CN118078930A - 治疗高尿酸血症与其并发症的中药组合物及制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本申请涉及中医中药技术领域，提供了一种中药组合物及其制备方法，该中药组合物的原料包括虎杖、萆薢、川牛膝、鸡血藤、三七粉以及土茯苓；本申请还提供了一种口服制剂，由上述中药组合物与药学上可接受的辅料按制剂工艺制备得到；本申请还提供了上述中药组合物或上述口服制剂在制备具有清热、化湿、驱邪、补肝肾以及强筋骨中的至少一种功效的药物、制备用于治疗高尿酸血症的药物、或制备用于治疗痛风、痛风性肾病以及痛风性关节炎中的至少一种的药物中的用途。本申请的中药组合物具有治疗高尿酸血症与其并发症的作用，疗效确切，副作用小，可用于痛风、痛风性肾病、痛风性关节炎的治疗，为临床提供了一种新的用药选择。

Description

治疗高尿酸血症与其并发症的中药组合物及制备方法和用途

技术领域

本申请涉及中医中药技术领域，具体是一种治疗高尿酸血症与其并发症的中药组合物及制备方法和用途。

背景技术

高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)是体内尿酸生成过多和/或排泄过少所致，在正常嘌呤饮食状态下，针对非同日两次空腹血尿酸水平，男性高于420μmol/L，女性高于360μmol/L，即可被诊断为高尿酸血症。高尿酸血症的发生和发展被认为与性别、饮食习惯、职业、环境因素等导致的尿酸代谢失常相关。随着我国社会经济的发展，人们生活水平的提高和生活习惯的改变使得高尿酸血症的发病率呈逐年上升趋势，具体来说，高尿酸血症的发病率从1980年的1.4％上升至2019年的14.1％。《高尿酸血症和痛风治疗中国专家共识》中指出，高尿酸血症是痛风发生的最重要的生化基础和最直接的致病因素，痛风是否发生以及发作的频率与血尿酸水平直接相关；高尿酸可引起血管内皮损伤和肾脏的慢性损害，加重胰岛素抵抗，增加糖尿病和代谢综合征以及高血压、冠心病、脑卒中等发生的风险。

高尿酸血症会引起一系列并发症，例如，痛风性肾病。痛风性肾病起病隐匿，多数患者在就诊时己经进入肾功能衰竭期。现代临床中医师多将本病归属于“肾浊”范畴，认为其基本病机为：阳虚不化，津液失调，湿浊内生，痰毒瘀浊阻滞经络；肺、脾、肾三脏阳虚不化，津液代谢失调，湿浊内生，久则生瘀，痰毒瘀浊互结，阻滞肾络，并随气机升降内达脏腑，外至经络、关节，缠绵难愈，变化多端。

高尿酸血症的治疗周期较长，安全有效的西药品种也并不丰富。而我国传统医学的整体治疗观独具特色，早在金元时期祖国医学就有“痛风”的病名。古代医家认为，痛风属于“痹证”的范畴，此病有走注关节、痛势甚剧的特点，故又被称为“白虎历节”。《素问·痹论》指出：“风寒湿邪三气杂至，合而为痹也。”张仲景在《金匮要略》中指出：“寸口脉沉而弱，沉即主骨，弱即主筋；沉即主肾，弱即为肝，汗出入水中，如水伤心，历节黄汗出，故名历节。……盛人脉涩小，短气，自汗出，历节痛，不可屈伸，此皆饮酒汗出当风所致。”可见，历节病多由肝肾不足而感受风寒湿邪，入侵关节，痹阻经络，走注四末所致，治疗以调和营卫、祛风除湿、温经通络为法。

针对治疗高尿酸血症的中药组方，在现有技术中，中国专利文献CN114848766A公开了一种治疗痛风的药物组合物，共含有20味中药，具有清热利湿、通络止痛之效，但是该组合物组方复杂、制备成本高，且药效偏弱，见效慢；中国专利文献CN103432477A公开了一种治疗痛风的中药制剂，包括口服药和外用药，但是其组方也包含20余味中药，制备成本高，且其虽然声称已经过临床验证根治了尿酸血症，但并未经过研究证明。由此可见，现有技术中虽然已对治疗高尿酸血症的中药组方进行了研究，但是其中药组方普遍存在组方复杂、制备成本高、药效不够理想以及见效慢等问题，也即，目前尚不知晓哪些组分在配合使用时能够产生良好的协同作用，从而解决上述问题。

