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CN118541487A - 一种dsRNA、其应用及制备方法 - Google Patents

一种dsRNA、其应用及制备方法 Download PDF

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CN118541487A
CN118541487A CN202380017490.3A CN202380017490A CN118541487A CN 118541487 A CN118541487 A CN 118541487A CN 202380017490 A CN202380017490 A CN 202380017490A CN 118541487 A CN118541487 A CN 118541487A
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CN
China
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nucleotide
seq
dsrna
antisense strand
modified
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Application number
CN202380017490.3A
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李云飞
林晓燕
张瑱
王艳辉
董玉琼
茅松
周雅琴
黄龙飞
黄燕芬
黄敏印
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Tuojie Biomedical Technology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Tuojie Biomedical Technology Co ltd
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Application filed by Shanghai Tuojie Biomedical Technology Co ltd filed Critical Shanghai Tuojie Biomedical Technology Co ltd
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
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Abstract

提供了一种抑制血管紧张素原(AGT)表达的化学修饰的dsRNA及其制备方法。还提供了包含该dsRNA的药物组合物、载体、细胞、试剂盒，及其在制备用于预防和/或治疗高血压的药物中的应用。

Description

一种dsRNA、其应用及制备方法
本公开要求申请日为2022年01月20日的中国专利申请202210064314.2的优先权，本公开引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本公开涉及一种利用dsRNA降低目的RNA表达以及治疗相关疾病的技术领域，具体地，本公开涉及dsRNA的制备和应用。
背景技术
AGT也被称为SERPINA8或ANHU。AGT由AGT基因编码，主要由肝脏产生，是肾素-血管紧张素系统(RAS)的一种限速底物，也是血管紧张素肽的前体。在血浆中活性肾素的作用下，AGT分裂成血管紧张素I，其随后通过循环和局部表达的血管紧张素-转化酶(ACE)的作用转化成血管紧张素II。而血管紧张素II是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)中最主要的生物活性物质，它通过与血管紧张素II 1型受体(AT1R)的结合，导致动脉血管收缩、肾上腺皮质醛固酮的分泌，因此在机体血压调节中起着关键作用。当血管紧张素II过度产生或AT1R过度刺激，导致RAAS系统功能失调将会引起高血压。众多研究表明AGT基因上的多态现象与机体的血压调控能力密切相关，而在中国汉族人群的关联研究显示AGT M235T位点多态性与原发性高血压(ER)的发生有关。
高血压(Hypertension)是一种世界性常见的心血管疾病，全球患病率高达10％至20％，并可导致脑血管、心脏以及肾脏的并发症，是各种疾病、失调和病症的主要风险因素(如脑卒中、冠心病、慢性肾病、心肌梗塞、心力衰竭、动脉瘤、外周动脉疾病、心脏损伤等其他心血管相关疾病)。目前，治疗高血压的药物主要有五类，包括利尿药、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂以及血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂。尽管可用于治疗高血压的抗压药品种多，但超过三分之二的受试者用一种抗压药不能得到控制并且需要两种或更多种不同类别的抗压药。由于依从性和副作用随着用药增加而增加，这进一步降低了具有受控血压的受试者的数量。
RNA干扰(RNAi)是一种有效的沉默基因表达的方式。据统计，在人体内的疾病相关蛋白中，大约超过80％的蛋白质不能被目前常规的小分子药物以及生物大分子制剂所靶向，属于不可成药蛋白。利用RNA干扰技术，可以根据编码这些蛋白的mRNA，设计合适的dsRNA，特异性靶向目标mRNA并降解目标mRNA，从而达到抑制相关的蛋白生成。因此dsRNA具有非常重要的药物开发前景。然而要实现体内的治疗目的RNA干扰效应，需要向体内特定的细胞递送dsRNA分子。
采用靶向配体缀合dsRNA，利用靶向配体与细胞膜表面的受体分子结构，从 而内吞进入到细胞内，是一种有效的药物递送方式。例如，去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是肝细胞特异性表达的受体，在肝细胞表面具有高丰度，胞内外转换快速的特点。半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺等单糖和多糖分子对ASGPR有高亲和性。
发明内容
第一方面，本公开提供了一种双链核糖核酸(dsRNA)，其包含有义链和反义链，所述有义链和反义链按照5'端到3'端的方向包含连续的核苷酸，其中所述有义链第7、8和9位的核苷酸为2'-氟代修饰的核苷酸，第5位的核苷酸独立地为2'-甲氧基修饰的核苷酸或2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸为2'-甲氧基修饰的核苷酸；所述反义链第2和14位的核苷酸为2'-氟代修饰的核苷酸，第4、6、8、9、10、12、16和18位的核苷酸独立地为2'-甲氧基或2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸为2'-甲氧基修饰的核苷酸；所述反义链中2'-氟代修饰的核苷酸的个数为2-7个；
所述反义链第2位至第8位中的至少一个核苷酸位置处包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中：Y选自O、NH和S；
每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H或C1-C6烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
Q1为Q2为R2；或者Q1为R2，Q2为
其中：
R1选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，q＝1、2或 3；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B是碱基；
所述式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐修饰不是
在一些实施方案中(某些基团或特征的定义如下，未定义的基团或特征同其他任一方案所述，以下简称“在一些实施方案中”)，当X为NH-CO时，R1不是H。
在一些实施方案中，以2’-甲氧基修饰替换式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述反义链第2位至第8位中的至少一个核苷酸为2’-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、4、6、10、12、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、4、6、10、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、4、6、12、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、6、10、12、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、6、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、4、6、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、6、10、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、6、12、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第6、14和16位为2'-氟代修饰 的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、14和16位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些具体的实施方案中，所述反义链5’端起第2、6和14位为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自式(I-1)所示的化学修饰：
其中：Y选自O、NH和S；
每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
每个J1、J2分别独立地为H或C1-C6烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
R1选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，q＝1、2或3；
R2选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、 胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自式(I-2)所示的化学修饰：
其中Y选自O、NH和S；
每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H或C1-C6烷基；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
R1选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，q＝1、2或3；
R2选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基；r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基或异丙基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H或甲基；
R3选自H、OH、F、Cl、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-甲基氨基、-O-乙基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，p＝1或2；
R1选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，q＝1或2；
R2选自H、OH、F、Cl、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-甲基氨基、-O-乙基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，r＝1或2；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基或异丙基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H或甲基；
R3选自H、OH、F、Cl、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧 基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-甲基氨基、-O-乙基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，p＝1或2；
R1选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，q＝1或2；
R2选自H、OH、F、Cl、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-甲基氨基、-O-乙基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，r＝1或2；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O或NH；每个X独立地选自NH-CO、CH2和NH；
n＝0或1；m＝0或1；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H；
R1选自H、甲基和CH2OH；
R2选自H、OH、NH2、甲基和CH2OH；
R3选自H、OH、NH2、甲基和CH2OH；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、 胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O或NH；每个X独立地选自NH-CO、CH2和NH；
n＝0或1；m＝0或1；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H；
R1选自H、甲基和CH2OH；
R2选自H、甲基和CH2OH；
R3选自H、OH、NH2、甲基和CH2OH；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O或NH；
每个X独立地选自CR4(R4’)、NR5和NH-CO，R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H或C1-C6烷基；
n＝0或1；m＝0或1；s＝0或1；
R3选自H、OH、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和(CH2)pR6；R6选自OH、甲氧基和乙氧基，p＝1、2或3；
Q1为Q2为R2；或者Q1为R2，Q2为
R1选自H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和(CH2)qR7；R7选自OH、甲氧基 和乙氧基，q＝1、2或3；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和(CH2)rR8；R8选自OH、甲氧基和乙氧基，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成3-6元环；
B是碱基；
所述式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐修饰不是
在一些实施方案中，X独立地选自CR4(R4’)和NH-CO。
在一些实施方案中，X独立地选自CR4(R4’)。
在一些实施方案中，R3选自H、C1-C6烷基和(CH2)pR6。
在一些实施方案中，R3选自H和C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R1选自H、C1-C6烷基和(CH2)qR7。
在一些实施方案中，R1选自H和C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R2选自H、OH、C1-C6烷基和(CH2)rR8。
在一些实施方案中，R2选自H、C1-C6烷基和(CH2)rR8。
在一些实施方案中，Y为O；
每个X独立地选自CR4(R4’)和NH-CO，R4和R4’分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H或C1-C6烷基；
R3选自H、C1-C6烷基和(CH2)pR6；R6选自OH，p＝1、2或3；
Q1为Q2为R2；或者Q1为R2，Q2为
R1选自H、C1-C6烷基和(CH2)qR7；R7选自OH，q＝1、2或3；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、OH、C1-C6烷基和(CH2)rR8；R8选自OH，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成5-6元环；
B是碱基。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基 吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O；
每个X独立地选自CR4(R4’)，R4和R4’分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H；
R3选自H和C1-C6烷基；
Q1为Q2为R2；或者Q1为R2，Q2为
R1选自H和C1-C6烷基；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、C1-C6烷基和(CH2)rR8；R8选自OH，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成5-6元环；
B是碱基。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O。
在一些实施方案中，X独立地选自CR4(R4’)、NR5和NH-CO，R4、R4’、R5 分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，X独立地选自NH-CO、CH2和NH。在一些实施方案中，X独立地选自NH-CO和CH2。在一些实施方案中，X为CH2。
在一些实施方案中，J2为H或甲基。在一些实施方案中，J2为H。
在一些实施方案中，R3选自H、OH、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和(CH2)pR6，R6选自OH、甲氧基和乙氧基，p＝1或2。在一些实施方案中，R3选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基和(CH2)pR6，R6选自OH，p＝1或2。在一些实施方案中，R3选自H和甲基。
在一些实施方案中，R1选自H、OH、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和(CH2)qR7，R7选自OH，q＝1或2。在一些实施方案中，R1选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基和(CH2)qR7，R7选自OH，q＝1或2。在一些实施方案中，R1选自H和甲基。
在一些实施方案中，R2选自H、OH、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和(CH2)rR8，R8选自OH，r＝1或2。在一些实施方案中，R2选自H、OH、甲基、乙基、正丙基、异丙基和(CH2)rR8，R8选自OH，r＝1或2。在一些实施方案中，R2选自H、甲基和CH2OH。
