CN118652798A - 一种助睡眠益生菌羊乳粉及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种助睡眠益生菌羊乳粉及其制备方法,以山羊乳为原料,将山羊乳灭菌后冷却,接入产助睡眠功能因子——γ‑氨基丁酸的发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6,已于2023年9月7日保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M20231642,搅拌均匀后于恒温发酵,无需添加γ‑氨基丁酸的前体物质谷氨酸或者谷氨酸钠等,发酵结束即得含γ‑氨基丁酸的益生菌发酵山羊乳,再将其经真空低温喷雾干燥,即得可以助睡眠的功能性益生菌山羊乳粉。本发明制备的助睡眠益生菌羊乳粉富含γ‑氨基丁酸和益生菌,具有助睡眠以及调节肠道菌群平衡的双重功能。
Description
技术领域
本发明属于发酵工程技术领域,具体属于一种利用发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6发酵山羊乳后经喷雾干燥获得的助睡眠益生菌羊乳粉及其制备方法。
背景技术
睡眠作为一种对人体健康至关重要的生理活动,在人类一生中约占据了1/3的时间。睡眠扮演着协助大脑神经系统储存与恢复能量、加强神经元连接的关键角色,有助于提高学习和记忆力。随着失眠患者数量逐渐增加并呈现年轻化趋势,消费者对助眠产品的需求呈现急剧上升。目前市售药物主要以苯二氮卓类药物为代表的镇定催眠类药物为主,其虽然具有效,但是长期服用,会带来耐药性和成瘾性等副作用,因此,寻求并开发助睡眠的食品,通过食疗解决失眠的问题显得尤为迫切与必要。
褪黑素是保健食品中常用的助睡眠成分,其是由哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素,能够使一种产生黑色素的细胞发亮,因而命名为褪黑素。即褪黑素是让人皮肤变白、延缓衰老的起美容作用的激素药物,其能改善睡眠,但存在低体温、释放过多泌乳激素导致不孕以及降低男性生理欲望等。
γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid,GABA)是一种天然活性成分,也是非蛋白质功能性氨基酸,是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经传达物质,具有安神,调解激素分泌,改善脂质代谢,降血压等生物学功能,因此进行富含γ-氨基丁酸食品的研究与开发是通过食疗解决失眠的必要手段
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题,本发明提供一种助睡眠益生菌羊乳粉及其制备方法,以山羊乳为原料,采用可用于食品的菌种——发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6发酵,将山羊乳中自身的谷氨酸以及蛋白质分解为产生的谷氨酸转化为γ-氨基丁酸,并将发酵后的山羊乳通过低温喷雾干燥制备获得了助睡眠益生菌羊乳粉。
为实现上述目的,本发明提供了如下方案:一种发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6,保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M20231642。
本发明还提供一种发酵粘液乳杆菌KD6在治疗失眠疾病中的应用,发酵粘液乳杆菌KD6将包含谷氨酸或谷氨酸钠的底物中的谷氨酸或谷氨酸钠转化为γ-氨基丁酸。
进一步的,发酵粘液乳杆菌KD6将包含谷氨酸或谷氨酸钠的食品中的谷氨酸或谷氨酸钠转化为γ-氨基丁酸。
进一步的,所述食品为山羊乳。
本发明还提供一种助睡眠益生菌发酵羊乳,在预处理后的山羊乳中加入发酵粘液乳杆菌KD6的冻干菌粉,于34℃~43℃恒温发酵20h~28h,得到助睡眠益生菌发酵羊乳。
进一步的,发酵粘液乳杆菌KD6冻干菌粉的添加量为0.01%~0.05%,得到助睡眠益生菌发酵羊乳中的γ-氨基丁酸含量为0.488g/L~0.633g/L,益生菌活菌数为2.32×108CFU/mL~4.12×108CFU/mL,pH为3.56~4.59。
