[go: up one dir, main page]

CN118317793A - 治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤的方法 - Google Patents

治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN118317793A
CN118317793A CN202280077926.3A CN202280077926A CN118317793A CN 118317793 A CN118317793 A CN 118317793A CN 202280077926 A CN202280077926 A CN 202280077926A CN 118317793 A CN118317793 A CN 118317793A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methyl
fluoro
quinoxalin
pyridine
oxo
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280077926.3A
Other languages
English (en)
Inventor
P·哈默里克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
AstraZeneca AB
Original Assignee
AstraZeneca AB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by AstraZeneca AB filed Critical AstraZeneca AB
Publication of CN118317793A publication Critical patent/CN118317793A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/336—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having three-membered rings, e.g. oxirane, fumagillin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4188—1,3-Diazoles condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. biotin, sorbinil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0038—Radiosensitizing, i.e. administration of pharmaceutical agents that enhance the effect of radiotherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本披露涉及治疗有需要的患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的具有作为聚(ADP‑核糖)聚合酶(PARP)抑制剂的活性的经取代的氮杂喹诺酮化合物。

Description

治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤的方法
本披露涉及治疗有需要的患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，该抑制剂是经取代的氮杂喹诺酮化合物。脑肿瘤和神经母细胞瘤可以包含X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型。PARP抑制剂可以与烷基化化疗药和/或电离辐射组合施用于患者。
目前用于治疗脑肿瘤诸如神经胶质瘤的治疗策略包括手术切除、电离辐射和使用烷基化化疗药诸如替莫唑胺(TMZ)。不幸的是，这些脑肿瘤中的许多，诸如胶质母细胞瘤(GBM)，与极差的临床预后相关。随着时间的推移，外科手术、仪器技术、诊断和放疗/化疗策略都在慢慢演化，但这没有转化成患者存活率的显著增加。因此，需要针对脑肿瘤诸如GBM的新治疗策略。
一些分子标记物已被用于神经胶质瘤的分类。神经胶质瘤可以基于它们在异柠檬酸脱氢酶(IDH)1和/或2基因中是否含有突变(Hartmann等人2009)和/或它们在X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)基因中是否含有突变(Haase等人2018)进行分类。ATRX基因中的遗传改变也与神经母细胞瘤患者的不良结局患者亚组相关(George等人2020)。此外，MGMT启动子甲基化已被用作标记物，以预测暴露于烷化剂化疗的GBM患者的有利结局(Weller等人2010)。
替莫唑胺(TMZ)是GBM的护理标准(SOC)化疗(Stupp等人,2014；Stuppet等人,2010)。在机理上，TMZ将特定位置的DNA甲基化，导致DNA加合物，所述DNA加合物除非被修复否则导致单链和双链DNA断裂、细胞周期停滞和细胞凋亡(Singh等人,2021)。重要的是，PARP(尤其是PARP1)是参与DNA损伤和修复(DDR)过程的早期阶段的关键酶，作为对单链和双链断裂的反应。事实上，PARP1的关键功能之一是在碱基切除修复(BER)过程中，所述过程是去除由TMZ产生的DNA加合物所需要的并且招募下游因子来修复这种损伤。多种研究已经研究了PARP抑制剂(PARPi)和TMZ的组合益处(Gupta等人,2018；Higuchi等人,2020；Murai等人,2014)。
电离辐射(IR)诱导单链和双链DNA断裂，导致细胞周期停滞和细胞死亡(Reisz等人,2014)。重要的是，PARP1参与修复这些类型的DNA损伤。多种研究已经研究了PARPi和IR的组合益处(Jannetti等人,2020)。除了使神经胶质瘤对辐射敏感外，还描述了PARPi使室管膜瘤对辐射敏感性(van Vuurden等人,2011)。
在例如WO 2004/080976中教导了PARP抑制剂的实例及其作用机理。
PARP1和PARP2因其在DNA损伤修复中的作用而是被最广泛研究的PARP。PARP1由DNA损伤断裂激活并且起着催化聚(ADP-核糖)(PAR)链添加至靶蛋白的作用。这种翻译后修饰(称为PAR基化(PARylation))介导另外的DNA修复因子募集到DNA损伤中。
完成此募集作用后，PARP自动PAR基化触发结合的PARP从DNA释放，从而允许使用其他DNA修复蛋白以完成修复。因此，PARP与受损位点的结合、其催化活性以及其最终从DNA释放都是癌细胞应对由化疗剂和放疗引起的DNA损伤的重要步骤(Bai 2015)。
据信，与其他临床PARP1/2抑制剂相比，对PARP1选择性提高的PARP抑制剂可能导致功效提高和毒性降低。还据信对PARP1的选择性强抑制将导致PARP1捕获在DNA上，这通过使S期中的复制叉坍塌而导致DNA双链断裂(DSB)。
因此，本领域中需要开发PARP抑制剂，这些抑制剂既可以作为单一疗法也可以与烷基化化疗药和电离辐射组合用于安全且有效地治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤。这些PARP抑制剂可以展现出对PARP1的选择性。
申请人发现，本文所述的氮杂喹诺酮令人惊讶地具有PARP抑制活性，并且因此可用于治疗其中PARP功能具有药理学意义的疾病和病症。此外，本文所述的氮杂喹诺酮对PARP1的选择性比其他PARP家族成员(诸如PARP2、PARP3、PARP5a和PARP6)出人意料地高。
申请人进一步发现，本文所述的氮杂喹诺酮令人惊讶地能够穿透血脑屏障(BBB)，使其可用于治疗脑肿瘤，诸如神经胶质瘤。
申请人已经证明，具有这些特性的PARP抑制剂可以用于使用体外和体内模型治疗神经胶质瘤。如本文所述，PARP抑制剂被证明在IDH1突变体和IDH1野生型背景两者中作为单一疗法在ATRX突变体细胞系中具有有效活性。
在第一方面，申请人可获得一种治疗有需要的患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，
其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤包含X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型，
其中该PARP抑制剂是式(I)的化合物：
其中：
R1独立地选自H、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4氟烷基、和C1-4烷氧基；
R2独立地选自H、卤代、C1-4烷基、和C1-4氟烷基；并且
R3是H或C1-4烷基；
R4是卤代或C1-4烷基，
或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，脑肿瘤或神经母细胞瘤进一步包含异柠檬酸脱氢酶1或2(IDH1或IDH2)缺陷表型(例如，其被归类为IDH1突变体和/或IDH2突变体)。在其他实施例中，脑肿瘤或神经母细胞瘤不包含IDH1或IDH2表型(例如，其被归类为IDH1野生型和/或IDH1野生型)。
在一些实施例中，脑肿瘤或神经母细胞瘤包含O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化。
在一些实施例中，该方法包括在施用PARP抑制剂之前诊断患者为患有包含ATRX缺陷表型的脑肿瘤或神经母细胞瘤的又一步骤。在其他实施例中，正在治疗的患者先前被诊断为患有包含ATRX缺陷表型的脑肿瘤或神经母细胞瘤的患者。本文描述了用于诊断患者的方法，并且可以例如涉及测定从脑肿瘤或神经母细胞瘤或从患者的脑脊液(CSF)获得的细胞。
申请人还证明，本文披露的PARP抑制剂在与烷基化化疗剂(包括替莫唑胺(TMZ)和VAL-083)和/或与电离辐射组合使用时展现出协同抗肿瘤活性。
因此，在一些实施例中，向患者施用PARP抑制剂与以下的组合：
i)烷基化化疗剂；和/或
ii)放疗剂。
在第二方面，申请人可获得一种治疗有需要的患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，以及
i)烷基化化疗剂；和/或
ii)以10Gy或更高剂量施用的放疗剂，
其中所述PARP抑制剂是如第一方面中定义的式I的化合物。
在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含：
(i)X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型；
(ii)异柠檬酸脱氢酶1或2(IDH1或IDH2)缺陷表型；和/或
(iii)O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化。
在一些实施例中，所述烷基化化疗剂是替莫唑胺(TMZ)或二去水卫矛醇(VAL-083)。
如本文所述，本发明PARP抑制剂和TMZ的组合被证明在不需要高剂量TMZ的情况下提供抗肿瘤益处。这是有益的，因为它表明，涉及PARP抑制剂的组合疗法可以用于在烷基化化疗剂剂量减少的情况下治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤，这可能有利于允许有效治疗癌症并且减少与化疗相关的毒性副作用。类似地，证明了使用本发明PARP抑制剂与减少的临床相关剂量的电离辐射的组合有效治疗神经胶质瘤，表明可以在与放疗相关的毒性副作用减少的情况下来实现有效的癌症治疗。
因此，在一些实施例中，按以下施用TMZ：
(i)小于约200mg/m2的剂量、小于约150mg/m2的剂量、小于约125mg/m2、或小于约100mg/m2；
(ii)约50与200mg/m2之间的剂量、约75与150mg/m2之间的剂量、或约75mg/m2与125mg/m2之间的剂量。
在一些实施例中，按以下施用VAL-083：
(i)小于约50mg/m2的剂量、小于约40mg/m2的剂量、小于约30mg/m2、或小于约20mg/m2；
(ii)约10与50mg/m2之间的剂量、约10与40mg/m2之间的剂量、或约10mg/m2与30mg/m2之间的剂量。
如本文更详细描述的，所列举的TMZ和VAL-083剂量典型地是每日剂量。
在一些实施例中，所述放疗剂按以下施用：
(i)小于约60Gy、小于约55Gy、小于约50Gy、小于约45Gy、或小于约40Gy的剂量；或
(ii)约20Gy与约60Gy之间、约20Gy与约55Gy之间、约20Gy与约50Gy之间、约20与约45Gy之间、或约20与约40Gy之间、约30Gy与约60Gy之间、约30Gy与约55Gy之间、约30Gy与约50Gy之间、约30Gy与约45Gy之间、约30Gy与约40Gy之间的剂量。
如本文更详细描述的，电离辐射典型地作为分次放疗来施用。
在一些实施例中，所述脑肿瘤是神经胶质瘤或室管膜瘤。在一些实施例中，所述脑肿瘤是神经胶质瘤。神经胶质瘤可以是成人神经胶质瘤或儿科神经胶质瘤并且可以是高级别神经胶质瘤或低级别神经胶质瘤。在一些实施例中，所述神经胶质瘤是儿科神经胶质瘤。在一些实施例中，所述神经胶质瘤是高级别神经胶质瘤，诸如选自由以下组成的列表的神经胶质瘤：少突神经胶质瘤、间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、和弥漫性中线神经胶质瘤。在一些实施例中，所述神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
如本文中进一步证明的，本发明PARP抑制剂与电离辐射的组合被证明治疗H3K27M-突变型弥漫性中线神经胶质瘤的细胞系模型。H3K27M-突变型弥漫性中线神经胶质瘤是与预后不良相关的高级别儿科脑肿瘤并且目前的治疗策略具有治疗的挑战。本文证明的数据支持本发明PARP抑制剂用于治疗这些挑战性神经胶质瘤的方法中的潜力。
因此，在一些实施例中，所述神经胶质瘤是H3K27M突变型神经胶质瘤。
还可获得的是用于治疗患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法中的PARP抑制剂，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的PARP抑制剂，其中所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型，并且其中所述PARP抑制剂是如第一方面中定义的式I的化合物。
还可获得的是用于治疗患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法中的PARP抑制剂，所述方法包括向患者(例如，单独、顺序或同时)施用治疗有效量的PARP抑制剂，以及
i)烷基化化疗剂；和/或
ii)以10Gy或更高剂量施用的电离辐射。
其中所述PARP抑制剂是如第一方面中定义的式I的化合物。
还可获得的是用于治疗患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法中的烷基化化疗剂，所述方法包括向受试者(例如，单独、顺序或同时)施用烷基化化疗剂和治疗有效量的PARP抑制剂，其中PARP抑制剂是如第一方面中定义的式I的化合物。
在以上实施例的一个方面，式(I)的化合物具有式(Ia)：
其中：
R1独立地选自H、C1-4烷基、C1-4氟烷基、和C1-4烷氧基；
R2独立地选自H、卤代、C1-4烷基、和C1-4氟烷基；并且
R3是H或C1-4烷基；
R4是卤代或C1-4烷基，
或其药学上可接受的盐。
在以上实施例的一个方面，式(I)或式(Ia)的R1选自甲基、乙基、异丙基、环丙基、1,1-二氟乙基、1-氟乙基、三氟甲基、二氟甲基和甲氧基中的任一个。在一个特定方面，R1是甲基或乙基。
在以上实施例的一个方面，式(I)或式(Ia)的R2选自H、氯、氟、甲基和二氟甲基中的任一个。在一方面，R2是氟或甲基。
在以上实施例的一个方面，式(I)或式(Ia)的R3是甲基或乙基。
在以上实施例的一个方面，式(I)或式(Ia)的R4选自氯、氟和甲基中的任一个。在一个特定方面，R4是氟。
在以上实施例的一个方面，提供了式(I)或式(Ia)的化合物，其中R1是C1-4烷基，R2是卤代，R3是C1-4烷基，R4是卤代或C1-4烷基，或其药学上可接受的盐。
在又一方面，式(I)或式(Ia)的化合物呈游离碱形式。
在一方面，提供了式(I)的化合物，所述化合物是5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐。
在一方面，提供了式(I)的化合物，所述化合物是6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐。
在一方面，提供了式(I)的化合物，所述化合物是6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺结晶形式B或其药学上可接受的盐。
在一方面，提供了式(I)的化合物，所述化合物是6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺结晶形式D或其药学上可接受的盐。
在一方面，提供了式(I)的化合物，所述化合物是6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺甲磺酸盐，任选地作为结晶形式C。
通过阅读本说明书，本领域技术人员将清楚其他方面。
众所周知，由人类ether-à-gogo相关基因(hERG)编码的心脏离子通道的阻断是药物发现和开发的风险因素。hERG的阻塞会引起安全性问题，诸如心律失常。有利地，式(I)的化合物具有低的hERG活性。在一方面，式(I)的化合物具有IC50>10μM。在一方面，式I的化合物具有IC50>20μM。
为了使脱靶效应的风险最小化，希望药物分子具有对特定靶标的选择性。式I的化合物有利地具有对PARP1的选择性超过对于PARP家族的其他成员(包括PARP2、PARP3、PARP5a和PARP6)。有利地，式(I)的化合物对PARP1具有的选择性超过PARP2。在一方面，式(I)的化合物对PARP1的选择性是PARP2的10倍。在一方面，式(I)的化合物对PARP1的选择性是PARP2的100倍。
在一方面，患者对于BRCA1和/或BRCA2或其调节剂中的一个或多个变异(诸如突变和多态性)是杂合的。对BRCA1和BRCA2中变异的检测是本领域众所周知的并且例如描述于例如EP 699754、EP 705903、Neuhausen和Ostrander 1997；Chappnis和Foulkes 2002；Janatova等人,2003；Jancarkova 2003)。BRCA2结合因子EMSY的扩增的确定描述于Hughes-Davies等人(Hughes-Davies等人2003)中。
与癌症相关的突变和多态性可以通过检测变体核酸序列的存在而在核酸水平上检测，或者通过检测变体(即突变体或等位基因变体)多肽的存在而在蛋白质水平上检测。
定义
烷基基团和部分是直链的或支链的，例如C1-8烷基、C1-6烷基、C1-4烷基或C5-6烷基。烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基以及正辛基，诸如甲基或正己基。
环烷基是饱和的环状烷基。C3-6环烷基是具有3至6个碳原子的饱和环状烷基。C3-6环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。C3-6环烷基包括C3-5环烷基和C3-4环烷基。
氟烷基是其中一个或多个H原子被一个或多个氟原子替代的烷基，例如C1-8氟烷基、C1-6氟烷基、C1-4氟烷基或C5-6氟烷基。实例包括氟甲基(CH2F-)、二氟甲基(CHF2-)、三氟甲基(CF3-)、2,2,2-三氟乙基(CF3CH2-)、1,1-二氟乙基(CH3CHF2-)、2,2-二氟乙基(CHF2CH2-)、1-氟乙基(CH3CHF-)和2-氟乙基(CH2FCH2-)。
卤代意指氟、氯、溴、和碘。在一方面，卤代是氟或氯。
烷氧基是经由氧原子与分子的其余部分连接的烷基。合适的C1-4烷基氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
在本说明书中，除非另外说明，否则如本文所用的术语“药学上可接受的”是指在合理医学判断范围内，适合用于与人类和动物组织接触使用而没有过多的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症(与合理的益处/风险比相称)的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
在本说明书中，除非另外说明，否则短语“有效量”意指化合物或组合物的足以显著和积极地改变待治疗的症状和/或病症(例如，提供积极的临床反应)的量。用于药物组合物中的活性成分的有效量将随所治疗的特定病症、病症的严重程度、治疗的持续时间、同步疗法的性质、所利用的一种或多种特定活性成分、所利用的一种或多种特定药学上可接受的赋形剂/载体、以及处于主治医生的知识和专业知识范围内的类似因素而变化。
除非另有指示，否则如本文所用的术语“治疗”是指逆转、缓解或预防此术语所适用的障碍或病症或者此障碍或病症的一个或多个症状，抑制其进展，延迟其进展，延迟其发作。除非另有指示，如本文所用的术语“治疗”是指按照如上所定义的“治疗”进行治疗的行为。术语“治疗”还包括受试者的辅助治疗和新辅助治疗。为免存疑，本文提及的“治疗”包括提及治愈性、姑息性和预防性治疗以及用于这种治疗的药剂的施用。
式(I)或式(Ia)的化合物可以形成稳定的药学上可接受的酸或碱的盐，并且在此类情况下施用作为盐的化合物可能是适当的。酸加成盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐(camphorate)、樟脑磺酸盐、胆碱、柠檬酸盐、环己基氨基磺酸盐、二乙基二胺、乙磺酸盐、富马酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、2-羟乙基磺酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴化物、氢碘化物、羟基马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate)(甲磺酸盐(mesylate))、葡甲胺、2-萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、过硫酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、奎尼酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺胺酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐(对甲苯磺酸盐)、三氟乙酸盐和十一烷酸盐。尽管其他的盐可以用于诸如分离或纯化产物，但是无毒的生理学上可接受的盐是优选的。
所述盐可以通过常规手段来形成，诸如通过在所述盐不可溶的溶剂或介质中或在这样的溶剂诸如水(在真空中或通过冷冻干燥除去)中使产物的游离碱形式与一或多当量的适当酸反应，或通过在适合的离子交换树脂上将现有的盐的阴离子交换为另一种阴离子。
式(I)或式(Ia)的化合物可以具有超过一个手性中心，并且应理解本申请涵盖所有个体立体异构体、对映异构体和非对映异构体及其混合物。因而，应当理解，在式I的化合物可凭借一个或多个不对称碳原子而以光学活性形式或外消旋形式存在的情况下，本申请包括在其定义中任何此类具有上述活性的光学活性形式或外消旋形式。本申请涵盖具有如本文中定义的活性的所有此类立体异构体。
因此，贯穿本说明书，在提及式(I)或式(Ia)的化合物时，应理解术语化合物包括作为PARP1抑制剂的非对映异构体、非对映异构体的混合物以及对映异构体。
还应理解，某些式(I)或式(Ia)的化合物及其药用盐可以以溶剂化形式连同非溶剂化形式(例如像水合形式和无水形式)存在。应当理解，本文中的化合物涵盖所有此类溶剂化形式。为了清楚起见，这包括化合物游离形式的溶剂化(例如，水合)形式以及化合物的盐的溶剂化(例如，水合)形式两者。
如本文所述的式(I)或式(Ia)旨在涵盖其组成原子的所有同位素。例如，H(或氢)包括氢的任何同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C包括碳的任何同位素形式，包括12C、13C和14C；O包括氧的任何同位素形式，包括16O、17O和18O；N包括氮的任何同位素形式，包括13N、14N和15N；F包括氟的任何同位素形式，包括19F和18F；等。在一方面，式I的化合物包括本文中涵盖的原子的同位素，所述同位素的量对应于其天然存在的丰度。然而，在某些情况下，可能希望的是使一种或多种原子富集于正常将以较低丰度存在的具体同位素。例如，1H正常地将以大于99.98％的丰度存在；然而，在一方面，本文中呈现的任何式的化合物可以在H的存在下在一个或多个位置处富集2H或3H。在另一方面中，当本文中呈现的任何式的化合物富集于放射性同位素(例如，3H和14C)时，所述化合物可以用于药物和/或底物组织分布测定。应理解，本申请涵盖所有此类同位素形式。
式(I)或式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐通常会经由口服途径以药物制剂形式施用，所述药物制剂包含活性成分或其药学上可接受的盐或溶剂化物或此类盐的溶剂化物，呈药学上可接受的剂型。取决于待治疗的障碍和患者，所述组合物可以按不同剂量施用。
以上所述的式(I)或式(Ia)的化合物的药物配制品可以被制备用于口服施用，具体地呈片剂或胶囊形式，并且尤其涉及目的在于提供靶向结肠的药物释放的技术(Patel,2011)。
上以上所述的式(I)或式(Ia)的化合物的药物配制品可以方便地以单位剂型施用，并且可以通过制药领域中众所周知的任何方法，例如，如Remington's PharmaceuticalSciences[雷明顿药物科学],第17版,Mack Publishing Company,Easton,PA.[马克出版公司,伊斯顿,宾夕法尼亚州],(1985)中所述的制备。
适于口服施用的药物配制品可以包含一种或多种生理上可相容的载体和/或赋形剂，并且可以呈固体或液体的形式。片剂和胶囊可以用粘合剂、填充剂、润滑剂和/或表面活性剂(诸如十二烷基硫酸钠)制备。液体组合物可以含有常规添加剂，诸如助悬剂、乳化剂和/或防腐剂。液体组合物可以包封在例如明胶中以提供单位剂型。固体口服剂型包括片剂、两件式硬壳胶囊和软弹性明胶(SEG)胶囊。此类两件式硬壳胶囊可以例如通过将式(I)的化合物填充到明胶或羟丙基甲基纤维素(HPMC)壳中来制备。
干壳配制品典型地包含约40％至60％w/w浓度的明胶、约20％至30％浓度的增塑剂(诸如甘油、山梨糖醇或丙二醇)和约30％至40％浓度的水。也可以存在其他材料，诸如防腐剂、染料、遮光剂和调味剂。液体填充材料包括已经溶解、增溶或分散(用助悬剂，诸如蜂蜡、氢化蓖麻油或聚乙二醇4000)的固体药物或在媒介物或多种媒介物(诸如矿物油、植物油、甘油三酯、二醇、多元醇和表面活性剂)的组合中的液体药物。
在治疗性地治疗人类时，式(I)或式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐的合适的每日剂量是约0.0001-100mg/kg体重。
口服配制品是优选的，特别是片剂或胶囊，其可以通过本领域技术人员已知的方法配制，以提供在0.1mg至1000mg范围内的活性化合物的剂量。
分子标记物
脑肿瘤诸如神经胶质瘤和神经母细胞瘤可以基于其基因和分子分类进行表征。
在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型。
人中的ATRX基因跨越X染色体长臂q21.1带的几乎300kbp。含有36个外显子的基因编码分子量为282,586kDa的2492个氨基酸的蛋白质，尽管可替代地已鉴定出剪接转录变体。用于人ATRX的NCBI Entrez基因ID是基因ID：546。所述蛋白质含有ATP酶/解旋酶结构域和称为ADD(ATRX-DNMT3-DNMT3L，ADDATRX)的结构域，其与组蛋白H3结合。人ATRX的最长同种型的氨基酸序列作为NCBI参考序列：NP_000480.3提供。
神经胶质瘤中ATRX基因中的失活突变均匀分布在整个基因中，并且据报道，在7％的成人胶质母细胞瘤(GBM)中以及14％-31％的儿科GBM中发生(Jiao等人2012)。据报道，ATRX丧失促进肿瘤生长并且损害神经胶质瘤中的非同源末端连接DNA修复(Koschmann等人2017)。
如本文所用，包含ATRX缺陷表型的脑肿瘤或神经母细胞瘤意指癌症细胞中ATRX活性降低或消除。ATRX活性典型地通过ATRX基因中的突变来去除或消除。因此，在一些实施例中，包含ATRX缺陷表型的脑肿瘤或神经母细胞瘤包括ATRX基因中具有突变的癌症细胞。癌症细胞中的此类突变典型地是杂合的，并且癌症细胞包含一个ATRX基因突变体拷贝和一个野生型拷贝。
在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含异柠檬酸脱氢酶(IDH)1和/或2缺陷表型。在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含IDH1缺陷表型。在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含IDH2缺陷表型。在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤包含IDH1和IDH2缺陷表型。在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤不包含IDH1缺陷表型(即，它是IDH1野生型)。在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤不包含IDH2缺陷表型(即，它是IDH2野生型)。在一些实施例中，所述脑肿瘤或神经母细胞瘤不包含IDH1或IDH2缺陷表型(即，它是IDH1和IDH2野生型)。
IDH1和IDH2中的突变在人类恶性肿瘤中普遍存在。在神经胶质瘤中，在世界卫生组织(WHO)II/III级案例的>80％中识别出IDH1和IDH2突变。与癌症相关的IDH1和IDH2突变倾向于定位于精氨酸残基，所述精氨酸对于异柠檬酸盐的识别和酶的催化活性而言至关重要(对于IDH1为R132，对于IDH2为R140或R172)。降低或消除这些酶的催化活性会影响细胞对抗活性氧物质(reactive oxygen species)的能力(Cohen等人2013)。人IDH1的NCBIEntrez基因ID是基因ID：3417，并且人IDH2的NCBI Entrez基因ID是基因ID：3418。人IDH1的氨基酸序列提供为NCBI参考序列：NP_001269315.1，并且人IDH2的氨基酸序列提供为NCBI参考顺序：NP_001276839.1。
如本文所用，包含IDH1和/或IDH2缺陷表型的脑肿瘤或神经母细胞瘤意指癌症细胞中IDH1和/或IDH2活性降低或消除。IDH1或IDH2活性典型地分别通过IDH1或IDH2基因中的突变来去除或消除。因此，在一些实施例中，包含IDH1和/或IDH2缺陷表型的脑肿瘤或神经母细胞瘤包括所述一个或多个IDH1和/或IDH2基因中具有突变的癌症细胞。癌症细胞中的此类突变典型地是杂合的，并且癌症细胞包含一个IDH1基因突变体拷贝和一个野生型拷贝。IDH1基因中的突变可以是编码IDH1的氨基酸残基R132的核苷酸处的非同义突变，而IDH2基因中的突变可以是在编码IDH2的氨基酸残基R140或R174的核苷酸处非同义突变。
在一些实施例中，脑肿瘤或神经母细胞瘤包含O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化。
人中的MGMT基因位于染色体10q26.3上并且编码高度进化保守且普遍表达的参与DNA修复的酶。MGMT基因启动子的甲基化诱导MGMT蛋白水平的降低，并且已经在大约50％的GBM中观察到。
在一些实施例中，所述方法包括诊断患者为患有包含以上分子标记物(ATRX突变、IDH突变和MGMT甲基化)中的一种或多种的脑肿瘤或神经母细胞瘤的又一步骤。可以使用各种方法来进行这些肿瘤的基因组表征以及进行诊断。例如，诊断步骤可以涉及从肿瘤中手术分离细胞，并且测定从患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤(即，肿瘤活检)中获得的细胞。可替代地，可以使用非侵入性方法。例如，有报道称，从患有脑肿瘤的患者的脑脊液(CSF)中获得无细胞循环肿瘤DNA，并且对CSF样品进行测定(Martínez-Ricarte等人2018)。
可以使用本领域技术人员已知的任何方法评估来自患者的样品(例如，来自肿瘤的细胞和/或CSF样品)的ATRX突变、IDH1和/或IDH2突变。作为非限制性实例，此类方法包括：磁共振、化学测定(例如，高效液相色谱法(HPLC))、测序和PCR。
已知多种测定，并且可用于评估MGMT基因启动子甲基化。合适的测定包括Mansouri等人2019中描述的测定，并且包括例如甲基化特异化PCR、焦测序、定量实时PCR高分辨率解链、甲基化特异性多重连接依赖性探针扩增和免疫组织化学。
也可以基于其基因组不稳定性水平来表征脑肿瘤或神经母细胞瘤。研究证明，DNA损伤检查点信号传导在神经胶质瘤中异常且组成性地活跃，其可以使用持续进行的DNA复制应激的标记物诸如γgH2AX；Chk2、Chk1和Rad17的磷酸化来测量(Bartkova等人2010)。在一些实施例中，脑肿瘤或神经母细胞瘤被表征为具有高水平的基因组不稳定性，这可以通过包含高(例如，高于非肿瘤细胞)水平的γgH2AX；Chk2、Chk1和Rad17的磷酸化来证明。
治疗性应用
除非另有指示，否则如本文所用的术语“治疗”是指逆转、缓解或预防此术语所适用的障碍或病症或者此障碍或病症的一个或多个症状，抑制其进展，延迟其进展，延迟其发作。除非另有指示，如本文所用的术语“治疗”是指按照如上所定义的“治疗”进行治疗的行为。术语“治疗”还包括受试者(患者)的辅助治疗和新辅助治疗。为免存疑，本文提及的“治疗”包括提及治愈性、姑息性和预防性治疗以及用于这种治疗的药剂的施用。
在本说明书中，除非另外说明，否则短语“有效量”意指化合物或组合物的足以显著和积极地改变待治疗的症状和/或病症(例如，提供积极的临床反应)的量。用于药物组合物中的活性成分的有效量将随所治疗的特定病症、病症的严重程度、治疗的持续时间、同步疗法的性质、所利用的一种或多种特定活性成分、所利用的一种或多种特定药学上可接受的赋形剂/载体、以及处于主治医生的知识和专业知识范围内的类似因素而变化。
本发明的PARP抑制剂可以被配制为用于临床用途的药物组合物，并且可以包含药学上可接受的载体、稀释剂或佐剂。所述组合物可以被配制用于局部、肠胃外、静脉内、肌内、鞘内、眼内、皮下、口服、吸入或透皮施用途径，其可以包括注射。可注射配制品可以包含在无菌或等渗介质中的所选化合物。
本发明的PARP抑制剂通常会经由口服途径以药物制剂形式施用，所述药物制剂包含活性成分或其药学上可接受的盐或溶剂化物或此类盐的溶剂化物，呈药学上可接受的剂型。取决于待治疗的障碍和患者，所述组合物可以按不同剂量施用。
本文所述PARP抑制剂的药物配制品可以被制备用于口服施用，具体地呈片剂或胶囊形式，并且尤其涉及目的在于提供靶向结肠的药物释放的技术(Patel,2011)。
在人类的治疗性治疗中本文所述PARP抑制剂的合适每日剂量是约0.0001-100mg/kg体重。
口服配制品是优选的，特别是片剂或胶囊，其可以通过本领域技术人员已知的方法配制，以提供在0.1mg至1000mg范围内的活性化合物的剂量。在一些实施例中，施用于患者的PARP抑制剂的量在10mg/天至500mg/天之间、在20mg/天至500mg/天之间、或在40mg/天至500mg/天之间、或在10mg/天至400mg/天之间、在20mg/天至400mg/天之间、或在40mg/天至400mg/天之间。
组合
在一些实施例中，所述方法包括施用PARP抑制剂与烷基化化疗剂和/或电离辐射的组合。此类组合治疗可以包括单独、顺序或同时施用PARP抑制剂和烷基化化疗剂和/或电离辐射。
还提供了一种药物产品，所述药物产品包含i)如本文所定义的PARP抑制剂，和ii)烷基化化疗剂。PARP抑制剂和烷基化化疗剂典型地以单独的剂型存在。
烷基化化疗剂可以是替莫唑胺(TMZ)。
TMZ是GBM的护理标准(SOC)化疗(Stupp等人,2014；Stupp等人,2010)。治疗可以涉及每28天周期施用150–200mg/m2/天的剂量，持续5天。替莫唑胺具有以下结构：
因此，在一些实施例中，所述方法可以包括施用治疗有效量的如本文所述PARP抑制剂(例如，在10mg/天至500mg/天之间)以及施用150-200mg/m2/天的TMZ。这种治疗可以在28天周期内进行，其中TMZ在前5天每天施用并且然后在周期的剩余天数停止。PARP抑制剂可以在28天周期的每一天施用或者可以仅在施用TMZ时施用(例如，仅在28天周期的前5天期间施用)。
本文提供的数据还证明，本文所述PARP抑制剂可以在体外和体内模型中以相对低的TMZ剂量提供抗肿瘤益处。不希望受到理论的束缚，据信，本文所述PARP抑制剂可以能够在较低的TMZ剂量(例如，低于用于治疗所讨论疾病的TMZ的SOC剂量)下实现临床益处(例如，肿瘤减少)。
因此，在一些实施例中，按以下(例如，每日)剂量施用TMZ：小于约200mg/m2、小于约175mg/m2、小于约150mg/m2、小于约125mg/m2、小于约100mg/m2、小于约75mg/m2、或小于约50mg/m2。
在一些实施例中，按以下(例如，每日)剂量施用TMZ：在约50与200mg/m2之间、在约50与175mg/m2之间、在约50与150mg/m2之间、在约50与125mg/m2之间、在约50与100mg/m2之间、在约50与75mg/m2之间、在约75与200mg/m2之间、在约75与175mg/m2之间、在约75与150mg/m2之间、在约75与125mg/m2之间、在约75与100mg/m2之间、在约100与200mg/m2之间、在约125与175mg/m2之间、或在约125与150mg/m2之间。
烷基化化疗剂可以是二去水卫矛醇(VAL-083)。VAL-083是一种血脑屏障渗透烷化剂，所述烷化剂可以诱导DNA链间交联并且导致双链DNA断裂(Jimenez-Alcazar等人,2021)。
VAL-083已被授予用于治疗GBM的FDA和EMA罕用药物指定，所述药物在先前的TMZ治疗方案上取得了进展。目前，VAL-083处在用于MGMT甲基化和非甲基化GBM患者(NCT03050736、NCT02717962和NCT03138629)的临床试验中，并且具有以下结构：
与放疗组合的30mg/m2/天的VAL-083被描述为总体安全且耐受性良好。每21天在第1、2和3天施用VAL-083。
因此，在一些实施例中，所述方法可以包括施用治疗有效量的如本文所述PARP抑制剂(例如，在10mg/天至500mg/天之间)以及施用10-50mg/m2/天(例如，30mg/m2/天)的VAL-083。这种治疗可以在21天周期内进行，其中VAL-083在前3天每天施用并且然后在周期的剩余天数停止。PARP抑制剂可以在21天周期的每一天施用或者可以仅在施用VAL-083时施用(例如，仅在21天周期的前3天期间施用)。
在一些实施例中，按以下(例如，每日)剂量施用VAL-083：小于约50mg/m2、小于约40mg/m2、小于约30mg/m2、或小于约20mg/m2。
在一些实施例中，按以下(例如，每日)剂量施用VAL-083：在约10与50mg/m2之间、在约10与40mg/m2之间、或在约10mg/m2与30mg/m2之间。
在一些实施例中，本文所述PARP抑制剂可以与电离辐射组合施用(例如，用于治疗H3K27M神经胶质瘤)。除了烷基化化疗剂之外或代替烷基化化疗剂，可以施用电离辐射。
在某些实施例中，电离辐射的剂量是约10Gy、约15Gy、约20Gy、约25Gy、约30Gy、约35Gy、约40Gy、约45Gy、约50Gy、约55Gy、约60Gy、约65Gy、约70Gy、约75Gy、约80Gy、约90Gy、或约100Gy。在一些实施例中，电离辐射的剂量小于约100Gy、小于约90Gy、小于约80Gy、小于约70Gy、小于约60Gy、小于约50Gy、小于约45Gy、小于约40Gy、小于约35Gy、小于约30Gy、小于约25Gy、小于约20Gy。在某些实施例中，放疗的剂量是10Gy或更高、大于约15Gy、大于约20Gy、大于约25Gy、大于约30Gy、大于约35Gy、大于约40Gy、大于约45Gy、大于约50Gy。在一些实施例中，放疗的剂量在约10Gy与约100Gy之间。在一些实施例中，放疗的剂量在约20Gy与约80Gy之间。在一些实施例中，放疗的剂量在约20Gy与约60Gy之间。
电离辐射的剂量可以作为分次放疗来施用(即，几天/几周内每天施用总剂量的一部分)。例如，上述剂量可以在4-6周内以20-30个部分施用。
电离辐射的施用剂量可以取决于所治疗的肿瘤和/或患者的年龄(例如，成人或儿科)。例如，在原发性GBM(IDH野生型和ATRX野生型)的治疗中，可以使用60Gy的剂量，而在复发性GBM(可以是IDH突变体/ATRX突变体)的治疗中，可以使用35Gy的剂量。
本文提供的数据还证明，本文所述PARP抑制剂可以在体外模型中以相对低的电离辐射提供抗肿瘤益处。不希望受到理论的束缚，据信，本文所述PARP抑制剂可以能够在较低的电离辐射剂量(例如，低于用于治疗所讨论疾病的电离辐射的SOC剂量)下实现临床益处(例如，肿瘤减少)。
因此，在一些实施例中，电离辐射按剂量施用：小于约60Gy、小于约55Gy、小于约50Gy、小于约45Gy、或小于约40Gy。在一些实施例中，电离辐射按剂量施用：约20Gy与约60Gy之间、约20Gy与约55Gy之间、约20Gy与约50Gy之间、约20与约45Gy之间、或约20与约40Gy之间、约30Gy与约60Gy之间、约30Gy与约55Gy之间、约30Gy与约50Gy之间、约30Gy与约45Gy之间、约30Gy与约40Gy之间的剂量。
疾病
本文所述方法用于治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤。
可通过这些方法治疗的脑肿瘤的实例包括神经胶质瘤和室管膜瘤。在一些实施例中，正在治疗的脑肿瘤是神经胶质瘤。
适合治疗的神经胶质瘤包括成人和儿科神经胶质瘤以及高级别和低级别神经胶质瘤。高级别神经胶质瘤的实例包括少突神经胶质瘤、间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、和弥漫性中线神经胶质瘤。低级别神经胶质瘤的实例包括毛细胞型星形细胞瘤、视路神经胶质瘤、顶盖神经胶质瘤、少突神经胶质瘤、神经节神经胶质瘤、和多形性黄色星形细胞瘤。在一些实施例中，正在治疗的脑肿瘤是高级别神经胶质瘤。
在一些实施例中，正在治疗的脑肿瘤是胶质母细胞瘤。在一些实施例中，正在治疗的脑肿瘤是胶质母细胞瘤，例如成人胶质母细胞瘤。在一些实施例中，正在治疗的脑肿瘤是弥漫性中线神经胶质瘤，例如儿科弥漫性中线神经胶质瘤。在一些实施例中，正在治疗的脑肿瘤是H3K27M突变型神经胶质瘤。
附图说明
图1示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式B的X-射线粉末衍射图
图2示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式B的DSC迹线
图3示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式D的X-射线粉末衍射图
图4示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式D(ORTEP50)的单晶结构
图5示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺MSA盐形式C的X-射线粉末衍射图
图6示出了6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺MSA盐形式C的DSC迹线
图7示出了在具有ATRX突变(SJG2IDH1wt和SJG2IDH1mt)但不具有野生型ATRX(U87IDH1wt和U87 IDH1mt)的神经胶质瘤细胞中代表有效PARP抑制剂单一疗法活性的细胞融合度图。示出了代表性图，误差条表示+/-SD
图8示出了代表在U87 IDH1wt(A)和U87 IDH1mtR132H(B)等基因对中PARP抑制剂加强TMZ功效的细胞融合度图。示出了3个生物复制的代表性图，误差条表示+/-SD
图9示出了代表在SJ-G2 IDH1wt(A)和SJ-G2 IDH1mt R132H(B)等基因对中PARP抑制剂加强TMZ功效的细胞活力图。示出了代表性图，误差条表示+/-SD
图10示出了用以下给药的U87MG异种移植模型的抗肿瘤功效(A)和体重变化(B)：i)媒介物；ii)仅化合物20(3mg/kg QD)；iii)较低剂量的TMZ(在第1-5和29-33天，6.25mg/kg QD)；iv)较高剂量的TMZ(在第1-5和29-33天，25mg/kg QD)；和v)化合物20和较低剂量TMZ的组合。
图11示出了代表在U87 IDH1wt(A)和U87 IDH1mt R132H(B)等基因对中PARP抑制剂加强VAL-083功效的细胞融合度图。示出了代表性图，误差条表示+/-SD
图12示出了代表在SJ-G2 IDH1wt(A)和SJ-G2 IDH1mt R132H(B)等基因对中PARP抑制剂加强VAL-083功效的细胞融合度图。示出了代表性图，误差条表示+/-SD
图13示出了代表在BT245 H3K27M儿科神经胶质瘤中PARP抑制剂加强IR功效的细胞融合度图。示出了代表性图，误差条表示+/-SD
实例
现在将通过参考以下非限制性实例来进一步解释本申请的化合物。
通用实验条件
除非另有说明，否则使用Bruker 300MHz、400MHz或500MHz光谱仪，在27℃下获得1H NMR光谱；化学位移以百万分率(ppm，δ单位)表示，并参考溶剂的残留单1H同位素体(CHCl3：7.24ppm；CHDCl2：5.32ppm；CD3S(＝O)CD2H：2.49ppm)。耦合常数是以赫兹(Hz)为单位给出。分裂模式描述了明显的多重性，并且被指定为s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重奏)、m(多峰)和br s(宽峰)。LC-MS使用装有Waters SQD质谱仪的Waters UPLC或装有Shimadzu 2020质谱仪的Shimadzu LC-20AD LC-20XR LC-30AD进行。除非另有说明，否则报告的分子离子对应于[M+H]+；对于具有多个同位素模式的分子(Br、Cl等)，除非另有说明，否则报告值是对于最低同位素质量获得的值。
使用以下进行快速色谱法：在来自BiotageTM的SP1TM纯化系统上、来自ISCO的Rf或在来自赛默飞世尔公司(Thermo Fisher)的Gilson上，使用正相二氧化硅FLASH+TM(40M、25M或12M)或SNAPTM KP-Sil筒柱(340、100、50或10)、来自Agela的快速柱硅胶-CS柱，使用C18-快速柱的直相快速色谱法，或使用标准快速色谱法。通常，所有使用的溶剂都是可商购的并且是分析级的。无水溶剂常规用于反应。在这些实例中使用的相分离器是相分离柱。使用来自先进化学发展股份有限公司(Advanced ChemistryDevelopment,Inc.)(ACD/实验室)的ACD/名称12.01来命名以下命名的中间体和实例。起始材料是从商业来源获得的或通过文献路线制备的。
X-射线粉末衍射(XRPD)分析
XRPD分析使用Bruker D8衍射仪进行，所述衍射仪可商购自布鲁克AXS公司(Bruker AXS IncTM)(麦迪逊，威斯康星州)。XRPD光谱通过将用于分析的材料样品(大约10mg)安装在单硅晶体晶片支架上(例如，布鲁克硅零背景X-射线衍射样品架)并且借助于显微镜载玻片将该样品铺展成薄层获得。将样品以30转/分钟旋转(以改善计数统计)并且用由在40kV和40mA下操作的铜制长细聚焦管产生的具有1.5406埃(即，约1.54埃)的波长的X-射线来照射。以θ-θ模式中在从5°至40°的2-θ的范围内，使样品每0.02°的2-θ增量(连续扫描模式)暴露1秒。D8的运行时间约15min。
XRPD 2θ值可在合理的范围内变化，例如在±0.2°的范围内变化，并且当由于各种各样的原因(包括例如优选的方向)对基本上相同的结晶形式进行测量时XRPD强度可能变化。XRPD的原理被描述于出版物中，例如Giacovazzo,C.等人(1995),Fundamentals ofCrystallography[晶体的基本原理],Oxford University Press[牛津大学出版社]；Jenkins,R.和Snyder,R.L.(1996),Introduction to X-Ray Powder Diffractometry[对X-射线粉末衍射的介绍],John Wiley&Sons[约翰威利父子出版公司],纽约；和Klug,H.P.&Alexander,L.E.(1974),X-ray Diffraction Procedures[X-射线衍射程序],John Wileyand Sons[约翰威利父子出版公司],纽约。
DSC分析
对于根据标准方法制备的样品，使用可获得自TA(纽卡斯尔，特拉华州)的Q SERIESTMQ1000DSC热量计进行DSC分析。将样品(大约2mg)称量到铝样品盘中并且转移到DSC中。将仪器用氮气以50mL/min吹扫并且使用10℃/分钟的动态加热速率收集在22℃与300℃之间的数据。将热数据使用标准软件(例如，来自TA的通用v.4.5A)进行分析。