在一些实施方案中，R1和R2直接相连成5-6元环。在一些实施方案中，R1和R2直接相连形成3-6元环烷基。在一些实施方案中，R1和R2直接相连形成环戊基或环己基。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯中。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯中。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯中。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞 嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯中。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸选自包含式(I’)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸，
其中：Y选自O、NH和S；
每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H或C1-C6烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
Q1’为Q2’为R2；或者Q1’为R2，Q2’为
其中：
R1选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，q＝1、2或3；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B是碱基；
M为O或S；
所述式(I’)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐不是
在一些实施方案中，当X为NH-CO时，R1不是H。
在一些实施方案中，以2’-甲氧基修饰替换式(I’)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述式(I’)所示的化学修饰选自式(I’-1)所示的化学修饰：
其中：Y选自O、NH和S；
每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
每个J1、J2分别独立地为H或C1-C6烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
R1选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，q＝1、2或3；
R2选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，r＝1、2或3；
M为O或S；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I’)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，式(I’)所示的化学修饰选自式(I’-2)所示的化学修饰：
其中，Y选自O、NH和S；
每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H或C1-C6烷基；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
R1选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，q＝1、2或3；
R2选自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基；r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成环；
M为O或S；
B如式(I’)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C3烷基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H或C1-C3烷基；
R3选自H、OH、卤素、NH2、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C6烯基和C2-C6炔基，p＝1、2或3；
R1选自H、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C2-C4烯基、C2-C4炔基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C4烯基和C2-C4炔基，q＝1、2或3；
R2选自H、OH、卤素、NH2、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-烷基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、卤素、甲氧基、乙氧基、N3、C2-C4烯基和C2-C4炔基，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I’)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，每个X独立地选自CR4(R4’)、S、NR5和NH-CO，其中R4、R4’、R5分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基或异丙基；
n＝0、1或2；m＝0、1或2；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H或甲基；
R3选自H、OH、F、Cl、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-甲基氨基、-O-乙基氨基和(CH2)pR6；其中R6选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，p＝1或2；
R1选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基和(CH2)qR7；其中R7选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，q＝1或2；
R2选自H、OH、F、Cl、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、乙烯基、烯丙基、乙炔基、炔丙基、S-CH3、NCH3(CH3)、OCH2CH2OCH3、-O-甲基氨基、-O-乙基氨基和(CH2)rR8；其中R8选自OH、F、Cl、甲氧基、乙氧基、N3、乙烯基、烯丙基、乙炔基和炔丙基，r＝1或2；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I’)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌 呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O或NH；每个X独立地选自NH-CO、CH2和NH；
n＝0或1；m＝0或1；s＝0或1；
每个J1、J2分别独立地为H；
R1选自H、甲基和CH2OH；
R2选自H、甲基和CH2OH；
R3选自H、OH、NH2、甲基和CH2OH；
任选地，R1和R2直接相连成环；
B如式(I’)中所定义。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O或NH；
每个X独立地选自CR4(R4’)、NR5和NH-CO，R4、R4’、R5分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H或C1-C6烷基；
n＝0或1；m＝0或1；s＝0或1；
R3选自H、OH、NH2、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和(CH2)pR6；R6选自OH、甲氧基和乙氧基，p＝1、2或3；
Q1’为Q2’为R2；或者Q1’为R2，Q2’为
R1选自H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和(CH2)qR7；R7选自OH、甲氧基和乙氧基，q＝1、2或3；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、OH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和(CH2)rR8；R8选自OH、甲氧基和乙氧基，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成3-6元环；
M为O或S；
B是碱基；
所述式(I’)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐不是
在一些实施方案中，X独立地选自CR4(R4’)和NH-CO。
在一些实施方案中，X独立地选自CR4(R4’)。
在一些实施方案中，R3选自H、C1-C6烷基和(CH2)pR6。
在一些实施方案中，R3选自H和C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R1选自H、C1-C6烷基和(CH2)qR7。
在一些实施方案中，R1选自H和C1-C6烷基。
在一些实施方案中，R2选自H、OH、C1-C6烷基和(CH2)rR8。
在一些实施方案中，R2选自H、C1-C6烷基和(CH2)rR8。
在一些实施方案中，Y为O；
每个X独立地选自CR4(R4’)和NH-CO，R4和R4’分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H或C1-C6烷基；
R3选自H、C1-C6烷基和(CH2)pR6；R6选自OH，p＝1、2或3；
Q1’为Q2’为R2；或者Q1’为R2，Q2’为
R1选自H、C1-C6烷基和(CH2)qR7；R7选自OH，q＝1、2或3；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、OH、C1-C6烷基和(CH2)rR8；R8选自OH，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成5-6元环；
M为O或S；
B是碱基。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O；
每个X独立地选自CR4(R4’)，R4和R4’分别独立地为H或C1-C6烷基；
J2为H；
R3选自H和C1-C6烷基；
Q1’为Q2’为R2；或者Q1’为R2，Q2’为
R1选自H和C1-C6烷基；
J1为H或C1-C6烷基；
R2选自H、C1-C6烷基和(CH2)rR8；R8选自OH，r＝1、2或3；
任选地，R1和R2直接相连成5-6元环；
M为O或S；
B是碱基。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基 嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，Y为O。
在一些实施方案中，X独立地选自CR4(R4’)、NR5和NH-CO，R4、R4’、R5分别独立地为H、甲基、乙基、正丙基或异丙基。在一些实施方案中，X独立地选自NH-CO、CH2和NH。在一些实施方案中，X独立地选自NH-CO和CH2。在一些实施方案中，X为CH2。
在一些实施方案中，J2为H或甲基。在一些实施方案中，J2为H。
在一些实施方案中，R3选自H、OH、NH2、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和(CH2)pR6，R6选自OH、甲氧基和乙氧基，p＝1或2。在一些实施方案中，R3选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基和(CH2)pR6，R6选自OH，p＝1或2。在一些实施方案中，R3选自H和甲基。
在一些实施方案中，R1选自H、OH、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和(CH2)qR7，R7选自OH，q＝1或2。在一些实施方案中，R1选自H、甲基、乙基、正丙基、异丙基和(CH2)qR7，R7选自OH，q＝1或2。在一些实施方案中，R1选自H和甲基。
在一些实施方案中，R2选自H、OH、甲基、乙基、正丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基和(CH2)rR8，R8选自OH，r＝1或2。在一些实施方案中，R2选自H、OH、甲基、乙基、正丙基、异丙基和(CH2)rR8，R8选自OH，r＝1或2。在一些实施方案中，R2选自H、甲基和CH2OH。
在一些实施方案中，R1和R2直接相连成5-6元环。在一些实施方案中，R1和R2直接相连形成3-6元环烷基。在一些实施方案中，R1和R2直接相连形成环戊基或环己基。
在一些实施方案中，所述式(I’)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：M为O或S；
B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述式(I’)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：M为O或S；
B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述式(I’)所示的化学修饰选自以下任一结构：
其中：M为O或S；
B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述式(I’)所示的化学修饰选自以下任一结构： 以及它们 结构中的腺嘌呤被置换为鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶或胸腺嘧啶的那些。
在一些实施方案中，B选自嘌呤碱基、嘧啶碱基、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、异鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、C2修饰的嘌呤、N8修饰的嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、N6-烷基腺嘌呤、O6-烷基鸟嘌呤、7-脱氮嘌呤、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、异胞嘧啶、假胞嘧啶、尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、C5修饰的嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与所述反义链该位置处核苷酸未被修饰时的碱基相同。
再一方面，本公开提供了一种dsRNA，其包含有义链和反义链：
在一些实施方案中，所述反义链与靶序列至少部分地反向互补；在一些实施方案中，所述反义链与靶序列之间存在不多于5个、不多于4个、不多于3个、不多于2个、不多于1个错配；在一些实施方案中，所述反义链与靶序列完全反向互补。
在一些实施方案中，所述有义链与反义链至少部分地反向互补以形成双链区；在一些实施方案中，所述有义链与反义链之间存在不多于5个、不多于4个、不多于3个、不多于2个、不多于1个错配；在一些实施方案中，所述有义链与反义链完全反向互补。
在一些实施方案中，所述有义链和反义链各自独立地具有16至35个、16至34个、17至34个、17至33个、18至33个、18至32个、18至31个、18至30个、18至29个、18至28个、18至27个、18至26个、18至25个、18至24个、 18至23个、19至25个、19至24个、或19至23个核苷酸(例如19、20、21、22、23个核苷酸)。
在一些实施方案中，所述有义链和反义链长度相同或不同，所述有义链的长度为19-23个核苷酸，所述反义链的长度为19-26个核苷酸。在一些实施方案中，所述有义链和反义链的长度比可以是19/19、19/20、19/21、19/22、19/23、19/24、19/25、19/26、20/19、20/20、20/21、20/22、20/23、20/24、20/25、20/26、21/20、21/21、21/22、21/23、21/24、21/25、21/26、22/20、22/21、22/22、22/23、22/24、22/25、22/26、23/20、23/21、23/22、23/23、23/24、23/25或23/26。在一些实施方案中，所述有义链和反义链的长度比为19/21、21/23或23/25。在一些实施方案中，所述有义链和反义链的长度比为19/21。
在一些实施方案中，所述dsRNA包含一个或两个平端。
在一些实施方案中，所述dsRNA包含具有1至4个未配对核苷酸的突出端，例如1个、2个、3个、4个。
在一些实施方案中，所述dsRNA包含位于所述反义链3’端的突出端。
在一些实施方案中，包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸位于反义链5’区域的第5位、第6位或第7位。
在一些实施方案中，包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸位于反义链5’区域的位于第7位。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐修饰在其5’区域的第5位时，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐修饰在其5’区域的第6位时，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐修饰在其5’区域的第7位时，B选自腺嘌呤、鸟嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、6-二甲基氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶、吲哚、5-硝基吲哚和3-硝基吡咯。
在一些实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第5位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第6位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，所述有义链第5位的核苷酸为2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，所述反义链第7位的核苷酸为2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，所述有义链和反义链包含或为如下式所示的核苷酸序列：
有义链：5’-NaNaNaNaXNaNbNbNbNaNaNaNaNaNaNaNaNaNa-3’；
反义链：5’-Na’Nb’Na’X’Na’X’W’X’X’X’Na’X’Na’Nb’Na’X’Na’X’Na’Na’Na’-3’；
其中，每个X独立地为Na或Nb，每个X’独立地为Na’或Nb’；Na和Na’为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb和Nb’为2'-氟代修饰的核苷酸；
W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸或包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸，在一些实施方案中，W’具有以下的结构：
在一些实施方案中，所述有义链和反义链包含或为如下式所示的核苷酸序列：
有义链：5’-NaNaNaNaNaNaNbNbNbNaNaNaNaNaNaNaNaNaNa-3’；
反义链：5’-Na’Nb’Na’X’Na’X’W’X’X’X’Na’X’Na’Nb’Na’X’Na’X’Na’Na’Na’-3’；
其中，每个X’独立地为Na’或Nb’；Na和Na’为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb和Nb’为2'-氟代修饰的核苷酸；
