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CN118302199A - 抗cdh6抗体及其抗体-药物偶联物 - Google Patents

抗cdh6抗体及其抗体-药物偶联物 Download PDF

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CN118302199A
CN118302199A CN202280076590.9A CN202280076590A CN118302199A CN 118302199 A CN118302199 A CN 118302199A CN 202280076590 A CN202280076590 A CN 202280076590A CN 118302199 A CN118302199 A CN 118302199A
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CN
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amino acid
acid sequence
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antibody
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孟逊
刘淑惠
史静
王明桥
潘荣
蒋岳云
王一强
王朝晖
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Puzhong Discovery Pharmaceutical Technology Shanghai Co ltd
Original Assignee
Puzhong Discovery Pharmaceutical Technology Shanghai Co ltd
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Application filed by Puzhong Discovery Pharmaceutical Technology Shanghai Co ltd filed Critical Puzhong Discovery Pharmaceutical Technology Shanghai Co ltd
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Abstract

本申请涉及具有以下特性的抗原结合蛋白：(a)特异性结合CDH6，以及(b)具有通过结合CDH6而内化至表达CDH6的细胞中的活性。本公开进一步提供了包含特异性结合CDH6的表位并具有内化活性的抗体或其抗原结合片段的免疫偶联物、包含该免疫偶联物并对肿瘤具有治疗效果的药物产品、使用该免疫偶联物或该药物产品治疗肿瘤的方法等。

Description

抗CDH6抗体及其抗体-药物偶联物
本专利申请要求2021年12月10日提交的PCT申请PCT/CN2021/136994和2021年12月10日提交的CN申请CN2021115076855的优先权，这些在先申请的公开内容被认为是本申请公开内容的一部分，上述申请的全部内容被纳入本文。
本申请通过引用与本申请一起作为XML文件的序列列表，该文件题为"0283-PA-002.xml"，创建于2022年11月01日，其大小为149,920字节。
背景技术
钙粘蛋白6(CDH6)在发育阶段在脑或肾中特异性表达，并且已有报道称其在中枢神经系统的回路形成和肾中肾单位发育中起重要作用。CDH6在成人正常组织中的表达定位于肾小管、胆管上皮细胞等。
同时，已知CDH6在某些类型的成人癌症中在肿瘤位点处特异性过表达。CDH6在人肾细胞癌，特别是肾透明细胞癌和乳头状肾细胞癌中的表达与不良预后的相关性及其作为肿瘤标记物的适用性已有报道。CDH6在人卵巢癌中高表达也已有报道。也有报道称CDH6参与人甲状腺癌的上皮-间质细胞转换。此外，还有报道称CDH6也在人胆管癌和人小细胞肺癌中表达。
抗体-药物偶联物(“ADC”)已经用于在癌症治疗中局部递送细胞毒性剂(参见例如Lambert，Curr.Opinion In Pharmacology，第5卷：第543-549页，2005年)。ADC允许靶向递送药物部分，在这种情况下可实现最大疗效和最小毒性。尽管最近FDA批准了六种新的抗体-药物偶联物(ADC)，ADC研发看似前景不错，但在临床开发期间ADC的损耗仍然很高。
由Daiichi Sankyo开发的DS-6000a是唯一报道的正在研究中(I期临床阶段)的CDH6定向抗体-药物偶联物(ADC)。DS-6000a由人源化抗CDH6 IgG1单克隆抗体组成，该单克隆抗体经由基于四肽的可切割接头附接到拓扑异构酶I抑制剂有效载荷(依喜替康衍生物)上。DS-6000a尚未在任何国家被批准用于任何适应症，并且其安全性和有效性有待确定。
因此，仍然需要用于治疗对酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂和/或化疗药物具有抗性或具有高度抗性倾向的癌症的改善方法，特别是使用CDH6-ADC。
发明内容
本申请提供了一种抗原结合蛋白，该抗原结合蛋白具有以下性质中的一种或多种：
i)在ELISA测定中能够以小于12.5ng/mL的灵敏度结合CDH6蛋白；
ii)在ELISA测定中能够以低于约3.1×10-9M的KD值结合CDH6蛋白；以及
iii)在结合CDH6时能够被表达CDH6的细胞内化。
在一些实施方案中，CDH6是哺乳动物CDH6蛋白。
在一些实施方案中，CDH6是人CDH6蛋白。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中该参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
VH包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或者
VH包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，该抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、完整抗体、人抗体、人源化抗体和/或嵌合抗体。
在一些实施方案中，该抗原结合片段包括Fab、Fab'、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。
在一些实施方案中，该抗体是单克隆抗体。
在一些实施方案中，该抗体是嵌合抗体、人源化抗体和/或人抗体。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包含重链可变区(VH)的至少一个CDR(互补决定区)，VH包含如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:67、SEQID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗体或抗原结合片段包含轻链可变区(VL)的至少一个CDR，VL包含如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQID NO:104所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR2包含如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR3包含如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含框架区HFR1，HFR1的C末端直接或间接连接至HCDR1的N末端，并且HFR1包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:37、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含框架区HFR2，HFR2位于HCDR1和HCDR2之间，并且HFR2包含SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:38或SEQ IDNO:48所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含框架区HFR3，HFR3位于HCDR2和HCDR3之间，并且HFR3包含SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:49或SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含框架区HFR4，HFR4的N末端直接或间接连接至HCDR3的C末端，并且HFR4包含SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:40或SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，HFR1的C末端直接或间接连接至HCDR1的N末端，HFR2位于HCDR1和HCDR2之间，HFR3位于HCDR2和HCDR3之间，并且HFR4的N末端直接或间接连接至HCDR3的C末端；其中HFR1包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，HFR3包含SEQID NO:16所示的氨基酸序列，并且HFR4包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；或者
HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，HFR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，并且HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或者
HFR1包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，HFR2包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，HFR3包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，并且HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列；或者
HFR1包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，HFR3包含SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，并且HFR4包含SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；或者
HFR1包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列，HFR2包含SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，HFR3包含SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，并且HFR4包含SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列；或者
HFR1包含SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列，HFR2包含SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，HFR3包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列，并且HFR4包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH，其中VH包含如SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含抗体重链恒定区。
在一些实施方案中，该抗体重链恒定区包含源自人IgG的恒定区；任选地，该抗体重链恒定区包含源自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区。
在一些实施方案中，该抗体重链恒定区包含如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗体重链包含如SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，LCDR1包含如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，LCDR2包含如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，LCDR3包含如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
其中LCDR1包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或者
其中LCDR1包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或者
其中LCDR1包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH和VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH和VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:92所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:100所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含框架区LFR1，LFR1的C末端直接或间接连接至LCDR1的N末端，并且LFR1包含SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:30、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含框架区LFR2，LFR2位于LCDR1和LCDR2之间，并且LFR2包含SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:56或SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含框架区LFR3，LFR3位于LCDR2和LCDR3之间，并且LFR3包含SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含框架区LFR4，LFR4的N末端直接或间接连接至LCDR3的C末端，并且LFR4包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:45或SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中LFR1的C末端直接或间接连接至LCDR1的N末端，LFR2位于LCDR1和LCDR2之间，LFR3位于LCDR2和LCDR3之间，并且LFR4的N末端直接或间接连接至LCDR3的C末端；其中LFR1包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列；或者
LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；或者
LFR1包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；或者
LFR1包含SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列；或者
LFR1包含SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列；或者
LFR1包含SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列；或者
LFR1包含SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，LFR2包含SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，LFR3包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，并且LFR4包含SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VL，其中VL包含如SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含VH和VL，其中VH包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含抗体轻链恒定区。
在一些实施方案中，该抗体轻链恒定区包含人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
在一些实施方案中，该抗体轻链恒定区包含如SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗体轻链包含如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该抗原结合蛋白包含抗体重链和抗体轻链，其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；或者
其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列；或者
其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列；或者
其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
在另一方面，本申请提供了一种特异性结合CDH6的抗原结合蛋白，包括
(i)VL包含VL CDR1,CDR2以及CDR3，其中VL包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列；和/或VH包含VH CDR1,CDR2以及CDR3，其中VH包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；
(ii)VL包含VL CDR1,CDR2以及CDR3，其中VL包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列；和/或VH包含VH CDR1,CDR2以及CDR3，其中VH包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；
(iii)VL包含VL CDR1,CDR2以及CDR3，其中VL包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列；和/或VH包含VH CDR1,CDR2以及CDR3，其中VH包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；
(iv)VL包含VL CDR1,CDR2以及CDR3，其中VL包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列；和/或VH包含VH CDR1,CDR2以及CDR3，其中VH包含如SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；
(v)VL包含VL CDR1,CDR2以及CDR3，其中VL包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列；和/或VH包含VH CDR1,CDR2以及CDR3，其中VH包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；
(vi)VL包含VL CDR1,CDR2以及CDR3，其中VL包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列；和/或VH包含VH CDR1,CDR2以及CDR3，其中VH包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
在另一方面，本申请提供了一种抗原结合蛋白，其与前述抗原结合蛋白竞争性结合CDH6。
在另一方面，本申请提供了一种多肽，该多肽包含上述抗原结合蛋白。
在另一方面，本申请提供了一种或多种核酸分子，该一种或多种核酸分子编码上述抗原结合蛋白或上述多肽。
在另一方面，本申请提供了一种载体，该载体包含上述核酸分子。
在另一方面，本申请提供了一种细胞，该细胞包含上述核酸分子或上述载体，或者表达上述抗原结合蛋白或上述多肽。
在另一方面，本申请提供了一种用于制备上述抗原结合蛋白的方法，其中该方法包括在表达上述抗原结合蛋白的条件下培养上述细胞。
在另一方面，本申请提供了一种药物组合物，该药物组合物包含上述抗原结合蛋白、上述多肽、上述核酸分子、上述载体和/或上述细胞，以及任选的药学上可接受的载体。
在另一方面，本申请提供了一种试剂盒，该试剂盒包含上述抗原结合蛋白、上述多肽或上述药物组合物。
在另一方面，本申请提供了上述抗原结合蛋白、上述多肽、上述核酸分子、上述载体和/或上述细胞以及/或者上述药物组合物在制备用于预防和/或治疗CDH6相关疾病或病症的药物中的用途。
在一些实施方案中，该CDH6相关疾病或病症包括肿瘤。
在一些实施方案中，该肿瘤包括表达CDH6的肿瘤。
在一些实施方案中，该肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、肝癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
在一些实施方案中，该药物进一步包含另外的治疗剂。
在另一方面，本申请提供了一种免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，该免疫偶联物包含上述抗原结合蛋白。
在一些实施方案中，该免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物进一步包含偶联到抗体或其抗原结合片段的活性部分。
在一些实施方案中，该活性部分包含药物部分和/或标记。
在一些实施方案中，该药物部分选自由以下项组成的组：细胞毒性剂、细胞因子、核酸、核酸相关分子、放射性核素、趋化因子、免疫(共)刺激分子、免疫抑制分子、死亡配体、凋亡诱导蛋白、激酶、前药转化酶、核糖核酸酶、激动性抗体或抗体片段、拮抗性抗体或抗体片段、生长因子、激素、凝血因子、纤溶活性蛋白、模拟这些物质的肽，以及它们的片段、融合蛋白或衍生物。
在一些实施方案中，该标记选自由以下项组成的组：放射性标记、荧光团、发色团、显影剂和金属离子。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含微管破坏药物和/或DNA损伤剂。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含微管蛋白抑制剂和/或拓扑异构酶抑制剂。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含拓扑异构酶I抑制剂。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含喜树碱(CPT)或其衍生物。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含式II的结构或其同分异构体(tautomer)、内消旋体(mesomer)、外消旋体(racemate)、对映体(enantiomer)或非对映体(diastereomer)，或其混合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
在一些实施方案中，该免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物包含式(I)的抗体-药物偶联物(ADC)：
Ab-(L-(D)m)n，
(I)
其中Ab是前述抗原结合蛋白；
L是接头；
D是药物部分；
m是1至8的整数；并且
n是1至10的任何数。
在一些实施方案中，L选自：可切割接头和不可切割接头。
在一些实施方案中，L包括可切割肽。
在一些实施方案中，该可切割肽可被酶切割。
在一些实施方案中，该酶包括组织蛋白酶B。
在一些实施方案中，该可切割肽或L包含氨基酸单元。
在一些实施方案中，该氨基酸单元包括二肽、三肽、四肽或五肽。
在一些实施方案中，该氨基酸单元选自：Val-Cit、Val-Ala(VA)、Glu-Val-Cit、Ala-Ala-Asn(AAN)、Gly-Val-Cit、Gly-Gly-Gly(GGG)和Gly-Gly-Phe-Gly(GGFG)。
在一些实施方案中，L包含间隔子。
在一些实施方案中，该间隔子包括自降解间隔子。
在一些实施方案中，该自降解间隔子包括对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)。
在一些实施方案中，该可切割肽直接剪接至间隔子。
在一些实施方案中，L包括：-Val-Cit-PABC-、-Val-Ala-PABC-、-Glu-Val-Cit-PABC-、-Ala-Ala-Asn-PABC-、-Gly-Val-Cit-PABC-、-Gly-Gly-Gly-PABC-、-Gly-Gly-Phe-Gly-PABC-、-Val-Cit-PAB-、-Val-Ala-PAB-、-Glu-Val-Cit-PAB-、-Ala-Ala-Asn-PAB-、-Gly-Val-Cit-PAB-、-Gly-Gly-Gly-PAB-或-Gly-Gly-Phe-Gly-PAB-。
在一些实施方案中，该间隔子包括-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的结构，其中La表示-O-或单键；Lb表示-CR2(-CR3)-或单键，其中R2和R3各自独立地表示C1-C6烷基、-(CH2)na-NH2、-(CH2)nb-COOH或-(CH2)nc-OH，n1表示0至6的整数，na、nb和nc各自独立地表示1至4的整数，但当na为0时，R2和R3不相同，并且Lc表示-C(＝O)-。
在一些实施方案中，该间隔子包括-NH-(CH2)3-C(＝O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(＝O)-。
在一些实施方案中，L包括-L1-L2-L3-所示的结构，其中L1表示-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-(CH2)n2-C(＝O)-、-CH2-C(＝O)-NH-(CH2)n3-C(＝O)-或-C(＝O)-(CH2)n4-C(＝O)-，其中n2表示2至8的整数，n3表示1至8的整数，并且n4表示1至8的整数；L2表示氨基酸单元；L3表示自降解间隔子。
在一些实施方案中，L选自：
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2o-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；and
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-.