使用以下缩写：AcOH＝乙酸；aq＝水性；BAST＝双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫；Boc2O＝二碳酸二叔丁酯；Boc＝叔丁氧基羰基；CDCl3＝氘代氯仿；CD3OD＝氘代甲醇；CH3NO2＝硝基甲烷；DAST＝二乙基氨基三氟化硫；DCE＝1,2-二氯乙烷；DCM＝二氯甲烷；DDQ＝2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；DEA＝二乙胺；DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯；戴斯-马丁高碘烷＝1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3-(1H)-酮；DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺；DMAP＝2,6-二甲基氨基吡啶；DMF＝N,N-二甲基甲酰胺；DMSO＝二甲基亚砜；DMSO-d6＝氘代二甲亚砜；DPPA＝叠氮磷酸二苯酯；dppf＝1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁；DIAD＝(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯；DSC＝差示扫描量热法；DTAD＝(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二叔丁酯；ee＝对映异构体过量；eq.＝当量；ESI或ES＝电喷射离子化；Et2O＝乙醚；EtOAc或EA＝乙酸乙酯；EtOH＝乙醇；FA＝甲酸；格拉布斯(Grubbs)催化剂(1,3-二荚基咪唑啉-2-亚基)(三环己基膦)二氯化钌；h＝小时；HATU＝(二甲基氨基)-N,N-二甲基(3-氧化-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶基)甲亚胺鎓六氟磷酸盐；HCl＝盐酸；H2O2＝过氧化氢；HP＝高压；IPA＝异丙醇；KF＝氟化钾；LC＝液相色谱法；LiClO4＝高氯酸锂；mmol＝毫摩尔；mCPBA＝间氯过氧苯甲酸；MeOH＝甲醇；min＝分钟；MeCN或CH3CN或ACN＝乙腈；MeNO2＝硝基甲烷；MS＝质量＝谱法；NBS＝N-溴琥珀酰亚胺；NH4Cl＝氯化铵；NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮；NMR＝核磁共振；Pd/C＝钯碳；Pd2dba3＝三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)；PdCl2(dppf)＝1,1'-双(二-叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯；PE＝石油醚；PPh3＝三苯基膦；rt＝室温；Rt或RT＝保留时间；Ruphos Pd G3＝(2-二环己基膦基-2’,6’-二异丙氧基-1,1’-联苯基)[2-(2’-氨基-1,1’联苯基)]钯(II)甲磺酸盐；Pd-PEPPSITM-IPent＝二氯[1,3-双(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)钯(II)、[1,3-双(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯钯(II)、[1,3-双(2,6-二-3-戊基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)；XphosPd G2＝氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)、X-Phos氨基联苯基氯化钯；CataCXium A-Pd-G2＝氯[(二(1-金刚烷基)-N-丁基膦)-2-(2-氨基联苯基)]钯(II)；sat＝饱和的；SFC＝超临界流体色谱法；T3P＝2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物；PPh3O＝三苯基氧化膦；TBTU＝2-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基异脲鎓四氟硼酸盐；TFA＝三氟乙酸；THF＝四氢呋喃；TLC＝薄层色谱法；TMS＝三甲基甲硅烷基；Xantphos＝4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨；CBr4＝四溴化碳；HBr＝氢溴酸；Cs2CO3＝碳酸铯；MgSO4＝硫酸镁；NaHCO3＝碳酸氢钠；DDQ＝2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；SOCl2＝亚硫酰氯；DIBAL-H＝氢化二异丁基铝；NH4HCO3＝碳酸氢铵；BINAP＝2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘；SM＝起始材料；CH2Cl2＝二氯甲烷；Et3N＝三乙胺；HCO2H＝甲酸；LCMS＝液相色谱-质谱法；N2＝二氮；Na2SO4＝硫酸钠；NH4CO3＝碳酸铵；UV＝紫外线；XPhos Pd G2＝氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)；Pd(OAc)2＝醋酸钯(II)，ppt＝沉淀。
实例的制备
中间体2：1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基-苯
在0℃下向1-氟-3-甲基-2-硝基-苯(10.7g，68.98mmol)(中间体1)在TFA(50mL)中的溶液中缓慢添加浓H2SO4(20mL)，然后分批添加NBS(13.50g，75.87mmol)。添加后，将混合物在室温下搅拌4h。将所得混合物倒在冰上，并且通过过滤收集形成的沉淀，用水洗涤并且在真空下干燥以得到呈白色固体的1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基-苯(中间体2)(14.80g，92％)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)2.43(3H,s),7.03(1H,t),7.68(1H,dd)。
中间体3：2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸
将1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基-苯(13.8g，58.97mmol)(中间体2)、丙氨酸(6.30g，70.76mmol)和碳酸钾(24.45g，176.90mmol)在DMF(15mL)中的混合物在100℃下搅拌5h，然后将温度升至110℃并且搅拌5h。将混合物倒在冰上，在0℃下用1M HCl水溶液(约300ml)缓慢淬灭，得到黄色悬浮液。通过过滤收集固体，用水洗涤并且在真空烘箱中在50℃下干燥2天以得到呈黄色固体的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸(14.03g，78％)(中间体3)(存在一些杂质)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.39(3H,d),2.28(3H,s),4.20(1H,quin),6.12(1H,br d),6.68(1H,d),7.58(1H,d),12.98(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝303。
中间体4：2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯
在0℃下向2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸(14.9g，49.16mmol)(中间体3)在MeOH(150mL)中的溶液中逐滴添加亚硫酰氯(10.76mL，147.47mmol)，并且将混合物在室温下搅拌过夜。LCMS指示完全转化。在0℃下用饱和NaHCO3水溶液(约300ml)缓慢淬灭反应混合物以得到橙色悬浮液。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥以产生粗产物(14.6g)。将固体在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至25％乙酸乙酯洗脱)以得到呈亮橙色固体的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯(中间体4)(12.74g，82％)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)1.52(3H,d),2.43(3H,s),3.76(3H,s),4.14(1H,quin),5.83(1H,br d),6.45(1H,d),7.48(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝317。
中间体5：7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下向2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯(11.6g，36.58mmol)(中间体4)、锌(23.91g，365.77mmol)、氯化铵(19.56g，365.77mmol)在MeOH(100mL)中的搅拌混合物中添加小冰块(放热)。然后将反应混合物在0℃(冰浴)下搅拌15min。添加水(2mL)并且将所得混合物在室温下搅拌15min。亮橙色消失。将混合物通过滤纸过滤，用甲醇洗涤并且将滤液在真空下浓缩。将残余物用乙酸乙酯稀释并且用水洗涤，然后用盐水洗涤。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩以得到2-(2-氨基-4-溴-3-甲基-苯胺基)丙酸甲酯和7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮的混合物(9.8g)。
在室温下向上述固体在MeOH(100mL)中的溶液中添加2ml在二噁烷中的4M HCl，并且将混合物在室温下搅拌10min。再添加100ml甲醇(形成游离悬浮液)，并且将所得悬浮液在室温下搅拌1h。将混合物用醚(约200ml)稀释，通过过滤收集固体并且用醚洗涤。将滤液浓缩直至固体沉淀，通过过滤收集固体。将此程序重复数次以产生第一份产物7.2g。将滤液浓缩并且在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱)，并且将级分浓缩产物，并且将所得材料与上述材料合并以得到呈灰白色固体的7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(9.10g，98％)(中间体5)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.23(3H,d),2.24(3H,s),3.68(1H,q),3.75(br,1H),(6.54(1H,d),7.00(1H,d),9.77(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝255。
中间体6：7-溴-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将DDQ(8.91g，39.24mmol)添加到7-溴-3,8-二甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(9.1g，35.67mmol)(中间体5)在CH2Cl2(400mL)中的悬浮液中并且将混合物搅拌过夜。LCMS指示清楚的转化。在减压下除去溶剂，添加饱和NaHCO3溶液(约300ml)溶液并且将黄色悬浮液在室温下搅拌4h。通过过滤收集固体并且用水洗涤。将固体在饱和NaHCO3(100ml)中浆化并且在室温下搅拌1h。将固体过滤，用水洗涤，然后用醚洗涤并且干燥以产生呈灰白色固体的7-溴-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(7.29g，81％)(中间体6)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.40(3H,s),2.50(3H,s)(与DMSO-d6峰重叠),7.32-7.65(2H,m),11.76(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝253。
中间体7：7-(羟甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮
在80℃下将(三丁基甲锡烷基)甲醇(1142mg，3.56mmol)、7-溴-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(600mg，2.37mmol)(中间体6)和Xphos Pd G2(280mg，0.36mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的混合物搅拌18h。在减压下除去溶剂，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至15％甲醇洗脱)以产生呈灰白色固体的7-(羟甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(225mg，46％)(中间体7)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.31(3H,s),2.40(3H,s),4.58(2H,d),5.22(1H,t),7.33(1H,d),7.52(1H,d),11.53(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝205。
中间体8：7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将在HBr(15ml，132.59mmol)(在水中48w％)中的7-(羟甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(223mg，1.09mmol)(中间体7)在80℃下搅拌3.5h。在减压下除去溶剂，向残余物中添加乙醚，将混合物进行声波处理并且收集固体以产生呈黄色固体的7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(408mg，107％)(中间体8)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.36-2.45(6H,m),4.83(2H,s),7.34(1H,d),7.53(1H,d),11.63(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝267,269。
实例1：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N- 甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮，HBr(37mg，0.10mmol)(中间体8)的悬浮液中添加ACN(5ml)、6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(31.5mg，0.10mmol)(中间体32)和DIPEA(79μl，0.45mmol)并且将反应混合物在70℃下搅拌1h以得到浅黄色悬浮液。将悬浮液冷却至室温，添加1滴水，通过过滤收集固体，用乙腈洗涤三次并且干燥以产生呈黄色固体的5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.016g，33％)(实例1)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.07(3H,br s),2.42(3H,br d),2.56(4H,br s),2.76(3H,br s),3.14(4H,br s),3.61(2H,br s),7.23(1H,br d),7.42-7.67(2H,m),7.83(1H,br d),8.38(1H,br s),11.13-11.97(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝425。
实例2：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基- 吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-3,8-二甲基喹喔啉-2(1H)-酮，HBr(240mg，0.69mmol)(中间体8)、N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(202mg，0.69mmol)(中间体31)在乙腈(13mL)中的悬浮液中添加DIPEA(0.723mL，4.14mmol)并且将所得混合物在70℃下搅拌3h。将混合物浓缩并且在反相上纯化(C18柱，用0至100％ACN/水(0.2％氢氧化铵)洗脱)以产生呈棕色固体的产物。将固体悬浮在DCM和MeOH(2:1)的混合物中，浓缩以除去DCM，将固体过滤并且用甲醇洗涤。将固体悬浮在ACN(3ml)中，添加0.8ml 1M HCl的水溶液，用水(约3ml)稀释并且冻干以产生产物5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.033g，11％)的HCl盐(实例2)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.45(3H,s),2.54(3H,s),2.81(3H,br d),3.24-3.56(6H,m),3.88-4.02(2H,m),4.54(2H,br s),7.48-7.71(3H,m),7.97(1H,br d),8.33(1H,br d),8.59(1H,br s),11.28(1H,br s),11.48-11.95(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝407。
实例3：6-氯-5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N- 甲基-吡啶-2-甲酰胺
将在AcOH中的HBr(2mL，0.18mmol)(33wt％)添加到7-(羟甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(36mg，0.18mmol)(中间体7)在NMP(2mL)中的溶液中。将所得混合物在100℃下搅拌1小时。在减压下除去溶剂。将DIPEA(0.25mL，1.43mmol)添加到6-氯-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(48mg，0.19mmol)(中间体30)在NMP(2mL)中的溶液中。将所得混合物在100℃下搅拌18小时。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：YMC-Actus Triart C18，30*250，5μm；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内41B至61B；254；220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以产生呈白色固体的6-氯-5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(33.0mg，42％)(实例3)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)2.41(3H,s),2.43(3H,s),2.54-2.62(4H,m),2.78(3H,d),3.05-3.11(4H,m),3.62(2H,s),7.24(1H,d),7.51(1H,d),7.65(1H,d),7.92(1H,d),8.41-8.45(1H,m),11.56(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝441。
实例4：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二 甲基-吡啶-2-甲酰胺
将在AcOH中的HBr(2mL，12.15mmol)(33wt％)溶液添加到7-(羟甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(43mg，0.21mmol)(中间体7)在NMP(2mL)中的溶液中。将所得混合物在80℃下搅拌1小时。在减压下除去溶剂。向所得固体在NMP(3mL)中的溶液中添加DIPEA(0.25mL，1.43mmol)和N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(42mg，0.18mmol)(中间体33)。将所得混合物在100℃下搅拌18小时。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：YMC-ActusTriart C18，30*250，5μm；使用在乙腈中的水(0.05％NH4OH。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例4)(18.40mg，24％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.40(3H,s),2.43(3H,s),2.48(3H,s),2.55-2.63(4H,m),2.79(3H,d),2.87-2.94(4H,m),3.62(2H,s),7.24(1H,d),7.46(1H,d),7.51(1H,d),7.78(1H,d),8.39-8.44(1H,m),11.56(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝421。
中间体10：5-溴-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯
将在乙腈(300ml)中的5-溴吡啶甲酸甲酯(中间体9)(24g，111.09mmol)装入干燥的烧瓶，添加氟化银(II)(50g，342.78mmol)，将混合物在室温下在N2下搅拌1天。LCMS指示约70％的转化。添加另一批AgF2(16g)并且将所得混合物在室温下继续搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤，用乙腈洗涤，然后用DCM洗涤，并且将滤液浓缩以产生浅棕色固体。将残余物在DCM和饱和NH4Cl溶液之间分配，得到白色悬浮液。将固体滤出并且丢弃。将滤液转移至分液漏斗，分离有机层，并且将水层用乙酸乙酯(150ml x 3)萃取。将有机物合并，干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩直至固体沉淀出来。通过过滤收集固体，用醚洗涤，干燥以产生片状灰白色固体。将合并的滤液再次浓缩，通过过滤收集固体以得到合并的19.96g产物。将剩余的滤液浓缩并且在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至25％乙酸乙酯洗脱)以产生呈白色片状固体的所需产物的第二部分3.5g。合并所有材料以产生5-溴-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(23.46g，90％)(中间体10)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)3.89(3H,s),7.93(1H,d),8.51(1H,t)；m/z(ES+)[M+H]+＝234。
中间体11：4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将哌嗪-1-甲酸叔丁酯(28.0g，150.37mmol)、5-溴-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体10)(23.46g，100.25mmol)、RuPhos Pd G3(5.45g，6.52mmol)和Cs2CO3(82g，250.61mmol)在1,4-二噁烷(400mL)中的混合物在80℃下在N2下搅拌过夜。将反应混合物用水(250ml)稀释并且用乙酸乙酯(250ml)萃取。将有机层用盐水洗涤，将水层用乙酸乙酯(100ml x 1)萃取，将有机物干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩，将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯洗脱)得到呈黄色固体的产物，将固体从乙酸乙酯/己烷中重结晶，过滤，用己烷洗涤，干燥以产生呈结晶白色固体的产物(24.8g)；将滤液浓缩并且在硅胶柱上再纯化以产生更多的产物1.9g。总共产生4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体11)(26.7g，78％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.51(9H,s),3.12-3.28(4H,m),3.48-3.67(4H,m),3.98(3H,s),7.27(1H,d),7.99(1H,dd)；m/z(ES+)[M+H]+＝340。
中间体12：6-氟-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯
在室温下向4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.9g，5.60mmol)(中间体11)在MeOH(10mL)中的混合物中添加在二噁烷中的HCl 4M(10ml，40.00mmol)并且将所得混合物在室温下搅拌1h。将混合物用醚稀释，通过过滤收集固体，用醚洗涤并且在真空下干燥以产生呈白色固体的6-氟-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯(1.360g，78％)(中间体12)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)3.24(4H,br s),3.46(4H,br s),3.84(3H,s),7.65(1H,br t),7.94(1H,br d),9.43(2H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝240。
中间体13：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6- 氟-吡啶-2-甲酸甲酯
将7-(羟甲基)-3,8-二甲基喹喔啉-2(1H)-酮(223mg，1.09mmol)(中间体7)在HBr(15ml，132.59mmol)(在水中的48w％)在80℃下搅拌3.5h。在减压下除去溶剂，将DCM添加到残余物中并且浓缩以产生呈黄色固体的7-(溴甲基)-3,8-二甲基喹喔啉-2(1H)-酮。
在室温下向以上固体(20ml)在乙腈中的溶液中添加6-氟-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯、2HCl(260mg，0.83mmol)(中间体12)和DIPEA(1.907ml，10.92mmol)，并且将反应混合物在70℃下搅拌2h。将混合物冷却至室温，添加0.5ml水，并且通过过滤收集固体并且用乙腈洗涤。将固体干燥以产生灰白色固体，为5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(0.371g，80％)(中间体13)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.42(6H,m),2.52-2.59(4H,m),3.20(4H,br d),3.61(2H,s),3.82(3H,s),7.23(1H,d),7.41-7.59(2H,m),7.91(1H,d),11.55(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝426。
实例5：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-吡 啶-2-甲酰胺
在密封的40ml小瓶中装入5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(360mg，0.85mmol)(中间体13)和氨(15ml，105.00mmol，在甲醇中7N)并且将混合物在50℃下搅拌过夜。LCMS指示仍有一些起始材料剩余。将混合物浓缩，向固体中添加10ml 7N氨的甲醇溶液，并且将混合物在50℃下搅拌4h，得到白色悬浮液。通过过滤收集固体，用己烷洗涤并且干燥以产生呈白色固体的5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲酰胺(实例5)(340mg，98％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.40(3H,s),2.43(3H,s),2.56(4H,br s),3.14(4H,br s),3.61(2H,s),7.23(1H,d),7.46(1H,br s),7.48-7.58(2H,m),7.76(1H,br s),7.84(1H,br d),11.11-11.70(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝411。
中间体15：4-(6-甲氧基羰基-2-甲基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在装有隔垫盖的40mL小瓶中装入5-溴-6-甲基吡啶甲酸甲酯(中间体14)(2g，8.69mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.24g，17.39mmol)、Cs2CO3(5.66g，17.39mmol)和RuphosPd G3(0.727g，0.87mmol)。将反应小瓶在真空下抽真空并且填充氮气。添加1,4-二噁烷(20mL)，并且将反应小瓶置于预热至80℃的加热块中并且搅拌16h。将反应混合物冷却，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取，将有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并且浓缩。将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯洗脱)以产生呈浅黄色固体的4-(6-甲氧羰基-2-甲基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体15)(2.090g，72％)。1H NMR(500MHz,二氯甲烷-d2)1.49(9H,s),2.59(3H,s),2.88-3.00(4H,m),3.55-3.65(4H,m),3.92(3H,s),7.32(1H,d),7.92(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝336。
中间体16：6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯
将在1,4-二噁烷中的4M氯化氢溶液(31.2ml，124.63mmol)添加到4-(6-(甲氧基羰基)-2-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体15)(4.18g，12.46mmol)在DCM(30mL)中的搅拌溶液并且将所得溶液在室温下搅拌18h。在真空下除去溶剂，将所得固体在乙醚中浆化，并且通过过滤收集固体，以得到呈浅黄色固体的6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体16)(3.80g，99％)；m/z(ES+)[M+H]+＝236。
中间体18：5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6- 甲基-吡啶-2-甲酸甲酯
在室温下将三苯基膦(1.584g，6.04mmol)(添加4.4g，基于1.6mmol/g的PPh3负载量计算)添加到8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(419mg，2.01mmol)(中间体17)和全溴甲烷(1.335g，4.03mmol)在DCM(40mL)中的搅拌浆料中。将所得混合物搅拌1h。将反应混合物过滤，用DCM和THF洗涤，将滤液在真空下浓缩以产生呈浅黄色固体的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮。
向上述新鲜制备的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮在乙腈(25mL)中的浆料中添加6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯，2HCl(590mg，1.91mmol)(中间体16)和N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺(1754μl，10.07mmol)并且将反应加热至70℃持续1h。将反应混合物冷却至室温，浓缩，并且用饱和NaHCO3水溶液淬灭并且搅拌1h。通过过滤分离固体并且用水洗涤。将粗固体在二氧化硅胶柱色谱上纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体18)(0.263g，31％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.40-2.49(6H,m),2.62(4H,br s),2.97(4H,br s),3.72(2H,s),3.83(3H,s),7.30(1H,t),7.44(1H,d),7.52(1H,d),7.85(1H,d),12.45(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.54(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝426。
实例6：5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲 基-吡啶-2-甲酰胺
将在甲醇中的7N氨(16.47ml，115.26mmol)添加到在40mL闪烁小瓶中的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体18)(0.2452g，0.58mmol)，密封并且在室温下搅拌18h。将另外的7N NH3溶液(15mL)添加到反应混合物中并且在50℃下搅拌过夜。将反应在真空下浓缩，在5mL MeOH中浆化。将固体滤出，用甲醇洗涤并且干燥以产生呈灰白色固体的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例6)(0.151g，64％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),2.45-2.49(3H,m),2.52-2.69(4H,m),2.94(4H,br s),3.71(2H,s),7.29(1H,t),7.40-7.54(3H,m),7.77-7.84(2H,m),12.43(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.53(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝411。
中间体19：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲 基-吡啶-2-甲酸甲酯
将在HBr(15ml，132.59mmol)(在水中的48w％)中的7-(羟甲基)-3,8-二甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体7)(223mg，1.09mmol)在80℃下搅拌4h。在减压下除去溶剂，将DCM添加到残余物中，将混合物进行声波处理并且浓缩以产生呈黄色固体的7-(溴甲基)-3,8-二甲基喹喔啉-2(1H)-酮。
向上述在乙腈(20ml)中的浆料中添加6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酸甲酯，2HCl(中间体16)(337mg，1.09mmol)和DIPEA(1.907ml，10.92mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌2h，得到澄清溶液。将所得混合物冷却至室温，除去一半溶剂，添加0.5ml水。通过过滤收集固体，用乙腈洗涤并且干燥以产生黄色固体。将此固体在硅胶柱上纯化(用0-20％甲醇的DCM溶液洗脱)以产生呈灰白色固体的5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体19)(213mg，46％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.41(3H,s),2.43(3H,s),2.47(3H,s),2.58(4H,br s),2.95(4H,br s),3.63(2H,s),3.82(3H,s),7.24(1H,d),7.43(1H,d),7.51(1H,d),7.84(1H,d),11.55(1H,s)。m/z(ES+)[M+H]+＝422。
实例7：5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基- 吡啶-2-甲酰胺
在密封的40ml小瓶中装入5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体19)(210mg，0.50mmol)和氨(15ml，105.00mmol，在甲醇中7N)并且将反应在50℃下搅拌过夜。反应不完全。浓缩混合物，向此固体中添加10ml在甲醇中的7N氨。将小瓶加盖并且在50℃下搅拌4h以得到白色悬浮液。将混合物冷却至室温，通过过滤收集固体，用己烷洗涤并且干燥以产生呈白色固体的5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例7)(191mg，94％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.41(3H,s),2.44(3H,s),2.49(3H,s),2.58(4H,br s),2.92(4H,br s),3.63(2H,br s),7.24(1H,br d),7.42(1H,br s),7.46(1H,br d),7.51(1H,br d),7.79(2H,br d),10.53-11.23(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝407。
中间体21：2-氨基丁酸甲酯
在冰浴中冷却2-氨基丁酸(中间体20)(5g，48.49mmol)在甲醇(35mL)中的浆料。在0℃下将亚硫酰氯(11mL，150.72mmol)逐滴添加到上述混合物中。允许使反应升温至室温并且搅拌过夜。将澄清溶液浓缩至干以获得残余物。将所得固体悬浮在醚中，过滤，用醚洗涤并且干燥以产生呈白色固体呈HCl盐形式的2-氨基丁酸甲酯.HCl(中间体21)(7.35g，99％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)0.92(3H,t),1.76-1.93(2H,m),3.75(3H,s),3.95-4.05(1H,m),8.53(3H,br s)。
中间体23：2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯
在烧瓶中装入在1,4-二噁烷(30mL)中的2-氨基丁酸甲酯，HCl(中间体21)(1.811g，11.79mmol)、1-溴-2-氯-4-氟-3-硝基苯(中间体22)(2.0g，7.86mmol)，添加DIPEA(8.24mL，47.16mmol)并且将混合物在105℃下搅拌24h。将混合物浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯洗脱)以产生呈亮黄色油状物的2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯(中间体23)(2.100g，76％)，静置后变成黄色固体。1HNMR(500MHz,氯仿-d)0.99(3H,t),1.78-1.89(1H,m),1.91-2.02(1H,m),3.77(3H,s),4.04(1H,q),5.63(1H,br d),6.55(1H,d),7.52(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝351。
中间体24：7-溴-8-氯-3-乙基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
将连二亚硫酸钠(3.05g，17.49mmol)添加到2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯(中间体23)(2.05g，5.83mmol)在DMSO(50mL)中的搅拌混合物中，并且将混合物在120℃下搅拌3h。将混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(50ml x 2)萃取。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤，浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(在己烷中的0至55％乙酸乙酯)以产生峰1，即呈浅黄色固体的7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体25)(0.319g，19％)。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)1.31(3H,t),2.89(2H,q),7.56-7.67(2H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝287,289
和峰2，即呈黄色油状物的7-溴-8-氯-3-乙基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体24)(0.895g，53％)，放置后变成黄色固体。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.04(3H,t),1.75-1.84(1H,m),1.85-1.93(1H,m),3.89(1H,dd),6.51(1H,d),7.12(1H,d),7.82(1H,br s)。m/z(ES+)[M+H]+＝289,291。
中间体25：7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将DDQ(772mg，3.40mmol)添加到7-溴-8-氯-3-乙基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体24)(895mg，3.09mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物中，并且将所得悬浮液在室温下搅拌3h。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂，并且将残余物用饱和NaHCO3溶液处理，在室温下搅拌2h。通过过滤收集固体，用饱和NaHCO3溶液、水洗涤并且干燥以产生呈灰白色固体的7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体25)(780mg，88％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)1.31(3H,t),2.89(2H,q),7.56-7.67(2H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝287,289。
中间体26：8-氯-3-乙基-7-乙烯基-1H-喹喔啉-2-酮
将7-溴-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体25)(1.05g，3.65mmol)、三丁基(乙烯基)锡烷(1.737g，5.48mmol)和Pd(PPh3)4(0.422g，0.37mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在110℃下在N2下搅拌2h。LCMS指示剩余约44％的起始材料。将混合物在此温度下继续搅拌4.5h并且然后在80℃下搅拌过夜。将混合物浓缩，在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱)以产生低溶解性的呈浅黄色固体的所需产物8-氯-3-乙基-7-乙烯基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体26)(0.850g,99％)。m/z(ES+)[M+H]+＝235(产物被PPh3O污染)。
中间体27：5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛
将在H2O中的四氧化锇(0.568mL，0.07mmol)添加到8-氯-3-乙基-7-乙烯基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体26)(850mg，3.62mmol)、2,6-二甲基吡啶(0.844mL，7.24mmol)和高碘酸钠(3099mg，14.49mmol)在THF(50mL)/水(10mL)/叔丁醇(3.46mL，36.22mmol)中的溶液中并且在室温下搅拌过夜，得到黄色悬浮液。将反应浓缩，在水、饱和NH4Cl溶液和DCM之间分配，并且分离各层。将水层用DCM萃取，并且将合并的有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩。将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯洗脱)以产生呈浅黄色固体的5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体27)(808mg，94％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.34-1.42(3H,m),3.03(2H,q),7.88(2H,d),8.99-9.38(1H,m),10.54(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝237。
中间体28：8-氯-3-乙基-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将在MeOH(30mL)中的5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体27)(808mg，3.41mmol)冷却至0℃，并且一次性添加硼氢化钠(1292mg，3.41mmol)(在碱性氧化铝上10wt％)。将反应混合物在0℃下继续搅拌40min。LCMS指示剩余一些起始材料。将另外213mg NaBH4(10wt％)添加到此混合物中，并且在0℃下继续搅拌10min。向混合物中添加1ml水，浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用0至25％甲醇的DCM溶液洗脱)以产生8-氯-3-乙基-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体28)(625mg，77％)(被26％的过度还原副产物污染)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)1.27-1.34(3H,m),2.91(2H,q),4.79-4.82(2H,m),7.54(1H,d),7.75(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝239。