W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸或包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸，在一些实施方案中W’具有以下的结构：
在一些实施方案中，所述有义链包含如或为如下式所示的核苷酸序列：
5’-NaNaNaNaXNaNbNbNbNaNaNaNaNaNaNaNaNaNa-3’；
其中，X为Na或Nb；Na为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，所述有义链包含或为如下式所示的核苷酸序列：
5’-NaNaNaNaNaNaNbNbNbNaNaNaNaNaNaNaNaNaNa-3’；
其中，Na为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb为2'-氟代修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，所述反义链包含或为如下式所示的核苷酸序列：
5’-Na’Nb’Na’X’Na’X’W’X’X’X’Na’X’Na’Nb’Na’X’Na’X’Na’Na’Na’-3’；
其中，每个X’独立地为Na’或Nb’；Na’为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb’为2'-氟代修饰的核苷酸；
W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸或包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸，在一些实施方案中W’具有以下的结构：
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自：
其中：B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；在一些具体的实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自：
其中：M为O或S；其中：B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶；在一些具体的实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些具体的实施方案中，M为S。一些具体的实施方案中，M为O。
在一些实施方案中，所述反义链包含或为如下式所示的核苷酸序列：
5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Na’W’Nb’Nb’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Na’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；或，
5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Na’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
其中，Na’为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb’为2'-氟代修饰的核苷酸；
W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸或包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸，在一些实施方案中W’具有以下的结构：
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自：
其中：B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；在一些具体的实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自：
其中：M为O或S；其中：B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶；在一些具体的实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些具体的实施方案中，M为S。一些具体的实施方案中，M为O。
在一些实施方案中，所述有义链和/或反义链中至少一个磷酸酯基为具有修饰基团的磷酸酯基，所述修饰基团使得所述dsRNA在生物样品或环境中具有增加的稳定性；在一些实施方案中，所述具有修饰基团的磷酸酯基为硫代磷酸酯基。在一些实施方案中，所述具有修饰基团的磷酸酯基为硫代磷酸二酯基。
在一些实施方案中，所述硫代磷酸二酯基存在于以下位置中的至少一处：
所述有义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
所述有义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
所述反义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
所述反义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
所述反义链的3'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；以及
所述反义链的3'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间。
在一些实施方案中，所述有义链和/或反义链中包括多个硫代磷酸二酯基，所述硫代磷酸二酯基存在于：
所述有义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；和，
所述有义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；和，
所述反义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；和，
所述反义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；和，
所述反义链的3'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；和，
所述反义链的3'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间。
在一些实施方案中，所述有义链包含如下式所示的核苷酸序列：
5’-NmsNmsNmNmNfNmNfNfNfNmNmNmNmNmNmNmNmNmNm-3’，或，
5’-NmsNmsNmNmNmNmNfNfNfNmNmNmNmNmNmNmNmNmNm-3’，
其中，Nm表示2'-甲氧基修饰的任意核苷酸，例如2'-甲氧基修饰的C、G、U、A；Nf表示2'-氟代修饰的任意核苷酸，例如2'-氟代修饰的C、G、U、A；
小写字母s在中间时表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接；小写字母s在3’端第一个时表示与该字母s左侧相邻的一个核苷酸末端为硫代磷酸二酯基。
在一些实施方案中，所述有义链包含如下式所示的核苷酸序列：
5’-NmsNmsNmNmNmNmNfNfNfNmNmNmNmNmNmNmNmNmNm-3’，
其中，Nm表示2'-甲氧基修饰的任意核苷酸，例如2'-甲氧基修饰的C、G、U、A；Nf表示2'-氟代修饰的任意核苷酸，例如2'-氟代修饰的C、G、U、A；
小写字母s在中间时表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接；小写字母s在3’端第一个时表示与该字母s左侧相邻的一个核苷酸末端为硫代磷酸二酯基。
在一些实施方案中，所述反义链包含或为如下式所示的核苷酸序列：
5’-Nm’sNf’sNm’Nf’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nf’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nf’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nf’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nm’W’Nf’Nf’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nf’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nm’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；或，
5’-Nm’sNf’sNm’Nm’Nm’Nm’W’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’Nf’Nm’Nm’Nm’Nm’Nm’sNm’sNm’-3’；
其中，Nm’表示2'-甲氧基修饰的任意核苷酸，例如2'-甲氧基修饰的C、G、U、A；Nf’表示2'-氟代修饰的任意核苷酸，例如2'-氟代修饰的C、G、U、A；
小写字母s在中间时表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接，小写字母s在3’端第一个时表示与该字母s左侧相邻的一个核苷酸末端为硫代磷酸二酯基；
W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸或包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示2'-甲氧基修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，W’表示包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸。
在一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自：
其中：B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；在一些实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
一些实施方案中，式(I)所示的化学修饰选自：
其中：M为O或S；其中：B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶；在一些具体的实施方案中，B与所述反义链在其5’区域的第7位核苷酸未被修饰时的碱基相同。
在一些实施方案中，M为S。在一些具体的实施方案中，M为O。
在一些实施方案中，所述dsRNA抑制血管紧张素原(AGT)的表达。
在一些实施方案中，所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，和/或，
所述反义链包含与SEQ ID NO:2的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少19个连续核苷酸。
在一些实施方案中，所述有义链包含或选自SEQ ID NO:1的核苷酸序列，和/或，所述反义链包含或选自SEQ ID NO:2的核苷酸序列。
在一些实施方案中，所述dsRNA的有义链包含或由SEQ ID NO:3组成，反义链包含或由SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:15中任一的核苷酸序列组成；
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:6的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:7的核苷酸 序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:8的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:9的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:11的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:12的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:14的核苷酸序列；或
有义链包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:15的核苷酸序列。
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:5组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:6组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:7组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:8组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:9组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:10组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:11组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:12组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:13组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:14组成；
有义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:3组成，反义链的核苷酸序列由SEQ ID NO:15组成。
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
包含SEQ ID NO:3所示的有义链和SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:15中任一项所示的反义链。
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
由SEQ ID NO:3组成的有义链和由SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:15中任一项组成的反义链。
本公开中，按照5’-3’方向，
SEQ ID NO:3是
CmsGmsUmUmUmCmUfCfCfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm；
SEQ ID NO:5是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGfAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:6是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGmAmGfAmAfAmCfGmsGmsCm；
SEQ ID NO:7是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGfAmGfAmAfAmCfGmsGmsCm；
SEQ ID NO:8是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGfAmGfAmAfAmCfGmsGmsCm；
SEQ ID NO:9是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:10是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:11是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:12是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGfAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:13是
UmsUfsUmAmGmAm(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAmAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:14是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAmAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:15是
UmsUfsUmAmGmAm(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
其中，Af＝腺嘌呤2'-F核糖核苷(adenine 2'-F ribonucleoside)；Cf＝胞嘧啶2'-F核糖核苷(cytosine 2'-F ribonucleoside)；Uf＝尿嘧啶2'-F核糖核苷(uracil 2'-F ribonucleoside)；Gf＝鸟嘌呤2'-F核糖核苷(guanine 2'-F ribonucleoside)；Am＝腺嘌呤2'-OMe核糖核苷(adenine 2'-OMe ribonucleoside)；Cm＝胞嘧啶2'-OMe核糖核苷(cytosine 2'-OMe ribonucleoside)；Gm＝鸟嘌呤2'-OMe核糖核苷(guanine 2'-OMe ribonucleoside)；Um＝尿嘧啶2'-OMe核糖核苷(uracil 2'-OMe ribonucleoside)；
s表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接；NAG0052’表示(-)hmpNA(C)表示
在一些实施方案中，所述dsRNA还包括缀合的配体，所述配体选自靶向肝脏的靶向配体；在一些实施方案中，所述配体结合脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)；在一些实施方案中，所述配体包括半乳糖簇或半乳糖衍生物簇，所述半乳糖衍生物选自N-乙酰基-半乳糖胺、N-三氟乙酰基半乳糖胺、N-丙酰基半乳糖胺、N-正丁酰基半乳糖胺或N-异丁酰基半乳糖胺、或其组合。
在一些实施方案中，所述dsRNA还包括与其缀合的配体，所述配体为如式(II)所示化合物或其药学上可接受的盐，
其中，L1为C1-C30烷基链、或包含被一个或多个氧、硫、氮原子或C＝O间断的C1-C30烷基链；
R11和R12独立地为化学键、NR16、C＝O或-OC(＝O)-；
Q3为
为单键或双键，且当为单键时，R13独立地为CR17R18、NR16、O或S，当为双键时，R13独立地为CR19或N；
R14独立地为CR19或N；
环A为存在或不存在的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，且当环A存在时，R15独立地为CR19或N，当环A不存在时，R15独立地为CR17R18、NR16或O；
R16和R19独立地为氢、氘、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、SR'、S(＝O)R'、S(＝O)2R'、S(＝O)2NR'(R”)、NR'(R”)、C(＝O)R'、C(＝O)OR'或C(＝O)NR'(R”)，所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-7环烷基、3-12元杂环烷基、6-12元芳基、5-12元杂芳基、SR'、S(＝O)R'、S(＝O)2R'、S(＝O)2NR'(R”)、NR'(R”)、C(＝O)R'、C(＝O)OR'和C(＝O)NR'(R”)中的基团所取代；