综上所述，目前亟需一种治疗高尿酸血症与其并发症的中药组合物，以使其中的各组分在配合使用时能够产生良好的协同作用，从而至少达到药效好、见效快以及制备成本低的效果。

发明内容

本申请的目的在于克服现有技术的不足，提供一种治疗高尿酸血症与其并发症的中药组合物及制备方法和用途，以使其中的各味药材之间能够产生良好的协同作用，从而至少达到药效好、见效快以及制备成本低的效果。

本申请的目的是通过以下技术方案来实现的：

一方面，提供一种中药组合物。所述中药组合物的原料包括：虎杖、萆薢、川牛膝、鸡血藤三七粉以及土茯苓。

在一些实施例中，按重量份计，所述原料包括：虎杖35-65份、萆薢47.6-86.9份、川牛膝35-65份、鸡血藤47.6-86.9份、三七粉21.4-39.1份以及土茯苓35-65份。

在一些实施例中，所述原料还包括：草红藤、酒续断、葛根、骨碎补以及炙甘草。

在一些实施例中，按重量份计，所述原料包括：虎杖35-65份、萆薢47.6-86.9份、川牛膝35-65份、鸡血藤47.6-86.9份、三七粉21.4-39.1份、草红藤47.6-86.9份、土茯苓35-65份、酒续断35-65份、葛根35-65份、骨碎补35-65份以及炙甘草14.3-26.1份。

在一些实施例中，按重量份计，所述原料包括：虎杖50份、萆薢66.6份、川牛膝50份、鸡血藤66.6份、三七粉30份、草红藤66.6份、土茯苓50份、酒续断50份、葛根50份、骨碎补50份以及炙甘草20份。

另一方面，提供一种制备如上述实施例中的任一项所述的中药组合物的方法。所述方法包括：称取所述中药组合物的原料，进行提取、过滤、浓缩、干燥，得到所述中药组合物。

需要说明的是，所述中药组合物的原料的形态可以为多种，本申请对此不做限制。例如，所述中药组合物的原料的形态包括饮片。

在一些实施例中，所述提取采用的溶剂包括水、有机溶剂以及油中的至少一种。

在一些示例中，所述提取的方式包括浸提和萃取中的至少一种。

在一些示例中，所述有机溶剂包括乙醇、乙酸乙酯以及乙醚中的至少一种。

在一些示例中，所述油包括植物油和动物油中的至少一种。

在一些实施例中，所述方法还包括：进行纯化处理。

在一些示例中，所述纯化处理在所述浓缩后进行的情况下，所述纯化处理包括醇沉。

在另一些示例中，所述纯化处理在所述浓缩前进行的情况下，所述纯化处理包括超滤、色谱柱以及活性炭脱色中的至少一种，例如为：所述色谱柱。

在一些实施例中，所述方法还包括：对经过所述浓缩得到的稠膏进行干燥和粉碎。

再一方面，提供一种口服制剂。所述口服制剂由如上述实施例中的任一项所述的中药组合物与药学上可接受的辅料按制剂工艺制备而成。

在一些实施例中，所述口服制剂的剂型包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、浓缩丸、口服液以及合剂中的至少一种。

在一些示例中，在所述剂型为所述颗粒剂的情况下，所述辅料包括糊精、乳糖以及乙醇。

在另一些示例中，在所述剂型为所述片剂的情况下，所述辅料包括可溶性淀粉、乳糖、微晶纤维素以及硬脂酸镁。

在再一些示例中，在所述剂型为所述胶囊剂的情况下，所述辅料包括可溶性淀粉和硬脂酸镁。

在又一些示例中，在所述剂型为所述口服液的情况下，所述辅料包括山梨酸钾。

在又一些示例中，在所述剂型为所述合剂的情况下，所述辅料包括苯甲酸钠。

在一些示例中，在剂型为所述颗粒剂的情况下，所述制剂工艺包括：将所述中药组合物与所述辅料混合，然后进行制粒、干燥以及整粒。

在另一些示例中，在所述剂型为所述片剂的情况下，所述制剂工艺包括：将所述中药组合物与所述辅料混合，然后进行干燥、制粒以及压片。

在又一些示例中，在所述剂型为所述浓缩丸的情况下，所述制剂工艺包括：称取所述中药组合物除所述三七粉的剩余原料，进行提取、过滤以及浓缩，再与所述三七粉混合，进行制丸和干燥。

在又一些示例中，在所述剂型为所述口服液的情况下，所述制剂工艺包括：将所述中药组合物加水，进行搅拌、静止以及过滤，然后加入所述辅料，进行灌封和灭菌。

在又一些示例中，在所述剂型为所述合剂的情况下，所述制剂工艺包括：将所述中药组合物加水，进行搅拌、静止以及过滤，然后加入所述辅料，进行灌封和灭菌。

又一方面，提供一种如上述实施例中的任一项所述的中药组合物或如上述实施例中的任一项所述的口服制剂在制备具有清热、化湿、驱邪、补肝肾以及强筋骨中的至少一种功效的药物中的用途。