中间体29：7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下将四溴化碳(1612mg，4.86mmol)一次性添加到8-氯-3-乙基-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体28)(580mg，2.43mmol)和三苯基膦(1275mg，4.86mmol)在CH2Cl2(40mL)中的溶液中并且将混合物在0℃下搅拌1h。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯洗脱)以产生呈白色固体的纯的7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体29)(200mg，27％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.83(2H,q),4.85(2H,s),7.51(1H,d),7.71(1H,d),11.89(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝301,303。
实例8：6-氯-5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.058mL，0.33mmol)添加到7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体29)(25mg，0.08mmol)和6-氯-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(中间体30)(27.2mg，0.08mmol)在乙腈(4mL)中的搅拌悬浮液中并且将所得混合物在70℃下搅拌1.5h，得到悬浮液。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂并且提呈至分析纯化组，纯化后得到呈黄色固体的6-氯-5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例8)(24.00mg，61％)。纯化条件(非手性)：柱(XbridgeC1819mmx 100mm 5μm，流动相A：H2O，含0.2％NH4OH PH 10，流动相B：乙腈；梯度B％：经8min13％-95％B；流速：20ml/min；浓度：在DMSO中35mg/ml；负载量(mg/注射)：15；柱温：室温。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.23(3H,t),2.66(4H,br s),2.76-2.92(5H,m),3.13(4H,br s),3.77(2H,s),7.44(1H,d),7.69(2H,dd),7.94(1H,d),8.43(1H,q),10.75-11.45(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝475。
实例9：5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.116mL，0.66mmol)添加到6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(中间体32)(51.6mg，0.17mmol)和7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体29)(50mg，0.17mmol)在乙腈(4mL)中的搅拌悬浮液中并且将所得混合物在70℃下搅拌1.5h。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂并且在硅胶柱上纯化残余物(用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以得到产物和PPh3O的混合物。将材料提呈用于分析组进行纯化，纯化后得到呈黄色固体的5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例9)(47.0mg，62％)。纯化条件(非手性)：柱(Xbridge C1819mmx 100mm 5μm，流动相A：H2O，含0.2％NH4OH PH 10，流动相B：乙腈；梯度B％：经8min 13％-95％B；流速：20ml/min；浓度：在DMSO中35mg/ml；负载量(mg/注射)：15；柱温：室温。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.63(4H,br s),2.76(3H,d),2.82(2H,q),3.19(4H,br s),3.75(2H,s),7.43(1H,d),7.52-7.64(1H,m),7.70(1H,d),7.84(1H,d),8.39(1H,q),11.17-11.55(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝459。
实例10：5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲 基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.081mL，0.46mmol)添加到N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体31)(34.0mg，0.12mmol)和7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体29)(35mg，0.12mmol)在乙腈(4mL)中的搅拌悬浮液中并且将所得混合物在70℃下搅拌1.5h。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂，并且将所得残余物提呈至分析组进行纯化，纯化后得到呈白色固体的5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例10)(13.00mg，20％)。纯化条件(非手性)柱(Xbridge C1819mmx 100mm5μm，流动相A：H2O，含0.2％NH4OH PH 10，流动相B：乙腈；梯度B％经8min 13％-95％B；流速：20ml/min；浓度：在DMSO中35mg/ml；负载量(mg/注射)：15；柱温：室温。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.24(3H,t),2.79(3H,d),2.86(2H,q),3.22-3.37(8H,m,合并入水峰中),4.39-4.65(2H,m),7.46(1H,dd),7.57(1H,br d),7.79-7.90(2H,m),8.32(1H,d),8.43(1H,brd),11.87-12.21(1H,m)。m/z(ES+)[M+H]+＝441。
实例11：5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6- 二甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.111mL，0.64mmol)添加到N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(中间体33)(48.9mg，0.16mmol)和7-(溴甲基)-8-氯-3-乙基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体29)(48mg，0.16mmol)在乙腈(10mL)中的搅拌悬浮液中并且将所得混合物在70℃下搅拌2h，得到悬浮液。LCMS指示完全转化。将混合物冷却至室温，通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥以产生呈白色固体的5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例11)(42.0mg，58％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.65(4H,br s),2.78-2.88(5H,m),2.95(4H,br s),3.38(3H,s,与水峰重叠),3.76(2H,s),7.47(2H,dd),7.71(1H,d),7.79(1H,d),8.42(1H,br d),11.59-11.99(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝455。
中间体35：1-溴-2,4-二氟-3-硝基-苯
将1,3-二氟-2-硝基苯(中间体34)(19.5g，122.57mmol)和NBS(26.2g，147.08mmol)在硫酸(150mL)中的混合物在80℃下搅拌过夜。LCMS指示完全转化。将混合物冷却至室温并且缓慢倒在冰上。将此混合物用乙酸乙酯(200ml)萃取，将有机层用水(50mlx 2)、饱和NaHCO3溶液(50ml x 2)、盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩。将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至20％乙酸乙酯洗脱)以产生呈浅黄色油状物的1-溴-2,4-二氟-3-硝基-苯(中间体35)(26.8g，92％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)7.42-7.73(1H,m),8.06-8.26(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝238。
中间体36：2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-羟基-丁酸甲酯
在室温下将DIPEA(8.56mL，48.99mmol)缓慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基-苯(中间体35)(5.3g，22.27mmol)和2-氨基-3-羟基丁酸甲酯HCl(4.53g，26.72mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的搅拌溶液中，并且将所得混合物在40℃下搅拌3h。LCMS指示剩余一些起始材料。向混合物中添加800mg DL-苏氨酸甲酯HCl盐，并且然后将混合物在40℃下继续搅拌过夜。在减压下除去溶剂，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至30％乙酸乙酯洗脱)以产生呈亮橙色固体的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-羟基-丁酸甲酯(中间体36)(4.69g，60％)。(HNMR指示它是非对映异构体混合物)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.30-1.44(3H,m),3.81(3H,s),4.00-4.22(1H,m),4.22-4.48(1H,m),6.32-6.68(1H,m),7.40-7.66(2H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝351,353。
中间体37：2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-氟-丁酸甲酯
在0℃下将DAST(0.919mL，6.95mmol)经10min缓慢添加到2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-羟基-丁酸甲酯(中间体36)(2.22g，6.32mmol)在CH2Cl2(40mL)中的混合物中，将混合物在0℃下搅拌20min。LCMS和TLC显示剩余起始材料。向混合物中添加0.4ml DAST，并且将反应搅拌另外10min。将混合物用饱和NaHCO3溶液淬灭并且用DCM萃取。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩以产生黄色油状物。将所得残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至30％乙酸乙酯洗脱)以产生峰2，为呈黄色油状物的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-氟-丁酸甲酯(1.110g，50％)(中间体37)，和峰4，为起始材料2-((4-溴-3-氟-2-硝基苯基)氨基)-3-羟基丁酸甲酯(0.300g，13％)以及其他副产物。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.37-1.51(3H,m),2.80-2.93(0.5H,m),3.00(0.5H,br d),3.75(1.5H,s),3.85(1.5H,s),4.40-4.56(0.5H,m),5.01-5.23(0.5H,m),6.43-6.58(0.5H,m),6.71-6.74(0.5H,m),7.38-7.69(2H,m)。m/z(ES+)[M+H]+＝353。
中间体38：7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
向2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-氟-丁酸甲酯(中间体37)(1.11g，3.14mmol)、锌(2.466g，37.72mmol)和氯化铵(3.36g，62.87mmol)在MeOH(20mL)中的混合物中添加水(2mL)并且将混合物在室温下搅拌10min。橙色消失(放热)，并且LCMS显示完全转化。将混合物过滤，将固体用甲醇洗涤并且将滤液浓缩。将所得残余物溶解在DCM中，并且将有机层用水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩以产生粗产物。将残余物在硅胶柱上纯化(在己烷中的0至30％乙酸乙酯)以产生呈浅黄色固体的2-((2-氨基-4-溴-3-氟苯基)氨基)-3-氟丁酸甲酯(0.533g，52％)。
将上述黄色固体溶解在15ml甲醇中，添加在甲醇中的0.51MHCl并且将反应在室温下搅拌4h。LCMS指示完全转化。除去溶剂，并且将残余物用DCM/甲醇(5:1)稀释。将有机层用50％NaHCO3溶液洗涤一次，干燥(无水Na2SO4)并且浓缩。将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至31％乙酸乙酯洗脱)以产生呈白色固体的7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体38)(0.337g，37％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)1.27-1.46(3H,m),4.26(1H,dd),4.90-5.12(1H,m),6.50(1H,dd),6.97(1H,dd)。m/z(ES+)[M+H]+＝291,293。
中间体39：7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮
将DDQ(289mg，1.27mmol)添加7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体38)(337mg，1.16mmol)在CH2Cl2(10mL)中的浆料中并且将混合物在室温下搅拌2h。在减压下除去溶剂，将残余物用饱和NaHCO3溶液(约20ml)稀释并且将悬浮液在室温下搅拌3h。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥以产生呈白色固体的7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体39)(333mg，100％)。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)1.65-1.84(3H,m),5.87-6.18(1H,m),7.50-7.60(1H,m),7.61-7.78(1H,m)。m/z(ES+)[M+H]+＝289,291。
中间体40：8-氟-3-(1-氟乙基)-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将Pd-PEPPSITM-IPent催化剂(26mg，0.03mmol)、(三丁基甲锡烷基)甲醇(1638mg，5.10mmol)和7-溴-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体39)(590mg，2.04mmol)在1,4-二噁烷(25mL)中的混合物脱气，用N2回填，并且将混合物在80℃下搅拌17h。将混合物浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯(以回收剩余的SM)，然后用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生8-氟-3-(1-氟乙基)-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体40)(282mg，57％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.58-1.81(3H,m),4.67(2H,brd),5.46(1H,br t),5.87-6.24(1H,m),7.33-7.48(1H,m),7.65(1H,br d),12.65-12.83(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝241。
中间体41：7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮
将三苯基膦(1223mg，4.66mmol)和8-氟-3-(1-氟乙基)-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(280mg，1.17mmol)(中间体40)在CH2Cl2(15mL)中的悬浮液冷却至0℃，添加四溴化碳(1546mg，4.66mmol)，混合物立即变为透明和紫色，将混合物在此温度下继续搅拌10min，混合物变成黄色溶液，通过LCMS检查，指示完全转化(不是很干净)，将混合物浓缩，在硅胶柱上纯化(用0-20％甲醇的DCM溶液洗脱)以产生主峰，为7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体41)，其被一些杂质污染。浓缩得到2.5g固体(理论质量为353mg，假设100％产率可用于下一步骤)。m/z(ES+)[M+H]+＝303,305。
实例12和实例13：6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔 啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.265mL，1.52mmol)添加到7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体41)(115mg，0.38mmol)和6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺,2HCl(94mg，0.30mmol)(中间体32)在乙腈(20mL)中的混合物中并且将所得混合物在70℃下搅拌1h。LCMS指示完全转化。浓缩混合物，将残余物溶解在DMSO(约4ml)中并且在C18反相柱上纯化(用0至100％ACN/水/0.1％TFA洗脱)。将含有产物的级分合并，并且冻干至干燥。在吉尔森(Gilson)上对材料进行再纯化(用0至80％ACN/水/0.1％TFA洗脱)得到产物6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺。通过手性柱分离对映异构体。手性纯化条件：柱信息：chiralpak OD 4.6mm x100mm 5μm，流动相A：CO2(100％)，流动相B：含0.2％NH4OH的甲醇，在6min内等度25％B，流速：4.0ml/min，稀释剂：甲醇，柱温：室温，出口压力(SFC)：N/A。
峰1：将白色固体用水和ACN稀释。添加0.1mL 0.5M HCl水溶液并且将混合物冻干至干燥以产生呈HCl盐的异构体1，6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例12，未确定绝对立体化学)(5.42mg，10.90μmol，3％)，呈HCl盐呈黄色固体。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.54-1.73(3H,m),2.70-2.87(3H,m),3.53-3.90(8H,m),4.57(2H,br s),5.79-6.21(1H,m),7.59-7.81(3H,m),7.87(1H,d),8.43(1H,br d),11.40-11.85(1H,m),12.78-13.14(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝461,>95％ee。
峰2：将白色固体用水和ACN稀释。添加0.1mL 0.5M HCl水溶液并且将混合物冻干至干燥以产生呈HCl盐的异构体2，6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例13，未确定绝对立体化学)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.49-1.83(3H,m),2.77(3H,br d),3.46-3.91(8H,m),4.56(2H,br s),5.80-6.26(1H,m),7.52-7.80(3H,m),7.87(1H,br d),8.43(1H,br d),11.44-11.82(1H,m),12.77-13.24(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝461,>95％ee。
实例14和实例15：5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6- 基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-(1-氟乙基)喹喔啉-2(1H)-酮(中间体41)(138mg，0.41mmol)和N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(126mg，0.41mmol)(中间体33)在乙腈(13mL)中的悬浮液中添加DIPEA(429μl，2.46mmol)并且将所得混合物在70℃下搅拌3h。LCMS指示完全转化。将反应浓缩并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生呈浅黄色固体的外消旋产物5-[4-[[5-氟-2-[(1S/1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(169mg)。通过手性分离来分离对映异构体。手性纯化条件：柱信息：chiralpak OD 21.2mm x 250mm5μm，流动相A：CO2(100％)，流动相B：含0.2％NH4OH的甲醇，等度：经12min 25％B，流速：70.0ml/min，浓度：8.45mg/ml甲醇溶液，负载量：4.23mg/注射，柱温：室温，出口压力(SFC)：N/A。
手性分离后，将每种异构体在反相柱上再纯化(用0-60％ACN/水/0.2％氢氧化铵洗脱)以产生；
峰1：呈白色固体的5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，异构体1(实例14，未确定绝对立体化学)(30.7mg，0.067mmol，16％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.40-1.70(3H,m),2.48(3H,s),2.54-2.69(4H,m),2.79(3H,d),2.94(4H,br s),3.74(2H,s),5.83-6.22(1H,m),7.17-7.41(1H,m),7.47(1H,d),7.65(1H,d),7.78(1H,d),8.40(1H,br d),11.65-12.88(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝457；>98％ee。
峰2：呈白色固体的5-[4-[[5-氟-2-[(1S或1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，异构体2(实例15，未确定绝对立体化学)(37mg，0.081mmol，20％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.68-1.88(3H,m),2.51(3H,s),2.71(4H,br s),2.86-3.12(7H,m),3.81(2H,s),5.92-6.29(1H,m),7.34(1H,d),7.44(1H,t),7.76(1H,d),7.95(1H,br d),7.99(1H,d),10.24(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝457；94.5％ee。
中间体43：2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯
在烧瓶中装入在1,4-二噁烷(70mL)中的丙氨酸甲酯，HCl(中间体42)(1.851g，13.26mmol)和1-溴-2-氯-4-氟-3-硝基苯(中间体22)(2.25g，8.84mmol)。添加DIPEA(9.27mL，53.06mmol)，并且将混合物在105℃下搅拌24h，得到棕色溶液。LCMS显示反应完成。将混合物浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至30％乙酸乙酯洗脱)以产生呈亮黄色油状物的2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯(中间体43)(2.120g，71％)，静置后变成黄色固体。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.52(3H,d),3.77(3H,s),6.53(1H,d),7.15(1H,t),7.53(1H,d),7.78(1H,dd)；m/z(ES+)[M+H]+＝337。
中间体44：7-溴-8-氯-3-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
将连二亚硫酸钠(3.28g，18.84mmol)添加到2-(4-溴-3-氯-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯(中间体43)(2.12g，6.28mmol)在DMSO(50mL)中的搅拌溶液中，并且将混合物在120℃下搅拌5h。LCMS和TLC指示完全转化。将混合物用水淬灭并且用乙酸乙酯(50ml x 2)萃取。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤，浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(在己烷中的0至55％乙酸乙酯)以产生7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体45)(0.055g，3％)。m/z(ES+)[M+H]+273，275和7-溴-8-氯-3-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体44)(0.190g，11％)。m/z(ES+)[M+H]+＝275，277。
中间体45：7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将DDQ(157mg，0.69mmol)添加到7-溴-8-氯-3-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体44)(190mg，0.69mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中，并且将所得混合物在室温下搅拌过夜，LCMS指示完全转化。将混合物浓缩并且将残余物用饱和NaHCO3溶液处理。在室温下搅拌混合物4，通过过滤分离固体，用饱和NaHCO3溶液和水洗涤。然后将固体在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生呈黄色固体的7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体45)(122mg，65％)。m/z(ES+)[M+H]+＝273，275。
中间体46：8-氯-3-甲基-7-乙烯基-1H-喹喔啉-2-酮
将7-溴-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体45)(122mg，0.45mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(51.5mg，0.04mmol)和三丁基(乙烯基)锡烷(212mg，0.67mmol)在甲苯(15ml)中的混合物中在110℃下在N2下搅拌16h。LCMS指示反应完成。将混合物浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至16％甲醇洗脱)以产生呈棕色固体的8-氯-3-甲基-7-乙烯基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体46)(98mg，100％)。(被PPh3O污染)。m/z(ES+)[M+H]+＝221。
中间体47：5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛
将在H2O中的四氧化锇(0.1mL，0.01mmol)添加到8-氯-3-甲基-7-乙烯基-1H-喹喔啉-2-酮(140mg，0.63mmol)(中间体46)、2,6-二甲基吡啶(0.148ml，1.27mmol)和高碘酸钠(543mg，2.54mmol)在THF(10mL)/水(2mL)/叔丁醇中(0.607mL，6.34mmol)中的溶液中并且在室温下搅拌过夜，得到黄色悬浮液。LCMS和TLC指示仍有剩余起始材料。向混合物中添加THF(10ml)/水(2.000ml)、200mg高碘酸钠、0.3ml四氧化锇并且将混合物在室温下继续搅拌5h。LCMS指示完全转化。将反应用水稀释，添加饱和NH4Cl溶液并且用DCM萃取。将合并的有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩。将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生呈黄色固体的5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体47)(141mg，100％)。(不是很纯，转入下一步骤)。m/z(ES+)[M+H]+＝223。
中间体48：8-氯-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将硼氢化钠(23.96mg，0.63mmol)添加到5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体47)(141mg，0.63mmol)在MeOH(16mL)和DCM(8.00mL)的混合物中的冷却至0℃的冷却溶液中，并且将混合物在0℃下继续搅拌1h。LCMS指示完全转化。向混合物中添加1ml水，浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的40至100％乙酸乙酯洗脱；然后用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生呈黄色固体的8-氯-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体48)(142mg，100％)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),4.65(2H,br d),5.53(1H,br t),7.46(1H,br d),7.69(1H,br d),11.77(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝225。
中间体49：7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将在CH2Cl2(20ml)中的8-氯-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体48)(142mg，0.63mmol)和三苯基膦(332mg，1.26mmol)冷却至0℃。一次性添加过溴甲烷(419mg，1.26mmol)，并且将混合物在0℃下搅拌1h并且在室温下搅拌2h。LCMS指示无进展。在室温下向混合物中添加第二部分的三苯基膦(332mg，1.26mmol)和全溴甲烷(419mg，1.26mmol)并且将混合物搅拌1h。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱)以产生呈黄色固体的产物7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体49)(32mg，18％)。进一步用在DCM中的20％甲醇洗脱得到第二部分100mg(55％)呈棕色固体的产物(47％纯度)。m/z(ES+)[M+H]+＝287，289。
实例16：5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲 基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.053mL，0.31mmol)添加到N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(22.43mg，0.08mmol)(中间体31)和7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体49)(22mg，0.08mmol)在乙腈(4mL)中的混合物中并且将所得悬浮液在70℃下搅拌1h。LCMS指示完全转化。将混合物浓缩，将残余物溶解在DMSO中并且在反相C18柱上纯化(用0至100％ACN/水/0.1％TFA洗脱)。将含有纯产物的级分冻干至干燥以产生5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(20mg，56％)。添加1mL在醚中的2M HCl，并且在真空下除去溶剂以得到呈黄色固体的相应HCl盐(实例16)。1HNMR(500MHz,甲醇-d4)2.96-3.03(3H,m),3.48-3.86(6H,m),4.04-4.41(2H,m),4.78(2H,s),4.86(3H,d,合并入水峰中),7.74(1H,d),7.84(1H,d),8.14(1H,dd),8.31(1H,d),8.47(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝427。
实例17：5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.061mL，0.35mmol)添加到6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体32)(27.1mg，0.09mmol)和7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体49)(50mg，0.09mmol)(纯度约50％)在乙腈(5mL)中的混合物中并且将所得溶液在70℃下搅拌1h。LCMS指示完全转化。将混合物浓缩，并且将残余物溶解在DMSO中并且在反相C18柱上纯化(用0至100％ACN/水/0.1％TFA洗脱)，然后在反相C18柱上第二次纯化(用0到100％ACN/水/0.1％TFA洗脱)。最后将材料在反相柱上第三次纯化(用0至100％ACN/水/氢氧化铵洗脱，PH约10)以产生呈白色固体的5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例17)(16.50mg，43％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.37-2.47(3H,m),2.63(4H,br s),2.76(3H,d),3.13-3.23(4H,m),3.74(2H,s),7.45(1H,d),7.57(1H,dd),7.68(1H,d),7.84(1H,d),8.39(1H,br d),10.71-12.11(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝445。
实例18：5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6- 二甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.061mL，0.35mmol)添加到N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体33)(26.7mg，0.09mmol)和7-(溴甲基)-8-氯-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(50mg，0.09mmol)(中间体49，约50％纯度)在乙腈(5mL)中的混合物中并且将所得溶液在70℃下搅拌1h。LCMS指示完全转化。将混合物浓缩，将残余物溶解在DMSO中并且将残余物在反相C18柱上纯化(用0至100％ACN/水/0.1％TFA洗脱)。浓缩级分后，将残余物在反相C18柱上再纯化(用0至100％ACN/水/氢氧化铵洗脱，PH约10)。将纯级分冻干至干燥以产生呈游离碱的5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例18)(18.4mg，48％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)2.53(6H,d),2.76(4H,br s),2.94(3H,s),3.04(4H,br t),3.86(2H,s),7.48(1H,d),7.51-7.60(1H,m),7.69(1H,d),7.86(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝441。
中间体50：7-溴-8-氟-3-(1-羟乙基)-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下，将氯化铵(6.70g，125.31mmol)添加到2-((4-溴-3-氟-2-硝基苯基)氨基)-3-羟基丁酸甲酯(中间体36)(4.4g，12.53mmol)和锌(8.19g，125.31mmol)在MeOH(65mL)中的悬浮液中。向其中添加水(2mL)并且将混合物在0℃下搅拌60min。橙色消失，这指示完全转化，LCMS指示反应完成。将混合物过滤，用甲醇洗涤并且将滤液浓缩。将残余物用乙酸乙酯/甲醇(10/1)稀释，将有机层用水(约20ml)、盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，浓缩至干燥以产生中间体2-((2-氨基-4-溴-3-氟苯基)氨基)-3-羟基丁酸甲酯。
将上述固体在甲醇(约30ml)中浆化，添加在二噁烷中的4M HCl(约1ml)并且将混合物在室温下搅拌2h。LCMS指示完全转化。将混合物浓缩，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱)以产生呈黄色固体的7-溴-8-氟-3-(1-羟乙基)-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体50)(3.20g，88％)。(非对映异构体混合物)。m/z(ES+)[M+H]+＝289，291。
中间体51：7-溴-8-氟-3-(1-羟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮
将DDQ(432mg，1.90mmol)添加到7-溴-8-氟-3-(1-羟乙基)-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体50)(500mg，1.73mmol)在CH2Cl2(30mL)中的悬浮液中并且将混合物在室温下搅拌过夜。LCMS指示清楚的转化。在减压下除去溶剂，添加饱和NaHCO3(约100ml)溶液并且将混合物在室温下搅拌3h。通过过滤收集固体，用水洗涤并且干燥以产生7-溴-8-氟-3-(1-羟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体51)(439mg，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.39(3H,d),4.78-5.31(2H,m),7.39-7.71(2H,m),12.72(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝287,289。
中间体52：3-乙酰基-7-溴-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
在-78℃下将DMSO(0.651mL，9.17mmol)在DCM中的溶液逐滴添加到草酰氯(3.06mL，6.12mmol)(在DCM中2M)在二氯甲烷(20ml)中的搅拌溶液中。将7-溴-8-氟-3-(1-羟乙基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体51)溶液(439mg，1.53mmol)缓慢添加到上述反应混合物中，并且将所得浆料在-78℃下搅拌15min。逐滴添加三乙胺(1.279mL，9.17mmol)，并且将所得浆料在0℃下搅拌另外30min。LCMS指示所需产物的形成。添加水(30ml)，并且将混合物用二氯甲烷/MeOH(5:1)(2x 50ml)萃取。将有机相合并，并且经硫酸镁干燥。在真空下除去溶剂，并且将残余物通过反相C18柱纯化(用0至100％ACN/水/0.1％TFA洗脱)以产生呈黄色固体的3-乙酰基-7-溴-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体52)(85mg，19％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.52-2.66(3H,m),7.42-7.76(2H,m),13.03(1H,br s)。m/z(ES+)[M+H]+＝285,287。
中间体53：7-溴-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将DAST(0.148mL，1.12mmol)添加到3-乙酰基-7-溴-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体52)(80mg，0.28mmol)在CH2Cl2(20mL)中的悬浮液中，并且将所得悬浮液在室温下搅拌24h。LCMS指示42％的产物形成。继续搅拌混合物过周末。向混合物中添加水并且用DCM萃取。将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩。将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生呈浅黄色固体的7-溴-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体53)(65.0mg,75％)。m/z(ES+)[M+H]+＝307，309。(材料不是很纯，进行下一步骤)。
中间体54：3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将(三丁基甲锡烷基)甲醇(102mg，0.32mmol)、Xphos Pd G2(24.98mg，0.03mmol)和7-溴-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体53)(65mg，0.21mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物在N2气氛下在80℃下搅拌6h。LCMS指示完全转化。在真空下除去溶剂，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至20％甲醇洗脱)以产生呈棕色固体的3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体54)(55.0mg，100％)。m/z(ES+)[M+H]+＝259。
中间体55：7-(溴甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下将CBr4(129mg，0.39mmol)添加到3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体54)(67mg，0.26mmol)和三苯基膦(102mg，0.39mmol)在CH2Cl2(6mL)中的混合物中并且将所得混合物在室温下搅拌过夜。LCMS指示完全转化。在真空下除去溶剂，并且将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱)以产生呈白色固体的7-(溴甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体55)(56.0mg，67％)。m/z(ES+)[M+H]+＝321，323。
实例19：5-[4-[[2-(1,1-二氟乙基)-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪- 1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-3-(1,1-二氟乙基)-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体55)(56mg，0.16mmol)和N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体33)(48.2mg，0.16mmol)在乙腈(4mL)中的悬浮液中添加DIPEA(0.164mL，0.94mmol)并且将所得混合物在70℃下搅拌1.5h。LCMS指示完全转化。将混合物浓缩，并且将残余物在反相吉尔森柱上纯化(用0至70％ACN/水/0.1％TFA洗脱)。将纯级分合并，将0.5ml 1M HCl水溶液添加到合并的级分中并且冻干至干燥以产生呈黄色固体的5-[4-[[2-(1,1-二氟乙基)-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，呈HCl盐(实例19)(35.0mg，44％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.08(3H,brt),2.52(3H,s),2.80(3H,br d),3.02-3.54(8H,m),4.61(2H,br s),7.57(1H,br d),7.67-8.04(3H,m),8.52(1H,br d),11.74(1H,br s),12.77-13.55(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝475。
中间体56：2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯
将DIPEA(151ml，867.27mmol)缓慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯(中间体35)(68.8g，289.09mmol)和丙氨酸甲酯，HCl(40.4g，289.09mmol)在DMF(300mL)中的搅拌溶液中。将所得溶液在室温下搅拌18小时(根据LCMS完全转化为所需产物)。使用火箭蒸发系统将反应混合物浓缩，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用水彻底洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。向上述橙色固体中添加100mLDCM，将悬浮液在室温下搅拌30min，将固体过滤以产生呈亮橙色固体的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯(24.00g，26％)(中间体56)。1HNMR(500MHz,二氯甲烷-d2)1.52-1.62(3H,m),3.80(3H,s),4.28(1H,quin),6.49(1H,dd),7.19-7.39(1H,m),7.54(1H,dd)；19F NMR(471MHz,二氯甲烷-d2)-109.49(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝321，323。
