CN112716936A - 一种葛根素纳米粒的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种葛根素纳米粒的制备方法，葛根素用乙醇溶液超声溶解；称取唾液酸化壳聚糖，用纯水溶解，调节唾液酸化壳聚糖溶液pH至6.0；精密量取唾液酸化壳聚糖溶液至烧杯中，在磁力搅拌器下搅拌，量取葛根素乙醇溶液和PEG2000溶液，缓慢滴入唾液酸化壳聚糖溶液中，滴加完全后搅拌均匀，搅拌结束后，精密量取三聚磷酸钠溶液，缓慢滴入唾液酸化壳聚糖‑葛根素混合溶液中，全部滴加后继续搅拌一段时间，至体系出现明显的乳光。本发明制备得到的葛根素纳米粒的制备，不仅可有效提高药葛根素的溶解度以及载药稳定性，并且能通过唾液酸靶向血管的炎症组织，增强葛根素在体内的含量以及药效。
Description
技术领域
本发明属于中药靶向制剂技术领域，具体涉及一种葛根素纳米粒的制备方法。
背景技术
葛根素为常用中药葛根的主要药效成分，治疗缺血性脑中风疗效确切，药理作用广泛。多项临床实验显示，葛根素能够有效的降低中风患者的血浆内皮素、同型半胱氨酸、氧化低密度脂蛋白的水平；对肾炎、肾病肾衰模型均有保护作用。具有改善患者神经功能、提高日常生活能力的作用。但由于葛根素为异黄酮碳苷，溶解度低，口服给药绝对生物利用度仅为3 .77％，Caco-2、MDCK细胞转运实验进一步显示，其表观渗透系数Papp仅为1× 10-7，细胞吸收和黏膜渗透性较差。因此为葛根素寻求一种安全性高、顺应性好、能够迅速发挥药效的给药途径，和增加葛根素溶解性和渗透性给药剂型具有重要的临床价值。靶向制剂亦称靶向给药系统，将药物浓集于病变部位，并使药物保持一定浓度在靶部位滞留一定的时间，从而减少用药剂量，在一定程度上可减少药物不良反应的发生，提高药物的安全性和患者用药的顺应性，故靶向制剂在药剂学领域受到广泛的关注。虽然中药靶向制剂也得到广泛的研究，但是尚无葛根素靶向制剂的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种葛根素纳米粒的制备方法，以唾液酸化壳聚糖，三聚磷酸钠为载体材料，包裹葛根素，不仅可有效提高药葛根素的溶解度以及载药稳定性，并且能通过唾液酸靶向血管的炎症组织，增强葛根素在体内的含量以及药效。
为了实现上述目的，本发明采用了下述技术方案。一种葛根素纳米粒的制备方法，以唾液酸化壳聚糖和三聚磷酸钠为载体材料包裹葛根素，得到一种葛根素纳米粒。
具体步骤如下：
S1、精密称取葛根素，用乙醇溶液超声溶解，得到葛根素乙醇溶液；
S2、称取唾液酸化壳聚糖（SA-CS），用纯水溶解，调节唾液酸化壳聚糖溶液pH 至6.0；
S3、精密量取唾液酸化壳聚糖溶液至烧杯中，在磁力搅拌器下搅拌，量取葛根素乙醇溶液和PEG溶液，缓慢滴入唾液酸化壳聚糖溶液中，滴加完全后搅拌均匀，得到唾液酸化壳聚糖-葛根素混合溶液；
S4、搅拌结束后，精密量取三聚磷酸钠（TPP）溶液，缓慢滴入唾液酸化壳聚糖-葛根素混合溶液中，全部滴加后继续搅拌一段时间，至体系出现明显的乳光。
进一步优选，唾液酸化壳聚糖溶液浓度为0.5-3.0 mg/mL，唾液酸化壳聚糖溶液浓度的pH为5-6.5，三聚磷酸钠溶液的浓度为0.50-1.0mg/mL，PEG溶液的质量浓度为5-20%。
进一步优选，步骤S1中乙醇溶液的体积浓度为5%。
进一步优选，步骤S1中，葛根素乙醇溶液的葛根素浓度为2mg/mL。
进一步优选，步骤S2中，唾液酸化壳聚糖（SA-CS）溶液的浓度为2.5mg/mL。
进一步优选，步骤S3中，葛根素与唾液酸化壳聚糖的质量比为2：3。
进一步优选，步骤S3中，所述PEG溶液为5%的PEG2000溶液，加入量为唾液酸化壳聚糖溶液体积的1/6。
进一步优选，步骤S4中，三聚磷酸钠溶液的浓度为0.5 mg/mL 的 TPP 溶液，加入量为唾液酸化壳聚糖溶液体积的1/6。
