO 450mL、0.5mol/L FeCl3 1mL。
实施例4：贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液的制备
1)菌种活化：将贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7转接至LB斜面培养基，35℃培养20-24h。所述LB斜面培养基配方为：酵母粉5g、胰蛋白胨10g、氯化钠10g、琼脂粉20g、水1000mL，pH7.5。
2)三角瓶菌种制备：将活化后的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7转接至LB液体培养基，35℃、180-200rpm震荡培养20-24h，得到三角瓶种子液。所述LB液体培养基的配方为：酵母粉5g、胰蛋白胨10g、氯化钠10g、水1000mL，pH7.5。
3)种子罐菌种制备：将三角瓶种子转接至容积为20L的种子罐，内装LB液体培养基16L，接种量为2％，于35℃、搅拌转速200rpm、通风量16L/min的条件下培养20-24h，即为种子罐菌种。
4)液态发酵：将种子罐菌种转接入发酵罐，接种量为2％。发酵罐容积1000L，内装发酵培养基700L。于35℃、搅拌转速为200rpm、通风量600-700L/min的条件下发酵培养36h，即得贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液，其活菌含量约为1.0×1010cfu/mL，用于生物有机鱼肥的配制。
所述发酵培养基的配方为：低值鱼(鲜重)200g/L、麦芽糊精100g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、初始pH6.5-7.5。所述液态发酵培养基的制备方法为：低值鱼绞碎后，磨浆，按组方量配制培养基，升温至121℃灭菌15-30min。
实施例5：生物有机鱼肥的制备
采用实施例4所制备的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液制备生物有机鱼肥，其配方为：以质量份数计，鱼皮、鱼排、鱼内脏等低值鱼50份，发酵液50份。按组方量将低值鱼与发酵液混合，绞碎，磨浆，升温至50-55℃酶解90min，然后降温至40℃以下，加入适量防腐剂，搅拌均匀，即为本发明所述生物有机鱼肥，其有效成分含量为贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7活菌数≥1×109cfu/mL、有机质含量≥100g/L。防腐剂可采用卡松、山梨酸钾、苯甲酸钠等常规防腐剂。
应用例1：在辣椒生产中的应用
盆栽试验于2022年在山东省平阴县安城镇董庄村进行。实验用盆规格为盆口内径20cm、盆底内径14cm、盆高16cm。实验用土为大田耕作层土壤。土壤养分：有机质17.87g/kg、速效氮65.2mg/kg、速效磷75.17mg/g、速效钾156.24mg/g、pH6.72。实验共设3组：对照组(CK)、处理组T1和处理组T2，每个处理25盆，每盆2株辣椒。对照组CK施用经预灭菌处理的实施例4制备的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液；处理组T1施用实施例4制备的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液；处理组T2施用实施例5制备的生物有机鱼肥。施肥量均为30mL/盆，分别于移栽后第10、20和30天分3次随水冲施，每次10mL/盆。移栽后第60天时统计株高和茎粗，测定根际土壤酶活。株高和茎粗分别采取卷尺和游标卡尺测量。根际土壤酶活性的测定：脲酶测定采用苯酚钠比色法，过氧化氢酶测定采用高锰酸钾滴定法，蔗糖酶测定采用DNS比色法。
试验结果如表2与表3所示。与对照组CK相比，处理组T1和T2的株高和茎粗均有不同程度的提高，这说明施加本发明所述贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的发酵液及以其为主要成分制备的生物有机鱼肥均对辣椒的生长具有促进作用。与对照组CK相比，处理组T1和T2中的脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性均有不同程度的提高，这说明本发明所述贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的发酵液及以其为主要成分制备的生物有机鱼肥均可提高辣椒根际土壤酶活。
表2对辣椒生长的影响
备注：表中同列数据标识不同字母代表差异显著(P＜0.05)。
表3对辣椒根际土壤酶活的影响
备注：表中同列数据标识不同字母代表差异显著(P＜0.05)。
应用例2：对辣椒疫病的防治作用