在一些实施方案中，对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)包含聚肌氨酸(聚-N-甲基甘氨酸)残基。
在一些实施方案中，L选自以下结构：
其中n5表示0至20的整数。
在一些实施方案中，n5表示1至15的整数。
在一些实施方案中，n5表示1至7的整数。
在一些实施方案中，n5表示8至15的整数。
在一些实施方案中，L选自以下结构：
在一些实施方案中，该抗体-药物偶联物选自以下结构：
其中n是1至10的任何数。
在一些实施方案中，n是2至9的任何数。
本申请进一步提供了一种制备本申请的免疫偶联物的方法，该方法包括使本申请的抗体或其抗原结合片段与药物-接头中间体化合物反应的步骤。
本申请进一步提供了一种药物组合物，该药物组合物包含本申请的免疫偶联物，其盐或所述偶联物或盐的水合物。
在一些实施方案中，该药物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。
本申请进一步提供了本申请的免疫偶联物或本申请的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
在一些实施方案中，该肿瘤是表达CDH6的肿瘤。
在一些实施方案中，该肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
本申请进一步提供了一种用于治疗肿瘤的方法，该方法包括向受试者施用本申请的免疫偶联物、其盐、和/或所述偶联物或盐的水合物。
在一些实施方案中，该肿瘤是表达CDH6的肿瘤。
在一些实施方案中，该肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
本申请进一步提供了一种用于治疗肿瘤的方法，该方法包括同时、分开或序贯地向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含至少一种组分和至少一种抗肿瘤药物，该至少一种组分选自本申请的免疫偶联物、其盐和所述偶联物或盐的水合物。
本发明的有益效果
可预期通过向具有表达CDH6的癌细胞的患者施用包含经由具有特定结构的接头与在细胞中发挥毒性的药物偶联的本发明的抗CDH6抗体的抗CDH6抗体-药物偶联物会获得极好的抗肿瘤效果和安全性。具体地，本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物可用作抗肿瘤剂。
根据以下具体实施方式，本公开的另外的方面和优点对于本领域技术人员将变得显而易见，在具体实施方式中仅示出和描述了本公开的例示性实施方案。如将认识到的，本公开能够具有其他实施方案和不同实施方案，并且其若干细节能够在各种明显的方面进行修改，所有这些修改都不背离本公开。因此，附图和说明书本质上应被认为是例示性的，而非限制性的。
引用合并
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同每篇单独的出版物、专利或专利申请被具体且单独地指明通过引用并入本文。
附图说明
本发明的新颖特征在所附权利要求中具体阐述。通过参考以下具体实施方式，可以更好地理解本发明的特征和优点，该具体实施方式阐述了采用本发明原理的说明性实施方案，以及附图(在本文中也称为“图”)，其中：
图1A至图1B示出了检测抗CDH6嵌合抗体(Ch069707)及其人源化变体(CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2)与卵巢癌细胞系OVCAR-3结合的流式细胞术结果。
图2示出了检测抗CDH6嵌合抗体(Ch069463)及其人源化变体(CL069463-H1L1、CL069463-H2L2和CL069463-H2L3)与卵巢癌细胞系OVCAR-3结合的流式细胞术结果。
图3示出了检测CL069707-H1L1与人CDH6-ECD-His、CDH9-ECD-His和CDH10-ECD-His重组蛋白结合的ELISA结果。
图4示出了检测CL069707-H1L1与人、食蟹猴、小鼠和大鼠CDH6-ECD-His重组蛋白结合的ELISA结果。
图5A示出了通过常规规程G测量的CL069707-H1L1的体积排阻色谱图。
图5B示出了通过常规规程H测量的CL069707-H1L1的疏水层析色谱图。
图6A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-LP1中聚集体的体积排阻色谱图。
图6B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-LP1的疏水层析色谱图。
图7A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-LP2中聚集体的体积排阻色谱图。
图7B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-LP2的疏水层析色谱图。
图8A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-GGFG-DXd中聚集体的体积排阻色谱图。
图8B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-GGFG-DXd的疏水层析色谱图。
图9A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物DS-6000a中聚集体的体积排阻色谱图。
图9B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物DS-6000a的疏水层析色谱图。
图10A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物对照抗体-LP1中聚集体的体积排阻色谱图。
图10B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物对照抗体-LP1的疏水层析色谱图。
图11A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物人IgG-LP1中聚集体的体积排阻色谱图。
图11B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物人IgG-LP1的疏水层析色谱图。
图12A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物人IgG-LP2中聚集体的体积排阻色谱图。
图12B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物人IgG-LP2的疏水层析色谱图。
图13A示出了通过常规规程G测量的抗体-药物偶联物人IgG-GGFG-DXd中聚集体的体积排阻色谱图。
图13B示出了通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物人IgG-GGFG-DXd的疏水层析色谱图。
图14示出了PA-1、OVCAR-3和786-O细胞对CL069707-H1L1-LP1的内化。
图15A至图15D示出了评价抗CDH6抗体-药物偶联物(CL069707-H1L1-LP1、CL069707-H1L1-LP2、CL069707-H1L1-GGFG-DXd、CL069707-H1L2-GGFG-DXd、CL069707-H2L1-GGFG-DXd和CL069707-H2L2-GGFG-DXd)对CDH6阳性肿瘤细胞系OVCAR-3和PA-1的体外细胞生长抑制活性的结果。
图16A示出了与vc-MMAE偶联的抗CDH6抗体(CL069707、CL069439和CL069066)的体外细胞杀伤活性的结果。
图16B示出了与GGFG-DXd偶联的抗CDH6抗体(CL069707、CL069439和CL069066)的体外细胞杀伤活性的结果。
图17A示出了3个人源化抗CDH6抗体-药物偶联物(CL069707-H1L1-LP1、CL069707-H1L1-LP2和CL069707-H1L1-GGFG-DXd)的体内抗肿瘤效果。
图17B示出了3个人源化抗CDH6抗体-药物偶联物(CL069707-H1L1-LP1、CL069707-H1L1-LP2和CL069707-H1L1-GGFG-DXd)对小鼠体重的影响。使用动物模型进行评价，其中将CDH6阳性人卵巢畸胎瘤细胞系PA-1接种到免疫缺陷小鼠中。
图18A示出了在单剂量给药后CL069707-H1L1-LP1和CL069707-H1L1-LP2表现出剂量依赖性肿瘤消退。图18B示出了不同剂量的CL069707-H1L1-LP1和CL069707-H1L1-LP2对小鼠体重的影响。使用动物模型进行评价，其中将CDH6阳性人卵巢畸胎瘤细胞系PA-1接种到免疫缺陷小鼠中。
图19A示出了CL069707-H1L1-LP1的体内抗肿瘤效果。图19B示出了单剂量的CL069707-H1L1-LP1对小鼠体重的影响。使用动物模型进行评价，其中将CDH6阳性肿瘤细胞系OVCAR-3接种到免疫缺陷小鼠中。
图20A示出了CL069707-H1L1-LP1的体内抗肿瘤效果。图20B示出了CL069707-H1L1-LP1对小鼠体重的影响。使用动物模型进行评价，其中将CDH6阳性肿瘤细胞系786-O接种到免疫缺陷小鼠中。
图21A示出了CL069707-H1L1-LP1的体内抗肿瘤效果。图21B示出了CL069707-H1L1-LP1对小鼠体重的影响。使用肾癌患者来源的异种移植物(PDX)模型进行评价。
图22A至图22C示出了CL069707-H1L1-LP1、CL069707-H1L1-LP2和CL069707-H1L1-GGFG-DXd的结构。
图23示出了本申请所述抗体与CDH6抗原结合的检测灵敏度。
图24示出了本申请所述抗体对细胞表面表达的CDH6抗原的特异性识别。
具体实施方式
虽然本文已经示出并描述了本发明的各种实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员可以想到许多变化、改变和替换。应当理解，可以采用本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案。
定义
除非另有说明，否则本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义：
在本申请中，术语“烷基”通常是指具有指定碳原子数的单价饱和烃链。例如，C1-C6烷基是指具有1个至6个碳原子的烷基基团。烷基基团可以是直链或支链的。代表性的支链烷基基团具有一条、两条或三条支链。烷基基团的示例包括但不限于甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、丁基(正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)、戊基(正戊基、异戊基和新戊基)和己基。
在本申请中，如本文所用，术语“抗体”通常是指免疫球蛋白家族的多肽，其能够非共价地、可逆地并且以特异性方式结合对应抗原。例如，天然存在的IgG抗体是四聚体，其包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH区和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其中散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端以如下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，这些宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。
术语“抗体”包括但不限于单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼抗体和嵌合抗体。抗体可以是任何同种型/类别(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)或亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。
在本申请中，术语“互补决定结构域”在本文中与术语“互补决定区”(“CDR”)互换使用，并且通常是指VL和VH的高变区。CDR是抗体链的靶蛋白结合位点，其对这种靶蛋白具有特异性。在每个人VL或VH中存在三个CDR(CDR1-3，从N末端开始按顺序编号)，构成可变结构域的约15％至20％。CDR可按其区和顺序引用。例如，“VH CDR1”或“HCDR1”两者均是指重链可变区的第一个CDR。CDR在结构上与靶蛋白的表位互补，并且因此直接负责结合特异性。VL或VH的其余区段，即所谓的框架区，在氨基酸序列上表现出较少的变异(Kuby，Immunology，第4版，第4章，W.H.Freeman&Co.，New York，2000年)。在本领域中，抗体的CDR可通过各种方法定义，诸如基于序列变异性的Kabat定义规则(参见Kabat等人，proteinsequence in immunology，第5版，美国国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达，1991年)、基于结构环区位置的Chothia定义规则(参见A1-Lazikani等人，JMol Biol，第273卷：第927-948页，1997年)以及基于IMGT-ONTOLOGY概念和IMGT科学图表规则的IMGT定义规则。在某些实施方案中，本申请使用IMGT规则来定义抗体的CDR。本申请还包括Martin、PyIgClassify的定义规则和Kabat、Chothia、IMGT、Martin和PyIgClassify的联合定义规则。(见MarkL.Chiu等人，Antibodies 8(4),55,2019)。
表A.对每个区域的氨基酸的编号系统(用Chothia编号)
其中，Laa-Lbb或Haa-Hbb可分别指从N端开始的轻链或重链的NO.aa至NO.bb的氨基酸序列。例如，L24-L34指的是轻链中从NO.24到NO.34的氨基酸序列。
轻链和重链两者均被分成结构和功能同源区。术语“恒定”和“可变”是功能性的。在这点上，应当理解，轻链(VL)和重链(VH)部分两者的可变结构域决定了抗原识别和特异性。相反，轻链的恒定结构域(CL)和重链的恒定结构域(CH1、CH2或CH3)赋予重要的生物学特性，诸如分泌、经胎盘迁移、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们变得更加远离抗体的抗原结合位点或氨基末端而增加。N末端是可变区，并且C末端是恒定区；CH3和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端结构域。
在本申请中，如本文所用，术语“抗原结合片段”通常是指包括抗体的一个或多个部分的多肽，该一个或多个部分保留了与抗原的表位特异性相互作用(例如，通过结合、位阻、稳定/去稳定、空间分布)的能力。结合片段的示例包括但不限于单链Fv(scFv)，二硫键连接的Fv(sdFv)，Fab片段，F(ab')片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab')2片段，包含在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL结构域和VH结构域组成的Fv片段；dAb片段(Ward等人，Nature，第341卷：第544-546页，1989年)，其由VH结构域构成；以及抗体的分离的互补决定区(CDR)或其他表位结合片段。
抗原结合片段也可包括单结构域抗体、巨型抗体、微型抗体、纳米抗体、胞内抗体、双抗体、三抗体、四抗体和双scFv中(参见例如Hollinger和Hudson，NatureBiotechnology，第23卷：第1126-1136页，2005年)。抗原结合片段也可包括包含一对串联Fv片段(VH-CH1-VH-CH1)的单链分子中，该对片段与互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区(Zapata等人，Protein Eng.，第8卷：第1057-1062页，1995年)。常规抗体的片段也可以是单结构域抗体，诸如重链抗体或VHH。
在本申请中，如本文所用，术语“单克隆抗体”通常是指多肽，包括具有基本上相同的氨基酸序列或源自相同遗传来源的抗体和抗原结合片段。该术语也包括单分子组合物的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物对特定表位显示出单一结合特异性和亲和力。
在本申请中，术语“人源化抗体”通常是指包括源自非人物种(例如小鼠)的重链可变区和轻链可变区的序列但其中至少一部分VH和/或VL序列已经被改变为与人种系可变序列相似的抗体。例如，术语“人源化抗体”是可以免疫特异性结合相关抗原并且包括基本上包括人抗体的氨基酸序列的框架区(FR)和基本上包括非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。在CDR的上下文中，术语“基本上”意指CDR的氨基酸序列与非人抗体的CDR的氨基酸序列有至少80％，例如至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的同一性。人源化抗体基本上包括至少一个，通常两个可变结构域(Fab、Fab'、F(ab')2、Fab、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且所有或基本上所有框架区是具有人免疫球蛋白共有序列的框架区。在一些实施方案中，人源化抗体可进一步包括免疫球蛋白(Fc)的恒定区(通常是人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。
在本申请中，术语“人抗体”通常是指具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体是现有技术中熟知的(例如，请参考van Dijk,M.A.和van deWinkel,J.G.，Curr.Opin.Chem.Biol.，2001年，第5卷：第368-374页)。人抗体也可在转基因动物(例如小鼠)中产生，这些转基因动物可在免疫后在不存在产生的内源免疫球蛋白的情况下产生完整的或选择的一组人抗体(例如Jakobovits,A.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1993年，第90卷：第2551-2555页；Jakobovits,A.等人，Nature，1993年，第362卷：第255-258页；Brueggemann,M.等人，YearImmunol.，1993年，第7卷：第33-40页)。人抗体也可在噬菌体展示文库(例如Hoogenboom,H.R.和Winter,G.，J.Mol.Biol.，1992年，第227卷：第381-388页；Marks,J.D.等人，J.Mol.Biol.，1991年，第222卷：第581-597页)中产生。术语“人抗体”也可包括在恒定区中修饰的抗体。
在本申请中，术语“嵌合抗体”通常是指工程化抗体，其最广义地包含一种抗体的一个或多个区和一种或多种其他抗体的一个或多个区。特别地，嵌合抗体包含源自非人动物的抗体的VH结构域和VL结构域，以及另一抗体，特别是人抗体的CH结构域和CL结构域。作为非人动物，可使用任何动物，诸如小鼠、大鼠、仓鼠、兔等。嵌合抗体也可表示对至少两种不同抗原具有特异性的多特异性抗体。
当提及多肽(即本发明的抗体)或核苷酸序列时，所谓“纯化的”和“分离的”意指所示分子在基本上不存在相同类型的其他生物大分子的情况下存在。如本文所用，术语“纯化的”特别意指存在至少75重量％、85重量％、95重量％或98重量％的相同类型的生物大分子。编码特定多肽的“分离的”核酸分子是指基本上不含不编码本主题多肽的其他核酸分子的核酸分子；然而，该分子可包括一些额外碱基或部分，其不会有害地影响组合物的基本特征。本发明可以包含，例如，一个分离的抗原结合蛋白，一个分离的抗体或其抗原结合片段，一个分离的多肽，一个或多个分离的核酸分子或分子。
在本申请中，术语“亲和力”通常由完整抗体和抗原之间的平衡缔合来定义。亲和力可例如以半最大有效浓度(EC50)或平衡解离常数(KD)表示。亲和力可通过多种已知方法进行实验性评估，诸如用表面等离子体共振测量缔合和解离速率或者用免疫化学测定(ELISA和FACS)测量EC50。
“半最大有效浓度”或“EC50”通常是指在指定暴露时间后在基线和最大值之间的中途诱导响应的药物、抗体或毒剂的浓度。EC50与亲和力呈反比关系，即EC50值越低，抗体的亲和力越高。
“KD”是抗体与其抗原之间的平衡解离常数，即koff/kon的比率。KD和亲和力呈反比关系。KD值与抗体浓度有关，即KD值越低，抗体的亲和力越高。本公开的抗体通常将具有小于约10-7M或10-8M，例如小于约10-9M或10-10M，在一些方面中，小于约10-11M、10-12M或10-13M的平衡解离常数。
术语“保守修饰的变体”适用于氨基酸和核酸序列两者。关于特定核酸序列，保守修饰的变体是指编码相同或基本相同的氨基酸序列的那些核酸，或在核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本相同的序列。由于遗传密码的简并性，许多功能上相同的核酸编码任何给定的蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在由密码子指定的丙氨酸的每个位置，密码子可以改变为所述的任何对应密码子而不改变所编码的多肽。这种核酸变异是“沉默变异”，其是保守修饰的变异中的一种。本文中编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每一种可能的沉默变异。本领域技术人员将认识到，核酸中的每个密码子(除了通常是甲硫氨酸的唯一密码子的AUG和通常是色氨酸的唯一密码子的TGG之外)都可以被修饰以产生功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每个沉默变异都隐含在每个所述序列中。
对于多肽序列，“保守修饰的变体”包括对多肽序列的单独取代、缺失或添加，这导致氨基酸被化学相似的氨基酸取代。提供功能上相似的氨基酸的保守取代表是本领域熟知的。此类保守修饰的变体是对多态性变体、种间同源物和等位基因的补充并且不排除它们。以下八组含有互为保守取代的氨基酸：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(参见例如，Creighton，Proteins，1984年)。在一些方面，术语“保守序列修饰”用于指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。
在本申请中，在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“相同性百分比”或“同一性百分比”是指两个或更多个序列或子序列相同的程度。如果两个序列在被比较的区域上具有相同的氨基酸或核苷酸序列，则它们是“相同的”。如使用以下序列比较算法中的一者或通过人工比对和目视检查测量的，当在比较窗口或指定区域上进行最大对应性的比较和比对时，如果两个序列具有相同的指定百分比的氨基酸残基或核苷酸(即，在指定区域上或当未指定时在整个序列上具有60％同一性，任选地65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性)，则两个序列是“基本上相同的”。任选地，同一性存在于长度为至少约30个核苷酸(或10个氨基酸)的区域上，或更优选地存在于长度为100个至500个或1000个或更多个核苷酸(或20个、50个、200个或更多个氨基酸)的区域上。适用于确定序列同一性百分比和序列相似性的算法的两个示例为BLAST和BLAST 2.0算法，其分别在以下中所述：Altschul等人，Nuc.Acids Res.，第25卷：第3389-3402页，1977年；以及Altschul等人，J.Mol.Biol.，第215卷：第403-410页，1990年。
除了上述序列同一性百分比之外，两个核酸序列或多肽基本上相同的另一个指示是由第一核酸编码的多肽与针对由第二核酸编码的多肽产生的抗体具有免疫交叉反应性。因此，多肽通常与第二多肽基本上相同，例如，这两种多肽的不同之处仅在于保守取代。两个核酸序列基本上相同的另一个指示是两个分子或它们的补体在严格条件下彼此杂交。两个核酸序列基本上相同的又一个指示是相同的引物可用于扩增序列。
在本申请中，术语“核酸”在本文中可与术语“多核苷酸”互换使用，并且通常是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸以及它们的聚合物。该术语涵盖含有已知核苷酸类似物或修饰的主链残基或连接的核酸，其是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参比核酸相似的结合特性，并且以与参比核苷酸相似的方式代谢。此类类似物的示例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。
在本申请中，术语“多肽”在本文中可与术语“蛋白”互换使用，并且是指氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。除非另有说明，否则特定的多肽序列也隐含地涵盖其保守修饰的变体。
在本申请中，如本文所用，术语“免疫偶联物”通常是指抗体或其抗原结合片段与另一种试剂(诸如有效载荷、药物部分、化学治疗剂、毒素、免疫治疗剂、显影探针等)的连接。该连接可以是共价键或非共价相互作用，诸如通过静电力。可使用本领域已知的各种接头以形成免疫偶联物。另外，免疫偶联物可以融合蛋白的形式提供，该融合蛋白可由编码免疫偶联物的多核苷酸表达。如本文所用，“融合蛋白”是指通过连接最初编码独立的蛋白(包括肽和多肽)的两个或更多个基因或基因片段而产生的蛋白。融合基因的翻译产生了具有源自原始蛋白中的每一者的功能特性的单一蛋白。
如本文所用，术语“活性部分”或“有效载荷”通常是指构成活性剂的共轭化合物的部分，其介导的药物效果包括但不限于预防、治疗和/或诊断效果，例如，抗癌、抗炎、抗感染(如抗真菌、抗菌、抗病毒)或麻醉剂。将这些成分中的每一个连接到与本公开的抗体和方法兼容的连接子上的方法在本领域中是已知的。例如，见Singh等人，(2009)TherapeuticAntibodies:Methods and Protocols,vol.525,445-457.此外，"活性分子"或"有效载荷"可以是生物物理探针、荧光团、自旋标签、红外探针、亲和探针、螯合剂、光谱探针、放射性探针、脂质分子、聚乙二醇、聚合物、DNA、RNA、蛋白质、肽、表面、抗体、抗体片段、纳米粒子、量子点、脂质体、PLGA粒子、糖类或多糖。
在本申请中，术语“药物部分”或“D”通常是指具有所需生物活性和反应性官能团的可用于将药物并入本公开的偶联物中的任何化合物。在一些实施方案中，药物部分表示在癌症治疗中有用的细胞毒性药物；具有所需生物活性的蛋白或多肽，诸如毒素，例如相思豆毒蛋白(abrin)、蓖麻毒蛋白A(ricin A)、假单胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin)和白喉毒素(diphtheria toxin)；其他合适的蛋白包括肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织纤溶酶原激活物(tissue plasminogenactivator,)和生物应答调节剂，例如淋巴因子、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或其他生长因子。在一些实施方案中，术语"药物分子"可以是一个化学分子。在某些方面，药物分子选自V-ATP酶抑制剂、HSP90抑制剂、IAP抑制剂、mTor抑制剂、微管稳定剂、微管不稳定剂、Auristatin、Dolastatin、Maytansinoid、MetAP(蛋氨酸氨肽酶)、蛋白质CRM1的核出口抑制剂、DPPIV抑制剂、线粒体中磷酸转移反应的抑制剂、蛋白质合成抑制剂、激酶抑制剂、CDK2抑制剂、CDK9抑制剂、蛋白酶体抑制剂、驱动蛋白抑制剂、HDAC抑制剂、DNA损伤剂、DNA烷基化剂、DNA插层剂、DNA小沟粘合剂和DHFR抑制剂。
在一个实施方案中，药物部分可以是微管破坏药物，诸如澳瑞他汀，例如单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)和澳瑞他汀F(AF)。在另一实施方案中，药物部分可以是微管破坏药物，诸如美登素(maytansinoid)，例如DM1、DM3和DM4。在另一实施方案中，药物部分可以是DNA损伤剂，诸如卡奇霉素(calicheamicin)、倍癌霉素(duocarmycin)、SN-38和吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂卓(PBD)。在其他实施方案中，药物部分可以是鹅膏蕈碱(amanitin)、蒽环类(anthracycline)、浆果赤霉素(baccatin)、喜树碱(camptothecin)、西马多丁(cemadotin)、秋水仙碱(colchicine)、秋水仙胺(colcimid)、考布他汀(combretastatin)、念珠藻素(cryptophycin)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、棘霉素(echinomycins)、软珊瑚醇(eleutherobin)、埃坡霉素(epothilone)、雌莫司汀(estramustine)、lexitropsin、美登新(maytansine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、纺锤菌素(netropsin)、嘌呤霉素(puromycin)、根瘤菌素(rhizoxin)、紫杉烷(taxane)、微管溶素(tubulysin)或长春花生物碱(vincaalkaloid)。