进一步优选，所述唾液酸化壳聚糖的合成方法为：称取等摩尔质量的唾液酸（SA）、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）置于圆底烧瓶中，加入20mL乙醇超声溶解后，在60℃下搅拌30min活化羧基，然后将20mL已60℃预热的壳聚糖水溶液滴加至上述溶液中，磁力搅拌继续反应24h；反应好的溶液冷却室温后，转移至透析袋中，纯水透析48h， 透析结束后6000r离心10min，收集上清液冻干，既得唾液酸化壳聚糖。
本发明的技术效果：采用离子交联法制备的葛根素纳米粒，以唾液酸化壳聚糖，三聚磷酸钠为载体材料，包裹葛根素，通过两种载体之间的交联作用形成纳米粒的结构，使制备的壳聚糖葛根素纳米粒具有主动靶向炎症部位的效用，达到增加疗效的作用。血管损伤时，特定炎症因子的表达，为血管靶向纳米粒的主动靶向提供了特异性与可行性。唾液酸化NPs（SA-NPs），能够靶向发炎的血管内皮细胞上表达的SA和E-选择素受体，被发炎的血管内皮细胞特异性内化，靶向治疗。本发明制备得到的葛根素纳米粒，不仅可有效提高药葛根素的溶解度以及载药稳定性，并且能通过唾液酸靶向血管的炎症组织，增强葛根素在体内的含量以及药效。
附图说明
图1是本发明所得唾液酸化壳聚糖核磁共振氢谱图。
图2是本发明所得唾液酸化壳聚糖红外谱图。
图3是空白组Maestro活体成像结果（4，6，12h小鼠的背部与腹部均相同）。
图4是未靶向组Maestro活体成像结果。
图5是靶向组Maestro活体成像结果。
具体实施方式
下面结合实施例进一步详细阐明本发明。
实施例1
唾液酸化壳聚糖的合成
精密称取等摩尔质量的唾液酸（SA）、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）置于100mL圆底烧瓶中，加入20mL乙醇超声溶解后，在60℃下搅拌30min活化羧基，然后将20mL已60℃预热的壳聚糖水溶液滴加至上述溶液中，磁力搅拌继续反应24h。反应好的溶液冷却室温后，转移至透析袋（MWCO3.5kDa）中，纯水透析48h， 透析结束后6000r离心10min，收集上清液冻干，既得唾液酸化壳聚糖辅料。如图1和图2所示，采用核磁共振和红外光谱技术对合成产物的结构进行分析确认，结果显示SA-CS辅料已合成成功。
葛根素纳米粒的制备
采用单因素考察与中心复合设计对纳米粒的制备过程进行筛选和优化，得出的最佳处方条件进行制备，以粒径、电位、包封率、载药量为指标。采用离子交联法制备葛根素纳米粒，精密称取葛根素10 mg，用5%的乙醇溶液超声溶解，称取100mg实验室自制SA-CS用纯水溶解，配成浓度为2.5mg/mL，用 1%的稀盐酸和饱和氢氧化钠调节SA-CS pH 至6.0，精密量取SA-CS溶液6mL至烧杯中，在磁力搅拌器下搅拌，精密量取 5 mL葛根素乙醇溶液，1mL5%的PEG2000溶液，缓慢滴入SA-CS溶液中，滴加完全后搅拌 30 min，搅拌结束后，精密量取0.5 mg/mL 的 TPP 溶液1mL，缓慢滴入葛根素和SA-CS的混合溶液中，全部滴加后继续搅拌30min，至体系出现明显的乳光。
根据单因素考察与中心复合设计结果（应用Design-Expert 8.0.6软件进行模拟得到的结果），得出的最佳处方条件进行制备，得出： SA-CS浓度为2.5 mg/mL，SA-CS的pH为6.05，TPP浓度为0.50mg/mL，PEG的浓度为5%，为了方便实验操作，将最优处方和工艺定为SA-CS浓度为2.5 mg/mL，SA-CS的pH为6.00，TPP浓度为0.50mg/mL，PEG的浓度为5%。按照优化后处方和工艺进行3次重复实验，粒径、电位、包封率、载药量四个指标的预测值与实测值的RSD分别为0.21%、0. 23%、0.12%、0.62%，表明相对于预测值而言，实测值与其并无显著性差异，即建立的回归方程预测性良好。结果见表2.