盆栽试验于2022年在山东省平阴县安城镇董庄村进行。实验用盆规格为盆口内径20cm、盆底内径14cm、盆高16cm。实验用土为大田耕作层土壤。土壤养分：有机质17.87g/kg、速效氮65.2mg/kg、速效磷75.17mg/g、速效钾156.24mg/g、pH6.72。实验共设3组：对照组(CK)、处理组T1和处理组T2。每个处理25盆，每盆2株辣椒，共50株。
对照组CK于移栽后第10天施用辣椒疫霉菌悬液10mL/盆，随水冲施；处理组T1于移栽后第10天施用辣椒疫霉菌悬液10mL/盆和实施例4制备的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液10mL/盆，随水冲施；处理组T2于移栽后第10天施用辣椒疫霉菌悬液10mL/盆和实施例5制备的生物有机鱼肥10mL/盆，随水冲施。灌根处理15天后，观察症状并统计病害严重度和防效。辣椒疫霉菌悬液的制备方法：将辣椒疫霉接种于PDA平板中，28℃培养7-10d，长满菌丝后加无菌水刮取菌苔和孢子，制成悬浮液，孢子浓度为1×106cfu/mL。所述PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH值自然。
辣椒疫病病害分级标准，0级：完全无病；1级：外叶茎部有局部病症(黑褐色至黑色、溢缩)；3级：外叶茎部溢缩变色部分在1/3以下，或外叶少数蔫萎(脱落)；5级：全株1/3以上出现溢缩变色，或叶片蔫萎(脱落)或倒伏；7级：全株1/2以上出现溢缩变色，叶片脱落；9级：整株变色、枯死。病情指数(％)＝∑(级值×株数)/(9×总株数)×100。防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数×100。
实验结果如表4所示，与对照组CK相比，处理组T1和T2的发病率和病情指数均明显降低，这说明施加本发明所述贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的发酵液及以其为主要成分制备的生物有机鱼肥均对辣椒疫病具有较好的防治作用。
表4生物有机鱼肥对辣椒疫病的防治作用

Claims (10)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)PAPM-H-7，其特征是，其保藏编号为：CGMCC No.27682。
2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7在拮抗辣椒疫霉菌中的应用。
3.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7在产IAA和胞外多糖，分解蛋白和脂肪中的应用。
4.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7在制备生物有机鱼肥中的应用。
5.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的发酵方法，其特征是，包括菌种活化、三角瓶种子制备、液体种子罐菌种制备和液态发酵罐培养，其中，液态发酵罐培养采用发酵培养基，接种量为2％-4％，培养温度为32-37℃，培养时间24-36h，获得贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液；所述发酵培养基以低值鱼为主要成分。
6.如权利要求5所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7的发酵方法，其特征是，所述发酵培养基为：低值鱼200g/L、麦芽糊精100g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L，初始pH6.5-7.5。
7.权利要求5或6所述发酵方法制备的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液。
8.一种含功能菌的生物有机鱼肥的制备方法，其特征是，
其主要原料及质量份数为：权利要求7所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液40-60份，低值鱼40-60份；
将低值鱼与贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液混合，绞碎，磨浆，升温至50-55℃酶解60-120min，获得均匀浆液，降温至40℃以下，加入防腐剂，搅拌均匀，得到含功能菌的生物有机鱼肥。
9.权利要求8所述制备方法制备的含功能菌的生物有机鱼肥，其特征是，其有效成分及含量为：贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7活菌数≥1×109cfu/mL，有机质含量≥100g/L。
10.权利要求9所述的含功能菌的生物有机鱼肥或者权利要求7所述的贝莱斯芽孢杆菌PAPM-H-7发酵液在促进辣椒的生长、提高辣椒根际土壤酶活及防治辣椒疫病中的应用。
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