中间体57：7-溴-8-氟-3-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下将锌(78g，1195.88mmol)分批添加到2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丙酸甲酯(中间体56)(48g，149.49mmol)和氯化铵(64.0g，1195.88mmol)在MeOH(720ml)和水(16ml)中的混合物中(放热反应)并且将混合物在室温下搅拌2h(橙色完全消失表明反应完成)。将固体滤出并且将固体滤饼用在DCM中的20％MeOH洗涤。将滤液浓缩，向粗产物中添加水，并且将产物用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥并且在真空下浓缩以提供油状物。m/z(ES+)[M+H]+＝291，293。
将此材料在乙酸乙酯(50mL)和甲醇(50mL)中浆化，添加2mL在二噁烷中的4N HCl，并且将混合物搅拌1h。将反应混合物浓缩以产生呈灰色固体的粗产物7-溴-8-氟-3-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体57)(38.7g)。假设此反应的产率为100％，粗产物(38.7g)无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。m/z(ES+)[M+H]+＝259。
中间体58：7-溴-8-氟-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将DDQ(21.55g，94.95mmol)一次性添加到7-溴-8-氟-3-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体57)(20.5g，79.13mmol)在DCM(200mL)中的搅拌溶液中，产生很粘稠的灰白色浆料，添加另外的二氯甲烷(800mL)。将所得浆料在室温下搅拌2小时(根据LCMS完全转化为所需产物)。将反应混合物在真空下浓缩并且用饱和碳酸氢钠水溶液(约500mL，淬灭导致剧烈起泡)淬灭。将上述浆料在室温下搅拌过夜并且滤出固体，用水彻底洗涤并且将固体在过滤器上干燥过夜。将此固体用乙醚洗涤并且干燥30min以得到呈灰白色固体的7-溴-8-氟-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体58)(16.28g，80％)。19FNMR(471MHz,DMSO-d6)-124.18(1F,s)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.41(3H,s),7.45-7.54(2H,m),12.60(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝257。
中间体17：8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将(三丁基甲锡烷基)甲醇(15.39g，47.93mmol)、7-溴-8-氟-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体58)(11.2g，43.57mmol)和Xphos Pd G2(1.714g，2.18mmol)在1,4-二噁烷(200mL)中的混合物在80℃下搅拌7h。LCMS指示完全转化。在减压下除去溶剂，将残余物在硅胶柱上纯化(用在DCM中的0至15％甲醇洗脱)。将级分浓缩成浆料，用醚稀释，通过过滤收集固体并且干燥以产生呈白色固体的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体17)(8.10g，89％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.41(3H,s),4.63(2H,br d),5.39(1H,t),7.31(1H,brt),7.51(1H,d),12.41(1H,br s)。m/z(ES+)[M+H]+＝209。
实例20：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
在0℃下在氮气下用加料漏斗将三乙基膦(20.90ml，145.06mmol)逐滴添加到8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体17)(15.1g，72.53mmol)和1,2-二溴-1,1,2,2-四氯乙烷(52.0g，159.56mmol)在DCM(400mL)中的搅拌悬浮液中。将混合物在室温下搅拌3h，得到浅黄色悬浮液。粗LCMS指示完全转化。在真空下除去DCM；将残余物在室温下在300mL乙醚中浆化，并且将浅黄色ppt过滤并且用200ml醚洗涤。将固体吸收在300ml水中，在室温下搅拌10min，通过过滤收集固体，用水彻底洗涤(200ml)以除去盐。将固体在真空下干燥过夜(不加热)。将固体用己烷洗涤并且在蒲式耳漏斗中在真空中干燥以得到呈灰白色固体的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体59)(22.76g，116％，可能含有一些无机盐)。按原样用于下一步反应。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),4.65-4.93(2H,m),7.28-7.42(1H,m),7.51(1H,d),12.53(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝271,273。
在室温下向装有在乙腈(350ml)中的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体59)(22.76g)和6-氟-N-甲基-5-的烧瓶中(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体32)(24.24g，77.9mmol)的烧瓶中添加DIPEA(38.0ml，217.59mmol)并且将所得混合物在70℃下搅拌4h。反应未完成。向混合物中添加5g KI和2g NaI并且将混合物在50℃下搅拌20h。向混合物中添加更多540mg(约0.03当量)6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(中间体32)并且在50℃下继续搅拌2h。通过过滤收集来自反应悬浮液的固体，用乙腈洗涤并且干燥。然后将所得材料悬浮在水(约400ml)中，在室温下浆化20min，过滤并且干燥(LCMS纯度为97％)。然后将固体在回流下溶解到DCM/MeOH混合物(3/1)(约1.5L)中，通过硅胶垫过滤，除去大部分DCM，直到固体沉淀出来，并且将混合物在室温下保持20min。通过过滤收集固体并且针对滤液重复程序，并且将固体合并以产生呈浅黄色固体的产物6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例20)(26g，84％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.41(3H,s),2.57-2.69(4H,m),2.76(3H,d),3.16(4H,br s),3.70(2H,s),7.29(1H,br t),7.40-7.60(2H,m),7.83(1H,d),8.38(1H,br d),12.44(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝429。
实例21：6-(二氟甲基)-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌 嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.052mL，0.30mmol)添加到7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体59)(40mg，0.15mmol)和6-(二氟甲基)-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体60)(50.6mg，0.15mmol)在乙腈(mL)中的搅拌混合物中并且将所得混合物在70℃下搅拌2h。将反应浓缩并且提呈至分析组进行纯化(纯化条件：将残余物通过反相C18柱纯化(用0至100％ACN/水/0.1％NH4OH洗脱)，其产生呈白色固体的6-(二氟甲基)-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例21)(15mg，22％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.37(3H,s),2.64(4H,br s),2.84(3H,d),3.01(4H,brd),3.70(2H,s),7.00-7.28(2H,m),7.42(1H,br d),7.86(1H,d),8.09(1H,d),8.39(1H,q),12.24-12.63(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝461。
中间体61：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1- 基]吡啶-2-甲酸甲酯
在室温下将聚合物负载的三苯基膦(1.512g，5.76mmol)(添加3.4g，基于1.6mmol/g的PPh3负载量计算)添加到8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体17)(400mg，1.92mmol)和全溴甲烷(1.274g，3.84mmol)在DCM(40mL)中的搅拌浆料中。将所得混合物在23℃下搅拌1h。反应未完成。添加另外的聚合物结合的-PPh3(1g)以使反应完成。将反应混合物过滤，用DCM、THF洗涤，将滤液在真空下浓缩以产生呈浅黄色固体的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮。
向上述新鲜制备的7-(溴甲基)-8-氟-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮中添加6-氟-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯，2HCl(中间体12)(600mg，1.92mmol)、乙腈(25mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1674μl，9.61mmol)并且将反应混合物加热至70℃ 1h。将反应混合物冷却至室温，浓缩，并且将粗固体经由正相色谱法使用在DCM中的0-10％MeOH纯化以产生呈灰白色固体的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯(中间体61)(0.484g，59％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.34-2.49(3H,m),2.52-2.62(4H,m),3.08-3.28(4H,m),3.70(2H,s),3.83(3H,s),7.29(1H,t),7.44-7.54(2H,m),7.91(1H,dd),12.45(1H,s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.50(1F,s),-70.49(1F,s)。m/z(ES+)[M+H]+＝430。
实例22：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基] 吡啶-2-甲酰胺
将氨(MeOH中的7N氨)(31.3ml，218.90mmol)添加到在40mL闪烁瓶中的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯(中间体61)(0.470g，1.09mmol)，密封并且在室温下搅拌18h。通过LCMS，完全转化为所需产物。将白色固体过滤得到103mg纯产物。将滤液在真空下浓缩，将所得灰白色固体在约5mL甲醇中浆化并且过滤以获得另外的纯产物298mg。将两批合并以获得6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺(实例22)(0.401g，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),2.59(4H,br s),3.09-3.27(4H,m),3.70(2H,s),7.29(1H,brt),7.46(1H,br s),7.49-7.58(2H,m),7.76(1H,br s),7.85(1H,br d),12.35(1H,brs)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.49(1F,s),-72.40(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝415。
中间体62：2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯
将DIPEA(165ml，942.91mmol)缓慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基-苯(中间体35)(74.8g，314.30mmol)和2-氨基丁酸甲酯，HCl(48.3g，314.30mmol)在DMF(733mL)中的搅拌溶液中并且将所得溶液在室温下搅拌18小时。在火箭式蒸发器上除去DMF，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。浓缩后，将粗材料通过快速二氧化硅色谱法纯化，洗脱梯度为0至70％EtOAc/己烷。将产物级分在减压下浓缩以提供呈红色固体的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯(中间体62)(49.4g，47％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)0.82-0.98(3H,m),1.77-1.93(2H,m),3.70(3H,d),4.38-4.54(1H,m),6.77(1H,br d),7.28(1H,br d),7.64-7.80(1H,t)；m/z(ES+)[M+H]+＝335。
中间体63：7-溴-3-乙基-8-氟-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
将锌(44.1g，674.07mmol)分批添加(放热反应)至2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)丁酸甲酯(中间体62)(50.2g，149.79mmol)和氯化铵(64.1g，1198.34mmol)在MeOH(468mL)中的混合物中。将混合物在室温下搅拌1h。滤出固体并且用在DCM中的20％MeOH洗涤。将此材料溶解在甲醇(120mL)中，并且添加在二噁烷中的4NHCl(10mL)并且将反应搅拌30min。在真空下除去溶剂，用乙酸乙酯稀释并且用饱和NaHCO3溶液碱化。将有机层分离，用水洗涤，经硫酸钠干燥并且浓缩以得到粗产物。将固体与100mL甲醇研磨，搅拌10min，并且滤出浅棕色固体以得到7-溴-3-乙基-8-氟-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体63)(39.8g，97％)产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)0.92(3H,t),1.49-1.77(2H,m),3.57-3.87(1H,m),6.24-6.62(2H,m),6.99(1H,dd),10.44(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝273。
中间体64：7-溴-3-乙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
将DDQ(29.7g，130.94mmol)一次性添加到7-溴-3-乙基-8-氟-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体63)(29.8g，109.12mmol)在DCM(546mL)中的搅拌溶液中，并且将所得溶液在室温下搅拌2h。在真空下除去溶剂，并且将固体用150mL甲醇浆化并且搅拌30min。滤出固体并且用30mL甲醇洗涤。将固体转移到2L圆底烧瓶中；添加200mL水，然后缓慢添加300mL碳酸氢钠。添加完成后，将混合物在室温下搅拌过夜以得到浅黄色浆料。停止搅拌并且倾析水层。通过过滤收集固体并且用水彻底洗涤以得到呈黄色固体的7-溴-3-乙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体64)(24.45g，83％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.81(2H,q),7.27-7.69(2H,m),12.59(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝271。
中间体65：3-乙基-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将Xphos Pd G2(1.121g，1.43mmol)添加到7-溴-3-乙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体64)(7.727g，28.50mmol)和(三丁基甲锡烷基)甲醇(10.98g，34.20mmol)在1,4-二噁烷(143mL)中的搅拌脱气溶液中。将所得溶液在80℃下搅拌6小时。在真空下除去溶剂，添加100mL乙醚，并且将浆料搅拌30min。滤出固体并且用50mL乙醚洗涤以得到呈灰白色固体的3-乙基-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(5.88g，93％)(中间体65)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.82(2H,q),4.64(2H,br d),5.40(1H,t),7.32(1H,br t),7.55(1H,d),12.40(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝223。
中间体66：7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下在氮气下经5分钟的时间将三乙基膦(19.94ml，135.00mmol)逐滴添加到3-乙基-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体65)(10g，45.00mmol)和CBr4(49.2g，148.50mmol)在DCM(355mL)中的搅拌溶液中。将反应在室温下搅拌1h。在真空下除去DCM并且将残余物在150mL乙醚中浆化。滤出白色ppt并且用50mL乙醚洗涤。将此固体用水(200mL)浆化并且搅拌30min。滤出固体并且用水彻底洗涤。将固体在真空下干燥过夜以得到呈浅棕色固体的7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(中间体66)(11.38g，89％)。1H NMR(500MH z,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.83(2H,q),4.81(2H,s),7.37(1H,brt),7.55(1H,d),12.53(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝285。
实例23：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6- 二甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(20.90ml，119.64mmol)添加到7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(中间体66)(11.37g，39.88mmol)和N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(中间体33)(14.09g，45.86mmol)在乙腈(178mL)中的搅拌浆料中。将所得溶液在50℃下搅拌2h。反应完成。通过蒸发除去一半溶剂，添加10mL饱和碳酸氢钠并且将混合物搅拌15min。滤出固体，用水洗涤，然后用50mL乙腈洗涤。将固体溶解在DCM/甲醇(约9/1)中并且通过二氧化硅床过滤。将滤液浓缩以得到浅黄色固体。将此材料与约120mL甲醇一起研磨，滤出固体并且干燥。LCMS仍显示出约2.1％的杂质(可能来自试剂)。再次用乙腈并且然后用在乙腈中的3％甲醇研磨材料以得到约14g白色固体。添加甲醇(40mL)并且搅拌3h。滤出固体以得到纯产物5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例23)(12.26g，70％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.23(3H,t),2.48(3H,s),2.62(4H,br s),2.76-2.88(5H,m),2.95(4H,br s),3.73(2H,s),7.31(1H,t),7.47(1H,d),7.56(1H,d),7.79(1H,d),8.41(1H,q),12.44(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝439。
实例24：6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌 嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将DIPEA(0.049mL，0.28mmol)添加到7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(中间体66)(40mg，0.14mmol)和6-(二氟甲基)-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺，2HCl(中间体60)(48.1mg，0.14mmol)在乙腈(2mL)中的搅拌混合物中并且将所得混合物在70℃下搅拌2小时。将反应浓缩并且提呈至分析组进行纯化(纯化条件：将残余物通过反相C18柱纯化(用0至100％ACN/水/0.1％NH4OH洗脱)，其产生6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例24)(56.0mg，84％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.23(3H,t),2.65(4H,br d),2.77-2.86(5H,m),2.97-3.06(4H,m),3.73(2H,s),7.00-7.26(1H,t),7.30(1H,br d),7.55(1H,br d),7.86(1H,d),8.09(1H,d),8.39(1H,q),12.45(1H,br d)；m/z(ES+)[M+H]+＝475。
中间体67：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡 啶-2-甲酸甲酯
将DIPEA(246μl，1.41mmol)添加到7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体66)(134mg，0.47mmol)和5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯，2HCl(中间体119)(138mg，0.47mmol)在乙腈(2mL)中的搅拌浆料中。将所得溶液在50℃下搅拌2h。在真空下除去溶剂并将所得残余物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为在DCM中的0至20％MeOH)进行纯化。将产物级分在减压下浓缩以提供呈白色固体的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯(中间体67)(0.142g，71.0％)；m/z(ES+)[M+H]+＝426。
实例25：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶- 2-甲酰胺
将氨(7N)的甲醇溶液(3mL，6.00mmol)添加到5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酸甲酯甲酯(中间体67)(130mg，0.31mmol)。将所得悬浮液在50℃下搅拌24小时(密封管)。除去溶剂，并且将所得残余物通过快速二氧化硅色谱法纯化，洗脱梯度为在DCM中的0至35％MeOH。将产物级分在减压下浓缩以提供呈淡黄色固体的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺(实例25)(0.079g，63％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.23(3H,t),2.54-2.61(4H,m),2.83(2H,q),3.32-3.40(4H,m),3.70(2H,s),7.24-7.34(2H,m),7.38(1H,dd),7.56(1H,d),7.76(1H,brd),7.84(1H,d),8.27(1H,d),12.44(1H,br s)；m/z(ES+)[M+H]+＝411。
中间体68：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6- 甲基-吡啶-2-甲酸甲酯
在0℃下在氮气下经5分钟的时间将三乙基膦(0.399ml，2.70mmol)逐滴添加到3-乙基-8-氟-7-(羟甲基)喹喔啉-2(1H)-酮(中间体65)(0.2g，0.90mmol)和CBr4(0.985g，2.97mmol)在DCM(7.10mL)中的搅拌溶液中。将反应在室温下搅拌1h。在真空下除去DCM并且将所得固体在乙醚中浆化。在真空下过滤白色ppt，用水并且然后用醚洗涤。将固体在真空下干燥过夜(不加热)以得到呈浅棕色固体的7-(溴甲基)-3-乙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮。
向以上粗产物中添加6-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯，2HCl(中间体16)(278mg，0.90mmol)、乙腈(10mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(785μl，4.51mmol)并且加热至70℃持续1h。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。将沉淀过滤并且用水(50mL)洗涤。将固体通过正相色谱法使用在DCM中的0-10％MeOH纯化。分离的产物根据LCMS为89％纯度。使用质量导向制备型HPLC进一步纯化上述固体(使用20％-40％乙腈水溶液和NH4OH改性剂)，以产生呈白色固体的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体68)(115mg，0.262mmol，29％)，LCMS纯度为93％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.23(3H,t),2.45-2.49(3H,m),2.53-2.69(4H,m),2.83(2H,q),2.98(4H,br s),3.73(2H,s),3.83(3H,s),7.31(1H,t),7.45(1H,d),7.56(1H,d),7.86(1H,d),12.44(1H,brs)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.54(1F,s)。m/z(ES+)[M+H]+＝440。
实例26：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲 基-吡啶-2-甲酰胺
将在甲醇中的7N氨(6.40ml，44.78mmol)添加到在40mL闪烁小瓶中的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体68)(0.0984g，0.22mmol)，密封并且在室温下搅拌18h。将反应在真空下浓缩，添加另外的氨(6.40ml，44.78mmol)溶液，并且在50℃下搅拌16h。将反应在真空下浓缩，并且添加在甲醇中的另外NH3并且在室温下搅拌周末。根据LCMS反应完成。将反应混合物在真空下浓缩，将所得固体在乙醚中浆化。将固体过滤并且用另外的醚和甲醇洗涤以产生呈白色固体的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例26)(0.095g，100％)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(3H,br t),2.45-2.49(3H,m),2.52-2.68(4H,m),2.82(2H,q),2.94(4H,br s),3.72(2H,br s),7.30(1H,br t),7.38-7.51(2H,m),7.55(1H,br d),7.80(2H,br d),12.41(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.53(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝425。
中间体69：2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛
将戴斯-马丁高碘烷(458mg，1.08mmol)添加到在DCM(5mL)中的3-乙基-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体65)(被其区域异构体3-乙基-8-氟-5-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(160mg，0.72mmol)。将所得混合物在室温下搅拌4h。蒸发溶剂以得到粗产物，将所述粗产物通过快速C18快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水中的5％值30％MeCN(0.4％FA)。将纯级分蒸发至干以提供呈黄色固体的2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(被其区域异构体3-乙基-8-氟-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(中间体69)(110mg，69％)。m/z(ES+)[M+H]+＝221。
实例27：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将异丙醇钛(64.5mg，0.23mmol)添加到在THF(3mL)中的2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体69)(被其区域异构体3-乙基-8-氟-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(50mg，0.23mmol)和6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(54.1mg，0.23mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2min。添加三乙酰氧基硼氢化钠(中间体32)(192mg，0.91mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用MeOH(0.1mL)淬灭。蒸发溶剂以提供粗产物。将粗残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm 5um；流动相A：水(0.05％TFA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在10min内10％B至20％B；254；220nm)和(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10um；流动相A：水(10MMOL/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在7min内21B至95B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例27)(6mg，6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.56-2.64(4H,m),2.76(3H,d),2.82(2H,q),3.14-3.20(4H,m),3.71(2H,s),7.27-7.33(1H,m),7.53-7.59(2H,m),7.82-7.86(1H,m),8.38-8.45(1H,m),12.46(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-72.58,-135.51；m/z(ES+)[M+H]+＝443。
实例28：6-氯-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将异丙醇钛(51.6mg，0.18mmol)添加到在THF(3mL)中的2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体69)(被其区域异构体3-乙基-8-氟-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(40mg，0.18mmol)和6-氯-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体30)(50mg，0.20mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(154mg，0.73mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用MeOH(0.1mL)淬灭并且蒸发以提供粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5um；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内21B至41B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氯-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例28)(37.5mg，45％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.57-2.65(4H,m),2.76-2.86(5H,m),3.05-3.15(4H,m),3.72(2H,s),7.29(1H,t),7.55(1H,d),7.65(1H,d),7.93(1H,d),8.40-8.45(1H,m),12.45(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.46；m/z(ES+)[M+H]+＝459。
实例29：5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲 基-吡啶-2-甲酰胺
将异丙醇钛(51.6mg，0.18mmol)添加到在THF(3mL)中的2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(中间体69)(被其区域异构体3-乙基-8-氟-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(40mg，0.18mmol)和N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体31)(50mg，0.23mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(154mg，0.73mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用MeOH(0.1mL)淬灭并且浓缩以提供粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Xselect CSH OBD柱30*150mm 5um，n；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内6B至17B；254；220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例29)(17.29mg，22％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.53-2.63(4H,m),2.74-2.87(5H,m),3.05-3.15(4H,m,合并入水峰中),3.69(2H,s),7.29(1H,t),7.37(1H,dd),7.54(1H,d),7.81(1H,d),8.25(1H,d),8.35-8.42(1H,m),12.44(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.49；m/z(ES+)[M+H]+＝425。
中间体70：5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛
将戴斯-马丁高碘烷(1.34g，3.16mmol)添加到在DCM(20ml)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体17)(被8-氟-5-(羟甲基)-3-甲基-1H-喹喔啉-2-酮污染)(0.33g，0.79mmol)。将所得混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物蒸发，以得到粗产物。将粗产物通过快速C18快速色谱法(在水中的5至30％MeCN(0.4％FA)的洗脱梯度)纯化。将纯级分蒸发至干，以得到呈灰白色固体的5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(被8-氟-3-甲基-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(中间体70)(0.300g，92％)。m/z(ES+)[M+H]+＝207。
实例30：6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]- N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将异丙醇钛(89mg，0.31mmol)添加到在THF(3mL)中的5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(被8-氟-3-甲基-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(中间体70)(150mg，0.36mmol)和6-氯-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体30)(80mg，0.31mmol)。将所得混合物在室温下搅拌20分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(266mg，1.26mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用MeOH(0.1mL)淬灭并且浓缩以提供粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10um；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：MeOH-制备型；流速：20mL/min；梯度：在7min内57B至80B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例30)(35.6mg，25％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),2.58-2.66(4H,m),2.79(3H,d),3.06-3.16(4H,m),3.72(2H,s),7.30(1H,t),7.53(1H,d),7.65(1H,d),7.93(1H,d),8.41-8.48(1H,m),12.47(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.45；m/z(ES+)[M+H]+＝445。
实例31：5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
将异丙醇钛(105mg，0.37mmol)添加到在THF(3mL)中的5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(被8-氟-3-甲基-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(中间体70)(150mg，0.36mmol)和N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，HCl(中间体33)(100mg，0.37mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(313mg，1.48mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用MeOH(0.1mL)淬灭并且蒸发以提供粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5um；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内19B至39B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈灰白色固体的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例31)(12.39mg，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),2.48(3H,s),2.57-2.67(4H,m),2.80(3H,d),2.90-2.98(4H,m),3.72(2H,s),7.30(1H,t),7.47(1H,d),7.52(1H,d),7.79(1H,d),8.39-8.46(1H,m),12.46(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.52；m/z(ES+)[M+H]+＝425。
实例32：5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲 基-吡啶-2-甲酰胺
将异丙醇钛(103mg，0.36mmol)添加到在THF(3mL)中的5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-甲醛(被8-氟-3-甲基-2-氧代-1H-喹喔啉-5-甲醛污染)(150mg，0.36mmol)和N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体31)(80mg，0.36mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(308mg，1.45mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用MeOH(0.1mL)淬灭。将反应混合物蒸发，以得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Xbridge Phenyl OBD柱，5um，19*150mm；流动相A：水(0.05％TFA)，流动相B：MeOH-制备型；流速：20mL/min；梯度：在12min内24B至32B；254/220nm和(柱：XBridgeShieldRP18OBD柱，19*250mm，10um；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在10min内15B至30B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(12.4mg，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),2.55-2.60(4H,m),2.78(3H,d),2.90-2.98(4H,m,合并入水峰中),3.70(2H,s),7.30(1H,t),7.38(1H,dd),7.52(1H,d),7.82(1H,d),8.26(1H,d),8.38-8.43(1H,m),12.47(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.48；m/z(ES+)[M+H]+＝411。
中间体72：4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺
将铁粉(5.2g，93.11mmol)添加到在MeOH(30mL)中的4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺(中间体71)(7.3g，31.06mmol)和HCl(10mL，100.00mmol)(10M)中。将所得混合物在室温下搅拌18小时。在减压下除去溶剂。将反应混合物用饱和Na2CO3溶液(100mL)碱化。将水层用EtOAc(2x 100mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发以提供呈黑色固体的4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺(中间体72)(6.05g，95％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)4.66(2H,s),4.94(2H,s),6.30(1H,dd),6.56(1H,dd)；m/z(ES+)[M+H]+＝205,207。
中间体73：7-溴-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
将在甲苯中的2-氧代乙酸乙酯(6.41g，31.39mmol)添加到甲苯(30mL)中的4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺(中间体72)(4.46g，21.75mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌30分钟。在减压下除去溶剂。将反应混合物用(PE：10mL和EA：2mL)稀释。通过过滤收集沉淀，用EtOAc(5mL)洗涤并且在真空下干燥以提供呈灰白色固体的7-溴-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体73)(被6-溴-5-氟-1H-喹喔啉-2-酮污染)(2.75g，52％)。m/z(ES+)[M+H]+＝243。