又一方面，提供一种如上述实施例中的任一项所述的中药组合物或如上述实施例中的任一项所述的口服制剂在制备用于治疗高尿酸血症的药物中的用途。

又一方面，提供一种如上述实施例中的任一项所述的中药组合物或如上述实施例中的任一项所述的口服制剂在制备用于治疗痛风、痛风性肾病以及痛风性关节炎中的至少一种的药物中的用途。

本申请中，各组分的功效和药味归经如下：

虎杖：活血定痛，清热利湿；性味苦、寒，归肝、胆、肺经；

萆薢：利湿浊，祛风湿；性味苦、平，归肝、胃、膀胱经；

草红藤：清热解毒，活血止痛；性味苦、平，归大肠经；

土茯苓：除湿、利关节；性味甘、淡、平，贵肝、胃经；

续断：补肝肾，行血脉，续筋骨；性味苦、甘、辛，微温，归肝、肾经；

川牛膝：活血祛瘀，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行；性味苦、酸、平，归肝、肾经；

葛根：发表解肌，解热生津，通络止痛；性味甘、辛、凉，归脾、胃经；

骨碎补：补肾、活血；性味苦、温，归肝、肾经；

鸡血藤：行血补血，舒筋活络；性味苦、微甘，温，归肝经；

甘草：补脾益气、缓急止痛、缓和药性；性味甘、平，归心、肺、脾、胃经；

三七：化瘀、活血定痛；性味甘、微苦，温，归肝、胃经。

本方所治痛风为肝肾不足，湿浊郁痹，经络瘀滞，郁而化热，证属本虚标实，湿瘀阻滞。方中萆薢能祛风湿，通络止痛，善治腰膝痹痛，筋脉关节屈伸不利；虎杖祛风利湿，散瘀定痛，止咳化痰，用于关节痹痛，共为君药。土茯苓解毒除湿，通利关节；三七散瘀止血，消肿定痛；续断补肝肾，续筋骨，调血脉，治腰背酸痛。鸡血藤活血补血，调经止痛，舒筋活络。用于风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄，本品既能活血通络止痛，又能养血荣筋。草红藤清热解毒、活血祛风止痛。此五味共为臣药。辅以葛根解肌退热，生津止渴，通经活络；骨碎补补肾强骨，续伤止痛；川牛膝，引血下行之中兼以补益肝肾。甘草补益中气，调和诸药，是为使。全方清热化湿祛邪，补肝肾、强筋骨扶正，同时通经活络止痛，以祛邪为主，兼顾扶正，使湿热去，经络通，筋骨强，痹痛止。

本申请的有益效果是：

1.本申请的中药组合物能够降低高尿酸血症患者的血清尿酸浓度，增加肾脏尿酸清除率；减轻痛风性关节炎患者的关节肿胀度，降低关节内炎性细胞因子和血管粘附因子的表达；改善痛风性肾病患者的肾脏组织形态结构，提升肾脏功能。

2.本申请的中药组合物中所含药材不含国务院1988年公布的28种毒性中药材，资源比较丰富，制备成本较低，可以满足大规模工业化生产。

3.在本申请的中药组合物中，续断、川牛膝、骨碎补三味药具有补肝肾、强筋骨、行血脉的作用，葛根、鸡血藤、甘草、三七具有活血通络、止痛的作用，虎杖、草红藤、萆薢、土茯苓具有活血定痛、除湿浊、利关节的作用，而将这三组药材均对治疗高尿酸血症有一定的疗效，但当这三组药材结合在一起时，降尿酸的效果有显著的提高，这说明了，本申请的中药组合物中，各原料间具有协同作用，增强了治疗高尿酸血症的效果。

具体实施方式

实施例1

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖120g、萆薢173.9g、草红藤129g、土茯苓75g、酒续断83.3g、川牛膝130.4g、葛根90.9g、骨碎补75g、鸡血藤160g、灸甘草48g以及三七粉66.7g；加入8倍体积的水煎煮提取3次，每次1h，合并得到的提取液，过滤，在70℃(±5℃)下将过滤得到的滤液减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，在70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例1的中药组合物。