在本申请中，术语“拓扑异构酶抑制剂”通常是指抑制拓扑异构酶活性的化合物。称为拓扑异构酶I抑制剂的化合物具有针对拓扑异构酶I的活性，并且拓扑异构酶II抑制剂具有针对拓扑异构酶II的活性。一些化合物具有针对拓扑异构酶I和拓扑异构酶II两者的活性，并且称为拓扑异构酶I/II抑制剂。用于本发明的优选拓扑异构酶I抑制剂是喜树碱和喜树碱类似物。喜树碱是最初从喜树的木材和树皮中分离的五环生物碱，喜树是中国本土的树(Wall,M.E.等人，J.Am.Chem.Soc，第94卷：第388页，1966年)。喜树碱通过不可逆地抑制拓扑异构酶I发挥其药理学效果，喜树碱和喜树碱类似物或衍生物的合成方法是已知的，并且在美国专利号5,244,903中进行了总结和描述，该专利全文以引用方式并入本文。
在本申请中，术语“喜树碱”通常包括喜树碱和喜树碱衍生物，包括伊立替康(irinotecan)、托泊替康(topotecan)、勒托替康(lurtotecan)、斯拉替康(silatecan)、依替立替康聚乙二醇(etirinotecan pegol)、TAS103、9-氨基喜树碱(9-aminocamptothecin)、7-乙基喜树碱(7-ethylcamptothecin)、10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin)、9-硝基喜树碱(9-nitrocamptothecin)、10,11-亚甲二氧基喜树碱(10,11-methylenedioxycamptothecin)、9-氨基-10,11-亚甲二氧基喜树碱(9-amino-10,11-methylenedioxycamptothecin)、9-氯-10,11-亚甲二氧基喜树碱(9-chloro-10,11-methylenedioxycamptothecin)、7-(4-甲基哌嗪基亚甲基)-10,11-亚乙二氧基-20(S)-喜树碱(7-(4-methylpiperazinomethylene)-10)、7-(4-甲基哌嗪基亚甲基)-10,11-亚甲二氧基-20(S)-喜树碱(7-(4-methylpiperazinomethylene)-10,1 1-methylenedioxy-20(S)-camptothecin)和7-(2-(N-异丙基氨基)乙基)-(20S)-喜树碱(7-(2-(N-isopropylamino)ethyl)-(20S)-camptothecin)以及它们的立体异构体、盐和酯。
应当注意，药物不限于上述种类，并且包括所有可用于ADC的药物。
在本申请中，本公开中描述的术语“接头”包括可切割接头或不可切割接头。可切割接头可以是化学上不稳定的接头和酶不稳定的接头。由于高的血浆稳定性和良好的细胞内切割选择性和效率，酶不稳定接头被广泛地选择为ADC中的可切割接头候选物。在一些实施方案中，酶不稳定接头可包括选自由以下项组成的组的肽单元(-AAs-)：-缬氨酸-瓜氨酸-(-Val-Cit-)、-缬氨酸-赖氨酸-(-Val-Lys-)、-缬氨酸-精氨酸-(-Val-Arg-)、-苯丙氨酸-瓜氨酸-(-Phe-Cit-)、-苯丙氨酸-赖氨酸-(-Phe-Lys-)和-苯丙氨酸-精氨酸-(-Phe-Arg-)。典型的酶不稳定接头包括可被组织蛋白酶B识别的-Val-Cit-和-Phe-Lys-。在一些实施方案中，不可切割接头可以是能够增加所得ADC的亲水性的接头。在一个实施方案中，不可切割接头可包括一种或多种聚(乙二醇)(PEG)。在其他实施方案中，不可切割接头可以是PEG、PEG二胺(NH2-PEG-NH2)、胺-PEG-羟基(NH2-PEG-OH)、胺-PEG-COOH(NH2-PEG-COOH)、二亚乙基三胺或它们的组合。在一些实施方案中，PEG可表示为-(CH2CH2O)x-，其中x可以是1至20的整数。
在本申请中，如本文所用，术语“毒素”、“细胞毒素”或“细胞毒性剂”通常是指对细胞的生长和增殖有害并且可起到减少、抑制或破坏细胞或恶性肿瘤的作用的任何试剂。
在本申请中，如本文所用，术语“抗肿瘤剂”或“抗肿瘤药物”通常是指可用于治疗细胞增殖性病症诸如癌症的任何试剂，包括但不限于细胞毒性剂、化学治疗剂、放射治疗和放射治疗剂、靶向抗癌剂和免疫治疗剂。
在本申请中，术语“肿瘤”或“癌症”通常是指恶性或良性的赘生性细胞生长和增殖，以及所有癌前和癌细胞和组织。
在本申请中，术语“抗肿瘤活性”意指肿瘤细胞增殖、生存力或转移活性的速率的降低。显示抗肿瘤活性的一种可能方式是显示肿瘤细胞生长速率的下降、肿瘤大小的停滞或肿瘤大小的减小。可使用可接受的体外或体内肿瘤模型来评估这样的活性，这些模型包括但不限于异种移植物模型、同种异体移植物模型、MMTV模型和本领域已知的用于研究抗肿瘤活性的其他已知模型。
在本申请中，术语“钙粘蛋白6”或“CDH6”通常是指由790个氨基酸组成的单次跨膜蛋白，该蛋白被分类为II型钙粘蛋白家族，并且该蛋白具有N末端胞外和C末端胞内结构域。人类CDH6基因于1995年首次被克隆，其序列可参考NM_004932和NP_004923(NCBI)等登录号。此外，由包含上述CDH6氨基酸序列中一个或几个氨基酸的取代、缺失和/或添加的氨基酸序列组成并且具有与CDH6蛋白的生物活性相当的生物活性的蛋白也包括在术语“CDH6”中。
在本说明书中，术语“表位”通常用于意指CDH6的部分肽或部分三维结构，特异性抗CDH6抗体结合至该部分肽或部分三维结构。
术语“表达CDH6的肿瘤”或“CDH6阳性肿瘤”通常是指在肿瘤细胞表面表达CDH6和/或CDH6的突变形式的肿瘤。
在本申请中，术语“受试者”包括人和非人动物。非人动物包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除非另有说明，否则术语“患者”或“受试者”在本文中可互换使用。
在本申请中，术语“药学上可接受的”通常是指不干扰活性成分生物学活性的有效性的一种或多种无毒物质。这类制剂通常可含有盐、缓冲剂、防腐剂、相容性载体和任选的其它治疗剂。这类药学上可接受的制剂通常也可包含适合给予人的相容性固体或液体填料、稀释剂或包囊材料。用于医药时，盐应该是药学上可接受的盐，但可方便地使用非药学上可接受的盐来制备药学上可接受的盐，不能将它们排除在本发明范围以外。这类药理学和药学上可接受的盐包括但不限于由以下酸制备的盐：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、硼酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。药学上可接受的盐也可制备成碱金属盐或碱土金属盐，如钠盐、钾盐或钙盐。在本文中所述术语“溶剂化物”按照常规意义使用，是指溶质(例如，活性化合物，活性化合物的盐)和溶剂的配合物。溶剂化物通常不会显著改变化合物的生理活性或毒性，因此可以起药理学等效物的作用。如果溶剂是水，则溶剂化物可以方便地称为水合物，例如，单水合物，二水合物，三水合物，等。
在本申请中，术语“治疗”(“treat”、“treating”或“treatment”)任何疾病或病症在一个方面通常是指改善疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病或其临床症状中的至少一种的发展)。在另一方面，“治疗”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括患者可能无法辨别的那些。在又一方面，“治疗”是指在身体上(例如，稳定可辨别的症状)、在生理上(例如，稳定身体参数)或在两者上调节疾病或病症。在又一方面，“治疗”是指预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展。
在本申请中，术语“治疗上可接受的量”或“治疗有效剂量”可互换地指足以实现期望结果(即，肿瘤大小的减小，肿瘤生长的抑制，转移的预防，病毒、细菌、真菌或寄生虫感染的抑制或预防)的量。在一些方面，治疗上可接受的量不会诱导或引起不期望的副作用。治疗上可接受的量可通过首先施用低剂量，并且然后递增地增加该剂量直到实现期望的效果来确定。本公开的分子的“预防有效剂量”和“治疗有效剂量”可分别预防疾病症状(包括与癌症相关的症状)的发作或导致疾病症状的严重程度的降低。
在本申请中，术语“共同施用”通常是指在个体的血液中同时存在两种活性剂。共同施用的活性剂可同时或依次递送。
在本申请中，除非另有说明，术语“由……组成”、“含有”、“具有”、“包括”和“包含”应理解为“包括但不限于”。在描述本发明的上下文中，并且具体地在所附权利要求的上下文中，除非另有说明，否则术语“一个”、“一者”和“该”以及类似的指代应理解为包括单数和复数。除非另有要求，否则任何和所有示例或示例性语言(“例如”、“如”、“诸如”)的使用仅旨在说明本发明的各方面或实施方案，并且不应理解为限制其范围。
在本申请中，当涉及可测量值诸如量、时间期限等时，术语“约”意指涵盖指定值的±20％或在一些情况下±10％或在一些情况下±5％或在一些情况下±1％或在一些情况下±0.1％的变化，因为此类变化适于执行所公开的方法。
抗CDH6抗体
虽然本文已经示出并描述了本发明的各种实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员可以想到许多变化、改变和替换。应当理解，可以采用本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案。
本发明的抗CDH6抗体可源自任何物种。优选的物种示例可包括人、猴、大鼠、小鼠和兔。当本发明的抗CDH6抗体源自人以外的物种时，优选通过熟知技术嵌合或人源化抗CDH6抗体。本发明的抗体可以是多克隆抗体，或者可以是单克隆抗体，并且优选单克隆抗体。
本发明的抗CDH6抗体是可靶向肿瘤细胞的抗体。具体地，本发明的抗CDH6抗体具有能够识别肿瘤细胞的特性、能够结合肿瘤细胞的特性和/或通过细胞摄取内化至肿瘤细胞中的特性等。因此，本发明的抗CDH6抗体可经由接头偶联到活性部分以制备免疫偶联物(例如，本发明的抗CDH6抗体可经由接头偶联到具有抗肿瘤活性的化合物以制备抗体-药物偶联物)。
抗CDH6抗体可通过本领域通常进行的方法用作为抗原的多肽对动物进行免疫并且然后收集并纯化其活体中产生的抗体而获得。抗原的来源不限于人，并且因此，动物也可用源自非人动物诸如小鼠或大鼠的抗原进行免疫。在这种情况下，通过检查与异源抗原结合的所获得的抗体与人抗原的交叉反应性，可选择适用于人疾病的抗体。
此外，可根据已知方法(例如，Kohler和Milstein，Nature，1975年，第256卷：第495-497页；以及Kennet,R.编辑，Monoclonal Antibodies，第365-367页，Plenum Press，N.Y.，1980年)将产生针对该抗原的抗体的产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合以建立杂交瘤，以便获得单克隆抗体。
用于本发明的抗CDH6抗体没有特别限制。例如，可适当地使用在本申请的序列表中列出的氨基酸序列所指定的抗体。用于本发明的抗CDH6抗体理想地是具有以下特性的抗体：(a)与CDH6特异性结合，以及(b)通过与CDH6结合而具有内化至表达CDH6的细胞中的活性；其中CDH6可以是人CDH6。
在下文中，将具体描述获得抗CDH6抗体的方法。
(a)CDH6的胞外区(Ser 54-Ala 615)可用作免疫原(ACRO Biosystems，CA6-H5229)，并将抗原直接施用给待免疫的动物(例如大鼠或小鼠)。如果需要增强抗体滴度，则抗原的施用可进行一次或多次，优选多次；
(b)从已经诱导了免疫应答的上述动物中收集含有产生抗体的细胞的组织(例如，淋巴结)；
(c)制备骨髓瘤细胞(下文称作“骨髓瘤”)(例如，小鼠骨髓瘤SP2/0-ag14细胞)；
(d)产生抗体的细胞与骨髓瘤之间的细胞融合；
(e)选择产生目的抗体的杂交瘤组；
(f)分裂成单细胞克隆(克隆)；
(g)任选地，培养用于大量生产单克隆抗体的杂交瘤或培育接种了杂交瘤的动物；以及/或者
(h)研究由此产生的单克隆抗体的生理活性(内化活性)和结合特异性或检查作为标记试剂的抗体的特性。
用于测量本文所用抗体滴度的方法的示例可包括但不限于流式细胞术和Cell-ELISA。
本文定义的特定CDR序列通常基于IMGT定义。然而，应当理解，对特定抗体的重链CDR或CDRs和/或轻链CDR或CDRs的引用包括本领域技术人员已知的所有CDR定义。
在一些实施方案中，本文提供的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含本文所述抗体中任一种的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个CDR。在一些实施方案中，本文提供的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含表1中的一个、两个和/或三个VL CDR的VL。在一些实施方案中，本文提供的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含表1中的一个、两个和/或三个VH CDR的VH。在一些实施方案中，本文提供的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含表1中的一个、两个和/或三个VL CDR以及表1中一个、二个和/或者三个VH CDR。
在一些实施方案中，抗CDH6抗体或其抗原结合片段包含来自本文所述抗体或抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR 3、VH CDR1，VH CDR2和/或VH CDR3。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或其抗原结合片段包含本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至30个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至25个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至20个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至15个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至10个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至5个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段的变体包含抗CDH6抗体或抗原结合片段中的1至3个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，氨基酸取代、添加和/或缺失是保守的氨基酸取代。在一些实施方案中，保守氨基酸取代位于抗体或抗原结合片段的CDR中。在一些实施方案中，保守氨基酸取代不在抗体或抗原结合片段的CDR中。在一些实施方案中，保守氨基酸取代位于抗体或抗原结合片段的框架区域中。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如，人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，包括：
a)重链可变区(VH)，其包含(1)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；或(3)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；或其变体，其在HCDR中具有多达约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失；
和/或b)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；或(3)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；或其变体，其在LCDR中具有多达约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失；
在一些实施方案中，变体在HCDR中具有多达约5个氨基酸取代、添加和/或缺失，和/或变体在LCDR中具有多达约5个核苷酸取代、添加或缺失。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，其包括：a)和SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的VH，或100％序列同一性的VH；和/或b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的VL。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如，人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，包括：
a)重链可变区(VH)，其包含(1)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；
(2)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；或(3)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；或其变体，其在HCDR中具有多达约3、约5、约
8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失；
和/或b)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；或(3)
具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；或其变体，其在LCDR中具有多达约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，变体在HCDR中具有多达约5个氨基酸取代、添加和/或缺失，和/或变体在LCDR中具有多达约5个核苷酸取代、添加或缺失。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，其包括：a)和SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的VH，或100％序列同一性的VH；和/或b)与SEQ ID NO:46的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的VL。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如，人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，包括：
a)重链可变区(VH)，其包含(1)具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；
(2)具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；或(3)具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；或其变体，其在HCDR中具有多达约3、约5、约
8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失；
和/或b)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；或(3)
具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；或其变体，其在LCDR中具有多达约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，变体在HCDR中具有多达约5个氨基酸取代、添加和/或缺失，和/或变体在LCDR中具有多达约5个核苷酸取代、添加或缺失。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，其包括：a)和SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的VH，或100％序列同一性的VH；和/或b)与SEQ ID NO：96的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的VL。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如，人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，包括：
a)重链可变区(VH)，其包含(1)具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；或(3)具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；或其变体，其在HCDR中具有多达约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失；
和/或b)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；或(3)具有SEQ IDNO:102的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；或其变体，其在LCDR中具有多达约3、约5、约8、约10、约12或约15个氨基酸取代、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，变体在HCDR中具有多达约5个氨基酸取代、添加和/或缺失，和/或变体在LCDR中具有多达约5个核苷酸取代、添加或缺失。
在一些实施方案中，本文提供了特异性结合CDH6(例如人CDH6)的抗体或其抗原结合片段，其包括：a)和SEQ ID NO:103的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的VH，或100％序列同一性的VH；和/或b)与SEQ ID NO：104的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的VL。
如此建立的杂交瘤株的示例可包括产生抗CDH6抗体的杂交瘤707和463。应当注意，在本说明书中，由产生抗CDH6抗体的杂交瘤707产生的抗体称为“707抗体”或简称为“707”，由杂交瘤463产生的抗体称为“463抗体”或简称为“463”，由杂交瘤066产生的抗体称为“066抗体”或简称为“066”，并且由杂交瘤439产生的抗体称为“439抗体”或简称为“439”。
707抗体的重链可变区具有由如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的HCDR1、由如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的HCDR2和由如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成的HCDR3。707抗体的轻链可变区具有包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的LCDR1、包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的LCDR2和包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的LCDR3。
此外，707抗体的重链可变区由如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列组成。707抗体的轻链可变区由如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列组成。
463抗体的重链可变区具有由如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列组成的HCDR1、由如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列组成的HCDR2和由如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列组成的HCDR3。463抗体的轻链可变区具有包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的LCDR1、包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的LCDR2和包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的LCDR3。
此外，463抗体的重链可变区由如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列组成。463抗体的轻链可变区由如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列组成。
066抗体的重链可变区具有由如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列组成的HCDR1、由如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列组成的HCDR2和由如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列组成的HCDR3。066抗体的轻链可变区具有包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列的LCDR1、包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列的LCDR2和包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列的LCDR3。
此外，066抗体的重链可变区由如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列组成。066抗体的轻链可变区由如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列组成。
439抗体的重链可变区具有由如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列组成的HCDR1、由如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列组成的HCDR2和由如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列组成的HCDR3。439抗体的轻链可变区具有包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列的LCDR1、包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的LCDR2和包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列的LCDR3。
此外，439抗体的重链可变区由如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列组成。439抗体的轻链可变区由如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列组成。
其他抗体
本发明的抗体也包括为了降低对人的异质性抗原性而人工修饰的基因重组抗体，诸如嵌合抗体、人源化抗体和人抗体，以及上述抗CDH6单克隆抗体。这些抗体可通过已知方法制备。
在一些实施方案中，抗CDH6抗体或抗原结合片段是人抗体或抗原结合片段。可以使用本领域已知的各种技术制备人抗体。在一些实施方案中，人抗体由体外免疫的永生化人B淋巴细胞产生。在一些实施方案中，人抗体由从免疫个体分离的淋巴细胞产生。在任何情况下，都可以产生和分离产生针对靶抗原的抗体的细胞。在一些实施方案中，人抗体选自噬菌体库，其中噬菌体库表达人抗体。可替代地，噬菌体展示技术可用于从未接种供体的免疫球蛋白可变区基因库中体外产生人抗体和抗体片段。用于产生和使用抗体噬菌体库的技术是本领域公知的。一旦识别出抗体，本领域已知的成熟亲和力策略，包括但不限于链重排和定点突变，可用于产生更高亲和力的人抗体。在一些实施方案中，在含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中产生人抗体。免疫后，这些小鼠能够在缺乏内源性免疫球蛋白产生的情况下产生全部人类抗体。
嵌合抗体的示例可包括其中可变区和恒定区彼此异源的抗体，诸如通过将小鼠或大鼠来源的抗体的可变区与人源恒定区偶联形成的嵌合抗体(参见Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，第81卷：第6851-6855页，1984年)。
源自小鼠抗人CDH6抗体的嵌合抗体的示例包括由轻链和重链组成的抗体，该轻链包含本说明书中描述的每种小鼠抗人CDH6抗体(例如，707抗体或463抗体)的轻链可变区和人源恒定区，该重链包含其重链可变区和人源恒定区。