中间体74：8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将CataCXium A-Pd-G2(0.12g，0.18mmol)添加到在1,4-二噁烷(30mL)中的(三丁基甲锡烷基)甲醇(1.25g，3.89mmol)和7-溴-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(中间体73)(1g，2.06mmol)(被6-溴-5-氟-1H-喹喔啉-2-酮污染)。将所得混合物在氮气下在100℃下搅拌18小时。将反应混合物用饱和KF(10mL)淬灭，过滤并且蒸发以提供粗产物。将粗产物通过快速C18快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水中的3至30％MeCN(0.1％甲酸)。将纯级分蒸发至干以提供呈灰白色固体的8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体74)(260mg，69％)(被5-氟-6-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)。m/z(ES+)[M+H]+＝195。
实例33：5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶- 2-甲酰胺
将SOCl2(0.3mL，4.11mmol)添加到在DCM(3mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体74)(158mg，0.41mmol)(被5-氟-6-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。在减压下除去溶剂。将DIPEA(0.25mL，1.43mmol)和N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体31)(141mg，0.64mmol)添加到在NMP(3.00mL)中的混合物。将所得混合物在80℃下搅拌1h。粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250mm，5um；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在9min内18B至24B；254；220nm)。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例33)(13.00mg，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.55-2.60(4H,m),2.77(3H,d),3.28-3.33(4H,m),3.71(2H,s),7.30-7.42(2H,m),7.61(1H,d),7.82(1H,d),8.20(1H,s),8.25(1H,d),8.37-8.42(1H,m)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-129.26；m/z(ES+)[M+H]+＝397。
实例34：6-氯-5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基- 吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.3mL，4.11mmol)添加到在DCM(3mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体74)(被5-氟-6-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(143mg，0.37mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。在减压下除去溶剂。将DIPEA(0.25mL，1.43mmol)和6-氯-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体30)(101mg，0.40mmol)添加到在NMP(3.00mL)中的混合物中。将所得混合物在80℃下搅拌1h。粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge PrepOBD C18柱，19*250mm，5um；流动相A：水(10MMOL/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在9min内25B至28B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氯-5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例34)(23.0mg，14％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)2.58-2.65(4H,m),2.78(3H,d),3.07-3.14(4H,m),3.73(2H,s),7.35(1H,dd),7.61(1H,d),7.65(1H,d),7.93(1H,d),8.20(1H,s),8.41-8.45(1H,m),12.58(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.18；m/z(ES+)[M+H]+＝431。
实例35：5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基- 吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.3mL，4.11mmol)添加到在DCM(3mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体74)(被5-氟-6-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(143mg，0.37mmol)(153mg，0.39mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。在减压下除去溶剂。将在NMP(3mL)中的DIPEA(0.25mL，1.43mmol)和N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体33)(137mg，0.58mmol)添加到混合物中。将所得混合物在80℃下搅拌1h。粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250mm，5um；流动相A：水(10MMOL/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在9min内24B至28B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例35)(13.0mg，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.48(3H,s),2.56-2.65(4H,s),2.79(3H,d),2.92-2.97(4H,m),3.73(2H,s),7.31-7.39(1H,m),7.47(1H,d),7.61(1H,d),7.78(1H,d),8.19(1H,s),8.39-8.44(1H,m),12.55(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-135.25；m/z(ES+)[M+H]+＝411。
实例36：6-氟-5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基- 吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.3mL，4.11mmol)添加到在DCM(3mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(被5-氟-6-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(144mg，0.37mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。在减压下除去溶剂。将DIPEA(0.25mL，1.43mmol)和6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体32)(94mg，0.39mmol)添加到在NMP(3.00mL)中的混合物中。将所得混合物在80℃下搅拌1h。粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Prep OBD C18柱，19*250mm，5um；流动相A：水(10MMOL/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在9min内23B至25B；254/220nm；RT1:6.9,8.46。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氟-5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例36)(16.0mg，10％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)2.56-2.62(4H,m),2.76(3H,d),3.13-3.20(4H,m),3.71(2H,d),7.33(1H,dd),7.55(1H,t),7.61(1H,d),7.83(1H,dd),8.19(1H,s),8.37-8.43(1H,m),12.56(1H,brs)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-72.57,-135.21；m/z(ES+)[M+H]+＝415。
实例37：5-[4-[[2-(二氟甲基)-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1- 基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将氯化铁(II)(6.18mg，0.05mmol)和二氟甲亚磺酸锌(II)(86mg，0.29mmol)在水(0.5mL)中的溶液分批添加到5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例35)(40.0mg，0.10mmol)和TFA(7.51μl，0.10mmol)在DMSO(3mL)中的搅拌溶液中。随后添加叔丁基过氧化氢(9.44μl，0.10mmol)并且将所得混合物在室温下搅拌2h。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱，柱：XBridgePrep OBDC18柱，30×150mm5um；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内12％B至32％B；254/220nm；Rt：6.07min。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈淡黄色固体的5-[4-[[2-(二氟甲基)-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例37)(2.2mg，5％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)2.49(3H,s),2.60-2.65(4H,m),2.80(3H,d),2.92-2.99(4H,m),3.76(2H,s),7.08(1H,t),7.39(1H,t),7.48(1H,d),7.70(1H,d),7.79(1H,d),8.42(1H,q),13.01(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-124.324,-134.183；m/z(ES+)[M+H]+＝461。
中间体72：4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺
在室温下将铁粉(3.56g，63.83mmol)添加到在MeOH(30mL)中的4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺(中间体71)(3.00g，12.77mmol)、浓氯化氢(10.64ml，127.65mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用水(100mL)稀释并且用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取。将有机层经MgSO4干燥，过滤并且蒸发以提供4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺(中间体72)(2.5g，96％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)4.66(2H,s),4.94(2H,s),6.30(dd,1H),6.56(dd,1H)；m/z(ES+)[M+H]+＝205。
中间体75：7-溴-8-氟-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将2,2,2-三甲氧基乙酸甲酯(2.402g，14.63mmol)添加到在甲苯(20mL)中的4-溴-3-氟苯-1,2-二胺(中间体72)(1.500g，7.32mmol)、三(((三氟甲基)磺酰基)氧基)镱(0.454g，0.73mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌5h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相色谱法在C18柱上纯化，洗脱梯度为在水中的5％至70％MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈白色固体的7-溴-8-氟-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体75)(0.650g，32％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)3.97(3H,s),7.31(1H,dd),7.45(1H,dd)；m/z(ES+)[M+H]+＝273。
中间体76：8-氟-7-(羟甲基)-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下在氮气下将(三丁基甲锡烷基)甲醇(882mg，2.75mmol)添加到在1,4-二噁烷(20mL)中的7-溴-8-氟-3-甲氧基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体75)(300.0mg，1.1mmol)、cataCXiumA-Pd-G2(73mg，0.11mmol)中。将所得混合物在100℃下搅拌16h。将反应混合物用饱和KF(10mL)淬灭并且然后过滤。在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相色谱法在C18柱上纯化，洗脱梯度为在水中的5％至100％MeOH。将纯级分蒸发至干以提供呈白色固体的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体76)(130mg，53％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)3.97(3H,s),4.88(2H,d),5.36(1H,s),7.27-7.32(1H,m),7.36(1H,d),12.45(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝225。
中间体77：7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将SOCl2(8ml，109.62mmol)添加到在乙醚(50mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体76)(50.0mg，0.22mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌16h。在减压下除去溶剂以提供呈黄色油状物的7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体77)(66.7mg，122％,粗品)。将产物不经进一步纯化直接用于下一步骤。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)3.97(3H,s),4.88(2H,s),7.27-7.42(2H,m),12.60(1H,s)m/z(ES+)[M+H]+＝243。
实例38：5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N- 甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体31)(150mg，0.68mmol)添加到在MeCN(10mL)中的7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体77)(198mg，0.82mmol)、DIPEA(0.595mL，3.40mmol)中。将所得混合物在60℃下搅拌16h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过快速C18-快速色谱法纯化(洗脱梯度为在水中的5％至70％MeCN)。将纯级分蒸发至干以提供呈黄色固体的产物(103.0mg)(通过UV，纯度为80％)。通过快速C18-快速色谱法重新纯化，洗脱梯度为在水中的5％至70％的MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈黄色固体的5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例38)(36.0mg，12％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)2.51-2.60(4H,m),2.77(3H,d),3.18-3.45(4H,m),3.66(2H,s),3.95(3H,s),7.10-7.27(1H,m),7.27-7.42(2H,m),7.81(1H,d),8.25(1H,d),8.39(1H,q),12.30(1H,s)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)-134.783；m/z(ES+)[M+H]+＝427。
实例39：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1- 基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将SOCl2(0.065mL,0.89mmol)添加到在乙醚(10mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体76)(0.040g，0.18mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌16h。在减压下除去溶剂。在室温下将在MeCN(10.00mL)中的6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体32)(0.043g，0.18mmol)和DIPEA(0.156mL，0.89mmol)添加到以上固体中。将所得混合物在60℃下搅拌16h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过制备型HPLC柱纯化，柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10um；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在7min内34B至48B；254/220nm；RT1：5.9。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例39)(0.020g，25％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)2.55-2.61(4H,m),2.75(3H,d),3.11-3.19(4H,m),3.67(2H,s),3.96(3H,s),7.18-7.29(1H,m),7.35(1H,d),7.55(1H,dd),7.79-7.88(1H,m),8.41(1H,d),12.50(1H,s)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)-72.581,-134.799；m/z(ES+)[M+H]+＝445。
实例40：5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N, 6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体33)(0.097g，0.41mmol)添加到在MeCN(10mL)中的7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体77)(0.100g，0.41mmol)、DIPEA(0.360mL，2.06mmol)中。将所得混合物在60℃下搅拌16h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过制备型HPLC纯化，柱：XBridge Prep OBD C18柱，30×150mm5um；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内10B至30B；254/220nm。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例40)(0.063g，35％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.48(3H,s),2.58-2.63(4H,m),2.80(3H,d),2.92-2.96(4H,m),3.69(2H,s),3.97(3H,s),7.25(1H,t),7.36(1H,d),7.47(1H,d),7.79(1H,d),8.43(1H,q),12.51(1H,s)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-134.815；m/z(ES+)[M+H]+＝441。
实例41：6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1- 基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将SOCl2(0.065mL,0.89mmol)添加到在乙醚(10mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体76)(0.040g，0.18mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌16h。在减压下除去溶剂以提供粗7-(氯甲基)-8-氟-3-甲氧基-1H-喹喔啉-2-酮(0.045g，0.18mmol)。向以上固体中添加MeCN(10.00mL)，然后添加6-氯-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体30)(0.045g，0.18mmol)和DIPEA(0.156mL，0.89mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌16小时。在减压下除去溶剂。将粗产物通过制备型HPLC柱纯化，柱：YMC-Actus Triart C18，30*250，5um；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内21B至41B；254，220nm；RT1：6.18。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例41)(0.041g，50％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)2.56-2.66(4H,m),2.79(3H,d),3.06 3.16(4H,m),3.70(2H,s),3.97(3H,s),7.19-7.30(m,1H),7.36(d,1H),7.66(d,1H),7.93(d,1H),8.44(d,1H),12.47(s,1H)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)-134.746；m/z(ES+)[M+H]+＝461。
中间体78：2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丁酸
在室温下将2-氨基丁酸(0.793g，7.69mmol)添加到在DMF(20mL)中的1-溴-4-氟-2-甲基-3-硝基苯(中间体2)(1.500g，6.41mmol)、K2CO3(2.66g，19.23mmol)中。将所得混合物在100℃下搅拌6h。将反应混合物倒入冰水中，在0℃下用1M HCl(20mL)缓慢淬灭以得到黄色悬浮液。通过过滤收集固体，用水洗涤并干燥以提供呈黄色固体的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丁酸(中间体78)(1.4g，74％)(不是很纯，未经进一步纯化直接用于下一步骤)。m/z(ES+)[M+H]+＝317。
中间体79：7-溴-3-乙基-8-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将铁粉(1.585g，28.38mmol)缓慢添加到在MeOH(100mL)中的2-(4-溴-3-甲基-2-硝基-苯胺基)丁酸(中间体78)(1.800g，5.68mmol)、浓氯化氢(4.73ml，56.76mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌7h。将反应混合物过滤。在减压下除去溶剂。将反应混合物用饱和Na2CO3(40mL)淬灭并且用EtOAc(3x 50mL)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发以提供棕色固体。将粗产物通过快速C18-快速色谱法纯化(洗脱梯度为在水中的5％至50％MeCN)。将纯级分蒸发至干以提供呈白色固体的7-溴-3-乙基-8-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体79)(650mg，43％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)0.90(3H,t),1.43-1.72(2H,m),2.22(3H,s),3.56(1H,ddd),6.16(1H,d),6.56(1H,d),6.97(1H,d),9.76(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝269。
中间体80：7-溴-3-乙基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下将DDQ(1.316g，5.80mmol)添加到在1,4-二噁烷(150mL)中的7-溴-3-乙基-8-甲基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体79)(1.300g，4.83mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌3h。在减压下除去溶剂。将反应混合物用饱和NaHCO3(150mL)淬灭。通过过滤收集沉淀。将固体用水(10mL x 3)洗涤并且在真空下干燥以提供呈黄色固体的所需产物7-溴-3-乙基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体80)(1.2g，93％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)1.20(3H,t),2.44-2.53(3H,m),2.78(2H,q),7.48(2H,s),11.74(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝267。
中间体81：3-乙基-7-(羟甲基)-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
在室温下在氮气下将(三丁基甲锡烷基)甲醇(1202mg，3.74mmol)添加到在1,4-二噁烷(40mL)中的7-溴-3-乙基-8-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体80)(400mg，1.50mmol)、Pd(PPh3)4(173mg，0.15mmol)中。将所得混合物在60℃下搅拌16h。将反应混合物用KF(10mL)淬灭并且滤出固体。在减压下除去溶剂。将粗产物通过快速C18-快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水中的5％至100％MeOH。将纯级分蒸发至干以提供呈白色固体的3-乙基-7-(羟甲基)-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体81)(100mg，31％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.22(3H,t),2.32(3H,s),2.81(2H,q),4.59(2H,d),5.25(1H,s),7.33(1H,d),7.55(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝219。
实例42：5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N, 6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将在AcOH中的HBr(1ml，6.08mmol)(33w％)添加到3-乙基-7-(羟甲基)-8-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体81)(65.0mg，0.30mmol)中。将所得混合物在60℃下搅拌2h。在减压下除去溶剂。在室温下将在NMP(3mL)中的N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体33)(69.8mg，0.30mmol)和DIPEA(0.156ml，0.89mmol)添加到以上固体中。将所得混合物在60℃下搅拌2h。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱，柱：Sunfireprep C18柱，30*150，5um；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内9B至20B；254/220nm；RT1：5.15；将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈淡黄色固体的5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例42)(0.049g，38％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.20(3H,t),2.42(3H,s),2.50(3H,s),2.53-2.59(4H,m),2.73-2.86(5H,m),2.87-2.93(4H,m),3.61(2H,s),7.23(1H,d),7.45(1H,d),7.52(1H,d),7.76(1H,d),8.39(1H,d),11.52(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝435。
实例43：5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6- 氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温将在AcOH中的HBr(1ml，6.08mmol)(33w％)添加到3-乙基-7-(羟甲基)-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体81)(65.0mg，0.30mmol)中。将所得混合物在60℃下搅拌2小时。在减压下除去溶剂。在室温下将6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体32)(71.0mg，0.30mmol)添加到以上固体中，然后添加在NMP(3mL)中的DIPEA(0.156ml,0.89mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌2小时。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱，柱：XBridge Prep OBD C18柱，30×150mm 5um；流动相A：水(0.05％NH3H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内31B至51B；254/220nm；RT1：6.27；将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈淡黄色固体的5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例43)(0.043g，33％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.20(3H,t),2.41(3H,s),2.49-2.59(4H,m),2.70-2.81(5H,m),3.08-3.16(4H,m),3.59(2H,s),7.22(1H,d),7.47-7.60(2H,m),7.82(1H,dd),8.37(1H,d),11.52(1H,s)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)-72.539；m/z(ES+)[M+H]+＝439。
实例44：5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N- 甲基-吡啶-2-甲酰胺
在室温下将在AcOH中的HBr(1ml，18.42mmol)(33wt％)添加到3-乙基-7-(羟甲基)-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(中间体81)(65.0mg，0.30mmol)中。将所得混合物在60℃下搅拌2小时。在减压下除去溶剂。在室温下将N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体31)(65.6mg，0.30mmol)和DIPEA(0.156ml，0.89mmol)添加到在NMP(3mL)中的以上固体中。将所得混合物在60℃下搅拌2h。粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Sunfireprep C18柱，30*150，5um；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内9B至20B；254/220nm；RT1：5.15；将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈淡黄色固体的5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例44)(0.014g，10％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.16-1.26(3H,m),2.41(3H,s),2.49-2.59(4H,m),2.70-2.81(5H,m),3.30-3.35(4H,m,合并入水峰中),3.61(2H,s),7.25(1H,d),7.38(1H,d),7.55(1H,d),7.82(1H,d),8.26(1H,s),8.38(1H,s),11.53(1H,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝421。
中间体82：4-[6-(乙基氨基甲酰基)-2-氟-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体11)(500mg，1.47mmol)添加到在水中的乙胺(10mL，1.47mmol)(65wt％)中。将所得混合物在室温下搅拌2h。反应达到完成。通过过滤收集沉淀，用水(2mL x 3)洗涤并且在真空下干燥以提供呈灰白色固体的4-[6-(乙基氨基甲酰基)-2-氟-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体82)(0.515g，99％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)1.09(3H,t),1.42(9H,s),3.11(4H,t),3.23-3.30(2H,m),3.49(4H,t),7.59(1H,dd),7.85(1H,d),8.45(1H,t)；m/z(ES+)[M+H]+＝353。
中间体83：N-乙基-6-氟-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺
将4-[6-(乙基氨基甲酰基)-2-氟-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体82)(536mg，1.52mmol)添加到在1,4-二噁烷中的HCl(5mL，20.00mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。添加DIPEA(5mL)并且将所得混合物在室温下搅拌15min。将反应混合物蒸发以提供粗产物。将粗产物通过快速C18-快速色谱法纯化，洗脱梯度为以在水(0.1％NH4HCO3)中的5％至50％MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈黄色固体的N-乙基-6-氟-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体83)(0.368g，96％)。样品不纯，未经进一步纯化直接用于下一步骤；m/z(ES+)[M+H]+＝253。
实例45：N-乙基-6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌 嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺
将Ph3P(94mg，0.36mmol)添加到在CH2Cl2(3mL)中的CBr4(119mg，0.36mmol)、8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(中间体17)(50mg，0.24mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。在减压下除去溶剂。将在NMP(3mL)中的N-乙基-6-氟-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体83)(60mg，0.24mmol)和DIPEA(1.5mL，8.59mmol)添加到混合物中。将所得混合物在80℃下搅拌2h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过快速C18快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水(NH4HCO3)中的0至25％MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈白色固体的N-乙基-6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺(实例45)(2.60mg，3％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)1.09(3H,t),2.40(3H,s),2.52-2.62(4H,m),3.17-3.27(4H,m),3.25(2H,q),3.68(2H,s),7.28(1H,t),7.48-7.59(2H,m),7.82(1H,d),8.41(1H,t),12.48(1H,s)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)-72.58,-135.52；m/z(ES+)[M+H]+＝443。
中间体84：5-溴-N-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将在H2O中的乙胺(3mL，2.20mmol)(65wt％)添加到5-溴-6-甲基-吡啶-2-甲酸甲酯(中间体14)(505mg，2.20mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌18h。在减压下除去溶剂以提供呈黄色固体的5-溴-N-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺(中间体84)(0.500g，94％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)1.13(3H,t),2.66(3H,s),3.26-3.39(2H,m),7.76(1H,d),8.18(1H,d),8.67-8.72(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝243。
中间体85：4-[6-(乙基氨基甲酰基)-2-甲基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将Cs2CO3(1.340g，4.11mmol)添加到在1,4-二噁烷(5mL)中的5-溴-N-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺(中间体84)(0.5g，2.06mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.575g，3.09mmol)、BINAP(0.128g，0.21mmol)和Pd(OAc)2(0.046g,0.21mmol)中。将所得混合物在100℃下在氮气下搅拌18h。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并且用水(10mLx 2)洗涤并且然后用盐水(10mL x 1)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发以提供粗产物。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法纯化，洗脱梯度为在石油醚中的0至40％EtOAc。将纯级分蒸发至干以提供呈黄色固体的4-[6-(乙基氨基甲酰基)-2-甲基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体85)(0.481g，67％)。1H NMR(300MHz,氯仿-d)1.26(3H,t),1.49(9H,s),2.54(3H,s),2.85-2.98(4H,m),3.49(2H,qd),3.56-3.65(4H,m),7.32(1H,d),7.91-8.01(2H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝349。
中间体86：N-乙基-6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺
将在1,4-二噁烷中的HCl(4ml，16.00mmol，4M)添加到在MeOH(10mL)中的4-[6-(乙基氨基甲酰基)-2-甲基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体85)(0.481g，1.38mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2小时。在减压下除去溶剂。将反应混合物用在MeOH(3mL)中的DIPEA(1mL)碱化。在减压下除去溶剂。将粗产物通过快速C18快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水(NH4HCO3)中的0至20％MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈黄色油状物的N-乙基-6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体86)(0.189g，55％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)1.12(3H,t),2.81-2.92(8H,m),3.27-3.36(5H,m),7.46(1H,d),7.81(1H,d),8.43(1H,t)；m/z(ES+)[M+H]+＝249。
实例46：N-乙基-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1- 基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将Ph3P(299mg，1.14mmol)添加到在CH2Cl2(3.00mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-甲基喹喔啉-2(1H)-酮(158mg，0.76mmol)(中间体17)、CBr4(378mg，1.14mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌1h。在减压下除去溶剂。将N-乙基-6-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体86)(188mg，0.76mmol)和DIPEA(1.5mL，8.59mmol)添加到在NMP(3mL)中的混合物中。将所得混合物在80℃下搅拌2h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过快速C18快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水(NH4HCO3)中的0至25％MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈白色固体的N-乙基-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例46)(7.40mg，2％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.10(3H,t),2.40(3H,s),2.50(3H,s),2.54-2.64(4H,m),2.87-2.97(4H,m),3.30(2H,q),3.70(2H,s),7.28(1H,t),7.47(1H,d),7.52(1H,d),7.77(1H,d),8.42(1H,t),12.44(1H,s)；19F NMR(282MHz,DMSO-d6)-135.54；m/z(ES+)[M+H]+＝439。
中间体87：7-溴-8-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将3,3,3-三氟-2-氧代丙酸乙酯(2.30g，13.52mmol)添加到在甲苯(10mL)中的4-溴-3-氟-苯-1,2-二胺(中间体72)(2.20g,10.73mmol)中。将所得混合物在100℃下搅拌18h。在减压下除去溶剂。将粗产物通过快速C18-快速色谱法纯化，洗脱梯度为以在水(0.1％NH4HCO3)中的3％至70％MeCN。将纯级分蒸发至干以提供呈灰白色固体的7-溴-8-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体87)(被6-溴-5-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(3.40g，501％)。m/z(ES+)[M+H]+＝311。