本发明还提供一种助睡眠益生菌发酵羊乳的制备方法,将山羊乳于90℃~95℃灭菌5min~10min后冷却至36℃~40℃,然后加入0.01%~0.05%的发酵粘液乳杆菌KD6的冻干菌粉,于34℃~43℃恒温发酵20h~28h,得到助睡眠益生菌发酵羊乳。
本发明还提供一种助睡眠益生菌发酵羊乳粉,将上述助睡眠益生菌发酵羊乳或上述制备方法制备的助睡眠益生菌发酵羊乳进行真空低温喷雾干燥,得到助睡眠益生菌发酵羊乳粉。
进一步的,助睡眠益生菌发酵羊乳粉的γ-氨基丁酸含量为3.561g/kg~4.648g/kg,益生菌活菌数为1.15×108CFU/g~2.50×108CFU/g。
进一步的,所述真空低温喷雾干燥的条件为进风温度65℃~75℃,进料蠕动泵开度为30%~50%,真空负压为0.03Ma~0.04Ma。
本发明公开了以下技术效果:
本发明提供一种发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6,保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M20231642,该发酵粘液乳杆菌KD6可以将包含谷氨酸或谷氨酸钠的底物中的谷氨酸或谷氨酸钠转化为γ-氨基丁酸,从而可以制备具有γ-氨基丁酸的助睡眠食品。
本发明提供一种助睡眠益生菌发酵羊乳,与一般助睡眠食品直接添加γ-氨基丁酸的方法不同,本发明利用发酵粘液乳杆菌KD6发酵羊乳的方式将γ-氨基丁酸引入羊乳中,发酵粘液乳杆菌KD6能将羊乳中的游离谷氨酸和蛋白质水解生成的谷氨酸转化为γ-氨基丁酸,从而增加了羊乳的助睡眠功能。同时,通过发酵粘液乳杆菌KD6的发酵作用,产生的乳酸等代谢产物有助于降低羊乳的膻味,使其在感官评价上更加优良。
另外,本发明采用了低温喷雾干燥技术将助睡眠益生菌发酵羊乳制备成助睡眠益生菌发酵羊乳粉,在低温喷雾干燥可以保持羊乳粉中较高的活菌数。制得的羊乳粉每克所含的活菌数高达1.0×108CFU/g。值得一提的是,在制备过程中没有添加益生菌抗热保护剂或其他助剂,使得配料表更加简单,更容易为消费者所接受。总的来说,由本发明制备的助睡眠益生菌羊乳粉富含γ-氨基丁酸和益生菌,具有助睡眠以及调节肠道菌群平衡的双重功能。
附图说明
图1发酵粘液乳杆菌KD6的菌体和菌落形态;
图2发酵粘液乳杆菌KD6和大肠杆菌的溶血性;
图3发酵粘液乳杆菌KD6抗生素敏感性;
图4发酵粘液乳杆菌KD6对酸的耐受性;
图5发酵粘液乳杆菌KD6对胆盐的耐受性;
图6发酵粘液乳杆菌KD6对氯化钠的耐受性;
图7发酵粘液乳杆菌KD6对羊乳发酵产γ-氨基丁酸的影响;
图8接种量、温度和时间对发酵粘液乳杆菌KD6发酵羊乳产γ-氨基丁酸的影响。
具体实施方式
为了进一步理解本发明,下面结合附图和实施例对本发明进行描述,这些描述只是进一步解释本发明的特征和优点,并非用于限制本发明的权利要求。
实施例1本发明发酵粘液乳杆菌KD6的分离、鉴定及益生特性研究
1、发酵粘液乳杆菌KD6分离
将乳开菲尔粒按3%接种于已灭菌冷却的山羊乳中,室温发酵24h后以其为样品,经系列稀释后采用平板涂布法,从中分离出的乳酸菌30株,又经反复初筛和复筛,获得一株产γ氨基丁酸能力强的乳杆菌。
2、发酵粘液乳杆菌KD6的鉴定
采用16S rDNA对菌株进行菌种鉴定。对目的片段进行扩增和纯化后,根据16SrDNA部分基因片段的同源性分析对这菌株进行表征,将测得序列与NCBI数据库中的碱基序列进行比对和分析,证实该菌株为发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum),其碱基对序列如下:
