EA048005B1

EA048005B1 - Производные хиноксалина в качестве противораковых лекарственных средств

Info

Publication number: EA048005B1
Application number: EA202390052
Authority: EA
Inventors: Мартин Джон ПАКЕР; Себастьян Луи Дегорс; Джеффри Уоллас Джоханнес; Судхир Махадео Ханде; Авипса Гош; СяоЛань Чжен
Original assignee: Астразенека Аб
Priority date: 2020-06-25
Filing date: 2021-06-24
Publication date: 2024-10-21

Abstract

Изобретение относится к соединениям на основе азахинолона формулы (I) и их применению в медицине.

Description

Изобретение относится к замещенным соединениям на основе азахинолона и их фармацевтически приемлемым солям, которые ингибируют семейство ферментов, представляющих собой поли(АДФрибоза)полимеразы (PARP). Настоящее изобретение также относится к применению данных соединений и их фармацевтически приемлемых солей в медицине, например, в лечении заболеваний, при которых ингибирование функции PARP1 или PARP2 имеет терапевтическое значение. Настоящее изобретение также относится к способам лечения и способам изготовления лекарственных препаратов с применением соединений согласно настоящему изобретению.

Семейство ферментов PARP играет важную роль в ряде клеточных процессов, таких как репликация, рекомбинация, ремоделирование хроматина и репарация повреждений ДНК (O'Connor MJ, Mol Cell (2015) 60(4):547-60).

Примеры ингибиторов PARP и механизм их действия изложены, например, в WO 2004/080976.

PARP1 и PARP2 представляют собой наиболее широко изученные PARP с точки зрения их роли в репарации повреждений ДНК. PARP1 активируется разрывами, представляющими собой повреждение ДНК, и осуществляет катализ добавления цепей поли(АДФ-рибоза) (PAR) к целевым белкам. Данная посттрансляционная модификация, известная как парилирование, опосредует рекрутирование дополнительных факторов репарации ДНК в очаги повреждения ДНК.

После завершения выполнения данной роли, представляющей собой рекрутирование, аутопарилирование PARP запускает высвобождение связанной PARP из ДНК с обеспечением доступа других белков репарации ДНК для завершения репарации. Таким образом, все шаги из связывания PARP с поврежденными сайтами, ее каталитической активности и ее последующего высвобождения из ДНК представляют собой важные стадии ответа раковой клетки на повреждение ДНК, обусловленное химиотерапевтическими средствами и лучевой терапией (Bai P. Biology of poly (ADP-ribose) polymerases: the factotums of cell maintenance. Mol Cell 2015; 58:947-58.).

Ингибирование ферментов семейства PARP использовалось в качестве стратегии селективного уничтожения раковых клеток посредством инактивации дополнительных путей репарации ДНК. В ходе ряда доклинических и клинических исследований было продемонстрировано, что опухолевые клетки, несущие вредоносные изменения BRCA1 или BRCA2, основных белков-супрессоров опухоли, участвующих в репарации двухнитевого разрыва ДНК (DSB) посредством гомологичной рекомбинации (HR), являются селективно чувствительными в отношении низкомолекулярных ингибиторов семейства ферментов репарации ДНК PARP. Такие опухоли являются дефектными в отношении путей репарации посредством гомологичной рекомбинации (HRR) и их выживание зависит от функционирования ферментов PARP. Несмотря на то, что терапия с применением ингибитора PARP была преимущественно нацелена на виды рака с мутацией в BRCA, ингибиторы PARP клинически тестировали на опухолях без мутации в BRCA, которые демонстрировали недостаточность по гомологичной рекомбинации (HRD) (Turner N, Tutt A, Ashworth A. Hallmarks of 'BRCAness' in sporadic cancers. Nat Rev Cancer 2004;4:814-9.).

Считается, что ингибиторы PARP, характеризующиеся улучшенной селективностью в отношении PARP1, могут привести к улучшенной эффективности и сниженной токсичности по сравнению с другими ингибиторами PARP1/2, применяющимися в клинической практике. Также считается, что селективное выраженное ингибирование PARP1 будет приводить к блокированию PARP1 на ДНК, приводящему к двухнитевым разрывам ДНК (DSB) посредством коллапса вилок репликации в S-фазе. Также считается, что блокирование PARP1 на ДНК представляет собой эффективный механизм селективного уничтожения опухолевых клеток с HRD.

Таким образом, существует неудовлетворенная медицинская потребность в эффективных и безопасных ингибиторах PARP. В особенности в ингибиторах PARP, характеризующихся селективностью в отношении PARP1.

Заявитель обнаружил, что азахинолоны, описанные в данном документе, неожиданно характеризуются ингибирующей активностью в отношении PARP, и, таким образом, могут быть пригодными для лечения заболеваний и состояний, при которых функция PARP имеет фармакологическое значение. Кроме того, азахинолоны, описанные в данном документе, характеризуются неожиданно высокой селективностью в отношении PARP1 по сравнению с другими представителями семейства PARP, такими как PARP2, PARP3, PARP5a и PARP6.

Заявитель дополнительно обнаружил, что азахинолоны, описанные в данном документе, неожиданно способны проникать через гематоэнцефалический барьер (BBB). Таким образом, азахинолоны, описанные в данном документе, можно применять для лечения заболеваний и состояний, возникающих в тканях в центральной нервной системе, таких как головной мозг и спинной мозг.

Согласно одному аспекту изобретения предложено соединение формулы I

- 1 048005

где

R¹ независимо выбран из H, С1_-4алкила, С_3-6циклоалкила, С1_-4фторалкила и С_1-4алкилокси;

R² независимо выбран из H, галогена, С_1-4алкила и С_1-4фторалкила, и

R3 представляет собой H или С_1-4алкил;

R⁴ представляет собой галоген или С_1-4алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.

Предпочтительно R¹ выбран из любого из метила, этила, изопропила, циклопропила, 1,1дифторэтила, 1-фторэтила, трифторметила, дифторметила и метокси, более предпочтительно R¹ представляет собой метил или этил.

В одном аспекте R¹ независимо выбран из H, С_1-4алкила, С_1-4фторалкила и С_1-4алкилокси

Предпочтительно R² выбран из любого из H, хлора, фтора, метила и дифторметила, более предпочтительно R² представляет собой фтор или метил.

Предпочтительно R³ представляет собой метил или этил.

Предпочтительно R⁴ выбран из любого из хлора, фтора и метила, более предпочтительно R⁴ представляет собой фтор.

В одном аспекте предусмотрены соединение формулы I, где R¹ представляет собой С1-4алкил, R²представляет собой галоген, R3 представляет собой С1-4алкил, R⁴ представляет собой галоген или С1₄алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.

Более предпочтительным является соединение формулы I, выбранное из

5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин-2карбоксамида, 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]-пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин2-карбоксамида, 6-хлор-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метил пиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2,5-диметил-3 -оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-К,6диметилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-6-фторпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пипера зин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пипера зин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксамида, 6-хлор-5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)ме тил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбокс-амида, 5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо4H-хино-ксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 6-фтор-5-[4-[[5фтор-2-[(^ и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида, 5-[4-[[5-фтор-2-[(^ и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хино-ксалин-6-ил]метил]пиперазин-1ил]-Ы\6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пипе разин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбокс-амида, 5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-6-фтор-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин6-ил)-метил]пиперазин-1-ил]-Ы\6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[[2-(1,1-дифторэтил)-5-фтор-3оксо-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2-кар-боксамида, 6-фтор-5-[4-[(5фтор-2-метил-3 -оксо-4H-хиноксαлин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил] -N-метилпиридин-2-карбоксамида, 6(дифторметил)-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпири дин-2-карбоксамида, 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]пиридин-2-карбокс-амида, 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]^6-ди-метилпиридин-2-карбоксамида, 6-(дифторметил)-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хинокса-лин-6ил)метил]пиперазин-1 -ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3 -оксо-4Н-хинокса лин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-кар-боксамида, 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хинокса лин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида, 6-хлор-5-[4-[(2-этил-5-фтор3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-этил-5фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида, 6-хлор-5-[4[(5 -фтор-2-метил-3 -оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил|-\ -метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)-метил]пиперазин-1-ил]-Ы\6-диметилпиридин-2карбоксамида, 5-[4-[(5 -фтор-2-метил-3 -оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1 -ил] -N-метилпири дин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин2-карбокс-амида, 6-хлор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метил-пири дин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы\6-диметилпири дин-2-карбоксамида, 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы- 2 048005 метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[[2-(дифторметил)-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пипера зин-1-ил]-Н,6-диметилпирвдин-2-кар-боксамвда,5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2-карбоксамвда, 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)ме'тил|пиперазин-1-ил|-Н-ме'тилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил|пиперазин-1-ил|-Н,6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 6-хлор-5-[4-[(5(|)тор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил|пиперазин-1-ил|-Н-метилпиридин-2-карбоксамида. 5|4-|(2-этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил|-пиперазин-1-ил|-Н.6-диметилпиридин-2-карбок самида, 5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпири дин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамида, №этил-6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)ме тил]-пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксамида, Н-этил-5-|4-|(5-(()тор-2-метил-3-оксо-4Н-хино-ксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Нхиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпири-дин-2-карбоксамида, 6-фтор-5-[4-[[5-фтор-3оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпирвдин-2-карбоксамвда, 6хлор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпири дин-2-кар-боксамида, 5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида, 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4Н-хи-ноксалин-6-ил)ме тил| пиперазин-1 -ил| -N -метилпиридин-2 -карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-2 -изопропил-3 -оксо-4Н-хинокса лин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-циклопро пил-5-фтор-3-оксо-4H-хинокса-лин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин-2-карбокса мида, 5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)-метил]пиперазин-1ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида, 5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пи перазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2-карбоксамида, 6-фтор-5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида, 6-(дифторметил)-5-[4-[(2метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида и 6-(дифтор-метил)-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида, или его фармацевтически приемлемая соль.

Наиболее предпочтительным является соединение по изобретению, которое представляет собой 6фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]-пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамид, или его фармацевтически приемлемая соль.

В дополнительном аспекте предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый разбавитель, вспомогательное вещество или инертный носитель.

В дополнительном аспекте предусмотрено применение соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, как они определены выше, в качестве лекарственного препарата.

В еще одном аспекте предусмотрено применение соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, как они определены выше, для лечения рака. В одном аспекте при указанном раке имеет место дефект HR-зависимого пути репарации DSB ДНК. В одном аспекте указанный рак предусматривает одну или несколько раковых клеток, обладающих сниженной или подавленной способностью к репарации DSB ДНК посредством HR по сравнению с нормальными клетками. В еще одном аспекте указанные раковые клетки характеризуются фенотипом, дефектным в отношении BRCA1 или BRCA2. В еще одном аспекте указанные раковые клетки являются дефектными в отношении BRCA1 или BRCA2. Согласно еще одному аспекту указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в гене, кодирующем компонент HR-зависимого пути репарации DSB ДНК, предпочтительно указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в BRCA1 и/или BRCA2. Согласно еще одному аспекту рак выбран из любого из рака молочной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гематологического рака, рака желудочно-кишечного тракта, рака легкого и рака головного мозга.

В дополнительном аспекте предусмотрен способ лечения заболевания или состояния, при которых ингибирование PARP1 является благоприятным, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, как они определены выше, пациенту, нуждающемуся в этом. В одном аспекте у пациента, нуждающегося в лечении, имеется рак. В одном аспекте при указанном раке имеет место дефект HR-зависимого пути репарации DSB ДНК. В еще одном аспекте указанный рак предусматривает одну или несколько раковых клеток, обладающих сниженной или подавленной способностью к репарации DSB ДНК посредством HR по сравнению с нормальными клетками. В еще одном аспекте указанные раковые клетки характеризуются фенотипом, дефектным в отношении BRCA1 или BRCA2. В дополнительном аспекте указанные раковые клетки являются дефектными в отношении BRCA1 или BRCA2. Согласно еще одному аспекту указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в гене, кодирующем компонент HR-зависимого пути репарации DSB ДНК, предпочтительно указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в BRCA1

- 3 048005 и/или BRCA2. Согласно одному аспекту рак выбран из любого из рака молочной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гематологического рака, рака желудочнокишечного тракта, рака легкого и рака головного мозга.

В дополнительном аспекте предусмотрено применение соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, как они определены выше, для лечения или профилактики заболеваний и состояний, при которых ингибирование PARP1 является благоприятным, предпочтительно заболевание или состояние представляет собой рак, наиболее предпочтительно рак выбран из любого из рака молочной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гематологического рака, рака желудочно-кишечного тракта, рака легкого и рака головного мозга.

Дополнительные аспекты будут очевидны для специалиста в данной области техники после прочтения данного описания.

Хорошо известно, что блокирование сердечного ионного канала, кодируемого геном человека, родственным гену ether-a-gogo (hERG), представляет собой фактор риска при открытии и разработке лекарственного средства. Блокирование hERG может обусловливать проблемы безопасности, такие как сердечная аритмия. Соединения формулы I характеризуются низкой активностью в отношении hERG, что обеспечивает их преимущество. В одном аспекте предусмотрено соединение формулы I, характеризующееся IC50, составляющей более 10 мкМ. В одном аспекте предусмотрено соединение формулы I, характеризующееся IC50, составляющей более 20 мкМ.

Для минимизации рисков проявления нецелевых эффектов необходимо, чтобы молекулы лекарственного средства обладали селективностью в отношении конкретной мишени. Соединения формулы I обладают более высокой селективностью в отношении PARP1 по сравнению с другими представителями семейства PARP, в том числе PARP2, PARP3, PARP5a и PARP6, что обеспечивает их преимущество. Соединения формулы I обладают более высокой селективностью в отношении PARP1 по сравнению с PARP2, что обеспечивает их преимущество. В одном аспекте предусмотрено соединение формулы I, характеризующееся селективностью в отношении PARP1, в 10 раз превышающей селективность в отношении PARP2. В одном аспекте предусмотрено соединение формулы I, характеризующееся селективностью в отношении PARP1, в 100 раз превышающей селективность в отношении PARP2.

В другом дополнительном аспекте предусмотрено применение соединения формулы I в получении лекарственного препарата для применения в качестве вспомогательного средства в терапии рака или для стимуляции опухолевых клеток для лечения ионизирующим излучением, или химиотерапевтическими средствами, или средствами терапии на основе антител, такими как иммуноонкологические средства или конъюгаты антитело-лекарственное средство.

В других дополнительных аспектах предусмотрено лечение заболевания, выраженность которого снижается посредством ингибирования PARP1, включающее введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, и лечение рака, включающее введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы I в комбинации, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, одновременно или последовательно с применением ионизирующего излучения или химиотерапевтических средств.

В дополнительных аспектах соединение формулы I можно использовать в получении лекарственного препарата для лечения рака, который является дефектным в отношении активности репарации DSB ДНК, зависимой от гомологичной рекомбинации (HR), или в лечении пациента с раком, при котором имеет место дефект активности HR-зависимой репарации DSB ДНК, включающем введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества соединения.

По HR-зависимому пути репарации DSB ДНК осуществляется репарация двухнитевых разрывов (DSB) в ДНК посредством механизмов гомологичной рекомбинации с повторным образованием непрерывной спирали ДНК (K.K. Khanna and S.P. Jackson, Nat. Genet. 27(3): 247-254 (2001)). Компоненты HRзависимого пути репарации DSB ДНК включают без ограничения ATM (NM_000051), RAD51 (NM_002875), RAD51L1 (NM_002877), RAD51C (NM_002876), RAD51L3 (NM_002878), DMC1 (NM_007068), XRCC2 (NM_005431), XRCC3 (NM_005432), RAD52 (NM_002879), RAD54L (NM_003579), RAD54B (NM_012415), BRCA1 (NM_007295), BRCA2 (NM_000059), RAD50 (NM_005732), MRE11A (NM_005590) и NBS1 (NM_002485). Другие белки, вовлеченные в HRзависимый путь репарации DSB ДНК, предусматривают регуляторные факторы, такие как EMSY (Hughes-Davies, et al., Cell, 115, pp.523-535). Компоненты HR также описаны в Wood, et al., Science, 291, 1284-1289 (2001).

Рак, при котором имеет место дефект HR-зависимой репарации DSB ДНК, может предусматривать одну или несколько раковых клеток, которые характеризуются сниженной или подавленной способностью к репарации DSB ДНК посредством данного пути по сравнению с нормальными клетками, или состоять из них, т. е. активность HR-зависимого пути репарации DSB ДНК может быть снижена или нарушена в одной или нескольких раковых клетках.

Активность одного или нескольких компонентов HR-зависимого пути репарации DSB ДНК может быть нарушена в одной или нескольких раковых клетках индивидуума, у которого имеется рак, при ко

- 4 048005 тором имеет место дефект HR-зависимой репарации DSB ДНК. Компоненты HR-зависимого пути репарации DSB ДНК хорошо охарактеризованы в данной области техники (см., например, Wood, et al., Science, 291, 1284-1289 (2001)) и предусматривают компоненты, перечисленные выше.

В одном аспекте раковые клетки могут характеризоваться фенотипом, дефектным в отношении BRCA1 и/или BRCA2, т. е. в раковых клетках снижена или нарушена активность BRCA1 и/или BRCA2. Раковые клетки с данным фенотипом могут быть дефектными в отношении BRCA1 и/или BRCA2, т. е. в раковых клетках может быть снижена или нарушена экспрессия и/или активность BRCA1 и/или BRCA2, например, посредством мутации или полиморфизма в кодирующей нуклеиновой кислоте или посредством амплификации, мутации или полиморфизма в гене, кодирующем регуляторный фактор, например, в гене EMSY, который кодирует регуляторный фактор BRCA2 (Hughes-Davies, et al., Cell, 115, 523-535).

BRCA1 и BRCA2 представляют собой известные супрессоры опухоли, аллели дикого типа которых часто утрачиваются в опухолях у гетерозиготных носителей (Jasin M., Oncogene, 21(58), 8981-93 (2002); Tutt, et al., Trends Mol Med, 8 (12), 571-6, (2002)). Связь наличия мутаций в BRCA1 и/или BRCA2 с раком молочной железы хорошо охарактеризована в данной области техники (Radice, P.J., Exp Clin Cancer Res., 21(3 Suppl), 9-12 (2002)). Также известно, что амплификация гена EMSY, который кодирует BRCA2связывающий фактор, ассоциирована с раком молочной железы и раком яичника. Носители мутаций в BRCA1 и/или BRCA2 также подвержены повышенному риску развития определенных видов рака, в том числе рака молочной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гематологического рака, рака желудочно-кишечного тракта и рака легкого.

В одном аспекте индивидуум является гетерозиготным по одной или нескольким вариациям, таким как мутации и полиморфизмы, в BRCA1 и/или BRCA2 или их регуляторе. Выявление вариации в BRCA1 и BRCA2 является хорошо известным из уровня техники и описано, например, в EP 699754, EP 705903, Neuhausen, S.L. and Ostrander, E.A., Genet. Test, 1, 75-83 (1992); Chappnis, P.O. and Foulkes, W.O., Cancer Treat Res, 107, 29-59 (2002); Janatova M., et al., Neoplasma, 50(4), 246-505 (2003); Jancarkova, N., Ceska Gynekol., 68(1), 11-6 (2003)). Определение амплификации гена, кодирующего BRCA2-связывающий фактор EMSY, описано в Hughes-Davies, et al., Cell, 115, 523-535).

Мутации и полиморфизмы, ассоциированные с раком, могут быть выявлены на уровне нуклеиновой кислоты посредством выявления наличия вариантной последовательности нуклеиновой кислоты или на уровне белка посредством выявления наличия вариантного (т. е. мутантного или аллельного варианта) полипептида.

Определения

Алкильные группы и фрагменты представляют собой линейную или разветвленную цепь, например, С1_-8алкил, С1_-6алкил, С1_-4алкил или Оз-балкил. Примеры алкильных групп представляют собой метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил и н-октил, например, метил или н-гексил.

Циклоалкильные группы представляют собой насыщенные циклические алкильные группы. Cз_-6циклоалкил представляет собой насыщенную циклическую алкильную группу, содержащую от 3 до 6 атомов углерода. Примеры Cз_-6циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. Cз_-6циклоалкил предусматривает Cз_-5циклоалкил и Cз_-4циклоалкил.

Фторалкильные группы представляют собой алкильные группы, в которых один или несколько атомов H замещены одним или несколькими атомами фтора, например, С1_-8фторалкил, С_1-6фторалкил, С1_-4фторалкил или C5_-6фторалкил. Примеры включают фторметил (CH2F-), дифторметил (CHF2-), трифторметил (CF₃-), 2,2,2-трифторэтил (CF₃CH₂-), 1,1-дифторэтил (CH₃CHF₂-), 2,2-дифторэтил (CHF2CH2-), 1-фторэтил (CH₃CHF-) и 2-фторэтил (CH2FCH2-).

Галоген означает фтор, хлор, бром и йод. В одном аспекте галоген представляет собой фтор или хлор.

Алкилоксигруппы представляют собой алкильные группы, которые присоединены к остальной части молекулы посредством атома кислорода. Примеры подходящих С1_-4алкилоксигрупп включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси и трет-бутокси.

В настоящем описании, если не указано иное, используемый в данном документе термин фармацевтически приемлемый относится к таким соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые по результатам тщательной медицинской оценки являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения в соответствии с разумным соотношением польза/риск.

В настоящем описании, если не указано иное, фраза эффективное количество означает количество соединения или композиции, которое является достаточным для существенного и положительного изменения симптомов и/или состояний, подлежащих лечению (например, обеспечивает положительный клинический ответ). Эффективное количество активного ингредиента для применения в фармацевтической композиции будет варьироваться в зависимости от конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, продолжительности лечения, характера сопутствующей терапии, применяемого конкретного активного ингредиента(ингредиентов), применяемого конкретного фармацевтически приемлемого

- 5 048005 вспомогательного вещества(веществ)/носителя(носителей) и подобных факторов, находящихся в пределах знаний и опыта лечащего врача.

Используемый в данном документе термин осуществление лечения если не указано иное, означает обращение вспять, облегчение, подавление течения, задержку прогрессирования, задержку начала или предупреждение нарушения или состояния, по отношению к которому применяется такой термин, или одного или нескольких симптомов такого нарушения или состояния. Используемый в данном документе термин лечение, если не указано иное, относится к процессу осуществления лечения, при этом определение термина осуществление лечения приведено непосредственно выше. Термин осуществление лечения также предусматривает лечение субъекта с применением адъюванта и неоадъюванта. Во избежание неоднозначности толкования упоминание в данном документе термина лечение в том числе относится к радикальному, паллиативному и профилактическому лечению, а также к введению лекарственного препарата для применения при таком лечении.

Соединения формулы I могут образовывать стабильные фармацевтически приемлемые соли кислоты или основания, и в таких случаях подходящим может быть введение соединения в виде соли. Примеры солей присоединения кислоты включают ацетат, адипат, аскорбат, бензоат, бензолсульфонат, бикарбонат, бисульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, холин, цитрат, циклогексилсульфамат, диэтилендиамин, этансульфонат, фумарат, глутамат, гликолят, гемисульфат, 2-гидроксиэтилсульфонат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, гидроксималеат, лактат, малат, малеат, метансульфонат (мезилат), меглумин, 2-нафталинсульфонат, нитрат, оксалат, памоат, персульфат, фенилацетат, фосфат, дифосфат, пикрат, пивалат, пропионат, хинат, салицилат, стеарат, сукцинат, сульфамат, сульфанилат, сульфат, тартрат, тозилат (п-толуолсульфонат), трифторацетат и ундеканоат. Предпочтительными являются нетоксичные физиологически приемлемые соли, хотя другие соли также могут быть пригодными, например, для выделения или очистки продукта.

Соли могут быть образованы традиционными способами, например, посредством осуществления реакции продукта в форме свободного основания с одним или несколькими эквивалентами соответствующей кислоты в растворителе или среде, в которой соль является нерастворимой, или в растворителе, таком как вода, который удаляют in vacuo, или посредством лиофилизации, или посредством обмена анионов имеющейся соли на другой анион в подходящей ионообменной смоле.

Соединения формулы I могут содержать более чем один хиральный центр, и следует понимать, что настоящая заявка охватывает все отдельные стереоизомеры, энантиомеры и диастереоизомеры, а также их смеси. Таким образом, следует понимать, что поскольку соединения формулы I могут существовать в оптически активных или рацемических формах благодаря одному или нескольким асимметрическим атомам углерода, настоящая заявка включает в своем определении любую такую оптически активную или рацемическую форму, которая обладает упомянутой выше активностью. Настоящая заявка охватывает все такие стереоизомеры, обладающие активностью, определенной в данном документе.

Таким образом, по всему тексту настоящего описания, где упоминается соединение формулы I, следует понимать, что термин соединение предусматривает диастереоизомеры, смеси диастереоизомеров и энантиомеры, которые являются ингибиторами PARP1.

Также следует понимать, что определенные соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в сольватированной, а также в несольватированной формах, таких как, например, гидратированные и безводные формы. Следует понимать, что соединения в данном документе охватывают все такие сольватированные формы. Для ясности, это предусматривает как сольватированные (например, гидратированные) формы свободной формы соединения, так и сольватированные (например, гидратированные) формы соли соединения.

Предполагается, что формула I, описанная в данном документе, охватывает все изотопы составляющих ее атомов. Например, H (или водород) предусматривает любую изотопную форму водорода, в том числе 'H. ²H (D) и ³H (T); C предусматривает любую изотопную форму углерода, в том числе ¹²C, ¹³C и ¹⁴C; O предусматривает любую изотопную форму кислорода, в том числе ¹⁶O, ¹⁷O и ¹⁸O; N предусматривает любую изотопную форму азота, в том числе ¹³N, ¹⁴N и ¹⁵N; F предусматривает любую изотопную форму фтора, в том числе ¹⁹F и ¹⁸F, и т. д. В одном аспекте соединения формулы I содержат изотопы атомов, предусмотренные в данном документе, в количествах, соответствующих их содержанию в природе. Однако в определенных случаях может быть необходимо обогащать один или несколько атомов в конкретном изотопе, который обычно присутствует в меньшем количестве. Например, 'H обычно содержится в количестве, превышающем 99,98%; однако в одном аспекте соединение любой формулы, представленной в данном документе, может быть обогащено ²H или ³H в одном или нескольких положениях, где присутствует H. В другом аспекте, если соединение любой формулы, представленной в данном документе, является обогащенным радиоактивным изотопом, например, ³H и ¹⁴C, то соединение может быть пригодным в анализах распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Следует понимать, что настоящая заявка охватывает все такие изотопные формы.

Соединения формулы I или их фармацевтически приемлемые соли обычно вводят пероральным путем в форме фармацевтических препаратов, содержащих активный ингредиент, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, или сольват такой соли в фармацевтически приемлемой лекарственной

- 6 048005 форме. В зависимости от нарушения и пациента, подлежащего лечению, композиции можно вводить при различных дозах.

Фармацевтические составы на основе соединения формулы I, описанные выше, могут быть получены для перорального введения, в частности в форме таблеток или капсул, и особенно с применением технологий, направленных на обеспечение целенаправленного высвобождения лекарственного средства в толстом кишечнике (Patel, M. M. Expert Opin. Drug Deliv. 2011, 8 (10), 1247-1258).

Фармацевтические составы на основе соединения формулы I, описанного выше, в целях удобства можно вводить в стандартной лекарственной форме, и их можно получать посредством любого из способов, хорошо известных в области фармацевтики, например, как описано в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985).

Фармацевтические составы, подходящие для перорального введения, могут содержать один или несколько физиологически совместимых носителей и/или вспомогательных веществ и могут находиться в твердой или жидкой форме. Таблетки и капсулы можно получать с применением связывающих средств, наполнителей, смазывающих средств и/или поверхностно-активных веществ, таких как лаурилсульфат натрия. Жидкие композиции могут содержать традиционные добавки, такие как суспендирующие средства, эмульгирующие средства и/или консерванты. Жидкие композиции могут быть инкапсулированы, например, в желатин, с получением стандартной лекарственной формы. Твердые лекарственные формы для перорального введения предусматривают таблетки, двустворчатые капсулы с твердой оболочкой и мягкие эластичные желатиновые (SEG) капсулы. Такие двустворчатые капсулы с твердой оболочкой можно получать, например, посредством заполнения соединением формулы (I) желатиновой или гидроксипропилметилцеллюлозной (HPMC) оболочки.

Состав сухой оболочки, как правило, содержит желатин в концентрации от приблизительно 40% до 60% вес/вес, смягчитель в концентрации от приблизительно 20% до 30% (такой как глицерин, сорбит или пропиленгликоль) и воду в концентрации от приблизительно 30% до 40%. Также могут присутствовать другие материалы, такие как консерванты, красители, замутняющие средства и ароматизаторы. Материал для наполнения жидкостью содержит твердое лекарственное средство, которое было растворено, солюбилизировано или диспергировано (с помощью суспендирующих средств, таких как пчелиный воск, гидрогенизированное касторовое масло или полиэтиленгликоль 4000), или жидкое лекарственное средство в средах-носителях или комбинациях сред-носителей, таких как минеральное масло, растительные масла, триглицериды, гликоли, полиолы и поверхностно-активные средства.

Подходящие суточные дозы соединений формулы I или их фармацевтически приемлемой соли при осуществлении терапевтического лечения людей составляют приблизительно 0,0001-100 мг/кг веса тела.

Предпочтительными являются составы для перорального введения, в частности таблетки или капсулы, которые могут быть составлены посредством способов, известных специалистам в данной области техники, с обеспечением доз активного соединения в диапазоне от 0,1 мг до 1000 мг.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма формы B 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида.

На фиг. 2 показана кривая DSC для формы B 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида.

На фиг. 3 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма формы D 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида.

На фиг. 4 показана структура монокристалла формы D 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (ORTEP50).

На фиг. 5 показана порошковая рентгеновская дифрактограмма соли MSA формы C 6-фтор-5-[4-[(5фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида.

На фиг. 6 показана кривая DSC для соли MSA формы C 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил] -Ы-метилпиридин-2-карбоксамида.

Примеры

Далее соединения согласно настоящей заявке будут дополнительно пояснены с помощью ссылки на следующие неограничивающие примеры.

Общие экспериментальные условия

Спектры 1H ЯМР получали с применением спектрометра Bruker при 300 МГц, 400 МГц или 500 МГц при 27°C, если не указано иное; химические сдвиги выражены в частях на миллион (ppm, δединицах) и относительно остаточного моно-¹Н изотополога растворителя (CHCl₃: 7,24 ppm; CHDCl₂: 5,32 ppm; CD₃S(=O)CD2H: 2,49 ppm). Константы взаимодействия приведены в герцах (Гц). Паттерны разделения описывают наблюдаемые мультиплетности и обозначены как s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), m (мультиплет) и br s (широкий синглет). LC-MS осуществляли с применением системы Waters для UPLC, оснащенной масс-спектрометром Waters SQD, или системы Shimadzu LC-20AD LC-20XR LC-30AD с масс-спектрометром Shimadzu 2020. Указанные молекулярные ионы соответствуют [M+H]+, если не указано иное; для молекул с дифрактограммами множественных изотопов (Br, Cl и т. д.) указанное значение является значением, полученным для изотопа с наименьшей массой, если не указано

- 7 048005 иное.

Флэш-хроматографию проводили с применением прямофазной флэш-хроматографии на системе для очистки SP1™ от Biotage™, CombiFlash®Rf от ISCO или на системе Gilson от Thermo Fisher с применением картриджей с силикагелем для нормальной фазы FLASH+™ (40 М, 25 М или 12 М) или SNAP™ KP-Sil (340, 100, 50 или 10), колонок Flash silica-CS от Agela, с применением флэш-колонок С18 или стандартной флэш-хроматографии. В целом, все используемые растворители были коммерчески доступными и характеризовались аналитической степенью чистоты. В реакциях обычно использовали безводные растворители. Фазовые сепараторы, используемые в примерах, представляют собой колонки для фазового разделения ISOLUTE®. Промежуточные соединения и примеры, названные ниже, были названы с применением ACD/Name 12.01 от Advanced Chemistry Development, Inc. (ACD/Labs). Исходные материалы получали из коммерческих источников или получали посредством путей, указанных в источниках литературы.

Анализ посредством порошковой рентгеновской дифракции (XRPD)

XRPD-анализ проводили с применением дифрактометра Bruker D8, который является коммерчески доступным от Bruker AXS Inc™ (Мэдисон, Висконсин). Спектры XRPD получали посредством установки образца (примерно 10 мг) материала для анализа на пластинчатый фиксатор из монокристалла кремния (например, кремниевый держатель образцов для рентгеновской дифракции с нулевым фоновым значением Bruker) и распределения образца в виде тонкого слоя с помощью предметного стекла. Образец вращали со скоростью 30 оборотов в минуту (для улучшения статистики подсчета) и облучали рентгеновским излучением, генерируемым медной длинной острофокусной трубкой, эксплуатируемой при 40 кВ и 40 мА с длиной волны 1,5406 ангстрема (т. е. приблизительно 1,54 ангстрема). Образец экспонировали в течение 1 секунды с приращением в 0,02 градуса угла 2-тета (режим непрерывного сканирования) в диапазоне от 5 градусов до 40 градусов угла 2-тета в режиме тета-тета. Время анализа составляло приблизительно 15 мин для D8.

Значения угла 2θ при XRPD могут варьироваться в приемлемом диапазоне, например, в диапазоне ± 0,2°, и такие значения интенсивности XRPD могут варьироваться при измерении по сути той же кристаллической формы по целому ряду причин, включая, например, предпочтительную ориентацию. Принципы XRPD описаны в публикациях, таких как, например, Giacovazzo, C. et al. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; and Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York.

DSC-анализ

DSC-анализ проводили на образцах, полученных согласно стандартным способам с применением DSC-калориметра Q SERIES™ Q1000, доступного от ТА INSTRUMENTS® (Нью-Касл, Делавэр). Образец (примерно 2 мг) взвешивали в алюминиевом тигле для образцов и переносили в устройство для DSC. Устройство продували азотом при 50 мл/мин и данные собирали в диапазоне от 22°C до 300°C с применением скорости динамического нагревания, составляющей Ю^/минута. Температурные данные анализировали с применением стандартного программного обеспечения, например, Universal V.4.5A от TA INSTRUMENTS®.

Используются следующие сокращения: AcOH означает уксусную кислоту; водн. означает водный; BAST означает трифторид бис(2-метоксиэтил)аминосеры; Boc₂O означает ди-трет-бутилдикарбонат; Boc означает трет-бутилоксикарбонил; CDCl₃ означает дейтерированный хлороформ; CF₃OD означает дейтерированный метанол; CH3NO2 означает нитрометан; DAST означает трифторид диэтиламиносеры; DCE означает 1,2-дихлорэтан; DCM означает дихлорметан; DDQ означает 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4бензохинон; DEA означает диэтиламин; DEAD означает диэтилазодикарбоксилат; перйодинан ДессаМартина означает 1,1,1-трис(ацетилокси)-1,1 -дигидро-1,2-бензйодоксол-3-(Ш)-он; DIPEA означает N,Nдиизопропилэтиламин; DMAP означает 2,6-диметиламинопиридин; DMF означает N,Nдиметилформамид; DMSO означает диметилсульфоксид; DMSO-d₆ означает дейтерированный диметилсульфоксид; DPPA означает дифенилфосфоразидат; dppf означает 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен; DIAD означает диизопропил-^-диазенИД-дикарбоксилат; DSC означает дифференциальную сканирующую калориметрию; DTAD означает ди-трет-бутил-^-диазенИД-дикарбоксилат; ее означает энантиомерный избыток; экв. означает эквивалент; ESI или ES означает ионизацию посредством электрораспыления; Et₂O означает диэтиловый эфир; EtOAc или EA означает этилацетат; EtOH означает этанол; FA означает муравьиную кислоту; катализатор Граббса означает дихлорид (1,3-димеситилимидазолин-2илиден)(трициклогексилфосфин)рутения; ч означает час(часы); HATU означает гексафторфосфат (диметиламино^^^диметил^-оксидо-Ш-ДД^триазоло^Д-ЭДпиридинил^етаниминия; HCl означает хлористоводородную кислоту; H2O2 означает пероксид водорода; HP означает высокое давление; IPA означает изопропиловый спирт; KF означает фторид калия; LC означает жидкостную хроматографию; LiClO4 означает перхлорат лития; ммоль означает миллимоль; mCPBA означает мета-хлорпероксибензойную кислоту; MeOH означает метанол; мин означает минуту (минуты); MeCN, или CH₃CN, или ACN означает ацетонитрил; MeNO2 означает нитрометан; MS означает масс-спектрометрию; NBS означает N- 8 048005 бромсукцинимид; NH4C1 означает хлорид аммония; NMP означает №метил-2-пирролидон; ЯМР означает ядерный магнитный резонанс; Pd/C означает палладий на угле; Pd₂dba3 означает трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0); PdCl₂(dppf) означает дихлорид 1,1'-бис(ди-третбутилфосфино)ферроценпалладия; PE означает петролейный эфир; PPh3 означает трифенилфосфин; к. т. означает комнатную температуру; Rt или RT означает время удерживания; Ruphos Pd G3 означает метансульфонат (2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропокси-1,1'-бифенил)[2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палла дия(П); Pd-PEPPSI™-IPent означает дихлор[1,3-бис(2,6-ди-3-пентилфенил)имидазол-2-илиден](3-хлор пиридил)-палладий(П), [1,3-бис(2,6-ди-3-пентилфенил)имидазол-2-илиден](3-хлорпиридил)-дихлорпал ладий(П), дихлорид[1,3-бис(2,6-ди-3-пентилфенил)имидазол-2-илиден](3-хлорпиридил)палладия(П);

Xphos Pd G2 означает хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1'-бифенил)[2-(2'-амино1,1'-бифенил)]палладий(П), X-Phos означает хлорид аминобифенилпалладия; CataCXium A-Pd-G2 означает хлор[(ди(1-адамантил)-^бутилфосфин)-2-(2-аминобифенил)]палладий(П); насыщ. означает насыщенный; SFC означает сверхкритическую флюидную хроматографию; T3P означает 2,4,6-трипропил1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфинан-2,4,6-триоксид; PPh₃O означает оксид трифенилфосфина; TBTU означает тетрафторборат 2-(Ш-бензо^][1,2,3]триазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилизоурония; TFA означает трифторуксусную кислоту; THF означает тетрагидрофуран; TLC означает тонкослойную хроматографию; TMS означает триметилсилил; Xantphos означает 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен; CBr₄означает тетрабромид углерода; HBr означает бромистоводородную кислоту; Cs₂CO₃ означает карбонат цезия; MgSO₄ означает сульфат магния; NaHCO₃ означает бикарбонат натрия; DDQ означает 2,3-дихлор5,6-дициано-1,4-бензохинон; SOCl₂ означает тионилхлорид; DIBAL-H означает гидрид диизобутилалюминия; NH4HCO3 означает бикарбонат аммония; BINAP означает 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'бинафтил; SM означает исходный материал; CH₂Cl₂ означает дихлорметан; Et₃N означает триэтиламин; HCO2H означает муравьиную кислоту; LCMS означает жидкостную хроматографию с массспектрометрией; N2 означает молекулярный азот; Na2SO4 означает сульфат натрия; NH4CO3 означает карбонат аммония; УФ означает ультрафиолет; XPhos Pd G2 означает хлор(2-дициклогексилфосфино2',4',6'-триизопропил-1,Г-бифенил)[2-(2'-амино-1,Г-бифенил)]палладий(П); Pd(OAc)₂ означает ацетат палладия(П), ppt означает осадок.

Получение иллюстративных соединений

Промежуточное соединение 1

Промежуточное соединение 2

Промежуточное соединение 3

Промежуточное соединение 4

Промежуточное соединение 5

Промежуточное соединение 6

Промежуточное соединение 7

Промежуточное соединение 8

Иллюстративное соединение 1

Промежуточное соединение 2. 1-Бром-4-фтор-2-метил-3-нитробензол

К раствору 1-фтор-3-метил-2-нитробензола (10,7 г, 68,98 ммоль) (промежуточного соединения 1) в TFA (50 мл) медленно добавляли конц. H₂SO₄ (20 мл) при 0°C с последующим добавлением порциями NBS (13,50 г, 75,87 ммоль). После добавления смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Полученную смесь выливали на лед и осадок, который образовался, собирали посредством фильтрации, промывали водой и высушивали под вакуумом с получением 1-бром-4-фтор-2-метил-3нитробензола (промежуточного соединения 2) в виде белого твердого вещества (14,80 г, 92%). ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 2,43 (3H, s), 7,03 (1H, t), 7,68 (1H, dd).

Промежуточное соединение 3. 2-(4-Бром-3-метил-2-нитроанилино)пропановая кислота

Смесь 1-бром-4-фтор-2-метил-3-нитробензола (13,8 г, 58,97 ммоль) (промежуточного соединения 2), аланина (6,30 г, 70,76 ммоль) и карбоната калия (24,45 г, 176,90 ммоль) в DMF (15 мл) перемешивали при 100°C в течение 5 ч, затем температуру повышали до 110°C и перемешивали в течение 5 ч. Смесь выливали на лед, медленно гасили 1М водн. раствором HCl (приблизительно 300 мл) при 0°C с получением желтой суспензии. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой и высушивали в вакуумной печи в течение 2 дней при 50°C с получением 2-(4-бром-3-метил-2нитроанилино)пропановой кислоты (14,03 г, 78%) (промежуточного соединения 3) в виде желтого твердого вещества (присутствуют некоторые примеси). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,39 (3H, d), 2,28 (3H, s), 4,20 (1H, quin), 6,12 (1H, br d), 6,68 (1H, d), 7,58 (1H, d), 12,98 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=303.

Промежуточное соединение 4. Метил-2-(4-бром-3-метил-2-нитроанилино)пропаноат

К раствору 2-(4-бром-3-метил-2-нитроанилино)пропановой кислоты (14,9 г, 49,16 ммоль) (промежуточного соединения 3) в MeOH (150 мл) по каплям добавляли тионилхлорид (10,76 мл, 147,47 ммоль) при 0°C и смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. Результат LCMS указывал на полное превращение. Реакционную смесь медленно гасили водн. насыщ. раствором NaHCO₃ при 0°C (приблизительно 300

- 9 048005 мл) с получением оранжевой суспензии. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой и высушивали с получением неочищенного продукта (14,6 г). Твердое вещество очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-25% этилацетата в гексанах) с получением метил-2-(4бром-3-метил-2-нитроанилино)пропаноата (промежуточного соединения 4) в виде ярко-оранжевого твердого вещества (12,74 г, 82%). 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,52 (3H, d), 2,43 (3H, s), 3,76 (3H, s), 4,14 (1H, quin), 5,83 (1H, br d), 6,45 (1H, d), 7,48 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=317.

Промежуточное соединение 5. 7-Бром-3,8-диметил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-он

К перемешиваемой смеси метил-2-(4-бром-3-метил-2-нитроанилино)пропаноата (11,6 г, 36,58 ммоль) (промежуточного соединения 4), цинка (23,91 г, 365,77 ммоль) и хлорида аммония (19,56 г, 365,77 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляли небольшой кусок льда при 0°C (экзотермическая реакция). Затем реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°C (ледяная баня). Добавляли воду (2 мл) и полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 15 мин. Ярко-оранжевое окрашивание исчезало. Смесь фильтровали через бумажный фильтр, промывали метанолом и фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли этилацетатом и промывали водой с последующим промыванием солевым раствором. Органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением смеси метил-2-(2-амино-4-бром-3-метиланилино)пропаноата и 7-бром-3,8-диметил-3,4дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (9,8 г).

К раствору вышеуказанного твердого вещества в MeOH (100 мл) добавляли 2 мл 4 М раствора HCl в диоксанах при к. т. и смесь перемешивали при к. т. в течение 10 мин. Добавляли еще 100 мл метанола (с получением свободной суспензии) и полученную суспензию перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Смесь разбавляли эфиром (приблизительно 200 мл), твердое вещество собирали посредством фильтрации и промывали эфиром. Фильтрат концентрировали до твердого осадка и твердое вещество собирали посредством фильтрации. Данную процедуру повторяли несколько раз с получением первой порции продукта массой 7,2 г. Фильтрат концентрировали и очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах), и фракцию продукта концентрировали, и полученный материал объединяли с вышеуказанным материалом с получением 7-бром-3,8-диметил-3,4-дигидро-Шхиноксалин-2-она (9,10 г, 98%) (промежуточного соединения 5) в виде грязно-белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,23 (3H, d), 2,24 (3H, s), 3,68 (1H, q), 3,75 (br, 1H), (6,54 (1H, d), 7,00 (1H, d), 9,77 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=255.

Промежуточное соединение 6. 7-Бром-3,8-диметил-Ш-хиноксалин-2-он

DDQ (8,91 г, 39,24 ммоль) добавляли к суспензии 7-бром-3,8-диметил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин2-она (9,1 г, 35,67 ммоль) (промежуточного соединения 5) в CH₂Cl₂ (400 мл) при комнатной температуре и смесь перемешивали в течение ночи. Результат LCMS указывал на чистое превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении, добавляли насыщ. раствор NaHCO₃ (приблизительно 300 мл) и желтую суспензию перемешивали при к. т. в течение 4 ч. Твердое вещество собирали посредством фильтрации и промывали водой. Твердое вещество суспендировали в насыщ. растворе NaHCO3 (100 мл) и перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Твердое вещество фильтровали, промывали водой, затем эфиром и высушивали с получением 7-бром-3,8-диметил-1H-хиноксалин-2-она (7,29 г, 81%) (промежуточного соединения 6) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,40 (3H, s), 2,50 (3H, s) (перекрывался с пиком DMSO-d6), 7,32 - 7,65 (2H, m), 11,76 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=253.

Промежуточное соединение 7. 7-(Гuдроксиметил)-3,8-диметил-1H-хиноксалин-2-он

Смесь (трибутилстаннил)метанола (1142 мг, 3,56 ммоль), 7-бром-3,8-диметил-1H-хиноксалин-2-она (600 мг, 2,37 ммоль) (промежуточного соединения 6) и Xphos Pd G2 (280 мг, 0,36 ммоль) в 1,4-диоксане (40 мл) перемешивали при 80°C в течение 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-15% метанола в DCM) с получением 7(гuдроксиметил)-3,8-диметил-1H-хиноксалин-2-она (225 мг, 46%) (промежуточного соединения 7) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,31 (3H, s), 2,40 (3H, s), 4,58 (2H, d), 5,22 (1H, t), 7,33 (1H, d), 7,52 (1H, d), 11,53 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=205.

Промежуточное соединение 8. 7-(Бромметил)-3,8-диметил-1H-хиноксалин-2-он

7-(Гuдроксиметил)-3,8-диметил-1H-хиноксалин-2-он (223 мг, 1,09 ммоль) (промежуточное соединение 7) в HBr (15 мл, 132,59 ммоль) (48 вес.% в воде) перемешивали при 80°C в течение 3,5 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении, к остатку добавляли диэтиловый эфир, смесь подвергали воздействию ультразвука и твердое вещество собирали с получением 7-(бромметил)-3,8-диметил-Шхиноксалин-2-она (408 мг, 107%) (промежуточного соединения 8) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,36 - 2,45 (6H, m), 4,83 (2H, s), 7,34 (1H, d), 7,53 (1H, d), 11,63 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=267, 269.

Пример 1. 5-[4-[(2,5-Диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метил пиридин-2-карбоксамид

К суспензии 7-(бромметил)-3,8-диметил-Ш-хиноксалин-2-она (37 мг, 0,10 ммоль) (промежуточного соединения 8) и HBr добавляли ACN (5 мл), 6-фтор-Ы-метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (31,5 мг, 0,10 ммоль) (промежуточное соединение 32) и DIPEA (79 мкл, 0,45 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 1 ч с получением светло-желтой суспензии. Суспензию охлаждали до к.

- 10 048005

т., добавляли 1 каплю воды, твердое вещество собирали посредством фильтрации, три раза промывали ацетонитрилом и высушивали с получением 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-6-фтор-№метилпиридин-2-карбоксамида (0,016 г, 33%) (иллюстративного соединения 1) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,07 (3H, br s), 2,42 (3H, br d), 2,56 (4H, br s), 2,76 (3H, br s), 3,14 (4H, br s), 3,61 (2H, br s), 7,23 (1H, br d), 7,42 - 7,67 (2H, m), 7,83 (1H, br d), 8,38 (1H, br s), 11,13 - 11,97 (1H, m); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=425.

Пример 2. 5-[4-[(2,5 - Диметил-3 -оксо-4H-хиноксалин-6 -ил)метил] пиперазин-1 -ил] -N-метилпиридин2-карбоксамид

К суспензии 7-(бромметил)-3,8-диметилхиноксалин-2(Ш)-она, HBr (240 мг, 0,69 ммоль) (промежуточного соединения 8), №метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (202 мг, 0,69 ммоль) (промежуточного соединения 31) в ацетонитриле (13 мл) добавляли DIPEA (0,723 мл, 4,14 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 3 ч. Смесь концентрировали и очищали с применением обращенной фазы (колонка С18, элюировали смесью 0-100% ACN/вода (0,2% раствор гидроксида аммония)) с получением продукта в виде коричневого твердого вещества. Твердое вещество суспендировали в смеси DCM и MeOH (2:1), концентрировали с удалением DCM и твердое вещество фильтровали и промывали метанолом. Твердое вещество суспендировали в ACN (3 мл), добавляли 0,8 мл 1 М раствора HCl в воде, разбавляли водой (приблизительно 3 мл) и лиофилизировали до сухого состояния с получением соли HCl продукта, представляющего собой 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамид (0,033 г, 11%) (иллюстративное соединение 2). 1HNMR (500 МГц, DMSO-d₆) 2,45 (3H, s), 2,54 (3H, s), 2,81 (3H, br d), 3,24 - 3,56 (6H, m), 3,88 - 4,02 (2H, m), 4,54 (2H, br s), 7,48 - 7,71 (3H, m), 7,97 (1H, br d), 8,33 (1H, br d), 8,59 (1H, br s), 11,28 (1H, br s), 11,48 - 11,95 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=407.

Промежуточное Иллюстративное соединение 7 соединение 3

Пример 3. 6-Хлор-5 -[4-[(2,5 -диметил-3 -оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1 -ил] -N-метил пиридин-2-карбоксамид

HBr в AcOH (2 мл, 0,18 ммоль) (33 вес.%) добавляли к раствору 7-(гидроксиметил)-3,8-диметил-Шхиноксалин-2-она (36 мг, 0,18 ммоль) (промежуточного соединения 7) в NMP (2 мл). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (0,25 мл, 1,43 ммоль) добавляли к раствору 6-хлор-Ы-метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида (48 мг, 0,19 ммоль) (промежуточного соединения 30) в NMP (2 мл). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 18 часов. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: YMCActus Triart С18, 30 х250,5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH3H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 41 В до 61 В за 7 мин; 254; 220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (33,0 мг, 42%) (иллюстративного соединения 3) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,41 (3H, s), 2,43 (3H, s), 2,54 - 2,62 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,05 - 3,11 (4H, m), 3,62 (2H, s), 7,24 (1H, d), 7,51 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,92 (1H, d), 8,41 - 8,45 (1H, m), 11,56 (1H, s); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=441.

соединение 4

Пример 4. 5-[4-[(2,5 - Диметил-3 -оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1 -ил] -^6-диметилпири дин-2-карбоксамид

HBr в AcOH (2 мл, 12,15 ммоль) (33 вес.%) добавляли к раствору 7-(гидроксиметил)-3,8-диметилШ-хиноксалин-2-она (43 мг, 0,21 ммоль) (промежуточного соединения 7) в NMP (2 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 1 часа. Растворитель удаляли при пониженном давлении. К раствору полученного твердого вещества в NMP (3 мл) добавляли DIPEA (0,25 мл, 1,43 ммоль) и N,6диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид (42 мг, 0,18 ммоль) (промежуточное соединение 33). Получен

- 11 048005 ную смесь перемешивали при 100°C в течение 18 часов. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: YMC-Actus Triart С18, 30x250,5 мкм, с применением воды в ацетонитриле (0,05% NH4OH). Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2карбоксамида (иллюстративного соединения 4) (18,40 мг, 24%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,40 (3H, s), 2,43 (3H, s), 2,48 (3H, s), 2,55 - 2,63 (4H, m), 2,79 (3H, d), 2,87 - 2,94 (4H, m), 3,62 (2H, s), 7,24 (1H, d), 7,46 (1H, d), 7,51 (1H, d), 7,78 (1H, d), 8,39 - 8,44 (1H, m), 11,56 (1H, s); масса/заряд (eS⁺) [M+H]⁺=421.

Промежуточное соединение 10. Метил-5-бром-6-фторпиридин-2-карбоксилат

В сухую колбу загружали метил-5-бромпиколинат (промежуточное соединение 9) (24 г, 111,09 ммоль) в ацетонитриле (300 мл), добавляли фторид серебра(П) (50 г, 342,78 ммоль), смесь перемешивали при к. т. в течение 1 дня в атмосфере N₂. Результат LCMS указывал на приблизительно 70% превращение. Добавляли другую партию AgF₂ (16 г) и полученную смесь продолжали перемешивать при к. т. в течение ночи. Смесь фильтровали через целит, промывали ацетонитрилом с последующим промыванием с помощью DCM и фильтрат концентрировали с получением светло-коричневого твердого вещества. Остаток разделяли между DCM и насыщ. раствором NH₄Cl, в результате чего получали белую суспензию. Твердое вещество отфильтровывали и удаляли. Фильтрат переносили в делительную воронку, органический слой отделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (150 млх3). Органические вещества объединяли, высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали до осаждения твердого вещества. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали эфиром, высушивали с получением хлопьевидного грязно-белого твердого вещества. Объединенный фильтрат снова концентрировали и твердое вещество собирали посредством фильтрации с получением 19,96 г объединенного продукта. Остальную часть фильтрата концентрировали и очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-25% этилацетата в гексанах) с получением второй порции требуемого продукта в виде белого хлопьевидного твердого вещества массой 3,5 г. Весь материал объединяли с получением метил-5-бром-6фторпиридин-2-карбоксилата (23,46 г, 90%) (промежуточного соединения 10). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSOd6) 3,89 (3H, s), 7,93 (1H, d), 8,51 (1H, t); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=234.

Промежуточное соединение 11. трет-Бутил-4-(2-фтор-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1карбоксилат

Смесь трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (28,0 г, 150,37 ммоль), метил-5-бром-6-фторпиридин-2карбоксилата (промежуточного соединения 10) (23,46 г, 100,25 ммоль), RuPhos Pd G3 (5,45 г, 6,52 ммоль) и Cs₂CO₃ (82 г, 250,61 ммоль) в 1,4-диоксане (400 мл) перемешивали при 80°C в течение ночи в атмосфере N₂. Реакционную смесь разбавляли водой (250 мл) и экстрагировали этилацетатом (250 мл). Органический слой промывали солевым раствором, водный слой экстрагировали этилацетатом (100 млх1), органические вещества высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали, остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах) с получением продукта в виде желтого твердого вещества, твердое вещество подвергали перекристаллизации из смеси этилацетат/гексаны, фильтровали, промывали гексанами, высушивали с получением продукта в виде кристаллического белого твердого вещества (24,8 г). Фильтрат концентрировали и повторно очищали на колонке с силикагелем с получением большего количества продукта массой 1,9 г. Общий выход трет-бутил-4-(2фтор-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 11) (26,7 г, 78%). 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,51 (9H, s), 3,12 - 3,28 (4H, m), 3,48 - 3,67 (4H, m), 3,98 (3H, s), 7,27 (1H, d), 7,99 (1H, dd); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=340.

Промежуточное соединение 12. Метил-6-фтор-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксилат

К смеси трет-бутил-4-(2-фтор-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилата (1,9 г, 5,60 ммоль) (промежуточного соединения 11) в MeOH (10 мл) добавляли 4 М раствор HCl в диоксане (10 мл, 40,00 ммоль) при к. т. и полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Смесь разбавляли эфиром, твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали эфиром и высушивали под вакуумом с получением метил-6-фтор-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксилата (1,360 г, 78%) (промежуточного соединения 12) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 3,24 (4H, br s), 3,46

- 12 048005 (4H, br s), 3,84 (3H, s), 7,65 (1H, br t), 7,94 (1H, br d), 9,43 (2H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=240.

Промежуточное соединение 13. Метил-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксαлин-6-ил)метил]пи перазин-1 -ил] -6-фторпиридин-2-карбоксилат

7-(Гидроксиметил)-3,8-диметилхиноксалин-2(Ш)-он (223 мг, 1,09 ммоль) (промежуточное соединение 7) в HBr (15 мл, 132,59 ммоль) (48 вес % в воде) перемешивали при 80°C в течение 3,5 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении, к остатку добавляли DCM и концентрировали с получением 7(бромметил)-3,8-диметилхиноксалин-2(Ш)-она в виде желтого твердого вещества.

К раствору вышеуказанного твердого вещества в ацетонитриле (20 мл) добавляли метил-6-фтор-5пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксилат, 2HCl (260 мг, 0,83 ммоль) (промежуточное соединение 12) и DIPEA (1,907 мл, 10,92 ммоль) при к. т. и реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч. Смесь охлаждали до к. т., добавляли 0,5 мл воды и твердое вещество собирали посредством фильтрации и промывали ацетонитрилом. Твердое вещество высушивали с получением грязно-белого твердого вещества в виде метил-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фторпиридин-2карбоксилата (0,371 г, 80%) (промежуточного соединения 13). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,42 (6H, m), 2,52 - 2,59 (4H, m), 3,20 (4H, br d), 3,61 (2H, s), 3,82 (3H, s), 7,23 (1H, d), 7,41 - 7,59 (2H, m), 7,91 (1H, d), 11,55 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=426.

Пример 5. 5-[4-[(2,5-Диметил-3-оксо-4H-хиноксaлин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фторпиридин2-карбоксамид

В закрытый флакон объемом 40 мл загружали метил-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фторпиридин-2-карбоксилат (360 мг, 0,85 ммоль) (промежуточное соединение 13) и аммиак (15 мл, 105,00 ммоль, 7 н. в метаноле) и смесь перемешивали при 50°C в течение ночи. Результат LCMS указывал на то, что еще оставалось некоторое количество исходного материала. Смесь концентрировали, 10 мл 7 н. раствора аммиака в метаноле добавляли к твердому веществу и смесь перемешивали при 50°C в течение 4 ч с получением белой суспензии. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали гексанами и высушивали с получением 5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фторпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 5) (340 мг, 98%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,40 (3H, s), 2,43 (3H, s), 2,56 (4H, br s), 3,14 (4H, br s), 3,61 (2H, s), 7,23 (1H, d), 7,46 (1H, br s), 7,48 - 7,58 (2H, m), 7,76 (1H, br s), 7,84 (1H, br d), 11,11 - 11,70 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=411.

Промежуточное соединение 15. трет-Бутил-4-(6-метоксикарбонил-2-метил-3-пиридил)пиперазин-1карбоксилат

Во флакон объемом 40 мл, оснащенный крышкой с перегородкой, загружали метил-5-бром-6метилпиколинат (промежуточное соединение 14) (2 г, 8,69 ммоль), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилат (3,24 г, 17,39 ммоль), Cs₂CO₃ (5,66 г, 17,39 ммоль) и Ruphos Pd G3 (0,727 г, 0,87 ммоль). Содержимое реакционного флакона извлекали под вакуумом и флакон заполняли азотом. Добавляли 1,4-диоксан (20 мл) и реакционный флакон помещали в термостат, предварительно нагретый до 80°C, и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом, органический слой промывали солевым раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах) с получением трет-бутил-4-(6-метоксикарбонил-2-метил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 15) (2,090 г, 72%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, ДИХЛОРМЕТАНД2) 1,49 (9H, s), 2,59 (3H, s), 2,88 - 3,00 (4H, m), 3,55 - 3,65 (4H, m), 3,92 (3H, s), 7,32 (1H, d), 7,92 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=336.

Промежуточное соединение 16. Метил-6-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксилат

М раствор хлороводорода в 1,4-диоксане (31,2 мл, 124,63 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору трет-бутил-4-(6-(метоксикарбонил)-2-метилпиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата (промежу

- 13 048005 точного соединения 15) (4,18 г, 12,46 ммоль) в DCM (30 мл) и полученный раствор перемешивали при к. т. в течение 18 ч. Растворитель удаляли под вакуумом, полученное твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире и твердое вещество собирали посредством фильтрации с получением метил-6-метил5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксилата (промежуточного соединения 16) (3,80 г, 99%) в виде светложелтого твердого вещества; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=236.

Промежуточное соединение 18. Метил-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилат

Трифенилфосфин (1,584 г, 6,04 ммоль) (добавляли 4,4 г, рассчитывали в пересчете на PPh₃, загрузка 1,6 ммоль/г) добавляли к перемешиваемой взвеси 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метилхиноксалин-2(Ш)она (419 мг, 2,01 ммоль) (промежуточного соединения 17) и пербромметана (1,335 г, 4,03 ммоль) в DCM (40 мл) при к. т. Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали, промывали с помощью DCM и THF и фильтрат концентрировали под вакуумом с получением 7(бромметил)-8-фтор-3-метилхиноксалин-2(1H)-она в виде светло-желтого твердого вещества.

К взвеси вышеуказанного свежеприготовленного 7-(бромметил)-8-фтор-3-метилхиноксалин-2(Ш)она в ацетонитриле (25 мл) добавляли метил-6-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксилат, 2HCl (590 мг, 1,91 ммоль) (промежуточное соединение 16) и №этил-№-изопропилпропан-2-амин (1754 мкл, 10,07 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 70°C в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до к. т., концентрировали, гасили насыщ. водным раствором NaHCO₃ и перемешивали в течение 1 ч. Твердое вещество выделяли посредством фильтрации и промывали водой. Неочищенное твердое вещество очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния с применением смеси 0-10% MeOH в DCM с получением метил-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6метилпиридин-2-карбоксилата (промежуточного соединения 18) (0,263 г, 31%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,40 - 2,49 (6H, m), 2,62 (4H, br s), 2,97 (4H, br s), 3,72 (2H, s), 3,83 (3H, s), 7,30 (1H, t), 7,44 (1H, d), 7,52 (1H, d), 7,85 (1H, d), 12,45 (1H, br s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -135,54 (1F, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=426.

Пример 6. 5-[4-[(5-Фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпири дин-2-карбоксамид

н. раствор аммиака в метаноле (16,47 мл, 115,26 ммоль) добавляли к метил-5-[4-[(5-фтор-2-метил3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилату (промежуточному соединению 18) (0,2452 г, 0,58 ммоль) в сцинтилляционном флаконе объемом 40 мл, закрывали и перемешивали при к. т. в течение 18 ч. Дополнительный 7 н. раствор NH₃ (15 мл) добавляли к реакционной смеси и перемешивали при 50°C в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, суспендируют в 5 мл MeOH. Твердое вещество отфильтровывали, промывали метанолом и высушивали с получением 5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин2-карбоксамида (иллюстративного соединения 6) (0,151 г, 64%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,42 (3H, s), 2,45 - 2,49 (3H, m), 2,52 - 2,69 (4H, m), 2,94 (4H, br s), 3,71 (2H, s), 7,29 (1H, t), 7,40 - 7,54 (3H, m), 7,77 - 7,84 (2H, m), 12,43 (1H, br s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d₆) 135,53 (1F, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=411.

соединение 19 соединение 7

Промежуточное соединение 19. Метил-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пипе разин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилат

7-(Гидроксиметил)-3,8-диметилхиноксалин-2(1H)-он (промежуточное соединение 7) (223 мг, 1,09 ммоль) в HBr (15 мл, 132,59 ммоль) (48 вес.% в воде) перемешивали при 80°C в течение 4 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении, к остатку добавляли DCM, смесь подвергали воздействию ультразвука и концентрировали с получением 7-(бромметил)-3,8-диметилхиноксалин-2(Ш)-она в виде желтого твердого вещества.

К взвеси вышеуказанного вещества в ацетонитриле (20 мл) добавляли метил-6-метил-5-пиперазин1-илпиридин-2-карбоксилат, 2HCl (промежуточное соединение 16) (337 мг, 1,09 ммоль) и DIPEA (1,907 мл, 10,92 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч с получением прозрачного раствора. Полученную смесь охлаждали до к. т., половину растворителя удаляли, добавляли 0,5 мл воды. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали ацетонитрилом и высушивали с получением желтого твердого вещества. Данное твердое вещество очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением метил-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилата (промежуточного соединения 19) (213 мг, 46%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,41 (3H, s), 2,43 (3H, s), 2,47

- 14 048005 (3H, s), 2,58 (4H, br s), 2,95 (4H, br s), 3,63 (2H, s), 3,82 (3H, s), 7,24 (1H, d), 7,43 (1H, d), 7,51 (1H, d), 7,84 (1H, d), 11,55 (1H, s). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=422.

Пример 7. 5-[4-[(2,5-Диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин2-карбоксамид

В закрытый флакон объемом 40 мл загружали метил-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилат (промежуточное соединение 19) (210 мг, 0,50 ммоль) и аммиак (15 мл, 105,00 ммоль, 7 н. в метаноле) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение ночи. Реакция не была завершена. Смесь концентрировали, 10 мл 7 н. раствора аммиака в метаноле добавляли к данному твердому веществу. Флакон закрывали крышкой и содержимое флакона перемешивали при 50°C в течение 4 ч с получением белой суспензии. Смесь охлаждали до к. т., твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали гексанами и высушивали с получением 5-[4-[(2,5диметил-3 -оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-6-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 7)(191 мг, 94%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,41 (3H, s), 2,44 (3H, s), 2,49 (3H, s), 2,58 (4H, br s), 2,92 (4H, br s), 3,63 (2H, br s), 7,24 (1H, br d), 7,42 (1H, br s), 7,46 (1H, br d), 7,51 (1H, br d), 7,79 (2H, br d), 10,53 - 11,23 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=407.

Промежуточное соединение 21. Метил-2-аминобутаноат

Взвесь 2-аминобутановой кислоты (промежуточного соединения 20) (5 г, 48,49 ммоль) в метаноле (35 мл) охлаждали на ледяной бане. Тионилхлорид (11 мл, 150,72 ммоль) по каплям добавляли к вышеуказанной смеси при 0°C. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до к. т. и перемешивали в течение ночи. Прозрачный раствор концентрировали до сухого состояния с получением остатка. Полученное твердое вещество суспендировали в эфире, фильтровали, промывали эфиром и высушивали с получением метил-2-аминобутаноата. HCl (промежуточного соединения 21) (7,35 г, 99%) в виде белого твердого вещества, представляющего собой соль HCl. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 0,92 (3H, t), 1,76 - 1,93 (2H, m), 3,75 (3H, s), 3,95 - 4,05 (1H, m), 8,53 (3H, br s).

Промежуточное соединение 23. Метил-2-(4-бром-3-хлор-2-нитроанилино)бутаноат

В колбу загружали метил-2-аминобутаноат, HCl (промежуточное соединение 21) (1,811 г, 11,79 ммоль), 1-бром-2-хлор-4-фтор-3-нитробензол (промежуточное соединение 22) (2,0 г, 7,86 ммоль) в 1,4диоксане (30 мл), добавляли DIPEA (8,24 мл, 47,16 ммоль) и смесь перемешивали при 105°C в течение 24 ч. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах) с получением метил-2-(4-бром-3-хлор-2-нитроанилино)бутаноата (промежуточного соединения 23) (2,100 г, 76%) в виде ярко-желтого масла, превратившегося в желтое твердое вещество после отстаивания. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 0,99 (3H, t), 1,78 - 1,89 (1H, m), 1,91 - 2,02 (1H, m), 3,77 (3H, s), 4,04 (1H, q), 5,63 (1H, br d), 6,55 (1H, d), 7,52 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=351.

Промежуточное соединение 24. 7-Бром-8-хлор-3-этил-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2-он

Дитионит натрия (3,05 г, 17,49 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси метил-2-(4-бром-3-хлор2-нитроанилино)бутаноата (промежуточного соединения 23) (2,05 г, 5,83 ммоль) в DMSO (50 мл) и смесь перемешивали при 120°C в течение 3 ч. Смесь гасили водой и экстрагировали этилацетатом (50 млх2). Органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали, концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (смесь 0-55% этилацетата в гексанах) с получением пика 1, соответствующего 7-бром-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 25) (0,319 г, 19%) в виде светло-желтого твердого вещества, 1H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ^) 1,31 (3H, t), 2,89 (2H, q), 7,56 - 7,67 (2H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=287, 289 и пика 2, соответствующего 7-бром-8-хлор-3-этил-3,4дигидро-Ш-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 24) (0,895 г, 53%) в виде желтого масла, которое превратилось в желтое твердое вещество при отстаивании. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,04 (3H, t), 1,75 - 1,84 (1H, m), 1,85 - 1,93 (1H, m), 3,89 (1H, dd), 6,51 (1H, d), 7,12 (1H, d), 7,82 (1H, br s). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=289, 291.

Промежуточное соединение 25. 7-Бром-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-он

DDQ (772 мг, 3,40 ммоль) добавляли к смеси 7-бром-8-хлор-3-этил-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2она (промежуточного соединения 24) (895 мг, 3,09 ммоль) в 1,4-диоксане (20 мл) при к. т. и полученную суспензию перемешивали при к. т. в течение 3 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток обрабатывали насыщ. раствором NaHCO₃, пере

- 15 048005 мешивали при к. т. в течение 2 ч. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали насыщ. раствором NaHCO3, водой и высушивали с получением 7-бром-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 25) (780 мг, 88%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ-d^ 1,31 (3H, t), 2,89 (2H, q), 7,56 - 7,67 (2H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=287, 289.

Промежуточное соединение 26. 8-Хлор-3-этил-7-винил-1H-хиноксалин-2-он

Смесь 7-бром-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 25) (1,05 г, 3,65 ммоль), трибутил(винил)станнана (1,737 г, 5,48 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (0,422 г, 0,37 ммоль) в толуоле (50 мл) перемешивали при 110°C в атмосфере N2 в течение 2 ч. Результат LCMS указывал на то, что оставалось приблизительно 44% исходного материала. Смесь продолжали перемешивать при данной температуре в течение 4,5 ч и затем при 80°C в течение ночи. Смесь концентрировали, очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах) с получением низкорастворимого требуемого продукта, представляющего собой 8-хлор-3-этил-7-винил-1H-хиноксалин-2-он (промежуточное соединение 26) (0,850 г, 99%), в виде светло-желтого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=235 (продукт был загрязнен PPh3O).

Промежуточное соединение 27. 5-Хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-карбальдегид

Тетраоксид осмия в H2O (0,568 мл, 0,07 ммоль) добавляли к раствору 8-хлор-3-этил-7-винил-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 26) (850 мг, 3,62 ммоль), 2,6-лутидина (0,844 мл, 7,24 ммоль) и перйодата натрия (3099 мг, 14,49 ммоль) в смеси THF (50 мл)/вода (10 мл)/трет-бутанол (3,46 мл, 36,22 ммоль) и перемешивали при к. т. в течение ночи с получением желтой суспензии. Реакционную смесь концентрировали, разделяли между водой, насыщ. раствором NH₄Cl и DCM и слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью DCM и объединенный органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах) с получением 5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6карбальдегида (промежуточного соединения 27) (808 мг, 94%) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,34 -1,42 (3H, m), 3,03 (2H, q), 7,88 (2H, d), 8,99 - 9,38 (1H, m), 10,54 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=237.

Промежуточное соединение 28. 8-Хлор-3-этил-7-(гидроксиметил)-1H-хиноксалин-2-он

5-Хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-карбальдегид (промежуточное соединение 27) (808 мг, 3,41 ммоль) в MeOH (30 мл) охлаждали до 0°C и борогидрид натрия (1292 мг, 3,41 ммоль) (10 вес.% на щелочном оксиде алюминия) добавляли одной порцией. Реакционную смесь продолжали перемешивать при 0°C в течение 40 мин. Результат LCMS указывал на некоторое количество оставшегося исходного материала. К данной смеси добавляли еще 213 мг NaBH₄ (10 вес.%) и перемешивание продолжали при 0°C в течение 10 мин. К смеси добавляли 1 мл воды, концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-25% метанола в DCM) с получением 8-хлор-3-этил-7-(гидроксиметил)-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 28) (625 мг, 77%) (загрязненного 26% сверхвосстановленного побочного продукта). ¹H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ-d^ 1,27 - 1,34 (3H, m), 2,91 (2H, q), 4,79 4,82 (2H, m), 7,54 (1H, d), 7,75 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=239.

Промежуточное соединение 29. 7-(Бромметил)-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-он

Тетрабромид углерода (1612 мг, 4,86 ммоль) добавляли одной порцией к раствору 8-хлор-3-этил-7(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 28) (580 мг, 2,43 ммоль) и трифенилфосфина (1275 мг, 4,86 ммоль) в CH₂Cl₂ (40 мл) при 0°C и смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах) с получением чистого 7-(бромметил)-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 29)(200 мг, 27%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H, t), 2,83 (2H, q), 4,85 (2H, s), 7,51 (1H, d), 7,71 (1H, d), 11,89 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=301,303.

Пример 8. 6-Хлор-5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метил пиридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,058 мл, 0,33 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии 7-(бромметил)-8-хлор-3этил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 29) (25 мг, 0,08 ммоль) и 6-хлор-№метил-5пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (промежуточного соединения 30) (27,2 мг, 0,08 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1,5 ч с получением суспензии. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении и направляли аналитической группе для очистки, которая после очистки получала 6-хлор-5-[4-[(5-хлор-2этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамид (иллюстративное соединение 8) (24,00 мг, 61%) в виде желтого твердого вещества. Условия очистки (ахиральной): колонка (Xbridge С18, 19 ммх100 мм, 5 мкм, подвижная фаза A: H2O с 0,2% NH4OH, pH 10, подвижная фаза B: ацетонитрил; градиент B%: 13-95% В на протяжении 8 мин; скорость потока: 20 мл/мин; концентрация: 35 мг/мл в DMSO; загрузка (мг/вводимый объем): 15; температура колонки: комнатная температура. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,23 (3H, t), 2,66 (4H, br s), 2,76 - 2,92 (5H, m), 3,13 (4H, br s), 3,77 (2H, s), 7,44 (1H, d), 7,69 (2H, dd), 7,94 (1H, d), 8,43 (1H, q), 10,75 -11,45 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=475.

- 16 048005

соединение 32 соединение 29 соединение 9

Пример 9. 5-[4-[(5-Хлор-2-этил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Ыметилпиридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,116 мл, 0,66 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии 6-фтор-\'-метил-5пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (промежуточного соединения 32) (51,6 мг, 0,17 ммоль) и 7-(бромметил)-8-хлор-3-этилхиноксалин-2(Ш)-она (промежуточного соединения 29) (50 мг, 0,17 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1,5 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением смеси продукта и PPh₃O. Материал направляли аналитической группе для очистки, которая после очистки получала 5-[4[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин-2-карбокса мид (иллюстративное соединение 9) (47,0 мг, 62%) в виде желтого твердого вещества. Условия очистки (ахиральной): колонка (Xbridge С18, 19 ммх100 мм, 5 мкм, подвижная фаза A: H₂O с 0,2% NH4OH, pH 10, подвижная фаза B: ацетонитрил; градиент B%: 13-95% В на протяжении 8 мин; скорость потока: 20 мл/мин; концентрация: 35 мг/мл в DMSO; загрузка (мг/вводимый объем): 15; температура колонки: ком натная температура.

1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,22 (3H, t), 2,63 (4H, br s), 2,76 (3H, d), 2,82 (2H, q), 3,19 (4H, br s), 3,75 (2H, s), 7,43 (1H, d), 7,52 - 7,64 (1H, m), 7,70 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,39 (1H, q), 11,17 - 11,55 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=459.

Промежуточное Промежуточное Иллюстративное соединение 31 соединение 29 соединение 10

Пример 10. 5-[4-[(5-Хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпири дин-2-карбоксамид

DIPEA (0,081 мл, 0,46 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии №метил-5-(пиперазин-1ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 31) (34,0 мг, 0,12 ммоль) и 7-(бромметил)-8-хлор3-этилхиноксалин-2(1H)-она (промежуточного соединения 29) (35 мг, 0,12 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1,5 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток направляли аналитической группе для очистки, которая после очистки получала 5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамид (иллюстративное соединение 10) (13,00 мг, 20%) в виде белого твердого вещества. Условия очистки (ахиральной): колонка (Xbridge С18, 19 ммх100 мм, 5 мкм, подвижная фаза A: H2O с 0,2% NH4OH, pH 10, подвижная фаза B: ацетонитрил; градиент B%: 13-95% В на протяжении 8 мин; скорость потока: 20 мл/мин; концентрация: 35 мг/мл в DMSO; загрузка (мг/вводимый объем): 15; температура колонки: комнатная температура. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,24 (3H, t), 2,79 (3H, d), 2,86 (2H, q), 3,22 - 3,37 (8H, m, сливался с пиком, соответствующим воде), 4,39 4,65 (2H, m), 7,46 (1H, dd), 7,57 (1H, br d), 7,79 - 7,90 (2H, m), 8,32 (1H, d), 8,43 (1H, br d), 11,87 - 12,21 (1H, m). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=441.

Промежуточное Промежуточное Иллюстративное ⁰ соединение 33 соединение 29 соединение 11

Пример 11. 5-[4-[(5-Хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпи ридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,111 мл, 0,64 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии ^6-диметил-5-пиперазин-1илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (промежуточного соединения 33) (48,9 мг, 0,16 ммоль) и 7(бромметил)-8-хлор-3-этил-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 29)(48 мг, 0,16 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч с получением суспензии. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь охлаждали до к. т., твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой и высушивали с получением 5-[4-[(5-хлор-2-этил-3оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративно

- 17 048005 го соединения 11)(42,0 мг, 58%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H,

t), 2,65 (4H, br s), 2,78 - 2,88 (5H, m), 2,95 (4H, br s), 3,38 (3H, s, перекрывался с пиком, соответствующим воде), 3,76 (2H, s), 7,47 (2H, dd), 7,71 (1H, d), 7,79 (1H, d), 8,42 (1H, br d), 11,59 - 11,99 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=455.

о. о

Q.N

o₂n

Вг ^ho-Anh₂

НО

Промежуточное соединение 36

Вг

Промежуточное соединение 37

Вг

Промежуточное соединение 38

Промежуточное соединение 34

Промежуточное соединение 35

Промежуточное соединение 39

Промежуточное соединение 32

Промежуточное соединение 40

Промежуточное соединение 41

Иллюстративное соединение 12 (или энантиомер)

Иллюстративное соединение (или энантиомер)

Промежуточное соединение 35. 1-Бром-2,4-дифтор-3-нитробензол

Смесь 1,3-дифтор-2-нитробензола (промежуточного соединения 34) (19,5 г, 122,57 ммоль) и NBS (26,2 г, 147,08 ммоль) в серной кислоте (150 мл) перемешивали при 80°C в течение ночи. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь охлаждали до к. т. и медленно выливали на лед. Данную смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл), органический слой промывали водой (50 млх2), насыщ. раствором NaHCO₃ (50 млх2), солевым раствором, высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% этилацетата в гексанах) с получением 1-бром-2,4-дифтор-3-нитробензола (промежуточного соединения 35) (26,8 г, 92%) в виде светло-желтого масла. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 7,42 - 7,73 (1H, m), 8,06 - 8,26 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=238.

Промежуточное соединение 36. Метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-3-гидроксибутаноат

DIPEA (8,56 мл, 48,99 ммоль) медленно добавляли к перемешиваемому раствору 1-бром-2,4дифтор-3-нитробензола (промежуточного соединения 35) (5,3 г, 22,27 ммоль) и метил-2-амино-3гидроксибутаноата, HCl (4,53 г, 26,72 ммоль) в 1,4-диоксане (50 мл) при к. т. и полученную смесь перемешивали при 40°C в течение 3 ч. Результат LCMS указывал на некоторое количество оставшегося исходного материала. К смеси добавляли 800 мг соли HCl сложного метилового эфира DL-треонина и затем смесь продолжали перемешивать при 40°C в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-30% этилацетата в гексанах) с получением метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-3-гидроксибутаноата (промежуточного соединения 36) (4,69 г, 60%) в виде ярко-оранжевого твердого вещества. (Результат H ЯМР указывал на наличие смеси диастереомеров). 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,30 -1,44 (3H, m), 3,81 (3H, s), 4,00 - 4,22 (1H, m), 4,22 - 4,48 (1H, m), 6,32 - 6,68 (1H, m), 7,40 -7,66 (2H, m); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=351, 353.

Промежуточное соединение 37. Метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-3-фторбутаноат

DAST (0,919 мл, 6,95 ммоль) на протяжении 10 мин медленно добавляли к смеси метил-2-(4-бром3-фтор-2-нитроанилино)-3-гидроксибутаноата (промежуточного соединения 36) (2,22 г, 6,32 ммоль) в CH₂Cl₂ (40 мл) при 0°C, смесь перемешивали при 0°C в течение 20 мин. Результаты LCMS и TLC демонстрировали оставшийся исходный материал. К смеси добавляли 0,4 мл DAST и реакционную смесь перемешивали еще 10 мин. Смесь гасили насыщ. раствором NaHCO₃ и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением желтого масла. Полученный остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-30% этилацетата в гексанах) с получением пика 2, соответствующего метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)3-фторбутаноату (1,110 г, 50%) (промежуточному соединению 37) в виде желтого масла, и пика 4, соответствующего исходному материалу, представляющему собой метил-2-((4-бром-3-фтор-2нитрофенил)амино)-3-гидроксибутаноат (0,300 г, 13%), наряду с другим побочным продуктом. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,37 - 1,51 (3H, m), 2,80 - 2,93 (0,5H, m), 3,00 (0,5H, br d), 3,75 (1,5H, s), 3,85 (1,5H, s), 4,40 - 4,56 (0,5H, m), 5,01 - 5,23 (0,5H, m), 6,43 - 6,58 (0,5H, m), 6,71 - 6,74 (0,5H, m), 7,38 - 7,69 (2H, m). масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=353.

Промежуточное соединение 38. 7-Бром-8-фтор-3-(1-фторэтил)-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2-он

К смеси метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-3-фторбутаноата (промежуточного соединения 37)(1,11 г, 3,14 ммоль), цинка (2,466 г, 37,72 ммоль) и хлорида аммония (3,36 г, 62,87 ммоль) в MeOH (20

- 18 048005 мл) добавляли воду (2 мл) и смесь перемешивали при к. т. в течение 10 мин. Оранжевое окрашивание исчезало (экзотермическая реакция), и результат LCMS демонстрировал полное превращение. Смесь фильтровали, твердое вещество промывали метанолом и фильтрат концентрировали. Полученный остаток растворяли в DCM и органический слой промывали водой, высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением неочищенного продукта. Остаток очищали на колонке с силикагелем (смесь 0-30% этилацетата в гексанах) с получением метил-2-((2-амино-4-бром-3фторфенил)амино)-3-фторбутаноата (0,533 г, 52%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Вышеуказанное желтое твердое вещество растворяли в 15 мл метанола, добавляли 0,5 1 М раствора HCl в метаноле и реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 4 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли и остаток разбавляли смесью DCM/метанол (5:1). Органический слой промывали один раз 50% раствором NaHCO3, высушивали (безводный Na₂SO₄) и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-31% этилацетата в гексанах) с получением 7-бром-8-фтор-3-(1-фторэтил)-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 38) (0,337 г, 37%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ-0₄) 1,27 - 1,46 (3H, m), 4,26 (1H, dd), 4,90 - 5,12 (1H, m), 6,50 (1H, dd), 6,97 (1H, dd). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=291, 293.

Промежуточное соединение 39. 7-Бром-8-фтор-3-(1-фторэтил)-Ш-хиноксалин-2-он

DDQ (289 мг, 1,27 ммоль) добавляли к взвеси 7-бром-8-фтор-3-(1-фторэтил)-3,4-дигидро-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 38) (337 мг, 1,16 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл) и смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток разбавляли насыщ. раствором NaHCO₃ (приблизительно 20 мл) и суспензию перемешивали при к. т. в течение 3 ч. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой и высушивали с получением 7бром-8-фтор-3-(1-фторэтил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 39) (333 мг, 100%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ-d.-i) 1,65 - 1,84 (3H, m), 5,87 - 6,18 (1H, m), 7,50 - 7,60 (1H, m), 7,61 - 7,78 (1H, m). масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=289, 291.

Промежуточное соединение 40. 8-Фтор-3-(1-фторэтил)-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-он

Смесь катализатора Pd-PEPPSI™-IPent (26 мг, 0,03 ммоль), (трибутилстаннил)метанола (1638 мг, 5,10 ммоль) и 7-бром-8-фтор-3-(1-фторэтил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 39) (590 мг, 2,04 ммоль) в 1,4-диоксане (25 мл) дегазировали, повторно заполняли N2 и смесь перемешивали при 80°C в течение 17 ч. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах (с удалением оставшегося SM) с последующим элюированием смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 8-фтор-3-(1-фторэтил)-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2она (промежуточного соединения 40) (282 мг, 57%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,58 - 1,81 (3H, m), 4,67 (2H, br d), 5,46 (1H, br t), 5,87 - 6,24 (1H, m), 7,33 - 7,48 (1H, m), 7,65 (1H, br d), 12,65 - 12,83 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=241.

Промежуточное соединение 41. 7-(Бромметил)-8-фтор-3-(1-фторэтил)-Ш-хиноксалин-2-он

Суспензию трифенилфосфина (1223 мг, 4,66 ммоль) и 8-фтор-3-(1-фторэтил)-7-(гидроксиметил)Ш-хиноксалин-2-она (280 мг, 1,17 ммоль) (промежуточного соединения 40) в CH₂Cl₂ (15 мл) охлаждали до 0°C, добавляли тетрабромид углерода (1546 мг, 4,66 ммоль), смесь немедленно становилась прозрачной и пурпурного цвета, смесь продолжали перемешивать при данной температуре в течение 10 мин, смесь превращалась в желтый раствор, контролировали посредством LCMS, результат которой указывал на полное превращение (не очень чистое), смесь концентрировали, очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением основного пика, соответствующего 7(бромметил)-8-фтор-3-(1-фторэтил)-Ш-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 41), которое было загрязнено некоторыми примесями. Концентрировали с получением 2,5 г твердого вещества (теоретическая масса составляла 353 мг, предполагали 100% выход с переносом на следующую стадию). Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=303, 305.

Пример 12 и пример 13. 6-Фтор-5-[4-[[5-фтор-2-[(^ и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил] метил] пиперазин-1 -ил] - Ы-метилпиридин-2 -карбоксамид

DIPEA (0,265 мл, 1,52 ммоль) добавляли к смеси 7-(бромметил)-8-фтор-3-(1-фторэтил)-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 41) (115 мг, 0,38 ммоль) и 6-фтор-Ы-метил-5-(пиперазин1-ил)пиколинамида, 2HCl (94 мг, 0,30 ммоль) (промежуточного соединения 32) в ацетонитриле (20 мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали, остаток растворяли в DMSO (приблизительно 4 мл) и очищали на колонке С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% АС№водя/0,1% TFA). Продукт, содержащий фракции, объединяли и лиофилизировали до сухого состояния. Материал повторно очищали с помощью Gilson (элюировали смесью 0-80% ACN/вода/0,1% TFA) с получением продукта, представляющего собой 6-фтор-5-[4-[[5-фтор-2-[(^ и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамид. Энантиомеры разделяли с помощью хиральной колонки. Условия хиральной очистки: информация о колонке: chiralpak, OD 4,6 ммх100 мм, 5 мкм, подвижная фаза A: CO2 (100%), подвижная фаза B: метанол с 0,2% NH4OH, изократический режим, 25% В на протяжении 6 мин, скорость потока: 4,0 мл/мин, разбавитель: метанол, температура колонки: комнатная температура, давле

- 19 048005 ние на выходе (SFC): N/A.

Пик 1. Белое твердое вещество разбавляли водой и ACN, добавляли 0,1 мл водн. 0,5 М раствора HCl и смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением изомера 1, представляющего собой 6-фтор5-[4-[[5-фтор-2-[(18 или 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксαлин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N-метил пиридин-2-карбоксамид, в виде соли HCl (иллюстративное соединение 12, абсолютная стереохимия не определена) (5,42 мг, 10,90 мкмоль, 3%) в виде соли HCl, в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,54 - 1,73 (3H, m), 2,70 - 2,87 (3H, m), 3,53 - 3,90 (8H, m), 4,57 (2H, br s), 5,79 -6,21 (1H, m), 7,59 - 7,81 (3H, m), 7,87 (1H, d), 8,43 (1H, br d), 11,40 - 11,85 (1H, m), 12,78 -13,14 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=461, >95% ee.

Пик 2. Белое твердое вещество разбавляли водой и ACN, добавляли 0,1 мл водн. 0,5 М раствора HCl и смесь лиофилизировали до сухого состояния с получением изомера 2, представляющего собой 6-фтор5-[4-[[5-фтор-2-[(18 или 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксαлин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N-метил пиридин-2-карбоксамид, в виде соли HCl (иллюстративное соединение 13, абсолютная стереохимия не определена). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,49 - 1,83 (3H, m), 2,77 (3H, br d), 3,46 - 3,91 (8H, m), 4,56 (2H, br s), 5,80 -6,26 (1H, m), 7,52 - 7,80 (3H, m), 7,87 (1H, br d), 8,43 (1H, br d), 11,44 - 11,82 (1H, m), 12,77 13,24 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=461, >95% ee.

HN^

Иллюстративное соединение (или энантиомер)

Пример 14 и пример 15. 5-[4-[[5-Фтор-2-[(^ и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксαлин-6ил]метил]пиперазин-1-ил]-^6-диметилпиридин-2-карбоксамид

К суспензии 7-(бромметил)-8-фтор-3-(1-фторэтил)хиноксалин-2(Ш)-она (промежуточного соединения 41) (138 мг, 0,41 ммоль) и ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (126 мг, 0,41 ммоль) (промежуточного соединения 33) в ацетонитриле (13 мл) добавляли DIPEA (429 мкл, 2,46 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 3 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Реакционную смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением рацемического продукта, представляющего собой 5[4-[[5-фтор-2-[(1S/1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксaлин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпири дин-2-карбоксамид, в виде светло-желтого твердого вещества (169 мг). Энантиомеры разделяли посредством хирального разделения. Условия хиральной очистки: информация о колонке: chiralpak, OD 21,2 ммх250мм, 5 мкм, подвижная фаза A: CO₂ (100%), подвижная фаза B: метанол с 0,2% NH4OH, изократический режим: 25% В на протяжении 12 мин, скорость потока: 70,0 мл/мин, концентрация: 8,45 мг/мл в метаноле, загрузка: 4,23 мг/вводимый объем, температура колонки: комнатная температура, давление на выходе (SFC): N/A.

После хирального разделения каждый изомер повторно очищали на колонке с обращенной фазой (элюировали смесью 0-60% ACN/вода/0,2% гидроксид аммония) с получением пика 1, соответствующего 5-[4-[[5-фтор-2-[(^ или 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксαлин-6ил]метил]пиперазин-1-ил]-^6-диметилпиридин-2-карбоксамиду, изомеру 1 (иллюстративному соединению 14, абсолютная стереохимия не определена) (30,7 мг, 0,067 ммоль, 16%), в виде белого твердого вещества, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,40 -1,70 (3H, m), 2,48 (3H, s), 2,54 - 2,69 (4H, m), 2,79 (3H, d), 2,94 (4H, br s), 3,74 (2H, s), 5,83 -6,22 (1H, m), 7,17 - 7,41 (1H, m), 7,47 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,78 (1H, d), 8,40 (1H, br d), 11,65 -12,88 (1H, m); масса/заряд (eS⁺) [M+H]⁺=457; >98% ee.

пика 2, соответствующего 5-[4-[[5-фтор-2-[(^ или 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксaлин-6ил]метил]пиперазин-1-ил]-^6-диметилпиридин-2-карбоксамиду, изомеру 2 (иллюстративному соединению 15, абсолютная стереохимия не определена) (37 мг, 0,081 ммоль, 20%), в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,68-1,88 (3H, m), 2,51 (3H, s), 2,71 (4H, br s), 2,86 - 3,12 (7H, m), 3,81 (2H, s), 5,92 - 6,29 (1H, m), 7,34 (1H, d), 7,44 (1H, t), 7,76 (1H, d), 7,95 (1H, br d), 7,99 (1H, d), 10,24 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=457; 94,55 ee.

- 20 048005

Промежуточное соединение 43. Метил-2-(4-бром-3-хлор-2-нитроанилино)пропаноат

В колбу загружали метилаланинат, HCl (промежуточное соединение 42) (1,851 г, 13,26 ммоль) и 1бром-2-хлор-4-фтор-3-нитробензол (промежуточное соединение 22) (2,25 г, 8,84 ммоль) в 1,4-диоксане (70 мл). Добавляли DIPEA (9,27 мл, 53,06 ммоль) и смесь перемешивали при 105°C в течение 24 ч с получением коричневого раствора. Результат LCMS демонстрировал завершение реакции. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-30% этилацетата в гексанах) с получением метил-2-(4-бром-3-хлор-2-нитроанилино)пропаноата (промежуточного соединения 43) (2,120 г, 71%) в виде ярко-желтого масла, превратившегося в желтое твердое вещество после отстаивания. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,52 (3H, d), 3,77 (3H, s), 6,53 (1H, d), 7,15 (1H, t), 7,53 (1H, d), 7,78 (1H, dd); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=337.

Промежуточное соединение 44. 7-Бром-8-хлор-3-метил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-он

Дитионит натрия (3,28 г, 18,84 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору метил-2-(4-бром-3хлор-2-нитроанилино)пропаноата (промежуточного соединения 43) (2,12 г, 6,28 ммоль) в DMSO (50 мл) и смесь перемешивали при 120°C в течение 5 ч. Результаты LCMS и TLC указывали на полное превращение. Смесь гасили водой и экстрагировали этилацетатом (50 млх2). Органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали, концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (смесь 0-55% этилацетата в гексанах) с получением 7-бром-8-хлор-3-метил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 45) (0,055 г, 3%), масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=273, 275, и 7-бром-8-хлор-3-метил-3,4дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 44) (0,190 г, 11%). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=275, 277.

Промежуточное соединение 45. 7-Бром-8-хлор-3-метил-1H-хиноксалин-2-он

DDQ (157 мг, 0,69 ммоль) добавляли к смеси 7-бром-8-хлор-3-метил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2она (промежуточного соединения 44) (190 мг, 0,69 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) и полученную смесь перемешивали при к. т. в течение ночи, результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали и остаток обрабатывали насыщ. раствором NaHCO₃. Смесь перемешивали при к. т. в течение 4, твердое вещество выделяли посредством фильтрации, промывали насыщ. раствором NaHCO₃ и водой. Затем твердое вещество очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 7-бром-8-хлор-3-метил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 45) (122 мг, 65%) в виде желтого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=273, 275.

Промежуточное соединение 46. 8-Хлор-3-метил-7-винил-Ш-хиноксалин-2-он

Смесь 7-бром-8-хлор-3-метил-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 45) (122 мг, 0,45 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (51,5 мг, 0,04 ммоль) и трибутил(винил)станнана (212 мг, 0,67 ммоль) в толуоле (15 мл) перемешивали при 110°C в атмосфере N₂ в течение 16 ч. Результат LCMS указывал на завершение реакции. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-16% метанола в DCM) с получением 8-хлор-3-метил-7-винил-Ш-хиноксалин-2она (промежуточного соединения 46) (98 мг, 100%) в виде коричневого твердого вещества (загрязненного PPh₃O). Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=221.

Промежуточное соединение 47. 5-Хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-карбальдегид

Тетраоксид осмия в H2O (0,1 мл, 0,01 ммоль) добавляли к раствору 8-хлор-3-метил-7-винил-Шхиноксалин-2-она (140 мг, 0,63 ммоль) (промежуточного соединения 46), 2,6-лутидина (0,148 мл, 1,27 ммоль) и перйодата натрия (543 мг, 2,54 ммоль) в смеси THF (10 мл)/вода (2 мл)/трет-бутанол (0,607 мл, 6,34 ммоль) и перемешивали при к. т. в течение ночи с получением желтой суспензии. Результаты LCMS и TLC указывали на то, что еще оставался исходный материал. К смеси добавляли смесь THF (10 мл)/вода (2,000 мл), 200 мг перйодата натрия, 0,3 мл тетраоксида осмия и смесь продолжали перемешивать при к. т. в течение 5 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Реакционную смесь разбавляли водой, добавляли насыщ. раствор NH₄Cl и экстрагировали с помощью DCM. Объединенный органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 5-хлор-2-метил-3оксо-4H-хиноксалин-6-карбальдегида (промежуточного соединения 47) (141 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества (не очень чистого, переносили на следующую стадию). Масса/заряд (ES⁺)

- 21 048005

[M+H]+=223.

Промежуточное соединение 48. 8-Хлор-7-(гидроксиметил)-3-метил-1Н-хиноксалин-2-он

Боргидрид натрия (23,96 мг, 0,63 ммоль) добавляли к охлажденному раствору 5-хлор-2-метил-3оксо-4Н-хиноксалин-6-карбальдегида (промежуточного соединения 47) (141 мг, 0,63 ммоль) в смеси MeOH (16 мл) и DCM (8,00 мл), охлаждали до 0°C и смесь продолжали перемешивать при 0°C в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. К смеси добавляли 1 мл воды, концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 40-100% этилацетата в гексанах; затем смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 8-хлор-7-(гидроксиметил)-3-метил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 48) (142 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,42 (3H, s), 4,65 (2H, br d), 5,53 (1H, br t), 7,46 (1H, br d), 7,69 (1H, br d), 11,77 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=225.

Промежуточное соединение 49. 7-(Бромметил)-8-хлор-3-метил-1H-хиноксалин-2-он

8-Хлор-7-(гидроксиметил)-3-метил-1H-хиноксалин-2-он (промежуточное соединение 48) (142 мг, 0,63 ммоль) и трифенилфосфин (332 мг, 1,26 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) охлаждали до 0°C. Пербромметан (419 мг, 1,26 ммоль) добавляли одной порцией и смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч и при к. т. в течение 2 ч. Результат LCMS указывал на отсутствие протекания реакции. К смеси добавляли вторую порцию трифенилфосфина (332 мг, 1,26 ммоль) и пербромметана (419 мг, 1,26 ммоль) при к. т. и смесь перемешивали в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах) с получением продукта, представляющего собой 7-(бромметил)-8-хлор-3-метилШ-хиноксалин-2-он, в виде желтого твердого вещества (промежуточного соединения 49) (32 мг, 18%). Посредством дополнительного элюирования смесью 20% метанола в DCM получали вторую порцию продукта массой 100 мг (55%) в виде коричневого твердого вещества (чистота 47%). Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=287, 289.

Пример 16. 5-[4-[(5-Хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпири дин-2-карбоксамид

DIPEA (0,053 мл, 0,31 ммоль) добавляли к смеси Н-метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (22,43 мг, 0,08 ммоль) (промежуточного соединения 31) и 7-(бромметил)-8-хлор-3-метил-1H-хиноксалин2-она (промежуточного соединения 49){22 мг, 0,08 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) и полученную суспензию перемешивали при 70°C в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали, остаток растворяли в DMSO и очищали на колонке С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/0,1% TFA). Фракции, содержащие чистый продукт, лиофилизировали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (20 мг, 56%). Добавляли 1 мл 2 М раствора HCl в эфире и растворитель удаляли под вакуумом с получением соответствующей соли HCl в виде желтого твердого вещества (иллюстративного соединения 16). 1H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ-d^ 2,96 - 3,03 (3H, m), 3,48 - 3,86 (6H, m), 4,04 - 4,41 (2H, m), 4,78 (2H, s), 4,86 (3H, d, сливался с пиком, соответствующим воде), 7,74 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,14 (1H, dd), 8,31 (1H, d), 8,47 (1H, d); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=427.

соединение 32 соединение 49 соединение 17

Пример 17. 5-[4-[(5-Хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Nметилпиридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,061 мл, 0,35 ммоль) добавляли к смеси 6-фтор-Ы-метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 32) (27,1 мг, 0,09 ммоль) и 7-(бромметил)-8-хлор-3-метил-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 49) (50 мг, 0,09 ммоль) (чистота около 50%) в ацетонитриле (5 мл) и полученный раствор перемешивали при 70°C в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали и остаток растворяли в DMSO и очищали на колонке С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/0,1% TFA), затем очищали второй раз на колонке с обращенной фазой С18 (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/0,1% TFA). Материал наконец очищали третий раз на колонке с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/гидроксид аммония, pH приблизительно 10) с получением 5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-№метилпиридин-2-карбоксамида (примера 17) (16,50 мг, 43%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,37 - 2,47 (3H, m), 2,63 (4H, br s), 2,76 (3H, d), 3,13 - 3,23 (4H, m), 3,74 (2H, s), 7,45 (1H, d), 7,57 (1H, dd), 7,68 (1H, d), 7,84 (1H, d), 8,39 (1H, br d), 10,71 12,11 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=445.

- 22 048005

Пример

18.

Промежуточное Промежуточное ^r соединение 49 соединение 33

соединение 18

Иллюстративное

5-[4-[(5-Хлор-2-метил-3 -оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил] -N,6 диметилпиридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,061 мл, 0,35 ммоль) добавляли к смеси ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 33) (26,7 мг, 0,09 ммоль) и 7-(бромметил)-8-хлор-3-метил-Шхиноксалин-2-она (50 мг, 0,09 ммоль) (промежуточного соединения 49, чистота приблизительно 50%) в ацетонитриле (5 мл) и полученный раствор перемешивали при 70°C в течение 1 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали, остаток растворяли в DMSO и остаток очищали на колонке С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/водa/0,1% TFA). После концентрирования фракции остаток повторно очищали на колонке С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/гидроксид аммония, pH приблизительно 10). Чистые фракции лиофилизировали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-№,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 18) (18,4 мг, 48%) в виде свободного основания. ¹H ЯМР (500 МГц, МЕТАНОЛ^) 2,53 (6H, d), 2,76 (4H, br s), 2,94 (3H, s), 3,04 (4H, br t), 3,86 (2H, s), 7,48 (1H, d), 7,51 - 7,60 (1H, m), 7,69 (1H, d), 7,86 (1H, d); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=441.

.Вг

НО

Вг но

Вг

Промежуточное соединение 53

Промежуточное соединение 36

Промежуточное соединение 50

Промежуточное соединение 52

Промежуточное соединение 51

Промежуточное соединение 55

Промежуточное соединение 33

Иллюстративное соединение 19

Промежуточное соединение 54

Промежуточное соединение

50. 7-Бром-8-фтор-3-(1 -гидроксиэтил)-3,4-дигидро-1 Н-хиноксалин-2он

Хлорид аммония (6,70 г, 125,31 ммоль) добавляли к суспензии метил-2-((4-бром-3-фтор-2нитрофенил)амино)-3-гидроксибутаноата (промежуточного соединения 36) (4,4 г, 12,53 ммоль) и цинка (8,19 г, 125,31 ммоль) в MeOH (65 мл) при 0°C. К данной смеси добавляли воду (2 мл) и смесь перемешивали при 0°C в течение 60 мин. Оранжевое окрашивание исчезало, что указывало на полное превращение, результат LCMS указывал на завершение реакции. Смесь фильтровали, промывали метанолом и фильтрат концентрировали. Остаток разбавляли смесью этилацетат/метанол (10/1), органический слой промывали водой (приблизительно 20 мл), солевым раствором, высушивали (безводный Na₂SO₄), концентрировали с получением промежуточного соединения, представляющего собой метил-2-((2-амино-4бром-3-фторфенил)амино)-3-гидроксибутаноат.

Вышеуказанное твердое вещество суспендировали в метаноле (приблизительно 30 мл), добавляли 4 М раствор HCl в диоксанах (приблизительно 1 мл) и смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах) с получением 7-бром-8-фтор-3-(1гидроксиэтил)-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 50) (3,20 г, 88%) в виде желтого твердого вещества (смесь диастереомеров). Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=289, 291.

Промежуточное соединение 51. 7-Бром-8-фтор-3-(1-гидроксиэтил)-1H-хиноксалин-2-он

DDQ (432 мг, 1,90 ммоль) добавляли к суспензии 7-бром-8-фтор-3-(1-гидроксиэтил)-3,4-дигидроЩ-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 50) (500 мг, 1,73 ммоль) в CH₂Cl₂ (30 мл) и смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. Результат LCMS указывал на чистое превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении, добавляли насыщ. раствор NaHCO₃ (приблизительно 100 мл) и смесь перемешивали при к. т. в течение 3 ч. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой и высушивали с получением 7-бром-8-фтор-3-(1-гидроксиэтил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 51) (439 мг, 88%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,39 (3H, d), 4,78 - 5,31 (2H, m), 7,39 - 7,71 (2H, m), 12,72 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=287, 289.

Промежуточное соединение 52. 3-Лцетил-7-бром-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-он

Раствор DMSO (0,651 мл, 9,17 ммоль) в DCM по каплям добавляли к перемешиваемому раствору оксалилхлорида (3,06 мл, 6,12 ммоль) (2 М раствор в DCM) в дихлорметане (20 мл) при -78°C. Раствор 7бром-8-фтор-3-(1-гидроксиэтил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 51) (439 мг, 1,53 ммоль) медленно добавляли к вышеуказанной реакционной смеси и полученную взвесь перемешивали в

- 23 048005 течение 15 мин при -78°C. По каплям добавляли триэтиламин (1,279 мл, 9,17 ммоль) и полученную взвесь перемешивали в течение еще 30 мин при 0°C. Результат LCMS указывал на образование требуе мого продукта. Добавляли воду (30 мл) и смесь экстрагировали смесью дихлорметан/MeOH (5:1) (2x50 мл). Органические фазы объединяли и высушивали над сульфатом магния. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали с помощью колонки С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/0,1% TFA) с получением 3-ацетил-7-бром-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 52) (85 мг, 19%) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,52 - 2,66 (3H, m), 7,42 - 7,76 (2H, m), 13,03 (1H, br s). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=285, 287.

Промежуточное соединение 53. 7-Бром-3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-он

DAST (0,148 мл, 1,12 ммоль) добавляли к суспензии 3-ацетил-7-бром-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 52) (80 мг, 0,28 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) при к. т. и полученную суспензию перемешивали при к. т. в течение 24 ч. Результат LCMS указывал на образование 42% продукта. Смесь продолжали перемешивать на протяжении выходных дней. К смеси добавляли воду и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 7-бром-3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 53) (65,0 мг, 75%) в виде светло-желтого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=307, 309 (материал был не очень чистый, переносили на следующую стадию).

Промежуточное соединение 54. 3-(1,1-Дифторэтил)-8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-он

Смесь (трибутилстаннил)метанола (102 мг, 0,32 ммоль), Xphos Pd G2 (24,98 мг, 0,03 ммоль) и 7бром-3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 53) (65 мг, 0,21 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) перемешивали при 80°C в течение 6 ч в атмосфере N₂. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-7(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 54) (55,0 мг, 100%) в виде коричневого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=259.

Промежуточное соединение 55. 7-(Бромметил)-3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-он

CBr₄ (129 мг, 0,39 ммоль) добавляли к смеси 3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-7-(гидроксиметил)-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 54) (67 мг, 0,26 ммоль) и трифенилфосфина (102 мг, 0,39 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) при 0°C и полученную смесь перемешивали при к. т. в течение ночи. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах) с получением 7-(бромметил)3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 55) (56,0 мг, 67%) в виде белого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=321,323.

Пример 19. 5-[4-[[2-(1,1-Дифторэтил)-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]^6-диметилпиридин-2-карбоксамид

К суспензии 7-(бромметил)-3-(1,1-дифторэтил)-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 55) (56 мг, 0,16 ммоль) и ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 33) (48,2 мг, 0,16 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) добавляли DIPEA (0,164 мл, 0,94 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1,5 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь концентрировали и остаток очищали на колонке Gilson с обращенной фазой (элюировали смесью 0-70% ACN/вода/0,1% TFA). Чистые фракции объединяли, 0,5 мл водн. 1 М раствора HCl добавляли к объединенным фракциям и лиофилизировали до сухого состояния с получением 5-[4-[[2(1,1 -дифторэтил)-5-фтор-3 -оксо-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1 -ил] -^6-диметилпиридин-2карбоксамида в виде соли HCl (иллюстративное соединение 19) (35,0 мг, 44%) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,08 (3H, br t), 2,52 (3H, s), 2,80 (3H, br d), 3,02 - 3,54 (8H, m), 4,61 (2H, br s), 7,57 (1H, br d), 7,67 - 8,04 (3H, m), 8,52 (1H, br d), 11,74 (1H, br s), 12,77 - 13,55 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=475.

соединение 17 соединение 59 соединение 20

Промежуточное соединение 56. Метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)пропаноат

DIPEA (151 мл, 867,27 ммоль) медленно добавляли к перемешиваемому раствору 1-бром-2,4дифтор-3-нитробензола (промежуточного соединения 35) (68,8 г, 289,09 ммоль) и метилаланината, HCl

- 24 048005 (40,4 г, 289,09 ммоль) в DMF (300 мл). Полученный раствор перемешивали при к. т. в течение 18 часов (полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS). Реакционную смесь концентрировали с применением системы выпаривания Rocket, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой тщательно промывали водой, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. К вышеуказанному оранжевому твердому веществу добавляли 100 мл DCM, суспензию перемешивали при к. т. в течение 30 мин и твердое вещество фильтровали с получением метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)пропаноата (24,00 г, 26%) (промежуточного соединения 56) в виде ярко-оранжевого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ДИХЛОРМЕТАН-dJ 1,52 - 1,62 (3H, m), 3,80 (3H, s), 4,28 (1H, quin), 6,49 (1H, dd), 7,19 - 7,39 (1H, m), 7,54 (1H, dd); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, ДИХЛОРМЕТАН<) -109,49 (1F, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=321, 323.

Промежуточное соединение 57. 7-Бром-8-фтор-3-метил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-он

Цинк (78 г, 1195,88 ммоль) добавляли порциями к смеси метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитро анилино)пропаноата (промежуточного соединения 56) (48 г, 149,49 ммоль) и хлорида аммония (64,0 г, 1195,88 ммоль) в MeOH (720 мл) и воде (16 мл) при 0°C (экзотермическая реакция) и смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч (полное исчезновение оранжевого окрашивания свидетельствует о завершении реакции). Твердое вещество отфильтровывали и твердый осадок на фильтре промывали 20% раствором MeOH в DCM. Фильтрат концентрировали, добавляли воду к неочищенному продукту и продукт экстрагировали этилацетатом. Органический слой высушивали и концентрировали под вакуумом с получением масла. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=291, 293.

Данный материал суспендировали в этилацетате (50 мл) и метаноле (50 мл), добавляли 2 мл 4 н. раствора HCl в диоксане и смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали с получением неочищенного продукта, представляющего собой 7-бром-8-фтор-3-метил-3,4-дигидро-Шхиноксалин-2-он (промежуточное соединение 57) (38,7 г), в виде серого твердого вещества. Неочищенный продукт (38,7 г) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки, предполагая, что выход данной реакции составляет 100%. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=259.

Промежуточное соединение 58. 7-Бром-8-фтор-3-метил-Ш-хиноксалин-2-он

DDQ (21,55 г, 94,95 ммоль) добавляли одной порцией к перемешиваемому раствору 7-бром-8-фтор3-метил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 57) (20,5 г, 79,13 ммоль) в DCM (200 мл) с получением очень плотной грязно-белой взвеси, добавляли дополнительное количество дихлорметана (800 мл). Полученную взвесь перемешивали при к. т. в течение 2 часов (полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS). Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и гасили насыщенным водн. раствором бикарбоната натрия (приблизительно 500 мл, гашение приводит к интенсивному вспениванию). Вышеуказанную взвесь перемешивали при к. т. в течение ночи и твердое вещество отфильтровывали, тщательно промывали водой и твердое вещество высушивали на фильтре в течение ночи. Данное твердое вещество промывали диэтиловым эфиром и высушивали в течение 30 мин с получением 7-бром-8-фтор-3-метил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 58) (16,28 г, 80%) в виде грязно-белого твердого вещества. ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -124,18 (1F, s); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,41 (3H, s), 7,45 - 7,54 (2H, m), 12,60 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=257.

Промежуточное соединение 17. 8-Фтор-7-(гидроксиметил)-3-метил-Ш-хиноксалин-2-он

Смесь (трибутилстаннил)метанола (15,39 г, 47,93 ммоль), 7-бром-8-фтор-3-метил-Ш-хиноксалин-2она (промежуточного соединения 58) (11,2 г, 43,57 ммоль) и Xphos Pd G2 (1,714 г, 2,18 ммоль) в 1,4диоксане (200 мл) перемешивали при 80°C в течение 7 ч. Результат LCMS указывал на полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-15% метанола в DCM). Фракции концентрировали с получением взвеси, разбавляли эфиром, твердое вещество собирали посредством фильтрации и высушивали с получением 8-фтор-7(гидроксиметил)-3-метил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 17) (8,10 г, 89%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,41 (3H, s), 4,63 (2H, br d), 5,39 (1H, t), 7,31 (1H, br t), 7,51 (1H, d), 12,41 (1H, br s). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=209.

Пример 20. 6-Фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]πиπерαзин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

Триэтилфосфан (20,90 мл, 145,06 ммоль) по каплям добавляли с помощью капельной воронки к перемешиваемой суспензии 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метил-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 17) (15,1 г, 72,53 ммоль) и 1,2-дибром-1,1,2,2-тетрахлорэтана (52,0 г, 159,56 ммоль) в DCM (400 мл) при 0°C в атмосфере азота. Смесь перемешивали при к. т. в течение 3 ч с получением светложелтой суспензии. Результат LCMS неочищенного продукта указывал на полное превращение. DCM удаляли под вакуумом; остаток суспендировали в 300 мл диэтилового эфира при к. т. и светло-желтый осадок фильтровали и промывали 200 мл эфира. Твердое вещество переносили в 300 мл воды, перемешивали при к. т. в течение 10 мин, твердое вещество собирали посредством фильтрации, тщательно промывали водой (200 мл) с удалением солей. Твердое вещество высушивали под вакуумом в течение ночи (без нагревания). Твердое вещество промывали гексанами и высушивали в вакууме в воронке объемом один бушель с получением 7-(бромметил)-8-фтор-3-метилхиноксалин-2(Ш)-она (промежуточного соединения 59) (22,76 г, 116%, вероятно, содержит некоторые неорганические соли) в виде грязно-белого

- 25 048005 твердого вещества. Использовали в интактном виде для следующей реакции. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSOde) 2,42 (3H, s), 4,65 - 4,93 (2H, m), 7,28 - 7,42 (1H, m), 7,51 (1H, d), 12,53 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=271, 273.

В колбу загружали 7-(бромметил)-8-фтор-3-метилхиноксалин-2(Ш)-он (промежуточное соединение 59) (22,76 г) и 6-фтор-№метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (промежуточное соединение 32) (24,24 г, 77,9 ммоль) в ацетонитриле (350 мл), добавляли DIPEA (38,0 мл, 217,59 ммоль) при к. т. и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 4 ч. Реакция не была завершена. К смеси добавляли 5 г KI и 2 г NaI и смесь перемешивали при 50°C в течение 20 ч. Более 540 мг (приблизительно 0,03 экв.) 6фтор-№метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 32) добавляли к смеси и перемешивание продолжали при 50°C в течение 2 ч. Твердое вещество из реакционной суспензии собирали посредством фильтрации, промывали ацетонитрилом и высушивали. Затем полученный материал суспендировали в воде (приблизительно 400 мл), получали суспензию при к. т. в течение 20 мин, фильтровали и высушивали (чистота 97%, определенная посредством LCMS). Затем твердое вещество растворяли в смеси DCM/MeOH (3/1) (приблизительно 1,5 л) с применением обратного холодильника, фильтровали через слой силикагеля, удаляли большую часть DCM до осаждения твердого вещества и смесь выдерживали при к. т. в течение 20 мин. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, и повторяли процедуру для фильтрата, и твердые вещества объединяли с получением продукта, представляющего собой 6-фтор-5-[4-[(5 -фтор-2-метил-3 -оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1 -ил] -N метилпиридин-2-карбоксамид (иллюстративное соединение 20) (26 г, 84%), в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,41 (3H, s), 2,57 - 2,69 (4H, m), 2,76 (3H, d), 3,16 (4H, br s), 3,70 (2H, s), 7,29 (1H, br t), 7,40 - 7,60 (2H, m), 7,83 (1H, d), 8,38 (1H, br d), 12,44 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=429.

Пример 21. 6-(Дифторметил)-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин1 -ил] -№метилпиридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,052 мл, 0,30 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси 7-(бромметил)-8-фтор-3метилхиноксалин-2(Ш)-она (промежуточного соединения 59)(40 мг, 0,15 ммоль) и 6-(дифторметил)-№ метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 60) (50,6 мг, 0,15 ммоль) в ацетонитриле (мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и направляли аналитической группе для очистки (условия очистки: остаток очищали с помощью колонки С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% ACN/вода/0,1% NH4OH), посредством которой получали 6-(дифторметил)-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамид (иллюстративное соединение 21) (15 мг, 22%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,37 (3H, s), 2,64 (4H, br s), 2,84 (3H, d), 3,01 (4H, br d), 3,70 (2H, s), 7,00 - 7,28 (2H, m), 7,42 (1H, br d), 7,86 (1H, d), 8,09 (1H, d), 8,39 (1H, q), 12,24 - 12,63 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=461.

Промежуточное соединение 61. Метил-6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксилат

Трифенилфосфин на полимерной подложке (1,512 г, 5,76 ммоль) (добавляли 3,4 г, рассчитывали в пересчете на PPh₃, загрузка 1,6 ммоль/г) добавляли к перемешиваемой взвеси 8-фтор-7-(гидроксиметил)3-метилхиноксалин-2(Ш)-она (промежуточного соединения 17) (400 мг, 1,92 ммоль) и пербромметана (1,274 г, 3,84 ммоль) в DCM (40 мл) при к. т. Полученную смесь перемешивали при 23°C в течение 1 ч. Реакция не была завершена. Для завершения реакции добавляли дополнительное количество PPh₃ (1 г), связанного с полимером. Реакционную смесь фильтровали, промывали с помощью DCM, THF и фильтрат концентрировали под вакуумом с получением 7-(бромметил)-8-фтор-3-метилхиноксалин-2(Ш)-она в виде светло-желтого твердого вещества.

К вышеуказанному свежеприготовленному 7-(бромметил)-8-фтор-3-метилхиноксалин-2(Ш)-ону добавляли метил-6-фтор-5-(пиперазин-1-ил)пиколинат, 2HCl (промежуточное соединение 12) (600 мг, 1,92 ммоль), ацетонитрил (25 мл) и №этил-№изопропилпропан-2-амин (1674 мкл, 9,61 ммоль) и реакци- 26 048005 онную смесь нагревали до 70°C в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до к. т., концентрировали и неочищенное твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением смеси 0-10% MeOH в DCM с получением метил-6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксилата (промежуточного соединения 61) (0,484 г, 59%) в виде грязно-белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,34 - 2,49 (3H, m), 2,52 - 2,62 (4H, m), 3,08 - 3,28 (4H, m), 3,70 (2H, s), 3,83 (3H, s), 7,29 (1H, t), 7,44 - 7,54 (2H, m), 7,91 (1H, dd), 12,45 (1H, s); 19F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -135,50 (1F, s), -70,49 (1F, s). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=430.

Пример 22. 6-Фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]пиридин-2-карбоксамид

Аммиак (7 н. раствор аммиака в MeOH) (31,3 мл, 218,90 ммоль) добавляли к метил-6-фтор-5-[4-[(5фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксилату (промежуточному соединению 61) (0,470 г, 1,09 ммоль) в сцинтилляционном флаконе объемом 40 мл, закрывали и перемешивали при к. т. в течение 18 ч. Полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS. Белое твердое вещество фильтровали с получением 103 мг чистого продукта. Фильтрат концентрировали под вакуумом, полученное грязно-белое твердое вещество суспендировали в приблизительно 5 мл метанола и фильтровали с получением дополнительного количества чистого продукта, составляющего 298 мг. Обе партии объединяли с получением 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 22) (0,401 г, 88%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,42 (3H, s), 2,59 (4H, br s), 3,09 - 3,27 (4H, m), 3,70 (2H, s), 7,29 (1H, br t), 7,46 (1H, br s), 7,49 - 7,58 (2H, m), 7,76 (1H, br s), 7,85 (1H, br d), 12,35 (1H, br s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -135,49 (1F, s), -72,40 (1F, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=415.

F

O₂N Br

nh₂ ^ογν ^0 .HCl

F

Про межуточное соединение 35 ^,0

F Вг

Промежуточное соединение 63

F

Вг

H ^FO N Br '-''Ж

h ^FO.N

Промежуточное соединение 62

Промежуточное соединение 64

он

H O.N

Br

Промежуточное соединение 65

Промежуточное соединение 66

Промежуточное соединение 62. Метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)бутаноат

DIPEA (165 мл, 942,91 ммоль) медленно добавляли к перемешиваемому раствору 1-бром-2,4дифтор-3-нитробензола (промежуточного соединения 35) (74,8 г, 314,30 ммоль) и метил-2аминобутаноата, HCl (48,3 г, 314,30 ммоль) в DMF (733 мл) и полученный раствор перемешивали при к. т. в течение 18 часов. DMF удаляли с применением испарителя Rocket, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. После концентрирования неочищенный материал очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле с градиентом элюирования 0-70% EtOAc в гексанах. Фракции продукта концентрировали при пониженном давлении с получением метил-2-(4-бром-3-фтор-2нитроанилино)бутаноата (промежуточного соединения 62) (49,4 г, 47%) в виде красного твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 0,82 - 0,98 (3H, m), 1,77 - 1,93 (2H, m), 3,70 (3H, d), 4,38 - 4,54 (1H, m), 6,77 (1H, br d), 7,28 (1H, br d), 7,64 - 7,80 (1H, t); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=335.

Промежуточное соединение 63. 7-Бром-3-этил-8-фтор-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2-он

Цинк (44,1 г, 674,07 ммоль) порциями добавляли (экзотермическая реакция) к смеси метил-2-(4бром-3-фтор-2-нитроанилино)бутаноата (промежуточного соединения 62) (50,2 г, 149,79 ммоль) и хлорида аммония (64,1 г, 1198,34 ммоль) в MeOH (468 мл). Смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Твердое вещество отфильтровывали и промывали 20% раствором MeOH в DCM. Данный материал растворяли в метаноле (120 мл) и добавляли 4 н. раствор HCl в диоксане (10 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Растворитель удаляли под вакуумом, разбавляли этилацетатом и подщелачивали насыщ. раствором NaHCO₃. Органический слой отделяли, промывали водой, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного продукта. Твердое вещество растирали в порошок со 100 мл метанола, перемешивали в течение 10 мин и светло-коричневое твердое вещество отфильтровывали с получением продукта, представляющего собой 7-бром-3-этил-8-фтор-3,4-дигидроШ-хиноксалин-2-он (промежуточное соединение 63) (39,8 г, 97%). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 0,92 (3H, t), 1,49 - 1,77 (2H, m), 3,57 - 3,87 (1H, m), 6,24 - 6,62 (2H, m), 6,99 (1H, dd), 10,44 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=273.

Промежуточное соединение 64. 7-Бром-3-этил-8-фтор-1H-хиноксалин-2-он

DDQ (29,7 г, 130,94 ммоль) одной порцией добавляли к перемешиваемому раствору 7-бром-3-этил8-фтор-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 63) (29,8 г, 109,12 ммоль) в DCM (546 мл) и полученный раствор перемешивали при к. т. в течение 2 ч. Растворитель удаляли под вакуумом и твердое вещество суспендировали со 150 мл метанола и перемешивали в течение 30 мин. Твердое

- 27 048005 вещество отфильтровывали и промывали 30 мл метанола. Твердое вещество переносили в круглодонную колбу объемом 2 л; добавляли 200 мл воды с последующим медленным добавлением 300 мл бикарбоната натрия. После завершения добавления смесь перемешивали в течение ночи при к. т. с получением светло-желтой взвеси. Перемешивание останавливали и водн. слой деконсервировали. Твердое вещество собирали посредством фильтрации и тщательно промывали водой с получением 7-бром-3-этил-8-фтор-Шхиноксалин-2-она (промежуточного соединения 64) (24,45 г, 83%) в виде твердого вещества желтого цвета. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H, t), 2,81 (2H, q), 7,27 - 7,69 (2H, m), 12,59 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=271.

Промежуточное соединение 65. 3-Этил-8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-он

Xphos Pd G2 (1,121 г, 1,43 ммоль) добавляли к перемешиваемому дегазированному раствору 7бром-3-этил-8-фтор-1Н-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 64) (7,727 г, 28,50 ммоль) и (трибутилстаннил)метанола (10,98 г, 34,20 ммоль) в 1,4-диоксане (143 мл). Полученный раствор перемешивали при 80°C в течение 6 часов. Растворитель удаляли под вакуумом, добавляли 100 мл диэтилового эфира и взвесь перемешивали в течение 30 мин. Твердое вещество отфильтровывали и промывали 50 мл диэтилового эфира с получением 3-этил-8-фтор-7-(гидроксиметил)-1Н-хиноксалин-2-она (5,88 г, 93%) (промежуточного соединения 65) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H, t), 2,82 (2H, q), 4,64 (2H, br d), 5,40 (1H, t), 7,32 (1H, br t), 7,55 (1H, d), 12,40 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=223.

Промежуточное соединение 66. 7-(Бромметил)-3-этил-8-фтор-1Н-хиноксалин-2-он

Триэтилфосфан (19,94 мл, 135,00 ммоль) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору 3этил-8-фтор-7-(гидроксиметил)-1Н-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 65) (10 г, 45,00 ммоль) и CBr₄ (49,2 г, 148,50 ммоль) в DCM (355 мл) при 0°C на протяжении периода времени, составляющего 5 минут, в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. DCM удаляли под вакуумом и остаток суспендировали в 150 мл диэтилового эфира. Белый осадок отфильтровывали и промывали 50 мл диэтилового эфира. Данное твердое вещество суспендировали с водой (200 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Твердое вещество отфильтровывали и тщательно промывали водой. Твердое вещество высушивали под вакуумом в течение ночи с получением 7-(бромметил)-3-этил-8фторхиноксалин-2(1Н)-она (промежуточного соединения 66) (11,38 г, 89%) в виде светло-коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (500 MHz, DMSO-d₆) 1,22 (3H, t), 2,83 (2H, q), 4,81 (2H, s), 7,37 (1H, br t), 7,55 (1H, d), 12,53 (1H, br s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=285.

Иллюстративное соединение 23

Пример 23. 5-[4-[(2-Этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-^6диметилпиридин-2-карбоксамид

DIPEA (20,90 мл, 119,64 ммоль) добавляли к перемешиваемой взвеси 7-(бромметил)-3-этил-8фторхиноксалин-2(1Н)-она (промежуточного соединения 66) (11,37 г, 39,88 ммоль) и ^6-диметил-5пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HC1 (промежуточного соединения 33) (14,09 г, 45,86 ммоль) в ацетонитриле (178 мл). Полученный раствор перемешивали при 50°C в течение 2 ч. Реакция завершалась. Половину растворителя удаляли посредством выпаривания, добавляли 10 мл насыщ. раствора бикарбоната натрия и смесь перемешивали в течение 15 мин. Твердое вещество отфильтровывали, промывали водой с последующим промыванием 50 мл ацетонитрила. Твердое вещество растворяли в смеси DCM/метанол (приблизительно 9/1) и фильтровали через слой диоксида кремния. Фильтрат концентрировали с получением светло-желтого твердого вещества. Данный материал растирали в порошок с приблизительно 120 мл метанола, твердое вещество отфильтровывали и высушивали. Результат LCMS еще демонстрирует приблизительно 2,1% примеси (вероятно из реагента). Материал снова растирали в порошок с ацетонитрилом и затем с 3% раствором метанола в ацетонитриле с получением приблизительно 14 г белого твердого вещества. Добавляли метанол (40 мл) и перемешивали в течение 3 ч. Твердое вещество отфильтровывали с получением чистого продукта, представляющего собой 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-^6-диметилпиридин-2-карбоксамид (иллюстративное соединение 23) (12,26 г, 70%). 1H NMR (500 МГц, DMSO-d6) 1,23 (3H, t), 2,48 (3H, s), 2,62 (4H, br s), 2,76 2,88 (5H, m), 2,95 (4H, br s), 3,73 (2H, s), 7,31 (1H, t), 7,47 (1H, d), 7,56 (1H, d), 7,79 (1H, d), 8,41 (1H, q), 12,44 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=439.

- 28 048005

Иллюстративное о соединение 24

Br __________________________________

Промежуточное

Промежуточное соединение 60 соединение 66

Пример 24. 6-(Дифторметил)-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]^-метилпиридин-2-карбоксамид

DIPEA (0,049 мл, 0,28 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси 7-(бромметил)-3-этил-8фторхиноксалин-2(1Н)-она (промежуточного соединения 66) (40 мг, 0,14 ммоль) и 6-(дифторметил)-Ыметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (промежуточного соединения 60) (48,1 мг, 0,14 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали и направляли аналитической группе для очистки (условия очистки: остаток очищали с помощью колонки С18 с обращенной фазой (элюировали смесью 0-100% АС^вода/0,1% NH4OH), посредством которой получали 6-(дифторметил)-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамид (иллюстративное соединение 24) (56,0 мг, 84%). 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,23 (3Н, t), 2,65 (4Н, br d), 2,77 - 2,86 (5Н, m), 2,97 - 3,06 (4Н, m), 3,73 (2Н, s), 7,00 - 7,26 (1Н, t), 7,30 (1Н, br d), 7,55 (1Н, br d), 7,86 (1Н, d), 8,09 (1Н, d), 8,39 (1Н, q), 12,45 (1Н, br d); масса/заряд (ES⁺) [М+Н]⁺=475.

соединение 66 соединение 67 соединение 25

Промежуточное соединение 67. Метил-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксилат

DIPEA (246 мкл, 1,41 ммоль) добавляли к перемешиваемой взвеси 7-(бромметил)-3-этил-8-фтор1Н-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 66) (134 мг, 0,47 ммоль) и метил-5-(пиперазин-1ил)пиколината, 2НС1 (промежуточного соединения 119)(138 мг, 0,47 ммоль) в ацетонитриле (2 мл). Полученный раствор перемешивали при 50°C в течение 2 ч. Растворитель удаляли под вакуумом и полученный остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле, градиент элюирования 0-20% МеОН в DCM. Фракции продукта концентрировали при пониженном давлении с получением метил-5-[4[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксилата (промежуточного соединения 67) (0,142 г, 71,0%) в виде белого твердого вещества; масса/заряд (ES⁺) [М+Н]⁺=426.

Пример 25. 5-[4-[(2-Этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2карбоксамид

Раствор аммиака (7 н.) в метаноле (3 мл, 6,00 ммоль) добавляли к метилметил-5-[4-[(2-этил-5-фтор3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксилату (промежуточному соединению 67) (130 мг, 0,31 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 50°C в течение 24 часов (в закрытой пробирке). Растворитель удаляли и полученный остаток очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле, градиент элюирования 0-35% МеОН в DCM. Фракции продукта концентрировали при пониженном давлении с получением 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 25) (0,079 г, 63%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,23 (3Н, t), 2,54 - 2,61 (4Н, m), 2,83 (2Н, q), 3,32 - 3,40 (4Н, m), 3,70 (2Н, s), 7,24 - 7,34 (2Н, m), 7,38 (1Н, dd), 7,56 (1Н, d), 7,76 (1Н, br d), 7,84 (1Н, d), 8,27 (1Н, d), 12,44 (1Н, br s); масса/заряд (ES+) [М+Н]⁺=411.

IlUUlVlCAV 1U4HUC ' соединение 68 соединение 26 соединение 16

Промежуточное соединение 68. Метил-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилат

Триэтилфосфин (0,399 мл, 2,70 ммоль) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору 3-этил-8фтор-7-(гидроксиметил)хиноксалин-2(1Н)-она (промежуточного соединения 65) (0,2 г, 0,90 ммоль) и CBr4 (0,985 г, 2,97 ммоль) в DCM (7,10 мл) при 0°C на протяжении периода времени, составляющего 5 минут, в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. DCM удаляли под вакуумом и полученное твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире. Белый осадок фильтро

- 29 048005 вали под вакуумом, промывали водой с последующим промыванием эфиром. Твердое вещество высушивали под вакуумом в течение ночи (без нагревания) с получением 7-(бромметил)-3-этил-8фторхиноксалин-2(Ш)-она в виде светло-коричневого твердого вещества.

К вышеуказанному неочищенному продукту добавляли метил-6-метил-5-(пиперазин-1ил)пиколинат, 2HCl (промежуточное соединение 16) (278 мг, 0,90 ммоль), ацетонитрил (10 мл) и N-этил№изопропилпропан-2-амин (785 мкл, 4,51 ммоль) и нагревали до 70 С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO₃ (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали водой (50 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением смеси 0-10% MeOH в DCM. Выделенный продукт характеризовался чистотой 89%, подтвержденной посредством LCMS. Вышеуказанное твердое вещество дополнительно очищали с применением масс-направленной препаративной HPLC с применением градиента 20-40% ацетонитрила в воде с модификатором NH₄OH с получением метил-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилата (промежуточного соединения 68) (115 мг, 0,262 ммоль, 29%) в виде белого твердого вещества с чистотой 93% согласно LCMS. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,23 (3H, t), 2,45 - 2,49 (3H, m), 2,53 - 2,69 (4H, m), 2,83 (2H, q), 2,98 (4H, br s), 3,73 (2H, s), 3,83 (3H, s), 7,31 (1H, t), 7,45 (1H, d), 7,56 (1H, d), 7,86 (1H, d), 12,44 (1H, br s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d₆) 135,54 (1F, s). масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=440.

Пример 26. 5-[4-[(2-Этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпири дин-2-карбоксамид

н. раствор аммиака в метаноле (6,40 мл 44,78 ммоль) добавляли к метил-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксилату (промежуточному соединению 68) (0,0984 г, 0,22 ммоль) в сцинтилляционном флаконе объемом 40 мл, закрывали и перемешивали при к. т. в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, добавляли дополнительное количество раствора аммиака (6,40 мл, 44,78 ммоль) и перемешивали при 50 С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, добавляли дополнительное количество NH₃ в метаноле и перемешивали при к. т. в течение выходных дней. Завершение реакции подтверждали посредством LCMS. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, полученное твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире. Твердое вещество фильтровали и промывали дополнительным количеством эфира и метанола с получением 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 26) (0,095 г, 100%) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H, br t), 2,45 - 2,49 (3H, m), 2,52 - 2,68 (4H, m), 2,82 (2H, q), 2,94 (4H, br s), 3,72 (2H, br s), 7,30 (1H, br t), 7,38 - 7,51 (2H, m), 7,55 (1H, br d), 7,80 (2H, br d), 12,41 (1H, br s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d₆) -135,53 (1F, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=425.

Промежуточное соединение 69. 2-Этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-карбальдегид

Перйодинан Десса-Мартина (458 мг, 1,08 ммоль) добавляли к 3-этил-8-фтор-7-(гидроксиметил)-1Нхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 65) (загрязненному его региоизомером, представляющим собой 3-этил-8-фтор-5-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-он) (160 мг, 0,72 ммоль) в DCM (5 мл).

Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Растворитель выпаривали с получением неочищенного продукта, который очищали посредством флэш-хроматографии с применением колонки d8-flash, градиент элюирования 5-30% MeCN в воде (0,4% FA). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-карбальдегида (загрязненного его региоизомером, представляющим собой 3-этил-8-фтор-2-оксо-1H-хиноксалин-5-карбальдегид) (промежуточное соединение 69) (110 мг, 69%) в виде желтого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=221.

Пример 27. 5-[4-[(2-Этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Nметилпиридин-2-карбоксамид

Изопропоксид титана (64,5 мг, 0,23 ммоль) добавляли к 2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6карбальдегиду (промежуточному соединению 69) (загрязненному его региоизомером, представляющим собой 3-этил-8-фтор-2-оксо-Ш-хиноксалин-5-карбальдегид) (50 мг, 0,23 ммоль) и 6-фтор-Ы-метил-5(пиперазин-1-ил)пиколинамиду (54,1 мг, 0,23 ммоль) в THF (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 мин. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (промежуточное соединение 32)(192 мг, 0,91 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили с помощью MeOH (0,1мл). Растворитель выпаривали с получени- 30 048005 ем неочищенного продукта. Неочищенный остаток очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка Xselect CSH OBD, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% TFA), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 10% В до 20% В за 10 мин; 254; 220 нм) и (колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO₃ + 0,1% NH3-H2O), подвижная фаза В: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 21 В до 95 В за 7 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин-2карбоксамида (иллюстративного соединения 27) (6 мг, 6%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 1,22 (3H, t), 2,56 - 2,64 (4H, m), 2,76 (3H, d), 2,82 (2H, q), 3,14 - 3,20 (4H, m), 3,71 (2H, s), 7,27 - 7,33 (1H, m), 7,53 - 7,59 (2H, m), 7,82 - 7,86 (1H, m), 8,38 - 8,45 (1H, m), 12,46 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -72,58, -135,51; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=443.

о

Промежуточное соединение 69

Cl

Иллюстративное соединение 28

Пример 28. 6-Хлор-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

Изопропоксид титана (51,6 мг, 0,18 ммоль) добавляли к 2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6карбальдегиду (промежуточному соединению 69) (загрязненному его региоизомером, представляющим собой 3-этил-8-фтор-2-оксо-1H-хиноксалин-5-карбальдегид) (40 мг, 0,18 ммоль) и 6-хлор-№метил-5(пиперазин-1-ил)пиколинамиду (промежуточному соединению 30) (50 мг, 0,20 ммоль) в THF (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 минут. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (154 мг, 0,73 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили с помощью MeOH (0,1 мл) и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH₃H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 21 В до 41 В за 7 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-5-[4-[(2-этил-5фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 28) (37,5 мг, 45%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H, t), 2,57 - 2,65 (4H, m), 2,76 - 2,86 (5H, m), 3,05 - 3,15 (4H, m), 3,72 (2H, s), 7,29 (1H, t), 7,55 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,93 (1H, d), 8,40 - 8,45 (1H, m), 12,45 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -135,46; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=459.

Пример 29. 5-[4-[(2-Этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпири дин-2-карбоксамид

Изопропоксид титана (51,6 мг, 0,18 ммоль) добавляли к 2-этил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6карбальдегиду (промежуточному соединению 69) (загрязненному его региоизомером, представляющим собой 3-этил-8-фтор-2-оксо-Ш-хиноксалин-5-карбальдегид) (40 мг, 0,18 ммоль) и №метил-5-(пиперазин1-ил)пиколинамиду (промежуточному соединению 31) (50 мг, 0,23 ммоль) в THF (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 минут. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (154 мг, 0,73 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили с помощью MeOH (0,1 мл) и концентрировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка Xselect CSH OBD, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,1% FA), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 6 В до 17 В за 7 мин; 254; 220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(2-этил-5-Фтор-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 29) (17,29 мг, 22%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (3H, t), 2,53 2,63 (4H, m), 2,74 - 2,87 (5H, m), 3,05 - 3,15 (4H, m, сливался с пиком, соответствующим воде), 3,69 (2H, s), 7,29 (1H, t), 7,37 (1H, dd), 7,54 (1H, d), 7,81 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,35 - 8,42 (1H, m), 12,44 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -135,49; масса/заряд (eS⁺) [M+H]⁺=425.

- 31 048005

соединение 17 соединение 70 соединение 30

Промежуточное соединение 70. 5-Фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-карбальдегид

Перйодинан Десса-Мартина (1,34 г, 3,16 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метил1Н-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 17) (загрязненному 8-фтор-5-(гидроксиметил)-3метил-Ш-хиноксалин-З-оном) (0,33 г, 0,79 ммоль) в DCM (20 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционную смесь выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с применением колонки d8-flash, градиент элюирования 5-30% MeCN в воде (0,4% FA). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-карбальдегида (загрязненного 8-фтор3-метил-2-оксо-Ш-хиноксалин-5-карбальдегидом) (промежуточного соединения 70) (0,300 г, 92%) в виде грязно-белого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=207.

Пример 30. 6-Хлор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

Изопропоксид титана (89 мг, 0,31 ммоль) добавляли к 5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6карбальдегиду (загрязненному 8-фтор-3-метил-2-оксо-Ш-хиноксалин-5-карбальдегидом) (промежуточному соединению 70) (150 мг, 0,36 ммоль) и 6-хлор-№-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамиду (промежуточному соединению 30) (80 мг, 0,31 ммоль) в THF (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (266 мг, 1,26 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили с помощью MeOH (0,1 мл) и концентрировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Shield RP18

OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO3 + 0,1% NH3.H2O), подвижная фаза B: MeOH для препаративной хроматографии; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 57 В до 80 В за 7 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпи ридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 30) (35,6 мг, 25%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 2,42 (3H, s), 2,58 - 2,66 (4H, m), 2,79 (3H, d), 3,06 - 3,16 (4H, m), 3,72 (2H, s), 7,30 (1H, t), 7,53 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,93 (1H, d), 8,41 - 8,48 (1H, m), 12,47 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -135,45; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=445.

F

Промежуточное соединение 70

F

соединение 31

Пример 31. 5-[4-[(5-Фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметил пиридин-2-карбоксамид

Изопропоксид титана (105 мг, 0,37 ммоль) добавляли к 5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6карбальдегиду (загрязненному 8-фтор-3-метил-2-оксо-1H-хиноксалин-5-карбальдегидом) (промежуточному соединению 70) (150 мг, 0,36 ммоль) и ^6-диметил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамиду, HCl (промежуточному соединению 33) (100 мг, 0,37 ммоль) в THF (3 мл). Полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 2 минут. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (313 мг, 1,48 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили с помощью MeOH (0,1 мл) и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH3H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин;

градиент: от 19 В до 39 В за 7 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпарива ли до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пипе разин-1-ил]-№,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 31) (12,39 мг, 8%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,42 (3H, s), 2,48 (3H, s), 2,57 - 2,67 (4H, m), 2,80 (3H, d), 2,90 - 2,98 (4H, m), 3,72 (2H, s), 7,30 (1H, t), 7,47 (1H, d), 7,52 (1H, d), 7,79 (1H, d), 8,39 - 8,46 (1H, m), 12,46 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -135,52; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=425.

Пример 32. 5-[4-[(5-Фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпири

- 32 048005 дин-2-карбоксамид

Изопропоксид титана (103 мг, 0,36 ммоль) добавляли к 5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6карбальдегиду (загрязненному 8-фтор-3-метил-2-оксо-Ш-хиноксалин-5-карбальдегидом) (150 мг, 0,36 ммоль) и №метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамиду (промежуточному соединению 31) (80 мг, 0,36 ммоль) в THF (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 минут. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (308 мг, 1,45 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили с помощью MeOH (0,1 мл). Реакционную смесь выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка Xbridge Phenyl OBD, 5 мкм, 19x150 мм; подвижная фаза A: вода (0,05% TFA), подвижная фаза B: MeOH для препаративной хроматографии; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 24 В до 32 В за 12 мин; 254/220 нм и (колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO3 + 0,1% NH₃.H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 15 В до 30 В за 10 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-фтор-2-метил3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперαзин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида (12,4 мг, 8%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-de) 2,42 (3H, s), 2,55 - 2,60 (4H, m), 2,78 (3H, d), 2,90 - 2,98 (4H, m, сливался с пиком, соответствующим воде), 3,70 (2H, s), 7,30 (1H, t), 7,38 (1H, dd), 7,52 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,26 (1H, d), 8,38 - 8,43 (1H, m), 12,47 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-de) -135,48; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=411.

Ο₂Ν^1Βγ

JL J .Br

О.

Промежуточное соединение 71

Промежуточное соединение 72

Промежуточное соединение 73

Промежуточное соединение 74

O.

Иллюстративное о соединение 33

Промежуточное соединение 72. 4-Бром-3-фторбензол-1,2-диамин

Железный порошок (5,2 г, 93,11 ммоль) добавляли к 4-бром-3-фтор-2-нитроанилину (промежуточному соединению 71) (7,3 г, 31,06 ммоль) и HCl (10 мл, 100,00 ммоль) (10 М) в MeOH (30 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь подщелачивали насыщенным раствором Na₂CO₃ (100 мл). Вод ный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2x100 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали с получением 4-бром-3-фторбензол-1,2-диамина (промежуточного соединения 72) (6,05 г, 95%) в виде темного твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 4,66 (2H, s), 4,94 (2H, s), 6,30 (1H, dd), 6,56 (1H, dd); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=205, 207.

Промежуточное соединение 73. 7-Бром-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-он

Этил-2-оксоацетат в толуоле (6,41 г, 31,39 ммоль) добавляли к 4-бром-3-фторбензол-1,2-диамину (промежуточному соединению 72) (4,46 г, 21,75 ммоль) в толуоле (30 мл). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 30 минут. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь разбавляли (PE: 10 мл и EA: 2 мл). Осадок собирали посредством фильтрации, промывали с помощью EtOAc (5 мл) и высушивали под вакуумом с получением 7-бром-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 73) (загрязненного 6-бром-5-фтор-Ш-хиноксалин-2-оном) (2,75 г, 52%) в виде грязно-белого твердого вещества. Масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=243.

Промежуточное соединение 74. 8-Фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-он

CataCXium A-Pd-G2 (0,12 г, 0,18 ммоль) добавляли к (трибутилстаннил)метанолу (1,25 г, 3,89 ммоль) и 7-бром-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 73) (1 г, 2,06 ммоль) (загрязненному 6-бром-5-фтор-Ш-хиноксалин-2-оном) в 1,4-диоксане (30 мл). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 18 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором KF (10 мл), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 3-30% MeCN в воде (0,1% муравьиной кислоты). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 74) (260 мг, 69%) (загрязненного 5-фтор-6-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) в виде грязно-белого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=195.

Пример 33. 5-[4-[(5-Фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-М-метилпиридин-2карбоксамид

SOCl₂ (0,3 мл, 4,11 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 74) (158 мг, 0,41 ммоль) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин2-оном) в DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Рас

- 33 048005 творитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (0,25 мл, 1,43 ммоль) и №метил-5-пиперазин-1илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 31) (141 мг, 0,64 ммоль) добавляли к смеси в NMP (3,00 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 1 ч. Неочищенный продукт очища ли посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 19x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH₄HCO₃ + 0,1% NH₃.H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 18 В до 24 В за 9 мин; 254; 220 нм). Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6 ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 33) (13,00 мг, 8%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 2,55 - 2,60 (4H, m), 2,77 (3H, d), 3,28 3,33 (4H, m), 3,71 (2H, s), 7,30 - 7,42 (2H, m), 7,61 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,20 (1H, s), 8,25 (1H, d), 8,37 - 8,42 (1H, m); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) -129,26; масса/заряд (ES+) [M+H]+=397.

Пример 34. 6-Хлор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4H-хиноксaлин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-N-метилпири дин-2-карбоксамид

SOCl₂ (0,3 мл, 4,11 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 74) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) (143 мг, 0,37 ммоль) в DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (0,25 мл, 1,43 ммоль) и 6-хлор-\-метил-5пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 30) (101 мг, 0,40 ммоль) добавляли к смеси в NMP (3,00 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 1 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 19x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO3 + 0,1% NH3-H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 25 В до 28 В за 9 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое со единение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4H-хиноксaлин-6 ил)метил]пиперазин-1-ил]-^метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 34) (23,0 мг, 14%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,58 - 2,65 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,07

- 3,14 (4H, m), 3,73 (2H, s), 7,35 (1H, dd), 7,61 (1H, d), 7,65 (1H, d), 7,93 (1H, d), 8,20 (1H, s), 8,41 - 8,45 (1H, m), 12,58 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -135,18; масса/заряд (ES+) [M+H]+=431.

Пример 35. 5-[4-[(5-Фтор-3-оксо-4H-хиноксaлин-6-ил)метил]пиперaзин-1-ил]-N,6-диметилпиридин2-карбоксамид

SOCl₂ (0,3 мл, 4,11 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 74) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) (143 мг, 0,37 ммоль) (153 мг, 0,39 ммоль) в DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. К смеси добавляли DIPEA (0,25 мл, 1,43 ммоль) и ^6-диметил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 33) (137 мг, 0,58 ммоль) в NMP (3 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 1 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 19x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO3 + 0,1% NH3.H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 24 В до 28 В за 9 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-Фтор-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 35) (13,0 мг, 8%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,48 (3H, s), 2,56 2,65 (4H, s), 2,79 (3H, d), 2,92 - 2,97 (4H, m), 3,73 (2H, s), 7,31 - 7,39 (1H, m), 7,47 (1H, d), 7,61 (1H, d), 7,78 (1H, d), 8,19 (1H, s), 8,39 - 8,44 (1H, m), 12,55 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -135,25; масса/заряд (ES+) [M+H]+=411.

соединение 74 соединение 36

Пример 36. 6-Фтор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4H-хиноксaлин-6-ил)метил]пиперазин-1 - ил]-N-метилпири дин-2-карбоксамид

- 34 048005

SOC12 (0,3 мл, 4,11 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-1Н-хиноксалин-2-ону (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-1Н-хиноксалин-2-оном) (144 мг, 0,37 ммоль) в DCM (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (0,25 мл, 1,43 ммоль) и 6-фтор-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 32) (94 мг, 0,39 ммоль) добавляли к смеси в NMP (3,00 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 1 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 19x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO₃ + 0,1%NH₃.H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 23 В до 25 В за 9 мин; 254/220 нм; RT1: 6,9, 8,46. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 36) (16,0 мг, 10%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,56 - 2,62 (4H, m), 2,76 (3H, d), 3,13 - 3,20 (4H, m), 3,71 (2H, d), 7,33 (1H, dd), 7,55 (1H, t), 7,61 (1H, d), 7,83 (1H, dd), 8,19 (1H, s), 8,37 - 8,43 (1H, m), 12,56 (1H, brs); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -72,57, -135,21; масса/заряд (ES+) [M+H]+=415.

Пример 37. 5-[4-[[2-(Дифторметил)-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N,6диметилпиридин-2-карбоксамид

Раствор хлорида железа(П) (6,18 мг, 0,05 ммоль) и дифторметансульфината цинка(П) (86 мг, 0,29 ммоль) в воде (0,5 мл) порциями добавляли к перемешиваемому раствору 5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 35) (40,0 мг, 0,10 ммоль) и TFA (7,51 мкл, 0,10 ммоль) в DMSO (3 мл) при комнатной температуре. После чего добавляли трет-бутилгидропероксид (9,44 мкл, 0,10 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH₃H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 12% В до 32% В за 7 мин; 254/220 нм; Rt: 6,07 мин. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[[2-(дифторметил)-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1ил]-№,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 37) (2,2 мг, 5%) в виде бледножелтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,49 (3H, s), 2,60 - 2,65 (4H, m), 2,80 (3H, d), 2,92 - 2,99 (4H, m), 3,76 (2H, s), 7,08 (1H, t), 7,39 (1H, t), 7,48 (1H, d), 7,70 (1H, d), 7,79 (1H, d), 8,42 (1H, q), 13,01 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -124,324, -134,183; масса/заряд (ES+) [M+H]+=461.

Железный порошок (3,56 г, 63,83 ммоль) добавляли к 4-бром-3-фтор-2-нитроанилину (промежуточному соединению 71) (3,00 г, 12,77 ммоль), концентрированному хлороводороду (10,64 мл, 127,65 ммоль) в MeOH (30 мл) при к. т. Полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 млх3). Органический слой высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали с получением 4-бром-3-фторбензол-1,2-диамина (промежуточного соединения 72) (2,5 г, 96%). 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 4,66 (2H, s), 4,94 (2H, s), 6,30 (dd, 1H), 6,56 (dd, 1H); масса/заряд (ES+) [M+H]+=205.

Промежуточное соединение 75. 7-Бром-8-фтор-3-метокси-1Н-хиноксалин-2-он

Метил-2,2,2-триметоксиацетат (2,402 г, 14,63 ммоль) добавляли к 4-бром-3-фторбензол-1,2диамину (промежуточному соединению 72) (1,500 г, 7,32 ммоль), трис(((трифторметил)сульфонил)окси) иттербию (0,454 г, 0,73 ммоль) в толуоле (20 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 5 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с обращенной фазой на колонке С18, градиент элюирова

- 35 048005 ния 5-70% MeCN в воде. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 7-бром-8-фтор3-метокси-1Н-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 75) (0,650 г, 32%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d^ 3,97 (3H, s), 7,31 (1H, dd), 7,45 (1H, dd); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=273.

Промежуточное соединение 76. 8-Фтор-7-(гидроксиметил)-3-метокси-Ш-хиноксалин-2-он (Трибутилстаннил)метанол (882 мг, 2,75 ммоль) добавляли к 7-бром-8-фтор-3-метоксихиноксалин2(Ш)-ону (промежуточному соединению 75) (300,0 мг, 1,1 ммоль), cataCXium A-Pd-G2 (73 мг, 0,11 ммоль) в 1,4-диоксане (20 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили насыщ. раствором KF (10 мл) и затем фильтровали. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с обращенной фазой на колонке С18, градиент элюирования 5-100% MeOH в воде. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метоксиЩ-хиноксалин^-она (промежуточного соединения 76) (130 мг, 53%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) 3,97 (3H, s), 4,88 (2H, d), 5,36 (1H, s), 7,27 - 7,32 (1H, m), 7,36 (1H, d), 12,45 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=225.

Промежуточное соединение 77. 7-(Хлорметил)-8-фтор-3-метокси-1H-хиноксалин-2-он

SOCl₂ (8 мл, 109,62 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метокси-1H-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 76) (50,0 мг, 0,22 ммоль) в диэтиловом эфире (50 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 7-(хлорметил)-8-фтор-3-метокси-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 77) (66,7 мг, 122%, неочищенного) в виде желтого масла. Продукт непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) 3,97 (3H, s), 4,88 (2H, s), 7,27 - 7,42 (2H, m), 12,60 (1H, s) масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=243.

Пример 38. 5-[4-[(5-Фтор-2-метокси-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпи ридин-2-карбоксамид №Метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 31) (150 мг, 0,68 ммоль) добавляли к 7-(хлорметил)-8-фтор-3-метокси-1H-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 77) (198 мг, 0,82 ммоль), DIPEA (0,595 мл, 3,40 ммоль) в MeCN (10 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 5-70% MeCN в воде. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением продукта (103,0 мг) в виде желтого твердого вещества (чистота 80%, определенная по УФ-поглощению). Повторно очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 570% MeCN в воде. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-фтор-2метокси-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 38) (36,0 мг, 12%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, DMSOd₆) 2,51 - 2,60 (4H, m), 2,77 (3H, d), 3,18 - 3,45 (4H, m), 3,66 (2H, s), 3,95 (3H, s), 7,10 - 7,27 (1H, m), 7,27 7,42 (2H, m), 7,81 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,39 (1H, q), 12,30 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, DMSO-d6) -134,783; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=427.

Промежуточное Иллюстративное о соединение 76 соединение 39

Пример 39. 6-Фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

SOCl₂ (0,065 мл, 0,89 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метокси-Ш-хиноксалин-2ону (промежуточному соединению 76) (0,040 г, 0,18 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. 6-Фтор-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 32) (0,043 г, 0,18 ммоль) и DIPEA (0,156 мл, 0,89 ммоль) в MeCN (10,00 мл) добавляли к вышеуказанному твердому веществу при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с применением колонки для препаративной HPLC, колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO₃ + 0,1% NH3-H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 34 В до 48 В за 7 мин; 254/220 нм; RT1: 5,9. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-фтор-5-[4-[(5-фтор2-метокси-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 39) (0,020 г, 25%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, DMSOd₆) 2,55 - 2,61 (4H, m), 2,75 (3H, d), 3,11-3,19 (4H, m), 3,67 (2H, s), 3,96 (3H, s), 7,18 - 7,29 (1H, m), 7,35 (1H, d), 7,55 (1H, dd), 7,79 - 7,88 (1H, m), 8,41 (1H, d), 12,50 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, DMSO-d6) -72,581, -134,799; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=445.

- 36 048005

соединение 77 соединение 40

Пример 40. 5-[4-[(5-Фтор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы\6-диме тилпиридин-2-карбоксамид ^6-Диметил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 33) (0,097 г, 0,41 ммоль) добавляли к 7-(хлорметил)-8-фтор-3-метоксихиноксалин-2(Ш)-ону (промежуточному соединению 77) (0,100 г, 0,41 ммоль), DIPEA (0,360 мл, 2,06 ммоль) в MeCN (10 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC; колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH₃H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 10B до 30B за 7 мин; 254/220 нм. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-Ы\6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 40) (0,063 г, 35%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 2,48 (3H, s), 2,58 - 2,63 (4H, m), 2,80 (3H, d), 2,92 -2,96 (4H, m), 3,69 (2H, s), 3,97 (3H, s), 7,25 (1H, t), 7,36 (1H, d), 7,47 (1H, d), 7,79 (1H, d), 8,43 (1H, q), 12,51 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -134,815; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=441.

F

Промежуточное Иллюстративное ° соединение 76 соединение 41

Пример 41. 6-Хлор-5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

SOCl₂ (0,065 мл, 0,89 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метокси-Ш-хиноксалин-2ону (промежуточному соединению 76) (0,040 г, 0,18 ммоль) в диэтиловом эфире (10 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного 7-(хлорметил)-8-фтор-3-метокси-Шхиноксалин-2-она (0,045 г, 0,18 ммоль). MeCN (10,00 мл) добавляли к вышеуказанному твердому веществу с последующим добавлением 6-хлор-№метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксами₁да (промежуточного соединения 30) (0,045 г, 0,18 ммоль) и DIPEA (0,156 мл, 0,89 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 16 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с применением колонки для препаративной HPLC, колонка: YMC-Actus Triart С18, 30x250, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH3H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 21 В до 41 В за 7 мин; 254, 220 нм; RT1: 6,18. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1 -ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 41) (0,041 г, 50%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) 2,56 - 2,66 (4H, m), 2,79 (3H, d), 3,06 3,16 (4H, m), 3,70 (2H, s), 3,97 (3H, s), 7,19 - 7,30 (m, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,93 (d, 1H), 8,44 (d, 1H), 12,47 (s, 1H); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, DMSO-d6) -134,746; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=461.

Промежуточное соединение 78. 2-(4-Бром-3-метил-2-нитроанилино)бутановая кислота

2-Аминобутановую кислоту (0,793 г, 7,69 ммоль) добавляли к 1-бром-4-фтор-2-метил-3нитробензолу (промежуточному соединению 2) (1,500 г, 6,41 ммоль), K₂CO₃ (2,66 г, 19,23 ммоль) в DMF (20 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 6 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, медленно гасили 1 М раствором HCl (20 мл) при 0°C с получением желтой суспензии. Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой и высу

- 37 048005 шивали с получением 2-(4-бром-3-метил-2-нитроанилино)бутановой кислоты (промежуточного соединения 78) (1,4 г, 74%) в виде желтого твердого вещества (не очень чистого, переносили на следующую стадию без дополнительной очистки). Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=317.

Промежуточное соединение 79. 7-Бром-3-этил-8-метил-3,4-дигидро-1Н-хиноксалин-2-он

Железный порошок (1,585 г, 28,38 ммоль) медленно добавляли к 2-(4-бром-3-метил-2нитроанилино)бутановой кислоте (промежуточному соединению 78) (1,800 г, 5,68 ммоль), концентрированному хлороводороду (4,73 мл, 56,76 ммоль) в MeOH (100 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. Реакционную смесь фильтровали. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором Na₂CO₃ (40 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3x50 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали с получением коричневого твердого вещества. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 5-50% MeCN в воде. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 7-бром-3-этил-8-метил3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 79) (650 мг, 43%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO^) 0,90 (3H, t), 1,43 - 1,72 (2H, m), 2,22 (3H, s), 3,56 (1H, ddd), 6,16 (1H, d), 6,56 (1H, d), 6,97 (1H, d), 9,76 (1H, s); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=269.

Промежуточное соединение 80. 7-Бром-3-этил-8-метил-1H-хиноксалин-2-он

DDQ (1,316 г, 5,80 ммоль) добавляли к 7-бром-3-этил-8-метил-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 79) (1,300 г, 4,83 ммоль) в 1,4-диоксане (150 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором NaHCO₃ (150 мл). Осадок собирали посредством фильтрации. Твердое вещество промывали водой (10 млх3) и высушивали под вакуумом с получением требуемого продукта, представляющего собой 7-бром-3-этил-8-метил-1Нхиноксалин-2-он (промежуточное соединение 80) (1,2 г, 93%), в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-de) 1,20 (3H, t), 2,44 - 2,53 (3H, m), 2,78 (2H, q), 7,48 (2H, s), 11,74 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=267.

Промежуточное соединение 81. 3-Этил-7-(гидроксиметил)-8-метил-1H-хиноксалин-2-он (Трибутилстаннил)метанол (1202 мг, 3,74 ммоль) добавляли к 7-бром-3-этил-8-метилхиноксалин2(1Н)-ону (промежуточному соединению 80) (400 мг, 1,50 ммоль), Pd(PPh₃)₄ (173 мг, 0,15 ммоль) в 1,4диоксане (40 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили с помощью KF (10 мл) и твердое вещество отфильтровывали. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 5-100% MeOH в воде. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 3-этил-7-(гидроксиметил)-8-метил-1Н-хиноксалин-2она (промежуточного соединения 81) (100 мг, 31%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 1,22 (3H, t), 2,32 (3H, s), 2,81 (2H, q), 4,59 (2H, d), 5,25 (1H, s), 7,33 (1H, d), 7,55 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=219.

Пример 42. 5-[4-[(2-Этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№,6-диметил пиридин-2-карбоксамид

Добавляли HBr в AcOH (1 мл, 6,08 ммоль) (33 вес.%) к 3-этил-7-(гидроксиметил)-8метилхиноксалин-2(1Н)-ону (промежуточному соединению 81) (65,0 мг, 0,30 ммоль) при к. т. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. N,6Диметил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 33) (69,8 мг, 0,30 ммоль) и DIPEA (0,156 мл, 0,89 ммоль) в NMP (3 мл) добавляли к вышеуказанному твердому веществу при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка, колонка: колонка Sunfire prep С18, 30x150, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,1% FA), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 9 В до 20 В за 7 мин; 254/220 нм; RT1: 5,15. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-№,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 42) (0,049 г, 38%) в виде бледно-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) 1,20 (3H, t), 2,42 (3H, s), 2,50 (3H, s), 2,53 2,59 (4H, m), 2,73 - 2,86 (5H, m), 2,87 - 2,93 (4H, m), 3,61 (2H, s), 7,23 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,52 (1H, d), 7,76 (1H, d), 8,39 (1H, d), 11,52 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=435.

о

Промежуточное Иллюстративное соединение 81 соединение 43

Пример 43. 5-[4-[(2-Этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Ыметилпиридин-2-карбоксамид

Добавляли HBr в AcOH (1 мл, 6,08 ммоль) (33 вес.%) к 3-этил-7-(гидроксиметил)-8-метил-1Н

- 38 048005 хиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 81) (65,0 мг, 0,30 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. 6-Фтор-Ы-метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид (промежуточное соединение 32) (71,0 мг, 0,30 ммоль) добавляли к вышеуказанному твердому веществу с последующим добавлением DIPEA (0,156 мл, 0,89 ммоль) в NMP (3 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 часов. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка, колонка: колонка XBridge Prep OBD С18, 30x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,05% NH₃H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 31 В до 51 В за 7 мин; 254/220 нм; RT1: 6,27. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метuлпирuдин-2карбоксамида (иллюстративного соединения 43) (0,043 г, 33%) в виде бледно-желтого твердого вещест ва. ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) 1,20 (3H, t), 2,41 (3H, s), 2,49 - 2,59 (4H, m), 2,70 -2,81 (5H, m), 3,08 - 3,16 (4H, m), 3,59 (2H, s), 7,22 (1H, d), 7,47 - 7,60 (2H, m), 7,82 (1H, dd), 8,37 (1H, d), 11,52 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, DMSO-d6) -72,539; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=439.

Промежуточное соединение 81

Иллюстративное о соединение 44

Пример 44. 5-[4-[(2-Этuл-5-метuл-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метuлпири дин-2-карбоксамид

Добавляли HBr в AcOH (1 мл, 18,42 ммоль) (33 вес.%) к 3-этил-7-(гидроксиметил)-8-метил-Шхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 81) (65,0 мг, 0,30 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. №Метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид (промежуточное соединение 31) (65,6 мг, 0,30 ммоль) и DIPEA (0,156 мл, 0,89 ммоль) добавляли к вышеуказанному твердому веществу в NMP (3 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 2 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка Sunfire prep С18, 30x150, 5 мкм; подвижная фаза A: вода (0,1% FA), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 60 мл/мин; градиент: от 9 В до 20 В за 7 мин; 254/220 нм; RT1: 5,15. Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 44) (0,014 г, 10%) в виде бледножелтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 1,16-1,26 (3H, m), 2,41 (3H, s), 2,49 - 2,59 (4H, m), 2,70 - 2,81 (5H, m), 3,30 - 3,35 (4H, m, сливался с пиком, соответствующим воде), 3,61 (2H, s), 7,25 (1H, d), 7,38 (1H, d), 7,55 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,26 (1H, s), 8,38 (1H, s), 11,53 (1H, s); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=421.

Промежуточное соединение 11

Промежуточное соединение 82

Промежуточное соединение 83

Иллюстративное соединение 45

Промежуточное соединение 82. трет-Бутил-4-[6-(этилкарбамоил)-2-фтор-3-пиридил]пиперазин-1карбоксилат трет-Бутил-4-(2-фтор-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилат (промежуточное соединение 11) (500 мг, 1,47 ммоль) добавляли к этиламину в воде (10 мл, 1,47 ммоль) (65 вес.%). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакция протекала до завершения. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали водой (2 млх3) и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил-4-[6-(этилкарбамоил)-2-фтор-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 82) (0,515 г, 99%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц,

DMSO-d6) 1,09 (3H, t), 1,42 (9H, s), 3,11 (4H, t), 3,23 - 3,30 (2H, m), 3,49 (4H, t), 7,59 (1H, dd), 7,85 (1H, d), 8,45 (1H, t); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=353.

Промежуточное соединение 83. №этил-6-фтор-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид трет-Бутил-4-[6-(этилкарбамоил)-2-фтор-3 -пиридил]пиперазин-1 -карбоксилат (промежуточное соединение 82) (536 мг, 1,52 ммоль) добавляли к HCl в 1,4-диоксане (5 мл, 20,00 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли DIPEA (5 мл) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакционную смесь выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством флэшхроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 5-50% MeCN в воде (0,1% NH4HCO3). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением №этил-6-фтор-5-пиперазин-1-илпиридин-2карбоксамида (промежуточного соединения 83) (0,368 г, 96%) в виде желтого твердого вещества. Образец не был чистым, его переносили на следующую стадию без дополнительной очистки; масса/заряд

- 39 048005 (ES+) [M+H]+=253.

Пример 45. ^-Этил-6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]пиридин-2-карбоксамид

Ph₃P (94 мг, 0,36 ммоль) добавляли к CBr₄ (119 мг, 0,36 ммоль), 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3метилхиноксалин-2(1Н)-ону (промежуточному соединению 17) (50 мг, 0,24 ммоль) в CH₂Cl₂ (3 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. №Этил-6-фтор-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 83) (60 мг, 0,24 ммоль) и DIPEA (1,5 мл, 8,59 ммоль) в NMP (3 мл) добавляли к смеси. Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 0-25% MeCN в воде (NH4HCO3). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением Nэтил-6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2карбоксамида (иллюстративного соединения 45) (2,60 мг, 3%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) 1,09 (3H, t), 2,40 (3H, s), 2,52 - 2,62 (4H, m), 3,17 - 3,27 (4H, m), 3,25 (2H, q), 3,68 (2H, s), 7,28 (1H, t), 7,48 - 7,59 (2H, m), 7,82 (1H, d), 8,41 (1H, t), 12,48 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, DMSOd6) -72,58, -135,52; масса/заряд (eS⁺) [M+H]⁺=443.

Промежуточное Промсжу точное соединение ¹⁴ соединение 84 Промежуточное соединение 85

Промежуточное Иллюстративное соединение 86 соединение 46

Промежуточное соединение 84. 5-Бром-Ы-этил-6-метилпиридин-2-карбоксамид

Раствор этанамина в H2O (3 мл, 2,20 ммоль) (65 вес.%) добавляли к метил-5-бром-6-метилпиридин2-карбоксилату (промежуточному соединению 14) (505 мг, 2,20 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 5-бром-Ы-этил-6-метилпиридин-2-карбоксамида (промежуточного соединения 84) (0,500 г, 94%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) 1,13 (3H, t), 2,66 (3H, s), 3,26 - 3,39 (2H, m), 7,76 (1H, d), 8,18 (1H, d), 8,67 - 8,72 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=243.

Промежуточное соединение 85. трет-Бутил-4-[6-(этилкарбамоил)-2-метил-3-пиридил]пиперазин-1карбоксилат

Cs₂CO₃ (1,340 г, 4,11 ммоль) добавляли к 5-бром-Ы-этил-6-метилпиридин-2-карбоксамиду (промежуточному соединению 84) (0,5 г, 2,06 ммоль), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилату (0,575 г, 3,09 ммоль), BINAP (0,128 г, 0,21 ммоль) и Pd(OAc)₂ (0,046 г, 0,21 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 18 ч. в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (10 мл) и последовательно промывали водой (10 млх2) с последующим промыванием солевым раствором (10млх1). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством флэшхроматографии на силикагеле, градиент элюирования 0-40% EtOAc в петролейном эфире. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением трет-бутил-4-[6-(этилкарбамоил)-2-метил-3пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 85) (0,481 г, 67%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) 1,26 (3H, t), 1,49 (9H, s), 2,54 (3H, s), 2,85 - 2,98 (4H, m), 3,49 (2H, qd), 3,56 - 3,65 (4H, m), 7,32 (1H, d), 7,91 - 8,01 (2H, m); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=349.

Промежуточное соединение 86. №Этил-6-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид

HCl в 1,4-диоксане (4 мл, 16,00 ммоль, 4 М) добавляли к трет-бутил-4-[6-(этилкарбамоил)-2-метил3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилату (промежуточному соединению 85) (0,481 г, 1,38 ммоль) в MeOH (10 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь подщелачивали с помощью DIPEA (1 мл) в MeOH (3 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой d8-flash, градиент элюирования 0-20% MeCN в воде (NH4HCO3). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением №этил-6-метил-5пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида (промежуточного соединения 86) (0,189 г, 55%) в виде желтого масла. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 1,12 (3H, t), 2,81 -2,92 (8H, m), 3,27 - 3,36 (5H, m), 7,46 (1H, d), 7,81 (1H, d), 8,43 (1H, t); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=249.

Пример 46. N-Этил-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6

- 40 048005 метилпиридин-2-карбоксамид

Ph3P (299 мг, 1,14 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-метилхиноксалин-2(1Н)-ону (158 мг, 0,76 ммоль) (промежуточному соединению 17), CBr₄ (378 мг, 1,14 ммоль) в CH₂Cl₂ (3,00 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. №Этил-6-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 86) (188 мг, 0,76 ммоль) и DIPEA (1,5 мл, 8,59 ммоль) добавляли к смеси в NMP (3 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой C18-flash, градиент элюирования 0-25% MeCN в воде (NH4HCO3). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением N-этил-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2карбоксамида (иллюстративного соединения 46) (7,40 мг, 2%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) 1,10 (3H, t), 2,40 (3H, s), 2,50 (3H, s), 2,54 - 2,64 (4H, m), 2,87 - 2,97 (4H, m), 3,30 (2H, q), 3,70 (2H, s), 7,28 (1H, t), 7,47 (1H, d), 7,52 (1H, d), 7,77 (1H, d), 8,42 (1H, t), 12,44 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (282 МГц, DMSO-d6) -135,54; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=439.

Промежуточное соединение 87. 7-Бром-8-фтор-3-(трифторметил)-1H-хиноксалин-2-он

Этил-3,3,3-трифтор-2-оксопропаноат (2,30 г, 13,52 ммоль) добавляли к 4-бром-3-фторбензол-1,2диамину (промежуточному соединению 72) (2,20 г, 10,73 ммоль) в толуоле (10 мл). Полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой C18-flash, градиент элюирования 370% MeCN в воде (0,1% NH4HCO₃). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 7бром-8-фтор-3-(трифторметил)-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 87) (загрязненного 6бром-5-фтор-3-(трифторметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) (3,40 г, 501%) в виде грязно-белого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=311.

Промежуточное соединение 88. 8-Фтор-7-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-1H-хиноксалин-2-он

CataCxium A Pd G2 (53 мг, 0,08 ммоль) добавляли к 7-бром-8-фтор-3-(трифторметил)-Шхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 87) (загрязненному 6-бром-5-фтор-3-(трифторметил)Ш-хиноксалин-2-оном) (0,5 г, 0,80 ммоль) и (трибутилстаннил)метанолу (0,5 мл, 0,80 ммоль) в 1,4диоксане (15 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 18 ч. в атмосфере азота. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором KF (1,25 мл). Реакционный раствор собирали посредством фильтрации, промывали диоксаном (2,5 мл). Растворитель в объединенных органических слоях удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии с колонкой C18-flash, градиент элюирования 3-40% MeCN в воде (0,1%, TFA). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-1H-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 88) (загрязненного 5-фтор-6-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-Шхиноксалин-2-оном) (0,217 г, 51%) в виде грязно-белого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=263.

Пример 47. 5-[4-[[5-Фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]^6-диметилпиридин-2-карбоксамид

SOCl₂ (0,5 мл, 6,85 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-Шхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 88) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-3(трифторметил)-'1И-хиноксалин-2-оном) (160 мг, 0,31 ммоль) в Et₂O (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (4 мл, 22,90 ммоль) и ^6-диметил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 33) (134 мг, 0,57 ммоль) добавляли к смеси в MeCN (10 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge ВЕН С18 OBD Prep, 5 мкм, 19 мм, 250 мм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO₃ + 0,1% NH3.H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 24 В до 33 В за 10 мин; 254/220 нм; RT1: 8,2/9,5). Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6ил]метил]пиперазин-1-ил]-№,6-диметилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 47) (8,8 мг, 6%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,50 (3H, s), 2,58 - 2,66 (4H, m), 2,79 (3H, d), 2,90 - 2,99 (4H, m), 3,77 (2H, s), 7,41 (1H, t), 7,47 (1H, d), 7,72 (1H, d), 7,78 (1H, d), 8,39 - 8,44 (1H, m),13,21 (1H, brs); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -68,50, -133,81; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=479.

- 41 048005

Промежуточное соединение 88

Иллюстративное соединение 48

Пример 48. 6-Фтор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1ил]-№-метилпиридин-2-карбоксамид

SOC12 (0,4 мл, 5,48 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-1Нхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 88) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-3(трифторметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) (120 мг, 0,23 ммоль) в Et2O (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (2 мл, 11,45 ммоль) и 6-фтор-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 32) (156 мг, 0,65 ммоль) добавляли к смеси в MeCN (10 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge BEH С18 OBD Prep, 5 мкм, 19 мм, 250 мм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH₄HCO₃ + 0,1% NH₃.H2O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 25 В до 37 В за 10 мин; 254/220 нм; RT1: 7,58/8,97). Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-фтор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Hхиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 48) (8,9 мг, 8%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,58 - 2,65 (4H, m), 2,76 (3H, d), 3,14-3,21 (4H, m), 3,75 (2H, s), 7,39 (1H, t), 7,56 (1H, dd), 7,71 (1H, d), 7,84 (1H, dd), 8,37 - 8,43 (1H, m), 13,39 (1H, brs); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -68,48, -72,59, -133,78; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=483.

Пример 49. 6-Хлор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1ил]-№-метилпиридин-2-карбоксамид

SOCl₂ (0,4 мл, 5,48 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-Шхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 88) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-3(трифторметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) (120 мг, 0,23 ммоль) в Et₂O (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (2 мл, 11,45 ммоль) и 6-хлор-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 30) (157 мг, 0,62 ммоль) добавляли к смеси в MeCN (10 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH₄HCO₃ + 0,1% NH₃.H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 45 В до 57 В за 10 мин; 254/220 нм). Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил] пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 49) (18 мг, 16%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 2,60 - 2,68 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,07 - 3,16 (4H, m), 3,77 (2H, s), 7,40 (1H, t), 7,66 (1H, d), 7,72 (1H, d), 7,93 (1H, d), 8,40 - 8,43 (1H, m), 13,25 (1H, brs); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) -68,51, -133,73; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=499.

F

О

Промежуточное соединение 88

F

Иллюстративное соединение 50

Пример 50. 5-[4-[[5-Фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4H-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

SOCl₂ (0,4 мл, 5,48 ммоль) добавляли к 8-фтор-7-(гидроксиметил)-3-(трифторметил)-Шхиноксалин-2-ону (промежуточному соединению 88) (загрязненному 5-фтор-6-(гидроксиметил)-3(трифторметил)-Ш-хиноксалин-2-оном) (120 мг, 0,23 ммоль) в Et₂O (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2. Растворитель удаляли при пониженном давлении. DIPEA (2 мл, 11,45 ммоль) и №метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид (промежуточное соединение 31) (259 мг, 1,18 ммоль) добавляли к смеси в MeCN (10 мл). Полученную смесь перемешивали при

- 42 048005 комнатной температуре в течение 24 ч. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной HPLC (колонка: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 19x250 мм, 10 мкм; подвижная фаза A: вода (10 ммоль/л NH4HCO3 + 0,1% NH3.H₂O), подвижная фаза B: ACN; скорость потока: 20 мл/мин; градиент: от 15 В до 35 В за 10 мин; 254/220 нм; RT1: 10,18/11,2). Фракции, содержащие требуемое соединение, выпаривали до сухого состояния с получением 5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Н-хиноксалин-6ил]метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 50) (6 мг, 6%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) 2,51 - 2,57(4H, m), 2,76 (3H, d), 3,25 3,34 (4H, m), 3,72 (2H, s), 7,30 (1H, t), 7,39 (1H, dd), 7,65 (1H, d), 7,83 (1H, d), 8,27 (1H, d), 8..36 - 8,41 (1H, m); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -68,34, -133,80; масса/заряд (ES+) [M+H]+=465.

Промежуточное соединение 90. Метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-3-метилбутаноат

DIPEA (2,202 мл, 12,61 ммоль) медленно добавляли к перемешиваемому раствору 1-бром-2,4дифтор-3-нитробензола (промежуточного соединения 35) (1 г, 4,20 ммоль) и метилвалината, HCl (промежуточного соединения 89) (0,704 г, 4,20 ммоль) в DMF (6 мл). Полученный раствор перемешивали при к. т. в течение 18 часов (полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS). Реакционную смесь концентрировали, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом, органический слой высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением смеси гексан: этилацетат с получением метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-3-метилбутаноата (0,763 г, 52,0%) (промежуточного соединения 90) в виде ярко-оранжевого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, ДИХЛОРМЕТАН-d^ 1,00 - 1,14 (6H, m), 2,20 - 2,35 (1H, m), 3,78 (3H, s), 4,06 (1H, dd), 6,52 (1H, br d), 7,39 (1H, br d), 7,52 (1H, dd); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, ДИХЛОРМЕТАН^₂) -109,33 (1F, s); масса/заряд (ES+) [M+H]+=349.

Промежуточное соединение 91. 7-Бром-8-фтор-3-изопропил-3,4-дигидро-1H-хиноксалин-2-он

Порошок цинка (1,143 г, 17,48 ммоль) порциями добавляли к смеси метил-2-(4-бром-3-фтор-2нитроанилино)-3-метилбутаноата (0,763 г, 2,19 ммоль) (промежуточного соединения 90) и хлорида аммония (0,935 г, 17,48 ммоль) в MeOH (12 мл) и воде (0,3 мл) при 0°C (экзотермическая реакция), смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч (не оставалось SM, полное исчезновение оранжевого окрашивания свидетельствует о завершении реакции). Zn отфильтровывали, твердый осадок на фильтре промывали 20% MeOH в DCM и фильтрат концентрировали под вакуумом. К вышеуказанному неочищенному продукту добавляли воду и продукт экстрагировали в слой этилацетата. Органический слой высушивали и концентрировали под вакуумом с получением бесцветного масла. Неочищенный продукт суспендировали в смеси этилацетат:метанол 1:1, добавляли 0,5 мл 4 н. раствора HCl в диоксане и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (не оставалось нециклизованного продукта). Реакционную смесь концентрировали с получением 7-бром-8-фтор-3-изопропил-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 91). Неочищенный продукт подвергали воздействию реагентов на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки, предполагая, что выход данной реакции составляет 100%. Масса/заряд (ES+) [M+H]+=287.

Промежуточное соединение 92. 7-Бром-8-фтор-3-изопропил-Ш-хиноксалин-2-он

4,5-Дихлор-3,6-диоксоциклогекса-1,4-диен-1,2-дикарбонитрил (595 мг, 2,62 ммоль) одной порцией добавляли к перемешиваемому раствору 7-бром-8-фтор-3-изопропил-3,4-дигидрохиноксалин-2(1H)-она (627 мг, 2,18 ммоль) (промежуточного соединения 91) в DCM (20 мл). Полученную взвесь перемешивали при к. т. в течение 2 часов (полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS).. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и гасили насыщенным водн. раствором бикарбоната натрия. Вышеуказанную взвесь перемешивали при к. т. в течение ночи и твердое вещество отфильтровывали. Отфильтрованное твердое вещество тщательно промывали водой с последующим промыванием диэтиловым эфиром и высушивали с получением 7-6ром-8-Фтор-3-изопропил-1Нхиноксалин-2-она (0,425 г, 68,3%) (промежуточного соединения 92) в виде грязно-белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,22 (6H, d), 3,36 - 3,52 (1H, m), 7,45 - 7,58 (2H, m), 12,62 (1H, br s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -124,16 (1F, s).; масса/заряд (ES+) [M+H]+=285.

Промежуточное соединение 93. 8-Фтор-7-(гидроксиметил)-3-изопропил-1Н-хиноксалин-2-он

- 43 048005

Xphos Pd G2 (103 мг, 0,13 ммоль) добавляли к перемешиваемому дегазированному раствору 7бром-8-фтор-3-изопропилхиноксалин-2(1Н)-она (375 мг, 1,32 ммоль) (промежуточного соединения 92) и (трибутилстаннил)метанола (507 мг, 1,58 ммоль) в 1,4-диоксане (6,58 мл). Полученный раствор перемешивали при 80°C в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 0-10% MeOH в DCM с получением 8фтор-7-(гидроксиметил)-3-изопропил-Ш-хиноксалин-2-она (0,255 г, 82%) (промежуточного соединения 93) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (6H, d), 3,39 - 3,52 (1H, m), 4,64 (2H, d), 5,41 (1H, t), 7,33 (1H, s), 7,55 (1H, d), 12,42 (1H, br s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -137,71 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=237.

Промежуточное соединение 94. 7-(Бромметил)-8-фтор-3-изопропил-1H-хиноксалин-2-он

Триэтилфосфан (0,477 мл, 3,23 ммоль) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору 8-фтор7-(гидроксиметил)-3-изопропилхиноксалин-2(Ш)-она (0,2541 г, 1,08 ммоль) (промежуточного соединения 93) и CBr₄ (1,177 г, 3,55 ммоль) в DCM (8,49 мл) при 0°C на протяжении периода времени, составляющего 5 минут, в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч, DCM удаляли под вакуумом и полученное твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире. Белый осадок фильтровали под вакуумом, промывали водой с последующим промыванием эфиром. Твердое вещество высушивали под вакуумом в течение ночи (без нагревания) с получением 7-(бромметил)-8-фтор-3изопропил-Ш-хиноксалин-2-она (0,313 г, 97%) (промежуточного соединения 94) в виде светлокоричневого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=299.

Пример 51. 6-Фтор-5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]№метилпиридин-2-карбоксамид

К 7-(бромметил)-8-фтор-3-изопропилхиноксалин-2(Ш)-ону (100 мг, 0,33 ммоль) (промежуточному соединению 94) добавляли 6-фтор-Ы~-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид, 2HCl (104 мг, 0,33 ммоль) (промежуточное соединение 32), ацетонитрил (5 мл) и ^-этил-Ы~-изопропилпропан-2-амин (291 мкл, 1,67 ммоль) и нагревали до 70°C. Результат LCMS указывал на полное исчезновение SM и образование требуемого продукта через 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO₃ (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали большими количествами воды (50 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 0-10% MeOH в DCM с получением 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (0,050 г, 32,8%) (иллюстративного соединения 51) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (6H, d), 2,53 - 2,65 (4H, m), 2,77 (3H, d), 3,12 -3,24 (4H, m), 3,36 - 3,52 (1H, m), 3,71 (2H, s), 7,30 (1H, t), 7,52 - 7,59 (2H, m), 7,84 (1H, d), 8,36 - 8,41 (1H, m), 12,46 (1H, br s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d₆) -135,53 (1F, s), -72,59 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=457.

Пример 52. 5-[4-[(5-Фтор-2-изопропил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6диметилпиридин-2-карбоксамид

К 7-(бромметил)-8-фтор-3-изопропилхиноксалин-2(Ш)-ону (109 мг, 0,36 ммоль) (промежуточному соединению 94) добавляли ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (112 мг, 0,36 ммоль) (промежуточное соединение 33), ацетонитрил (5 мл) и №этил-№изопропилпропан-2-амин (317 мкл, 1,82 ммоль) и нагревали до 70°C. Результат LCMS указывал на полное исчезновение SM и образование требуемого продукта через 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO₃ (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали большими количествами воды (50 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 0-10% MeOH в DCM с получением 5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-^6-диметилпиридин-2-карбоксамида (0,057 г, 34,6%) в виде белого твердого вещества (иллюстративного соединения 52). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (6H, d), 2,46 - 2,49 (3H, m), 2,52 - 2,68 (4H, m), 2,80 (3H, d), 2,94 (4H, br s), 3,36 - 3,52 (1H, m), 3,73 (2H, s), 7,30 (1H, t), 7,47 (1H, d), 7,56 (1H, d), 7,79 (1H, d), 8,37 - 8,44 (1H, m), 12,46 (1H, s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -135,55 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=453.

- 44 048005

Пример 53. 5-[4-[(5-Фтор-2-изо11ро11и.л-3-оксо-411-хи110кса.ли11-6-и.л)мети.л]11И11ерази11-1-и.л]-\метилпиридин-2-карбоксамид

К 7-(бромметил)-8-фтор-3-изопропилхиноксалин-2(1Н)-ону (100 мг, 0,33 ммоль) (промежуточному соединению 94) добавляли ^метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (98 мг, 0,33 ммоль) (промежуточное соединение 31), ацетонитрил (5 мл) и ^этил^-изопропилпропан-2-амин (291 мкл, 1,67 ммоль) и нагревали до 70°C. Результат LCMS указывал на полное исчезновение SM и образование требуемого продукта через 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO₃ (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали большими количествами воды (50 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением градиента 0-10% MeOH в DCM с получением 5-[4-[(5-фтор-2-изоnропил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-^метилпиридин-2-карбоксамида (0,052 г, 35,5%) (иллюстративного соединения 53) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,22 (6H, d), 2,52 - 2,61 (4H, m), 2,78 (3H, d), 3,26 -3,30 (4H, m), 3,36 - 3,52 (1H, m), 3,70 (2H, s), 7,31 (1H, t), 7,38 (1H, dd), 7,56 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,26 (1H, d), 8,38 (1H, br d), 12,45 (1H, br s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-de) -135,54 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=439.

Промежуточное соединение 96. Метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-2-циклопропилацетат

DIPEA (2,202 мл, 12,61 ммоль) медленно добавляли к перемешиваемому раствору 1-бром-2,4дифтор-3-нитробензола (промежуточного соединения 35) (1 г, 4,20 ммоль) и метил-2-амино-2циклопропилацетата, HCl (промежуточного соединения 95) (0,696 г, 4,20 ммоль) в DMF (6 мл). Полученный раствор перемешивали при к. т. в течение 18 часов (полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS). Реакционную смесь концентрировали, разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом, органический слой высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением гексана и этилацетата с получением метил-2-(4-бром-3-фтор-2-нитроанилино)-2циклопропилацетата (0,635 г, 43,5%) (промежуточного соединения 96) в виде ярко-оранжевого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ДИХЛОРМЕТАН^) 0,39 -0,49 (1H, m), 0,54 (1H, td), 0,64 - 0,75 (2H, m), 1,25 -1,39 (1H, m), 3,74 - 3,83 (4H, m), 6,45 (1H, dd), 7,34 (1H, br d), 7,52 (1H, dd). ¹⁹F ЯМР (471 МГц, ДИХЛОРМЕТАН^) -109,53 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=347.

Промежуточное соединение 97. 7-Бром-3-циклопропил-8-фтор-3,4-дигидро-Ш-хиноксалин-2-он

Порошок цинка (957 мг, 14,63 ммоль) порциями добавляли к смеси метил-2-((4-бром-3-фтор-2нитрофенил)амино)-2-циклопропилацетата (635 мг, 1,83 ммоль) (промежуточного соединения 96) и хлорида аммония (783 мг, 14,63 ммоль) в MeOH (12 мл) и воде (0,3 мл) при 0°C (экзотермическая реакция), смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч (не оставалось SM, полное исчезновение оранжевого окрашивания свидетельствует о завершении реакции). Zn отфильтровывали и твердый осадок на фильтре промывали 20% MeOH в DCM. Фильтрат концентрировали, в неочищенном материале присутствовал в основном нециклизованный продукт. К вышеуказанному неочищенному продукту добавляли воду и продукт экстрагировали в слой этилацетата. Органический слой высушивали и концентрировали под вакуумом с получением масла. Данный материал суспендировали в смеси этилацетат:метанол 1:1, добавляли 0,5 мл 4 н. раствора HCl в диоксане и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (не остава

- 45 048005 лось нециклизованного продукта). Реакционную смесь концентрировали с получением 7-бром-3циклопропил-8-фтор-3,4-дигидро-1Н-хиноксалин-2-она (промежуточного соединения 97) в виде серого твердого вещества. Неочищенный продукт подвергали воздействию реагентов на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки, предполагая, что выход данной реакции составляет 100%. Масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=285.

Промежуточное соединение 98. 7-Бром-3-циклопропил-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-он

4,5-Дихлор-3,6-диоксоциклогекса-1,4-диен-1,2-дикарбонитрил (499 мг, 2,20 ммоль) одной порцией добавляли к перемешиваемому раствору 7-бром-3-циклопропил-8-фтор-3,4-дигидрохиноксалин-2(Ш)она (522 мг, 1,83 ммоль) (промежуточного соединения 97) в DCM (20 мл). Полученную взвесь перемешивали при к. т. в течение 2 часов (полное превращение в требуемый продукт подтверждали посредством LCMS). Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и гасили насыщенным водн. раствором бикарбоната натрия. Вышеуказанную взвесь перемешивали при к. т. в течение ночи и твердое вещество отфильтровывали. Твердое вещество тщательно промывали водой с последующим промыванием диэтиловым эфиром и высушивали с получением 7-бром-3-циклопропил-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (0,382 г, 73,7%) (промежуточного соединения 98) в виде грязно-белого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=283.

Промежуточное соединение 99. 3-Циклопропил-8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-он

Xphos Pd G2 (92 мг, 0,12 ммоль) добавляли к перемешиваемому дегазированному раствору 7-бром3-циклопропил-8-фторхиноксалин-2(Ш)-она (332 мг, 1,17 ммоль) (промежуточного соединения 98) и (трибутилстаннил)метанола (452 мг, 1,41 ммоль) в 1,4-диоксане (5,86 мл) и полученный раствор перемешивали при 80°C в течение 16 часов. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 0-10% MeOH в DCM с получением 3циклопропил-8-фтор-7-(гидроксиметил)-Ш-хиноксалин-2-она (0,224 г, 82%) (промежуточного соединения 99) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,02 - 1,14 (4H, m), 2,52 - 2,73 (1H, m), 4,62 (2H, d), 5,38 (1H, t), 7,29 (1H, t), 7,43 (1H, d), 12,43 (1H, br s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) 137,67 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=235.

Промежуточное соединение 100. 7-(Бромметил)-3-циклопропил-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-он

Триэтилфосфан (0,422 мл, 2,86 ммоль) по каплям добавляли к смеси З-циклопропил-8-фтор-7(гидроксиметил)хиноксалин-2(Ш)-она (0,223 г, 0,95 ммоль) (промежуточного соединения 99) и CBr₄(1,043 г, 3,14 ммоль) в DCM (7,52 мл) при 0°C на протяжении периода времени, составляющего 5 минут, в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. DCM удаляли под вакуумом и полученное твердое вещество суспендировали в диэтиловом эфире. Светлый зеленовато-белый осадок фильтровали под вакуумом, промывали водой с последующим промыванием эфиром. Твердое вещество высушивали под вакуумом в течение ночи (без нагревания) с получением 7-(бромметил)-3циклопропил-8-фтор-Ш-хиноксалин-2-она (0,193 г, 68,2%) (промежуточного соединения 100) в виде светло-зеленого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,03 - 1,17 (4H, m), 2,63 - 2,76 (1H, m), 4,79 (2H, s), 7,33 (1H, t), 7,43 (1H, d), 12,55 (1H, br s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -133,65 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=297.

Пример 54. 5-[4-[(2-Циклопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6фтор^-метилпиридин-2-карбоксамид

К 7-(бромметил)-3-циклопропил-8-фторхиноксалин-2(Ш)-ону (75 мг, 0,25 ммоль) (промежуточному соединению 100) добавляли 6-фтор-№метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (79 мг, 0,25 ммоль) (промежуточное соединение 32), ацетонитрил (5 мл) и №этил-^изопропилпропан-2-амин (220 мкл, 1,26 ммоль) и нагревали до 70 С. Результат LCMS указывал на полное исчезновение SM и образование требуемого продукта через 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO₃ (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали большими количествами воды (50 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 010% MeOH в DCM с получением 5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-№метилпиридин-2-карбоксамида (0,048 г, 41,8%) (иллюстративного соединения 54) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 1,04 - 1,13 (4H, m), 2,52 2,63 (4H, m), 2,71 (1H, s), 2,77 (3H, d), 3,12 - 3,21 (4H, m), 3,69 (2H, s), 7,26 (1H, t), 7,43 (1H, d), 7,55 (1H, dd), 7,84 (1H, d), 8,39 (1H, br d), 12,46 (1H, br s).; ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -135,52 (1F, s), -72,58 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=455.

- 46 048005

Пример 55. 5-[4-[(2-Циклопропил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-^6диметилпиридин-2-карбоксамид

К 7-(бромметил)-3-циклопропил-8-фторхиноксалин-2(1Н)-ону (75 мг, 0,25 ммоль) (промежуточному соединению 100) добавляли ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (78 мг, 0,25 ммоль) (промежуточное соединение 33), ацетонитрил (5 мл) и №этил-№изопропилпропан-2-амин (220 мкл, 1,26 ммоль) и нагревали до 70°C. Результат LCMS указывал на полное превращение в требуемый продукт через 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO₃ (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали большими количествами воды (50 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 0-10% MeOH в DCM с получением 5-[4-[(2-циkлопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диме тилпиридин-2-карбоксамида (0,049 г, 43,1%) (иллюстративного соединения 55) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,03 - 1,15 (4H, m), 2,46 - 2,49 (3H, m), 2,52 - 2,65 (4H, m), 2,65 2,75 (1H, m), 2,80 (3H, d), 2,94 (4H, br s), 3,71 (2H, s), 7,26 (1H, t), 7,40 - 7,50 (2H, m), 7,79 (1H, d), 8,37 8,44 (1H, m), 12,46 (1H, s); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d6) -135,54 (1F, s); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=451.

Пример 56. 5- [4-[(2-Циkлопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1 -ил] -N метилпиридин-2-карбоксамид

К 7-(бромметил)-3-циклопропил-8-фторхиноксалин-2(Ш)-ону (43 мг, 0,14 ммоль) (промежуточному соединению 100) добавляли №метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид, 2HCl (42,4 мг, 0,14 ммоль) (промежуточное соединение 31), ацетонитрил (5 мл) и №этил-№изопропилпропан-2-амин (126 мкл, 0,72 ммоль) и нагревали до 70°C. Результат LCMS указывал на полное исчезновение SM и образование требуемого продукта через 1 ч. Реакционную смесь охлаждали, концентрировали, гасили водн. раствором NaHCO3 (1 мл) и перемешивали в течение 1 ч при к. т. К вышеуказанной смеси добавляли воду (3 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Осадок фильтровали и промывали большими количествами воды (25 мл). Твердое вещество очищали посредством хроматографии с нормальной фазой с применением 0-10% MeOH в DCM с получением 5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин1-ил]-^метилпиридин-2-карбоксамида (0,020 г, 31,7%) (иллюстративного соединения 56) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,03 - 1,16 (4H, m), 2,53 - 2,60 (4H, m), 2,65 - 2,80 (5H, m), 3,68 (2H, s), 7,25 (1H, br t), 7,38 (1H, dd), 7,42 (1H, d), 7,82 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,35 - 8,40 (1H, m), 12,38 - 12,51 (1H, m) (отсутствующий 3H, вероятно, перекрывается с пиком, соответствующим DMSO); ¹⁹F ЯМР (471 МГц, DMSO-d₆) -135,52 (1F, s).; масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=437

Промежуточное соединение 102. 7-Бром-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-он

Смесь 4-бром-3-метилбензол-1,2-диамина (1,75 г, 8,70 ммоль) (промежуточного соединения 101), метил-2,2,2-триметоксиацетата (2,86 г, 17,41 ммоль) и трифторметансульфоната иттербия(Ш) (0,540 г, 0,87 ммоль) в толуоле (10 мл) в закрытой пробирке дегазировали, повторно заполняли N2, перемешивали при 100°C в течение ночи с получением коричневой суспензии, результат LCMS указывал на образование требуемого продукта, смесь охлаждали до к. т., твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали метанолом, высушивали с получением 7-бром-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (1,2 г, 51,2%) (промежуточного соединения 102) в виде желтого твердого вещества (загрязненного приблизительно 8% его региоизомера, представляющего собой 6-бром-3-метокси-5-метилхиноксалин-2(Ш)-он). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,50 (3H, br s), 3,97 (3H, s), 7,32 (1H, d), 7,45 (1H, d), 11,79 (1H, br s); (масса/заряд) (ES+) [M+H]⁺=269.

- 47 048005

Промежуточное соединение 103. 7-(Гидроксиметил)-3-метокси-8-метил-1Н-хиноксалин-2-он

Смесь (трибутилстаннил)метанола (1,844 г, 5,74 ммоль), 7-бром-3-метокси-8-метил-1Н-хиноксалин2-она (1,03 г, 3,83 ммоль) (промежуточного соединения 102) и Xphos Pd G2 (0,452 г, 0,57 ммоль) в 1,4диоксане (40 мл) перемешивали при 80°C в течение ночи в атмосфере N₂ с получением темной смеси, результат LCMS указывал на почти полное превращение. Растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM), фракции концентрировали с получением желтого твердого вещества, твердое вещество анализировали посредством LCMS, результат которой указывал на то, что оно было не очень чистым, затем продукт суспендировали в 20 мл метанола, твердое вещество собирали посредством фильтрации, высушивали с получением продукта с чистотой 55% в виде желтого твердого вещества (загрязненного 30% исходного материала и 9,5% дебромированного побочного продукта).

Твердое вещество, полученное выше, загружали в сухую колбу с 1,4-диоксаном (40 мл), в колбу добавляли 900 мг (трибутилстаннил)метанола и 300 мг xphos Pd G2, смесь дегазировали, затем перемешивали при 80°C в течение ночи в атмосфере N2. Растворитель удаляли при пониженном давлении, смесь очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-20% метанола в DCM) с получением 7(гидроксиметил)-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (800 мг, 95%) (промежуточного соединения 103) в виде желтого твердого вещества с чистотой 80%, определенной посредством LCMS. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,32 (3H, s), 3,91 - 4,01 (3H, m), 4,56 (2H, d), 5,15 (1H, t), 7,27 (1H, d), 7,37 (1H, d), 11,57 (1H, br s); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=221.

Промежуточное соединение 104. 7-(Бромметил)-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-он

Триэтилфосфан (294 мкл, 2,04 ммоль) по каплям добавляли к суспензии 7-(гидроксиметил)-3метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (300 мг, 1,36 ммоль) (промежуточного соединения 103) и 1,1,2,2тетрабром-1,2-дихлорэтана (875 мг, 2,11 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) при 0°C в атмосфере N2, затем полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 3,5 ч, растворитель удаляли при пониженном давлении, остаток суспендировали в эфире (10 мл), фильтровали, твердое вещество промывали эфиром (10 млх2), затем твердое вещество суспендировали в воде (20 мл), фильтровали, промывали водой (5 млх3), высушивали с получением 7-(бромметил)-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (0,250 г, 64,8%) (промежуточного соединения 104) в виде светло-желтого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=285.

Пример 57. 5-[4-[(2-Метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6диметилпиридин-2-карбоксамид

К суспензии ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (83 мг, 0,27 ммоль) (промежуточного соединения 33) и 7-(бромметил)-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (85 мг, 0,27 ммоль) (промежуточного соединения 104) в ацетонитриле (6 мл) добавляли DIPEA (236 мкл, 1,35 ммоль), полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч с получением прозрачного раствора, смесь охлаждали до к. т. с получением суспензии, твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой, ацетонитрилом, высушивали с получением 5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-^6-диметилпиридин-2-карбоксамида (0,064 г, 54,3%) (иллюстративного соединения 57) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,43 (3H, s), 2,49 (3H, s), 2,57 (4H, br s), 2,80 (3H, d), 2,91 (4H, br s), 3,60 (2H, s), 3,95 (3H, s), 7,18 (1H, d), 7,35 (1H, d), 7,46 (1H, d), 7,78 (1H, d), 8,40 (1H, q), 11,58 (1H, br s); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=437

npviviv/l\v I winw ' соединение 104 соединение 58 соединение 32

Пример 58. 6-Фтор-5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Nметилпиридин-2-карбоксамид

К суспензии 6-фтор-№метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида, 2HCl (84 мг, 0,27 ммоль) (промежуточного соединения 32) и 7-(бромметил)-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (85 мг, 0,27 ммоль) (промежуточного соединения 104) в ацетонитриле (6 мл) добавляли DIPEA (236 мкл, 1,35 ммоль), полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч с получением суспензии, смесь охлаждали до к. т., твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали водой, ацетонитрилом, высушивали, твердое вещество суспендировали в ацетонитриле, фильтровали и высушивали с получением 6-фтор-5[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1 -ил] -N-метилпиридин-2-карбок самида (0,073 г, 61,3%) (иллюстративного соединения 58) в виде твердого вещества бежевого цвета. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,42 (3H, s), 2,55 (4H, br s), 2,76 (3H, d), 3,14 (4H, br s), 3,58 (2H, s), 3,95 (3H, s), 7,17 (1H, br d), 7,35 (1H, br d), 7,50 -7,63 (1H, m), 7,83 (1H, br d), 8,38 (1H, br d), 11,58 (1H, s); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=442.

- 48 048005

Промежуточное соединение 106. Метил-6-бром-5-фторпиридин-2-карбоксилат

Серную кислоту (1,5 мл, 28,14 ммоль) медленно добавляли к смеси 6-бром-5-фторпиколиновой кислоты (500 мг, 2,27 ммоль) (промежуточного соединения 105) в MeOH (8 мл). Смесь продолжали перемешивать при к. т. в течение 3 ч с получением белой суспензии. Результат LCMS указывал на полное превращение, смесь выливали в насыщ. водн. раствор NaHCO₃, экстрагировали с помощью DCM (40 млх2), органические слои высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением метил-6-бром-5-фторпиридин-2-карбоксилата (532 мг, 100%) (промежуточного соединения 106) в виде белого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 4,01 (3H, s), 7,55 (1H, t), 8,15 (1H, dd); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=236.

Промежуточное соединение 107. трет-Бутил-4-(2-бром-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1карбоксилат

Смесь трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (8,21 г, 44,06 ммоль), метил-6-бром-5-фторпиридин-2карбоксилата (6,065 г, 25,92 ммоль) (промежуточного соединения 106) и карбоната калия (4,66 г, 33,69 ммоль) в DMF (60 мл) перемешивали при 110°C в течение 5 часов, результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь охлаждали до к. т., разбавляли DCM и водой, слои разделяли, водный слой два раза экстрагировали с помощью DCM, органические слои объединяли, высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали, остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-50% этилацетата в гексанах, УФ при 221, 310 нм) с получением требуемого продукта, представляющего собой трет-бутил-4-(2-бром-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилат (7,68 г, 74,1%) (промежуточное соединение 107), в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,51 (9H, s), 3,14 (4H, br t), 3,60 - 3,71 (4H, m), 3,99 (3H, s), 7,32 (1H, d), 8,08 (1H, d); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=402.

Промежуточное соединение 108. трет-Бутил-4-[2-бром-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин1-карбоксилат трет-Бутил-4-(2-бром-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилат (7,67 г, 19,16 ммоль) (промежуточное соединение 107) в метанамине (100 мл, 19,16 ммоль) (33% в этаноле) перемешивали в закрытом сосуде при 60°C в течение 4,5 ч, результат LCMS указывал на полное превращение, смесь охлаждали до к. т., концентрировали, остаток растворяли в DCM, промывали насыщ. раствором NH₄Cl, высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали с получением трет-бутил-4-[2-бром-6(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (7,48 г, 98%) (промежуточного соединения 108) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,50 (9H, s), 3,02 (3H, d), 3,08 (4H, br t), 3,60 - 3,71 (4H, m), 7,36 (1H, d), 7,68 (1H, br d), 8,11 (1H, d); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=401.

Промежуточное соединение 109. трет-Бутил-4-[6-(метилкарбамоил)-2-винил-3-пиридил]пиперазин1-карбоксилат

Смесь трет-бутил-4-[2-бром-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (1,344 г, 3,37 ммоль) (промежуточного соединения 108), трибутил(винил)станнана (1,174 г, 3,70 ммоль) и Xphos Pd G2 (0,132 г, 0,17 ммоль) в 1,4-диоксане (25 мл) перемешивали при 100°C в атмосфере N2 в течение 2,5 ч, результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь разбавляли с помощью DCM, промывали насыщ. раствором NH₄Cl, органический слой высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали, остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-80% этилацетата в гексанах, УФ при 226, 293 нм) с получением трет-бутил-4-[6-(метилкарбамоил)-2-винил-3пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (0,961 г, 82%) (промежуточного соединения 109) в виде белого твер

- 49 048005 дого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,50 (9H, s), 2,90 - 3,01 (4H, m), 3,05 (3H, d), 3,55 3,68 (4H, m), 5,54 (1H, dd), 6,42 (1H, dd), 7,10 (1H, dd), 7,39 (1H, d), 7,98 (1H, br d), 8,07 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=346,6, 348,5.

Промежуточное соединение 110. трет-Бутил-4-[2-формил-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пипе разин-1 -карбоксилат

Тетраоксид осмия в H₂O (0,0435 мл, 6,00 мкмоль) добавляли к раствору трет-бутил-4-[6(метилкарбамоил)-2-винил-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (960 мг, 2,77 ммоль) (промежуточного соединения 109), 2,6-лутидина (646 мкл, 5,54 ммоль) и перйодата натрия (2371 мг, 11,08 ммоль) в смеси THF (25 мл)/вода (5 мл)/трет-бутанол (2650 мкл, 27,71 ммоль) и перемешивали при к. т. в течение ночи с получением желтой суспензии. Результат LCMS и TLC указывал на полное превращение. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали этилацетатом. После концентрирования неочищенный материал очищали на колонке с диоксидом кремния (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах, УФ при 226, 310 нм) с получением трет-бутил-4-[2-формил-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1карбоксилата (0,732 г, 76%) (промежуточного соединения 110) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,50 (9H, s), 3,07 (3H, d), 3,15 - 3,30 (4H, m), 3,63 - 3,79 (4H, m), 7,48 (1H, d), 7,85 (1H, br d), 8,28 (1H, d), 10,10 (1H, s); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=349.

Промежуточное соединение 111. трет-Бутил-4-[2-(дифторметил)-6-(метилкарбамоил)-3пиридил]пиперазин-1-карбоксилат трет-Бутил-4-[2-формил-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилат (730 мг, 2,10 ммоль) (промежуточное соединение 110) в CH₂Cl₂ (10 мл) охлаждали до 0°C, к смеси добавляли DAST (692 мкл, 5,24 ммоль) в DCM (5 мл), затем полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 4 ч, результат TLC и LCMS указывал на полное превращение. Реакционную смесь гасили по каплям насыщ. водн. раствором NaHCO₃, экстрагировали с помощью DCM, органические слои высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали, остаток очищали на колонке с силикагелем (элюировали смесью 0-100% этилацетата в гексанах, УФ при 254, 293 нм) с получением трет-бутил-4-[2-(дифторметил)-6(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (0,666 г, 86%) (промежуточного соединения 111) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,50 (9H, s), 2,93 - 3,02 (4H, m), 3,05 (3H, d), 3,57 - 3,72 (4H, m), 6,99 (1H, t), 7,62 (1H, d), 7,92 (1H, br d), 8,27 (1H, d); (масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=371.

Промежуточное соединение 60. 6-(Дифторметил)-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбок самид, 2HCl

М Раствор HCl в диоксане (7 мл, 28,00 ммоль) добавляли в колбу, загруженную трет-бутил-4-[2(дифторметил)-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилатом (665 мг, 1,80 ммоль) (промежуточным соединением 111) и магнитной мешалкой, смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч с получением желтой суспензии. Растворитель удаляли, остаток разбавляли эфиром, твердое вещество собирали посредством фильтрации, высушивали с получением 6-(дифторметил)-№метил-5-пиперазин-1илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (0,617 г, 100%) (промежуточного соединения 60) в виде оранжевого твердого вещества. Масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=272.

Пример 59. 6-(Дифторметил)-5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4H-хиноксαлин-6-ил)метил]пипера зин-1 -ил] -N-метилпиридин-2-карбоксамид

К суспензии 6-(дифторметил)-У-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (87 мг, 0,25 ммоль) (промежуточного соединения 60) и 7-(бромметил)-3-метокси-8-метил-Ш-хиноксалин-2-она (80 мг, 0,25 ммоль) (промежуточного соединения 104) в ацетонитриле (6 мл) добавляли DIPEA (222 мкл, 1,27 ммоль), полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 ч с получением прозрачного раствора, смесь охлаждали до к. т. с получением суспензии, твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали ацетонитрилом, водой, высушивали с получением 6-(дифторметил)-5-[4-[(2-метокси-5-метил3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида (0,070 г, 58,3%) (иллюстративного соединения 59) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,43 (3H, s), 2,59 (4H, br s), 2,83 (3H, br d), 2,98 (4H, br s), 3,60 (2H, s), 3,95 (3H, s), 6,92 - 7,29 (2H, m), 7,35 (1H, d), 7,85 (1H, br d), 8,08 (1H, d), 8,38 (1H, br d), 11,58 (1H, br s); ((масса/заряд) (ES⁺) [M+H]⁺=473.

соединение s

Пример 60. 6-(Дифторметил)-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хиноксαлин-6-ил)метил]пиперαзин-1 ил] -N-метилпиридин-2-карбоксамид

Смесь 7-(бромметил)-3,8-диметил-Ш-хиноксалин-2-она (196 мг, 0,73 ммоль) (промежуточного со

- 50 048005 единения 8), 6-(дифторметил)-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HC1 (252 мг, 0,73 ммоль) (промежуточного соединения 60) и Et₃N (0,614 мл, 4,41 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) перемешивали при 70°C в течение 2 ч с получением прозрачного раствора, результат LCMS указывал на полное превращение. Смесь охлаждали до к. т. в течение ночи. Твердое вещество подвергали кристаллизации из смеси, твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали ацетонитрилом, водой, высушивали с получением части 1 продукта массой 141 мг, фильтрат концентрировали, очищали на колонке Gilson с обращенной фазой (элюировали смесью 5-80% ACN/вода/0,1% TFA) с получением второй порции продукта массой 92 мг в виде соли TFA. Суммарно: 6-(дифторметил)-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамид (0,233 г, 64,0%) (иллюстративное соединение 60) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,40 (3H, s), 2,43 (3H, s), 2,60 (4H, br s), 2,83 (3H, d), 2,98 (4H, br d), 3,63 (2H, s), 6,95 - 7,22 (1H, m), 7,23 - 7,29 (1H, m), 7,51 (1H, d), 7,85 (1H, d), 8,08 (1H, d), 8,38 (1H, br d), 11,54 (1H, br s); (масса/заряд) (ES+) [M+H]⁺=457.

Промежуточное Промежуточное Промежуточное соединение 112 соединение 113 соединение 30

Промежуточное соединение 113. Метил-6-хлор-5-(пиперазин-1-ил)пиколинат

Пиперазин (1,0 г, 11,61 ммоль) добавляли к метил-6-хлор-5-фторпиколинату (промежуточному соединению 112, 1,0 г, 5,28 ммоль) в MeCN (30 мл). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 18 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с обращенной фазой, градиент элюирования 5-60% MeCN в воде (0,1% NH4HCO₃). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением метил-6-хлор-5-(пиперазин-1ил)пиколината (промежуточного соединения 113, 1,28 г, 95%) в виде красного масла. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 2,81 - 2,91 (4H, m), 3,04 - 3,08 (4H, m), 3,85 (3H, s), 7,61 (1H, d), 8,00 (1H, d) (протон NH не показан); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=256.

Промежуточное соединение 30. 6-Хлор-Ы-метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид

М раствор метиламина в THF (40 мл, 80,00 ммоль) добавляли к метил-6-хлор-5-(пиперазин-1ил)пиколинату (промежуточному соединению 113, 1,26 г, 4,93 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 18 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с обращенной фазой, градиент элюирования 5-60% MeCN в воде (0,1% NH4HCO3). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 6-хлор-Ы-метил-5(пиперазин-1-ил)пиколинамида (промежуточного соединения 30, 1,12 г, 89%) в виде бледно-желтого масла. 1H ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 2,79 (3H, d), 2,85 - 2,89 (4H, m), 2,97 - 3,02 (4H, m), 7,63 (1H, d), 7,94 (1H, d), 8,45 (1H, q) (протон пиперазин-NH не показан); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=255.

Промежуточное Промежуточное Промежуточное соединение 11 соединение 114 соединение 32

Промежуточное соединение 114. трет-Бутил-4-[2-фтор-6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин1-карбоксилат трет-Бутил-4-(2-фтор-6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилат (промежуточное соединение 11, 12,49 г, 36,80 ммоль) в метиламине (120 мл, 36,80 ммоль, 33 вес.% в этаноле) перемешивали при к. т. в течение 24 ч (в закрытой пробирке). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM, и фильтровали через слой силикагеля, и промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил-4-[2-фтор-6-(метилкарбамоил)-3пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 114,12,45 г, 100%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 1,42 (9H, s), 2,77 (3H, d), 3,04 - 3,16 (4H, m), 3,43 - 3,56 (4H, m), 7,59 (1H, dd), 7,80 - 7,93 (1H, m), 8,41 (1H, q); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=340.

Промежуточное соединение 32. 6-Фтор-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамид

HCl (4 M в диоксане, 100 мл, 400,00 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил-4-[2-фтор-6(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 114, 12,5 г, 36,94 ммоль) в 1,4-диоксане (50 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч, в течение которых температуру повышали до комнатной температуры, с получением желтой суспензии. Суспензию разбавляли эфиром, твердое вещество отфильтровывали и промывали эфиром. Данное твердое вещество высушивали под вакуумом с получением 6-фтор-Ы-метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида, 2HCl (промежуточного соединения 32, 11,42 г, 99%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ ppm 2,8 (d, J=4,6 Гц, 3H) 3,3 (br s, 4H) 3,4 (br d, J=4,4 Гц, 4H) 7,6 - 7,7 (m, 1H) 7,9

- 51 048005 (d, J=8,1 Гц, 1H) 8,4 (br d, J=4,4 Гц, 1H) 9,0 - 9,3 (m, 2H); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=239

Промежуточное соединение 14

Промежуточное соединение 115

о

Промежуточное соединение 116

Промежуточное соединение 33

Промежуточное соединение 115. 5-Бром-Ы/6-диметилпиколинамид

М раствор метиламина в THF (20 мл, 40,00 ммоль) добавляли к метил-5-бром-6-метилпиколинату (промежуточному соединению 14, 2,0 г, 8,69 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 18 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с обращенной фазой, градиент элюирования 5-80% MeOH в воде (0,1% NH₄HCO₃). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 5-бром-Ы/6диметилпиколинамида (промежуточного соединения 115, 1,5 г, 75%) в виде бледно-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 2,65 (3H, s), 2,82 (3H, d), 7,75 (1H, d), 8,17 (1H, d), 8,57 - 8,76 (1H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=229

Промежуточное соединение 116. трет-Бутил-4-(2-метил-6-(метилкарбамоил)пиридин-3-ил)пипера зин-1-карбоксилат

5-Бром-Ы/6-диметилпиколинамид (промежуточное соединение 115, 1,0 г, 4,37 ммоль) добавляли к трет-бутилпиперазин-1-карбоксилату (0,894 г, 4,80 ммоль), BINAP (0,272 г, 0,44 ммоль), Pd(OAc)2 (0,098 г, 0,44 ммоль) и Cs₂CO₃ (3,56 г, 10,91 ммоль) в толуоле (20 мл) в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 16 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством хроматографии с обращенной фазой, градиент элюирования 530% MeOH в воде (0,4% HCO2H). Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением третбутил-4-(2-метил-6-(метилкарбамоил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 116, 1,2 г, 82%) в виде коричневого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 1,50 (9H, s), 2,58 (3H, s), 2,92 - 3,00 (7H, m), 3,62 (4H, m), 7,50 (1H, d), 7,88 (1H, d); масса/заряд (ES+) [M+H]⁺=335.

Промежуточное соединение 33. ^6-Диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамид трет-Бутил-4-(2-метил-6-(метилкарбамоил)пиридин-3 -ил)пиперазин-1 -карбоксилат (промежуточное соединение 115, 1,18 г, 3,53 ммоль) добавляли к 4 М раствору HCl в 1,4-диоксане (10 мл, 329,15 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Осадок собирали посредством фильтрации, промывали петролейным эфиром (5 млх2), Et₂O (5 млх2) и высушивали под вакуумом с получением ^6-диметил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинамида (промежуточного соединения 33, 0,77 г, 81%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, CD3OD) δ 2,86 (3H, s), 3,02 (3H, s), 3,42 - 3,54 (8H, m), 8,29 (2H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=235.

Промежуточное соединение 117. трет-Бутил-4-(6-метоксикарбонил-3 -пиридил)пиперазин-1 карбоксилат

Ruphos Pd G3 (4,07 г, 4,86 ммоль) добавляли к дегазированной смеси метил-5-бромпиридин-2карбоксилата (промежуточного соединения 9, 30 г, 138,87 ммоль), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (27,2 г, 145,81 ммоль), Cs₂CO₃ (90 г, 277,73 ммоль) в 1,4-диоксане (200 мл) и смесь перемешивали при 110°C в течение 6 ч в атмосфере N2. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли во дой, экстрагировали этилацетатом (150 млх3). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. К данному фильтрату добавляли 3-(диэтилентриамино)пропил

- 52 048005 функционализированный силикагель (12 г, загрузка 1,3 ммоль/г) и смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали до приблизительно 100 мл. Кристаллическое желтое твердое вещество отфильтровывали, промывали эфиром и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил-4-(6-метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 117, 26,36 г, 82 ммоль, 59,1%) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМd) 1,50 (9H, s), 3,31 - 3,42 (4H, m), 3,56 - 3,68 (4H, m), 3,98 (3H, s), 8,04 (1H, d), 8,37 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=322.

Промежуточное соединение 118. трет-Бутил-4-[6-(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1карбоксилат

Метиламин (100 мл, 1155,26 ммоль, 40% в воде) добавляли к раствору трет-бутил-4-(6метоксикарбонил-3-пиридил)пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 117, 36 г, 112,02 ммоль) в MeOH (100 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч с получением белой суспензии. Смесь концентрировали, остаток разделяли между насыщ. раствором NH₄Cl и DCM, слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью DCM, органические слои объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением трет-бутил-4-[6-(метилкарбамоил)-3 -пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 118, 35,9 г, 100%) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (500 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) 1,49 (9H, s), 3,02 (3H, d), 3,26 - 3,35 (4H, m), 3,58 - 3,67 (4H, m), 7,23 (1H, dd), 7,81 (1H, br d), 8,07 (1H, d), 8,16 (1H, d); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=321.

Промежуточное соединение 119. Метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколинат

М HCl в диоксане (20 мл, 576,01 ммоль) добавляли к смеси трет-бутил-4-(6(метоксикарбонил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 117, 1,55 г, 4,82 ммоль) в MeOH (2 мл) при 0°C, реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч с получением суспензии, результат LCMS указывал на полное превращение, смесь разбавляли эфиром (приблизительно 80 мл), твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали эфиром, высушивали с получением метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколината (промежуточного соединения 119) (1,384 г, 98%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 3,21 (4H, br s), 3,66 (4H, br d), 3,83 (3H, s), 7,43 -7,55 (1H, m), 7,95 (1H, br d), 8,43 (1H, br s), 9,49 (2H, br s); (масса/заряд) (ES+) [M+H]⁺=223,0.

Промежуточное соединение 31. Карбоксилат №метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2-карбоксамида

HCl (4 M в диоксане, 150 мл, 600,00 ммоль) добавляли к суспензии трет-бутил-4-[6(метилкарбамоил)-3-пиридил]пиперазин-1-карбоксилата (промежуточного соединения 118, 35,9 г, 112,05 ммоль) в MeOH (50 мл) и полученную оранжевую суспензию перемешивали при к. т. в течение 4 ч. Приблизительно 80 мл растворителя удаляли при пониженном давлении и смесь разбавляли смесью эфира и гексанов (200 мл, 1/1). Твердое вещество собирали посредством фильтрации, промывали гексанами, высушивали и высушивали под вакуумом с получением соли 2HCl №метил-5-пиперазин-1-илпиридин-2карбоксамида (промежуточного соединения 31, 37,0 г, 100%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) 2,79 (3H, d), 3,22 (4H, br s), 3,53 - 3,67 (4H, m), 7,51 (1H, dd), 7,91 (1H, d), 8,33 (1H, d), 8,50 (1H, br s), 9,19 - 9,49 (2H, m); масса/заряд (ES⁺) [M+H]⁺=221.

Пример 61. Получение кристаллической формы B 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил] -№метилпиридин-2-карбоксамида (безводной формы)

Способ 1 мг (0,10 ммоль) 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (например, из примера 20) суспендировали в 1,0 мл MeOH и добавляли 0,11 мл 1 М водного раствора метансульфоновой кислоты (MSA) с получением прозрачного раствора. К раствору добавляли 0,11 мл 1 н. водного раствора NaOH. Белое твердое вещество начинало выпадать в осадок после завершения добавления раствора NaOH. Взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. Фильтровали и высушивали на воздухе 36 мг белого твердого вещества. Результат XRPD демонстрирует, что твердое вещество представляет собой чистую форму В_6-Фтор-5-[4[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2-карбоксамида.

Способ 2

Пиридин (93,5 г) добавляли к раствору чистого мезилата 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (4,67 кг, полученного посредством способа 2 из примера 63) в воде (47,9 кг) и этаноле (38,0 кг) при 75 ± 5°C с последующим добавлением затравки, представляющей собой форму B 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хuноксалин-6ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (4,7 г), полученной согласно способу 1. Взвесь перемешивали при 75 ± 5°C в течение 40 мин, затем постепенно добавляли раствор пиридина (651 г) в смеси вода:этанол 50:50 объем:объем (4,2 кг) на протяжении 3 ч 40 мин. Взвесь перемешивали при 75 ± 5°C в течение 50 мин, затем постепенно добавляли раствор 4-метилморфолина (900 г) в смеси вода:этанол 50:50 объем:объем (4,1 кг) на протяжении 3 ч 50 мин. Взвесь перемешивали при 75 ± 5°C в течение 1 ч 10 мин, охлаждали до 25 ± 5°C на протяжении 4 ч и 50 мин, перемешивали при 25 ± 5°C в течение 15 ч, затем фильтровали. Полученное твердое вещество два раза промывали смесью вода:этанол

- 53 048005

50:50 объем:объем (12,5 кгх2) и затем высушивали под вакуумом при от 25°C до 50°C в течение 1 дня с получением чистой формы B 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (3,54 кг) с выходом 93%.

Форму B из способа 1 анализировали посредством XRPD, и результаты представлены в таблице ниже (табл. 1) и показаны на фиг. 1.

Таблица 1

Пики XRPD для формы B

Угол (2Θ ± 0,2°)
18,2
9,6
9,1
18,7
12,7
8,5
10,0
20,1
21,7
23,2
12,4
16,1
14,3
6,2
15,6
27,4
26,4
29,7
27,1
25,0

Интенсивность (%)
100,0
86,7
80,7
55,8
24,1
23,9
15,6
14,8
13,9
12,3
12,2
9,6
9,2
8,9
7,7
6,9
6,6
6,2
6,0
5,0

Форма B характеризуется тем, что обеспечивает по меньшей мере одно из следующих значений угла 2θ, измеренных с применением излучения CuKa: 6,2, 14,3 и 15,6°.

Форму B (из способа 1) анализировали посредством методик термического анализа. Результаты DSC-анализа указывали на то, что форма B характеризуется точкой плавления с началом при 275°C и пиком при 276°C. Результаты TGA указывали на то, что форма B характеризуется потерей массы, составляющей приблизительно 0,2%, при нагревании от приблизительно 25°C до приблизительно 100°C. Иллюстративная термограмма DSC/TGA формы B показана на фиг. 2.

Пример 62. Получение кристаллической формы D 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (безводной формы).

Растворяли 5-6 мг 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил]-^метилпиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 20) в смешанных растворителях MeOH/DCM/H2O (0,50 мл/0,50 мл/0,20 мл), прозрачный раствор медленно выпаривали в условиях окружающей среды с получением белого твердого вещества. Результат XRPD демонстрирует, что полученное белое твердое вещество представляет собой форму D 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-^метилпиридин-2-карбоксамида.

Форму D анализировали посредством XRPD и результаты приведены в таблице ниже (табл. 2) и показаны на фиг. 3.

- 54 048005

Таблица 2

Форма D характеризуется тем, что обеспечивает по меньшей мере одно из следующих значений угла 2θ, измеренных с применением излучения CuKa: 7,9, 13,1 и 16,3°.

Монокристаллы формы D получали посредством выпаривания раствора (или смеси DMF/H₂O) 6фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксαлин-6-ил)метил]пиперαзин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида в DMF. Анализ структуры монокристалла подтверждал, что форма D представляет собой безводную форму. Молекулярная структура формы D 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Нхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-^метилпиридин-2-карбоксамида показана на фиг. 4. Кристаллографические данные: моноклинная пространственная группа Р21/с, размеры элементарной ячейки: a=17,4559(8) A, b=5,0647(2) A, c=22,564(1) А, β=92,609(1)°, V=1992,8(2) А³.

Пример 63. Получение кристаллической формы C соли MSA 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (безводной формы).

Способ 1

427 мг 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метил пиридин-2-карбоксамида (иллюстративного соединения 20) суспендировали в 8,0 мл MeOH. К суспензии добавляли 1,1 мл 1,0 М водного раствора MSA (1,1 ммоль), получали прозрачный раствор. Полученный раствор фильтровали и удаляли растворители из прозрачного раствора. Полученное твердое вещество суспендировали в 1,0 мл EtOH и 2,0 мл THF с получением взвеси. Взвесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 дня. Твердое вещество собирали посредством фильтрации и высушивали на воздухе. Получали 452 мг грязно-белого твердого вещества. Результат XRD демонстрирует, что была получена форма C соли MSA 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1ил] -N-метилпиридин-2-карбоксамида.

Способ 2

Метансульфоновую кислоту (16,8 г) добавляли к перемешиваемой суспензии 6-фтор-5-[4-[(5-фтор2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-№метилпиридин-2-карбоксамида (80,8 г, 92,8% вес./вес.) в смеси Т№:этанол 4:1 объем/объем (750 мл) при 25°C. Полученную суспензию перемешивали при 25°C в течение 16 ч и затем фильтровали. Твердое вещество промывали смесью Т№:этанол 4:1 объем:объем (300 мл) и затем высушивали при 35°C под вакуумом с получением формы C мезилата 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]метилпиридин-2-карбоксамида (90,3 г) с выходом 98%.

- 55 048005

MSA-форму C из способа 1 анализировали посредством XRPD и результаты представлены в таблице ниже (табл. 3) и показаны на фиг. 5.

Таблица 3

MSA-форму C, полученную способом 1, анализировали посредством методик термического анализа. Результаты DSC-анализа указывали на то, что MSA-форма C начинает плавиться и разлагаться при температуре с началом при 254°C и пиком при 258°C. Результаты TGA указывали на то, что MSA-форма C характеризуется потерей массы, составляющей приблизительно 0,3%, при нагревании от приблизительно 25°C до приблизительно 100°C. Иллюстративная термограмма DSC/TGA MSA-формы C показана на фиг. 6

Биологические анализы

Следующие процедуры тестирования можно применять для определения ингибирующих свойств соединений, описанных в данном документе.

Анализы связывания PARP на основе анизотропии флуоресценции

Рекомбинантный полноразмерный белок PARP1 с меткой 6HIS разбавляли до 6 нМ с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl₂, 150 мМ NaCl и инкубировали в течение четырех часов с эквивалентным объемом флуоресцентного зонда с концентрацией 2 нМ, разбавленного с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl₂, 150 мМ NaCl. Конечную концентрацию DMSO в растворе зонда поддерживали ниже 1% (объем/объем).

Рекомбинантный полноразмерный белок PARP2 разбавляли до 6 нМ с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl₂, 150 мМ NaCl и инкубировали в течение четырех часов с эквивалентным объемом флуоресцентного зонда с концентрацией 2 нМ, разбавленного с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl₂, 150 мМ NaCl. Конечную концентрацию DMSO в растворе зонда поддерживали ниже 1% (объем/объем).

Рекомбинантный полноразмерный белок PARP3 разбавляли до 100 нМ с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl2, 150 мМ NaCl и инкубировали в течение четырех часов с эквивалентным объемом флуоресцентного зонда с концентрацией 6 нМ, разбавленного с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl₂, 150 мМ NaCl. Конечную концентрацию DMSO в растворе зонда поддерживали ниже 1% (объем/объем).

Рекомбинантный связывающий домен PARP5a разбавляли до 160 нМ с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl₂, 150 мМ NaCl и инкубировали в течение четырех часов с эквивалентным объемом флуоресцентного зонда с концентрацией 6 нМ, разбавленного с помощью 50 мМ Трис

- 56 048005 с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl2, 150 мМ NaCl. Конечную концентрацию DMSO в растворе зонда поддерживали ниже 1% (объем/объем).

Рекомбинантный полноразмерный белок PARP6 с меткой GST разбавляли до 160 нМ с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl2, 150 мМ NaCl и инкубировали в течение четырех часов с эквивалентным объемом флуоресцентного зонда с концентрацией 6 нМ, разбавленного с помощью 50 мМ Трис с pH 8, 0,001% Triton X100, 10 мМ MgCl2, 150 мМ NaCl. Конечную концентрацию DMSO в растворе зонда поддерживали ниже 1% (объем/объем).

Анизотропию флуоресценции зонда при связывании с белками измеряли с применением BMG Pherastar FSX© в присутствии тестируемых соединений или контроля с растворителем и определяли влияние на анизотропию. Рассчитывали процентные значения ингибирования для различных концентраций тестируемого соединения и аппроксимировали относительно четырехпараметрического логистического графика с целью определения значения IC₅₀. При необходимости Ki соединения можно определить на основе значения IC₅₀ с применением уравнения Мансона-Родбарда, определение которого представлено в Anal Biochem. 1980 Sep 1;107(1):220-39, и на основе известной KD зонда, связывающегося с соответствующим белком PARP.

Анализ пролиферации с применением PARP (введение дозы соединения в течение 7 дней)

Клетки DLD1 и BRCA2 (-/-) DLD1 собирали с получением плотности 5000 клеток/мл и 2,5E4 клеток/мл соответственно в полной среде, высевали при 40 мкл/лунка в 384-луночные планшеты (Greiner, Кремсмюнстер, Австрия; 781090) с применением Multidrop Combi, затем инкубировали при 37°C, 5% CO₂ в течение ночи. На следующий день (день 1) с применением Multidrop Combi добавляют sytox green (5 мкл, 2 мкМ) и сапонин (10 мкл, 0,25% исходный раствор) в планшет дня 0, герметично закрывают планшет с применением черной клейкой крышки и инкубируют в течение более 3 ч при к. т. Клетки визуализировали с применением Cell Insight (Thermo Fisher), оснащенного 4x объективом. Тестируемые соединения добавляли с применением Echo 555 и помещали в инкубатор с поддержанием 37°C, 5% CO₂ и инкубировали в течение 7 дней. В день 8 добавляют sytox green (5 мкл, 2 мкМ) и затем сапонин (10 мкл, 0,25% исходный раствор) в планшеты, герметично закрывают планшет с применением черной клейкой крышки и инкубируют в течение более 3 ч при к. т. Все клетки анализируют с помощью Cell Insight с 4x объективом. Скорость пролиферации определяют в Genedata посредством оценки общего количества клеток, полученного с помощью Cell Insight для планшетов дня 0 и дня 8.

Анализ эффлюкса транспортеров человека in vitro

Клетки MDCKII, экспрессирующие MDR1 и BCRP, высевали на полиэтиленовые мембраны в 96луночные системы Transwell insert при плотности, обеспечивающей образование монослоя конфлюэнтных клеток. Тестируемые и эталонные соединения разбавляли буфером для переноса (HBSS HEPES, pH7,4) до концентрации 1 или 0,1 мкМ. Конечный объемный процент органического растворителя составлял менее 1%. Проникновение тестируемых соединений в направлении от A до B и в направлении от B до A определяли на протяжении инкубации продолжительностью 90 мин при 37°C и 5% CO2 при относительной влажности 95%. В конце инкубации отбирали образцы с апикальной и базолатеральной сторон и затем осаждали холодным ацетонитрилом, содержащим внутренний стандарт. После центрифугирования при 4000 об/мин надосадочную жидкость разбавляли 0,1% водным раствором муравьиной кислоты и определяли количественно посредством LC-MS/MS. Целостность монослоев клеток подтверждали с применением маркера Lucifer yellow.

Коэффициент проницаемости (1х 10^-6 см/с) рассчитывали с применением следующего уравнения:

Papp=(dCr/dt)xVr/(AxC0);

(1) коэффициент эффлюкса рассчитывали с применением следующего уравнения: коэффициент эффлюкса=Papp(от B до A^app^ A до B), (2) где dCr/dt представляет собой кумулятивную концентрацию соединения в приемной камере в виде функции времени (в мкМ/с); Vr представляет собой объем раствора в приемной камере (0,1 мл на апикальной стороне и 0,3 мл на базолатеральной стороне); A представляет собой площадь поверхности для переноса, то есть 0,11 см² для площади монослоя, и C0 представляет собой исходную концентрацию в донорной камере (в мкМ).

Определение несвязанной фракции в плазме крови

Несвязанную фракцию определяли с применением RED Device.

Соединения получали в виде 10 мМ растворов в DMSO. Рабочий исходный 1 мМ раствор получали посредством смешивания не более 9 тестируемых соединений (4 мкл каждого) и 1 контроля (мкл). Если включали менее чем 9 тестируемых соединений, то добавочный объем интактного раствора DMSO добавляли для доведения объема до 40 мкл.

Замороженную плазму крови размораживали на водяной бане при 37°C. Затем плазму крови центрифугировали в течение 2 минут при 4000 об/мин с удалением сгустков и отбором надосадочной жидкости в новую пробирку. Контролировали pH плазмы крови и использовали, если ее значение pH находилось в диапазоне от pH 7 до pH 8. Добавляли 3 мкл рабочего раствора из каждой кассеты к 597 мкл интактной плазмы крови и встряхивали в течение 5 минут при 1000 об/мин. Конечный объемный про

- 57 048005 цент органического растворителя составляет 0,5%, и конечная концентрация тестируемого соединения составляла 5 мкМ. Немедленно переносят 50 мкл суспензии плазмы крови с добавкой в 96-луночный планшет, которая выступает в качестве контрольного образца T=0. Образцы обрабатывают таким же образом, как и образцы после инкубации. Оставшуюся плазму крови выдерживают при 37°C до начала диализа.

Помещают вставки открытым концом вверх в лунки основного планшета. Добавляют 300 мкл образца плазмы крови с добавкой в камеру для образца, обозначенную с помощью красного кольца. Добавляют 500 мкл фосфатного буфера (pH 7,4) в камеру для буфера. Установку накрывают газопроницаемой крышкой и инкубируют в течение 18 часов при 37°C при 300 об/мин с 5% CO2 на орбитальном встряхивателе в инкубаторе с CO2. В конце инкубации убирают крышку и вносят с помощью пипетки 50 мкл образцов после диализа из камер как для буфера, так и для плазмы крови в отдельный 96-луночный планшет для анализа соответственно.

Образцы приводили в соответствие матричному раствору посредством добавления 50 мкл интактной плазмы крови крысы к образцам буфера и равного объема PBS к отобранным образцам плазмы крови и встряхивали для перемешивания. Добавляли 400 мкл ацетонитрила, содержащего подходящий внутренний стандарт (IS), к осадку белка и высвобожденного соединения и перемешивали посредством встряхивания планшета в течение 10 минут с последующим центрифугированием в течение 30 минут при 4000 об/мин. Переносили 250 мкл надосадочной жидкости в новые 96-луночные планшеты и снова центрифугировали (4000 об/мин, 30 минут). Затем переносили 100 мкл надосадочной жидкости в новые 96луночные планшеты и смешивали со 100 мкл дистиллированной воды для каждого образца посредством встряхивания в течение 5 минут при 1000 об/мин. Образцы анализировали посредством LC-MS/MS и концентрации лекарственного средства определяли в сравнении с калибровочной кривой, полученной для интактной плазмы крови с добавкой с типичным диапазоном концентраций, составляющим 1-7500 нМ.

Определяли % несвязанной фракции как % несвязанной фракции=(конц. в камере с буфером / конц. в камере с плазмой крови) х 100%. Несвязанная фракция=% несвязанной фракции/100.

Определение несвязанной фракции в срезе головного мозга

Принцип способа определения объема несвязанной фракции в срезах головного мозга был опубликован ранее (Development of a High-Throughput Brain Slice Method for Studying Drug Distribution in the Central Nervous System; Friden et al.,; Drug Metabolism and Disposition, 2009, 37 (6) 1226-1233). Краткое описание представлено ниже.

Получали исходные растворы соединения в DMSO с концентрацией 10 мМ. Рабочий исходный 1 мМ раствор получали посредством смешивания не более 9 тестируемых соединений (4 мкл каждого) и 1 контроля (4 мкл). Если включали менее чем 9 тестируемых соединений, то интактный раствор DMSO добавляли для доведения объема до 40 мкл. В день эксперимента 4 мкл разбавляли в 40 мл буфера ECF с получением раствора каждого из тестируемых соединений с концентрацией 100 нМ, который затем предварительно нагревали до 37°C перед началом инкубации.

Для получения срезов головного мозга крыс весом примерно 300 г подвергали эвтаназии посредством ингаляции изофлурана, головной мозг осторожно извлекали и погружали в ледяной оксигенированный буфер ECF. Головной мозг крысы переносили в емкость, содержащую ледяной буфер ECF с добавленным O₂, и подрезали лезвием перед приклеиванием к лотку микротома, при этом головной мозг помещали задней поверхностью вниз по центру лотка. Ледяной буфер ECF добавляли для затвердевания клея и увлажнения головного мозга. Лоток помещали в микротом и с применением подходящей скорости разрезания нарезали срезы толщиной 100-400 мкм до появления области стриатума. Для каждого головного мозга нарезали от четырех до шести коронарных среза областей стриатума толщиной 300 мкм и до инкубации помещали в ледяной буфер с добавленным O2. Шесть срезов переносили в лоток для инкубации, содержащий 40 мл предварительно нагретой (37°C) кассетной смеси. Время от момента извлечения головного мозга до помещения срезов в смесь составляло максимум 20 минут. Лоток для инкубации накрывали газопроницаемой крышкой и помещали на водяную баню при 37°C с нагнетанием в нее 02 и инкубировали при частоте встряхивания 45 об/мин в течение 5 ч.

Перед инкубацией 200 мкл кассетного раствора, не подвергнутого инкубации, сохраняли под названием образец T=0. Затем 200 мкл смешивали с 200 мкл интактного гомогената головного мозга в буфере ECF (4 объема (вес/объем)). После инкубации измеряют и регистрируют pH кассетного раствора, и значение pH должно быть выше 7,3. Переносили 200 мкл с поверхности кассетного раствора в пробирку, содержащую 200 мкл интактного гомогената головного мозга в буфере ECF (4 объема (вес/объем)). Каждый срез головного мозга высушивают на фильтровальной бумаге и взвешивают в пробирке eppendorf объемом 2 мл. После добавления 9 объемов (вес/объем) буфера ECF срезы гомогенизируют с помощью ультразвукового диспергатора. Образцы осаждали и разбавляли как описано ниже.

Аликвоты каждого образца объемом 50 мкл и 3х50 мкл из каждого кассетного раствора (смешанного с интактным гомогенатом) переносили в центрифужные пробирки объемом 0,6 мл. Образцы осаждают с 200 мкл ледяного ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт, и встряхивают при 2000 об/мин в

- 58 048005 течение 3 минут с последующим центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15 минут при 4°C. Переносили 100 мкл надосадочной жидкости в новый 96-луночный планшет для анализа и 100 мкл дистиллированной воды к каждому образцу и планшет встряхивали в течение 2 минут при 1000 об/мин для анализа посредством LC-MS/MS.

Затем смешанные образцы срезов дополнительно разбавляют в две стадии, в 10 и 100 раз, двойным объемом интактных образцов, полученных со 150 мкл интактного гомогената головного мозга в буфере ECF (4 объема (вес./объем)), переносят в центрифужные пробирки объемом 1,5 мл, содержащие 150 мкл буфера ECF, и встряхивают при 2000 об/мин в течение 2 минут. Образцы осаждают с 1200 мкл ледяного ацетонитрила и встряхивают при 2000 об/мин в течение 3 минут с последующим центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15 минут при 4°C. Затем переносят 100 мкл надосадочной жидкости в новый 96-луночный планшет для анализа. Добавляют 100 мкл дистиллированной воды к каждому образцу с получением интактных образцов двойного объема.

Объем несвязанной фракции головного мозга ^связанная фракция, головной мозг) рассчитывали как Vнесвязαнная фракция (Ссрез - Vo*Cecf)/(1-Vo)*Cecf, где С_срез, C_ECF и V₀ представляют собой количество лекарственного средства в срезе, концентрацию лекарственного средства в ECF (представляющую собой концентрацию лекарственного средства в головном мозге с ECF, т. е. свободную концентрацию) и адгезию воды в срезе головного мозга (0,0931) соответственно.

=1/V

Несвязанная фракция головного мозга Несвязанная фракция, головной мозг

Определение Kpuu у крысы несвязанная фракция, головной мозг

Отношение общее количество лекарственного средства/количество несвязанного лекарственного средства в плазме крови и общее количество лекарственного средства/количество несвязанного лекарственного средства в головном мозге (Kp/Kpuu) определяли следующим образом.

Соединения составляли в виде смеси при концентрации каждого 0,5 мМ в смеси тетраэтиленгликоль:диметилацетамид:вода 1:1:1 и вводили крысам Han Wistar посредством внутривенной инфузии при 2 мкмоль/кг/ч при объеме 4 мл/кг. Через 4 ч животных умерщвляли и собирали образцы головного мозга и крови. Получали плазму крови из крови и до анализа все образцы хранили в замороженном виде при 20°C. Следующие отобранные образцы головного мозга гомогенизировали в очищенной воде в соотношении 1:3 (вес/объем) и до анализа хранили в замороженном виде при -20°C.

Образцы плазмы крови и головного мозга анализировали посредством осаждения белка с последующей LC-MS/MS и концентрации определяли по калибровочной кривой, полученной посредством внесения добавки, представляющей собой лекарственное средство, в интактную плазму крови или гомо генат головного мозга крысы в подходящем диапазоне концентраций. Концентрацию в головном мозге корректировали для остаточного количества крови посредством вычитания 0,8% концентрации в плазме крови из общей концентрации в головном мозге.

Затем Kp рассчитывали следующим образом: Kp ((^[гомогенат головного мозга]) - (0,008*[плазма крови]))/[плазма крови].

Затем Kpuu рассчитывали следующим образом: Kpuu=Kp*(несвязанная фракция в срезе головного мозга/несвязанная фракция в плазме крови).

Таблица 4

Биологические данные

Иллюстративного соединения Номер	PARP1, IC50 (мкМ)	PARP2, IC50 (мкМ)	PARP3, IC50 (мкМ)	PARP5a, IC50 (мкМ)	PARP6, IC50 (мкМ)	hERG, IC50 (мкМ)	пролиф. BRCA2 DLD- 1 IC50 (мкМ) в d 7	Пролиф. DLD-1 WTIC50 (мкМ) в d7	MDCKMDR1- BCRP Коэффициент эффлюкса	<ριιιι у крысы
1	0,004	>70	>100	>100	>100	>40	0,014	24	0,7	0,07
2	0,011	15				>40	0,734
3	0,003	>100	>100	>100	>100	>40	0,008	25	1,3
4	0,005	>83	78	>100	>100	>40	0,081	>14	0,8	0,13
5	0,005	>63					2,89
6	0,004	>100
7	0,006	58					8,43	>30
8	0,004	>66	>100	>100	>100	>40	0,012	>7,9
9	0,004	>100	>100	>100	>100	>40	0,01	>10	0,4
10	0,013	>100	>100	>100	>100	>40	>30,0	>30

- 59 048005

И	0,003	>100	>100	>100	>100	>40	0,009	>30
12	0,015		85	>100	>100	>40	0,008		4,2
13	0,009	>100	62	>100	>100	>40	0,019	22	3,0
14	0,013	>83	52	>100	>100	>40	0,015		3,7
15	0,012	>100	43	>100	>100	>38	0,014		3,7
16	0,01	>100	>100	>29	>100	>40	3,62	>30
17	0,006	>100	>100	>100	>100	>40	1,05	>10
18	0,005	>100	>100	>100	>100	14	4,33	21
19	0,013	40				>40	0,006		2,4
20	<0,005	>93	>100	>100	>100	>40	0,008	>30	1,1	0,27
21	0,007	>100	5,8	>100	>100	>40	1,42		1,6
22	0,006	87
23	0,005	>67	>100	>100	>100	>40	0,003	>30	0,8	0,62
24	0,006	>81	>100	>100	>100	>36	0,003	>30	1,1
25	0,005	>100					0,297
26	0,005	88
27	0,004	>64	>100	>100	>100	>40	0,006	6,3	0,8	0,43
28	0,005	>100	>100	>100	>100	>38	0,004		0,8
29	0,015	>100	>100	>100	>100	>40	0,005	>10	0,7	0,33
30	0,006	>100	>100	>100	>100	>40	0,003	>30	1,8
31	0,007	>100	>100	>100	>100	>40	0,007	>30	1,6	0,19
32	0,007	>100	>100	>100	>100	>40	1,08	23
33	0,167	>100					>30,0
34	0,026	>100				29	8,44
35	0,03	>100					10,3	>30
36	0,022	>100					16,2
37	0,026	57					0,01		5,0
38	0,012	21	>100	>100	>100	>40	0,547
39	0,006	>100	>100	>100	>100	>40	0,008		1,9
40	0,011	>100	>100	13	>100	>40	0,007		2,0
41	0,005	>100	>100	>100	>100	>40	0,007		2,4
42	0,005	>88					0,006
43	0,005	>100					0,01
44	0,128	>100					>30,0
45	0,006	>100					0,006		1,5
46	0,01	>100					0,013
47	0,076	>100	>100	>100	>100	>40	0,058
48	0,039	26	>100	>100	>100	>40	0,018	27	8,8
49	0,043	11	>29	>100	>100	>40	0,041
50	0,060	35				>40	0,136
51	0,006	1,2
52	0,085	3,8
53	0,026	>100
54	0,111	>100
55	0,005	>100
56	0,008	>100
57	0,011	>100
58	0,008	>100
59	0,006	2,1
60	0,023	>100

-

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы I

где R¹ независимо выбран из H, С1.₄алкила, C₃.₆циклоαлкила, С_1-4фторалкила и С1.₄алкилокси;

R² независимо выбран из H, галогена, С_1-4алкила и С_1-4фторалкила, и

R³ представляет собой H или С_1-4алкил;

R⁴ представляет собой галоген или С_1-4алкил, или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, где R¹ выбран из любого из метила, этила, изопропила, циклопропила, 1,1 дифторэтила, 1 -фторэтила, трифторметила, дифторметила и метокси.
3. Соединение по п.2, где R¹ представляет собой метил или этил.
4. Соединение по любому из пп.1-3, где R² выбран из любого из H, хлора, фтора, метила и дифтор метила.
5. Соединение по п.4, где R² представляет собой фтор или метил.
6. Соединение по любому из пп.1-5, где R³ представляет собой метил или этил.
7. Соединение по любому из пп.1-6, где R⁴ выбран из любого из хлора, фтора и метила.
8. Соединение по п.7, где R⁴ представляет собой фтор.
9. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой С1.4алкил, R² представляет собой галоген, R³ представляет собой С1.4алкил, R⁴ представляет собой галоген или С1.₄алкил, или его фармацевтически прием лемая соль.
10. Соединение по п.1, выбранное из

5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хuноксαлин-6-ил)метил]пиперαзин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида,

6-хлор-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фторпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2карбоксамида,

6-хлор-5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-хлор-2-этил-3-оксо-4H-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[[5-фтор-2-[(^ и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]У-метилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[[5-фтор-2-[(18 и 1R)-1-фторэтил]-3-оксо-4H-хиноксaлин-6-ил]метил]пиперaзин-1-ил]-N,6диметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-N-метилпиридин2-карбоксамида,

5-[4-[(5-хлор-2-метил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N,6-диметилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[[2-(1,1 -дифторэтил)-5-фтор-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1 -uh]-N,6диметилпиридин-2-карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4H-хuноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-N-метилпиридин2-карбоксамида,

- 61 048005

6-(дифторметил)-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2 -карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6-диметилпирвдин-2карбоксамида,

6-(дифторметил)-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпиридин-2карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Н-метилпирвдин2-карбоксамида,

6-хлор-5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

6-хлор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин2-карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6-диметилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2-карбоксамвда, 6-хлор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6-диметилпиридин-2карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[(5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[[2-(дифторметил)-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Н,6диметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6-диметилпирвдин2-карбоксамида,

6-хлор-5-[4-[(5-фтор-2-метокси-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6-диметилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Н-метилпирвдин2-карбоксамида,

5-[4-[(2-этил-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил|пиперазин-1-ил|-Н-метилпиридин-2карбоксамида, №этил-6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]пиридин2-карбоксамида, №этил-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-метилпирвдин2-карбоксамида,

5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Н,6диметилпиридин-2-карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

6-хлор-5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[[5-фтор-3-оксо-2-(трифторметил)-4Н-хиноксалин-6-ил]метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6диметилпиридин-2-карбоксамида,

- 62 048005

5-[4-[(5-фтор-2-изопропил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин-2карбоксамида,

5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-6-фтор-Нметилпиридин-2 -карбоксамида,

5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6диметилпиридин-2-карбоксамида,

5-[4-[(2-циклопропил-5-фтор-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н-метилпирвдин2-карбоксамида,

5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Н,6-диметилпирвдин2-карбоксамида,

6-фтор-5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида,

6-(дифторметил)-5-[4-[(2-метокси-5-метил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида и

6-(дифторметил)-5-[4-[(2,5-диметил-3-оксо-4Н-хиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Нметилпиридин-2-карбоксамида, или его фармацевтически приемлемая соль.
11. Соединение по п.1, которое представляет собой 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил]пиперазин-1-ил]-Ы-метилпиридин-2-карбоксамид, или его фармацевтически приемлемая соль.
12. Соединение по п.1, которое представляет собой 6-фтор-5-[4-[(5-фтор-2-метил-3-оксо-4Hхиноксалин-6-ил)метил] пиперазин-1-ил] -Ы-метилпиридин-2-карбоксамид.
13. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-12 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый разбавитель, вспомогательное вещество или инертный носитель.
14. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 в качестве лекарственного препарата.
15. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 для лечения рака.
16. Применение по п.15, где при указанном раке имеет место дефект HR-зависимого пути репарации DSB ДНК.
17. Применение по п.15, где указанный рак предусматривает одну или несколько раковых клеток, обладающих сниженной или подавленной способностью к репарации DSB ДНК посредством HR по сравнению с нормальными клетками.
18. Применение по п.15 или 16, где указанные раковые клетки характеризуются фенотипом, дефектным в отношении BRCA1 или BRCA2.
19. Применение по п.18, где указанные раковые клетки являются дефектными в отношении BRCA1 или BRCA2.
20. Применение по любому из пп.16-19, где указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в гене, кодирующем компонент HR-зависимого пути репарации DSB ДНК.
21. Применение по п.20, где указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в BRCA1 и/или BRCA2.
22. Применение по любому из пп.15-21, где рак выбран из любого из рака молочной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, гематологического рака, рака желудочно-кишечного тракта, рака легкого и рака головного мозга.
23. Способ лечения заболевания или состояния, при которых ингибирование PARP1 является благоприятным, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 пациенту, нуждающемуся в этом.
24. Способ лечения по п.23, где у пациента, нуждающегося в лечении, имеется рак.
25. Способ по п.24, где при указанном раке имеет место дефект HR-зависимого пути репарации DSB ДНК.
26. Способ по п.24, где указанный рак предусматривает одну или несколько раковых клеток, обладающих сниженной или подавленной способностью к репарации DSB ДНК посредством HR по сравнению с нормальными клетками.
27. Способ по п.25 или 26, где указанные раковые клетки характеризуются фенотипом, дефектным в отношении BRCA1 или BRCA2.
28. Способ по п.27, где указанные раковые клетки являются дефектными в отношении BRCA1 или BRCA2.
29. Способ по любому из пп.25-28, где указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в гене, кодирующем компонент HR-зависимого пути репарации DSB ДНК.
30. Способ по п.29, где указанный индивидуум является гетерозиготным по мутации в BRCA1 и/или BRCA2.

-