中间体88：8-氟-7-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮将CataCxiumAPd G2(53mg，0.08mmol)添加到在1,4-二噁烷(15mL)中的7-溴-8-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体87)(被6-溴-5-氟-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(0.5g，0.80mmol)和(三丁基甲锡烷基)甲醇(0.5mL，0.80mmol)中。将所得混合物在80℃下在氮气下搅拌18h。将反应混合物用饱和KF(1.25mL)淬灭。通过过滤收集反应溶液，用二噁烷(2.5mL)洗涤。在减压下除去合并的有机层的溶剂。将粗产物通过快速C18快速色谱法纯化，洗脱梯度为在水中的3％至40％MeCN(0.1％TFA)。将纯级分蒸发至干以提供呈灰白色固体的8-氟-7-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体88)(被5-氟-6-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(0.217g，51％)。m/z(ES+)[M+H]+＝263。
实例47：5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1- 基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.5mL，6.85mmol)添加到在Et2O(5mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体88)(被5-氟-6-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(160mg，0.31mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2h。在减压下除去溶剂。将DIPEA(4mL，22.90mmol)和N,6-二甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体33)(134mg，0.57mmol)添加到在MeCN(10mL)中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌24h。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5μm，19mm 250mm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在10min内24B至33B；254/220nm；RT1：8.2/9.5)，将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例47)(8.8mg，6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.50(3H,s),2.58-2.66(4H,m),2.79(3H,d),2.90-2.99(4H,m),3.77(2H,s),7.41(1H,t),7.47(1H,d),7.72(1H,d),7.78(1H,d),8.39-8.44(1H,m),13.21(1H,brs)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-68.50,-133.81；m/z(ES+)[M+H]+＝479。
实例48：6-氟-5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪- 1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.4mL，5.48mmol)添加到在Et2O(5mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体88)(被5-氟-6-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(120mg，0.23mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2h。在减压下除去溶剂。将DIPEA(2mL，11.45mmol)和6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体32)(156mg，0.65mmol)添加到在MeCN(10mL)中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌24h。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge BEH C18 OBD Prep柱，5μm，19mm 250mm；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在10min内25B至37B；254/220nm；RT1：7.58/8.97)。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氟-5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例48)(8.9mg，8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.58-2.65(4H,m),2.76(3H,d),3.14-3.21(4H,m),3.75(2H,s),7.39(1H,t),7.56(1H,dd),7.71(1H,d),7.84(1H,dd),8.37-8.43(1H,m),13.39(1H,brs)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-68.48,-72.59,-133.78；m/z(ES+)[M+H]+＝483。
实例49：6-氯-5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪- 1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.4mL，5.48mmol)添加到在Et2O(5mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体88)(被5-氟-6-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(120mg，0.23mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2h。在减压下除去溶剂。将DIPEA(2mL，11.45mmol)和6-氯-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体30)(157mg，0.62mmol)添加到在MeCN(10mL)中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌24h。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10um；流动相A：水(10MMOL/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在10min内45B至57B；254/220nm)。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的6-氯-5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例49)(18mg，16％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.60-2.68(4H,m),2.78(3H,d),3.07-3.16(4H,m),3.77(2H,s),7.40(1H,t),7.66(1H,d),7.72(1H,d),7.93(1H,d),8.40-8.43(1H,m),13.25(1H,brs)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-68.51,-133.73；m/z(ES+)[M+H]+＝499。
实例50：5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1- 基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将SOCl2(0.4mL，5.48mmol)添加到在Et2O(5mL)中的8-氟-7-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(中间体88)(被5-氟-6-(羟甲基)-3-(三氟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮污染)(120mg，0.23mmol)中。将所得混合物在室温下搅拌2。在减压下除去溶剂。将DIPEA(2mL，11.45mmol)和N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺(中间体31)(259mg，1.18mmol)添加到在MeCN(10mL)中的混合物中。将所得混合物在室温下搅拌24h。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10um；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在10min内15B至35B；254/220nm；RT1：10.18/11.2)。将含有所需化合物的级分蒸发至干以提供呈白色固体的5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例50)(6mg，6％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.51-2.57(4H,m),2.76(3H,d),3.25-3.34(4H,m),3.72(2H,s),7.30(1H,t),7.39(1H,dd),7.65(1H,d),7.83(1H,d),8.27(1H,d),8..36-8.41(1H,m)；19F NMR(376MHz,DMSO-d6)-68.34,-133.80；m/z(ES+)[M+H]+＝465。
中间体90：2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-甲基-丁酸甲酯
将DIPEA(2.202mL，12.61mmol)缓慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯(中间体35)(1g，4.20mmol)和缬氨酸甲酯，HCl(中间体89)(0.704g，4.20mmol)在DMF(6mL)中的搅拌溶液中。将所得溶液在室温下搅拌18小时(根据LCMS完全转化为所需产物)。将反应混合物浓缩，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。将粗产物经由正相色谱法用己烷:乙酸乙酯纯化以产生呈亮橙色固体的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-甲基-丁酸甲酯(0.763g，52.0％)(中间体90)。1H NMR(500MHz,二氯甲烷-d2)1.00-1.14(6H,m),2.20-2.35(1H,m),3.78(3H,s),4.06(1H,dd),6.52(1H,br d),7.39(1H,br d),7.52(1H,dd)；19F NMR(471MHz,二氯甲烷-d2)-109.33(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝349。
中间体91：7-溴-8-氟-3-异丙基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下将锌粉(1.143g，17.48mmol)分批添加到2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-3-甲基-丁酸甲酯(0.763g，2.19mmol)(中间体90)和氯化铵(0.935g，17.48mmol)在MeOH(12mL)和水(0.3mL)中的混合物中(放热反应)，将混合物在室温下搅拌2h(无SM剩余，橙色完全消失表明反应完成)。滤出Zn，将固体滤饼用在DCM中的20％MeOH洗涤，并且将滤液在真空下浓缩。向上述粗产物中添加水，并且将产物萃取到乙酸乙酯层中。将有机层干燥并且在真空下浓缩以提供无色油状物。将粗产物在1:1乙酸乙酯:甲醇中浆化，添加0.5mL在二噁烷中的4NHCl并且将反应搅拌1h(无未环化产物剩余)。将反应混合物浓缩以产生7-溴-8-氟-3-异丙基-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体91)。假设此反应的产率为100％，将粗产物无需任何进一步纯化即可经受试剂用于下一步骤。m/z(ES+)[M+H]+＝287。
中间体92：7-溴-8-氟-3-异丙基-1H-喹喔啉-2-酮
将4,5-二氯-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1,2-二甲腈(595mg，2.62mmol)一次性添加到7-溴-8-氟-3-异丙基-3,4-二氢喹喔啉-2(1H)-酮(627mg，2.18mmol)(中间体91)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中。将所得浆料在室温下搅拌2小时(根据LCMS完全转化为所需产物)。将反应混合物在真空下浓缩并且用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。将以上浆料在室温下搅拌过夜并且滤出固体。将过滤的固体用水接着用乙醚彻底洗涤并且干燥以得到呈灰白色固体的7-溴-8-氟-3-异丙基-1H-喹喔啉-2-酮(0.425g，68.3％)(中间体92)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(6H,d),3.36-3.52(1H,m),7.45-7.58(2H,m),12.62(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-124.16(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝285。
中间体93：8-氟-7-(羟甲基)-3-异丙基-1H-喹喔啉-2-酮
将Xphos Pd G2(103mg，0.13mmol)添加到7-溴-8-氟-3-异丙基喹喔啉-2(1H)-酮(375mg，1.32mmol)溶液中(中间体92)和(三丁基甲锡烷基)甲醇(507mg，1.58mmol)在1,4-二噁烷(6.58mL)中的搅拌脱气溶液中。将所得溶液在80℃下搅拌16小时。将反应混合物在真空下浓缩，并且通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的8-氟-7-(羟甲基)-3-异丙基-1H-喹喔啉-2-酮(0.255g，82％)(中间体93)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(6H,d),3.39-3.52(1H,m),4.64(2H,d),5.41(1H,t),7.33(1H,s),7.55(1H,d),12.42(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-137.71(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝237。
中间体94：7-(溴甲基)-8-氟-3-异丙基-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下在氮气下经5分钟的时间将三乙基膦(0.477ml，3.23mmol)逐滴添加到8-氟-7-(羟甲基)-3-异丙基喹喔啉-2(1H)-酮(0.2541g，1.08mmol)(中间体93)和CBr4(1.177g，3.55mmol)在DCM(8.49mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1h，在真空下除去DCM并且将所得固体在乙醚中浆化。在真空下过滤白色ppt，用水并且然后用醚洗涤。将固体在真空下干燥过夜(不加热)以得到呈浅棕色固体的7-(溴甲基)-8-氟-3-异丙基-1H-喹喔啉-2-酮(0.313g，97％)(中间体94)。m/z(ES+)[M+H]+＝299。
实例51：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1- 基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-异丙基喹喔啉-2(1H)-酮(100mg，0.33mmol)(中间体94)中添加6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(104mg，0.33mmol)(中间体32)、乙腈(5mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(291μL，1.67mmol)并且加热至70℃。LCMS指示在1h后SM完全消失以及形成所需产物。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。过滤沉淀并且用大量水(50mL)洗涤。将固体通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.050g，32.8％)(实例51)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(6H,d),2.53-2.65(4H,m),2.77(3H,d),3.12-3.24(4H,m),3.36-3.52(1H,m),3.71(2H,s),7.30(1H,t),7.52-7.59(2H,m),7.84(1H,d),8.36-8.41(1H,m),12.46(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.53(1F,s),-72.59(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝457。
实例52：5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N, 6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-异丙基喹喔啉-2(1H)-酮(109mg，0.36mmol)(中间体94)中添加N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(112mg，0.36mmol)(中间体33)、乙腈(5mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(317μl，1.82mmol)并且加热至70C。LCMS指示在1h后SM完全消失以及形成所需产物。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。过滤沉淀并且用大量水(50mL)洗涤。将固体通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.057g，34.6％)(实例52)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(6H,d),2.46-2.49(3H,m),2.52-2.68(4H,m),2.80(3H,d),2.94(4H,br s),3.36-3.52(1H,m),3.73(2H,s),7.30(1H,t),7.47(1H,d),7.56(1H,d),7.79(1H,d),8.37-8.44(1H,m),12.46(1H,s)；19FNMR(471MHz,DMSO-d6)-135.55(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝453。
实例53：5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N- 甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-8-氟-3-异丙基喹喔啉-2(1H)-酮(100mg，0.33mmol)(中间体94)中添加N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(98mg，0.33mmol)(中间体31)、乙腈(5mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(291μl，1.67mmol)并且加热至70℃。LCMS指示在1h后SM完全消失以及形成所需产物。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。过滤沉淀并且用大量水(50mL)洗涤。将固体通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.052g，35.5％)(实例53)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.22(6H,d),2.52-2.61(4H,m),2.78(3H,d),3.26-3.30(4H,m),3.36-3.52(1H,m),3.70(2H,s),7.31(1H,t),7.38(1H,dd),7.56(1H,d),7.82(1H,d),8.26(1H,d),8.38(1H,br d),12.45(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.54(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝439。
中间体96：2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-2-环丙基-乙酸甲酯
将DIPEA(2.202mL，12.61mmol)缓慢添加到1-溴-2,4-二氟-3-硝基苯(中间体35)(1g，4.20mmol)和2-氨基-2-环丙基乙酸甲酯，HCl(中间体95)(0.696g，4.20mmol)在DMF(6mL)中的搅拌溶液中。将所得溶液在室温下搅拌18小时(根据LCMS完全转化为所需产物)。将反应混合物浓缩，用水稀释并且用乙酸乙酯萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤并且在真空下浓缩。将粗产物通过正相色谱法纯化(使用己烷和乙酸乙酯)以产生呈亮橙色固体的2-(4-溴-3-氟-2-硝基-苯胺基)-2-环丙基-乙酸甲酯(0.635g，43.5％)(中间体96)。1H NMR(500MHz,二氯甲烷-d2)0.39-0.49(1H,m),0.54(1H,td),0.64-0.75(2H,m),1.25-1.39(1H,m),3.74-3.83(4H,m),6.45(1H,dd),7.34(1H,br d),7.52(1H,dd)。19F NMR(471MHz,二氯甲烷-d2)-109.53(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝347。
中间体97：7-溴-3-环丙基-8-氟-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下将锌粉(957mg，14.63mmol)分批添加到2-((4-溴-3-氟-2-硝基苯基)氨基)-2-环丙基乙酸甲酯(635mg，1.83mmol)(中间体96)和氯化铵(783mg，14.63mmol)在MeOH(12mL)和水(0.3mL)中的混合物中(放热反应)，将混合物在室温下搅拌2h(无SM剩余，橙色完全消失表示反应完成)。将Zn滤出并且将固体滤饼用在DCM中的20％MeOH洗涤。将滤液浓缩，粗材料显示出大多未环化的产物。向上述粗产物中添加水，并且将产物萃取到乙酸乙酯层中。将有机层干燥并且在真空下浓缩以提供油状物。将此材料在1:1乙酸乙酯:甲醇中浆化，添加0.5mL在二噁烷中的4N HCl并且将反应混合物搅拌1h(无未环化产物剩余)。将反应混合物浓缩以产生呈灰色固体的7-溴-3-环丙基-8-氟-3,4-二氢-1H-喹喔啉-2-酮(中间体97)。假设此反应的产率为100％，将粗产物无需任何进一步纯化即可经受试剂用于下一步骤。m/z(ES+)[M+H]+＝285。
中间体98：7-溴-3-环丙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
将4,5-二氯-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1,2-二甲腈(499mg，2.20mmol)一次性添加到7-溴-3-环丙基-8-氟-3,4-二氢喹喔啉-2(1H)-酮(522mg，1.83mmol)(中间体97)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中。将所得浆料在室温下搅拌2小时(根据LCMS完全转化为所需产物)。将反应混合物在真空下浓缩并且用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。将以上浆料在室温下搅拌过夜并且滤出固体。将固体用水接着用乙醚彻底洗涤并且干燥以得到呈灰白色固体的7-溴-3-环丙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(0.382g，73.7％)(中间体98)。m/z(ES+)[M+H]+＝283。
中间体99：3-环丙基-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮
将Xphos Pd G2(92mg，0.12mmol)添加到7-溴-3-环丙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(332mg，1.17mmol)(中间体98)和(三丁基甲锡烷基)甲醇(452mg，1.41mmol)在1,4-二噁烷(5.86mL)中的搅拌脱气溶液中并且将所得混合物在80℃下搅拌16小时。将反应混合物在真空下浓缩，并且通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的3-环丙基-8-氟-7-(羟甲基)-1H-喹喔啉-2-酮(0.224克，82％)(中间体99)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.02-1.14(4H,m),2.52-2.73(1H,m),4.62(2H,d),5.38(1H,t),7.29(1H,t),7.43(1H,d),12.43(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-137.67(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝235。
中间体100：7-(溴甲基)-3-环丙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下在氮气下经5分钟的时间将三乙基膦(0.422ml，2.86mmol)逐滴添加到3-环丙基-8-氟-7-(羟甲基)喹喔啉-2(1H)-酮(0.223g，0.95mmol)(中间体99)和CBr4(1.043g，3.14mmol)在DCM(7.52mL)中的混合物中。将反应在室温下搅拌1h。在真空下除去DCM并且将所得固体在乙醚中浆化。在真空下过滤浅绿白色ppt，用水并且然后用醚洗涤。将固体在真空下干燥过夜(不加热)以得到呈浅绿色固体的7-(溴甲基)-3-环丙基-8-氟-1H-喹喔啉-2-酮(0.193g，68.2％)(中间体100)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.03-1.17(4H,m),2.63-2.76(1H,m),4.79(2H,s),7.33(1H,t),7.43(1H,d),12.55(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-133.65(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝297。
实例54：5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6- 氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-3-环丙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(75mg，0.25mmol)(中间体100)中添加6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(79mg，0.25mmol)(中间体32)、乙腈(5mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(220μl，1.26mmol)并且加热至70C。LCMS指示在1h后SM完全消失以及形成所需产物。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。过滤沉淀并且用大量水(50mL)洗涤。将固体通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.048g，41.8％)(实例54)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.04-1.13(4H,m),2.52-2.63(4H,m),2.71(1H,s),2.77(3H,d),3.12-3.21(4H,m),3.69(2H,s),7.26(1H,t),7.43(1H,d),7.55(1H,dd),7.84(1H,d),8.39(1H,br d),12.46(1H,br s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.52(1F,s),-72.58(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝455。
实例55：5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N, 6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-3-环丙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(75mg，0.25mmol)(中间体100)中添加N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(78mg，0.25mmol)(中间体33)、乙腈(5mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(220μL，1.26mmol)并且加热至70℃。LCMS显示出在1h后完全转化为所需产物。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。过滤沉淀并且用大量水(50mL)洗涤。将固体通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.049g，43.1％)(实例55)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)1.03-1.15(4H,m),2.46-2.49(3H,m),2.52-2.65(4H,m),2.65-2.75(1H,m),2.80(3H,d),2.94(4H,br s),3.71(2H,s),7.26(1H,t),7.40-7.50(2H,m),7.79(1H,d),8.37-8.44(1H,m),12.46(1H,s)；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)-135.54(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝451。
实例56：5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N- 甲基-吡啶-2-甲酰胺
向7-(溴甲基)-3-环丙基-8-氟喹喔啉-2(1H)-酮(43mg，0.14mmol)(中间体100)中添加N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(42.4mg，0.14mmol)(中间体31)、乙腈(5mL)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(126μl，0.72mmol)并且加热至70℃。LCMS指示在1h后SM完全消失以及形成所需产物。将反应混合物冷却，浓缩，用NaHCO3水溶液(1mL)淬灭并且在室温下搅拌1h。将水(3mL)添加到以上混合物中并且搅拌10min。过滤沉淀并且用大量水(25mL)洗涤。将固体通过正相色谱法纯化(使用在DCM中的0-10％MeOH)以产生呈白色固体的5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.020g，31.7％)(实例56)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.03-1.16(4H,m),2.53-2.60(4H,m),2.65-2.80(5H,m),3.68(2H,s),7.25(1H,br t),7.38(1H,dd),7.42(1H,d),7.82(1H,d),8.25(1H,d),8.35-8.40(1H,m),12.38-12.51(1H,m)(缺失的3H可能与DMSO峰重叠)；19FNMR(471MHz,DMSO-d6)-135.52(1F,s)；m/z(ES+)[M+H]+＝437
中间体102：7-溴-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将在密封管中的4-溴-3-甲基苯-1,2-二胺(1.75g，8.70mmol)(中间体101)、2,2,2-三甲氧基乙酸甲酯(2.86g，17.41mmol)和三氟甲磺酸镱(III)(0.540g，0.87mmol)在甲苯(10mL)中的混合物脱气，用N2回填，在100℃下搅拌过夜得到棕色悬浮液，LCMS指示形成所需产物，将混合物冷却至室温，通过过滤收集固体，用甲醇洗涤，干燥以产生呈黄色固体的7-溴-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(1.2g，51.2％)(中间体102)(被约8％的其区域异构体6-溴-3-甲氧基-5-甲基喹喔啉-2(1H)-酮污染)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.50(3H,brs),3.97(3H,s),7.32(1H,d),7.45(1H,d),11.79(1H,br s)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝269。
中间体103：7-(羟甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
将(三丁基甲锡烷基)甲醇(1.844g，5.74mmol)、7-溴-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(1.03g，3.83mmol)(中间体102)和Xphos Pd G2(0.452g，0.57mmol)在1,4-二噁烷(40mL)中的混合物在80℃下在N2下搅拌过夜，得到深色混合物，LCMS指示接近完全转化。在减压下除去溶剂，将残余物在硅胶柱上纯化(用0-20％甲醇的DCM溶液洗脱)，将级分浓缩成黄色固体，通过LCMS检查固体，指示其不是很纯，然后将产物在20mL甲醇中浆化，通过过滤收集固体，干燥以产生纯度为55％的呈黄色固体的产物(被30％起始材料和9.5％脱溴副产物污染)。
将以上获得的固体装入具有1,4-二噁烷(40mL)的干燥烧瓶中，向烧瓶中添加900mg(三丁基甲锡烷基)甲醇和300mg xphos Pd G2，将混合物脱气，然后在80℃下在N2下搅拌过夜。在减压下除去溶剂，将混合物在硅胶柱上纯化(用0-20％甲醇的DCM溶液洗脱)以产生呈黄色固体的7-(羟甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(800mg，95％)(中间体103)，通过LCMS，纯度为80％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.32(3H,s),3.91-4.01(3H,m),4.56(2H,d),5.15(1H,t),7.27(1H,d),7.37(1H,d),11.57(1H,br s)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝221。
中间体104：7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮
在0℃下在N2下将三乙基膦(294μl，2.04mmol)逐滴添加到7-(羟甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(300mg，1.36mmol)(中间体103)和1,1,2,2-四溴-1,2-二氯乙烷(875mg，2.11mmol)在CH2Cl2(20mL)中悬浮液中，然后将所得混合物在室温下搅拌3.5h，在减压下除去溶剂，将残余物悬浮在醚(10mL)中，过滤，将固体用醚(10mL x 2)洗涤，然后将固体悬浮在水(20mL)中，过滤，用水(5mL x 3)洗涤，干燥以产生呈浅黄色固体的7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(0.250g，64.8％)(中间体104)。(m/z)(ES+)[M+H]+＝285。
实例57：5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]- N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺
向N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(83mg，0.27mmol)(中间体33)和7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(85mg，0.27mmol)(中间体104)在乙腈(6mL)中的悬浮液中添加DIPEA(236μL，1.35mmol)，将所得混合物在70℃下搅拌2h，得到澄清溶液，将混合物冷却至室温，得到悬浮液，通过过滤收集固体，用水、乙腈洗涤，干燥以产生呈白色固体的5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.064g，54.3％)(实例57)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)2.43(3H,s),2.49(3H,s),2.57(4H,br s),2.80(3H,d),2.91(4H,br s),3.60(2H,s),3.95(3H,s),7.18(1H,d),7.35(1H,d),7.46(1H,d),7.78(1H,d),8.40(1H,q),11.58(1H,br s)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝437
实例58：6-氟-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1- 基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
向6-氟-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺，2HCl(84mg，0.27mmol)(中间体32)和7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(85mg，0.27mmol)(中间体104)在乙腈(6mL)中的悬浮液中添加DIPEA(236μL，1.35mmol)，将所得混合物在70℃下搅拌2h，得到悬浮液，将混合物冷却至室温，通过过滤收集固体，用水、乙腈洗涤，干燥，将固体悬浮在乙腈中，过滤并且干燥以产生呈米色固体的6-氟-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.073g，61.3％)(实例58)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.42(3H,s),2.55(4H,br s),2.76(3H,d),3.14(4H,br s),3.58(2H,s),3.95(3H,s),7.17(1H,br d),7.35(1H,br d),7.50-7.63(1H,m),7.83(1H,br d),8.38(1H,br d),11.58(1H,s)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝442。
中间体106：6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸甲酯
将硫酸(1.5mL，28.14mmol)缓慢添加到6-溴-5-氟吡啶甲酸(500mg，2.27mmol)(中间体105)在MeOH(8mL)中的混合物中。将混合物在室温下继续搅拌3h，得到白色悬浮液。LCMS指示完全转化，将混合物倒入饱和NaHCO3水溶液中，用DCM(40mL x 2)萃取，将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩以产生呈白色固体的6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(532mg，100％)(中间体106)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)4.01(3H,s),7.55(1H,t),8.15(1H,dd)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝236。
中间体107：4-(2-溴-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8.21g，44.06mmol)、6-溴-5-氟-吡啶-2-甲酸甲酯(6.065g，25.92mmol)(中间体106)和碳酸钾(4.66g，33.69mmol)在DMF(60mL)中的混合物在110℃下搅拌5小时，LCMS指示完全转化。将混合物冷却至室温，用DCM和水稀释，分离各层，将水层用DCM萃取两次，将有机层合并，干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩，将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至50％乙酸乙酯洗脱，UV在221，310nm处)以产生所需产物呈白色固体的4-(2-溴-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7.68g，74.1％)(中间体107)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.51(9H,s),3.14(4H,br t),3.60-3.71(4H,m),3.99(3H,s),7.32(1H,d),8.08(1H,d)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝402。
中间体108：4-[2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将密封管中的在甲胺(100mL，19.16mmol)(在乙醇中33％)中的4-(2-溴-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7.67g，19.16mmol)(中间体107)在60℃下搅拌4.5h，LCMS指示完全转化，将混合物冷却至室温，浓缩，将残余物溶解在DCM中，用饱和NH4Cl溶液洗涤，干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩以产生呈白色固体的4-[2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7.48g，98％)(中间体108)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.50(9H,s),3.02(3H,d),3.08(4H,br t),3.60-3.71(4H,m),7.36(1H,d),7.68(1H,br d),8.11(1H,d)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝401。
中间体109：4-[6-(甲基氨基甲酰基)-2-乙烯基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-[2-溴-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.344g，3.37mmol)(中间体108)、三丁基(乙烯基)锡烷(1.174g，3.70mmol)和Xphos Pd G2(0.132g，0.17mmol)在1,4-二噁烷(25ml)中的混合物在100℃下在N2下搅拌2.5h，LCMS显示完全转化。将混合物用DCM稀释，用饱和NH4Cl洗涤，将有机层干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩，将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至80％乙酸乙酯洗脱，UV波长为226nm，293nm)得到呈白色固体的4-[6-(甲基氨基甲酰基)-2-乙烯基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.961g，82％)(中间体109)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.50(9H,s),2.90-3.01(4H,m),3.05(3H,d),3.55-3.68(4H,m),5.54(1H,dd),6.42(1H,dd),7.10(1H,dd),7.39(1H,d),7.98(1H,br d),8.07(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝346.6,348.5。
中间体110：4-[2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将在H2O中的四氧化锇(0.0435mL，6.00μmol)添加到4-[6-(甲基氨基甲酰基)-2-乙烯基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(960mg，2.77mmol)(中间体109)、2,6-二甲基吡啶(646μl，5.54mmol)和高碘酸钠(2371mg，11.08mmol)在THF(25mL)/水(5mL)/叔丁醇(2650μL，27.71mmol)中的溶液中并且在室温下搅拌过夜，得到黄色悬浮液。LCMS和TLC指示完全转化。将反应用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。浓缩后，将粗材料通过二氧化硅柱纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱，UV在226nm，310nm处)得到呈黄色固体的4-[2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.732g，76％)(中间体110)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)1.50(9H,s),3.07(3H,d),3.15-3.30(4H,m),3.63-3.79(4H,m),7.48(1H,d),7.85(1H,br d),8.28(1H,d),10.10(1H,s)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝349。
中间体111：4-[2-(二氟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁 酯