R17和R18独立地为氢、氘、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、SR'、S(＝O)R'、S(＝O)2R'、S(＝O)2NR'(R”)、NR'(R”)、C(＝O)R'、C(＝O)OR'或C(＝O)NR'(R”)，所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、羟基、氧代、硝基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-7环烷基、3-12元杂环烷基、6-12元芳基、5-12元杂芳基、SR'、S(＝O)R'、S(＝O)2R'、S(＝O)2NR'(R”)、NR'(R”)、C(＝O)R'、C(＝O)OR'和C(＝O)NR'(R”)中的基团所取代；
R'和R”独立地为氢、氘、羟基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，所述烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、羟基、氧代、硝基和氰基中的取代基所取代；
m1、n1、p1和q1独立地为0、1、2、3或4；
B1为
Rb1、Rb2、Rb3、Rb4、Rb5、Rb6和Rb7独立地为-C(＝O)-、-NHC(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-(CH2)z8-O-或-NHC(＝O)-(CH2)z9-O-；
z1、z2、z3、z4、z5、z6、z7、z8和z9独立地为0-10的整数；
L2为C1-C30烷基链、或包含被一个或多个氧、硫、氮原子或C＝O间断的C1-C30烷基链；
r1为1-10的整数。
在一些实施方案中，L1为C1-C30烷基链、或包含被一个或多个氧、硫、氮原子或C＝O间断的C1-C30烷基链；
R11和R12独立地为化学键、NR16或C＝O；
R16为氢或C1-6烷基；
Q3为
R13为CR17R18、NR16、O或S；
R14为CR19；
R15独立地为CR17R18、NR16或O；
R17至R19独立地为氢、氘或烷基；
m1、p1和q1独立地为0、1、2、3或4；
B1为
Rb5、Rb6和Rb7独立地为-C(＝O)-、-NHC(＝O)-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-(CH2)z8-O-或-NHC(＝O)-(CH2)z9-O-；
z5、z6、z7、z8和z9独立地为0-10的整数；
L2为C1-C30烷基链、或包含被一个或多个氧、硫、氮原子或C＝O间断的C1-C30烷基链；
r1为1-10的整数。
在一些实施方案中，L1为-(CH2)j11-C(＝O)-(CH2)j12-；
R11和R12独立地为化学键、NR16或C＝O；
R16为氢或C1-6烷基；
Q3为
R13为CR17R18或O；
R14为CR19；
R15独立地为CR17R18或O；
R17至R19独立地为氢或烷基；
m1、p1和q1独立地为0或1；
B1为
Rb5、Rb6和Rb7独立地为-C(＝O)-(CH2)z8-O-或-NHC(＝O)-(CH2)z9-O-；
z8和z9独立地为0-10的整数；
L2为-(CH2)j15-(OCH2CH2)1-4-(CH2)j16-或
j15和j16独立地为0-4的整数；
r1为3、4、5或6。
在一些实施方案中，L1可为L3或L3-R110-R111-L3，其中，L3独立地为C1-C12烷基链、-(CH2)j11-C(＝O)-(CH2)j12-或-(CH2)j13-(CH2CH2O)1-4-(CH2)j14-，R110和R111独立地为化学键、-NR112-、-C(＝O)-或-OC(＝O)-，R112为氢或C1-C12烷基，j11、j12、j13和j14独立地为0-10的整数。在一些实施方案中，j11、j12、j13和j14独立地为0-2或4-10的整数。在一些实施方案中，j11、j12、j13和j14独立地为0、1、2、6、7、8、9或10。
在一些实施方案中，L1可为-(CH2)j11-C(＝O)-(CH2)j12-，j11和j12的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，L1可为j12的定义同前任一方案所述，其中，a1端与B1相连，b1端与R11相连。
在一些实施方案中，L1可为 其中，a1端与B1相连，b1端与R11相连。
在一些实施方案中，R11可为化学键且R12可为C＝O。
在一些实施方案中，R11可为化学键且R12可为NR16，R16的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，R11可为化学键且R12可为-OC(＝O)-。
在一些实施方案中，R11可为NR16且R12可为C＝O，R16的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，R1可为NR16且R12可为-OC(＝O)-，R16的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，R12可为NR16且R11可为C＝O，R16的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，R12可为NR16且R11可为-OC(＝O)-，R16的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，R11可为NH且R12可为C＝O。
在一些实施方案中，R12可为NH且R11可为C＝O。
在一些实施方案中，R16可为氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，R16可为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。
在一些实施方案中，R16可为氢。
在一些实施方案中，R17和R18可为氢。
在一些实施方案中，R19可为氢。
在一些实施方案中，环A存在时，环A可为C6-12芳基。
在一些实施方案中，环A可为苯基。
在一些实施方案中，m1可为0或1。
在一些实施方案中，m1可为3。
在一些实施方案中，n1可为0或1。
在一些实施方案中，p1和q1独立地为0或1。
在一些实施方案中，p1＝1且q1＝1。
在一些实施方案中，p1＝1且q1＝0。
在一些实施方案中，p1＝0且q1＝1。
在一些实施方案中，p1＝0且q1＝0。
在一些实施方案中，z1、z2、z3、z4、z5、z6、z7、z8和z9可独立地为0-4的整数。在一些实施方案中，z1、z2、z3、z4、z5、z6、z7、z8和z9可独立地为0、1或2。
在一些实施方案中，B1可为Rb1、Rb2、Rb3和Rb4独立地为-C(＝O)-或-NHC(＝O)-，N原子与L1相连，z1、z2、z3和z4的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，B1可为Rb1、Rb2、Rb3和Rb4独立地为-C(＝O)-或-NHC(＝O)-，N原子与L1相连，Rb1、Rb3和Rb4相同，z1、z2、z3和z4的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，B1可为
在一些实施方案中，B1可为
在一些实施方案中，B1可为Rb5、Rb6和Rb7独立地为-C(＝O)-(CH2)z8-O-或-NHC(＝O)-(CH2)z9-O-，N原子与L1相连，z5、z6、z7、z8和z9的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，B1可为Rb5、Rb6和Rb7独立地为-C(＝O)-(CH2)z8-O-或-NHC(＝O)-(CH2)z9-O-，N原子与L1相连，Rb5、Rb6和Rb7相同，z5、z6、z7、z8和z9的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，B1可为
在一些实施方案中，L2可为L4或L4-R13-R14-L4，其中，L4独立地为C1-C12烷基链或-(CH2)j15-(OCH2CH2)1-4-(CH2)j16-，R13和R14独立地为化学键、-NR115-、-C(＝O)-或-OC(＝O)-，R115独立地为氢或C1-C12烷基，j15和j16独立地为0-10的整数。在一些实施方案中，j15和j16独立地为0-6的整数。在一些实施方案中，j15和j16独立地为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，L2可为-(CH2)j15-(OCH2CH2)1-4-(CH2)j16-，j15和j16的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，L2可为在一些实施方案中，L2可为其中，左侧与O原子相连，右侧与B1相连。
在一些实施方案中，L2可为C1-C12烷基链。
在一些实施方案中，L2可为
在一些实施方案中，L2可为在一些实施方案中，L2可为在一些实施方案中，L2可为在一些实施方案中，L2可为其中，a3端与O原子相连，b3端与B1相连。
在一些实施方案中，L2可为其中，a3端与O原子相连，b3端与B1相连。
在一些实施方案中，r1可为3、4、5或6。在一些实施方案中，r1可为3。
在一些实施方案中，Q3可为在一些实施方案中，Q3可为其中，R13、R14、R15和n1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为其中，R13、R14、R15、p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为 其中，R13、R14、R15、p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为在一些实施方案中，可为在一些实施方案中， 可为p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为 在一些实施方案中，可为 在一些实施方案中，可为 p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为其中，R13、R14、n1、 p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为其中，R13、R14、n1、p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为在一些实施方案中，可为n1、p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，可为n1、p1和q1的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，所述的配体可为以下任一结构或其药学上可接受的盐，
在一些实施方案中，所述的配体可为以下任一结构或其药学上可接受的盐，
在一些实施方案中，所述的配体可为以下结构或其药学上可接受的盐，
在一些实施方案中，可以N-三氟乙酰基半乳糖胺、N-丙酰基半乳糖胺、N-正丁酰基半乳糖胺或N-异丁酰基半乳糖胺替换以上配体中的N-乙酰基-半乳糖胺部分。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰为 B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；
所述配体为如下任一结构或其药学上可接受的盐，
在一些实施方案中，所述有义链和反义链的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰为 B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；
所述配体为如下任一结构或其药学上可接受的盐，
在一些实施方案中，所述有义链和反义链的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，所述式(I)所示的化学修饰为 B选自鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；
所述配体为如下结构或其药学上可接受的盐，
在一些实施方案中，所述有义链和反义链的定义同前任一方案所述。
在一些实施方案中，所述有义链和/或反义链和所述配体共价或非共价连接。
在一些实施方案中，所述有义链的3’端和/或5’端与所述配体缀合。
在一些实施方案中，所述有义链的3’端与所述配体缀合。
在一些实施方案中，所述配体通过磷酸酯基团或硫代磷酸酯基团与所述有义链和/或反义链末端连接。
在一些实施方案中，所述配体通过磷酸二酯基团或硫代磷酸二酯基团与所述有义链和/或反义链末端连接。
在一些实施方案中，所述配体通过磷酸二酯基团与所述有义链和/或反义链末 端连接。
在一些实施方案中，所述配体通过磷酸酯基团或硫代磷酸酯基团与所述有义链和/或反义链末端间接连接。
在一些实施方案中，所述配体通过磷酸酯基团或硫代磷酸酯基团与所述有义链和/或反义链末端直接连接。
在一些实施方案中，所述配体通过磷酸酯基团或硫代磷酸酯基团与所述有义链3’末端直接连接。
在一些实施方案中，所述磷酸酯基团为磷酸一酯基团或磷酸二酯基团。在一些实施方案中，所述磷酸酯基团为磷酸二酯基团。
在一些实施方案中，所述硫代磷酸酯基团为硫代磷酸一酯基团或硫代磷酸二酯基团。在一些实施方案中，所述硫代磷酸酯基团为硫代磷酸二酯基团。
在一些实施方案中，为了促进dsRNA进入细胞，可以在有义链的末端引入胆固醇等亲脂性的基团，亲脂性的基团包括以共价键与小干扰核酸结合，如末端引入胆固醇、脂蛋白、维生素E等，以利于通过由脂质双分子层构成的细胞膜与细胞内的mRNA发生作用。同时，dsRNA也可以进行非共价键修饰，如通过疏水键或离子键结合磷脂分子、多肽、阳离子聚合物等增加稳定性和生物学活性。
在一些实施方案中，所述配体的个数包括但不限于：1、2、3或4个。在一些实施方案中，所述配体的个数为1个。
在一些实施方案中，所述dsRNA的有义链的核苷酸序列包含或由SEQ ID NO:4组成，反义链的核苷酸序列包含或由SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:15中任一的核苷酸序列组成；
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:5的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:6的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:8的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:9的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:10的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:11的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:12的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:14的核苷酸序列；
有义链包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列，反义链包含SEQ ID NO:15的核苷酸序列。
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列组成；
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列组成；或
有义链由SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成，反义链由SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列组成。
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
包含SEQ ID NO:4所示的有义链和SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:15中任一项所示的反义链。
在一些实施方案中，所述dsRNA为以下任一方案：
由SEQ ID NO:4组成的有义链和由SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:15中任一项 组成的反义链。
本公开中，按照5’-3’方向，
SEQ ID NO:4是
CmsGmsUmUmUmCmUfCfCfUmUmGmGmUmCmUmAmAmAm-NAG0052’；
SEQ ID NO:5是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGfAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:6是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGmAmGfAmAfAmCfGmsGmsCm；
SEQ ID NO:7是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGfAmGfAmAfAmCfGmsGmsCm；
SEQ ID NO:8是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGfAmGfAmAfAmCfGmsGmsCm；
SEQ ID NO:9是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:10是
UmsUfsUmAfGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:11是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAfGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:12是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGfAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:13是
UmsUfsUmAmGmAm(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAmAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:14是
UmsUfsUmAmGmAf(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAmAmCmGmsGmsCm；
SEQ ID NO:15是
UmsUfsUmAmGmAm(-)hmpNA(C)CmAmAmGmGmAmGfAmAfAmCmGmsGmsCm。
其中，Af＝腺嘌呤2'-F核糖核苷(adenine 2'-F ribonucleoside)；Cf＝胞嘧啶2'-F核糖核苷(cytosine 2'-F ribonucleoside)；Uf＝尿嘧啶2'-F核糖核苷(uracil 2'-F ribonucleoside)；Gf＝鸟嘌呤2'-F核糖核苷(guanine 2'-F ribonucleoside)；Am＝腺嘌呤2'-OMe核糖核苷(adenine 2'-OMe ribonucleoside)；Cm＝胞嘧啶2'-OMe核糖核苷(cytosine 2'-OMe ribonucleoside)；Gm＝鸟嘌呤2'-OMe核糖核苷(guanine 2'-OMe ribonucleoside)；Um＝尿嘧啶2'-OMe核糖核苷(uracil 2'-OMe ribonucleoside)；
s表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接；NAG0052’表示(-)hmpNA(C)表示
在一些实施方案中，所述dsRNA选自如下结构或其药学上可接受的盐：