实施例2

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖93.6g、萆薢142.8g、草红藤133.3g、土茯苓83.3g、酒续断103.4g、川牛膝88.2g、葛根90.9g、骨碎补103.4g、鸡血藤129g、灸甘草52.1g以及三七粉60g；加入8倍体积的水煎煮提取3次，每次1h，合并得到的提取液，过滤，在70℃(±5℃)下将过滤得到的滤液减压(0.07Mpa)浓缩至相对密度为1.20的稠膏，加入乙醇使含醇量至70％，静置过夜，过滤，收集醇沉液，在70℃(±5℃)下减压(0.07Mpa)回收乙醇，并浓缩，即得实施例2的中药组合物。

实施例3

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖123.4g、萆薢115.2g、草红藤137.9g、土茯苓103.4g、酒续断130.4g、川牛膝103.4g、葛根100g、骨碎补103.4g、鸡血藤137.9g、灸甘草41.3g以及三七粉62g；加入6倍体积的85％乙醇回流提取3次，每次1h，将得到的提取液进行抽滤，合并抽滤得到的滤液，在70℃(±5℃)下将滤液减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，在70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例3的中药组合物。

实施例4

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖88.2g、萆薢127.6g、草红藤117.6g、土茯苓98.2g、酒续断88.2g、川牛膝88.2g、葛根88.2g、骨碎补89.4g、鸡血藤117.6g、灸甘草35.3g以及三七粉52.9g；加入8倍体积的水煎煮提取3次，每次1h，合并滤液得到的提取液，过滤，采用101大孔吸附树脂柱对过滤得到的滤液进行洗脱，先用7倍体积的水洗，然后弃去水液，再用75％乙醇洗脱，收集洗脱液，在70℃(±5℃)下将所述洗脱液减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，在70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例4的中药组合物。

实施例5

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖100g、萆薢133.3g、草红藤133.3g、土茯苓100g、酒续断100g、川牛膝100g、葛根100g、骨碎补100g、鸡血藤133.3g、灸甘草40g以及三七粉60g；加入6倍体积的70％乙醇回流提取3次，每次1h，将得到的提取液进行抽滤，合并抽滤得到的滤液，在65℃(±5℃)下减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，在70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例5的中药组合物。

实施例6

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖75g、萆薢98.7g、草红藤100g、土茯苓74.6g、酒续断75g、川牛膝75g、葛根80.3g、骨碎补75g、鸡血藤105.4g、灸甘草30g以及三七粉45g；加入6倍体积的稀乙醇回流提取3次，每次1h，将得到的提取液进行抽滤，合并抽滤所得的滤液，过滤，采用大孔吸附树脂(101)柱对过滤得到的滤液进行洗脱，先用7倍体积的水洗，然后弃去水液，再用75％乙醇洗脱，收集洗脱液，在70℃(±5℃)下将所述洗脱液减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，再70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例6的中药组合物。

实施例7

一种中药组合物，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖115.3g、萆薢97.5g、草红藤105.3g、土茯苓120g、酒续断130.4g、川牛膝125g、葛根115.3g、骨碎补115.3g、鸡血藤153.8g、灸甘草46.1g以及三七粉69.2g；加入6倍体积的60％乙醇回流提取3次，每次1h，将得到的提取液进行抽滤，合并抽滤得到的滤液在70℃(±5℃)下减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，在70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例7的中药组合物。

实施例8

一种中药组合物，其制备步骤如下：：

称取中药饮片：虎杖100g、萆薢133.3g、川牛膝100g、鸡血藤133.3g、三七粉60g以及土茯苓100g；加入6倍体积的70％乙醇回流提取3次，每次1h，将得到的提取液进行抽滤，合并抽滤得到的滤液，在65℃(±5℃)下减压(0.07Mpa)浓缩成稠膏，在70℃(±5℃)下减压干燥(0.08Mpa)成干膏，打粉，即得实施例8的中药组合物。

实施例9

一种口服制剂，其剂型为颗粒剂，其制备步骤如下：

按照实施例5制备中药组合物，过100目筛，按比例加入糊精200g和乳糖80g，混合均匀，采用75％乙醇制粒，再进行干燥和整粒，即得。

实施例10

一种口服制剂，其剂型为片剂，其制备步骤如下：

按照实施例4制备中药组合物，过100目筛，按比例加入可溶性淀粉170g、乳糖60g以及微晶纤维素20g，混匀后干燥，制成颗粒，再加入硬脂酸镁，压制成片，即得。

实施例11

一种口服制剂，其剂型为胶囊剂，其制备步骤如下：

按照实施例2制备中药组合物，过120目筛，加可溶性淀粉230g，混匀，进行制粒和干燥，再加入硬脂酸镁5g，混匀，装入胶囊，即得。

实施例12

一种口服制剂，其剂型为浓缩丸，其制备步骤如下：

称取中药饮片：虎杖103.4g、萆薢127.9g、草红藤117.9g、土茯苓103.4g、酒续断83g、川牛膝124.3g、葛根112g、骨碎补99g、鸡血藤137.9g以及灸甘草41.4g；加入8倍体积的水煎煮提取3次，每次1h，合并得到的提取液，过滤，在70℃(0.07Mpa)对过滤得到的滤液减压(0.07Mpa)浓缩至相对密度为1.25的稠膏；取三七粉碎成细粉，与上述稠膏混匀，制丸，干燥，即得。