将在CH2Cl2(10mL)中的4-[2-甲酰基-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(730mg，2.10mmol)(中间体110)冷却至0℃，将在DCM(5mL)中的DAST(692μL，5.24mmol)添加到混合物中，然后将所得混合物在室温下搅拌4h，TLC和LCMS指示完全转化。将反应混合物逐滴用饱和NaHCO3水溶液淬灭，用DCM萃取，将有机物干燥(无水Na2SO4)，过滤并且浓缩，将残余物在硅胶柱上纯化(用在己烷中的0至100％乙酸乙酯洗脱，UV在254，293nm处)以产生呈白色固体的4-[2-(二氟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.666g，86％)(中间体111)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.50(9H,s),2.93-3.02(4H,m),3.05(3H,d),3.57-3.72(4H,m),6.99(1H,t),7.62(1H,d),7.92(1H,br d),8.27(1H,d)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝371。
中间体60：6-(二氟甲基)-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl
将在二噁烷中的HCl 4M(7mL，28.00mmol)添加到装有4-[2-(二氟甲基)-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(665mg，1.80mmol)(中间体111)和搅拌棒的烧瓶中，将混合物在室温下搅拌1h，得到黄色悬浮液。除去溶剂，将残余物用醚稀释，通过过滤收集固体，干燥得到呈橙色固体的6-(二氟甲基)-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(0.617g,100％)(中间体60)。(m/z)(ES+)[M+H]+＝272。
实例59：6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲 基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
向6-(二氟甲基)-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(87mg，0.25mmol)(中间体60)和7-(溴甲基)-3-甲氧基-8-甲基-1H-喹喔啉-2-酮(80mg，0.25mmol)(中间体104)在乙腈(6mL)中的悬浮液中添加DIPEA(222μL，1.27mmol)，将所得混合物在70℃下搅拌2h，得到澄清溶液，将混合物冷却至室温，得到悬浮液，通过过滤收集固体，用乙腈、水洗涤，干燥以产生呈白色固体的6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.070g，58.3％)(实例59)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.43(3H,s),2.59(4H,br s),2.83(3H,br d),2.98(4H,br s),3.60(2H,s),3.95(3H,s),6.92-7.29(2H,m),7.35(1H,d),7.85(1H,br d),8.08(1H,d),8.38(1H,br d),11.58(1H,br s)；((m/z)(ES+)[M+H]+＝473。
实例60：6-(二氟甲基)-5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌 嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺
将7-(溴甲基)-3,8-二甲基-1H-喹喔啉-2-酮(196mg，0.73mmol)(中间体8)、6-(二氟甲基)-N-甲基-的混合物5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺,2HCl(252mg，0.73mmol)(中间体60)和Et3N(0.614mL，4.41mmol)在乙腈(25mL)中混合物在70℃下搅拌2h得到澄清溶液，LCMS指示完全转化。将混合物冷却至室温过夜。从混合物中结晶出固体，通过过滤收集固体，用乙腈、水洗涤，干燥得到产物的第1部分141mg，将滤液浓缩，在反相吉尔森上纯化(用5％至80％ACN/水/0.1％TFA洗脱)得到作为TFA盐的产物的第二部分92mg。总共：呈灰白色固体的6-(二氟甲基)-5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(0.233g，64.0％)(实例60)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.40(3H,s),2.43(3H,s),2.60(4H,br s),2.83(3H,d),2.98(4H,br d),3.63(2H,s),6.95-7.22(1H,m),7.23-7.29(1H,m),7.51(1H,d),7.85(1H,d),8.08(1H,d),8.38(1H,br d),11.54(1H,brs)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝457。
中间体113：6-氯-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯
将哌嗪(1.0g，11.61mmol)添加到在MeCN(30mL)中的6-氯-5-氟吡啶甲酸甲酯(中间体112，1.0g，5.28mmol)中。将所得混合物在80℃下搅拌18小时。在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相色谱法纯化，洗脱梯度为在水(0.1％NH4HCO3)中的5％至60％MeCN。将纯级分蒸发至干燥以得到呈红色油状物的6-氯-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯(中间体113，1.28g，95％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.81-2.91(4H,m),3.04-3.08(4H,m),3.85(3H,s),7.61(1H,d),8.00(1H,d)(未显示NH质子)；m/z(ES+)[M+H]+＝256。
中间体30：6-氯-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺
将甲胺在THF(40mL，80.00mmol)中的2M溶液添加到6-氯-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯(中间体113，1.26g，4.93mmol)中。将所得混合物在80℃下搅拌18小时。在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相色谱法纯化，洗脱梯度为在水(0.1％NH4HCO3)中的5％至60％MeCN。将纯级分蒸发至干燥以得到呈淡黄色油状物的6-氯-N-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体30，1.12g，89％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.79(3H,d),2.85-2.89(4H,m),2.97-3.02(4H,m),7.63(1H,d),7.94(1H,d),8.45(1H,q)(哌嗪-未显示NH质子)；m/z(ES+)[M+H]+＝255。
中间体114：4-[2-氟-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将在甲胺(120mL，36.80mmol，33wt％，在乙醇中)中的4-(2-氟-6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体11，12.49g，36.80mmol)在室温下搅拌24h(密封管)。在减压下除去溶剂。将残余物溶解在DCM中并且通过硅胶床过滤并且用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩并且在真空下干燥以得到呈黄色固体的4-[2-氟-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体114，12.45g，100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)1.42(9H,s),2.77(3H,d),3.04-3.16(4H,m),3.43-3.56(4H,m),7.59(1H,dd),7.80-7.93(1H,m),8.41(1H,q)；m/z(ES+)[M+H]+＝340。
中间体32：6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺
在0℃下，将HCl(在二噁烷中4M，100ml，400.00mmol)添加到4-[2-氟-6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体114，12.5g，36.94mmol)在1,4-二噁烷(50mL)中的溶液中。将反应搅拌5h，在这期间将温度温热至室温以得到黄色悬浮液。将悬浮液用醚稀释，滤出固体并且用醚洗涤。将此固体在真空下干燥以提供呈浅黄色固体的6-氟-N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl(中间体32，11.42g，99％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δppm2.8(d,J＝4.6Hz,3H)3.3(br s,4H)3.4(br d,J＝4.4Hz,4H)7.6-7.7(m,1H)7.9(d,J＝8.1Hz,1H)8.4(br d,J＝4.4Hz,1H)9.0-9.3(m,2H)；m/z(ES+)[M+H]+＝239
中间体115：5-溴-N,6-二甲基吡啶酰胺
将甲胺在THF(20mL，40.00mmol)中的2M溶液添加到5-溴-6-甲基吡啶甲酸甲酯(中间体14，2.0g，8.69mmol)中，并且将所得混合物在80℃下搅拌18小时。在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相色谱法纯化，洗脱梯度为在水(0.1％NH4HCO3)中的5％至80％MeOH。将纯级分蒸发至干燥以得到呈淡黄色固体的5-溴-N,6-二甲基吡啶酰胺(中间体115，1.5g，75％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.65(3H,s),2.82(3H,d),7.75(1H,d),8.17(1H,d),8.57-8.76(1H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝229
中间体116：4-(2-甲基-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气下将5-溴-N,6-二甲基吡啶酰胺(中间体115，1.0g，4.37mmol)添加到在甲苯(20mL)中的哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.894g，4.80mmol)、BINAP(0.272g，0.44mmol)、Pd(OAc)2(0.098g，0.44mmol)和Cs2CO3(3.56g，10.91mmol)中。将所得混合物在80℃下搅拌16小时。在减压下除去溶剂。将粗产物通过反相色谱法纯化，洗脱梯度为水(0.4％HCO2H)中的5％至30％MeOH，。将纯级分蒸发至干燥以得到呈棕色固体的4-(2-甲基-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体116，1.2g，82％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ1.50(9H,s),2.58(3H,s),2.92-3.00(7H,m),3.62(4H,m),7.50(1H,d),7.88(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝335。
中间体33：N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酰胺
将4-(2-甲基-6-(甲基氨基甲酰基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体115，1.18g，3.53mmol)添加到在1,4-二噁烷(10mL，329.15mmol)中的4M HCl溶液中。将所得混合物在室温下搅拌1小时。通过过滤收集沉淀，用石油醚(5mL x 2)、Et2O(5mL x 2)洗涤，并且在真空下干燥以得到呈黄色固体的N,6-二甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶酰胺(中间体33，0.77g，81％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ2.86(3H,s),3.02(3H,s),3.42-3.54(8H,m),8.29(2H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝235。
中间体117：4-(6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将Ruphos Pd G3(4.07g，4.86mmol)添加到5-溴吡啶-2-甲酸甲酯(中间体9，30g，138.87mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(27.2g，145.81mmol)、Cs2CO3(90g，277.73mmol)在1,4-二噁烷(200mL)中的脱气混合物中，并且将混合物在110℃下在N2气氛下搅拌6h。然后将混合物冷却至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取(150ml x 3)。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并且过滤。向此滤液中添加3-(二亚乙基三氨基)丙基官能化的硅胶(12g，1.3mmol/g负载量)并且将混合物在室温下搅拌1h。将混合物过滤，并且将滤液浓缩至约100mL。滤出结晶的黄色固体，用醚洗涤并且在真空下干燥以得到呈黄色固体的4-(6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体117，26.36g，82mmol，59.1％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.50(9H,s),3.31-3.42(4H,m),3.56-3.68(4H,m),3.98(3H,s),8.04(1H,d),8.37(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝322。
中间体118：4-[6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将甲胺(100mL，1155.26mmol，40％，在水中)添加到4-(6-甲氧基羰基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体117，36g，112.02mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中，并且将反应在室温下搅拌4h以得到白色悬浮液。将混合物浓缩，将残余物在饱和NH4Cl溶液与DCM之间分配，分离各层。将水层用DCM萃取，将有机层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩以得到呈黄色固体的4-[6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体118，35.9g，100％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)1.49(9H,s),3.02(3H,d),3.26-3.35(4H,m),3.58-3.67(4H,m),7.23(1H,dd),7.81(1H,br d),8.07(1H,d),8.16(1H,d)；m/z(ES+)[M+H]+＝321。
中间体119：5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯
在0℃下将在二噁烷中的HCl 4M(20ml，576.01mmol)添加到4-(6-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体117,1.55g，4.82mmol)在MeOH(2mL)中的混合物中，将反应在室温下搅拌2h，得到悬浮液，LCMS指示完全转化，将混合物用醚(约80ml)稀释，通过过滤收集固体，用醚洗涤，干燥以产生呈黄色固体的5-(哌嗪-1-基)吡啶甲酸甲酯(中间体119)(1.384g，98％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)3.21(4H,br s),3.66(4H,br d),3.83(3H,s),7.43-7.55(1H,m),7.95(1H,br d),8.43(1H,br s),9.49(2H,br s)；(m/z)(ES+)[M+H]+＝223.0。
中间体31：甲酸酯N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺
将HCl(在二噁烷中4M，150mL，600.00mmol)添加到4-[6-(甲基氨基甲酰基)-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体118，35.9g，112.05mmol)在MeOH(50mL)中的悬浮液中，并且将所得橙色悬浮液在室温下搅拌4h。在减压下除去约80mL溶剂，并且将混合物用醚和己烷(200ml，1/1)稀释。通过过滤收集固体，用己烷洗涤，干燥并且在真空下干燥以提供呈黄色固体的N-甲基-5-哌嗪-1-基-吡啶-2-甲酰胺，2HCl盐(中间体31，37.0g，100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)2.79(3H,d),3.22(4H,br s),3.53-3.67(4H,m),7.51(1H,dd),7.91(1H,d),8.33(1H,d),8.50(1H,br s),9.19-9.49(2H,m)；m/z(ES+)[M+H]+＝221。
实例61：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺结晶形式B(无水形式)的制备
方法1
将43mg(0.10mmol)6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(来自例如实例20)悬浮在1.0ml MeOH中并且添加0.11ml1M甲磺酸(MSA)水溶液以获得澄清溶液。向溶液中添加0.11ml 1N NaOH水溶液。NaOH溶液添加完后，白色固体开始沉淀。将浆料在室温下搅拌1天。过滤36mg白色固体并且在空气中干燥。XRPD显示固体是纯6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式B。
方法2
将吡啶(93.5g)添加到纯6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺甲磺酸酯(4.67kg，通过实例63的方法2制备)在75℃±5℃的水(47.9kg)和乙醇(38.0kg)中的溶液中，然后添加根据方法1制备的6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式B种子(4.7g)。将浆料在75℃±5℃下搅拌40min，然后经3h 40min逐渐添加在50:50v:v水:乙醇(4.2g)中的吡啶(651g)溶液。将浆料在75℃±5℃下搅拌50min，然后经3h 50min逐渐添加在50:50v:v水:乙醇(4.1kg)中的4-甲基吗啉(900g)溶液。将浆料在75℃±5℃下搅拌1h10min，经4h 50min冷却至25℃±5℃，在25℃±5℃下搅拌15h，然后过滤。将所得固体用50:50v:v水:乙醇(12.5kg x 2)洗涤两次，然后在25℃与50℃之间在真空下干燥1天以得到纯6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式B(3.54kg)，产率为93％。
将来自方法1的形式B通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表1)并且在图1中示出。
表1.形式B的XRPD峰
角度(2θ±0.2°) 强度(％)
18.2 100.0
9.6 86.7
9.1 80.7
18.7 55.8
12.7 24.1
8.5 23.9
10.0 15.6
20.1 14.8
21.7 13.9
23.2 12.3
12.4 12.2
16.1 9.6
14.3 9.2
6.2 8.9
15.6 7.7
27.4 6.9
26.4 6.6
29.7 6.2
27.1 6.0
25.0 5.0
形式B的特征在于提供使用CuKα辐射测量的以下2θ值中的至少一个：6.2、14.3、和15.6°。
将形式B(来自方法1)通过热技术进行分析。DSC分析表明形式B具有在275℃开始并且峰在276℃处的熔点。TGA表明形式B展现出在从约25℃加热至约100℃后约0.2％的质量损失。形式B的代表性DSC/TGA热谱图示出在图2中。
实例62：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺结晶形式D(无水形式)的制备。
将5-6mg 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例20)溶解在MeOH/DCM/H2O(0.50ml/0.50ml/0.20ml)的混合溶剂中，将澄清溶液在环境条件下缓慢蒸发以获得白色固体。XRPD显示所得白色固体是6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式D。
将形式D通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表2)并且示出在图3中。
表2.形式D的XRPD峰
形式D的特征在于提供使用CuKα辐射测量的以下2θ值中的至少一个：7.9°、13.1°和16.3°。
形式D的单晶从6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺的DMF溶液(或DMF/H2O)的蒸发获得。单晶结构分析证实形式D是无水形式。6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺形式D的分子结构示出在图4中。晶体学数据：空间群单斜晶系P21/c，晶胞尺寸：β＝92.609(1)°，
实例63：6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺MSA结晶盐形式C(无水形式)的制备。
方法1
将427mg 6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(实例20)悬浮在8.0ml MeOH中。向悬浮液中添加1.1ml 1.0MMSA水溶液(1.1mmol)，获得澄清溶液。过滤所得溶液，并且除去澄清溶液的溶剂。将所得固体悬浮在1.0ml EtOH和2.0ml THF中，以获得浆料。将浆料在室温下搅拌1天。通过过滤收集固体并且风干。获得452mg灰白色固体。XRD显示获得6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺MSA盐形式C。
方法2
在25℃下将甲磺酸(16.8g)添加到6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺(80.8g，92.8％w/w)在4:1v:v THF:乙醇(750mL)中的搅拌悬浮液中。将所得悬浮液在25℃下搅拌16h并且然后过滤。将固体用4:1v:v THF:乙醇(300mL)洗涤并且然后在35℃下在真空下干燥以得到6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺甲磺酸酯形式C(90.3g)，产率为98％。
将来自方法1的MSA-形式C通过XRPD进行分析并且将结果如下列表(表3)并且在图5中示出。
表3.针对MSA-形式C的XRPD峰
通过热技术分析从方法1获得的MSA-形式C。DSC分析表明，MSA-形式C在254℃开始并且峰在258℃处的温度下开始熔化和分解。TGA表明，MSA-形式C在从约25℃加热到约100℃后展现出约0.3％的质量损失。MSA-形式C的代表性DSC/TGA热谱图示出在图6中。
生物学测定
可以采用以下测试程序来确定本文所述化合物的抑制特性。
PARP荧光各向异性结合测定
将重组全长6HIS标记的PARP1蛋白用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mMMgCl2、150mM NaCl稀释至6nM，并且用等体积的2nM荧光探针(用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释)孵育四小时。探针的最终DMSO浓度保持低于1％(v/v)。
将重组全长PARP2蛋白用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释至6nM，并且用等体积的2nM荧光探针(用50mM Tris pH 8、0.001％TritonX100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释)孵育四小时。探针的最终DMSO浓度保持低于1％(v/v)。
将重组全长PARP3蛋白用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释至100nM，并且用等体积的6nM荧光探针(用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释)孵育四小时。探针的最终DMSO浓度保持低于1％(v/v)。
将重组PARP5a结合结构域用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释至160nM，并且用等体积的6nM荧光探针(用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释)孵育四小时。探针的最终DMSO浓度保持低于1％(v/v)。
将重组全长GST标记的PARP6蛋白用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mMMgCl2、150mM NaCl稀释至160nM，并且用等体积的6nM荧光探针(用50mM Tris pH 8、0.001％Triton X100、10mM MgCl2、150mM NaCl稀释)孵育四小时。探针的最终DMSO浓度保持低于1％(v/v)。
在存在测试化合物或溶剂对照的情况下，使用BMG Pherastar测量与蛋白质结合时探针的荧光各向异性，并且确定对各向异性的影响。计算不同测试化合物浓度的％抑制值，并且将其拟合到四参数对数图以确定IC50值。必要时，化合物Ki可以使用AnalBiochem.[分析生物化学]1980年9月1日；107(1):220-39定义的Munson Rodbard方程由IC50值确定，并且其基于与相关PARP蛋白结合的探针的已知KD。
PARP增殖测定(7天的化合物给药)
在完全培养基中收获密度分别为5000个细胞/ml和2.5E4个细胞/ml的DLD1细胞和BRCA2(-/-)DLD1细胞，使用Multidrop Combi将它们以40μL/孔接种到384孔板(格瑞纳公司(Greiner)，克雷姆斯明斯特(Kremsmunster)，奥地利；781090)中，然后在37℃、5％CO2下孵育过夜。第二天(第1天)，使用Multidrop Combi将sytox绿(sytox green)(5ul，2uM)和皂苷(10ul，0.25％储备液)添加到第0天的板中，使用黑色胶盖密封板，并且在室温下孵育>3h。使用装有4x物镜的Cell Insight(赛默飞世尔公司(Thermo Fisher))对细胞成像。使用Echo 555添加测试化合物，并且将其置于维持在37℃、5％CO2下的培养箱中，并且孵育7天。在第8天，向板中添加sytox绿(5ul，2uM)，并且然后添加皂苷(10ul，0.25％储备液)，使用黑色胶盖密封板并且在室温下孵育>3h。使用4x物镜读取Cell Insight上的所有细胞。通过评估针对第0天和第8天的板的Cell Insight输出的总细胞数，确定Genedata中的增殖速率。
体外人类转运蛋白外排
将表达MDR1和BCRP的MDCKII细胞以形成融合细胞单层的密度接种到96孔Transwell插入系统中的聚乙烯膜上。测试和参考化合物用转运缓冲液(HBSS HEPES pH7.4)稀释至1或0.1μM的浓度。有机溶剂的最终体积百分比小于1％。在37℃和5％CO2和95％相对湿度下孵育90分钟后确定测试化合物从A到B方向和从B到A方向的渗透。在孵育结束时，从顶端侧和基底外侧取样，并且然后用含有内标的冷乙腈沉淀。4000rpm离心后，将上清液用0.1％甲酸水溶液稀释并且通过LC-MS/MS定量。通过使用标记荧光黄来确认细胞单层的完整性。
使用以下等式计算渗透系数(1×10-6cm/s)
Papp＝(dCr/dt)×Vr/(A×C0)
(1)使用以下等式计算外排比
外排比＝Papp(B比A)/Papp(A比B)
(2)其中dCr/dt是接收室中化合物的累积浓度作为时间的函数(单位为μM/s)；Vr是接收室中的溶液体积(顶端侧0.1ml和基底外侧0.3ml)；A是转运表面积，即单层面积为0.11cm2；并且C0是供体室中的初始浓度(单位为μM)。
血浆中未结合分数的确定
使用RED设备确定未结合分数。
将化合物制备为在DMSO中的10mM溶液。通过混合多达9种测试化合物(每种4uL)和1种对照(uL)制备1mM工作储备液。如果包含的测试化合物少于9种，则添加空白DMSO的体积以补足40uL的体积。
将冷冻血浆在37℃水浴中解冻。然后将血浆以4,000rpm离心2分钟以去除凝块并且将上清液收集到新鲜管中。检查血浆的pH，并且仅在pH 7至pH 8范围内时使用。将每个盒的3μL工作溶液添加到597μL空白血浆中，并其以1000rpm涡旋5分钟。有机溶剂的最终体积百分比为0.5％，并且测试化合物的最终浓度为5μM。立即将50μL加标血浆悬浮液转移到96孔板中，充当T＝0对照样品。样品与孵育后的样品相同地处理。剩余的血浆在开始透析前保持在37℃。
将插入物开口端朝上放置到底板的孔中。将300μL加标血浆样品添加到样品室中，由红色环指示。向缓冲室中添加500μL磷酸盐缓冲液(pH 7.4)。用透气盖盖住装置，并且在CO2培养箱中的定轨振荡器上以300rpm用5％CO2在37℃下孵育18小时。在孵育结束时，取下盖，分别从缓冲液和血浆室两者中移液50μL透析后样品到分开的96孔板中进行分析。
通过向缓冲液样品中添加50μL空白大鼠血浆和向收集的血浆样品中添加等体积的PBS并且涡旋混合，对样品进行基质匹配。添加400μL含有适当内标(IS)的乙腈以沉淀蛋白质并且释放化合物，并且通过涡旋板10分钟然后以4,000rpm离心30分钟来混合。将250μL上清液转移到新的96孔板中并且再次离心(4,000rpm，30分钟)。然后将100μL上清液转移到新的96孔板中，并且与100μL蒸馏水通过以1,000rpm的转速涡旋5分钟混合到每个样品中。通过LC-MS/MS分析样品，并且相对于由加标空白血浆产生的校准曲线确定药物浓度，典型范围为1-7500nM。
未结合％确定为未结合％＝(缓冲室浓度/血浆室浓度)×100％。未结合分数＝未结合％/100。
脑切片中未结合分数的确定
用于确定脑切片中未结合体积的方法的原理先前已发表(Development of aHigh-Throughput Brain Slice Method for Studying Drug Distribution in theCentral Nervous System[开发用于研究中枢神经系统药物分布的高通量脑切片方法]；Fridén等人；Drug Metabolism and Disposition[药物代谢和处置],2009,37(6)1226-1233)。简言之：
在DMSO中制备浓度为10mM的化合物储备溶液。通过混合多达9种测试化合物(每种4uL)和1种对照(4uL)制备1mM工作储备液。如果包含的测试化合物少于9种，则添加空白DMSO以补足体积至40uL。在实验当天，将4ul在40mL ECF缓冲液中稀释以得到每种测试化合物的100nM溶液，然后在孵育开始前将其预温热至37℃。
为了制备脑切片，通过吸入异氟醚对重约300g的大鼠进行终末麻醉，小心地取出脑并且浸入冰冷的含氧ECF缓冲液中。将大鼠脑转移到含有冰冷、供应O2的ECF缓冲液的盘中，并且在粘在微型切片机的托盘上之前用剃刀修剪，脑被放置在托盘中央，背部剖切表面朝下。添加冰冷的ECF缓冲液以硬化胶粘剂并且润湿脑。将托盘放置在微切片机中，并且使用合适的切割速度，切割100-400μm的切片，直至出现纹状体区域。每个脑四到六个，300μm厚，纹状体区域的冠状切片被切割并且放置在冰冷的供应O2的缓冲液中直到孵育。将六个切片转移到含有40mL预热(37℃)盒式混合物的孵育托盘中。从取出脑一直到切片进入鸡尾酒式混合物的时间最长为20分钟。孵育盘盖上透气盖，放置在37℃水浴中，泵入O2，以45rpm的振荡频率孵育5h。
孵育前，将200μL未孵育的盒溶液保存为T＝0样品。然后将200μL与200μL空白脑匀浆在ECF缓冲液(4体积(w/v)中混合。孵育后测量并且记录盒溶液中的pH值，并且pH值必须高于7.3。将盒溶液表面的200μL转移到含有在ECF缓冲液中的200μL空白脑匀浆(4体积(w/v))的管中。每个脑切片在滤纸上干燥并且称重在2mL eppendorf管中。添加9体积(w/v)的ECF缓冲液后，将切片用超声波仪匀浆。如下沉淀和稀释样品。
将来自每个样品的50μL等分试样和来自每个盒溶液(与空白匀浆混合)的3x50μL转移到0.6mL离心管中。将样品用200μL含有内标的冰冷乙腈沉淀，并且以2,000rpm涡旋3分钟，然后在4℃下以14000rpm离心15分钟。将100μL上清液转移到新的96孔板中进行分析，并且向每个样品中添加100μL蒸馏水，并且将板以1000rpm摇动2分钟，通过LC-MS/MS进行分析。
然后将混合切片样品分两步进一步稀释，10倍和100倍，双空白样品用150μL空白脑匀浆在ECF缓冲液(4体积(w/v))中制备，转移到含有150μL ECF缓冲液的1.5mL离心管中，以2,000rpm涡旋2分钟。将样品用1200μL冰冷乙腈沉淀，并且在2,000rpm下涡旋3分钟，然后在4℃下在14000rpm下离心15分钟。然后将100μL上清液转移到新的96孔板中进行分析。向每个样品中添加100μL蒸馏水以获得双空白样品。
未结合脑体积(Vu,脑)计算为Vu＝(C切片-V0*CECF)/(1-V0)*CECF
其中C切片、CECF和V0分别是切片中的药物量、ECF中的药物浓度(代表脑ECF中的药物浓度，即游离浓度)和脑切片的水附着(0.0931)。
脑中的未结合分数fu,脑＝1/Vu,脑
大鼠中Kpuu的确定
血浆中总/未结合药物与脑中总/未结合药物的比率(Kp/Kpuu)如下确定。
将化合物在1:1:1四甘醇:二甲基乙酰胺:水中以各0.5mM的浓度配制为混合物，并且经由以2μmol/kg/h以4mL/kg的体积静脉输注施用于Han Wistar大鼠。4h后处死动物，并且收集脑和血液样品。由血液制备血浆，并且所有样品均在-20℃下冷冻保存直至分析。收集后，将脑样品在纯化水中以1:3(w/v)的比率匀浆，并且在-20℃下冷冻储存直至分析。
通过蛋白质沉淀分析血浆和脑样品，然后进行LC-MS/MS，并且根据通过用适当浓度范围内的药物加标空白大鼠血浆或脑匀浆产生的校准曲线确定浓度。通过从总脑浓度中减去0.8％的血浆浓度来校正残留血液的脑浓度。
然后如下计算Kp：Kp＝((4*[脑匀浆])-(0.008*[血浆]))/[血浆]
然后如下计算Kpuu：Kpuu＝Kp*(脑切片中的未结合分数/血浆中的未结合分数)
生物学数据
表4
其他材料和方法
细胞系
为了评价与护理标准化疗替莫唑胺(TMZ)、电离辐射(IR)和新出现的化疗VAL-083组合的本文所述PARP抑制剂的活性和效力，测定U87、SJG2和BT245胶质母细胞瘤细胞。亲本U87细胞系从位于英国奥尔德利公园(Alderley Park)的阿斯利康全球细胞库(AstraZeneca Global Cell Bank)获得，并且异柠檬酸脱氢酶1突变体细胞系(IDH1mtR132H)从ATCC获得许可。SJ-G2(ATRX突变体)和BT245(H3K27M突变体)细胞系从加拿大蒙特利尔QC H4A 3J1麦吉尔大学健康中心研究所(Research Institute ofthe McGillUniversity Health Centre)获得。在SJG2细胞系中诱导IDH1R132突变以产生等基因对(SJG2 IDH1mt和SJG2 IDH1wt)。
组合测定-PARP抑制剂与替莫唑胺(TMZ)或VAL-083
为了评价实例20中产生的PARP抑制剂(6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺；下文称为化合物20)与TMZ或VAL-083的组合活性，在U87等基因对中使用核计数终点测定，并且对于SJ-G2等基因对使用CellTiter-Glo(CTG)终点。在此，将细胞以低密度(500个细胞/孔)接种在96孔板中，并且暴露于化合物20持续对应于超过4-5个复制细胞周期(7-8)天的时间。细胞附着后，用自动数字D300 HP分配器(Tecan)将板用PARP抑制剂预处理一小时，此后自动分配TMZ或VAL-083。从溶解在DMSO中的化合物储备液(PARP抑制剂10mM储备液、TMZ 100mM储备液和VAL-083100mM储备液)中以指示的滴定稀释度添加药物，其中在每个板中一式两份地测试每种浓度。DMSO用作媒介物对照。选择测试的浓度范围以获得在等基因对中的最佳PARP抑制剂、TMZ或VAL-083活性，并且以多个剂量评估组合。将板在37℃、5％CO2下孵育指示的时间。定期在显微镜下检查细胞生长和无污染。
对于核计数终点测定，通过每孔添加50μl甲醛(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)F8775)将细胞固定约15分钟(min)。然后除去固定溶液，并且将板用PBS洗涤一次，然后在室温(RT)下在30min内以储备液的在PBS中1:10000稀释度添加hoechst(Thermo Scientific33342)。将板再次洗涤并且添加PBS。使用CellInsight CX5(Thermo Fisher)采集图像，并且通过测量hoechst染色细胞核的总数进行分析。将药物处理孔的细胞核数(融合度％)相对于DMSO对照归一化，并且使用combenefit软件(Di Veroli等人,2016)计算生长抑制。类似地，对于CTG终点测定，通过按照制造商说明添加试剂使SJ-G2等基因对的组合板停止(Promega，美国威斯康星州麦迪逊；G7570)。将药物处理孔的细胞活力(活力％)相对于DMSO对照归一化，并且使用combenefit软件(Di Veroli等人,2016)计算生长抑制。
通过与HSA加性模型的比较，计算协同得分和相对于每种单一疗法的过量活性(Borisy等人,2003；Tan等人,2012)。在所表示的图中，误差条是平均值±SD。
组合测定-PARP抑制剂与电离辐射(IR)
为了评价化合物20与IR的组合活性，采用集落形成测定，并且测量在10-14天内单个集落的细胞生长，允许其经历至少5个复制细胞周期。这里，将细胞以低密度(500个细胞/孔)接种在包被有聚L-赖氨酸的24孔板中，以促进细胞附着。细胞附着后，用自动数字D300HP分配器(Tecan)将板用PARP抑制剂预处理一小时，此后通过高电压X-射线发生器管(Faxitron X-ray Corporation)将细胞用0.9Gy照射。从溶解在DMSO中的化合物储备液(10mM储备液)中以指示的滴定稀释度添加PARP抑制剂，其中在每个板中一式三份地测试每种浓度。DMSO用作媒介物对照。将板在37℃、5％CO2下孵育指示的时间。定期在显微镜下检查细胞生长和无污染。接下来，使用重构在1％乙酸中的磺基罗丹明B酸形式(SRB)[西格玛(Sigma)，341738-5g]将细胞固定和染色，因为在固定后直接添加染色剂，而没有任何限制细胞脱离的洗涤步骤。用GelCount集落计数器(Oxford OPTRONIX)以600dpi分辨率扫描带有染色集落的板。通过使用24孔板感兴趣区域(ROI)掩模(CFU，集落形成单位)量化ImageJ软件测量的总光密度来对集落形成进行评分。通过相对于设置为＝100的处理媒介物将相应板归一化进行数据分析。将数据相对于相应的媒介物对照(设置为＝100)或无IR进行归一化，制图并且用Prism GraphPad软件计算IC50。在所表示的图中，误差条是平均值±SD。
U87MG异种移植研究
将U87MG细胞(在无血清MEM培养基中250万个)皮下(SC)植入雌性裸小鼠(体重大于18g)的背部侧面。通过双边游标卡尺测量，每周两次测量肿瘤(长度x宽度)，并且使用椭圆公式(π/6×宽度×宽度×长度)计算肿瘤体积。在整个研究期间，监测动物体重和肿瘤情况。当平均肿瘤体积达到大约0.2cm3时，将小鼠随机分配到处理组中。
从随机化后第二天对动物进行口服(PO)处理。将对照动物每天一次用媒介物(水/甲磺酸(MSA)pH 3-3.2)处理，持续10天(QD x10)。单一疗法组和组合组中分别以3mg/kg QDx10或QD x33给药在水/甲磺酸(MSA)pH 3-3.2中的PARP抑制剂。单一疗法组中在第1-5和29-33天以25mg/kg QD以及单一疗法组和组合组中在第1-5和29-33天以6.25mg/kg QD给药在OraPlus Perrigo中的替莫唑胺(TMZ)。
通过比较对照组和处理组的肿瘤体积(TV)的平均变化来评估从处理开始起的肿瘤生长抑制，并且表示为肿瘤生长抑制(TGI，当肿瘤体积(TV)≥起始TV时)或消退(reg，当TV<起始TV时)百分比。使用单尾t检验来评价统计学显著性。统计学显著性如下指示：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001。
ATRX突变体GBM模型中使用PARP抑制剂的处理
我们研究了化合物20在IDHmt和ATRXmt细胞系(SJ-G2和U87 GBM模型)中的单一疗法活性。ATRXmt GBM SJ-G2在临床上可实现的剂量范围内显示出对化合物20单一疗法的敏感性，并且IDH1突变的增加未进一步提高对此模型的敏感性。与ATRXwt U87模型相比，SJ-G2 ATRXmt模型展现出对化合物20的敏感性高约40倍。结果提供在下表5中并且示出在图7中。
表5：ATRX突变体GBM模型中的单一疗法处理
这些结果证明，化合物20在ATRX突变体细胞系中具有有效的单一疗法活性，并且IDH1突变的额外存在没有进一步提高此模型的敏感性。
使用PARP抑制剂和TMZ的组合处理
在IDH1野生型(IDH1wt)和IDH1突变体(IDH1mt)胶质母细胞瘤(GBM)细胞中评价化合物20和TMZ的组合。化合物20在多种化合物20浓度下显示出增加的与TMZ的协同作用，这远远高于U87同基因对中化合物20的PAR化抑制的IC95(0.008μM；数据未示出)(图8)。重要的是，化合物20在低至10nM的浓度下显示出对PARP1的有效捕获，同时保留PARP2(数据未示出)，表明在化合物20和TMZ的情况下在此观察到的组合益处是由PARP1的催化抑制以及由于在DNA上捕获的PARP1而增加的DNA损伤驱动的。此外，与野生型相比，化合物20与TMZ在IDH1mt GBM系中的协同作用浓度低10倍(与在IDH1mt中为1μM相比，在IDH1wt中为10μM)，表明IDH1mt GBM对TMZ处理更敏感。
此外，在SJ-G2 GBM等基因IDH1mt和IDH1mt模型(其为ATRX突变体和p53突变体)中研究化合物20和TMZ的组合。这些IDH1wt和IDH1mt SJG2模型更接近地表示GBM患者群体(Ohba,Kuwahara,Yamada,Abe和Hirose,2020)。重要的是，化合物20在多种PARP抑制剂浓度甚至低至10nM下显著增强在SJ-G2等基因对中的TMZ效应，(图9)。另外，TMZ在IDH1wt和IDH1mt模型中与相同浓度的化合物20显著协同。
使用上述方法在U87MG异种移植模型中也研究了化合物20与TMZ的组合的抗肿瘤功效。在第1-5和29-33天以6.25mg/kg QD给药的TMZ导致28％的肿瘤消退(2/8个肿瘤消退)，而其与化合物20(3mg/kg QD)的组合提供了95％肿瘤消退(8/8肿瘤消退)的进一步抗肿瘤益处(图10A)。差异是统计学显著的。较高剂量的TMZ(在第1-5和29-33天，25mg/kg QD)的效果是92％肿瘤消退(7/8个肿瘤消退)，与组合处理效果可比较。在处理时监测体重减轻和动物福祉，作为毒性的替代指标。与较低剂量替莫唑胺(6.25mg/kg)与3mg/kg的化合物20的组合，高剂量替莫唑胺(25mg/kg)导致更多的体重减轻(图10B)。
使用PARP抑制剂和VAL-083的组合处理
在U87 IDH1wt和IDH1mt等基因对中评价化合物20和烷化剂VAL-083的组合。图11中示出的结果证明在这些细胞中，化合物20与VAL-083具有协同作用。值得注意地，化合物20与VAL-083的组合益处不取决于GBM模型的IDH1突变状态，因为在IDH1mt模型中与PARP抑制剂协同作用所需的烷化剂剂量没有减少。
类似地，ATRX突变体SJ-G2 IDH1wt和IDH1mt等基因对显示出化合物20和VAL-083的增强的组合益处，这与IDH1mt状态无关(图12)。这些结果还证明，在不存在VAL-083的情况下，1μM化合物20在ATRX突变体细胞系中具有活性。这与以上报告的结果一致，并且示出在图7中，证明了化合物20在多种浓度下具有单一疗法效果。因此，除了证明这种PARP抑制剂在单一疗法(即，无化疗或放疗)中的潜在适用性外，这还表明PARP抑制剂具有减少肿瘤的作用，所述作用与其加强烷基化化疗剂(诸如VAL-083和TMZ)的功效的能力无关。
使用PARP抑制剂和电离辐射疗法的组合处理
H3K27M-突变型弥漫性中线神经胶质瘤是儿科神经胶质瘤，对于所述儿科神经胶质瘤而言放疗是护理标准治疗。然而，这些类型的肿瘤预后相对较差。在此研究中，在H3K27M-突变型神经胶质瘤模型中评价电离辐射和化合物20的组合。
图13中示出的结果证明，在多个抑制剂剂量连同减少的临床相关剂量的0.9Gy(临床相关剂量为1.8Gy)下，研究的PARP抑制剂与电离辐射显示出增强的组合益处。重要的是，在儿科模型中化合物20诱导的PAR化抑制的IC95是0.004μM，因此所述化合物在其最大活性范围内。这些结果表明，所披露的PARP抑制剂可以与电离辐射组合用于治疗具有挑战性的神经胶质瘤，诸如H3K27M-突变型神经胶质瘤。此外，结果表明，有可能使用PARP抑制剂与降低水平的电离辐射治疗肿瘤，这可以减少与暴露于高剂量辐射相关的有害影响。
参考文献
上面引用了许多出版物以便更全面地描述和披露本发明以及本发明所属领域的技术水平。下面提供了这些参考文献的完整引用。这些参考文献中的每一篇参考文献整体并入本文。
WO 2004/080976
EP 699754
EP 705903
Bai P.Biology of poly(ADP-ribose)polymerases:the factotums of cellmaintenance.Mol Cell 2015；58:947-958,doi:10.1016/j.molcel.2015.01.034
Bartkova J,Hamerlik P,Stockhausen MT,Ehrmann J,Hlobilkova A,LaursenH,Kalita O,Kolar Z,Poulsen HS,Broholm H,Lukas J,Bartek J.Replication stressand oxidative damage contribute to aberrant constitutive activation ofDNAdamage signalling in human gliomas.Oncogene.2010Sep 9；29(36):5095-5102.doi:10.1038/onc.2010.249.Epub 2010Jun 28.PMID:20581868.