其中，Af＝腺嘌呤2'-F核糖核苷(adenine 2'-F ribonucleoside)；Cf＝胞嘧啶2'-F核糖核苷(cytosine 2'-F ribonucleoside)；Uf＝尿嘧啶2'-F核糖核苷(uracil 2'-F ribonucleoside)；Am＝腺嘌呤2'-OMe核糖核苷(adenine 2'-OMe ribonucleoside)；Cm＝胞嘧啶2'-OMe核糖核苷(cytosine 2'-OMe ribonucleoside)；Gf＝鸟嘌呤2'-F核糖核苷(guanine 2'-F ribonucleoside)；Gm＝鸟嘌呤2'-OMe核糖核苷(guanine 2'-OMe ribonucleoside)；Um＝尿嘧啶2'-OMe核糖核苷(uracil 2'-OMe ribonucleoside)。 表示硫代磷酸二酯基，表示磷酸二酯基，NAG0052’表示(-)hmpNA(C)表示
在一些实施方案中，所述药学上可接受的盐可为本领域常规的盐，包括但不限于：钠盐、钾盐、铵盐、胺盐等。
在一些实施方案中，所述dsRNA选自TRD008110、TRD008112、TRD008103、TRD008104、TRD008105、TRD008106、TRD008107、TRD008108、TRD008109、TRD008111、TRD008113中的任一项。
在一些实施方案中，所述dsRNA为TRD008110，其为如下结构：
在一些实施方案中，所述dsRNA为TRD008112，其为如下结构：
其中，Af＝腺嘌呤2'-F核糖核苷(adenine 2'-F ribonucleoside)；Cf＝胞嘧啶2'-F核糖核苷(cytosine 2'-F ribonucleoside)；Uf＝尿嘧啶2'-F核糖核苷(uracil 2'-F ribonucleoside)；Am＝腺嘌呤2'-OMe核糖核苷(adenine 2'-OMe ribonucleoside)；Cm＝胞嘧啶2'-OMe核糖核苷(cytosine 2'-OMe ribonucleoside)；Gf＝鸟嘌呤2'-F核糖核苷(guanine 2'-F ribonucleoside)；Gm＝鸟嘌呤2'-OMe核糖核苷(guanine 2'-OMe ribonucleoside)；Um＝尿嘧啶2'-OMe核糖核苷(uracil 2'-OMe ribonucleoside)。表示硫代磷酸二酯基，表示磷酸二酯基，NAG0052’表示(-)hmpNA(C)表示
另一方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本公开所述的dsRNA。
在一些实施方案中，所述的药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。各种递药系统是已知的并且可以用于本公开的dsRNA或药物组合物，例如封装在脂质体中、微粒、微囊、能够表达该化合物的重组细胞、受体介导的细胞内吞作用、构建核酸作为逆转录病毒或其他载体的一部分。
在一些实施方案中，本公开的dsRNA或药物组合物的给药方式是常规的，可通过局部给药(例如，直接注射或植入)或全身给药，也可通过口服、直肠或胃肠外途径进行给药，所述肠胃外途径包括但不限于皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、透皮给药、吸入给药(如气溶胶)、粘膜给药(如舌下、鼻内给药)、颅内给药等。
在一些实施方案中，本公开提供的dsRNA或药物组合物可以通过注射给予，例如，静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内注射。
在一些实施方案中，本公开提供的dsRNA或药物组合物可被包装在试剂盒中。
本公开中，所述的dsRNA或药物组合物的有效量或有效剂量为约0.001mg/kg体重至约200mg/kg体重、约0.01mg/kg体重至约100mg/kg体重或约0.5mg/kg体重至约50mg/kg体重。
另一方面，本公开提供了一种本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物在制备药物中的应用。
在一些实施方案中，所述的药物可用于预防和/或治疗高血压、心血管疾病或肝源性疾病。在一些实施方案中，所述的药物可用于预防和/或治疗临界性高血压、 原发性高血压、继发性高血压、孤立性收缩期或舒张期高血压、妊娠相关高血压、糖尿病性高血压、顽固性高血压、难治性高血压、阵发性高血压、肾血管性高血压、戈德布拉特氏高血压、低血浆肾素活性或血浆肾素浓度相关的高血压、眼高血压、青光眼、肺动脉高血压、门静脉高血压、系统性静脉高血压、收缩期高血压、不稳定性高血压、高血压性心脏病、高血压性肾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、血管病变、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、肾小球硬化症、主动脉缩窄、主动脉瘤、心室纤维化、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、心脏瓣膜病、中风、肾疾病、肾衰竭、系统性硬化症、宫内发育迟缓(IUGR)、胎儿生长受限、肥胖、肝脂肪变性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)或代谢综合征。
在一些实施方案中，所述的药物可用于预防和/或治疗与AGT基因表达相关的疾病。在一些实施方案中，所述的与AGT基因表达相关的疾病可为高血压、心血管疾病或肝源性疾病。在一些实施方案中，所述的疾病可为临界性高血压、原发性高血压、继发性高血压、孤立性收缩期或舒张期高血压、妊娠相关高血压、糖尿病性高血压、顽固性高血压、难治性高血压、阵发性高血压、肾血管性高血压、戈德布拉特氏高血压、低血浆肾素活性或血浆肾素浓度相关的高血压、眼高血压、青光眼、肺动脉高血压、门静脉高血压、系统性静脉高血压、收缩期高血压、不稳定性高血压、高血压性心脏病、高血压性肾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、血管病变、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、肾小球硬化症、主动脉缩窄、主动脉瘤、心室纤维化、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、心脏瓣膜病、中风、肾疾病、肾衰竭、系统性硬化症、宫内发育迟缓(IUGR)、胎儿生长受限、肥胖、肝脂肪变性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)或代谢综合征。
在一些实施方案中，所述的dsRNA或药物组合物的有效量或有效剂量为约0.001mg/kg体重至约200mg/kg体重、约0.01mg/kg体重至约100mg/kg体重或约0.5mg/kg体重至约50mg/kg体重。
另一方面，本公开提供了一种预防和/或治疗疾病的方法，其包括向受试者给予有效量或有效剂量的本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述的疾病可为高血压、心血管疾病或肝源性疾病。在一些实施方案中，所述的疾病可为高血压、原发性高血压、继发性高血压、孤立性收缩期或舒张期高血压、妊娠相关高血压、糖尿病性高血压、顽固性高血压、难治性高血压、阵发性高血压、肾血管性高血压、戈德布拉特氏高血压、低血浆肾素活性或血浆肾素浓度相关的高血压、眼高血压、青光眼、肺动脉高血压、门静脉高血压、系统性静脉高血压、收缩期高血压、不稳定性高血压、高血压性心 脏病、高血压性肾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、血管病变、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、肾小球硬化症、主动脉缩窄、主动脉瘤、心室纤维化、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、心脏瓣膜病、中风、肾疾病、肾衰竭、系统性硬化症、宫内发育迟缓(IUGR)、胎儿生长受限、肥胖、肝脂肪变性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)或代谢综合征。
在一些实施方案中，所述的疾病可为与AGT基因表达相关的疾病。在一些实施方案中，所述的与AGT基因表达相关的疾病可为高血压、心血管疾病或肝源性疾病。在一些实施方案中，所述的疾病可为临界性高血压、原发性高血压、继发性高血压、孤立性收缩期或舒张期高血压、妊娠相关高血压、糖尿病性高血压、顽固性高血压、难治性高血压、阵发性高血压、肾血管性高血压、戈德布拉特氏高血压、低血浆肾素活性或血浆肾素浓度相关的高血压、眼高血压、青光眼、肺动脉高血压、门静脉高血压、系统性静脉高血压、收缩期高血压、不稳定性高血压、高血压性心脏病、高血压性肾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、血管病变、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、肾小球硬化症、主动脉缩窄、主动脉瘤、心室纤维化、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、心脏瓣膜病、中风、肾疾病、肾衰竭、系统性硬化症、宫内发育迟缓(IUGR)、胎儿生长受限、肥胖、肝脂肪变性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)或代谢综合征。
另一方面，本公开提供了一种用于在体内或在体外沉默细胞中靶基因或其mRNA的方法，其包括将本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物引入该细胞中的步骤。
在一些实施方案中，所述的靶基因为AGT。
另一方面，本公开提供了一种抑制靶基因或其mRNA表达的方法，其包括向受试者给予有效量或有效剂量的本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物。
在一些实施方案中，所述的靶基因为AGT。
本公开的dsRNA或药物组合物可以在细胞、细胞群、组织或受试者等对象中降低靶基因或其mRNA的表达水平，包括：向对象给予治疗有效量的本文所述的dsRNA或药物组合物，从而抑制靶基因或其mRNA在对象中的表达。
在一些实施方案中，所述对象已在先前被鉴定为在靶向的细胞、细胞群、组织或受试者中具有靶基因或其mRNA的病理性上调。
另一方面，本公开提供了一种递送寡核苷酸至肝脏的方法，其包括向受试者给予有效量或有效剂量的本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物。
另一方面，本公开提供了一种RNA干扰(RNAi)试剂，其包含本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物。
另一方面，本公开还提供了一种细胞，其包含本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物。
另一方面，本公开还提供了一种试剂盒，其包含本公开所述的dsRNA或本公开所述的药物组合物。
一些实施方案中，本公开的dsRNA选自siRNA。
本公开中，本公开所述dsRNA或药物组合物当接触到表达靶基因的细胞时，由例如：psiCHECK活性筛选和荧光素酶报告基因检测法，其他如PCR或基于分支DNA(bDNA)的方法、或基于蛋白质的方法，如免疫荧光分析法，例如Western Blot或流式细胞术测定的，本公开所述dsRNA或药物组合物会抑制靶基因的表达至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％。
本公开中，本公开所述dsRNA或药物组合物当接触到表达靶基因的细胞时，由例如：psiCHECK活性筛选和荧光素酶报告基因检测法，其他如PCR或基于分支DNA(bDNA)的方法、或基于蛋白质的方法，如免疫荧光分析法，例如Western Blot或流式细胞术测定的，本公开所述dsRNA或药物组合物引起的靶基因mRNA剩余表达百分比为不高于99％、不高于95％、不高于90％、不高于85％、不高于80％、不高于75％、不高于70％、不高于65％、不高于60％、不高于55％、不高于50％、不高于45％、不高于40％、不高于35％、不高于30％、不高于25％、不高于20％、不高于15％、或不高于10％。
本公开中，本公开所述dsRNA或药物组合物当接触到表达靶基因的细胞时，由例如：psiCHECK活性筛选和荧光素酶报告基因检测法，其他如PCR或基于分支DNA(bDNA)的方法、或基于蛋白质的方法，如免疫荧光分析法，例如Western Blot、或流式细胞术测定的，dsRNA在保持在靶活性的同时，将脱靶活性减少了至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％。
本公开中，本公开所述dsRNA或药物组合物当接触到表达靶基因的细胞时，由例如：psiCHECK活性筛选和荧光素酶报告基因检测法，其他如PCR或基于分支DNA(bDNA)的方法、或基于蛋白质的方法，如免疫荧光分析法，例如Western Blot、或流式细胞术测定的，dsRNA使在靶活性降低至多20％、至多19％、至多15％、至多10％、至多5％或超过1％的同时，将脱靶活性减少了至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％。
本公开中，本公开所述dsRNA或药物组合物当接触到表达靶基因的细胞时，由例如：psiCHECK活性筛选和荧光素酶报告基因检测法，其他如PCR或基于分 支DNA(bDNA)的方法、或基于蛋白质的方法，如免疫荧光分析法，例如Western Blot、或流式细胞术测定的，dsRNA使在靶活性提高至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％的同时，将脱靶活性减少了至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％。
本公开化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本公开设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本公开的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围之内。本公开的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本公开某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本公开所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键可以为或者同时包含两种构型。本公开所述化合物的化学结构中，键并未指定构型，即键的构型可以为E型或Z型，或者同时包含E和Z两种构型。
在本公开的化学结构式中，可以根据本文所述发明范围连接一个或多个任何基团；星号“*”表示手性中心。
在不指明构型的情况下，本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺异构化。内酰胺-内酰亚胺平衡实例是在如下所示的A和B之间。
本公开中的所有化合物可以被画成A型或B型。所有的互变异构形式在本公开的范围内。化合物的命名不排除任何互变异构体。
本公开还包括一些与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(D)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或更高丰度的氘。本公开还包括各种氘化形式的式(I)、式(I’)、式(II)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(I)、式(I’)、式(II)化合物。在制备氘代形式的式(I)、式(I’)、式(II)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
本公开还提供了一种制备dsRNA或药物组合物的方法，其包括：合成本公开所述的dsRNA或药物组合物。
本公开引入WO2022028462A1、PCT/CN2022/103275、PCT/CN2022/132883全文。
术语解释
如本文所用，术语“包含”或“包括”意指包括所述的要素、整数或步骤，但是不排除任意其他要素、整数或步骤。在本文中，当使用术语“包含”或“包括”时，除非另有指明，否则也涵盖由所述及的要素、整数或步骤组成的情形。例如，当提及“包含”某个具体序列时，也旨在涵盖由该具体序列组成的情形。
除另有说明，“任选地”、“任选”、“可选的”或“可选”是指意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如“任选地，R1和R直接相连成环”是指R1和R2直接相连成环可以发生但不必须存在，该说明包括R1和R2直接相连成环的情形和R1和R2不成环的情形。
术语“约”、“大约”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受 误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定(即测量体系的限度)。例如，“约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者，“约”或“基本上包含”可意味着至多20％的范围，例如1％至15％之间、在1％至10％之间、在1％至5％之间、在0.5％至5％之间、在0.5％至1％之间变化，本公开中，数字或数值范围之前有术语“约”的每种情况也包括给定数的实施方案。除非另外说明，否则当具体值在本申请和权利要求中出现时，“约”或“基本上包含”的含义应该假定为在该具体值的可接受误差范围内。
如无特殊说明，本公开的“化合物”、“化学修饰”、“配体”、“dsRNA”、“核酸”和“RNAi”均可独立地以盐、混合盐或非盐(例如游离酸或游离碱)的形式存在。当以盐或混合盐的形式存在时，其可为药学上可接受的盐。
“药学上可接受的盐”可选自无机盐或有机盐，也可包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2,2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、萘二磺酸盐等。这些盐可通过本领域已知的方法制备。
“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。一些实施方案中无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐及镁盐，一些实施方案中为钠盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下的盐：伯胺类、仲胺类及叔胺类，被取代的胺类，包括天然的被取代胺类、环状胺类及碱性离子交换树脂，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。一些实施方案中有机碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因。这些盐可通过本领域已知的方法制备。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，例如包括1至30个碳原子的直链和支链基团(C1-C30烷基)，又例如含有1至6个碳原子的烷基(C1-C6烷基)，又例如1至3个碳原子的烷基(C1-C3烷基)。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异 丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基及其各种支链异构体等。
术语“烯基”是指含有至少一个双键的烃基。烯基的非限制性实例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基或2-丁烯基及其各种支链异构体。
术语“炔基”指含有至少一个三键的烃基。炔基的非限制性实例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基或2-丁炔基及其各种支链异构体。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至6个碳原子，更优选包含5-6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基等；多环环烷基包括螺环、并环和桥环的环烷基。
“杂环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至7个环原子。“杂环烷基”非限制性实例包括： 等等。