源自小鼠抗人CDH6抗体的嵌合抗体的其他示例包括由轻链和重链组成的抗体，该轻链包含轻链可变区，该轻链可变区在本说明书中描述的每种小鼠抗人CDH6抗体(例如，707抗体或463抗体)的轻链可变区中的氨基酸的一个至几个残基、1个至3个残基、1个或2个残基，优选1个残基被其他氨基酸残基取代，该重链包含重链可变区，该重链可变区在其重链可变区中的氨基酸的一个至几个残基、1个至3个残基、1个或2个残基，优选1个残基被其他氨基酸残基取代。该抗体可具有任何给定的人源恒定区。
源自小鼠抗人CDH6抗体的嵌合抗体的其他示例包括由轻链和重链组成的抗体，该轻链包含轻链可变区，该轻链可变区在本说明书中描述的每种小鼠抗人CDH6抗体(例如，707抗体或463抗体)的轻链可变区中的任何1个至3个CDR中的氨基酸的1个或2个残基，优选1个残基被其他氨基酸残基取代，该重链包含重链可变区，该重链可变区在其重链可变区中的任何1个至3个CDR中的氨基酸的1个或2个残基，优选1个残基被其他氨基酸残基取代。该抗体可具有任何给定的人源恒定区。
本领域已知，抗体的恒定区介导多种效应器功能，这些效应器功能可根据抗体的同种型而变化。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgA抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgD抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgE抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgG抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgM抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgG1抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgG2抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgG3抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本文所述的抗CDH6抗体或抗原结合片段包含人IgG4抗体的至少一个恒定区。在一些实施例中，Fc区域通过铰链融合。铰链可以是IgG1铰链、IgG2铰链或IgG3铰链。本领域普通技术人员已知人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc区的氨基酸序列。在某些情况下，天然抗体中已鉴定出具有氨基酸变异的Fc区。
源自707抗体的嵌合抗体的示例包括由重链和轻链组成的抗体，该重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，该轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。该抗体可具有任何给定的人源恒定区。任选地，重链恒定区可以是人IgG1恒定区，并且轻链恒定区可以是人Igκ恒定区。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列，并且嵌合抗体命名为Ch069707。
源自463抗体的嵌合抗体的示例包括由重链和轻链组成的抗体，该重链包含重链可变区，该重链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，该轻链包含轻链可变区，该轻链可变区包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。该抗体可具有任何给定的人源恒定区。任选地，重链恒定区可以是人IgG1恒定区(SEQ ID NO:70)，并且轻链恒定区可以是人Igκ恒定区(SEQ ID NO:71)。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列，并且嵌合抗体命名为Ch069463。
人源化抗体的示例可包括通过仅将互补决定区(CDR)整合到人源抗体中形成的抗体(参见Nature，1986年，第321卷，第522-525页)，通过根据CDR移植方法(国际公开号WO90/07861)将来自一些框架的氨基酸残基以及CDR序列整合到人抗体中形成的抗体，以及通过修饰一些CDR的氨基酸序列同时保持抗原结合能力形成的抗体。
在本说明书中，源自707抗体、Ch069707抗体、463抗体或Ch069463抗体的人源化抗体不限于特定的人源化抗体，只要该人源化抗体保留707抗体、Ch069707抗体、463抗体或Ch069463抗体所特有的所有6个CDR序列，并具有内化活性。该人源化抗体的一些CDR的氨基酸序列可进一步修饰，只要其具有内化活性。
Ch069707抗体的人源化抗体的具体示例可包括重链和轻链的任意给定的组合，该重链包含重链可变区，该重链可变区由选自以下项组成的组的任一个氨基酸序列组成：(1)如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，(2)与上述氨基酸序列(1)具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列(优选与除每个CDR序列之外的框架区的序列具有至少95％或更高序列同一性的氨基酸序列)，和(3)包含上述氨基酸序列(1)中一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列；该轻链包含轻链可变区，该轻链可变区由选自以下项组成的组的任一个氨基酸序列组成：(4)如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列，(5)与上述氨基酸序列(4)具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列(优选与除每个CDR序列之外的框架区序列具有至少95％或更高序列同一性的氨基酸序列)，和(6)包含上述氨基酸序列(4)中一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列。任选地，重链恒定区可以是人IgG1恒定区(SEQ ID NO:70)，并且轻链恒定区可以是人Igκ恒定区(SEQ ID NO:71)，并且人源化抗体分别命名为CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2，具体地描述如下。
在一些实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:85具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:86具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，Ch069707抗体的人源化抗体可以包括以下任意给定的组合：重链，其包含由选自SEQ ID NO:27或29中所列氨基酸序列的任意一个氨基酸序列组成的重链可变区；和包含轻链可变区的轻链，所述轻链可变区域由选自SEQ ID NO:34或36中所列氨基酸序列的任何一个氨基酸序列组成。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069707-H1L1。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069707-H1L2。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069707-H2L1。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069707-H2L2。
Ch069463抗体的人源化抗体的具体示例可包括重链和轻链的任意给定的组合，该重链包含重链可变区，该重链可变区由选自以下项组成的组的任一个氨基酸序列组成：(1)如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，(2)与上述氨基酸序列(1)具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列(优选与除每个CDR序列之外的框架区的序列具有至少95％或更高序列同一性的氨基酸序列)，和(3)包含上述氨基酸序列(1)中一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列；该轻链包含轻链可变区，该轻链可变区由选自以下项组成的组的任一个氨基酸序列组成：(4)如SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列，(5)与上述氨基酸序列(4)具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列(优选与除每个CDR序列之外的框架区序列具有至少95％或更高序列同一性的氨基酸序列)，和(6)包含上述氨基酸序列(4)中一个或几个氨基酸的缺失、取代或添加的氨基酸序列。任选地，重链恒定区可以是人IgG1恒定区(SEQ ID NO:70)，并且轻链恒定区可以是人Igκ恒定区(SEQ ID NO:71)，并且人源化抗体命名为CL069463-H1L1、CL069463-H1L2、CL069463-H1L3、CL069463-H2L1、CL069463-H2L2和CL069463-H2L3。
在一些实施方案中，Ch069463抗体的人源化抗体可以包括以下任意给定的组合：重链，其包含由选自SEQ ID NO:51或54中所列氨基酸序列的任意一个氨基酸序列组成的重链可变区；和包含轻链可变区的轻链，所述轻链可变区域由选自SEQ ID NO:58、63或65中所列氨基酸序列的任何一个氨基酸序列组成。
在一些实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列或与SEQ IDNO:87具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:88具有至少95％或更高同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069463-H1L1。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069463-H1L2。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069463-H1L3。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069463-H2L1。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069463-H2L2。
在一个实施方案中，重链可包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列，并且轻链可包含如SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列，并且人源化抗体命名为CL069463-H2L3。
表1.小鼠抗体、嵌合抗体和人源化抗体的序列
本说明书中的氨基酸取代优选是保守氨基酸取代。保守氨基酸取代是在与某些氨基酸侧链相关的氨基酸组内发生的取代。优选的氨基酸基团如下：酸性基团＝天冬氨酸和谷氨酸；碱性基团＝赖氨酸、精氨酸和组氨酸；非极性基团＝丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和色氨酸；以及不带电荷的极性家族＝甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。其他优选的氨基酸基团如下：脂族羟基＝丝氨酸和苏氨酸；含酰胺基团＝天冬酰胺和谷氨酰胺；脂族基团＝丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；以及芳基＝苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。优选在不损害具有原始氨基酸序列的物质的特性的情况下进行这样的氨基酸取代。
通过将与上述重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列显示高度同一性的序列组合在一起，有可能选择具有与上述抗体中每一者的生物活性相当的生物活性的抗体。这种同一性通常是80％或更高，优选90％或更高，更优选95％或更高，最优选99％或更高的同一性。此外，通过将重链和轻链的氨基酸序列组合，该重链和轻链的氨基酸序列包含相对于重链或轻链的氨基酸序列其一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加，也有可能选择具有与上述抗体中每一者的生物活性相当的生物活性的抗体。
也可通过根据遗传重组技术用编码此类人抗体的重链和轻链中每一者的cDNA或优选用包含cDNA的载体转化真核细胞，并且然后培养产生基因修饰的人单克隆抗体的转化细胞，使得可从培养上清液获得抗体来获得抗CDH6人抗体。在该上下文中，例如可使用真核细胞，并且优选哺乳动物细胞诸如CHO细胞、淋巴细胞或骨髓瘤作为宿主。
此外，获得从人抗体文库(参见Wormstone,I.M.等人，InvestigativeOphthalmology&Visual Science，2002年，第43卷第7期：第2301-2308页；Carmen,S.等人，Briefings in Functional Genomics and Proteomics，2002年，第1卷第2期：第189-203页；Siriwardena,D.等人，Ophthalmology，2002年，第109卷第3期：第427-431页；等等)中选择的噬菌体展示源人抗体的方法也是已知的。
免疫偶联物
本申请的抗CDH6抗体可偶联到活性部分，并且该活性部分可包括药物部分和/或标记。
在一些实施方案中，该药物部分选自由以下项组成的组：细胞毒性剂、细胞因子、核酸、核酸相关分子、放射性核素、趋化因子、免疫(共)刺激分子、免疫抑制分子、死亡配体、凋亡诱导蛋白、激酶、前药转化酶、核糖核酸酶、激动性抗体或抗体片段、拮抗性抗体或抗体片段、生长因子、激素、凝血因子、纤溶活性蛋白、模拟这些物质的肽，以及它们的片段、融合蛋白或衍生物。
在一些实施方案中，该标记选自由以下项组成的组：放射性标记、荧光团、发色团、显影剂和金属离子。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含微管破坏药物和/或DNA损伤剂。
在一些实施方案中，细胞毒性剂可选自：紫杉醇(Paclitaxel)、细胞松弛素B(cytochalasin B)、短细菌素D(short bacteriocin D)、溴化乙锭(ethidium bromide)、吐根碱(emetine)、丝裂霉素(mitomycin；)、依托泊苷(etoposide)、onychothioside、thienoside、长春新碱(vincristine)、秋水仙碱(colchicine；)、多柔比星(doxorubicin)、红霉素(erythromycin)、dihydroxycarbamycin二酮(dihydroxycarbamycin dione)、微管蛋白抑制剂、米托蒽醌(mitoxantrone)、放线菌素D(actinomycin D)、1-去氢睾酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮质激素(glucocorticoids)、普鲁卡因(procaine)、布比卡因(bupivacaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)、嘌呤霉素(puromycin)、激肽释放酶(kallikrein)或其类似物或衍生物、抗代谢物、烷化剂、抗生素、抗有丝分裂剂、白喉毒素(diphtheria toxin)和相关分子及其活性片段和异二聚体分子、蓖麻毒蛋白毒素(ricin toxin)、霍乱毒素(cholera toxin)、志贺样毒素(shiga-like toxin,)、LT毒素、C3毒素、志贺毒素(shiga toxin)、百日咳毒素(pertussis toxin)、破伤风毒素(tetanustoxin)、大豆鲍曼-伯克蛋白酶抑制剂(soybean Bowman-Birk protease inhibitor)、假单胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin)、芦荟素(alorin)、岩藻糖苷(fucoside)、capsidin、gelanin、菜豆毒素链A(phaseolus toxin chain A)、capsidin链A(capsidin chain A)、α-溴毒素(alpha-bromotoxin)、橄榄苦苷(oleuropein)、葡萄球菌溶素蛋白(staphylinprotein)、美国商业蛋白、苦瓜抑制剂(bitter melon inhibitor,)、麻风树毒素(jatrophatoxin)、巴豆毒素(croton toxin)、肥皂草抑制剂(soapwort inhibitor)、白树毒素(whitetree toxin)、mitogellin、极限单端孢霉烯(limiting trichothecene)、酚霉素(phenomycin)和enoxycin毒素、核糖核酸酶(RNase)、DNase I、葡萄球菌内毒素A(staphylococcal endotoxin A)、美国商陆抗病毒蛋白(American commercial landantiviral protein)、白喉毒素(diphtheria toxin)和假单胞菌内毒素(Pseudomonasendotoxin)。
在一些实施方案中，微管蛋白抑制剂可以是medensin I或其类似物或衍生物；抗代谢物是氨基蝶呤(aminopterin)、6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟达拉滨(fludarabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、达卡巴嗪(dacarbazine)、羟基脲(hydroxyurea)、天冬酰胺酶(asparaginase)、吉西他滨(gemcitabine)或克拉屈滨(cladribine)；烷化剂是阿扎胞苷(azacitidine)、托布津(thiophan)、苯甲酸阿扎胞苷(azacitidine benzoate)、美法仑(melphalan)、carazacitidine(BSNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、dibromomannan、链脲霉素(streptozotocin)、达卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)、甲基苄肼(procarbazine)、丝裂霉素C(mitomycin C)、顺钼(cis-molybdenum)、carbomolybdenum、倍癌霉素A(duocarmycin A)、倍癌霉素SA(duocarmycin SA)、雷切尔霉素(rachelmycin，CC-1065)或其类似物或衍生物；抗生素是博来霉素(bleomycin)、阿霉素(adriamycin)、伊达比星(idarubicin)(或丝裂霉素(mitomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、puccamycin、antrixin(AMC))；抗有丝分裂剂是单甲基澳瑞他汀E或F；白喉毒素相关分子是白喉A链(diphtheria A chain)；蓖麻毒蛋白毒素(ricin toxin)是蓖麻毒蛋白A(ricin A)或去糖基化蓖麻毒蛋白A链毒素(deglycosylated ricin A chain toxin)；志贺样毒素(shiga-like toxin)是SLT I、SLTII和SLT IIV；美国商业蛋白是PAPI、PAPII、PAP S。
在一些实施方案中，放射性核素包括：At211、I131、I125、I123、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212、Tc99、S35、F19、N15、C14、C13或H3，任选地，放射性核素可经由螯合剂与抗体偶联。
在一些实施方案中，细胞因子包括：IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-23、IL-24、IL-27、IL_28a、IL_28b、IL-29、KGF IFNα、IFNβ、IFNγ、GM-CSF、CD40L、Flt3配体、干细胞因子、茴香胺或TNFα。
抗CDH6抗体-药物偶联物
本申请的抗CDH6抗体可经由接头结构部分偶联到药物以制备抗CDH6抗体-药物偶联物。药物没有特别限制，只要其具有可与接头结构连接的取代基或部分结构。根据偶联的药物，抗CDH6抗体-药物偶联物可用于多种目的。该药物的示例可包括具有抗肿瘤活性的物质、对血液疾病有效的物质、对自身免疫疾病有效的物质、抗炎症物质、抗菌物质、抗真菌物质、抗寄生虫物质、抗病毒物质和抗麻醉物质。
细胞毒性剂
下文将描述使用细胞毒性剂作为偶联到本发明抗CDH6抗体-药物偶联物的化合物的示例。细胞毒性剂没有特别限制，只要该化合物具有抗肿瘤效果并具有可与接头结构连接的取代基或部分结构。在肿瘤细胞中切割部分或全部接头时，细胞毒性剂释放，使得细胞毒性剂显示出抗肿瘤效果。由于接头在与药物的连接位置被切割，因此细胞毒性剂以其原始结构释放，以发挥其原始抗肿瘤效果。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含微管蛋白抑制剂和/或拓扑异构酶抑制剂。例如，细胞毒性剂可包括：单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、medensin I、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、喜树碱、奈莫柔比星(nemorubicin,)、PNU-159682、蒽环类、betacamycin、紫苏生物碱(perillyl alkaloids)、紫杉醇(paclitaxel)、孟鲁司特(montelukast)、依利奈法德(elinafide)、激肽释放酶(kallikrein)、倍癌霉素(duocarmycin)、雷切尔霉素(rachelmycin，CC-1065)或其类似物、衍生物或前药。
在一些实施方案中，该细胞毒性剂包含拓扑异构酶I抑制剂。例如，细胞毒性剂可包括喜树碱(CPT)或其衍生物。
作为非限制性示例，喜树碱可包括喜树碱和喜树碱衍生物，包括但不限于伊立替康(irinotecan)、托泊替康(topotecan)、勒托替康(lurtotecan)、斯拉替康(silatecan)、etirinotecan pegol(依替立替康聚乙二醇)、TAS103、9-氨基喜树碱(9-aminocamptothecin)、7-乙基喜树碱(7-ethylcamptothecin)、10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin)、9-硝基喜树碱(9-nitrocamptothecin)、10,11-亚甲二氧基喜树碱(10,11-methylenedioxycamptothecin)、9-氨基-10,11-亚甲二氧基喜树碱(9-amino-10,11-methylenedioxycamptothecin)、9-氯-10,11-亚甲二氧基喜树碱(9-chloro-10,11-methylenedioxycamptothecin,)、7-(4-甲基哌嗪基亚甲基)-10,11-亚乙二氧基-20(S)-喜树碱(7-(4-methylpiperazinomethylene)-10)、7-(4-甲基哌嗪基亚甲基)-10,11-亚甲二氧基-20(S)-喜树碱(7-(4-methylpiperazinomethylene)-10,1 1-methylenedioxy-20(S)-camptothecin)和7-(2-(N-异丙基氨基)乙基)-(20S)-喜树碱(7-(2-N-isopropylamino)ethyl)-(20S)-camptothecin)以及它们的立体异构体、盐和酯。
作为本发明中使用的细胞毒性剂的一个示例，可优选使用由下式表示的依喜替康(exatecan)(一种喜树碱衍生物)：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮((1S,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-2,3-dihydro-9-hydroxy-4-methyl-1H,12H-benzo[de]pyrano[3’,4’:6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-10,13(9H,15H)-dione)。
依喜替康可通过例如美国专利公开号US2016/0297890中描述的方法或其他已知方法容易地获得，并且第1位的氨基可优选用作与接头结构连接的位置。
由于依喜替康具有喜树碱结构，因此已知在酸性含水介质(例如pH为3的量级)中，平衡转变为具有形成的内酯环(闭环)的结构，而在碱性含水介质(例如pH为10的量级)中，平衡转变为具有开放的内酯环(开环)的结构。本文讨论的式II包括其同分异构体、内消旋体、外消旋体、对映体或非对映体，或其混合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。其中已经引入了对应于这种闭环结构和开环结构的依喜替康残基的药物偶联物也预期具有相当的抗肿瘤效果，并且不用说，这种药物缀合物中的任一者都包括在本发明的范围内。
细胞毒性剂的其他示例可包括在文献(Pharmacological Reviews，第68卷：第3-19页，2016年)中描述的细胞毒性剂。其具体示例可包括柔比星(doxorubicin)、加利车霉素(calicheamicin)、海兔毒素10(dolastatin 10)、澳瑞他汀(auristatin)诸如单甲基澳瑞他汀E(MMAE)和单甲基澳瑞他汀F(MMAF)、美登素(maytansinoid)诸如DM1和DM4、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体SG2000(SJG-136)、喜树碱衍生物SN-38、倍癌霉素(duocarmycin)诸如CC1065、鹅膏蕈碱(amanitin)、柔红霉素(daunorubicin)、丝裂霉素C(mitomycin C)、博来霉素(bleomycin)、环胞苷(cyclocytidine,)、长春新碱(vincristine)、长春花碱(vinblastine)、氨甲蝶呤(methotrexate)、铂基抗肿瘤剂(顺铂(cisplatin)及其衍生物)和紫杉醇(Taxo)及其衍生物。
在该抗体-药物偶联物中，每个抗体分子的偶联药物分子的数量是影响其疗效和安全性的关键因素。该抗体-药物偶联物的制备通过指定反应条件诸如用于反应的起始材料和试剂的量来进行，以便获得恒定数量的偶联药物分子。与低分子量化合物的化学反应不同，通常获得含有不同数量的偶联药物分子的混合物。每个抗体分子的偶联药物分子的数量被定义并表示为平均值，即偶联药物分子的平均数量。除非另有说明，即，除了代表在具有不同数量的偶联药物分子的抗体-药物偶联物混合物中包括的具有指定数量的偶联药物分子的抗体-药物偶联物的情况下，否则根据本发明的偶联药物分子的数量通常也意指平均值。与抗体分子偶联的依喜替康分子的数量是可控的，并且作为每个抗体的偶联药物分子的平均数，可偶联大约1个至10个依喜替康分子。依喜替康分子的数量优选为2至8、3至8、4至8、5至8、6至8或7至8，更优选为5至8，进一步优选为7至8，再进一步优选为8。应当注意，本领域技术人员可基于本申请的实施例的描述设计用于将所需数量的药物分子偶联到抗体分子的反应，并且可获得具有控制数量的偶联的依喜替康分子的抗体-药物偶联物。
接头结构
将描述本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物中药物偶联到抗CDH6抗体的接头结构。在本申请的抗体-药物偶联物中，将抗CDH6抗体偶联到药物的接头结构没有特别限制，只要所得抗体-药物偶联物可使用。接头结构可根据使用目的适当地进行选择和使用。接头结构的一个示例可包括已知文献(Pharmacol Rev，第68卷：第3-19页，2016年1月，Protein CellDOI 10.1007/s13238-016-0323-0等)中描述的接头。
可优选使用下文给出的任何接头结构。应当注意，该结构的左末端是与抗体连接的位置，并且其右末端是与药物连接的位置。此外，以下给定的接头结构中的VA表示由通过肽键连接的缬氨酸-丙氨酸(VA)组成的氨基酸序列，并且以下给定的接头结构中的GGFG表示由通过肽键连接的甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸(GGFG)组成的氨基酸序列。
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2o-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；and
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-.