Borisy,A.A.,Elliott,P.J.,Hurst,N.W.,Lee,M.S.,Lehar,J.,Price,E.R.,...Keith,C.T.(2003).Systematic discovery of multicomponent therapeutics.ProcNatl Acad Sci U S A,100(13),7977-7982.doi:10.1073/pnas.1337088100
Chappnis,P.O.and Foulkes,W.O.,Cancer Treat Res,107,29-59(2002),doi:10.1007/978-1-4757-3587-1_2
Di Veroli,G.Y.,Fornari,C.,Wang,D.,Mollard,S.,Bramhall,J.L.,Richards,F.M.,&Jodrell,D.I.(2016).Combenefit:an interactive platform for the analysisand visualization of drug combinations.Bioinformatics,32(18),2866-2868.doi:10.1093/bioinformatics/btw230
George SL,Lorenzi F,King D,Hartlieb S,Campbell J,Pemberton H,ToprakUH,Barker K,Tall J,da Costa BM,van den Boogaard ML,Dolman MEM,Molenaar JJ,Bryant HE,Westermann F,Lord CJ,CheslerL.Therapeutic vulnerabilities in theDNA damage response for thetreatment of ATRX mutant neuroblastoma.EBioMedicine.2020Sep；59:102971.doi:10.1016/j.ebiom.2020.102971.Epub 2020 Aug 23.PMID:32846370；PMCID:PMC7452577
Gupta,S.K.,Smith,E.J.,Mladek,A.C.,Tian,S.,Decker,P.A.,Kizilbash,S.H.,...Sarkaria,J.N.(2018).PARP Inhibitors forSensitization of AlkylationChemotherapy in Glioblastoma:Impact ofBlood-Brain Barrier and MolecularHeterogeneity.Front Oncol,8,670.doi:10.3389/fonc.2018.00670
Haase,S.,Garcia-Fabiani,M.B.,Carney,S.,Altshuler,D.,F.J.,Méndez,F.M.,F.,Lowenstein,P.R.,&Castro,M.G.(2018).Mutant ATRX:uncoveringa new therapeutic target for glioma.Expertopinion on therapeutic targets,22(7),599-613.doi:10.1080/14728222.2018.1487953
Hartmann C,Meyer J,Balss J,Capper D,Mueller W,Christians A,FelsbergJ,Wolter M,Mawrin C,Wick W,Weller M,Herold-Mende C,Unterberg A,Jeuken JW,Wesseling P,Reifenberger G,von Deimling A.Type and frequency ofIDH1 and IDH2mutations are related to astrocyticand oligodendroglial differentiation andage:a study of 1,010 diffusegliomas.Acta Neuropathol.2009 Oct；118(4):469-74.doi:10.1007/s00401-009-0561-9.Epub 2009 Jun 25.PMID:19554337.
Higuchi,F.,Nagashima,H.,Ning,J.,Koerner,M.V.A.,Wakimoto,H.,&Cahill,D.P.(2020).Restoration of Temozolomide Sensitivity byPARP Inhibitors inMismatch Repair Deficient Glioblastoma isIndependent ofBase ExcisionRepair.Clin Cancer Res,26(7),1690-1699.doi:10.1158/1078-0432.CCR-19-2000
Himes,B.T.,Zhang,L.,&Daniels,D.J.(2019).TreatmentStrategies inDiffuse Midline Gliomas With the H3K27M Mutation:TheRole of Convection-Enhanced Delivery in Overcoming Anatomic Challenges.Front Oncol,9,31.doi:10.3389/fonc.2019.00031
Hughes-Davies,et al.,Cell,115,523-535(2003)doi:10.1016/s0092-8674(03)00930-9
Janatova M.,et al.,Neoplasma,50(4),246-250(2003)
Jancarkova,N.,Ceska Gynekol.,68(1),11-6(2003),PMID:12708108
Jannetti,S.A.,Zeglis,B.M.,Zalutsky,M.R.,&Reiner,T.(2020).Poly(ADP-Ribose)Polymerase(PARP)Inhibitors and Radiation Therapy.Front.Pharmacol.,11:170.doi:10.3389/fphar.2020.00170
Jimenez-Alcazar,M.,Curiel-Garcia,A.,Nogales,P.,Perales-Paton,J.,Schuhmacher,A.J.,Galan-Ganga,M.,...Squatrito,M.(2021).DianhydrogalactitolOvercomes Multiple Temozolomide Resistance Mechanisms in Glioblastoma.MolCancer Ther,20(6),1029-1038.doi:10.1158/1535-7163.MCT-20-0319
Koschmann,C.,Calinescu,A.A.,Nunez,F.J.,Mackay,A.,Fazal-Salom,J.,Thomas,D.,Mendez,F.,Kamran,N.,Dzaman,M.,Mulpuri,L.,Krasinkiewicz,J.,Doherty,R.,Lemons,R.,Brosnan-Cashman,J.A.,Li,Y.,Roh,S.,Zhao,L.,Appelman,H.,Ferguson,D.,Gorbunova,V.,…Castro,M.G.(2016).ATRX loss promotes tumor growth andimpairs nonhomologous end joining DNA repair in glioma.Science translationalmedicine,8(328),328ra28.doi:10.1126/scitranslmed.aac8228
Mansouri,A.,Hachem,L.D.,Mansouri,S.,Nassiri,F.,Laperriere,N.J.,Xia,D.,Lindeman,N.I.,Wen,P.Y.,Chakravarti,A.,Mehta,M.P.,Hegi,M.E.,Stupp,R.,Aldape,K.D.,&Zadeh,G.(2019).MGMT promoter methylation status testing to guidetherapy for glioblastoma:refining the approach based on emerging evidence andcurrent challenges.Neuro-oncology,21(2),167–178.doi:10.1093/neuonc/noy132
Martínez-Ricarte F,Mayor R,Martínez-Sáez E,Rubio-Pérez C,Pineda E,Cordero E,Cicuéndez M,Poca MA,López-Bigas N,Ramon Y Cajal S,Vieito M,CarlesJ,Tabernero J,Vivancos A,Gallego S,Graus F,Sahuquillo J,Seoane J.MolecularDiagnosis of Diffuse Gliomas through Sequencing of Cell-Free CirculatingTumor DNA from Cerebrospinal Fluid.Clin Cancer Res.2018 Jun 15；24(12):2812-2819.doi:10.1158/1078-0432.CCR-17-3800.Epub 2018 Apr 3.PMID:29615461.
Murai,J.,Huang,S.Y.,Das,B.B.,Renaud,A.,Zhang,Y.,Doroshow,J.H.,...Pommier,Y.(2012).Trapping of PARP1 and PARP2 by Clinical PARPInhibitors.Cancer Res,72(21),5588-5599.doi:10.1158/0008-5472.CAN-12-2753
Murai,J.,Zhang,Y.,Morris,J.,Ji,J.,Takeda,S.,Doroshow,J.H.,&Pommier,Y.(2014).Rationale for poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)inhibitors incombination therapy with camptothecins or temozolomide based on PARP trappingversus catalytic inhibition.J PharmacolExp Ther,349(3),408-416.doi:10.1124/jpet.113.210146
Neuhausen,S.L.and Ostrander,E.A.,Genet.Test,1,75-83(1997),doi:10.1089/gte.1997.1.75
Ohba,S.,Kuwahara,K.,Yamada,S.,Abe,M.,&Hirose,Y.(2020).Correlationbetween IDH,ATRX,and TERT promoter mutations in glioma.Brain Tumor Pathol,37(2),33-40.doi:10.1007/s10014-020-00360-4
Patel,M.M.,Expert Opin.DrugDeliv.,2011,8(10),1247-1258,doi:10.1517/17425247.2011.597739
Reisz,J.A.,Bansal,N.,Qian,J.,Zhao,W.,&Furdui,C.M.(2014).Effects ofionizing radiation on biological molecules--mechanisms of damage and emergingmethods ofdetection.AntioxidRedox Signal,21(2),260-292.doi:10.1089/ars.2013.5489
Singh,N.,Miner,A.,Hennis,L.,&Mittal,S.(2021).Mechanisms oftemozolomide resistance in glioblastoma-a comprehensivereview.CancerDrugResist,4,17-43.doi:10.20517/cdr.2020.79
SongTao,Q.,Lei,Y.,Si,G.,YanQing,D.,HuiXia,H.,XueLin,Z.,...Fei,Y.(2012).IDH mutations predict longer survival and response to temozolomide insecondary glioblastoma.Cancer Sci,103(2),269-273.doi:10.1111/j.1349-7006.2011.02134.x
Stupp,R.,Brada,M.,van den Bent,M.J.,Tonn,J.C.,Pentheroudakis,G.,&Group,E.G.W.(2014).High-grade glioma:ESMO Clinical Practice Guidelines fordiagnosis,treatment and follow-up.Ann Oncol,25 Suppl 3,iii93-101.doi:10.1093/annonc/mdu050
Stupp,R.,Tonn,J.C.,Brada,M.,Pentheroudakis,G.,&Group,E.G.W.(2010).High-grade malignant glioma:ESMO Clinical PracticeGuidelines for diagnosis,treatment and follow-up.Ann Oncol,21 Suppl 5,v190-193.doi:10.1093/annonc/mdq187
Tan,X.,Hu,L.,Luquette,L.J.,3rd,Gao,G.,Liu,Y.,Qu,H.,...Elledge,S.J.(2012).Systematic identification of synergistic drug pairstargetingHIV.NatBiotechnol,30(11),1125-1130.doi:10.1038/nbt.2391
van Vuurden DG,Hulleman E,Meijer OL,Wedekind LE,Kool M,Witt H,Vandertop PW,Würdinger T,Noske DP,Kaspers GJ,Cloos J.PARP inhibitionsensitizes childhood high grade glioma,medulloblastomaand ependymoma toradiation.Oncotarget.2011 Dec；2(12):984-996.doi:10.18632/oncotarget.362.PMID:22184287；PMCID:PMC3282104.
Weller M,Stupp R,Reifenberger G,Brandes AA,van den Bent MJ,Wick W,Hegi ME.MGMT promoter methylation in malignant gliomas:ready for personalizedmedicine？Nat Rev Neurol.2010 Jan；6(1):39-51.doi:10.1038/nrneurol.2009.197.Epub 2009 Dec 8.PMID:19997073.
For standard molecular biology techniques,see Sambrook,J.,Russel,D.W.Molecular Cloning,A Laboratory Manual.3 ed.2001,Cold SpringHarbor,NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press

Claims (33)

1.一种治疗有需要的患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，
其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤包含X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型，
其中该PARP抑制剂是式I的化合物
其中：
R1独立地选自H、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4氟烷基、和C1-4烷氧基；
R2独立地选自H、卤代、C1-4烷基、和C1-4氟烷基；并且
R3是H或C1-4烷基；
R4是卤代或C1-4烷基，
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的方法，其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤进一步包含异柠檬酸脱氢酶1和/或2(IDH1和/或IDH2)缺陷表型。
3.如权利要求1所述的方法，其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤不包含IDH1缺陷表型。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤包含O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法进一步包括在施用该PARP抑制剂之前诊断该患者为患有包含该ATRX缺陷表型的该脑肿瘤或神经母细胞瘤的步骤。
6.如权利要求5所述的方法，其中该诊断该患者的步骤进一步包括确定该脑肿瘤或神经母细胞瘤是否进一步包含该IDH1或IDH2缺陷表型和/或MGMT启动子甲基化。
7.如权利要求5或权利要求6所述的方法，其中诊断该患者包括测定从该患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤获得的细胞。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中向该患者施用该PARP抑制剂与以下的组合：
i)烷基化化疗剂；和/或
ii)电离辐射。
9.一种治疗有需要的患者的脑肿瘤或神经母细胞瘤的方法，该方法包括向该患者施用治疗有效量的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，以及
i)烷基化化疗剂；和/或
ii)以10Gy或更高剂量施用的电离辐射，
其中该PARP抑制剂是式I的化合物
其中：
R1独立地选自H、C1-4烷基、C3-6环烷基、C1-4氟烷基、和C1-4烷氧基；
R2独立地选自H、卤代、C1-4烷基、和C1-4氟烷基；并且
R3是H或C1-4烷基；
R4是卤代或C1-4烷基，
或其药学上可接受的盐。
10.如权利要求9所述的方法，其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤包含：
(i)X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合征(ATRX)缺陷表型；
(ii)异柠檬酸脱氢酶1或2(IDH1或IDH2)缺陷表型；和/或
(iii)O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化。
11.如权利要求8至10中任一项所述的方法，其中该烷基化化疗剂是替莫唑胺(TMZ)或二去水卫矛醇(VAL-083)。
12.如权利要求11所述的方法，其中按以下施用TMZ：
(i)小于约200mg/m2的剂量、小于约150mg/m2的剂量、小于约125mg/m2的剂量、或小于约100mg/m2；
(ii)约50与150mg/m2之间的剂量、约75与150mg/m2之间的剂量、或约50mg/m2与125mg/m2之间的剂量。
13.如权利要求11所述的方法，其中按以下施用VAL-083：
(i)小于约50mg/m2的剂量、小于约40mg/m2的剂量、小于约30mg/m2的剂量、或小于约20mg/m2；
(ii)约10与50mg/m2之间的剂量、约10与40mg/m2之间的剂量、或约10mg/m2与30mg/m2之间的剂量。
14.如权利要求8至13中任一项所述的方法，其中按以下施用该电离辐射：
(i)小于约60Gy、小于约55Gy、小于约50Gy、小于约45Gy、或小于约40Gy的剂量；或
(ii)约20Gy与约60Gy之间、约20Gy与约55Gy之间、约20Gy与约50Gy之间、约20与约45Gy之间、或约20与约40Gy之间、约30Gy与约60Gy之间、约30Gy与约55Gy之间、约30Gy与约50Gy之间、约30Gy与约45Gy之间、约30Gy与约40Gy之间的剂量
任选地，其中该电离辐射的剂量作为分次放疗来施用。
15.如权利要求8至14中任一项所述的方法，其中该PARP抑制剂协同地加强该烷基化化疗剂和/或放疗剂的活性。
16.如权利要求8至15中任一项所述的方法，其中该PARP抑制剂治疗该脑肿瘤或神经母细胞瘤，而不依赖于由这些化疗或放疗剂的施用诱导的对该神经胶质瘤的任何作用。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中R1选自甲基、乙基、异丙基、环丙基、1,1-二氟乙基、1-氟乙基、三氟甲基、二氟甲基和甲氧基中的任一个。
18.如权利要求17所述的方法，其中R1是甲基或乙基。
19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中R2选自H、氯、氟、甲基和二氟甲基中的任一个。
20.如权利要求19所述的方法，其中R2是氟或甲基。
21.一种化合物如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中R3是甲基或乙基。
22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中R4选自氯、氟和甲基中的任一个。
23.如权利要求22所述的方法，其中R4是氟。
24.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中R1是C1-4烷基，R2是卤代，R3是C1-4烷基，R4是卤代或C1-4烷基，或其药学上可接受的盐。
25.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中该PARP抑制剂选自：
5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氯-2-乙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[[5-氟-2-[(1S和1R)-1-氟乙基]-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氯-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[[2-(1,1-二氟乙基)-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-(二氟甲基)-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[(5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[[2-(二氟甲基)-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[(5-氟-2-甲氧基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-乙基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
N-乙基-6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]吡啶-2-甲酰胺，
N-乙基-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氯-5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[[5-氟-3-氧代-2-(三氟甲基)-4H-喹喔啉-6-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(5-氟-2-异丙基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-6-氟-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-环丙基-5-氟-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N,6-二甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-氟-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
6-(二氟甲基)-5-[4-[(2-甲氧基-5-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，和
6-(二氟甲基)-5-[4-[(2,5-二甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺，
或其药学上可接受的盐。
26.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中该PARP抑制剂是：
6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐。
27.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中该PARP抑制剂是：
6-氟-5-[4-[(5-氟-2-甲基-3-氧代-4H-喹喔啉-6-基)甲基]哌嗪-1-基]-N-甲基-吡啶-2-甲酰胺。
28.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中该脑肿瘤是神经胶质瘤或室管膜瘤。
29.如权利要求28所述的方法，其中该脑肿瘤是神经胶质瘤。
30.如权利要求29所述的方法，其中该神经胶质瘤是儿科神经胶质瘤。
31.如权利要求29或权利要求30所述的方法，其中该神经胶质瘤是高级别神经胶质瘤，任选地选自由以下组成的列表：少突神经胶质瘤、间变性星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、和弥漫性中线神经胶质瘤。
32.如权利要求29至31中任一项所述的方法，其中该神经胶质瘤是H3K27M突变型神经胶质瘤。
33.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中该脑肿瘤或神经母细胞瘤被表征为具有高水平的基因组不稳定性。
CN202280077926.3A 2021-12-21 2022-12-20 治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤的方法 Pending CN118317793A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163292029P 2021-12-21 2021-12-21
US63/292029 2021-12-21
PCT/EP2022/086913 WO2023118085A1 (en) 2021-12-21 2022-12-20 Methods of treating brain tumours and neuroblastomas

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN118317793A true CN118317793A (zh) 2024-07-09

Family

ID=84980901

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280077926.3A Pending CN118317793A (zh) 2021-12-21 2022-12-20 治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤的方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20250082630A1 (zh)
EP (1) EP4452256B1 (zh)
JP (1) JP2025503465A (zh)
KR (1) KR20240127394A (zh)
CN (1) CN118317793A (zh)
AU (1) AU2022422276B2 (zh)
CA (1) CA3242082A1 (zh)
IL (1) IL313661A (zh)
MX (1) MX2024007665A (zh)
TW (1) TW202342037A (zh)
WO (1) WO2023118085A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20240161147A (ko) 2022-03-14 2024-11-12 슬랩 파마슈티컬스 엘엘씨 다중 사이클릭 화합물
EP4534537A4 (en) * 2022-05-25 2025-12-10 Xizang Haisco Pharmaceutical Co Ltd BICYCLE-DERIVED PARP INHIBITOR AND ITS USE
US20250346573A1 (en) * 2022-06-02 2025-11-13 Chengdu Easton Biopharmaceuticals Co., Ltd. Azaquinolinone derivative, preparation method therefor and use thereof
WO2025120513A1 (en) * 2023-12-05 2025-06-12 Astrazeneca Uk Limited Combination of antibody-drug conjugate and blood brain barrier-penetrant parp1 selective inhibitor

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002503943A (ja) 1994-08-12 2002-02-05 ミリアド・ジェネティックス・インコーポレイテッド １７ｑ−連鎖乳癌および卵巣癌感受性遺伝子におけるイン・ビボ突然変異および多形性
ES2164136T5 (es) 1994-08-12 2009-02-16 The University Of Utah Research Foundation Sondas de acidos nucleicos que copmrenden un fragmento del gen de susceptibilidad al cancer de mama y ovarios asociado a 17q.
JP4027406B2 (ja) 2003-03-12 2007-12-26 クドス ファーマシューティカルズ リミテッド フタラジノン誘導体
MA57972B1 (fr) * 2019-07-19 2025-05-30 Astrazeneca Ab Inhibiteurs de parp1
US11795158B2 (en) * 2020-06-25 2023-10-24 Astrazeneca Ab Chemical compounds

Also Published As

Publication number Publication date
IL313661A (en) 2024-08-01
TW202342037A (zh) 2023-11-01
MX2024007665A (es) 2024-07-09
AU2022422276B2 (en) 2025-12-11
EP4452256B1 (en) 2025-12-10
CA3242082A1 (en) 2023-06-29
US20250082630A1 (en) 2025-03-13
AU2022422276A1 (en) 2024-08-01
WO2023118085A1 (en) 2023-06-29
EP4452256A1 (en) 2024-10-30
JP2025503465A (ja) 2025-02-04
KR20240127394A (ko) 2024-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN115768760A (zh) 作为抗癌药物的喹喔啉衍生物
TWI837403B (zh) 化學化合物
CN116096710B (zh) 用于治疗braf相关疾病和障碍的4-氧代-3,4-二氢喹唑啉酮化合物
CN118317793A (zh) 治疗脑肿瘤和神经母细胞瘤的方法
CN102171214B (zh) 聚(adp-核糖)聚合酶(parp)的二氢吡啶并酞嗪酮抑制剂
KR20180058832A (ko) Mdm2-p53 억제제로서의 스피로[3h-인돌-3,2&#39;-피롤리딘]-2(1h)-온 화합물 및 유도체
TW202222350A (zh) 抗體-藥物結合物及parp1選擇性抑制劑之組合
CN109641890B (zh) 异柠檬酸脱氢酶(idh)抑制剂
WO2024188246A9 (zh) 含氮大环类化合物及其制备方法和应用
CN114981270B (zh) Mll1抑制剂和抗癌剂
EA048972B1 (ru) Способы лечения опухолей головного мозга и нейробластом
EA048005B1 (ru) Производные хиноксалина в качестве противораковых лекарственных средств
WO2025209533A1 (zh) 一种pan-RAS抑制剂化合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination