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CN119113134A - 一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途 - Google Patents

一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途 Download PDF

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CN119113134A CN202411281452.1A CN202411281452A CN119113134A CN 119113134 A CN119113134 A CN 119113134A CN 202411281452 A CN202411281452 A CN 202411281452A CN 119113134 A CN119113134 A CN 119113134A
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conjugate
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Nanjing Lingnuo Biomedical Technology Research Institute Co ltd
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Abstract

本发明公开了一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途，涉及药物制备技术领域，通过将阿巴帕肽与活化肝素进行偶联纯化后得到阿巴帕肽偶联物，并进一步将阿巴帕肽偶联物封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液，最后又将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。本发明将阿巴帕肽在体内的半衰期得以显著延长，增强其治疗效果，减少了药物使用的频率。

Description

一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的 用途
技术领域
本发明属于药物制备技术领域，具体涉及一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途。
背景技术
骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织微结构破坏、骨脆性增加和易于骨折为特征的全身性骨骼疾病。随着人口老龄化的加剧，骨质疏松症已成为全球性的公共卫生问题。目前，骨质疏松症的治疗药物主要包括骨吸收抑制剂和骨形成促进剂两大类。阿巴帕肽作为骨形成促进剂的代表药物之一，它是一种甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)类似物，通过选择性激活甲状旁腺素1型受体(PTH1R)，调节骨代谢，促进骨骼形成，从而增加骨密度和骨强度，降低骨折风险。阿巴帕肽主要用于治疗绝经后妇女的骨质疏松症，尤其是那些对其他治疗无效或有高骨折风险的患者。阿巴帕肽的临床研究显示，它能够显著提高腰椎、髋部和股骨颈的骨密度，并且降低椎体和非椎体骨折的风险。
阿巴帕肽(Abaloparatide)是一种由34个氨基酸残基组成的多肽，多肽药物具有生物活性高、低毒、低免疫原性、高组织渗透性和易于合成等优点，具有极为广泛的应用前景。然而，大多数多肽的相对分子质量较小，易被血液和肾脏快速清除，同时易被人和动物体内的多种蛋白酶和肽酶降解，因此大多数多肽类药物的体内半衰期较短，这严重限制了该类药物在临床上的应用。目前，阿巴帕肽的半衰期较短，通常为1.3小时，药代动力学研究表明，在体内的降解速度较快，这影响了其长期疗效。因此，积极寻找提升阿巴帕肽(Abaloparatide)半衰期的方法并应用在骨质疏松症治疗中，可以用来减少阿巴帕肽给药频率，提高患者的生活质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提升阿巴帕肽半衰期的方法及其在治疗骨质疏松症中的用途，用于解决现有技术中阿巴帕肽半衰期短的技术问题。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)偶联：将肝素活化后，得到活化肝素溶液，再将高纯度的阿巴帕肽溶液和活化肝素溶液进行偶联，纯化后得到阿巴帕肽偶联物溶液；
(2)封装：将阿巴帕肽偶联物溶液封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
(3)装载：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法步骤(1)偶联中，操作步骤如下：
Q1、活化肝素：取高纯度肝素粉末用生理盐水进行溶解，配制成肝素溶液，取肝素活化剂用生理盐水进行溶解配置成肝素活化剂溶液，将肝素溶液与肝素活化剂溶液混合后，逐滴加入稀盐酸溶液调节pH，反应结束后，加入乙二醇溶液终止反应，再经透析纯化后得到活化肝素溶液。
Q2、偶联反应：取高纯度阿巴帕肽粉末用生理盐水进行溶解，配制成阿巴帕肽溶液，将阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液混合，加入偶联剂溶液进行偶联，用碳酸氢钠调节pH，偶联30～60min后，得到阿巴帕肽偶联反应物，再使用分子筛层析纯化阿巴帕肽偶联反应物，得到阿巴帕肽偶联物，将阿巴帕肽偶联物溶解在生理盐水中，得到阿巴帕肽偶联物溶液，备用。
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述Q1肝素为低分子量肝素，肝素溶液浓度为1～5mg/mL，肝素活化剂为高碘酸钠，肝素活化剂溶液浓度为1.2～7.5mg/mL，肝素活化剂溶液与肝素溶液的体积比为1.2～1.5倍，调节溶液pH至4.5～5.0，反应温度20-25℃，反应时间1～2h，乙二醇溶液浓度为6～8％，加入乙二醇溶液与肝素活化剂溶液的体积比为1：1，透析袋的截留分子量为5000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h；所述Q2阿巴帕肽溶液的浓度为0.2～5mg/mL，阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液的体积比为1：1～5，偶联剂溶液为0.5～0.7mg/mL的氰基硼氢化钠，偶联剂溶液与阿巴帕肽溶液的体积比为1：1～3，分子筛层析选用Sephadex G-50。
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法步骤(2)封装中，操作步骤如下：
S1、脂质材料预处理：将磷脂和胆固醇按照比例混合均匀后加入乙醇溶液溶解，使用磁力搅拌器轻柔搅拌，溶解均匀后得到脂质溶液；
S2、脂质薄膜的形成：使用旋转蒸发仪在减压条件下蒸发脂质溶液中的溶剂，蒸发结束后，在旋转蒸发仪容器内壁上形成均匀的脂质薄膜，取出即可得到脂质薄膜；
S3、包封：将阿巴帕肽偶联物溶液缓慢加入脂质薄膜中，同时进行超声处理，得到阿巴帕肽偶联封装反应物；
S4、纯化：将阿巴帕肽偶联封装反应物经透析纯化后得到阿巴帕肽偶联封装物，将其重悬于PBS中得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述S1胆固醇与磷脂的比例为1：3～9，乙醇溶液浓度为80～90％，温度为20～25℃；所述S2旋转蒸发仪的旋转速度为20～50rpm，减压抽真空至20～50mmHg，温度为30～34℃，蒸发时间为6～16h；所述S3将阿巴帕肽偶联物溶液使用注射器或滴管滴加到脂质薄膜上，超声的频率为20～100kHz，温度为4～20℃；所述S4透析袋的截留分子量为8000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h。
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法步骤(3)装载中，操作步骤如下：
M1、纳米颗粒制备：将纳米颗粒溶解在丙酮中，通过搅拌使其完全溶解，形成均匀的纳米颗粒溶液；将纳米颗粒溶液缓慢滴加到吐温20的水相中，同时用磁力搅拌器进行高速搅拌，得到纳米颗粒乳化液，将纳米颗粒乳化液置于通风橱中挥发，结束后用生理盐水洗涤，并用生理盐水重悬，得到纳米颗粒重悬液；
M2、混合：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒重悬液混合，并进行超声处理，得到阿巴帕肽纳米装载反应物；
M3、纯化阿巴帕肽纳米装载反应物：将阿巴帕肽纳米装载反应物透析纯化后得到阿巴帕肽纳米装载物。
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，所述M1纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，纳米颗粒溶液浓度为5～15mg/mL，吐温20在水相的终浓度为0.1～5％，磁力搅拌器的转速为500～2000rpm，用生理盐水洗涤6～10次；所述M2纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒溶液的体积比为1：10～15，控制混合温度为25～40℃，超声频率为20～50kHz，时间为30～120min；所述M3透析袋的截留分子量为12000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为16～28h。