在一些实施方案中，该间隔子包括自降解间隔子。例如，该自降解间隔子可包括对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)。
在一些实施方案中，该可切割肽可直接剪接至间隔子。
在一些实施方案中，L可包括：-Val-Cit-PABC-、-Val-Ala-PABC-、-Glu-Val-Cit-PABC-、-Ala-Ala-Asn-PABC-、-Gly-Val-Cit-PABC-、-Gly-Gly-Gly-PABC-、-Gly-Gly-Phe-Gly-PABC-、-Val-Cit-PAB-、-Val-Ala-PAB-、-Glu-Val-Cit-PAB-、-Ala-Ala-Asn-PAB-、-Gly-Val-Cit-PAB-、-Gly-Gly-Gly-PAB-或-Gly-Gly-Phe-Gly-PAB-。
例如，L可选自以下结构：
在一些实施方案中，对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)包含聚肌氨酸(聚-N-甲基甘氨酸)残基。
在一些实施方案中，L选自以下结构：
其中n5表示0至20的整数，任选地，n5可表示1至15的整数。
例如，n5可表示0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19或20。
例如，n5可表示1到20，1到19，1到18，1到17，1到16，1到15，1到14，1到13，1到12，1到11，1到10，1到9，1到8，1到7，1到6的整数。1到5，1到4，1到3，1到2，2到20，2到19，2到18，2到17，2到16，2到15，2到14，2到13，2到12，2到11，2到10，2到9，2到8，2到7，2到6。2至5，2至4，2至3，3至20，3至19，3至18，3至17，3至16，3至15，3至14，3至13，3至12，3至11，3至10，3至9，3至8，3至7，3至6，3至5。3到4，4到20，4到19，4到18，4到17，4到16，4到15，4到14，4到13，4到12，4到11，4到10，4到9，4到8，4到7，4到6，4到5，5到20，5到19。5至18，5至17，5至16，5至15，5至14，5至13，5至12，5至11，5至10，5至9，5至8，5至7，5至6，6至20，6至19，6至18，6至17，6至16，6至15。6至14，6至13，6至12，6至11，6至10，6至9，6至8，6至7，7至20，7至19，7至18，7至17，7至16，7至15，7至14，7至13，7至12，7至11。7至10，7至9，7至8，8至20，8至19，8至18，8至17，8至16，8至15，8至14，8至13，8至12，8至11，8至10，8至9，9至20，9至19，9至18，9至17。9至16，9至15，9至14，9至13，9至12，9至11，9至10，10至20，10至19，10至18，10至17，10至16，10至15，10至14，10至13，10至12或10至11的整数。
例如，n5可表示从1到7的整数。又例如，n5可以表示从8到15的整数。
例如，L可选自以下结构：
抗体-药物偶联物可通过使可由已知方法获得的化合物(例如，可通过专利公开文献US2016/297890中描述的方法获得(例如，可通过段落[0336]至[0374]中描述的方法获得))与具有巯基的抗体反应来产生。具有巯基的抗体可通过本领域技术人员熟知的方法(Hermanson,G.T，Bioconjugate Techniques，第56-136页，第456-493页，Academic Press，1996年)获得。
本发明的抗体-药物偶联物的一个具体示例可包括具有由下式表示的结构的抗体-药物偶联物：
其中n可以是1至10的任何数。例如，n可以是1至9.5、1至9、1至8.5、1至8、1至7.5、1至7、1至6.5、1至5.5、1至5、1至4.5、1至4、1至3.5、1至2.5、1至2、1至1.5、1.5至9.5，1.5至9，1.5至8.5，1.5至8，1.5至7.5，1.5至7，1.5至6.5，1.5至6，1.5至5.5，1.5至4.5，1.5至4，1.5至3.5，1.5至2.5，1.5至2，2至9.5，2至9，2至8。5，2至8，2至7.5，2至7，2至6.5，2至6，2至5.5，2至4.5，2至4，2至3.5，2至3，2至2.5，2.5至9.5，2.5至9，2.5至8.5，2.5至8，2.5至7.5，2.5至7，2.5至6，2.5至5.5，2.5至5，2.5至4.5，2.5至3.5，2.5至3，3至9.5，3至9，3至8.5，3至8，3至7.5，3至7，3至6.5，3至6，3至5.5，3至4.5，3至4，3至3.5，3。5至9.5，3.5至9，3.5至8.5，3.5至8，3.5至7.5，3.5至6.5，3.5至6，3.5至5.5，3.5至4.5，3.5至4，4至9.5，4至9，4至8.5，4至7.5，4至7，4至6。5，4至6，4至5.5，4至4.5，4至9.5，4至9，4至8.5，5至7，5至6.5，6.5至9，6.5至8.5，6.5至8，6.5至7.5，6.5至7，7至9.5，7至8.5，7至8，7至7.5，7.5至9.5，7.5至9，7.5至8.5，7.5至8，8至9.5，8至8.5，8.5至9，或8.5至9的任何数值。
在该上下文中，Ab代表本说明书中公开的抗CDH6抗体，并且该抗体经由源自该抗体的巯基与接头-有效载荷偶联。在该上下文中，n与所谓的DAR(药物-抗体比)具有相同的含义，并且表示每种抗体的药物-抗体比。具体地，n表示每个抗体分子的偶联药物分子的数量，其是定义并表示为平均值的数值，即偶联药物分子的平均数量。在本发明中，在通过常规规程F测量时，n可以是2至8，优选5至8，更优选7至8，并且还更优选8。
本发明的抗体-药物偶联物的一个示例可包括具有上述式所示结构的抗体-药物偶联物，其中由Ab表示的抗体包括选自由以下抗体(a)至(k)组成的组的任一种抗体或该抗体的功能片段或该抗体-药物偶联物的药理学上可接受的盐：
(a)由包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(b)由包含如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(c)由包含如SEQ ID NO:74所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(d)由包含如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(e)由包含如SEQ ID NO:75所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(f)由包含如SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(g)由包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(h)由包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(i)由包含如SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(j)由包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:82所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(k)由包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(l)由包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列的重链和包含如SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列的轻链组成的抗体；
(m)选自由抗体(a)至(j)组成的组的任一种抗体，其中重链或轻链包含一个或两个或多个修饰，该一个或两个或多个修饰选自由以下项为代表的翻译后修饰组成的组：N连接的糖基化、O连接的糖基化、N末端加工、C末端加工、脱酰胺、天冬氨酸异构化、甲硫氨酸氧化、甲硫氨酸残基添加到N末端、脯氨酸残基酰胺化和N末端谷氨酰胺或N末端谷氨酸转化为焦谷氨酸，以及羧基末端缺失一个或两个氨基酸。
本发明的抗体-药物偶联物的一个例子可以包括具有由下式代表的结构的抗体-药物偶联物：
其中，n可以是1至10的任何数字；
其中Ab所代表的抗体包括一个重链可变区(VH)，包括(1)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；和/或轻链可变区(VL)，包括(1)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；和其中n是1至10的任意数值(例如2到10，4到10，5到10，6到10，7到10，和8到10)。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链可变区域。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区域，和具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区域。在一些实施方案中，Ab代表的抗体包括CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1或CL069707-H2L2。
本发明的抗体-药物偶联物的另一个例子可以包括具有由下式代表的结构的抗体-药物偶联物：
其中，n可以是1至10的任何数字；
其中Ab所代表的抗体包括一个重链可变区(VH)，包括(1)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；和/或轻链可变区(VL)，包括(1)具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；和其中n是1至10的任意数值(例如2到10，4到10，5到10，6到10，7到10，和8到10)。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链可变区域。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的重链可变区域，和具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的轻链可变区域。在一些实施方案中，Ab代表的抗体包括CL069463-H1L1，CL069463-H1L2，CL069463-H1L3，CL069463-H2L1，CL069463-H2L2或CL069463-H2L3。
本发明的抗体-药物偶联物的另一个例子可以包括具有由下式代表的结构的抗体-药物偶联物：
其中，n可以是1至10的任何数字；
其中Ab所代表的抗体包括一个重链可变区(VH)，包括(1)具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；和/或轻链可变区(VL)，包括(1)具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；和其中n是1至10的任意数值(例如2到10，4到10，5到10，6到10，7到10，和8到10)。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQ IDNO:96的氨基酸序列的轻链可变区域。
本发明的抗体-药物偶联物的另一个例子可以包括具有由下式代表的结构的抗体-药物偶联物：
其中，n可以是1至10的任何数字；
其中Ab所代表的抗体包括一个重链可变区(VH)，包括(1)具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；和/或轻链可变区(VL)，包括(1)具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；和其中n是1至10的任意数值(例如2到10，4到10，5到10，6到10，7到10，和8到10)。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQ IDNO:104的氨基酸序列的轻链可变区域。
本发明的抗体-药物偶联物的另一个例子可以包括具有由下式代表的结构的抗体-药物偶联物：
其中，n可以是1至10的任何数字；
其中Ab所代表的抗体包括一个重链可变区(VH)，包括(1)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链CDR1(HCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链CDR2(HCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR3(HCDR3)；和/或轻链可变区(VL)，包括(1)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1(LCDR1)；(2)具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链CDR2(LCDR2)；和(3)具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR3(LCDR3)；和其中n是1至10的任意数值(例如2到10，4到10，5到10，6到10，7到10，和8到10)。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的轻链可变区域。在一些实施方案中，Ab所代表的抗体包括具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的重链可变区域，和具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的轻链可变区域。在一些实施方案中，Ab代表的抗体包括CL069707-H1L1。
药物
实施例中的抗CDH6抗体-药物偶联物是抗CDH6抗体和/或具有内化活性的抗体的功能片段与具有抗肿瘤活性(诸如细胞毒性活性)的药物的偶联物。由于该抗CDH6抗体-药物偶联物对表达CDH6的癌细胞显示出抗肿瘤活性，因此其可用作药物，并且特别是用作癌症的治疗剂和/或预防剂。
本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物可吸收水分或具有吸附水，以例如当其留在空气中或进行重结晶或纯化规程时转化为水合物。这种含水的化合物或药理学上可接受的盐也包括在本发明中。本发明也可包括抗CDH6抗体-药物偶联物，其中构成该抗体-药物偶联物的一个或多个原子被原子的同位素替代。包含用这种同位素标记的抗体-药物偶联物的组合物可用作例如治疗剂、预防剂、研究试剂、测定试剂、诊断剂和体内诊断显影剂。
应用本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物的癌症类型没有特别限制，只要癌症在待治疗的癌细胞中表达CDH6即可。其示例可包括肾细胞癌(例如，肾透明细胞癌或乳头状肾细胞癌)、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤和成神经细胞瘤，不过癌症并不限于此，只要癌症表达CDH6即可。癌症的更优选示例可包括肾细胞癌(例如，肾透明细胞癌和乳头状肾细胞癌)和卵巢癌。
本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物可优选施用给哺乳动物，并且更优选施用给人。
用于包含本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物的药物组合物的物质可根据应用剂量或应用浓度适当地选自药物添加剂和本领域常用的其他物质，然后使用。
本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物可以包含一种或多种药学上相容的组分的药物组合物的形式施用。例如，药物组合物通常包含一种或多种药物载体(例如，无菌液体(例如，水和油(包括石油和动物来源、植物来源或合成来源的油(例如，花生油、大豆油、矿物油和芝麻油))))。当静脉内施用药物组合物时，水是更典型的载体。盐水溶液、葡萄糖水溶液和甘油水溶液也可用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物溶媒是本领域已知的。如有需要，组合物也可包含痕量的保湿剂、乳化剂或pH缓冲剂。
已知多种递送系统，并且它们可用于施用本发明的抗CDH6抗体-药物偶联物。施用途径的示例可包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下途径。例如，可通过注射或推注(bolus injection)进行施用。根据具体的优选实施方案，上述抗体-药物偶联物的施用通过注射进行。肠胃外施用是优选的施用途径。
本申请公开了以下具体实例：
实例1：免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其包含特异性结合钙粘蛋白-6(CDH6)表位的抗体或其抗原结合片段，其抗体或其抗原结合片段具有一种或多种下述特性：
i)在ELISA测定中能够以低于约3.1×10-9M的KD值结合CDH6蛋白；以及
ii)在结合CDH6时能够被表达CDH6的细胞内化。
实例2：根据实例1的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中CDH6是哺乳动物CDH6蛋白。
实例3：根据实例1至2中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中CDH6是人CDH6蛋白。
实例4：根据实例1至3中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、完整抗体、人抗体、人源化抗体和/或嵌合抗体。
实例5：根据实例1至4中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗原结合片段包括Fab、Fab'、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。
实例6：根据实例1至4中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗体是单克隆抗体。
实例7：根据实例1至6中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗体是嵌合抗体、人源化抗体和/或人抗体。
实例8:根据实例1至7中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，该抗体或抗原结合片段包含重链可变区(VH)的至少一个CDR(互补决定区)，VH包含如SEQID NO:18、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:95或
SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
实例9：根据实例1至8中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，该抗体或抗原结合片段包含轻链可变区(VL)的至少一个CDR，VL包含如SEQ ID NO:23、SEQID NO:68、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
实例10：根据实例1至9中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
实例11：根据实例1至10中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQID NO:89或SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
实例12：根据实例1至11中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQID NO:90或SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列。
实例13：根据实例1至12中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
实例14：根据实例1至13中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
实例15：根据实例1至14中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
实例16：根据实例1至15中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH，其中VH包含如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:67、SEQID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
实例17：根据实例1至16中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含抗体重链恒定区。
实例18:根据实例17的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗体重链恒定区包含源自人IgG的恒定区。
实例19:根据实例17至18中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗体重链恒定区包含如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
实例20:根据实例1至16中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含抗体重链，其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
实例21:根据实例1至20中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VL，其中该VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，LCDR1包含如SEQ ID NO:
5、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列。
实例22:根据实例1至21中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VL，其中该VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，LCDR2包含如SEQ ID NO:
6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列。
实例23:根据实例1-22中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VL，其中该VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，LCDR3包含如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
实例24:根据实例1-23中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VL，其中VL包含LCDR1、LCDR2、LCDR3，LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
其中LCDR1包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或者
其中LCDR1包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或者
其中LCDR1包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
实例25：根据实例1至24中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH和VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且
LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
实例26:实例1至25中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH和VL，其中VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:11所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ IDNO:92所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，LCDR1包含如
SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
实例27:根据实例1至26中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VL，其中VL包含如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:69、SEQID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
实例28:根据实例1至27中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含VH和VL，其中VH包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
实例29：根据实例1至28中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含抗体轻链恒定区。
实例30:根据实例1至29中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该抗体轻链恒定区包含如SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
实例31:根据实例1至30中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含抗体重链，其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
实例32:根据实例1至31中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，包含抗体重链和抗体轻链，其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；或者
其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列；或者
其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列；或者
其中该抗体重链包含如SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，并且该抗体轻链包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
实例33：根据实例1至32中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述免疫偶联物进一步包含偶联到所述抗体或其抗原结合片段的活性部分。
实例34：根据实例33的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述活性部分包含药物部分和/或标记。
实例35：根据实例34的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该药物部分选自由以下项组成的组：细胞毒性剂、细胞因子、核酸、核酸相关分子、放射性核素、趋化因子、免疫(共)刺激分子、免疫抑制分子、死亡配体、凋亡诱导蛋白、激酶、前药转化酶、核糖核酸酶、激动性抗体或抗体片段、拮抗性抗体或抗体片段、生长因子、激素、凝血因子、纤溶活性蛋白、模拟这些物质的肽，以及它们的片段、融合蛋白或衍生物。
实例36：根据实例34的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该标记选自由以下项组成的组：放射性标记、荧光团、发色团、显影剂和金属离子。
实例37：根据实例35至36中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中中所述细胞毒性剂包括微管破坏药物和/或DNA损伤剂。
实例38：根据实例35至37中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括微管蛋白抑制剂和/或拓扑异构酶抑制剂。
实例39：根据实例35至38中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括拓扑异构酶I抑制剂。
实例40：根据实例35至39中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括喜树碱或其衍生物。
实例41：根据实例35至40中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包含下式II的结构：
实例42：根据实例1至41中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述免疫偶联物包含式(I)的抗体-药物偶联物(ADC)：
Ab-(L-(D)m)n,
(I)
其中Ab是实例1至41中任一项所述的抗体或抗原结合蛋白；
L是接头；
D是药物部分；
m是1至8的整数；并且
n是1至10的任何数。
实例43：根据实例42的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自：可切割接头和不可切割接头。
实例44：根据实例42至43中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包括可切割肽。
实例45：根据实例44的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述可切割肽可被酶切割。
实例46：根据实例45的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述酶包括组织蛋白酶B。
实例47：根据实例44至46中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，1.其中所述可切割肽或L包含氨基酸单元。
实例48：根据实例47的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述氨基酸单元包括二肽、三肽、四肽或五肽。
实例49：根据实例47至48中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述氨基酸单元选自：Val-Cit、Val-Ala、Glu-Val-Cit、Ala-Ala-Asn、Gly-Val-Cit、Gly-Gly-Gly和Gly-Gly-Phe-Gly。
实例50：根据实例42至49中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包含间隔子。
实例51：根据实例50的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述间隔子包括自降解间隔子。
实例52：根据实例51的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述自降解间隔子包括对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)。
实例53：根据实例44至52中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述可切割肽直接剪接至所述间隔子。
实例54：根据实例42至53中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包括：-Val-Cit-PABC-、-Val-Ala-PABC-、-Glu-Val-Cit-PABC-、-Ala-Ala-Asn-PABC-、-Gly-Val-Cit-PABC-、-Gly-Gly-Gly-PABC-、-Gly-Gly-Phe-Gly-PABC-、-Val-Cit-PAB-、-Val-Ala-PAB-、-Glu-Val-Cit-PAB-、-Ala-Ala-Asn-PAB-、-Gly-Val-Cit-PAB-、-Gly-Gly-Gly-PAB-或-Gly-Gly-Phe-Gly-PAB-。
实例55：根据实例42至54中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述间隔子包含-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的结构，其中La表示-O-或单键；Lb表示-CR2(-CR3)-或单键，其中R2和R3各自独立地表示C1-C6烷基、-(CH2)na-NH2、-(CH2)nb-COOH或-(CH2)nc-OH，n1表示0至6的整数，na、nb和nc各自独立地表示1至4的整数，但当na为0时，R2和R3不相同，并且Lc表示-C(＝O)-。
实例56：根据实例55的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述间隔子包括-NH-(CH2)3-C(＝O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(＝O)-。
实例57：根据实例42至56中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包含-L1-L2-L3-所示的结构，其中L1表示-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-(CH2)n2-C(＝O)-、-CH2-C(＝O)-NH-(CH2)n3-C(＝O)-或-C(＝O)-(CH2)n4-C(＝O)-，其中n2表示2至8的整数，n3表示1至8的整数，并且n4表示1至8的整数；L2表示氨基酸单元；L3表示所述自降解间隔子。
实例58：根据实例42至57中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自：
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2o-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-yl-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；and
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-。
实例59：根据实例42至58中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)包含聚肌氨酸钠(聚-N-甲基甘氨酸)残基。
实例60：根据实例42至59任一的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自以下结构：
其中n5表示0至20的整数。
实例61：根据实例60的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中n5表示8至15的整数。
实例62：根据实例42至61中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自以下结构：
实例63：根据实例42至62中任一项的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗体-药物偶联物选自以下结构：
其中n是1至10的任何数。
实例64：根据实例63的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中n是2至9的任何数。
实例65：一种制备根据实例1至64中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法，所述方法包括使根据实例1至32中任一项所述的抗原结合蛋白与药物-接头中间体化合物反应的步骤。
实例66：一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实例1-64中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
实例67：根据实例66所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。
实例68：一种根据实例1-64中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或实例66至67中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
实例69：根据实例68所述的用途，其中所述肿瘤是表达CDH6的肿瘤。
实例70：根据实例68至69中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
实例71：一种用于治疗肿瘤的方法，所述方法包括向受试者施用根据实例1至64中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
实例72：根据实例71所述的方法，其中所述肿瘤是表达CDH6的肿瘤
实例73：根据实例71至72中任一项所述的方法，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
实例74：一种用于治疗肿瘤的方法，所述方法包括同时、分开或序贯地向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含至少一种组分和至少一种抗肿瘤药物，所述至少一种组分选自根据实例1至64中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
实施例
阐述以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开和描述，而不是为了限制发明人视为其发明的范围，也不是为了表示以下实验是所进行的全部或唯一实验。已努力确保所使用的数字(例如数量、温度等)的准确性，但应将一些实验误差和偏差考虑在内。除非另有说明，否则份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度单位为摄氏度，压力是大气压或接近大气压。可使用标准缩写，例如bp表示碱基对，kb表示千碱基，pl表示皮升，s或sec表示秒，min表示分钟，h或hr表示小时，aa表示氨基酸，nt表示核苷酸，i.m.表示肌内的(地)，i.p.表示腹膜内的(地)，s.c.表示皮下的(地)，等等。
实施例1接头-有效载荷的制备
1.1化合物LP-1的制备
步骤1：中间体11-1的合成
在室温下，向化合物11-1A(Mc-Val-Ala-OH，购自MedChemExpress Shanghai，2.4g，6.29mmol)和11-1B(3.18g，6.29mmol)的DCM:MeOH(v:v＝2:1，90mL)混合物的溶液中加入EEDQ(1.86g，7.55mmol)。将反应体系在室温下搅拌24小时，真空除去溶剂，通过快速色谱法进一步纯化粗残余物，得到化合物11-1(3.9g，71％)。LC-MS(ESI,m/z):868.49(M+H).
步骤2：中间体11-2的合成
将化合物11-1(2g，2.3mmol)溶解在无水THF(50mL)中，在0℃下在氩气气氛下加入氟化氢-吡啶(4.6g，46mmol)，然后将反应混合物在0℃下搅拌2小时。加入水淬灭反应体系，用DCM萃取，并将有机相干燥并浓缩。通过硅胶色谱法纯化残余物，得到化合物11-2(1.1g，76％)。LC-MS(ESI,m/z):630.31(M+H).
步骤3：中间体11-3的合成
将化合物11-2(700mg，1.11mmol)溶解在无水DMF(4mL)中，在室温下在氩气气氛下加入DIPEA(0.39mL，2.23mmol)和4,4'-二硝基碳酸二苯酯(406mg，1.33mmol)，并在室温下搅拌过夜。通过浓缩除去溶剂，并从MTBE中沉淀出产物，通过过滤收集黄色固体，用乙醚洗涤，并干燥，得到化合物11-3，其直接用于下一步骤。LC-MS(ESI,m/z):795.41(M+H).
步骤4：中间体11-4的合成
将化合物11-3(300mg，0.44mmol)溶解在无水DMF(4mL)中，加入干燥的吡啶(1mL)，随后加入甲磺酸依喜替康(购自MedChemExpress Shanghai，234mg，0.44mmol)和HOBt(60mg，0.44mmol)。将反应混合物在室温下在氩气下搅拌过夜。通过制备型HPLC纯化产物，得到中间体11-4(230mg，48％)。LC-MS(ESI,m/z):1091.53(M+H).
步骤5：中间体11-5的合成
将化合物11-4(200mg，0.183mmol)溶解在1mL无水DCM中，在0℃下加入300μL TFA，将反应混合物在室温下搅拌30分钟，通过浓缩除去溶剂，得到中间体11-5，为TFA盐，其不经进一步纯化用于下一步骤。LC-MS(ESI,m/z):991.47(M+H).
步骤6：化合物LP-1的合成
将化合物11-5(120mg，0.109mmol)溶解在1mL无水DMF中，加入Ac-Sar10-COOH(84mg，0.109mmol)，随后加入HATU(50mg，0.130mmol)和DIPEA(38μL，0.22mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜，通过浓缩除去溶剂，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到化合物LP-1(74mg，38％)。LC-MS(ESI,m/z):1743.85(M+H).
1.2化合物LP-2的制备
LP-2
化合物LP-2的合成按照化合物LP-1的规程进行，起始材料11-1A用Mc-GGFG-OH(购自MedChemExpress Shanghai)替代，得到化合物LP-2，呈米色无定形固体。LC-MS(ESI,m/z):1891.90(M+H).
实施例2人源化抗CDH6抗体的制备和筛选
小鼠抗CDH6抗体CL069707通过CDR移植(Proc.Nal.Acad.Sci.USA，第86卷：第10029-10033页，1989年)人源化。将CL069707的CDR区移植到最相似的人种系序列中。一些重要的关键残基基于例如Queen等人(Proc.Nal.Acad.Sci.USA，第86卷：第10029-10033页，1989年)给出的标准被回复突变。
将两种人源化重链变体命名为CL069707-H1、CL069707-H2。CL069707-H1重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:74所示。CL069707-H2重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:75所示。将两种人源化轻链变体命名为CL069707-L1、CL069707-L2。CL069707-L1轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示。CL069707-L2轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示。
合成编码全长CL069707-H1、CL069707-H2、CL069707-L1、CL069707-L2氨基酸序列的DNA序列，并构建到pCDNA3.1表达载体中。在293细胞中通过组合重链和轻链产生抗体CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2。
如下测试人源化抗体对肿瘤细胞的结合EC50。在37℃下在5％ CO2气氛中，将人卵巢癌细胞系OVCAR-3(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)细胞培养物作为独立单层培养物在体外维持。使用胰蛋白酶-EDTA部分消化收获细胞，随后以1000rpm离心5分钟。将细胞重悬于冷PBS中，并加入Ch069707以及CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2抗体的系列稀释液。Ch069707抗体是嵌合抗体。可变区与CL069707的可变区相同，恒定区与人IgG1恒定区(SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71)相同。将细胞溶液混合，在4℃下温育，并在加入第二抗体偶联物(用于检测目的)之前用冷PBS洗涤。在4℃下孵育后，用PBS洗涤细胞，并且然后进行流式细胞术(FACS)分析。图1A显示CL069707-H1L1、CL069707-H1L2、CL069707-H2L1和CL069707-H2L2对OVCAR-3细胞的EC50相似。图1B显示CL069707-H1L1对OVCAR-3细胞的EC50略低于Ch069707。
小鼠抗CDH6抗体CL069463也用同样的方法人源化。结果示于图2中。CL069463-H1L1、CL069463-H2L2、CL069463-H2L3对OVCAR-3细胞的EC50与Ch069463相似。Ch069463抗体是嵌合抗体。可变区与CL069463的可变区相同，恒定区与人IgG1恒定区(SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71)相同。
实施例3人源化CL069707-H1L1的体外评价
3.1CL069707-H1L1对人CDH6、CDH9和CDH10的结合的分析
CDH9和CDH10是与CDH6最密切相关的家族成员。通过ELISA结合测定分析CL069707-H1L1对人CDH6、CDH9和CDH10 ECD结构域的结合。人CDH6-EC6D-His、CDH9-ECD-His和CDH10-ECD-His抗原获自百普赛斯公司。将100μLPBS稀释的1μg/mL抗原加入到96孔板中，并在4℃下温育过夜。将孔板用300μL洗涤缓冲液洗涤3次。然后将100μL/孔的1％ BSA封闭剂加入孔板中，并在37℃下温育1h，然后弃去封闭剂。将CL069707-H1L1的3倍系列稀释液加入孔板中，并且然后在37℃下温育1h。然后将孔板用300μL洗涤缓冲液洗涤3次。将1％BSA稀释的100μL/孔的HRP偶联的抗人抗体加入到孔板中，并且然后在37℃下温育1h。将孔板用300μL洗涤缓冲液洗涤3次。将100μL/孔的TMB底物加入到孔板中，并在室温下温育约10min。然后用100μL/孔的终止液终止反应体系。用酶标仪读取OD450并处理数据。结果示于图3中。CL069707-H1L1以0.1nM的EC50与人CDH6-ECD-His结合，CL069707-H1L1不与CDH9-ECD-His或CDH10-ECD-His蛋白结合。
3.2评估CL069707-H1L1对人、食蟹猴、小鼠和大鼠CDH6抗原的ELISA结合EC50
通过ELISA分析CL069707-H1L1对人、食蟹猴、小鼠或大鼠CDH6抗原的结合。人、食蟹猴、小鼠和大鼠CDH6-ECD-His抗原获自百赛普斯公司。ELISA用与实施例3.1中所述相同的方法进行。结果示于图4中。CL069707-H1L1以相似的EC50与人、食蟹猴、小鼠和大鼠CDH6-ECD-His抗原结合。
3.3评估CL069707-H1L1和Ch069707对人和食蟹猴CDH6抗原的结合常数
使用基于生物膜层干涉(BLI)技术的系统测量CL069707-H1L1和Ch069707的结合亲和力。将抗体以100nM浓度加载到AHC(抗hIgG Fc捕获)。然后将3.13nM、6.25nM、12.5nM、25nM、50nM和100nM的人CDH6-ECD-His或食蟹猴CDH6-ECD-His抗原与抗体偶联的生物传感器尖端一起温育以测量抗原和抗体之间的结合。根据由各抗原浓度获得的六个不同的结合曲线，基于1:1结合模型计算结合常数(KD)。结果示于表2中。CL069707-H1L1和Ch069707以相似的亲和力与人CDH6-ECD-His抗原结合。CL069707-H1L1以相似的亲和力与人CDH6-ECD-His和食蟹猴CDH6-ECD-His抗原结合。
表2
实施例4抗体-药物偶联物的制备
用于制备抗体-药物偶联物的一般方法
可用于本发明的抗体-药物偶联物的抗体没有特别限制，只要它是具有内化活性的抗CDH6抗体或该抗体的功能片段即可。
接下来，将描述制备本发明的抗体-药物偶联物的典型方法。应当注意，在以下说明中，每个反应方案中所示的“化合物编号”用于表示化合物。具体地，将各化合物称为“式(1)的化合物”、“化合物(1)”等。这同样适用于其他化合物编号。
通过使具有通过还原抗CDH6抗体，抗体硫键转化为巯基，并与化合物(2)反应，可制备下文给出的其中抗CDH6抗体经由硫醚与接头结构连接的式(1)所示的抗体-药物偶联物。该抗体-药物偶联物可例如通过以下方法制备。
[表达式1]
其中Ab表示具有巯基的抗体，其中L1具有-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-所示的结构，并且L1'表示下式所示的马来酰亚胺基。
[式1]
其中(NH-DX)具有下式所示的结构。
[式2]
-L1-Lx-具有下式中的任一者所示的结构：
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2o-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；和
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-。
在上述反应方案中，抗体-药物偶联物(1)可理解为具有以下结构：其中从药物到接头末端的一个结构部分连接到一个抗体。然而，仅为了方便起见给出了本说明，并且实际上存在许多其中多个上述结构部分连接到一个抗体分子的情况。这同样适用于下文所述的制备方法的解释。
具有巯基的抗体可通过本领域技术人员熟知的方法(Hermanson,G.T，Bioconjugate Techniques，第56-136页，第456-493页，Academic Press，1996年)获得。该方法的示例可包括但不限于：使特劳特试剂与抗体的氨基反应；使N-琥珀酰亚胺基S-乙酰基硫代链烷酸酯与抗体的氨基反应，随后与羟胺反应；使N-琥珀酰亚胺基3-(吡啶基二硫代)丙酸酯与抗体反应，然后与还原剂反应；使抗体与还原剂诸如二硫苏糖醇、2-巯基乙醇或三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)反应以还原抗体中的链间二硫键，以便形成巯基。
具体地，链间二硫键被部分或完全还原的抗体可通过使用0.3摩尔当量至3摩尔当量的TCEP作为抗体中每个链间二硫键的还原剂，并使还原剂与抗体在含有螯合剂的缓冲溶液中反应来获得。螯合剂的示例可包括乙二胺四乙酸(EDTA)和二乙烯三胺五乙酸(DTPA)。螯合剂可以1mM至20mM的浓度使用。磷酸钠、硼酸钠、乙酸钠等溶液可用作缓冲溶液。
应当注意，通过使巯基与药物-接头部分进行加成反应，该药物-接头部分可通过硫醚键偶联。
然后，对于每个具有巯基的抗体，使用2摩尔当量至20摩尔当量的化合物(2)可制备抗体-药物偶联物(1)，其中每个抗体偶联2个至8个药物分子。具体地，可将含有溶解于其中的化合物(2)的溶液加入到含有具有巯基的抗体的缓冲溶液中以进行反应。在该上下文中，醋酸钠溶液、磷酸钠、硼酸钠等可用作缓冲溶液。反应的pH为5至9，并且更优选地，反应体系可在接近pH 7的条件下进行。有机溶剂诸如二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)或N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)可用作溶解化合物(2)的溶剂。反应体系可通过将含有以1％至20％v/v溶解在有机溶剂中的化合物(2)的溶液加入到含有具有巯基的抗体的缓冲溶液中来进行。反应温度为0℃至37℃，更优选为10℃至25℃，并且反应时间为0.5小时至2小时。可通过使未反应的化合物(2)与含硫醇试剂的反应性失活来终止反应体系。含硫醇试剂是例如半胱氨酸或N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)。更具体地，通过向所用的化合物(2)中加入1摩尔当量至2摩尔当量的NAC，并将所得混合物在室温下温育10分钟至30分钟，可终止反应体系。
抗体-药物偶联物的鉴定
可根据下述常规规程对制备的抗体-药物偶联物(1)进行浓缩、缓冲液交换、纯化并测量抗体浓度和每个抗体分子偶联的药物分子的平均数，以鉴定抗体-药物偶联物(1)。
常规规程A：抗体或抗体-药物偶联物水溶液的浓缩
向Amicon Ultra(50000MWCO，密理博公司)容器中加入抗体或抗体-药物偶联物的溶液，并通过离心(在2000G至3800G下离心5分钟至20分钟)浓缩抗体或抗体-药物偶联物的溶液。
常规规程B：抗体浓度的测量
使用酶标仪(Multiskan GO，赛默飞世尔科技公司)，根据制造商定义的方法进行抗体吸收的测量。在这一方面，使用了抗体间不同的280nm吸收系数(1.3mL mg-1cm-1至1.8mL mg-1cm-1)。
常规规程C：抗体的缓冲液交换
根据制造商定义的方法，用含有氯化钠(50mM)和EDTA(2mM)的磷酸盐缓冲液(50mM，pH 7.0)(在本说明书中称为PBS7.0/EDTA)平衡ZebaTM旋转脱盐柱(5mL，40K MWCO，Thermo ScientificTM)。将抗体水溶液以2mL/ZebaTM(5mL)柱的量上样，然后通过离心脱盐柱(在1000G下离心4分钟)收集级分(约2mL)。该级分可通过常规规程A浓缩。在使用常规规程B测量抗体浓度后，使用PBS7.0/EDTA将抗体浓度调节至大于10mg/mL。
常规规程D：抗体-药物偶联物的纯化
用任何可获得的制剂缓冲溶液(诸如含有氯化钠(150mM)的组氨酸-乙酸盐缓冲液(20mM组氨酸，pH 5.5)或含有氯化钠(50mM)的磷酸盐缓冲液(50mM，pH 7.0))平衡ZebaTM旋转脱盐柱(5mL，40K MWCO，Thermo ScientificTM)。将抗体-药物偶联物的反应水溶液(约2mL)上样到ZebaTM柱(5mL)上，然后通过离心脱盐柱(在1000G下离心4分钟)收集抗体级分(约2mL)。将凝胶过滤纯化过程(其中将收集的级分再次上样到ZebaTM脱盐柱上，并通过离心进行洗脱)重复总共2次，以获得不含非偶联的接头-有效载荷和低分子量化合物(三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)、N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)和二甲基亚砜)的抗体-药物偶联物。
常规规程E：抗体-药物偶联物中的抗体浓度和每个抗体分子偶联的药物分子的平均数的测量
可通过测量抗体-药物偶联物的水溶液在280nm和370nm两个波长处的UV吸光度，然后进行如下所示的计算来计算抗体-药物偶联物中的偶联药物浓度。
任何给定波长处的总吸光度等于存在于系统中的所有光吸收化学物质的吸光度的总和[吸光度的加和性]。因此，基于抗体和药物的摩尔吸收系数在抗体和药物之间的偶联前后不变化这一假设，抗体-药物偶联物中的抗体浓度和药物浓度由以下方程表示。
A280＝AD,280+AA,280＝εD,280CD+εA,280CA 公式(1)
A370＝AD,370+AA,370＝εD,370CD+εA,370CA 公式(2)
在该上下文中，A280表示抗体-药物偶联物的水溶液在280nm处的吸光度，A370表示抗体-药物偶联物的水溶液在370nm处的吸光度，AA,280表示抗体在280nm处的吸光度，AA,370表示抗体在370nm处的吸光度，AD,280表示偶联物前体在280nm处的吸光度，AD,370表示偶联物前体在370nm处的吸光度，εA,280表示抗体在280nm处的摩尔吸光系数，εA,370表示抗体在370nm处的摩尔吸光系数，εD,280表示偶联物前体在280nm处的摩尔吸光系数，εD,370表示偶联物前体在370nm处的摩尔吸光系数，CA表示抗体-药物偶联物中的抗体浓度，并且CD表示抗体-药物偶联物中的药物浓度。
在该上下文中，关于εA,280、εA,370、εD,280和εD,370，使用预先准备的值(基于计算的估计值或通过化合物的UV测量获得的测量值)。例如，εA,280可通过已知的计算方法(ProteinScience，1995年，第4卷：第2411-2423页)从抗体的氨基酸序列中估计。εA,370通常为零。εD,280和εD,370可根据朗伯-比尔定律(吸光度摩尔浓度×摩尔吸收系数×光程)通过测量所用偶联物前体以一定摩尔浓度溶解于其中的溶液的吸光度来获得。CA和CD可通过测量抗体-药物偶联物的水溶液的A280和A370，并且然后通过代入这些值求解联立公式(1)和(2)来确定。此外，通过将CD除以CA，可确定每个抗体的偶联药物分子的平均数。
常规规程F：每个抗体分子的偶联药物分子的平均数的测量-(2)
除了上述“常规规程E”外，抗体-药物偶联物中每个抗体分子的偶联药物分子的平均数也可通过液相色谱-质谱仪(LC-MS)分析使用以下方法测定。在下文中，将描述当抗体通过二硫键与接头-有效载荷偶联时通过LC-MS测量偶联的药物分子的平均数的方法。本领域技术人员能够参考该方法，根据抗体和接头-有效载荷之间的连接方式，通过LC-MS适当地测量偶联的药物分子的平均数。
用于LC-MS分析的样品的制备(抗体-药物偶联物的还原)
将抗体-药物偶联物溶液(大约5mg/mL，6μL)与二硫苏糖醇(DTT)(100mM，3μL)和21μL水的水溶液混合。通过在37℃下温育混合物30分钟，抗体-药物偶联物的轻链和重链之间的二硫键被切割。将所得样品用于LC-MS分析。
HPLC参数
柱：Agilent PLRP-S，50×2.1mm，8μm。
检测波长：280nm
带宽：4nm
柱温箱温度：80℃
自动采样恒温器：5℃
流速：0.5mL/min
注入量：5μL
流动相A：0.05％ TFA，H2O
流动相B：0.05％ TFA，ACN
梯度程序(B％)：25％至34％(0min至0.7min)，34％至45％(0.7min至5min)，45％至90％(5min至6min)，90％(6min至7min)，90％至25％(7min至7.10min)，25％(7.10min至10min)
MS参数
气体温度：350℃
干燥气体：13L/min
雾化气压力：45psig
毛细管电压：5000V
碎裂电压：350V
质量范围：500m/z至8000m/z
采集速率：1光谱/s
数据分析
根据ESI扫描图，可检测与药物分子结合的轻链(与i药物分子结合的轻链:Li)和与药物分子结合的重链(与i药物分子结合的重链:Hi)。
根据以下表达式，对于峰面积的总校正值，计算每条链的峰面积比(％)。
结合的轻链的峰面积比
i药物分子＝100％×ALi/(AL0+AL1)
结合的重链的峰面积比
i药物分子＝100％×AHi/(AH0+AH1+AH2+AH3)
根据以下表达式计算抗体-药物偶联物每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数。
偶联的药物分子的平均数＝(L0峰面积比×0+L1峰面积比×1+H0峰面积比×0+H1峰面积比×1+H2峰面积比×2+H3峰面积比×3)×2
常规规程G：抗体-药物偶联物中抗体聚集的测量
可使用以下方法通过高效液相色谱(HPLC)分析中的体积排阻色谱(SEC)来确定抗体-药物偶联物中的聚集。
HPLC系统：Agilent 1260Infinity II HPLC系统(安捷伦科技公司)
检测器：紫外吸收光谱仪(测量波长：280nm)
SEC-柱：TOSOH TSKgel G3000SWXL(7.8×300mm，5μm)
流动相：200mmol/L KHPO4，150mmol/L NaCl，15％(v/v)异丙醇，pH7.0
流速：0.75mL/min
等度洗脱操作：18min
柱温：室温
进样量：50μg
数据分析
质量控制(QC，CL069707-H1L1)的SEC色谱图示于图5A中，证实了主QC产物的分子量为约150kDa，并且单体保留时间为约9.5min至10.5min。同时，聚集的保留时间早于单体的保留时间。
常规规程H：抗体-药物偶联物中抗体亲水性的比较
可使用以下方法通过高效液相色谱(HPLC)分析中的疏水作用色谱(HIC)来确定抗体-药物偶联物的亲水性。
HPLC系统：Agilent 1260Infinity II HPLC系统(安捷伦科技公司)
检测器：紫外吸收光谱仪(测量波长：280nm)
HIC-柱：TOSOH TSKgel Butyl-NPR(4.6mm内径×3.5cm，2.5μm)
流动相A：1.5mol/L(NH4)2SO4，50mmol/L KHPO4，pH7.0
流动相B：50mmol/L KHPO4，25％(v/v)异丙醇，pH7.0
等度洗脱操作：25min
柱温：室温
梯度程序(B％)：0％至25％(0min至1min)，25％(1min至3min)，25％至80％(3min至13min)，80％(13min至17min)，80％至0％(17min至17.10min)，0％(17.10min至25min)
进样量：10μL
数据分析：质量控制(QC，CL069707-H1L1)的HIC色谱图示于图5B中。与非偶联抗体相比，抗体-药物偶联物表现出较高的疏水性，并且因此具有更大的保留时间。可以确认，保留时间越短，样品的亲水性越好
4.1：CL069707-H1L1-药物偶联物的制备
4.1.1抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-LP1的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.423mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将CL069707-H1L1调节至9mg/mL。向该溶液(1.099mL)中加入5mM TCEP(0.101mL；7.0当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM LP1的二甲基乙酰胺(0.108mL；15当量/抗体分子)溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得1.2mL含有标题抗体-药物偶联物“CL069707-H1L1-LP1”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝6384并且εD,370＝16180)、规程F、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：7.82mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：8.55。通过常规规程F测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：7.65。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：2.83％(图6A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：7.505min(图6B)。
4.1.2抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-LP2的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.423mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将CL069707-H1L1调节至9mg/mL。向该溶液(1.099mL)中加入5mM TCEP(0.101mL；7.0当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM LP2的二甲基乙酰胺(0.108mL；15当量/抗体分子)溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得1.2mL含有标题抗体-药物偶联物“CL069707-H1L1-LP2”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝5814并且εD,370＝14742)、规程F、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：7.37mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：9.27。通过常规规程F测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：7.72。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：2.96％(图7A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：7.820min(图7B)。
4.1.3抗体-药物偶联物CL069707-H1L1-GGFG-DXd的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.423mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将CL069707-H1L1调节至9mg/mL。向该溶液(0.275mL)中加入5mM TCEP(0.025mL；7.0当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM GGFG-DXd(购自DC Chemicals，DC7556)的二甲基乙酰胺(0.027mL；15当量/抗体分子)溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得0.3mL含有标题抗体-药物偶联物“CL069707-H1L1-GGFG-DXd”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝5178并且εD,370＝20217)、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：6.78mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：6.88。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：0.92％(图8A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：8.802min(图8B)。
4.1.4抗体-药物偶联物DS-6000a(本文称为对照ADC)的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
DS-6000a mAb(本文称为对照抗体)的序列公开于US2020/0390900 A1(抗体H01L02)中。对照抗体的重链可变区的序列如SEQ ID NO:105所示。对照抗体的轻链可变区的序列如SEQ ID NO:106所示。对照抗体的重链恒定区和轻链恒定区的序列分别如SEQ IDNO:70和SEQ ID NO:71所示。
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTRNFMHWVRQAPGQGLEWMGWIYPG DGETEYAQKFQGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGVYGGFAGGYFDFWGQ GTLVTVSS(SEQ ID NO:109).
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNIYKNLAWYQQKPGKAPKLLIYDANTLQTG VPSRFSGSGSGSDFTLTISSLQPEDFATYFCQQYYSGWAFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:110).