葛根素纳米粒靶向应用
根据唾液酸靶向修饰的药效学研究，选择了小鼠急性肾损伤病理模型对所制备的葛根素纳米粒进行靶向药效研究。采用腹腔注射脂多糖诱发小鼠急性肾损伤，荧光染料吲哚菁绿（ICG）对纳米粒进行追踪。给予急性肾损伤小鼠葛根素纳米粒（含唾液酸）和葛根素纳米粒（无唾液酸）。利用Maestro活体成像在不同的时间点进行活体成像，结果如图3-图5所示，空白组为给药生理盐水，未靶向组给药葛根素纳米粒（无唾液酸），靶向组给药葛根素纳米粒（含唾液酸），靶向结果显示，葛根素纳米粒（含唾液酸）能够很好地靶向分布于炎症损伤部位，对比空白组和未用唾液酸进行靶向修饰的纳米粒，效果显著。
Claims (10)
1.一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，以唾液酸化壳聚糖和三聚磷酸钠为载体材料包裹葛根素，得到葛根素纳米粒。
2.根据权利要求1所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤如下：
S1、精密称取葛根素，用乙醇溶液超声溶解，得到葛根素乙醇溶液；
S2、称取唾液酸化壳聚糖，用纯水溶解，调节唾液酸化壳聚糖溶液pH 至6.0；
S3、精密量取唾液酸化壳聚糖溶液至烧杯中，在磁力搅拌器下搅拌，量取葛根素乙醇溶液和PEG溶液，缓慢滴入唾液酸化壳聚糖溶液中，滴加完全后搅拌均匀，得到唾液酸化壳聚糖-葛根素混合溶液；
S4、搅拌结束后，精密量取三聚磷酸钠溶液，缓慢滴入唾液酸化壳聚糖-葛根素混合溶液中，全部滴加后继续搅拌一段时间，至体系出现明显的乳光。
3.根据权利要求2所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，唾液酸化壳聚糖溶液浓度为0.5-3.0 mg/mL，唾液酸化壳聚糖溶液浓度的pH为5-6.5，三聚磷酸钠溶液的浓度为0.50-1.0mg/mL，PEG溶液的质量浓度为5-20%。
4.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤S1中乙醇溶液的体积浓度为5%。
5.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤S1中，葛根素乙醇溶液的葛根素浓度为2mg/mL。
6.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤S2中，唾液酸化壳聚糖溶液的浓度为2.5mg/mL。
7.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤S3中，葛根素与唾液酸化壳聚糖的质量比为2：3。
8.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述PEG溶液为5%的PEG2000溶液，加入量为唾液酸化壳聚糖溶液体积的1/6。
9.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，步骤S4中，三聚磷酸钠溶液的浓度为0.5 mg/mL 的 TPP 溶液，加入量为唾液酸化壳聚糖溶液体积的1/6。
10.根据权利要求3所述的一种葛根素纳米粒的制备方法，其特征在于，所述唾液酸化壳聚糖的合成方法为：称取等摩尔质量的唾液酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺置于圆底烧瓶中，加入20mL乙醇超声溶解后，在60℃下搅拌30min活化羧基，然后将20mL已60℃预热的壳聚糖水溶液滴加至上述溶液中，磁力搅拌继续反应24h；反应好的溶液冷却室温后，转移至透析袋中，纯水透析48h， 透析结束后6000r离心10min，收集上清液冻干，既得唾液酸化壳聚糖。
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