所述杂环烷基环可以稠合于芳基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环烷基，其非限制性实例包括：
等。
“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享 毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至12元，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为6至12元，更优选为5元或6元。例如。其非限制性实例包括：咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基(oxazolyl)、异噁唑基(isoxazolyl)、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基、三唑基、吲唑基、苯并咪唑基、等。
所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氰基”指-CN。
术语“氨基”指-NH2。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代”指＝O取代基。
本公开中，“磷酸酯基团”可为磷酸一酯基团、磷酸二酯基团或磷酸三酯基团，优选磷酸二酯基团；“硫代磷酸酯基团”中的“磷酸酯基团”也具有同样的含义。
本公开中，硫代磷酸二酯基是指一个非桥接氧原子被硫原子替代而修饰的磷酸二酯基，可用(M为S原子)互换使用。
“取代”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。当取代基是酮或氧代(即，＝O)时，则原子上有两个(2个)氢被替代。
本公开上下文中，基团中的部分可以替换为能够与相邻核苷酸实现连接的任意基团。
术语“连接”，当表示两个分子之间的联系时，指两个分子通过共价键连接或者两个分子经由非共价键(例如，氢键或离子键)关联，包括直接连接、间接连接。
术语“直接连接”指第一化合物或基团与第二化合物或基团在没有任何间插原子或原子基团的情况下连接。
术语“间接连接”指第一化合物或基团与第二化合物或基团通过中间基团、化合物或分子(例如，连接基团)连接。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何已经被美国食品和药物管理局(FDA)批准对于人类或家畜动物使用可接受的任何助剂、载体、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
如本文所使用的，术语“抑制”，可以与“减少”、“沉默”、“下调”、“阻抑”和其他类似术语交替使用，并且包括任何水平的抑制。抑制可通过这些变量中的一个或多个与对照水平相比的绝对或相对水平的减少来评估。该对照水平可以是本领域中使用的任何类型的对照水平，例如给药前基线水平或从类似的未经处理或经对照(例如仅缓冲液对照或惰性剂对照)处理的受试者、细胞、或样品确定的水平。例如，可以采用mRNA剩余表达量来表征dsRNA对靶基因表达的抑制程度，如mRNA剩余表达量为不高于99％、不高于95％、不高于90％、不高于85％、不高于80％、不高于75％、不高于70％、不高于65％、不高于60％、不高于55％、不高于50％、不高于45％、不高于40％、不高于35％、不高于30％、不高于25％、不高于20％、不高于15％、或不高于10％。靶基因表达的抑制率可以采用Luciferase Assay System检测，分别读取萤火虫(Firefly)化学发光值和海肾(Renilla)化学发光值，计算相对值Ratio＝Ren/Fir，抑制率(％)＝1-(Ratio+dsRNA/Ratioreporter only)*100％；本公开中，剩余mRNA表达量比例(或剩余活性％)＝100％-抑制率(％)。
“有效量”或“有效剂量”包含足以改善或预防医学病症的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
如本文所使用的，“对象”、“患者”、“受试者”或“个体”可互换使用，包括人类或者非人类动物，例如哺乳动物，例如人或猴。
如无特别说明，在本公开上下文中，术语“血管紧张素原”与“AGT”在本文可互换地使用。AGT也被称为SERPINA8和ANHU。AGT包括但不限于人类AGT、食蟹猴AGT、小鼠AGT、大鼠AGT，其氨基酸和完整编码序列、mRNA序列容易利用已公开的数据库取得，例如，GenBank、UniProt、OMIM和猕猴(Macaca)基因组计划网站。
术语“AGT”亦指AGT基因的天然存在的DNA序列变异，如AGT基因中的单核苷酸多态性(SNP)。示例性SNP可在dbSNP数据库中发现。
术语“靶序列”指在AGT基因转录期间所形成的mRNA分子的核苷酸序列的连续部分，包括作为主要转录产物的RNA加工产物的mRNA。所述靶序列中被靶向的部分应当足够长，才能作为iRNA指导的切割(iRNA-directed cleavage)的底物。在一个实施方案中，该靶序列在AGT的蛋白质编码区内。
术语“dsRNA”是指能够进行RNA干扰的双链RNA分子，包含有义链和反义链。
如本文所使用的，有义链(又称SS、SS链或正义链)是指包含与靶mRNA序列相同或基本上相同的序列的链；反义链(又称AS或AS链)是指具有与靶mRNA序列互补的序列的链。
在描述本文所述的dsRNA有义链的上下文中，术语“SEQ ID NO:1的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸序列的至少15个连续核苷酸”旨在表示本文所述的dsRNA有义链包含如与SEQ ID NO:1的至少15个连续核苷酸，或与SEQ ID NO:1的至少15个连续核苷酸相差不超过3个核苷酸序列，任选地，相差不超过2个核苷酸序列，任选地，相差1个核苷酸序列。任选地，本文所述的dsRNA有义链包含SEQ ID NO:1的至少16个连续核苷酸，或与SEQ ID NO:1的至少16个连续核苷酸相差不超过3个核苷酸序列，任选地，相差不超过2个核苷酸序列，任选地，相差1个核苷酸序列；
在描述本文所述的dsRNA反义链的上下文中，术语“与SEQ ID NO:2相差不超过3个核苷酸序列的至少15个连续核苷酸”旨在表示本文所述的SEQ ID NO:2的至少15个连续核苷酸，或与SEQ ID NO:2的至少15个连续核苷酸相差不超过3 个核苷酸序列，任选地，相差不超过2个核苷酸序列，任选地，相差1个核苷酸序列。
如无特别说明，在本公开上下文中，“G”、“C”、“A”、“T”与“U”分别代表核苷酸，其分别包含鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸苷与尿嘧啶的碱基。小写字母m表示该字母m左侧相邻的一个核苷酸为甲氧基修饰的核苷酸；小写字母f表示该字母f左侧相邻的一个核苷酸为氟代修饰的核苷酸；小写字母s表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接。
如本公开所使用的，术语“2'-氟代(2’-F)修饰的核苷酸”指核苷酸的核糖基2'位的羟基被氟取代形成的核苷酸，“非氟代修饰的核苷酸”指核苷酸的核糖基2'位的羟基被非氟基团取代形成的核苷酸或核苷酸类似物。
如本公开所使用的，术语“2'-甲氧基(2’-OMe)修饰的核苷酸”指核糖基的2'-羟基被甲氧基取代而形成的核苷酸。
在本公开的上下文中，一个核苷酸序列与另外一个核苷酸序列存在“核苷酸差异”，是指前者与后者相比，相同位置的核苷酸的碱基种类发生了改变，例如，在后者中一个核苷酸碱基为A时，在前者的相同位置处的对应核苷酸碱基为U、C、G或者T的情况下，认定为两个核苷酸序列之间在该位置处存在核苷酸差异。在一些实施方案中，以无碱基核苷酸或其等同物代替原位置的核苷酸时，也可认为在该位置处产生了核苷酸差异。
如本文所使用的，术语“互补”或“反向互补”一词可互相替代使用，并具有本领域技术人员周知的含义，即，在双链核酸分子中，一条链的碱基与另一条链上的碱基以互补的方式相配对。在DNA中，嘌呤碱基腺嘌呤(A)始终与嘧啶碱基胸腺嘧啶(或者在RNA中为尿嘧啶)相配对；嘌呤碱基鸟嘌呤始终与嘧啶碱基胞嘧啶相配对。每个碱基对都包括一个嘌呤和一个嘧啶。当一条链上的腺嘌呤始终与另一条链上的胸腺嘧啶(或尿嘧啶)配对，以及鸟嘌呤始终与胞嘧啶配对时，两条链被认为是彼此相互补的，以及从其互补链的序列中可以推断出该链的序列。与此相应地，“错配”在本领域中意指在双链核酸中，对应位置上的碱基并未以互补的形式配对存在。
术语“化学修饰”或“修饰”包括核苷酸经化学手段的所有改变，例如化学部分的添加或去除、或以一个化学部分取代另一个化学部分。
术语“碱基”包含任何已知的DNA和RNA碱基、碱基类似物，例如嘌呤或嘧啶，其还包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、次黄苷和天然类似物。碱基类似物还可以是通用碱基。
术语“平端”或“平末端”可互换使用，是指在dsRNA的给定的末端没有非配对的核苷酸或核苷酸类似物，即，没有核苷酸突出。大多数情况下，两个末端都是平末端的dsRNA将在其整个长度范围内是双链的。
本公开提供的dsRNA可以通过本领域常规的制备方法(例如固相合成和液相 合成的方法)得到。其中，固相合成已经有商业化订制服务。可以通过使用具有相应修饰的核苷单体来将修饰的核苷酸基团引入本公开所述的dsRNA中，制备具有相应修饰的核苷单体的方法及将修饰的核苷酸基团引入dsRNA的方法也是本领域技术人员所熟知的。
附图说明
图1为TRD002218、TRD007205在给药后第7天TTR mRNA的表达量。
图2为TRD002218、TRD007205在给药后第28天TTR mRNA的表达量。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制着本公开的范围。本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，则该试剂可自任意分子生物学试剂的供应商以用于分子生物学应用的质量/纯度而获得。
实施例1：化学修饰的制备
1.1合成化合物1-1a和化合物1-1b
将化合物1(500mg,3.42mmol)和三乙胺(Et3N，692mg,6.84mmol,0.95mL)溶于二氯甲烷(DCM，10mL)中，冰浴下滴加4-甲苯磺酰氯(TsCl,717mg,3.76mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，滴加完毕后反应在室温下搅拌过夜，待反应完毕后，用水淬灭，水相用二氯甲烷(15mL)提取三次，合并的有机相先用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤，再用饱和食盐水(20mL)洗涤，随后减压蒸干溶剂得到粗品2(820mg,80％)，直接用于下一步反应。MS m/z：C14H21O5S，[M+H]+理论：301.10；实测：301.2。
将化合物3(239mg,1.22mmol)溶解于二甲基甲酰胺(DMF，10mL)中，冰浴下加入NaH(60％溶解在矿物油中,93mg,2.33mmol)溶液，该反应下搅拌30分钟，然后滴加化合物2(350mg,1.16mmol)，滴加完毕后反应在60℃下搅拌5小时， 反应完毕后，加水淬灭，水相用乙酸乙酯(15mL)提取三次，合并的有机相先用水(10mL)洗涤三次，再用饱和食盐水(10mL)洗涤，随后减压蒸干溶剂，经反相制备HPLC(C18,条件:5-50％(A:H2O,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到220mg化合物4。MS m/z：C19H21N5O3Na，[M+Na]+理论：390.16，实测：390.3。
室温下将化合物4(1.50g,4.08mmol)溶解于20mL的醋酸和水(4:1)的混合溶液中，60℃下搅拌30分钟，待反应完毕后减压蒸干溶剂，经反相制备HPLC(C18,条件:5-25％(A:H2O,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到1.10g化合物5。MS m/z：C16H18N5O3，[M+H]+理论：328.13，实测：328.4。
将化合物5(1.00g,3.05mmol)溶于吡啶(Py，10mL)中，冰浴下滴4,4'-双甲氧基三苯甲基氯(DMTrCl,1.50g,4.58mmol)的吡啶(5mL)溶液，滴加完毕后反应在室温下搅拌过夜，待反应完毕后，用水淬灭，减压蒸干溶剂，经反相制备HPLC(C18,条件:5-80％(A:H2O,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到1.00g化合物6。MS m/z：C37H36N5O5，[M-H]+理论：630.26，实测：630.5。消旋体化合物6经手性柱(DaicelIE 250*4.6mm,5μm,A:正己烷,B:乙醇)拆分得410mg 6A(-)和435mg 6B(+)。
将化合物6A(-)(200mg,0.32mmol)，四氮唑(11mg,0.16mmol)，N-甲基咪唑(5mg,0.06mmol)，3A分子筛(500mg)溶于10mL的乙腈中，室温下加入化合物7(144mg,0.48mmol)，在室温下搅拌过夜。反应完毕后，将分子筛过滤掉，加入二氯甲烷(30mL)，饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤三次，再用饱和食盐水(20mL)洗涤，滤液旋干并经反相制备HPLC(C18,条件:5-100％(A:水,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到200mg化合物1-1a。MS m/z：C40H39N6O7P，[M-二异丙基+OH]+理论：747.26，实测：747.6。1H NMR(400MHz,Acetonitrile-d3)δ7.56,7.54(2s,1H),7.36-7.27(m,2H),7.24-7.21(m,7H),6.83-6.80(m,4H),4.12-4.10(m,2H),3.75-3.68(m,10H),3.20-2.80(m,2H),2.68-2.54(m,4H),1.22-1.04(m,18H)。
将化合物6B(+)(200mg,0.32mmol)，四氮唑(11mg,0.16mmol)，N-甲基咪唑(5mg,0.06mmol)，3A分子筛(500mg)溶于10mL的乙腈中，室温下加入化合物7(144mg,0.48mmol)，在室温下搅拌过夜。反应完毕后，将分子筛过滤掉，加入二氯甲烷(30mL)，饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)洗涤三次，再用饱和食盐水(20mL)洗涤，滤液旋干并经反相制备HPLC(C18,条件:5-100％(A:水,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到200mg化合物1-1b。MS m/z：C40H39N6O7P，[M-二异丙基+OH]+理论：747.26，实测：747.5。
1.2合成化合物1-6a
将化合物1(10g,68.404mmol),化合物2(15g,62.186mmol)和三苯基膦(32.62g,124.371mmol)溶于无水THF(30mL),于0℃下缓慢滴加DIAD(24.656mL，124.371mmol)。该反应液在25℃下反应12h。LCMS显示反应完成。将该反应液用乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)萃取，有机相干燥将滤液浓缩，得到的残留物用正向柱纯化(DCM/MeOH＝10/1)得目标产物3(20g)。
将化合物3(20g,28.585mmol)溶于醋酸(24mL,426.016mmol)和H2O(12mL)中，60℃搅拌1小时。之后将反应液旋干加入THF(12mL)和H2O(12mL)，80℃搅拌7小时。LCMS显示反应完成。将反应液加入乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)萃取，水相加入碳酸钠固体直到水相有大量固体析出。将固体过滤，用水洗涤，将滤饼用油泵拉干，得到目标化合物5(9g)。
在氮气保护下,将化合物5(6.8g,18.581mmol)溶于吡啶(80mL)中，于0℃下缓慢加入TMSCl(14.250mL,111.489mmol)，搅拌2h。之后在0℃下加入Isobutyryl chloride(2.044mL,19.511mmol)，于25℃下搅拌1h。LCMS显示反应完成。用二氯甲烷(200mL)和水(200mL)萃取，有机相干燥旋干后拌样，用正向柱纯化(DCM:MeOH＝10:1)过柱，在4.8％处出峰)，得到黄色油状化合物6(12g)。
在氮气保护下,将化合物6(5.5g,12.392mmol)溶于吡啶(30mL)，加入MOLECULAR SIEVE 4A 1/16(7g,12.392mmol)，然后在0℃下分批加入DMTrCl(5.04g,14.870mmol)固体，25℃反应2h。TLC(PE:EtOAc＝1:1,Rf＝0.69)显示反应已经完成。该反应液和TJN200879-040-P1合并一起处理。将反应液用乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)萃取，有机相干燥旋干后拌样用正向柱纯化(PE:EtOAc过柱，在84％处出峰)，得到黄色油状化合物7(12g)。
将化合物7(12g,15.389mmol)溶于EtOAc(140mL)，加入湿钯碳Pd/C(7g,15.389mmol)该反应液在25℃，氢气(15Psi)下反应2小时。TLC(PE:EtOAc＝0:1,Rf＝0.09)显示反应已经完成。将反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯(30mL)冲洗三遍后，收集滤液。滤液旋干后加入50mL二氯甲烷和2mL三乙胺拌样用正向柱纯化(DCM:MeOH＝10:1过柱，在0.5％处出峰)，得到9g(黄色泡沫状固体)。将所得消旋化合物SFC拆分，得到产品目标化合物7A(-)(3.9g)和目标化合物7B(+)(3.8g)。
将化合物7A(-)(3.30g,5.40mmol)，四氮唑(190mg,2.70mmol)，1-甲基咪唑(90mg,1.10mmol)，3A分子筛(500mg)溶于30mL的乙腈中，室温下加入化合物8(2.50g,8.10mmol)，在室温下搅拌2h。反应完毕后，将分子筛过滤掉，加入DCM(150mL)，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(30mL*3)，再用饱和食盐水(30mL) 洗涤，滤液旋干并经反相制备HPLC(C18,Condition:5-100％(A:water,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到1-6a(2.9g,66％)。MS m/z：C43H55N7O7P[M+H]+，理论：812.38，实测：812.5。1H NMR(400MHz,Acetonitrile-d3)δ7.56,7.54(2s,1H),7.36-7.27(m,2H),7.24-7.21(m,7H),6.83-6.80(m,4H),4.12-4.10(m,2H),3.75-3.68(m,10H),3.20-2.80(m,2H),2.68-2.54(m,4H),1.22-1.04(m,18H)。
1.3合成化合物1-7a
在氮气保护下，将化合物1(5g,23.1272mmol),化合物2(6.76g,46.254mmol)和三苯基磷(7.28g,27.753mmol)溶于30mL二氧六环中，于0℃缓慢滴加入DEAD(5.502mL,27.753mmol)。滴加完成后，反应缓慢升温至25℃继续反应1h。在反应液里加入100mL H2O和100mL EtOAc萃取，有机相合并干燥过滤浓缩后拌样过柱，用正向柱纯化(PE:EtOAc＝1:1过柱得目标产物(4g)。
将化合物3(3.3g)溶于HOAc(16mL)和H2O(4mL),油浴60℃加热0.5h。将反应液旋干得到的残留物用正向柱纯化(PE:EtOAc＝0:1过柱)，得到目标产物4(3g)。
将化合物4(3g,8.873mmol)溶于5mL吡啶中，在氮气保护下于0℃缓慢滴加DMTrCl(3.91g,11.535mmol)的10mL吡啶的溶液。滴加完毕后反应升温至 25℃并继续反应1h。在反应液中加入50mL水和100mL乙酸乙酯萃取。水相再用100mL乙酸乙酯萃取三次，有机相合并干燥过滤浓缩用正向柱纯化(用PE:EtOAc＝2:1)。得到目标产物5(4g)。
将化合物5(4g,5.769mmol)溶于甲醇(10mL),加入饱和的NH3甲醇溶液(40mL),0℃反应6h。将反应液旋干用正向柱纯化(用PE:EtOAc＝0:1)得消旋化合物2.4g SFC拆分，得到目标产物6A(-)(750mg,100％纯度)和目标产物6B(+)(400mg,99.16％纯度)。
将化合物6A(-)(700mg,1.40mmol)，四氮唑(50mg,0.70mmol)，1-甲基咪唑(23mg,0.28mmol)，3A分子筛(500mg)溶于10mL的乙腈中，室温下加入化合物7(630mg,2.10mmol)，在室温下搅拌2h。反应完毕后，将分子筛过滤掉，加入DCM(50mL)，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(10mL*3)，再用饱和食盐水(20mL)洗涤，滤液旋干并经反相制备HPLC(C18,Condition:5-100％(A:水B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到1-7a(700mg,72％)。MS m/z：C38H47N4O7PNa[M+Na]+，理论：725.32，实测：725.5。
1.4合成化合物1-8a
将化合物1(8.5g,76.508mmol),化合物2(30.64g,91.809mmol)溶于DMF(150mL),加入CS2CO3(29.91g,91.809mmol)，反应于氮气保护下，90℃反应12h。LCMS检测反应完成。将反应液过滤，油泵旋干，正向柱分离纯化(80g,DCM/MeOH＝10/1～5/1)得到目标产物3(13.5g,80％纯度)。
将化合物3(10.5g,35.105mmol)溶于吡啶(65mL)和CH3CN(65mL)，向溶液中滴加BzCl(4.894mL,42.126mmol)，于25℃反应2h。LCMS检测大部分原料反应完成，加H2O(100mL)淬灭，EtOAc(100mL X 3)萃取，干燥旋干，柱分离(合并TJN200872-101)纯化(80g,PE/EtOAc＝10/1～0/1,DCM/MeOH＝10/1)得到目标产物4(14g,90％纯度)。
将化合物4(14g,36.694mmol)溶于HOAc(56mL,314.796mmol)和H2O(14mL)，于60℃反应2h,LCMS显示反应完成。油泵浓缩，正向柱分离(40g,DCM/MeOH＝1/0～5/1)得到目标产物5(8.4g,90％纯度&2.4g,80％纯度)。
将化合物5(7.4g,21.957mmol),DMAP(0.54g,4.391mmol),MOLECULAR SIEVE 4A(11.1g,2.967mmol)溶于吡啶(60mL)，冰浴下搅拌10min，然后加入DMTrCl(8.93g,26.348mmol)，反应搅拌1.8h。LCMS检测约19％原料剩余，约60％目标MS。合并(TJN200872-105&106)一起纯化。向反应液中加入H2O(50mL)，经DCM(50mL X 3)萃取，干燥，旋干，柱分离(120g,PE/(EA:DCM:TEA＝1:1:0.05)＝1/0～0/1至DCM/MeOH＝10/1)得到目标化合物6(11g,89％纯度,TJN200872-105&106&107),回收原料(3.0g,70％纯度)。
化合物6(15g,22.041mmol)经SFC(DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*50mm,10um)；0.1％NH3H2O EtOH，B:45％-45％；200ml/min)分离得到目标产物6A(+)(5.33g,94.29％纯度),目标产物6B(-)(6.14g,97.91％纯度),化合物6回收1.0g。
将化合物6B(-)(5.4g,8.92mmol)，四氮唑(312mg,4.46mmol)，1-甲基咪唑(146mg,1.78mmol)，3A分子筛(500mg)溶于40mL的乙腈中，室温下加入化合物7(4g,13.4mmol)，在室温下搅拌2h。反应完毕后，将分子筛过滤掉，加入DCM(200mL)，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(30mL*3)，再用饱和食盐水(50mL) 洗涤，滤液旋干并经反相制备HPLC(C18,Condition:5-100％(A:water,B:CH3CN),流速:70mL/min)，冻干后得到1-8a(5.8g,80％)。MS m/z：C45H51N5O7P，[M+H]+，理论：804.36，实测：804.4。
实施例2：不同化学修饰表征
其中：我们将由2-羟甲基-1,3-丙二醇为起始原料合成的核苷酸定义hmpNA；
(+)hmpNA(A)为实施例1.1节中核苷亚磷酰胺单体1-1b通过固相合成获得，绝对构型为(S)-hmpNA(A)；
(-)hmpNA(A)为实施例1.1节中核苷亚磷酰胺单体1-1a通过固相合成获得，绝对构型为(R)-hmpNA(A)；
类似的，替换hmpNA的碱基种类，通过固相合成获得以下结构并确认绝对构型：
(+)hmpNA(G)，绝对构型为(S)-hmpNA(G)；
(-)hmpNA(G)，绝对构型为(R)-hmpNA(G)；
(+)hmpNA(C)，绝对构型为(S)-hmpNA(C)；
(-)hmpNA(C)，绝对构型为(R)-hmpNA(C)；
(+)hmpNA(U)，绝对构型为(R)-hmpNA(U)；
(-)hmpNA(U)，绝对构型为(S)-hmpNA(U)。
(S)-hmpNA(G)，(R)-hmpNA(G)，(S)-hmpNA(C)，(R)-hmpNA(C)，(S)-hmpNA(U)和(R)-hmpNA(U)的绝对构型由其中间体或衍生物经X-Ray衍射而确认。
中间体或衍生物的结构为：
TJ-NA067:检测晶体为无色块状(0.30×0.10×0.04mm3)，属于单斜晶系P21空间群。晶胞参数α＝90°,β＝118.015(4)°,γ＝90°,Z＝4。计算密度Dc＝1.389g/cm3，单胞中电子数F(000)＝504.0，单胞的线性吸收系数μ(Cu Kα)＝0.840mm–1，衍射实验温度T＝150.00(11)K。
6A(+):检测晶体为无色块状(0.30×0.20×0.10mm3)，属于单斜晶系P21空间群。晶胞参数α＝90°,β＝113.876(3)°,γ＝90°,Z＝2。计算密度Dc＝0.999g/cm3，单胞中电子数F(000)＝1318.0，单胞的线性吸收系数μ(Cu Kα)＝0.570mm–1，衍射实验温度T＝100.01(18)K。
TJ-NA048:检测晶体为无色针状(0.30×0.04×0.04mm3)，属于单斜晶系P1空间群。晶胞参数α＝85.007(4)°,β＝88.052(4)°,γ＝70.532(4)°,Z＝2。计算密度Dc＝ 1.366g/cm3，单胞中电子数F(000)＝620.0，单胞的线性吸收系数μ(Cu Kα)＝0.856mm–1，衍射实验温度T＝150.00(13)K。
TJ-NA092:检测晶体为无色棱柱状(0.30×0.10×0.10mm3)，属于三斜晶系P1空间群。晶胞参数α＝93.146(2)°,β＝101.266(2)°,γ＝96.134(2)°,Z＝2。计算密度Dc＝1.412g/cm3，单胞中电子数F(000)＝228.0，单胞的线性吸收系数μ(Cu Kα)＝0.945mm–1，衍射实验温度T＝100.00(10)K。
实施例3：制备NAG0052、L96
化合物NAG0024、NAG0026购买自天津药明康德新药开发有限公司。除非特别说明，以下实施例中所用的试剂均为市售商品。
化合物NAG0052的合成
起始原料化合物1采购自江苏倍达医药科技有限公司。化合物NAG0052的合成路线如下所示：
上述路线中涉及的具体中间产物以及终产物的合成以及鉴定如下所述：
化合物2
在0℃以及氮气保护下，往化合物1(12.3mL,101mmol)的THF(300mL)溶液中分批加入NaH(12.2g,304mmol，纯度60％)。该混合物在20℃下搅拌1小时之后再次冷却到0℃，接着往体系中逐滴加入苄溴(36.3mL,304mmol)，并且在20℃搅拌12小时。将该反应液用H2O(100mL)淬灭后，用EtOAc(200mL x 2)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤,Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到的残留物经过硅胶柱层析分离后得到目标化合物2(20.0g,51.8mmol,产率51％)。
LCMS:tR＝2.615 and 2.820min in 30-90AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm(Xtimate C18,3um,2.1*30mm),MS(ESI)m/z＝351.2[M+Na]+。
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 7.35-7.12(m,10H),5.06-4.95(m,1H),4.51-4.39(m,4H),4.24-3.87(m,2H),3.50-3.40(m,2H),3.38-3.20(m,3H),2.20-1.91(m,2H)。
化合物3和4
在20℃以及氮气保护下，往化合物2(13.0g,33.6mmol)的DCM(300mL)溶液中一次性加入TMSCN(13.5mL,101mmol)，接着逐滴加入TMSOTf(9.14mL,50.5mmol)的DCM(30mL)溶液。该反应液在20℃下搅拌15小时。反应结束之后用饱和NaHCO3水溶液(80mL)淬灭该体系，并且用DCM(150mL x 2)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水(80mL)洗涤，Na2SO4干燥，过滤以及浓缩后通过硅胶柱层析分离后得到目标化合物3(3.30g,9.18mmol,产率27％)以及淡黄色油状液体化合物4(8.50g,9.18mmol,产率70％)。
化合物3
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 7.42-7.29(m,10H),4.81(t,J＝7.8Hz,1H),4.65-4.49(m,4H),4.30-4.21(m,2H),3.65-3.57(m,1H),3.57-3.49(m,1H),2.49-2.40(m,2H)。
化合物4
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 7.42-7.26(m,10H),4.93-4.87(m,1H),4.65-4.48(m,4H),4.43-4.38(m,1H),4.21-4.17(m,1H),3.79-3.70(m,1H),3.54(d,J＝4.0Hz,1H),2.45-2.37(m,2H)。
化合物5
在0℃及氮气保护下将化合物4(3.00g,9.28mmol)的THF(15mL)溶液，滴加到LiAlH4(0.79g,20.9mmol)的THF(15mL)溶液中，滴加完后体系在0℃反应1小时。TLC(PE:EtOAc＝3:1)监测到原料完全消失。向反应液中缓慢加入十水硫酸钠，加至不冒泡为止。之后将反应液过滤，滤饼用二氯甲烷(60mL)洗涤三次后，收集滤液旋干，得目标化合物5(3.00g,产率90％)。
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.40-7.14(m,10H),4.54-4.38(m,4H),4.06-3.99(m,2H),3.91(q,J＝6.4Hz,1H),3.48-3.37(m,2H),2.67-2.52(m,2H),2.21-2.18(m,1H),1.77-1.73(m,1H)。
化合物6
在氮气保护下，将化合物5(3.00g,8.25mmol)溶于DCM(30mL)，加入TEA(3.44mL,24.7mmol)和CbzCl(1.76mL,12.4mmol)，20℃反应2小时。LCMS显示反应完成。将反应液加入二氯甲烷(30mL)和水(60mL)萃取。有机相用水(60mL x 3)洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩用正向柱纯化(PE:EtOAc＝1:1)，得到目标化合物6(2.5g,产率90％)。
LCMS:tR＝0.810min in 5-95AB_1min,MS(ESI)m/z＝462.2[M+H]+。
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 7.39-7.29(m,15H),5.35(s,1H),5.15-5.01(m,2H),4.72(d,J＝6.0Hz,1H),4.54-4.40(m,3H),4.26(s,1H),4.23-4.18(m,1H),4.11-4.04(m,1H),3.54-3.41(m,3H),3.37-3.25(m,1H),2.34-2.23(m,1H),1.85-1.79(m,1H)。
化合物7
在氮气保护下，将化合物6(2.00g,3.90mmol)溶于DCM(5mL)，在-78℃下加入BCl3的THF溶液(1M,27.3mL)，反应1小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测到原料完全消失。将反应液在-78℃下加入甲醇(20mL)淬灭，浓缩，用正向柱纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到目标化合物7(2.00g,产率60％)。
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δppm 7.41-7.23(m,5H),5.08(s,2H),4.25-4.07(m,2H),3.85-3.75(m,1H),3.63-3.56(m,1H),3.54-3.48(m,1H),3.30-3.27(m,2H),2.34-2.21(m,1H),1.71-1.64(m,1H)。
化合物8
在氮气保护下，将化合物7(0.50g,1.78mmol)溶于吡啶(5mL)中，在0℃下加入4A分子筛(500mg)和DMTrCl(0.66mL,2.13mmol)，之后升温至20℃反应1.5小时。TLC(PE:EtOAc＝2:1)监测到原料完全消失。将反应液加入乙酸乙酯(60mL)和水(60mL)萃取，有机相用水(60mL x 3)洗涤三次后用无水硫酸钠干燥，浓缩，用正向柱纯化(PE:EtOAc＝1:1)，得到目标化合物8(800mg,产率90％)。
1H NMR:(400MHz,CDCl3)δppm 7.44(d,J＝7.6Hz,2H),7.37-7.23(m,11H),7.22-7.15(m,1H),6.84(d,J＝8.8Hz,4H),5.09(s,2H),4.31-4.17(m,2H),4.02-3.91(m,1H),3.84-3.73(m,6H),3.33(s,1H),3.28(s,1H),3.19-3.01(m,2H),2.34-2.25(m,1H),1.70-1.62(m,1H)。
化合物9
将化合物8(800mg,1.234mmol)溶于EtOAc(5mL)，加入Pd/C 10％(800mg,7.517mmol)，反应在H2条件(15Psi)，20℃下反应1小时。LCMS显示反应已经完成。反应液过滤，滤饼用二氯甲烷(100mL)和甲醇(100mL)洗涤三次，浓缩，经过反相柱分离得到化合物9(300mg,54％)。
LCMS:tR＝2.586min in 10-80CD_3min MS(ESI)m/z＝450.2[M+H]+。
化合物11
将化合物10(435mg,1.780mmol)溶于DCM(10mL)，加入DIEA(0.441mL,2.67mmol)和HATU(677mg,1.78mmol)后,再加入化合物9(400mg,0.890mmol)，20℃反应1小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)监测反应完成。将反应液加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)萃取，有机相用水(60mL x 3)洗涤三次,无水硫酸钠干燥，浓缩用正向柱纯化(PE:EtOAc＝0:1过柱，在100％处出产品峰),得到目标化合物11(600mg,产率90％)。
LCMS:tR＝2.745min in 30-90CD_3min,MS(ESI)m/z＝698.4[M+Na]+。
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δppm 7.46-7.38(m,2H),7.35-7.24(m,6H),7.22-7.16(m,1H),6.90-6.78(m,4H),4.29-4.21(m,2H),4.02-3.95(m,1H),3.77(s,6H),3.66-3.62(m,3H),3.41(s,1H),3.18-3.04(m,2H),2.36-2.17(m,5H),1.71-1.50(m,5H),1.39-1.25(m,14H)。
化合物12
将化合物11(600mg,0.799mmol)溶于THF(3mL)和H2O(1mL)，加入 LiOH.H2O(134mg,3.20mmol)，20℃反应12小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完成。将反应液旋干，用水(5mL)和甲醇(5mL)溶解，用反向柱纯化(H2O:CH3CN＝1:1,在35％左右出峰)，得到目标化合物12(460mg,产率100％，锂盐)。
LCMS:tR＝1.346min in 10-80CD_3min,MS(ESI)m/z＝684.3[M+Na]+。
HPLC:tR＝1.879min in 10-80CD_6min。
1H NMR:(400MHz,CD3OD)δppm 7.47-7.39(m,2H),7.35-7.24(m,6H),7.22-7.15(m,1H),6.91-6.79(m,4H),4.31-4.18(m,2H),4.02-3.95(m,1H),3.78(s,6H),3.44-3.33(m,2H),3.18-3.04(m,2H),2.35-2.27(m,1H),2.24-2.10(m,4H),1.70-1.51(m,5H),1.31-1.23(m,12H)。
化合物13
室温环境，氮气保护下，将化合物NAG0024(271mg,0.151mmol)溶解于无水THF(2mL)和无水DMF(4mL)，加入3A分子筛，再依次加入化合物12(100mg,0.151mmol),HOBt(25mg,0.181mmol),DCC(38mg,0.181mmol)和DIEA(39mg,0.302mmol)。反应液45℃反应16h。LC-MS显示反应完全后，加水淬灭，过滤。滤液浓缩后，经C18反相柱纯化(H2O/MeCN)，得到化合物13(210mg，产率57％)。
化合物NAG0052
室温环境下，化合物13(230mg，0.094mmol)溶于吡啶(5mL)，加入分子筛，加入DMAP(12mg，0.283mmol)，丁二酸酐(28mg，0.283mmol)。氮气保护，50℃搅拌16小时。LCMS检测反应完全，过滤旋干。过C18反相柱纯化后，由制备HPLC二次纯化，得到目标化合物NAG0052(123mg，0.048mmol，产率51％)。
MS(ESI)m/z＝2535.3[M-1]-.理论：2536.2。
1H NMR(400MHz,Acetonitrile-d3)δ7.48-7.43(m,2H),7.37-7.12(m,11H),7.00-6.85(m,10H),6.66(s,1H),5.31(dd,J＝3.4,1.1Hz,3H),5.20-5.13(m,1H),5.05(dd,J＝11.3,3.4Hz,3H),4.56(d,J＝8.5Hz,3H),4.30(dd,J＝7.7,5.3Hz,1H),4.18-3.93(m,14H),3.79(s,10H),3.65(q,J＝4.7,3.6Hz,13H),3.56-3.07(m,24H),2.56(s,6H),2.37(t,J＝5.8Hz,10H),2.17(t,J＝7.5Hz,9H),2.02-1.96(m,20H),1.88(s,8H),1.82-1.73(m,2H),1.60(dt,J＝15.0,7.3Hz,16H),1.27(s,13H)。
L96的合成
按照专利申请WO2014025805A1记载的方法制备获得如上结构式所示的L96。
实施例4：dsRNA的合成
1.自制带有载体的树脂
将含有羧酸基团的化合物NAG0052(157mg,0.062mmol)溶于无水DMF(3mL)，待底物完全溶解后，依次加入无水乙腈(4mL),DIEA(0.03mL,0.154mmol，2.5eq)和HBTU(35mg,0.093mmol，1.5eq)。反应液混合均匀后，再加入大孔胺甲基树脂(476mg,空白载量为0.41mmol/g,目标载量为0.1mmol/g)。将反应液放入摇床上(温度：25℃，转速：200rpm)振摇过夜。反应液过滤，滤饼依次分别用DCM，无水乙腈洗涤，收集固体，真空干燥过夜。
将上步固体分散于无水乙腈(5mL)，依次加入吡啶(0.18mL)，DMAP(3mg)，NMI(0.12mL)和CapB1(2.68mL)。将反应液放入摇床上(温度：25℃，转速：200rpm)振摇2h。反应液过滤，滤饼用无水乙腈洗涤，收集固体，真空干燥过夜，得到带有载体的树脂。载量经过测定为0.1mmol/g。
2.对于已经连接在树脂上的NAG0052，使用该树脂作为起始，按照核苷酸排布顺序自3’-5’方向逐一连接核苷单体。每连接一个核苷单体都包括脱保护、偶联、盖帽、氧化或硫化四步反应。操作为本领域常规。
化合物NAG0052经过固相合成连接到序列上，再经过胺解后，NAG0052结构脱去一部分官能团成为NAG0052’。
制得的dsRNA具有表1和表2中所示的有义链和反义链。
表1.dsRNA列表
表2.有义链和反义链的核酸序列
在上表中，大写字母G、A、C、U分别表示包含鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶的核苷酸，小写字母m表示2'-甲氧基修饰，小写字母f表示2'-氟代修饰，小写字母s表示与该字母s左右相邻的两个核苷酸之间为硫代磷酸二酯基连接；以下同。
实施例5：dsRNA在体内对靶基因mRNA表达量的抑制
本实验考察本公开不同的dsRNA在体内对靶基因mRNA表达量的抑制效率
将雄性6-8周龄C57BL/6小鼠随机分组，每组共6只，每个时间点各3只，分别向每组小鼠给予TRD007205、参比阳性TRD002218以及PBS。
所有动物依据体总计算给药量，采用皮下注射方式单次给药，dsRNA给药剂量(以无配体核苷酸的量计)为1mg/kg，给药体积为5mL/kg。给药7天、28天后处死小鼠，收集肝脏，用RNA later(Sigma Aldrich公司)保存；随后用组织匀浆仪匀浆肝组织，再用组织RNA提取试剂盒(凡知医疗科技，FG0412)根据操作说明书标注的操作步骤提取得到肝组织总RNA。将总RNA反转录成cDNA并采用实时荧光定量PCR方法检测肝组织中的TTR mRNA(转甲状腺蛋白mRNA)的表达量。在该荧光定量PCR法中，以甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH)基因作为内参基因，使用针对TTR和GAPDH的Taqman探针引物分别检测TTR和GAPDH的mRNA表达量。
表3.小鼠体内实验分组信息：
表4.检测引物的序列参见如下：
TTR mRNA表达量按照如下等式计算：
TTR mRNA表达量＝【(测试组TTR mRNA表达量/测试组GAPDH mRNA表达量)/(对照组TTR mRNA表达量/对照组GAPDH mRNA表达量)】x 100％。
给药7天、28天后，本公开的缀合不同结构的dsRNA的在体内对靶基因mRNA表达量的抑制效率分别见图1和图2。由图1的结果可知，TRD007205在给药后7天对于TTR mRNA的表达抑制均具有良好的效果。由图2可知，给药28天后，TRD007205对靶基因mRNA表达量的抑制作用均优于TRD002218。
实施例6：合成dsRNA
1.自制带有载体的树脂
2.使用带有NAG0052的树脂作为起始，按照核苷酸排布顺序自3’-5’方向逐一连接核苷单体。每连接一个核苷单体都包括脱保护、偶联、盖帽、氧化或硫化四步反应。具体参照实施例7的合成方法。
制得的dsRNA具有表5和表6中所示的有义链和反义链。
表5.dsRNA列表
表6.dsRNA的有义链和反义链
表7.有义链和反义链的核酸序列的裸序列
其中，(-)hmpNA(C)表示
NAG0052’的结构为：
表8.裸序列dsRNA(对照组)
实施例7：dsRNA对人原代肝细胞(PHH)中人AGT的抑制-7个浓度点抑制活性
在人原代肝细胞(PHH)中采用7个浓度梯度对dsRNA进行人原代肝细胞(PHH)活性筛选。各个dsRNA样品转染起始终浓度为20nM，5倍梯度稀释和7个浓度点。
人原代肝细胞(PHH)冻存于液氮中，转染前24h，将人原代肝细胞(PHH)复苏后接种于96孔板，接种密度为每孔3×104个细胞，每孔80μL培养基。
参照产品说明手册，使用Lipofectamine RNAi MAX(ThermoFisher，13778150)转染dsRNA，dsRNA转染的梯度终浓度为10nM，2nM，0.4nM，0.08nM，0.016nM，0.0032nM和0.00064nM。在处理24小时后，使用高通量细胞RNA提取试剂盒FG0417-L/FG0418-XL,磁珠法)进行细胞总RNA提取、RNA逆转录实验(Takara PrimeScriptTM II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)和定量实时PCR(Takara PrimeScriptTM II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)检测，测定人AGT的mRNA水平，根据GAPDH内参基因水平对人AGT的mRNA水平进行校正。
该实验涉及的仪器如表9所示。
表9.实验仪器
其中，在实时定量PCR检测时，采用的是探针Q-PCR检测实验，其引物信息如表10所示。
表10.Taqman引物信息表
结果分析方法
Q-PCR检测实验完毕后，按照系统自动设定的阈值获取相应的Ct值，可以通过Ct值比较，相对定量某个基因的表达：比较Ct指的是通过与内参基因Ct值之间的差值来计算基因表达差异,也称之是2-△△Ct，△△Ct＝[(Ct实验组目的基因-Ct实验组内参)-(Ct对照组目的基因-Ct对照组内参)]。抑制率(％)＝(1-目的基因表达剩余量)*100％。
结果以相对于经过对照dsRNA处理的细胞的人AGT mRNA表达剩余百分比来表示。抑制率的IC50结果见表11。
结果表明，所有化合物在PHH细胞中针对AGT基因具有高水平的在靶抑制活性。
表11.dsRNA在PHH细胞中多剂量抑制活性
实施例8：对人肝癌细胞系(Hep3B)中AGT的多浓度点抑制活性
在人肝癌细胞系(Hep3B)中采用7浓度梯度进行剂量响应实验。
转染前24h，将Hep3B细胞以约20,000细胞/孔接种在96孔板中，每孔100μL培养基。转染时，参照产品说明手册，使用Lipofectamine RNAi MAX(ThermoFisher，13778150)转染样品，样品转染的梯度终浓度为10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032和0.00064nM。在处理24小时后，使用高通量细胞RNA提取试剂盒FG0417-L/FG0418-XL,磁珠法)进行细胞总RNA提取、RNA逆转录实验(Takara PrimeScriptTM II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)和定量实时PCR(Takara PrimeScriptTM II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)检测，测定人的mRNA水平，根据GAPDH内参基因水平对人AGT的mRNA水平进行校正。
结果以相对于经过对照样品处理的细胞的人AGT mRNA表达剩余百分比来表示，抑制率的IC50结果见表12
结果表明，所有化合物在Hep3B细胞中针对AGT基因具有高水平的在靶抑制活性。
表12.对Hep3B细胞中人AGT的抑制活性
实施例9:对人肝癌细胞系(Hep3B)中AGT的抑制-多浓度点抑制活性
在人肝癌细胞系(Hep3B)中采用7浓度梯度进行剂量响应实验。
转染前24h，将Hep3B细胞以约20,000细胞/孔接种在96孔板中，每孔100μL培养基。转染时，参照产品说明手册，使用Lipofectamine RNAi MAX(ThermoFisher，13778150)转染样品，样品转染的梯度终浓度为10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032和0.00064nM。在处理24小时后，使用高通量细胞RNA提取试剂盒进行细胞总RNA提取、RNA逆转录实验和定量实时PCR检测，测定人的mRNA水平，根据GAPDH内参基因水平对人AGT的mRNA水平进行校正。
结果以相对于经过对照样品处理的细胞的人AGT mRNA表达剩余百分比来表示，抑制率的IC50结果见表13。实验操作参考实施例8。
表13.对Hep3B细胞中人AGT的抑制活性
由表13数据可知：
TJR100283对AGT的抑制活性优于TJR100286、TJR100290、TJR100291、TJR100292和TJR100293。这些样品的序列是针对TJR100283序列进行5’端首位碱基突变，左右位移碱基等方式变换而来。结果表明TJR100283展现出更好的对AGT的抑制活性，若碱基变化均削弱对AGT的抑制活性。
实施例10:对猴原代肝细胞(PCH)中AGT的抑制-多浓度点抑制活性
在猴原代肝细胞(PCH)中采用7浓度梯度对样品进行剂量响应实验。
转染时，参照产品说明手册，使用Lipofectamine RNAiMAX(ThermoFisher，13778150)转染样品，样品转染的梯度终浓度为10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032和0.00064nM。将用Opti-MEM I稀释后的RNAiMAX和样品等体积混匀，室温孵育15分钟后，以每孔10μL的量加入96孔板中，然后每孔加入90μL复苏的冻存PCH细胞悬液(6.7E5细胞/mL)。转染24小时后收集细胞，使用RNeasy 96Kit(Qiagen-74182)提取细胞总RNA。参照反转录试剂盒(天根，KR106)说明书，加入随机引物反转录成cDNA。采用qPCR的方法检测样品中的AGT mRNA水平，根据GAPDH内参基因水平对猴的AGT的mRNA水平进行校正，探针引物序列信息见表14。
每个样品目的AGT mRNA的表达水平通过ΔΔCt相对定量法进行计算。目的基因相对表达量使用2-ΔΔCT表示，计算公式如下：
ΔCT＝目的基因平均Ct值-内参基因平均Ct值；
ΔΔCT＝ΔCT(加药组)组-ΔCT(对照组)；
目的基因mRNA相对表达量＝2-ΔΔCT
应用GraphPad Prism软件(four parameter logistic equations)计算IC50。结果见表15。
表14.Taqman探针引物信息表
表15.对PCH细胞中猴AGT的7浓度抑制活性
结果表明，TJR100283活性明显优于TJR100292，TJR100293和TJR100295。说明TJR100283序列本身对AGT的抑制活性都很强。

Claims (21)

  1. 一种双链核糖核酸(dsRNA)，其包含有义链和反义链，所述有义链和反义链按照5'端到3'端的方向包含连续的核苷酸，其中
    所述有义链第7、8和9位的核苷酸为2'-氟代修饰的核苷酸，第5位的核苷酸独立地为2'-甲氧基修饰的核苷酸或2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸为2'-甲氧基修饰的核苷酸；
    所述反义链第2和14位的核苷酸为2'-氟代修饰的核苷酸，第4、6、8、9、10、12、16和18位的核苷酸独立地为2'-甲氧基或2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸为2'-甲氧基修饰的核苷酸；
    所述反义链中2'-氟代修饰的核苷酸的个数为2-7个；
    所述反义链第7位的核苷酸位置处包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐：
    所述式(I)所示的化学修饰选自以下任一结构： B是所述反义链在其5’区域的第7位 核苷酸未被修饰时的碱基；
    所述dsRNA抑制血管紧张素原(AGT)的表达。
  2. 如权利要求1所述的dsRNA，其中，
    所述有义链含有如下式所示的核苷酸序列：
    5’-NaNaNaNaNaNaNbNbNbNaNaNaNaNaNaNaNaNaNa-3’；
    其中，Na为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb为2'-氟代修饰的核苷酸。
  3. 如权利要求1或2所述的dsRNA，其中，
    所述反义链包含如下式所示的核苷酸序列：
    5’-Na’Nb’Na’X’Na’X’W’X’X’X’Na’X’Na’Nb’Na’X’Na’X’Na’Na’Na’-3’；
    优选地，所述反义链包含如下式所示的核苷酸序列：
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Nb’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Na’W’Nb’Nb’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Nb’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Na’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；或，
    5’-Na’Nb’Na’Na’Na’Na’W’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Nb’Na’Na’Na’Na’Na’Na’Na’-3’；
    其中，每个X’独立地为Na’或Nb’；Na’为2'-甲氧基修饰的核苷酸，Nb’为2'-氟代修饰的核苷酸；
    W’表示包含式(I)所示的化学修饰、其互变异构体或其药学上可接受的盐的核苷酸。
  4. 如权利要求1-3中任一项所述的dsRNA，其中，所述有义链和/或反义链中至少一个磷酸酯基为具有修饰基团的磷酸酯基，优选为硫代磷酸酯基，更优选为硫代磷酸二酯基。
  5. 如权利要求4所述的dsRNA，其中，所述硫代磷酸二酯基存在于以下位置中的至少一处：
    所述有义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
    所述有义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
    所述反义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；
    所述反义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
    所述反义链的3'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；以及
    所述反义链的3'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；
    优选地，所述有义链和/或反义链中包括多个硫代磷酸二酯基，所述硫代磷酸二酯基存在于：
    所述有义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；和，
    所述有义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；和，
    所述反义链的5'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；和，
    所述反义链的5'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间；和，
    所述反义链的3'端第1个核苷酸和第2个核苷酸之间；和，
    所述反义链的3'端第2个核苷酸和第3个核苷酸之间。
  6. 如权利要求1-5中任一项所述的dsRNA，其中，
    所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸；并且
    所述反义链包含与SEQ ID NO:2的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少19个连续核苷酸；
    优选地，
    所述有义链包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，并且反义链包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
  7. 如权利要求1-6中任一项所述的dsRNA，其中，
    所述反义链包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15中任一项所示的核苷酸序列；
    优选地，所述有义链包含SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
  8. 如权利要求1-7中任一项所述的dsRNA，其中，所述dsRNA还包括与其缀合的配体，所述配体包含N-乙酰基-半乳糖胺。
  9. 如权利要求8所述的dsRNA，其中，
    所述配体具有如下结构或其药学上可接受的盐，
  10. 如权利要求8或9中任一项所述的dsRNA，其中，所述dsRNA有义链的3’端与所述配体缀合。
  11. 如权利要求8-10中任一项所述的dsRNA，其中，所述配体通过磷酸酯基团或硫代磷酸酯基团与所述dsRNA有义链的3’端连接；优选通过磷酸二酯基团或硫代磷酸二酯基团连接，更优选通过磷酸二酯基团连接。
  12. 如权利要求1-11中任一项所述的dsRNA，其中，
    所述反义链包含SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15中任一项所示的核苷酸序列；
    优选地，所述有义链包含SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。
  13. 如权利要求1-12中任一项所述的dsRNA，其中，所述dsRNA具有如下结构或其药学上可接受的盐：
    其中，Af＝腺嘌呤2'-F核糖核苷；Cf＝胞嘧啶2'-F核糖核苷；Uf＝尿嘧啶2'-F核糖核苷；Gf＝鸟嘌呤2'-F核糖核苷；Am＝腺嘌呤2'-OMe核糖核苷；Cm＝胞嘧啶2'-OMe核糖核苷；Gm＝鸟嘌呤2'-OMe核糖核苷；Um＝尿嘧啶2'-OMe核糖核苷；表示硫代磷酸二酯基，表示磷酸二酯基；
    NAG0052’表示(-)hmpNA(C)表示
  14. 一种药物组合物，其包含如权利要求1-13中任一项所述的dsRNA；任选地，所述的药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
  15. 一种载体，其包含如权利要求1-13中任一项所述的dsRNA。
  16. 一种细胞，其包含如权利要求1-13中任一项所述的dsRNA，或如权利要求15所述的载体。
  17. 一种如权利要求1-13中任一项所述的dsRNA、如权利要求14所述的药物组合物、如权利要求15所述的载体、或如权利要求16所述的细胞在制备药物中的应用；所述的药物用于预防和/或治疗高血压。
  18. 一种抑制AGT基因或其mRNA表达的方法，其包括向受试者给予有效量或有效剂量的如权利要求1-13中任一项所述的dsRNA、如权利要求14所述的药物组合物、如权利要求15所述的载体、或如权利要求16所述的细胞。
  19. 一种递送寡核苷酸至肝脏的方法，其包括向受试者给予有效量或有效剂量的如权利要求8-13中任一项所述的dsRNA、如权利要求14所述的药物组合物、如权利要求15所述的载体、或如权利要求16所述的细胞。
  20. 一种试剂盒，其包含如权利要求1-13中任一项所述的dsRNA、如权利要求14所述的药物组合物、如权利要求15所述的载体、或如权利要求16所述的细胞。
  21. 一种制备dsRNA或药物组合物的方法，其包括：合成如权利要求1-13中任一项所述dsRNA。
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