CCGAGGAAGGGCGGACGGGTGAATTACCAGTAGGTAACCTGGCCCGAAGCGGGGGGCTACCACCGGAAACCAATTGTAATTCCGCATAACAACGTTGTTCCCCAGAGTCCGAGTTAAAAAATGGGTTTTGGCTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCTCACCAAGGCGATGATGCATAGCCGACTTGAGAGGGTAATCGGCCACAATGGGACTGAGACACGGCCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACATATATGAGAGTAACTGTTCATACATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGTGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGAAAACTTGAGTGCAGAAGAGGGTAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGACTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTGCGCCAATCTTAGAGATAGGGCGTTTCCTTCGGGAACGCAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTATTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAGATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGGGCAAGCAAATCTCTTAAAACCGTTCTCAGTTCGGACTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCAGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGG
将该菌株命名为发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6,该发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6菌株已于2023年09月07日保藏于中国典型培养物保藏中心,湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学,保藏号为CCTCC NO:M20231642。
实施例2发酵粘液乳杆菌KD6的特性研究
1.菌体及菌落形态观察
将发酵粘液乳杆菌KD6按1%的接种量接入MRS肉汤于37℃恒温培养24后取样进行菌体和菌落形态观察,菌体采用甲苯胺蓝染色后显微镜观察,菌落形态采用稀释涂布平板法,菌体及菌落形态如图1所示。
由图1可知,发酵粘液乳杆菌KD6为短杆状,部分菌体弯曲,无分枝无芽孢,菌体两端多呈钝圆形;在MRS琼脂上的菌落凸起呈圆形,颜色为乳白色,外观光滑、湿润,边缘整齐,易挑起,均符合乳酸菌的菌落形态特征。
2.益生特性比较
比较发酵粘液乳杆菌KD6菌体与已公开的植物乳植杆菌7830、鼠李糖乳酪杆菌L20这3株益生菌的溶血性、抗生素敏感性、对酸、胆盐及氯化钠的耐受性等特性。结果见图2~图6:
如图2所示,接种溶血性大肠杆菌的哥伦比亚血琼脂平板上均观察到明显的透明光晕,即为β-溶血,而接种3株益生菌的哥伦比亚血琼脂平板上均未观察到溶血现象,表明这3株菌均无溶血性,即均为安全菌株,溶血性的缺失确保了菌株的安全性质,被作为益生菌菌株的筛选标准之一。
如图3所示,这3株益生菌普遍对青霉素敏感,抑菌圈范围在31.26~44.38mm;对环丙沙星、链霉素和万古霉素耐药。但不同菌株耐药性仍呈现较大区别,其中对于环丙沙星(CIP),KD5的敏感性显著高于其他菌株(p<0.05),抑菌圈为10.71mm,而其他菌种普遍耐药;对于庆大霉素(GM),KD11敏感(p<0.05),抑菌圈为24.72mm;对于四环素(TET),KD5敏感(p<0.05),抑菌圈为28.71mm;对于克林霉素(CC),KD5敏感(p<0.05),抑菌圈为27.31mm;对于头孢曲松(CTR),KD11敏感(p<0.05)且显著高于其他菌株,抑菌圈为44.38mm;对于氯霉素(C),KD11敏感(p<0.05),抑菌圈为36.38mm。
张灼阳等研究多株乳酸菌的抗生素敏感性,发现试验的大部分乳酸菌对链霉素、万古霉素的耐药性是先天固有的,且这种耐药性一般不会转移传递给致病菌。Guo等对分离自传统乳制品的保加利亚乳杆菌进行耐药性研究,结果显示所有保加利亚乳杆菌对庆大霉素、克林霉素、四环素、氯霉素表现为敏感,而对环丙沙星、链霉素和万古霉素产生不同的抗性,这与本发明的结论一致。
耐酸性是选择益生菌菌株的重要标准。人体胃液的pH值处于不断变化的过程中,通常为3.0左右,在空腹情况下可达1.8。益生菌能顺利通过胃液极端的酸性环境,才有可能在人体内发挥积极的益生作用。3株菌耐酸性结果见图4。
在图4中,益生菌在酸性环境中生长都受到了抑制。随着pH的降低,其抑制作用更加明显。当pH降为5时,3株益生菌均表现出了较强的耐受能力,普遍符合“S”型微生物生长规律,发酵24h最终OD600nm值均超过2.0;当pH降为4时,3株益生菌的耐受能力差别较小,OD600nm值范围在1.663~2.122之间,耐酸能力排名:KD6>7830>L20,其中KD6的生长曲线影响较小,表现出较强的耐酸能力;当pH降为3时,3株菌均生长缓慢。陈骏飞等从泡菜中分离出6株乳酸菌进行耐酸性测定,结果表明所有菌株在pH值为5.5时OD600nm值最大,pH≤4时几乎没有菌株生长,与之相比,本发明中的3株菌耐酸性整体较强,可能是由于泡菜中分离出的异型发酵乳酸菌相比同型发酵乳酸菌其耐酸性较差。研究指出,不同来源的菌株对人体消化道的耐受度不同,益生菌的作用具有菌株特异性。Aiba等报道了1株从人体胃液中分离得到的约氏乳杆菌No.1088,其能在pH 1.0的环境中处理2h仍保持10%的存活率。
食物在经过胃液的处理后,进入十二指肠并与具有抑菌作用的胆盐充分接触,胆盐可通过破坏细胞膜的完整度造成菌株死亡。因此,益生菌对人体肠道中高浓度胆盐的耐受能力被作为筛选益生菌的重要指标,三株均对胆盐的耐受性结果见图5。
由图5可知,随着胆盐浓度的增加,菌体生长所受影响越大。在胆盐浓度为0.1%时,OD600nm值范围在0.271~1.936之间,其中KD6表现出较强的胆盐耐受能力,培养24h最终OD600nm值为1.936。7830在前期(12h之前)表现出一定的胆盐耐受性,但随着处理时间的延长,其生长趋势逐渐减缓;在胆盐浓度为0.2%时,OD600nm值范围在0.221~0.661之间,胆盐耐受能力排名:KD6>7830>L20,表明KD6在较高浓度胆盐中仍具有良好的耐受性;研究表明,0.3%胆盐是健康成年男性肠道最大浓度,一般食物通过需要1~4h,在此浓度下处理12h,3株益生菌都表现出了一定耐受性,整体呈现缓慢的增长趋势,KD6培养24h最终OD600nm值为0.459。Reuben等指出具有益生菌潜力的乳酸菌其胆盐耐受浓度需达到0.3%,本发明中的3株菌均能达到要求。
益生菌进入人体需要经过胃部及小肠最终定植于大肠中,才能正在发挥其益生作用,各种不同渗透压也是菌种需要耐受的关键因素之一。在MRS肉汤中添加不同浓度的氯化钠,其对三株菌生长影响的结果如图6所示。
武亚婷等从自然发酵的辣椒酱中筛选出3株渗透压耐受性较好的植物乳杆菌,其最大可耐受至7% NaCl浓度。相比之下,本发明中的7830的渗透压耐受性更强。但有研究指出,益生菌的渗透压耐受性是由于其长期所处的环境所造成,因此益生菌能够适应平稳的渗透压变化,但渗透压的突然增大或减少会对其生长造成较大抑制,甚至导致死亡。
由图6知,菌株的OD600nm值随着NaCl含量的增加而减少。当NaCl质量分数为3%时,乳酸菌的生长基本不受影响,OD600nm值范围在1.727~2.272之间,其中KD6的耐酸性显著高于其他菌株(p<0.05)。当NaCl质量分数为6%时,其余菌株的生长受到明显抑制,OD600nm值范围在1.49~1.622之间,但KD6的OD600nm值较高为1.968(p<0.05)。当NaCl质量分数大于6%,乳酸菌生长极为缓慢,仅有7830表现出一定增长趋势(p<0.05),OD600nm值分别为0.965。当NaCl质量分数为12%时,菌株的OD600nm值均低于0.100。
将活化三代的菌株分别以5%的接种量接入山羊乳中,在37℃恒温发酵24h后,分离乳清,利用Berthlot比色法测定GABA含量,得到γ~氨基丁酸浓度在0~1.0μg/mL范围内,标准曲线方程为y=2.0686x+0.0804,回归方程系数R2达0.9968,说明吸光度与γ-氨基丁酸浓度的线性关系良好,在该线性关系范围内,可用于γ-氨基丁酸浓度的测定。3株菌产γ-GABA的结果如图7所示,由图7可知,在山羊乳中不额外添加谷氨酸钠,3株益生菌均转化出了较高浓度的GABA,这是由于益生菌较高活性的谷氨酸脱羧酶,利用山羊乳中的游离谷氨酸或者蛋白质水解产生的谷氨酸转化而形成GABA。在37℃恒温发酵24h,山羊乳中的GABA产量范围在0.1709~0.3718g/L;其中KD6在山羊乳的GABA产量均显著高于其他菌株(P<0.05)。孙世鑫等报告了一株乳酸乳球菌乳酸亚种4043,将其以3%的接种量接种于在含谷氨酸钠2g/L的乳基底物培养基中,在30℃下单菌种发酵48h,GABA产量约0.39g/L。Nejati F等在灭菌炼乳中培养乳酸乳球菌DIBCA1和植物乳杆菌PU11,在37℃下复配发酵48h,GABA的浓度为0.14g/L。对比可知KD6转化制备的GABA能力属于较高水平。
实施例3助睡眠益生菌发酵羊乳及羊乳粉制备
1.发酵条件对发酵粘液乳杆菌KD6发酵山羊乳产GABA的影响
将发酵粘液乳杆菌KD6冻干菌粉作为发酵剂接种于的山羊乳中,研究接种量(0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%,w/v)、发酵温度(31℃、34℃、37℃、40℃、43℃)和发酵时间(20h、22h、24h、26h、28h)对发酵粘液乳杆菌KD6发酵山羊乳产GABA的影响,测定发酵山羊乳的pH值和γ-氨基丁酸产量。基础实验条件为发酵时间20h、发酵温度37℃、接种量0.01%。由图8可知,随着接种量的增大,发酵粘液乳杆菌KD6发酵山羊乳中的γ-氨基丁酸含量先增大后降低,pH逐渐变小,γ-氨基丁酸含量范围为0.546g/L~0.633g/L;随着发酵温度的升高,发酵粘液乳杆菌KD6发酵山羊乳中的γ-氨基丁酸含量先增大后降低至趋于不变,pH快速下降后趋于不变,γ-氨基丁酸含量范围为0.488g/L~0.541g/L;随着发酵时间的延长,发酵粘液乳杆菌KD6发酵山羊乳中的γ-氨基丁酸含量先增大后降低至趋于不变,pH逐渐下降,γ-氨基丁酸含量范围为0.494g/L~0.590g/L;以γ-氨基丁酸含量不低于0.45g/L为目标,可知发酵粘液乳杆菌KD6发酵山羊乳产γ-氨基丁酸的适宜条件为:接种量0.01%~0.05%,温度34℃~43℃,发酵时间20h~28h。
根据发酵条件结果,分别按照发酵条件A为接种量0.03%,37℃培养24h和发酵条件B为接种量0.01%,43℃培养20h,分别获得助睡眠益生菌发酵羊乳A和B两批样品,取样测定,其活菌数分别为4.12×108CFU/mL和2.32×108CFU/mL,其GABA分别为0.626g/L和0.504g/L,然后将其采用真空低温喷雾干燥(真空低温喷雾干燥机,BILON-VSD1500,比朗公司)制备助睡眠益生菌羊乳粉,并以高温喷雾干燥(小型喷雾干燥机,YM-6000Y,上海豫明仪器有限公司)为对照,高温喷雾干燥条件为进风温度170℃,出风85℃,真空低温喷雾干燥分别采用65℃和75℃蠕动泵开度分别为30%~50%,干燥负压为0.03~0.04Mpa,其结果如表1所示:
表1高温和真空低温喷雾干燥对益生菌活菌数及降压肽活性的影响
由表1可知,助睡眠益生菌发酵羊乳A样品和B样品经真空低温喷雾干燥后,制备的助睡眠益生菌羊乳粉中活菌数均高于1.0×108CFU/g,活菌数范围为1.15×108CFU/g~2.50×108CFU/g,益生菌存活率高于45%,存活率范围为49.2%~61.09%,GABA含量均高于3.5g/kg,范围为3.561g/kg~4.648g/kg,而对照高温喷雾干燥组的活菌数范围为1.1×106CFU/g~2.3×106CFU/g,存活率不到1%,且高温喷雾干燥也导致GABA含量下降,因此真空低温喷雾干燥适宜用于助睡眠益生菌羊乳粉的制备。
Claims (10)
1.一种发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)KD6,保藏于中国典型培养物保藏中心,其保藏编号为CCTCC NO:M20231642。
2.权利要求1所述的发酵粘液乳杆菌KD6在治疗失眠疾病中的应用,其特征在于,发酵粘液乳杆菌KD6将包含谷氨酸或谷氨酸钠的底物中的谷氨酸或谷氨酸钠转化为γ-氨基丁酸。
3.权利要求1所述的发酵粘液乳杆菌KD6在助睡眠食品中的应用,其特征在于,发酵粘液乳杆菌KD6将包含谷氨酸或谷氨酸钠的食品中的谷氨酸或谷氨酸钠转化为γ-氨基丁酸。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述食品为山羊乳。
5.一种助睡眠益生菌发酵羊乳,其特征在于,在预处理后的山羊乳中加入权利要求1所述的发酵粘液乳杆菌KD6的冻干菌粉,于34℃~43℃恒温发酵20h~28h,得到助睡眠益生菌发酵羊乳。
6.根据权利要求5所述的一种助睡眠益生菌发酵羊乳,其特征在于,发酵粘液乳杆菌KD6冻干菌粉的添加量为0.01%~0.05%,得到助睡眠益生菌发酵羊乳中的γ-氨基丁酸含量为0.488g/L~0.633g/L,益生菌活菌数为2.32×108CFU/mL~4.12×108CFU/mL,pH为3.56~4.59。
7.一种助睡眠益生菌发酵羊乳的制备方法,其特征在于,将山羊乳于90℃~95℃灭菌5min~10min后冷却至36℃~40℃,然后加入0.01%~0.05%的权利要求1所述的发酵粘液乳杆菌KD6的冻干菌粉,于34℃~43℃恒温发酵20h~28h,得到助睡眠益生菌发酵羊乳。
8.一种助睡眠益生菌发酵羊乳粉,其特征在于,将权利要求5的助睡眠益生菌发酵羊乳或权利要求7中制备的助睡眠益生菌发酵羊乳进行真空低温喷雾干燥,得到助睡眠益生菌发酵羊乳粉。
9.根据权利要求8所述的一种助睡眠益生菌发酵羊乳粉,其特征在于,助睡眠益生菌发酵羊乳粉的γ-氨基丁酸含量为3.561g/kg~4.648g/kg,益生菌活菌数为1.15×108CFU/g~2.50×108CFU/g。
10.根据权利要求8所述的一种助睡眠益生菌发酵羊乳粉,其特征在于,所述真空低温喷雾干燥的条件为进风温度65℃~75℃,进料蠕动泵开度为30%~50%,真空负压为0.03Ma~0.04Ma。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN119351275A (zh) * | 2024-12-20 | 2025-01-24 | 云南农业大学 | 一株产γ-氨基丁酸的发酵粘液乳杆菌及其应用 |
CN119530108A (zh) * | 2025-01-23 | 2025-02-28 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 一种高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及应用 |
CN119351275B (zh) * | 2024-12-20 | 2025-04-08 | 云南农业大学 | 一株产γ-氨基丁酸的发酵粘液乳杆菌及其应用 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102839135A (zh) * | 2012-05-04 | 2012-12-26 | 江南大学 | 一种高产γ-氨基丁酸的发酵乳杆菌及其应用 |
US20200155623A1 (en) * | 2018-11-21 | 2020-05-21 | Grape King Bio Ltd | Lactobacillus Fermentum GKF3, Composition Comprising the Strain and Method for Improving Psychataxia Using the Same |
CN114480213A (zh) * | 2022-03-07 | 2022-05-13 | 广东南芯医疗科技有限公司 | 一株产γ-氨基丁酸的发酵乳杆菌E15及其在制备改善睡眠的药物中的应用 |
CN115820756A (zh) * | 2023-01-15 | 2023-03-21 | 天津小薇生物科技有限公司 | 发酵乳杆菌LF028在产γ-氨基丁酸及其在制备改善睡眠、缓解焦虑产品中的应用 |
KR20230050119A (ko) * | 2021-10-07 | 2023-04-14 | 충북대학교 산학협력단 | 곡물 발효에 적합하며 프로바이오틱 기능이 있는 신규의 리모시락토바실러스 퍼멘텀 mg7011 |
CN116656562A (zh) * | 2023-06-14 | 2023-08-29 | 陕西科技大学 | 一株多功能发酵粘液乳杆菌kd-1及其应用 |
CN116814464A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-09-29 | 广东悦创生物科技有限公司 | 一株发酵粘液乳杆菌jf5及其在制备减脂和助消化食品药品中的应用 |
CN117721033A (zh) * | 2023-10-13 | 2024-03-19 | 广东悦创生物科技有限公司 | 一株发酵粘液乳杆菌ks6及其在制备抗炎和助睡眠食品药品中的应用 |
-
2024
- 2024-06-07 CN CN202410739020.4A patent/CN118652798A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102839135A (zh) * | 2012-05-04 | 2012-12-26 | 江南大学 | 一种高产γ-氨基丁酸的发酵乳杆菌及其应用 |
US20200155623A1 (en) * | 2018-11-21 | 2020-05-21 | Grape King Bio Ltd | Lactobacillus Fermentum GKF3, Composition Comprising the Strain and Method for Improving Psychataxia Using the Same |
KR20230050119A (ko) * | 2021-10-07 | 2023-04-14 | 충북대학교 산학협력단 | 곡물 발효에 적합하며 프로바이오틱 기능이 있는 신규의 리모시락토바실러스 퍼멘텀 mg7011 |
CN114480213A (zh) * | 2022-03-07 | 2022-05-13 | 广东南芯医疗科技有限公司 | 一株产γ-氨基丁酸的发酵乳杆菌E15及其在制备改善睡眠的药物中的应用 |
CN115820756A (zh) * | 2023-01-15 | 2023-03-21 | 天津小薇生物科技有限公司 | 发酵乳杆菌LF028在产γ-氨基丁酸及其在制备改善睡眠、缓解焦虑产品中的应用 |
CN116814464A (zh) * | 2023-03-13 | 2023-09-29 | 广东悦创生物科技有限公司 | 一株发酵粘液乳杆菌jf5及其在制备减脂和助消化食品药品中的应用 |
CN116656562A (zh) * | 2023-06-14 | 2023-08-29 | 陕西科技大学 | 一株多功能发酵粘液乳杆菌kd-1及其应用 |
CN117721033A (zh) * | 2023-10-13 | 2024-03-19 | 广东悦创生物科技有限公司 | 一株发酵粘液乳杆菌ks6及其在制备抗炎和助睡眠食品药品中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
上官文菲等: "响应面法优化发酵乳杆菌产γ-氨基丁酸的培养条件", 中国酿造, vol. 38, no. 12, 25 December 2019 (2019-12-25), pages 87 - 91 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN119351275A (zh) * | 2024-12-20 | 2025-01-24 | 云南农业大学 | 一株产γ-氨基丁酸的发酵粘液乳杆菌及其应用 |
CN119351275B (zh) * | 2024-12-20 | 2025-04-08 | 云南农业大学 | 一株产γ-氨基丁酸的发酵粘液乳杆菌及其应用 |
CN119530108A (zh) * | 2025-01-23 | 2025-02-28 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 一种高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及应用 |
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