进一步地，所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法在治疗骨质疏松症中的用途。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明通过将阿巴帕肽与活化肝素偶联，肝素能够与阿巴帕肽形成稳定的复合物，减缓其代谢和排泄，又将偶联后的阿巴帕肽封装在脂质薄膜中，这不仅提供了一个保护层，还能减少药物在体内的降解，进一步用纳米颗粒进行装载，增强了药物的稳定性和释放控制，使药物能够缓慢释放，增加其在体内的滞留时间。通过这些步骤，阿巴帕肽的体内半衰期得以显著延长，从而增强了其治疗效果，并减少了药物使用的频率。
2、本发明将肝素通过活化处理后，能够与阿巴帕肽形成共价键，这种偶联反应使得阿巴帕肽的结构更为稳定，减少了其在体内的降解速率，活化肝素能够与阿巴帕肽分子上的氨基形成稳定的偶联物，这种偶联物更不易被体内的酶降解，并且能够减缓其从体内的排泄；此外，偶联后的阿巴帕肽与血浆蛋白结合更为紧密，增加了其在体内的循环时间，从而减缓了阿巴帕肽的生物降解速度，有效延长阿巴帕肽的半衰期。
3、本发明将磷脂和胆固醇形成脂质体，能够有效包裹药物分子，脂质膜的双层结构可以隔离药物与体内环境的直接接触，从而减缓其降解和排泄；脂质体的表面特性和脂质成分可以与药物形成良好的相容性，进一步提高药物的稳定性；脂质体封装不仅提供了一种有效的药物递送系统，可以保护药物免受体内酶的降解，并控制药物释放速率，而且脂质体能够减少药物的快速排泄和非特异性分布，提高药物的生物利用度。
4、本发明使用乳酸-羟基乙酸共聚物制备的纳米颗粒能够有效地包裹阿巴帕肽偶联封装物，并通过超声处理确保其均匀分散，纳米颗粒具有极高的比表面积，能够提供更多的药物结合位点，使药物分子在纳米颗粒表面形成稳定的复合物，这些纳米颗粒可以通过体内的自然滤过机制缓慢释放药物，从而延长药物的体内半衰期；此外，纳米颗粒的缓释特性和生物相容性进一步提高了阿巴帕肽的半衰期，并优化了其治疗效果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例提供一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，方法包括以下步骤：
(1)偶联：将肝素活化后，得到活化肝素溶液，再将高纯度的阿巴帕肽溶液和活化肝素溶液进行偶联，纯化后得到阿巴帕肽偶联物溶液；
(2)封装：将阿巴帕肽偶联物溶液封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
(3)装载：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。
具体的，步骤(1)偶联中，操作步骤如下：
Q1、活化肝素：取10mg高纯度肝素粉末用10mL生理盐水进行溶解，配制成1mg/mL肝素溶液，取12mg高碘酸钠用10mL生理盐水进行溶解配置成1.2mg/mL肝素活化剂溶液，将肝素溶液与肝素活化剂溶液混合后，逐滴加入稀盐酸溶液调节pH为4.5，反应温度20℃，反应时间1h，加入10mL 6％的乙二醇溶液终止反应，再经5000Da透析袋透析纯化，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16h，得到活化肝素溶液，备用。
Q2、偶联反应：取2mg高纯度阿巴帕肽粉末用10mL生理盐水进行溶解，配制成0.2mg/mL阿巴帕肽溶液，将阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液混合，加入10mL 0.5mg/mL的氰基硼氢化钠溶液进行偶联，用碳酸氢钠调节pH为8，偶联30min后，得到阿巴帕肽偶联反应物，再使用Sephadex G-50分子筛层析纯化阿巴帕肽偶联反应物，得到阿巴帕肽偶联物，冷冻干燥后，将阿巴帕肽偶联物溶解在10mL生理盐水中，得到阿巴帕肽偶联物溶液，备用。
步骤(2)封装中，操作步骤如下：
S1、脂质材料预处理：将3mg磷脂和1mg胆固醇混合均匀后加入5mL 80％乙醇溶液溶解，使用磁力搅拌器搅拌溶解，温度为20℃，充分溶解后得到脂质溶液；
S2、脂质薄膜的形成：将脂质溶液放入旋转蒸发仪中，旋转蒸发仪的旋转速度为20rpm，减压抽真空至20mmHg，温度为30℃，蒸发脂质溶液中的溶剂，蒸发6h，在旋转蒸发仪容器内壁上形成均匀的脂质薄膜，取出即可得到脂质薄膜；
S3、包封：将阿巴帕肽偶联物溶液使用滴管缓慢注入脂质薄膜中，同时进行超声10min，频率为20kHz，温度为4℃，得到阿巴帕肽偶联封装反应物；
S4、纯化：将阿巴帕肽偶联封装反应物放入透析袋，透析袋的截留分子量为8000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16h，透析纯化后得到阿巴帕肽偶联封装物，将其重悬于5mL磷酸盐缓冲液中得到阿巴帕肽偶联封装物溶液。
步骤(3)装载中，操作步骤如下：
M1、纳米颗粒制备：将50mg乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在10mL丙酮中，通过搅拌使其完全溶解，形成均匀的纳米颗粒溶液；将纳米颗粒溶液缓慢滴加到吐温20的水相中，吐温20在水相的终浓度为0.1％，同时用磁力搅拌器进行高速搅拌，磁力搅拌器的转速为500rpm，搅拌时间为20min，得到纳米颗粒乳化液，将纳米颗粒乳化液置于通风橱中挥发16h，结束后用生理盐水洗涤6次，并用10mL生理盐水重悬，得到纳米颗粒重悬液；
M2、混合：将1mL阿巴帕肽偶联封装物溶液与8mL纳米颗粒重悬液混合，并进行超声处理，超声频率为20kHz，时间为30min，得到阿巴帕肽纳米装载反应物；
M3、纯化阿巴帕肽纳米装载反应物：将阿巴帕肽纳米装载反应物放入透析袋，透析袋的截留分子量为12000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为16h，透析纯化后得到阿巴帕肽纳米装载物。
实施例2：
本实施例提供一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，方法包括以下步骤：
(1)偶联：将肝素活化后，得到活化肝素溶液，再将高纯度的阿巴帕肽溶液和活化肝素溶液进行偶联，纯化后得到阿巴帕肽偶联物溶液；
(2)封装：将阿巴帕肽偶联物溶液封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
(3)装载：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。
具体的，步骤(1)偶联中，操作步骤如下：
Q1、活化肝素：取25mg高纯度肝素粉末用10mL生理盐水进行溶解，配制成2.5mg/mL肝素溶液，取40mg高碘酸钠用10mL生理盐水进行溶解配置成4mg/mL肝素活化剂溶液，将肝素溶液与肝素活化剂溶液混合后，逐滴加入稀盐酸溶液调节pH为4.8，反应温度25℃，反应时间1.5h，加入10mL 7％的乙二醇溶液终止反应，再经5000Da透析袋透析纯化，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间24h，得到活化肝素溶液，备用。
Q2、偶联反应：取10mg高纯度阿巴帕肽粉末用10mL生理盐水进行溶解，配制成1mg/mL阿巴帕肽溶液，将阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液混合，加入5mL0.6mg/mL的氰基硼氢化钠溶液进行偶联，用碳酸氢钠调节pH为8，偶联30～60min后，得到阿巴帕肽偶联反应物，再使用Sephadex G-50分子筛层析纯化阿巴帕肽偶联反应物，得到阿巴帕肽偶联物，冷冻干燥后，将阿巴帕肽偶联物溶解在生理盐水中，得到阿巴帕肽偶联物溶液，备用。
步骤(2)封装中，操作步骤如下：
S1、脂质材料预处理：将6mg磷脂和1mg胆固醇混合均匀后加入5mL 80％乙醇溶液溶解，使用磁力搅拌器搅拌溶解，温度为23℃，充分溶解后得到脂质溶液；
S2、脂质薄膜的形成：将脂质溶液放入旋转蒸发仪中，旋转蒸发仪的旋转速度为35rpm，减压抽真空至30mmHg，温度为32℃，蒸发脂质溶液中的溶剂，蒸发6h，在旋转蒸发仪容器内壁上形成均匀的脂质薄膜，取出即可得到脂质薄膜；
S3、包封：将阿巴帕肽偶联物溶液使用注射器缓慢注入脂质薄膜中，同时进行超声15min，频率为20kHz，温度为4℃，得到阿巴帕肽偶联封装反应物；
S4、纯化：将阿巴帕肽偶联封装反应物放入透析袋，透析袋的截留分子量为8000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间24h，透析纯化后得到阿巴帕肽偶联封装物，将其重悬于5mL磷酸盐缓冲液中得到阿巴帕肽偶联封装物溶液。
步骤(3)装载中，操作步骤如下：
M1、纳米颗粒制备：将80mg乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在10mL丙酮中，通过搅拌使其完全溶解，形成均匀的纳米颗粒溶液；将纳米颗粒溶液缓慢滴加到吐温20的水相中，吐温20在水相的终浓度为2％，同时用磁力搅拌器进行高速搅拌，磁力搅拌器的转速为1000rpm，搅拌时间为30min，得到纳米颗粒乳化液，将纳米颗粒乳化液置于通风橱中挥发20h，结束后用生理盐水洗涤8次，并用10mL生理盐水重悬，得到纳米颗粒重悬液；
M2、混合：将1mL阿巴帕肽偶联封装物溶液与9mL纳米颗粒重悬液混合，并进行超声处理，超声频率为35kHz，时间为90min，得到阿巴帕肽纳米装载反应物；
M3、纯化阿巴帕肽纳米装载反应物：将阿巴帕肽纳米装载反应物放入透析袋，透析袋的截留分子量为12000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为24h，透析纯化后得到阿巴帕肽纳米装载物。
实施例3：
本实施例提供一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，方法包括以下步骤：
(1)偶联：将肝素活化后，得到活化肝素溶液，再将高纯度的阿巴帕肽溶液和活化肝素溶液进行偶联，纯化后得到阿巴帕肽偶联物溶液；
(2)封装：将阿巴帕肽偶联物溶液封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
(3)装载：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。
具体的，步骤(1)偶联中，操作步骤如下：
Q1、活化肝素：取50mg高纯度肝素粉末用10mL生理盐水进行溶解，配制成5mg/mL肝素溶液，取75mg高碘酸钠用10mL生理盐水进行溶解配置成7.5mg/mL肝素活化剂溶液，将肝素溶液与肝素活化剂溶液混合后，逐滴加入稀盐酸溶液调节pH为5.0，反应温度25℃，反应时间2h，加入10mL 8％的乙二醇溶液终止反应，再经5000Da透析袋透析纯化，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间28h，得到活化肝素溶液，备用。
Q2、偶联反应：取50mg高纯度阿巴帕肽粉末用10mL生理盐水进行溶解，配制成1mg/mL阿巴帕肽溶液，将阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液混合，加入50mL0.7mg/mL的氰基硼氢化钠溶液进行偶联，用碳酸氢钠调节pH为8，偶联30～60min后，得到阿巴帕肽偶联反应物，再使用Sephadex G-50分子筛层析纯化阿巴帕肽偶联反应物，得到阿巴帕肽偶联物，冷冻干燥后，将阿巴帕肽偶联物溶解在10mL生理盐水中，得到阿巴帕肽偶联物溶液，备用。
步骤(2)封装中，操作步骤如下：
S1、脂质材料预处理：将9mg磷脂和1mg胆固醇混合均匀后加入5mL 80％乙醇溶液溶解，使用磁力搅拌器搅拌溶解，温度为25℃，充分溶解后得到脂质溶液；
S2、脂质薄膜的形成：将脂质溶液放入旋转蒸发仪中，旋转蒸发仪的旋转速度为50rpm，减压抽真空至50mmHg，温度为34℃，蒸发脂质溶液中的溶剂，蒸发16h，在旋转蒸发仪容器内壁上形成均匀的脂质薄膜，取出即可得到脂质薄膜；
S3、包封：将阿巴帕肽偶联物溶液使用注射器缓慢注入脂质薄膜中，同时进行超声20min，频率为100kHz，温度为20℃，得到阿巴帕肽偶联封装反应物；
S4、纯化：将阿巴帕肽偶联封装反应物放入透析袋，透析袋的截留分子量为8000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间28h，透析纯化后得到阿巴帕肽偶联封装物，将其重悬于5mL磷酸盐缓冲液中得到阿巴帕肽偶联封装物溶液。
步骤(3)装载中，操作步骤如下：
M1、纳米颗粒制备：将150mg乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在10mL丙酮中，通过搅拌使其完全溶解，形成均匀的纳米颗粒溶液；将纳米颗粒溶液缓慢滴加到吐温20的水相中，吐温20在水相的终浓度为5％，同时用磁力搅拌器进行高速搅拌，磁力搅拌器的转速为2000rpm，搅拌时间为40min，得到纳米颗粒乳化液，将纳米颗粒乳化液置于通风橱中挥发20h，结束后用生理盐水洗涤10次，并用10mL生理盐水重悬，得到纳米颗粒重悬液；
M2、混合：将1mL阿巴帕肽偶联封装物溶液与10mL纳米颗粒重悬液混合，并进行超声处理，超声频率为50kHz，时间为120min，得到阿巴帕肽纳米装载反应物；
M3、纯化阿巴帕肽纳米装载反应物：将阿巴帕肽纳米装载反应物放入透析袋，透析袋的截留分子量为12000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为28h，透析纯化后得到阿巴帕肽纳米装载物。
对比例1：
对比例1与实施例2相比，对比例1在阿巴帕肽纳米装载物的制备过程中，不与肝素进行偶联，其他条件均不变。
对比例2：
对比例2与实施例2相比，对比例2在阿巴帕肽纳米装载物的制备过程中，不封装在脂质薄膜中，其他条件均不变。
对比例3：
对比例3与实施例2相比，对比例3在阿巴帕肽纳米装载物的制备过程中，不与纳米颗粒装载，其他条件均不变。
实验例
对实施例1-3和对比例1-3制得的阿巴帕肽纳米装载物进行以下测试：
一、稳定性测试
将实施例1-3和对比例1-3制得的阿巴帕肽纳米装载物作为实验组，将阿巴帕肽作为对照组，实验组与对照组均为肽化合物，分别对实验组和对照组药物加入乙酸钠缓冲液溶解，乙酸钠缓冲液的浓度为5mg/mL，并用乙酸调节pH＝5.1，使溶液最终浓度都为2mg/mL，用0.22μm无菌滤头过滤。分别吸取实验组和对照组溶液，通过HPLC(Shimadzu LC-20，Waters XBridge C18色谱柱，溶液A：0.1％(v/v)TFA-水溶液，溶液B：0.1％(v/v)TFA-ACN溶液；溶液A和溶液B中的溶剂分别为水和ACN)，分析15μL注射物的峰面积，此分析结果为药物稳定性测试的初始点(T0)。
将进行稳定性测试的药物样品溶液置于25℃恒温箱中，密封避光保存6天。每天定时取样，该过程结束后，将样品溶液4500rpm离心10min，轻轻吸取上清溶液并通过HPLC分析10μL注射物的峰面积，此分析结果为该药物稳定性测试的终点(T6)。通过比较T0和各时间点测定药物的目标峰面积及相关杂质峰面积，计算测定肽的剩余肽量。计算公式如下：
剩余量(％)＝(各时间点主峰面积/T0主峰面积)×100％；
通过比较测定肽化合物的肽剩余量来评估肽化合物的化学稳定性，测试结果参见表1。
表1
根据表1的测试结果，可以看出本发明实施例1-3和对比例1-3制备得到的阿巴帕肽纳米装载物与对照组阿巴帕肽在乙酸钠缓冲液中的稳定性没有明显差异，实验说明对阿巴帕肽进行与肝素偶联、封装在脂质体薄膜中以及与纳米颗粒进行装载，均不会降低在乙酸钠缓冲液中的稳定性。
测试阿巴帕肽纳米装载物在人血浆的稳定性，将冷冻血浆在37℃水浴中解冻，血浆以4000rpm离心5min，如果有血块，则去除血块。分别使用超纯水配制药物溶液(12.5μM)和阳性对照药溴丙胺太林溶液(100μM)，各取实验组与对照组溶液和溴丙胺太林溶液加入98μL的空白血浆中37℃水浴锅孵育，在0、1、2、3、4、5、6、8、10h取样的样品中加入400μL终止液。将各样品4000rpm离心5min，取50μL上清液使用纯化水稀释至100μL，稀释后的样品800rpm震荡10min后使用HPLC-MS检测(ACQUITY UPLC，XBridge Protein BEH C4(蛋白分析)液相色谱柱，溶液A：0.1％(v/v)TFA-水溶液，溶液B：0.1％(v/v)TFA-ACN溶液)。
通过比较T0和各时间点测定药物的目标峰面积及相关杂质峰面积，计算测定肽的剩余肽量。计算公式如下：
剩余肽(％)＝(各时间点主峰面积/T0主峰面积)×100％；
通过比较测定肽化合物的肽剩余量来评估肽化合物的血浆稳定性，测定结果参见表2。
表2
根据表2的测试结果，可以看出本发明实施例1-3制备得到的阿巴帕肽纳米装载物在人血浆稳定性试验中的稳定性显著增强，由对比例1-3和实施例1-3对比可知，通过对阿巴帕肽进行与肝素偶联、封装在脂质体薄膜中以及与纳米颗粒进行装载都可以提高阿巴帕肽的药物稳定性。
二、阿巴帕肽纳米装载物对PTH受体1的活性测定
将实施例1-3和对比例1-3制得的阿巴帕肽纳米装载物作为实验组，将阿巴帕肽作为对照组，通过测定稳定过表达人PTH受体1的CHO-K1细胞的cAMP信号响应来确定肽化合物对相应受体的激动活性，其中稳定过表达人PTH受体1的CHO-K1细胞购买自南京金斯瑞生物科技股份有限公司。使用试剂盒对细胞内cAMP含量进行测定，其中试剂盒购买自上海乾思生物科技有限公司(cAMP Gs dynamic kit)，它是基于HTRF(均相时间分辨荧光)技术测定。将稳定过表达人PTH受体1的CHO-K1细胞培养在含10％(v/v)的FBS和90％Ham’s F-12K完全培养基中，待细胞长至80％～90％密度时，用0.25％(w/v)胰酶-EDTA消化，完全消化后将细胞团轻轻吹散成单个细胞，调节细胞密度为5.0×105个/mL。取96孔板，分别向96孔板中每孔加入25μL细胞悬液(细胞密度为5.0×105个/mL)。待测阿巴帕肽纳米装载物溶于1×PBS缓冲液中，从400nM按4倍逐级稀释，共配制8个浓度点的阿巴帕肽纳米装载物溶液。将25μL配置好的化合物溶液分别加入96孔板对应细胞悬液中，吹打混合均匀，随后37℃孵育30min。药物孵育完成后各孔加入25μL试剂盒中的检测试剂，再室温孵育60min。将板置于Bio-Tek多功能酶标仪(Cytation5)中测定665nm/620nm处荧光读数，并利用GraphPadPrism8中信号比值与样品浓度，计算EC50值，计算结果见表3。
表3
组别 EC50(nM)
阿巴帕肽 1.34
实施例1 0.89
实施例2 0.75
实施例3 0.78
对比例1 1.04
对比例2 1.08
对比例3 1.07
根据表3的计算结果，可以看出本发明实施例1-3制备得到的阿巴帕肽纳米装载物的EC50值较低，表明在受体激动活性试验中激动受体能力较高，由对比例1-3和实施例1-3对比可知，通过对阿巴帕肽进行与肝素偶联、封装在脂质体薄膜中以及与纳米颗粒进行装载都可以提高阿巴帕肽激动受体能力，即增强阿巴帕肽的药物效力。
三、药代动力学分析
选取Sprague Dawley大鼠，该大鼠购买自赛业生物，雄性，8～10周，体重180～200g。将大鼠分别安置在温度为22～25℃控制的设施中，12小时光/暗循环，并可自由获得食物和水。大鼠适应设施后随机分组，每组3只。
将实施例1-3和对比例1-3制得的阿巴帕肽纳米装载物作为实验组，将阿巴帕肽作为对照组，使用水实验组和对照组的药物配制成0.1mg/mL，皮下注射剂量1mg/kg。分别于给药后0.25h、0.5h、1h、1.5h、2h、4h、6h、12h、24h、48h和72h颈静脉采集0.2mL静脉血置于EDTA2K抗凝管中，血样于4℃、8000rpm离心10min，分离得到的血浆中加入甲酸，使终浓度为1％，得到待测样品。
通过LC-MS/MS方法测定受试物的血浆浓度，样品处理步骤如下：取样品在冰水浴中融化后，涡旋混匀。分别取40μL待测样品、空白样品、零浓度样品、残留样品为用空白基质代替，试剂空白为用超纯水代替，加入至96孔板中；再加入160μL甲苯磺丁脲作为内标工作溶液(空白样品、残留样品、试剂空白用甲醇代替)，涡旋混匀5min；将96孔板放入离心机，4℃，8000rpm离心10min；取100μL上清液至含100μL超纯水的96孔板中，涡旋混匀，使用仪器LC-MS-006(API5000)，设置流速为0.6000mL/min，色谱柱型号XB-C18(2.1×30mm，5μm)，流动相分别为A：0.1％甲酸水溶液、B：乙腈，进样体积15μL，梯度15％B-95％B-3min进行分析，结果见表4。
表4
组别 半衰期(h) 达到最大浓度的时间(h)
实施例1 15.4 13
实施例2 16.0 13
实施例3 15.8 13
对比例1 10.5 7
对比例2 11.4 7.5
对比例3 11.2 7.5
阿巴帕肽 5.1 3.5
根据表4的测定结果，可以看出本发明实施例1-3制备得到的阿巴帕肽纳米装载物半衰期在皮下给药后约13小时达到平均最大血浆浓度，半衰期分别15.4、16.0和15.8小时，支持每周一次给药的可能性，实施例1-3与对比例1-3和阿巴帕肽对照组相比，实施例中的阿巴帕肽纳米装载物半衰期显著提高，实验表明通过对阿巴帕肽进行与肝素偶联、封装在脂质体薄膜中以及与纳米颗粒进行装载都可以提高阿巴帕肽的半衰期，应用在骨质疏松症患者中可以减少给药次数。
以上，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可做很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (9)

1.一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)偶联：将肝素活化后，得到活化肝素溶液，再将高纯度的阿巴帕肽溶液和活化肝素溶液进行偶联，纯化后得到阿巴帕肽偶联物溶液；
(2)封装：将阿巴帕肽偶联物溶液封装在脂质薄膜中，得到阿巴帕肽偶联封装物溶液；
(3)装载：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒装载，得到阿巴帕肽纳米装载物。
2.根据权利要求1所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，步骤(1)中，操作步骤如下：
Q1、活化肝素：取高纯度肝素粉末用生理盐水进行溶解，配制成肝素溶液，取肝素活化剂用生理盐水进行溶解配置成肝素活化剂溶液，将肝素溶液与肝素活化剂溶液混合后，逐滴加入稀盐酸溶液调节pH，反应结束后，加入乙二醇溶液终止反应，再经透析纯化后得到活化肝素溶液；
Q2、偶联反应：取高纯度阿巴帕肽粉末用生理盐水进行溶解，配制成阿巴帕肽溶液，将阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液混合，加入偶联剂溶液进行偶联，用碳酸氢钠调节pH，偶联30～60min后，得到阿巴帕肽偶联反应物，再使用分子筛层析纯化阿巴帕肽偶联反应物，得到阿巴帕肽偶联物，将阿巴帕肽偶联物溶解在生理盐水中，得到阿巴帕肽偶联物溶液，备用。
3.根据权利要求2所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述Q1肝素为低分子量肝素，肝素溶液浓度为1～5mg/mL，肝素活化剂为高碘酸钠，肝素活化剂溶液浓度为1.2～7.5mg/mL，肝素活化剂溶液与肝素溶液的体积比为1.2～1.5倍，调节溶液pH至4.5～5.0，反应温度20-25℃，反应时间1～2h，乙二醇溶液浓度为6～8％，加入乙二醇溶液与肝素活化剂溶液的体积比为1：1，透析袋的截留分子量为5000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h。
4.根据权利要求2所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述Q2阿巴帕肽溶液的浓度为0.2～5mg/mL，阿巴帕肽溶液与活化肝素溶液的体积比为1：1～5，偶联剂溶液为0.5～0.7mg/mL的氰基硼氢化钠，偶联剂溶液与阿巴帕肽溶液的体积比为1：1～3，分子筛层析选用Sephadex G-50。
5.根据权利要求1所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，步骤(2)中，操作步骤如下：
S1、脂质材料预处理：将磷脂和胆固醇按照比例混合均匀后加入乙醇溶液溶解，使用磁力搅拌器轻柔搅拌，溶解均匀后得到脂质溶液；
S2、脂质薄膜的形成：使用旋转蒸发仪在减压条件下蒸发脂质溶液中的溶剂，蒸发结束后，在旋转蒸发仪容器内壁上形成均匀的脂质薄膜，取出即可得到脂质薄膜；
S3、包封：将阿巴帕肽偶联物溶液缓慢加入脂质薄膜中，同时进行超声处理，得到阿巴帕肽偶联封装反应物；
S4、纯化：将阿巴帕肽偶联封装反应物经透析纯化后得到阿巴帕肽偶联封装物，将其重悬于PBS中得到阿巴帕肽偶联封装物溶液。
6.根据权利要求5所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述S1胆固醇与磷脂的比例为1：3～9，乙醇溶液浓度为80～90％，温度为20～25℃；所述S2旋转蒸发仪的旋转速度为20～50rpm，减压抽真空至20～50mmHg，温度为30～34℃，蒸发时间为6～16h；所述S3将阿巴帕肽偶联物溶液使用注射器或滴管滴加到脂质薄膜上，超声的频率为20～100kHz，温度为4～20℃；所述S4透析袋的截留分子量为8000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间16～28h。
7.根据权利要求1所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，步骤(3)中，操作步骤如下：
M1、纳米颗粒制备：将纳米颗粒溶解在丙酮中，通过搅拌使其完全溶解，形成均匀的纳米颗粒溶液；将纳米颗粒溶液缓慢滴加到吐温20的水相中，同时用磁力搅拌器进行高速搅拌，得到纳米颗粒乳化液，将纳米颗粒乳化液置于通风橱中挥发，结束后用生理盐水洗涤，并用生理盐水重悬，得到纳米颗粒重悬液；
M2、混合：将阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒重悬液混合，并进行超声处理，得到阿巴帕肽纳米装载反应物；
M3、纯化阿巴帕肽纳米装载反应物：将阿巴帕肽纳米装载反应物透析纯化后得到阿巴帕肽纳米装载物。
8.根据权利要求7所述一种提升阿巴帕肽半衰期的方法，其特征在于，所述M1纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，纳米颗粒溶液浓度为5～15mg/mL，吐温20在水相的终浓度为0.1～5％，磁力搅拌器的转速为500～2000rpm，用生理盐水洗涤6～10次；所述M2纳米颗粒为乳酸-羟基乙酸共聚物，阿巴帕肽偶联封装物溶液与纳米颗粒溶液的体积比为1：10～15，控制混合温度为25～40℃，超声频率为20～50kHz，时间为30～120min；所述M3透析袋的截留分子量为12000Da，透析液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液，透析时间为16～28h。
9.根据权利要求1～8任一项所述的提升阿巴帕肽半衰期的方法在治疗骨质疏松症中的用途。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1371993A (zh) * 2002-03-07 2002-10-02 山东大学 一种超氧化物歧化酶结合物及其制备方法
US20190091138A1 (en) * 2015-10-09 2019-03-28 Radius Health, Inc. Formulations of pthrp analogues, transdermal patches thereof, and uses thereof
CN113453704A (zh) * 2019-02-28 2021-09-28 雷迪厄斯健康公司 阿巴帕肽的透皮递送系统及其使用方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1371993A (zh) * 2002-03-07 2002-10-02 山东大学 一种超氧化物歧化酶结合物及其制备方法
US20190091138A1 (en) * 2015-10-09 2019-03-28 Radius Health, Inc. Formulations of pthrp analogues, transdermal patches thereof, and uses thereof
CN113453704A (zh) * 2019-02-28 2021-09-28 雷迪厄斯健康公司 阿巴帕肽的透皮递送系统及其使用方法

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Applicant after: Nanjing lingnuo Biomedical Technology Research Institute Co.,Ltd.

Address before: A1, 4th Floor, Building 5, No. 199 Wenfang Road, Jiangning District, Nanjing City, Jiangsu Province, 211100 (Jiangning High tech Park)

Applicant before: Nanjing lingnuo Biomedical Technology Research Institute Co.,Ltd.

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