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.678mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将对照抗体调节至14.8mg/mL。向该溶液(0.659mL)中加入5mM TCEP(0.130mL；10.0当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM GGFG-DXd的二甲基乙酰胺(0.098mL；15当量/抗体分子)的溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得1.4mL含有标题抗体-药物偶联物“对照ADC”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝5178并且εD,370＝20217)、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：4.46mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：7.02。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：2.68％(图9A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：7.672min(图9B)。
4.1.5抗体-药物偶联物对照抗体-LP1的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.678mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将对照抗体调节至12.7mg/mL。向该溶液(0.106mL)中加入5mM TCEP(12.6μL；7当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM LP1的二甲基乙酰胺(13.5μL；15当量/抗体分子)溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得200μL含有标题抗体-药物偶联物“对照抗体-LP1”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝6384并且εD,370＝16180)、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：8.07mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：7.11。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：0.89％(图10A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：6.422min(图10B)。
4.1.6抗体-药物偶联物人IgG-LP1的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.35mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将人IgG(购自索莱宝)调节至10mg/mL。向该溶液(1.33mL)中加入5mM TCEP(0.267mL；10当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM LP1的二甲基乙酰胺(0.2mL；15当量/抗体分子)溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得2mL含有标题抗体-药物偶联物“人IgG-LP1”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝6384并且εD,370＝16180)、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：11.08mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：9.15。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：4.38％(图11A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：6.213min(图11B)。
4.1.7抗体-药物偶联物人IgG-LP2的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.35mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将人IgG(购自索莱宝)调节至10mg/mL。向该溶液(0.467mL)中加入5mM TCEP(0.093mL；10当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM LP2的二甲基乙酰胺(0.07mL；15当量/抗体分子)溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得1mL含有标题抗体-药物偶联物“人IgG-LP2”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝5814并且εD,370＝14742)、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：4.68mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：9.18。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：2.92％(图12A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：6.506min(图12B)。
4.1.8抗体-药物偶联物人IgG-GGFG-DXd的制备
步骤1：抗体-药物偶联物
抗体的还原：使用制备方法中描述的常规规程B(使用1.35mL mg-1cm-1作为280nm吸收系数)和C，用PBS7.0/EDTA将人IgG(购自索莱宝)调节至10mg/mL。向该溶液(2.45mL)中加入5mM TCEP(0.327mL；10当量/抗体分子)的水溶液。在确认pH在7.0±0.1内之后，将该溶液在37℃下温育2小时，还原抗体的链间二硫键。
抗体和接头-有效载荷之间的偶联：将上述溶液在4℃下温育10分钟。随后，向其中加入10mM GGFG-DXd的二甲基乙酰胺(0.294mL；18当量/抗体分子)的溶液，并将获得的混合物在22℃下温育30分钟以将接头-有效载荷偶联到抗体。
纯化：通过制备方法中描述的常规规程D纯化上述溶液，获得1mL含有标题抗体-药物偶联物“人IgG-GGFG-DXd”的溶液。
表征：使用制备方法中描述的常规规程E(使用εD,280＝5178并且εD,370＝20217)、规程G和规程H，获得下列特征值。
抗体浓度：8.20mg/mL，通过常规规程E测量的每个抗体分子的偶联的药物分子的平均数(n)：7.08。通过常规规程G测量抗体-药物偶联物的聚集：4.25％(图13A)。通过常规规程H测量的抗体-药物偶联物的保留时间：8.222min(图13B)。
其他抗体-药物偶联物“CL069707-MMAE”、“CL069707-DXd”、“CL069066-MMAE”、“CL069066-DXd”、“CL069439-MMAE”和“CL069439-DXd”的制备与上述样品相同。
实施例5抗体-药物偶联物的体外评价
5.1抗体-药物偶联物的内化活性
在37℃下在5％ CO2气氛中，将人卵巢癌细胞系PA-1(浙江美森细胞科技有限公司)、OVCAR-3(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)和人肾癌细胞系786-O(上海勋庆生物科技有限公司)细胞培养物作为独立单层培养物在体外维持。使用胰蛋白酶-EDTA部分消化收获细胞，随后以1000rpm离心5分钟。将细胞重悬于冷PBS中，并加入50μg/mLCL069707-H1L1-LP1。将细胞溶液混合，在4℃下温育30min，然后用PBS洗涤细胞，再等分成5份，并在37℃下温育0h、0.5h、1h、2h和4h。在各时间点取一份样品并用冷PBS洗涤，然后加入第二抗体偶联物(用于检测目的)。在4℃下孵育后，用PBS洗涤细胞，并且然后进行流式细胞术(FACS)分析。结果示于图14中。CL069707-H1L1-LP1以时间依赖性方式内化到PA-1、OVCAR-3和786-O中。
5.2抗体-药物偶联物的体外肿瘤生长抑制活性
将CDH6阳性人卵巢癌细胞系OVCAR-3(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)及PA-1(浙江美森细胞科技有限公司)以2000细胞/100μL/孔接种于96孔板的培养基中，然后将细胞培养过夜。第二天，将这些偶联物中的每一者加入细胞中，使得最终浓度为0.01nM至100nM。在培养5天之后，从细胞中除去培养基，并根据制造商的说明进行CCK-8(细胞计数试剂盒-8)活力测定。细胞活力计算为仅具有肿瘤细胞的对照孔的％。图15A至图15D示出了将抗体-药物偶联物中的每一者加入CDH6阳性OVCAR-3和PA-1细胞时的浓度依赖性细胞生长抑制活性。在图15A和图15B中，所有人源化CL069707-GGFG-DXd(H1L1、H1L2、H2L1和H2L2)对OVCAR-3细胞和PA-1细胞均表现出相似的优异肿瘤细胞生长抑制活性。在图15C和图15D中，两种阳性抗体-药物偶联物均表现出优异的肿瘤细胞生长抑制活性，其中CL069707-H1L1-LP1表现出对OVCAR-3细胞的最显著的抑制活性，随后是CL069707-H1L1-LP2，并且其中CL069707-H1L1-LP1和CL069707-H1L1-LP2表现出对PA-1细胞的相当的抑制活性。
实施例6偶联到vc-MMAE或GGFG-DXd的小鼠抗CDH6抗体CL069707、CL069439、CL069066的体外细胞杀伤活性
将CDH6阳性人卵巢癌细胞系OVCAR-3(购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)以2000细胞/100μL/孔接种于96孔板的培养基中，然后将细胞培养过夜。第二天，将CL069707-vc-MMAE、CL069439-vc-MMAE和CL069066-vc-MMAE中的每一者加入细胞中，使得最终浓度为0.005nM至30nM；并将CL069707-GGFG-DXd、CL069439-GGFG-DXd和CL069066-GGFG-DXd中的每一者加入到细胞中，使得最终浓度为0.05nM至300nM。在培养5天之后，从细胞中除去培养基，并根据制造商的说明进行CCK-8(细胞计数试剂盒-8)活力测定。细胞活力计算为仅具有肿瘤细胞的对照孔的％。图16A显示3种偶联物对OVCAR-3细胞均具有浓度依赖性细胞生长抑制活性。此外，CL069707-vc-MMAE显示出比CL069439-vc-MMAE和CL069066-vc-MMAE更强的细胞杀伤活性。图16B显示3种偶联物对OVCAR-3细胞均具有浓度依赖性细胞生长抑制活性。此外，CL069707-GGFG-DXd显示出比CL069439-GGFG-DXd和CL069066-GGFG-DXd更强的细胞杀伤活性。
实施例7抗体-药物偶联物在PA-1异种移植物模型中的体内抗肿瘤效果。
6周雌性Balb/c小鼠购自JSJ Laboratory(中国上海)。将人卵巢癌细胞系PA-1(浙江美森细胞科技有限公司)细胞与基质胶混合，然后以1000万细胞/只进行皮下植入。在PA-1细胞植入后第15天(平均肿瘤大小约150mm3)，给小鼠静脉内注射10mg/kg的以下物质中的一种：IgG-LP2、CL069707-H1L1-LP1、CL069707-H1L1-LP2或CL069707-H1L1-GGFG-DXd。从治疗开始之日起，用卡尺每周测量两次肿瘤体积，并如下计算：TV＝(宽度*长度)2/2。结果示于图17A至图17B中。所有抗体-药物偶联物在单剂量给药后均显著减小了肿瘤体积，而不显著影响小鼠体重。
实施例8抗体-药物偶联物在PA-1异种移植物模型中的体内抗肿瘤效果。
6周雌性Balb/c小鼠购自JSJ Laboratory(中国上海)。将人卵巢癌细胞系PA-1(浙江美森细胞科技有限公司)细胞与基质胶混合，然后以1000万细胞/只进行皮下植入。在PA-1细胞植入后第14天(平均肿瘤大小约150mm3)，给小鼠静脉内注射以下物质中的一种：PBS、CL069707-H1L1-LP1(2.5mg/kg和5mg/kg)、CL069707-H1L1-LP2(2.5mg/kg和5mg/kg)或CL069707-H1L1-GGFG-DXd(5mg/kg)。从治疗开始之日起，用卡尺每周测量两次肿瘤体积，并如下计算：TV＝(宽度*长度)2/2。结果示于图18A至图18B中。所有抗体-药物偶联物在单剂量给药后均以剂量依赖性方式减小肿瘤体积，而不显著影响小鼠体重。值得注意的是，5mg/kg CL067707-H1L1-LP1具有比CL069707-H1L1-LP2和CL067707-H1L1-GGFG-DXd更好的肿瘤抑制效果。
实施例9抗体-药物偶联物在OVCAR-3异种移植物模型中的体内抗肿瘤效果。
6周至8周的Balb/c小鼠购自上海灵畅生物科技有限公司(中国上海)。将人卵巢癌细胞系OVCAR-3(ATCC-HTB-161)细胞与基质胶混合，然后以1000万细胞/只进行皮下植入。在OVCAR-3细胞植入后第35天(平均肿瘤大小约150mm3)，给小鼠静脉内注射以下物质中的一种：PBS和10mg/kg CL069707-H1L1-LP1。从治疗开始之日起，用卡尺每周测量两次肿瘤体积，并如下计算：TV＝(宽度*长度)2/2。结果示于图19A至图19B中。单剂量CL069707-H1L1-LP1显著减小了肿瘤体积，而不影响小鼠体重。
实施例10抗体-药物偶联物在786-O异种移植物模型中的体内抗肿瘤效果。
6周NCG小鼠购自集萃药康(中国苏州)。将人肾癌细胞系786-O(购自上海勋庆生物科技有限公司)细胞重悬于无血清培养基中，然后以650万细胞/只进行皮下植入。在786-O细胞植入后第15天(平均肿瘤大小约150mm3)和第36天，给小鼠静脉内注射以下物质中的一种：PBS、10mg/kg IgG-LP1和10mg/kg CL069707-H1L1-LP1。从治疗开始之日起，用卡尺每周测量两次肿瘤体积，并如下计算：TV＝(宽度*长度)2/2。结果示于图20A至图20B中。与IgG-LP1相比，CL069707-H1L1-LP1显著减小了肿瘤体积，而不影响小鼠体重。
实施例11抗体-药物偶联物在肾癌患者来源的异种移植物(PDX)模型中的体内抗肿瘤效果。
6周至8周的Nu/Nu小鼠购自浙江查尔斯河有限公司。将肿瘤切成3mm×3mm×3mm(约50mg至90mg)大小的碎片并皮下植入到小鼠右侧腹。然后每天检查动物的肿瘤生长情况和体重。当平均肿瘤体积达到约150mm3时，将小鼠随机分成5组。分组日视为第0天。然后给小鼠静脉内注射10mg/kg的以下物质中的一种：10mg/kg IgG-LP1、CL069707-H1L1-LP1、IgG-GGFG-DXd、对照ADC和对照抗体-LP1。从治疗开始之日起，用卡尺每周测量两次肿瘤体积，并如下计算：TV＝(宽度*长度)2/2。结果示于图21A至图21B中。与IgG-LP1相比，CL069707-H1L1-LP1显著减小了肿瘤体积，其次是对照抗体-LP1，而不影响小鼠体重。当与IgG-GGFG-DXd比较时，对照ADC未显示出肿瘤生长抑制活性。
实施例12CDH6蛋白的小鼠单克隆抗体杂交瘤细胞的制备
12.1抗原的制备
将CDH6胞外区(Ser 54-Ala 615)用作免疫原，并且该抗原购自百赛普斯公司，目录号CA6-H5229。
12.2小鼠免疫
每组抗原将被用于免疫12只Balb/c小鼠(8周龄至12周龄)，并且将监测免疫小鼠的血清滴度以确定免疫的最佳次数。优化的佐剂和免疫方法可产生对大多数抗原性多肽具有高亲和力的抗体(IgG亚型)。在初次免疫后，进行3次至4次增强免疫，并且在增强免疫后，取小鼠血清检测滴度(将重组蛋白用作抗原包被)。血清滴度合格的小鼠将进行增强免疫以进行融合，而血清滴度不合格的小鼠将继续进行一次到两次的增强免疫以达到融合前的最高滴度。
12.3血清检测和筛选
对免疫后的小鼠进行眼眶采血，通过ELISA检测血清滴度(将重组蛋白用作抗原包被)。要求血清滴度大于10K，否则继续增强免疫。
12.4融合和筛选
取出整个脾脏和1/2淋巴结，并与骨髓瘤SP2/0细胞系融合。该过程是优化的PEG融合。将融合的细胞接种在4个384孔板中(102个至104个细胞/孔)并培养。收集所有孔的上清液，通过ELISA筛选阳性细胞株以检测细胞上清液对CDH6重组蛋白的应答，并将细胞镜检的孔转移至96孔板以进一步培养。在生长几天之后，收集所有孔的上清液，并且通过ELISA检测与CDH6重组蛋白的反应性。进一步检测阳性孔中各种稀释度的细胞上清液与CDH6重组蛋白的结合能力以进行亲和力排序，并选择120个具有最高亲和力的亲本克隆进行亚克隆。
12.5亚克隆和筛选
通过有限稀释方法和ELISA筛选进行亚克隆，以获得单克隆杂交瘤细胞。将细胞铺在96孔板中，并培养至覆盖大约1/6个板底。通过ELISA检测每个孔中的上清液对CDH6重组蛋白的应答，并且具有高OD值和良好细胞状态的两个孔用于下一轮亚克隆。重复上述步骤，直到孔中细胞株的阳性率为100％。然后获得单克隆细胞株。在最后一轮亚克隆之后，立即扩增所有阳性细胞，一部分冷冻备用，另一部分制备为腹水。
12.6腹水制备和抗体纯化
最后，获得13种单克隆细胞株，并经腹部注射到F1小鼠中以产生抗体。所产生的腹水用蛋白A/G纯化并用于随后的检测。
实施例13抗体与抗原的结合活性
在4℃下将重组蛋白CDH6以1μg/mL在ELISA板上包被过夜；在用PBST洗涤之后，向板中加入10％胎牛血清，并将混合物在37℃下封闭1小时；在板中加入13种不同稀释度的CDH6单克隆抗体(0.1ng/mL至100ng/mL)，并将混合物在37℃下反应1h；在用PBST洗涤之后，向板中加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG第二抗体(山羊抗小鼠(HRP)，赛默飞世尔科技)，并将混合物在37℃下反应30min；在用PBST重复洗涤板5次之后，尽可能多地拍打吸水纸上剩余的液滴；向板的每个孔中加入100μL TMB(eBioscience)并在室温下(20±5℃)避光放置1.5min；向板的每个孔中加入100μL 2N H2SO4终止缓冲液以终止底物反应，使用酶标仪读取450nm处的OD值，并分析抗体与靶抗原CDH6的结合能力。如表1和图23所示，本申请的抗CDH6抗体和CDH6重组蛋白的灵敏度不超过12.5ng/mL，其中第13号(CL069463抗体)不超过3.125ng/mL，第23号(CL069707抗体)不超过1.56ng/mL，第4号(CL069066抗体)不超过6.3ng/mL，并且第16号(CL069439抗体)不超过1.0ng/mL。
表3.通过ELISA检测抗体与CDH6抗原的结合活性
实施例14通过抗体特异性识别细胞表面表达的CDH6抗原
使用OVCAR-3细胞(人卵巢癌细胞)作为阳性细胞以及HepG2细胞(人肝癌细胞)作为阴性细胞，通过流式细胞术(FCM)分析13种CDH6单克隆抗体与细胞表面上的CDH6的结合。收集对数生长期的细胞，调节至5×106个细胞/mL的细胞密度，并在冰上预冷。将13种CDH6单克隆抗体在含有2％ FBS的预冷盐水中稀释至20μg/mL。取100μL细胞，并加入等体积稀释的上述CDH6单克隆抗体，并使混合物在4℃下避光反应30min。在反应完成之后，用含有2％FBS的预冷盐水(6000rpm，45s)洗涤细胞两次。用含有2％ FBS的预冷盐水以1:500稀释第二抗体PE抗小鼠IgG(BD Pharmingen)，并将洗涤后的细胞分别用100μL稀释的第二抗体重悬，并在4℃下避光反应30min。在反应完成之后，用含有2％ FBS的预冷盐水(6000rpm，45s)洗涤细胞两次。将细胞重悬于400μL盐水中。使用流式细胞仪(BD Calibur)分析抗体与细胞表面抗原的结合能力。
结果示于图24中。结果显示，包括CL069463、CL069707等的共11种抗体能够特异性识别OVCAR-3细胞(人卵巢癌细胞)(图24)，而在阴性细胞HepG2细胞(人肝癌细胞)中未观察到结合。
虽然本文已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。本发明不受限于本说明书中提供的具体实施例。尽管已经参照上述说明书对本发明进行了描述，但对本文实施方案的描述和说明不应以限制性的方式去理解。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员将会想到许多变化、改变和替换。此外，应当理解，本发明的所有方面不限于本文所述的具体描述、配置或相对比例，其取决于各种条件和变量。
虽然本文已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。本发明不受限于本说明书中提供的具体实施例。尽管已经参照上述说明书对本发明进行了描述，但对本文实施方案的描述和说明不应以限制性的方式去理解。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员将会想到许多变化、改变和替换。此外，应当理解，本发明的所有方面不限于本文所述的具体描述、配置或相对比例，其取决于各种条件和变量。
应当理解，在实施本发明时可以采用本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案。因此，可以预期本发明还将涵盖任何此类替代方案、修改、变化或等价形式。以下权利要求书旨在限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求书范围内的方法和结构及其等价形式。
参考资料
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Claims (102)

1.一种抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白具有以下性质中的一种或多种：
i)在ELISA测定中能够以小于12.5ng/mL的灵敏度结合CDH6蛋白；
ii)在ELISA测定中能够以低于约3.1×10-9M的KD值结合CDH6蛋白；以及
iii)具有通过结合CDH6而内化至表达CDH6的细胞中的活性。
2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中所述CDH6是哺乳动物CDH6蛋白。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述CDH6是人CDH6蛋白。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白与参比抗体竞争结合CDH6蛋白，其中所述参比抗体包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)；其中：
所述VH包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，并且所述VL包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或者
所述VH包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，并且所述VL包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含抗体或其抗原结合片段。
6.根据权利要求5所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包括单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、聚合物、多特异性抗体、完整抗体、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
7.根据权利要求5至6中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括Fab、Fab'、Fv片段、F(ab')2、scFv、di-scFv和/或dAb。
8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体包括嵌合抗体、人源化抗体和/或人抗体。
9.根据权利要求5至8中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体是单克隆抗体。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含重链可变区(VH)的至少一个CDR，其中所述VH包含如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含轻链可变区(VL)的至少一个CDR，其中所述VL包含如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述HCDR1包含如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQID NO:89或SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述HCDR2包含如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQID NO:90或SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或者
所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所示HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或者
所述HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；
其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列；或者
其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，并且所述HCDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含框架区HFR1，所述HFR1的C末端直接或间接连接至所述HCDR1的N末端，并且所述HFR1包含如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含框架区HFR2，所述HFR2位于所述HCDR1和所述HCDR2之间，并且所述HFR2包含如SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含框架区HFR3，所述HFR3位于所述HCDR2和所述HCDR3之间，并且所述HFR3包含如SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含框架区HFR4，所述HFR4的N末端直接或间接连接至所述HCDR3的C末端，并且所述HFR4包含如SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:40或SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列。
23.根据权利要求1至22所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，所述HFR1的C末端直接或间接连接至所述HCDR1的N末端，所述HFR2位于所述HCDR1和所述HCDR2之间，所述HFR3位于所述HCDR2和所述HCDR3之间，并且所述HFR4的N末端直接或间接连接至所述HCDR3的C末端；其中所述HFR1包含如SEQ IDNO:14所示的氨基酸序列，所述HFR2包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，并且所述HFR4包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列；或者
所述HFR1包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，所述HFR3包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，并且所述HFR4包含如SEQID NO:26所示的氨基酸序列；或者
所述HFR1包含如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，所述HFR2包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，所述HFR3包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，并且所述HFR4包含如SEQID NO:26所示的氨基酸序列；或者
所述HFR1包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列，所述HFR2包含如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，并且所述HFR4包含如SEQID NO:40所示的氨基酸序列；或者
所述HFR1包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列，所述HFR2包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列，所述HFR3包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列，并且所述HFR4包含如SEQID NO:50所示的氨基酸序列；或者
所述HFR1包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列，所述HFR2包含如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列，所述HFR3包含如SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列，并且所述HFR4包含如SEQID NO:26所示的氨基酸序列。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH，其中所述VH包含如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含抗体重链恒定区。
26.根据权利要求25所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含源自人IgG的恒定区。
27.根据权利要求25所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含源自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区。
28.根据权利要求25所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体重链恒定区包含如SEQ IDNO:70所示的氨基酸序列。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含抗体重链，其中所述抗体重链包含如SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述LCDR1包含如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述LCDR2包含如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:93或SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:94或SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
所述LCDR1包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或者
其中所述LCDR1包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:94所示的氨基酸序列；或者
其中所述LCDR1包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ IDNO:101所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
所述HCDR1包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含如SEQID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，并且所述VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3；其中所述HCDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或者
所述HCDR1包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，所述LCDR1包含如SEQID NO:11所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，并且所述LCDR3包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:89所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO:92所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:93所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQID NO:94所示的氨基酸序列；或者
其中HCDR1包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列，HCDR2包含如SEQ ID NO:98所示的氨基酸序列，并且HCDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列，LCDR1包含如SEQ ID NO:100所示的氨基酸序列，LCDR2包含如SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列，并且LCDR3包含如SEQ ID NO:102所示的氨基酸序列。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含框架区LFR1，所述LFR1的C末端直接或间接连接至所述LCDR1的N末端，并且所述LFR1包含如SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含框架区LFR2，所述LFR2位于所述LCDR1和所述LCDR2之间，并且所述LFR2包含如SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含框架区LFR3，所述LFR3位于所述LCDR2和所述LCDR3之间，并且所述LFR3包含如SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:57或SEQ IDNO:61所示的氨基酸序列。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含框架区LFR4，所述LFR4的N末端直接或间接连接至所述LCDR3的C末端，并且所述LFR4包含如SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列。
40.根据权利要求1至39中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中所述LFR1的C末端直接或间接连接至所述LCDR1的N末端，所述LFR2位于所述LCDR1和所述LCDR2之间，所述LFR3位于所述LCDR2和所述LCDR3之间，并且所述LFR4的N末端直接或间接连接至所述LCDR3的C末端；其中所述LFR1包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列；或者
所述LFR1包含如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQID NO:33所示的氨基酸序列；或者
所述LFR1包含如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQID NO:33所示的氨基酸序列；或者
所述LFR1包含如SEQ ID NO:42所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQID NO:45所示的氨基酸序列；或者
所述LFR1包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQID NO:45所示的氨基酸序列；或者
所述LFR1包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQID NO:62所示的氨基酸序列；或者
所述LFR1包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列，所述LFR2包含如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列，所述LFR3包含如SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列，并且所述LFR4包含如SEQID NO:62所示的氨基酸序列。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VL，其中所述VL包含如SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
42.根据权利要求1至41中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含VH和VL，其中所述VH包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列，并且所述VL包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；或者
所述VH包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列，并且所述VL包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列；或者
所述VH包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列，并且所述VL包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列；或者
所述VH包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列，并且所述VL包含如SEQ ID NO:69所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列；或者
其中VH包含如SEQ ID NO:103所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列。
43.根据权利要求1至42中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含抗体轻链恒定区。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包含人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗体轻链恒定区包含如SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
46.根据权利要求1至45中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含抗体轻链，其中所述抗体轻链包含如SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列。
47.根据权利要求1至46中任一项所述的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列，并且所述抗体轻链包含如SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列；或者
所述抗体重链包含如SEQ ID NO:80所示的氨基酸序列，并且所述抗体轻链包含如SEQID NO:81所示的氨基酸序列；或者
所述抗体重链包含如SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列，并且所述抗体轻链包含如SEQID NO:86所示的氨基酸序列；或者
所述抗体重链包含如SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列，并且所述抗体轻链包含如SEQID NO:88所示的氨基酸序列。
48.一种多肽，所述多肽包含根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白。
49.一种或多种核酸分子，所述一种或多种核酸分子编码根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白或根据权利要求48所述的多肽。
50.一种载体，所述载体包含根据权利要求49所述的核酸分子。
51.一种细胞，其中所述细胞包含根据权利要求49所述的核酸分子或根据权利要求50所述的载体，或者所述细胞表达根据权利要求1至47所述的抗原结合蛋白或根据权利要求48所述的多肽。
52.一种用于制备根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白的方法，其中所述方法包括在表达根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白的条件下培养根据权利要求51所述的细胞。
53.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白、根据权利要求48所述的多肽、根据权利要求49所述的核酸分子、根据权利要求50所述的载体和/或根据权利要求51所述的细胞，以及任选的药学上可接受的载体。
54.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白、根据权利要求48所述的多肽或根据权利要求53所述的药物组合物。
55.一种根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白、根据权利要求48所述的多肽、根据权利要求49所述的核酸分子、根据权利要求50所述的载体和/或根据权利要求51所述的细胞和/或根据权利要求53所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗与CDH6相关的疾病或病症的药物中的用途。
56.根据权利要求55所述的用途，其中所述与CDH6相关的疾病或病症包括肿瘤。
57.根据权利要求55至56中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括表达CDH6的肿瘤。
58.根据权利要求55至57中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、肝癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
59.根据权利要求55至58中任一项所述的用途，其中所述药物进一步包含另外的治疗剂。
60.一种免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述免疫偶联物包含根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白或根据权利要求48所述的多肽。
61.根据权利要求60所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述免疫偶联物进一步包含偶联到所述抗体或其抗原结合片段的活性部分。
62.根据权利要求61所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述活性部分包含药物部分和/或标记。
63.根据权利要求62所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述药物部分选自由以下项组成的组：细胞毒性剂、细胞因子、核酸、核酸相关分子、放射性核素、趋化因子、免疫(共)刺激分子、免疫抑制分子、死亡配体、凋亡诱导蛋白、激酶、前药转化酶、核糖核酸酶、激动性抗体或抗体片段、拮抗性抗体或抗体片段、生长因子、激素、凝血因子、纤溶活性蛋白、模拟这些物质的肽，以及它们的片段、融合蛋白或衍生物。
64.根据权利要求62所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述标记选自由以下项组成的组：放射性标记、荧光团、发色团、显影剂和金属离子。
65.根据权利要求63至64中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括微管破坏药物和/或DNA损伤剂。
66.根据权利要求63至65中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括微管蛋白抑制剂和/或拓扑异构酶抑制剂。
67.根据权利要求63至66中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括拓扑异构酶I抑制剂。
68.根据权利要求63至67中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包括喜树碱或其衍生物。
69.根据权利要求63至68中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述细胞毒性剂包含下式II的结构或其同分异构体、内消旋体、外消旋体、对映体或非对映体，或其混合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
70.根据权利要求60至69中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述免疫偶联物包含式(I)的抗体-药物偶联物(ADC)：
Ab-(L-(D)m)n，
(I)
其中Ab是权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白
L是接头；
D是药物部分；
m是1至8的整数；并且
n是1至10的任何数。
71.根据权利要求70所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自：可切割接头和不可切割接头。
72.根据权利要求70至71中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包括可切割肽。
73.根据权利要求72所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述可切割肽可被酶切割。
74.根据权利要求73所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述酶包括组织蛋白酶B。
75.根据权利要求72至74中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述可切割肽或L包含氨基酸单元。
76.根据权利要求75所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述氨基酸单元包括二肽、三肽、四肽或五肽。
77.根据权利要求75至76中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述氨基酸单元选自：Val-Cit、Val-Ala、Glu-Val-Cit、Ala-Ala-Asn、Gly-Val-Cit、Gly-Gly-Gly和Gly-Gly-Phe-Gly。
78.根据权利要求70至77中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包含间隔子。
79.根据权利要求78所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述间隔子包括自降解间隔子。
80.根据权利要求79所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述自降解间隔子包括对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)。
81.根据权利要求72至80中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述可切割肽直接剪接至所述间隔子。
82.根据权利要求70至81中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包括：-Val-Cit-PABC-、-Val-Ala-PABC-、-Glu-Val-Cit-PABC-、-Ala-Ala-Asn-PABC-、-Gly-Val-Cit-PABC-、-Gly-Gly-Gly-PABC-、-Gly-Gly-Phe-Gly-PABC-、-Val-Cit-PAB-、-Val-Ala-PAB-、-Glu-Val-Cit-PAB-、-Ala-Ala-Asn-PAB-、-Gly-Val-Cit-PAB-、-Gly-Gly-Gly-PAB-或-Gly-Gly-Phe-Gly-PAB-。
83.根据权利要求70至82中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述间隔子包含-NH-(CH2)n1-La-Lb-Lc-所示的结构，其中La表示-O-或单键；Lb表示-CR2(-CR3)-或单键，其中R2和R3各自独立地表示C1-C6烷基、-(CH2)na-NH2、-(CH2)nb-COOH或-(CH2)nc-OH，n1表示0至6的整数，na、nb和nc各自独立地表示1至4的整数，但当na为0时，R2和R3不相同，并且Lc表示-C(＝O)-。
84.根据权利要求83所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述间隔子包括-NH-(CH2)3-C(＝O)-、-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-或-NH-(CH2)2-O-CH2-C(＝O)-。
85.根据权利要求70至84中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L包含-L1-L2-L3-所示的结构，其中L1表示-(琥珀酰亚胺基-3-基-N)-(CH2)n2-C(＝O)-、-CH2-C(＝O)-NH-(CH2)n3-C(＝O)-或-C(＝O)-(CH2)n4-C(＝O)-，其中n2表示2至8的整数，n3表示1至8的整数，并且n4表示1至8的整数；L2表示氨基酸单元；L3表示所述自降解间隔子。
86.根据权利要求70至85中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自：
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-GGFG-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2o-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-PABC-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-O-CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；
-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-CH2CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2O-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2-C(＝O)-；
-CH2-C(＝O)-NH-CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-；和
-C(＝O)-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-C(＝O)-VA-NH-CH2CH2CH2-C(＝O)-。
87.根据权利要求70至86中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述对氨基苯氧基羰基(PABC)或对氨基苄基(PAB)包含聚肌氨酸钠(聚-N-甲基甘氨酸)残基。
88.根据权利要求70至87中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自以下结构：
其中n5表示0至20的整数。
89.根据权利要求88所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中n5表示1至15的整数。
90.根据权利要求70至89中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述L选自以下结构：
91.根据权利要求60至90中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中所述抗体-药物偶联物选自以下结构：
其中n是1至10的任何数。
92.根据权利要求91所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中n是2至9的任何数。
93.一种制备根据权利要求60至92中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的方法，所述方法包括使根据权利要求1至47中任一项所述的抗原结合蛋白与药物-接头中间体化合物反应的步骤。
94.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求60至92中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
95.根据权利要求94所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。
96.一种根据权利要求60至92中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据权利要求94至95中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
97.根据权利要求96所述的用途，其中所述肿瘤是表达CDH6的肿瘤。
98.根据权利要求96至97中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
99.一种用于治疗肿瘤的方法，所述方法包括向受试者施用根据权利要求60至92中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述肿瘤是表达CDH6的肿瘤。
101.根据权利要求99至100中任一项所述的方法，其中所述肿瘤包括肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢癌、卵巢浆液性腺癌、甲状腺癌、胆管癌、肺癌、小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、间皮瘤、子宫癌、胰腺癌、维尔姆斯瘤或成神经细胞瘤。
102.一种用于治疗肿瘤的方法，所述方法包括同时、分开或序贯地向受试者施用药物组合物，所述药物组合物包含至少一种组分和至少一种抗肿瘤药物，所述至少一种组分选自根据权利要求60至92中任一项所述的免疫偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
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