实施例13

一种口服制剂，其剂型为口服液，其制备步骤如下：

按照实施例3制备中药组合物，加水使成1000ml，搅匀，静置，过滤，加入山梨酸钾，灌封，灭菌，即得。

实施例14

一种口服制剂，其剂型为合剂，其制备步骤如下：

按照实施例3制备中药组合物，加水使成1000ml，搅匀，静置，过滤，加入苯甲酸钠，灌封，灭菌，即得。

以下通过药效学试验证明本申请的有益效果：

实验例1

验证本申请对高尿酸血症实验动物模型的影响。将实施例5的中药组合物分别稀释为高剂量组(2.4g/kg)，中剂量组(1.2g/kg)，低剂量组(0.6g/kg)；将实施例8的中药组合物稀释为高剂量的核心处方组(2.4g/kg)。取70只雄性SD大鼠，随机分为空白对照组、模型组、高剂量组(2.4g/kg)，中剂量组(1.2g/kg)、低剂量组(0.6g/kg)、核心组方组(2.4g/kg)以及苯溴马隆组(12mg/kg)，以酵母膏10g/kg灌胃，1次/d，连续20d，造模第11天开始灌胃给药，1次/d，连续10d，空白对照组和模型组给等量的0.5％CMC-Na溶液。收集第(19～20)d大鼠24h尿液，记录尿量，第20天给药后60min取血，分离血清，测定血清和尿液尿酸水平，如表1所示。

表1本申请对高尿酸血症大鼠尿酸水平的影响(n＝10)

注：*P<0.05，**P<0.01，与模型组比较，下同。

结果表明：与空白对照组比较，模型组尿量明显增加，血液中尿酸浓度明显增高，尿液中尿酸浓度降低，24小时尿酸排出量也明显减少，有显著性差异(P<0.01)。全方组能降低血液中尿酸浓度，增加24小时尿酸排出量，与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)，说明本申请对高尿酸血症大鼠尿酸增高有较好改善作用；此外，核心处方组(2.4g/kg)也具有明显降低尿酸作用，与全方组的中剂量组(1.2g/kg)基本相当，但稍弱于全方组的高剂量组(2.4g/kg)，证明了本申请的核心处方具有治疗高尿酸血症的效果，而本申请的全方治疗高尿酸血症的效果更好。

实验例2

验证本申请对痛风性关节炎实验动物模型的影响。将实施例7的中药组合物分别稀释为高剂量组(2.4g/kg)，中剂量组(1.2g/kg)，低剂量组(0.6g/kg)。取健康SD大鼠60只，均为雄性，体重(200±20)g，随机分为6组，即，高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组、模型对照组以及空白对照组。分别灌胃给予高剂量组(2.4g/kg)、中剂量组(1.2g/kg)、低剂量组(0.6g/kg)、阳性对照组(秋水仙碱0.5mg/kg)、模型对照组(等容积的等量的0.5％CMC-Na溶液)，每天给药1次，连续7d。于第7d各组动物给药后60min，将尿酸钠(MSU)溶液0.05ml/只(浓度25mg/ml)注入大鼠左踝关节，形成急性痛风性关节炎。空白对照组动物的踝关节腔内注入等量生理盐水。用无弹性软尺分别在造模前、造模后1、3、4、5、6、7、8、24h测量受试踝关节相同部位的周长，计算关节肿胀度。关节肿胀度计算公式：肿胀度＝给药后关节周长-造模前关节周长，如表2所示。

表2本申请对高尿酸血症大鼠尿酸水平的影响(n＝10)

时相

空白对照组

模型对照组

高剂量组

中剂量组

低剂量组

阳性对照组

1h

0.01±0.04**

0.35±0.16

0.15±0.17*

0.16±0.16*

0.25±0.21

0.24±0.11

3h

0.02±0.05**

0.58±0.22

0.26±0.27**

0.30±0.21**

0.34±0.19*

0.37±0.20*

4h

0.04±0.05**

0.60±0.31

0.31±0.22*

0.38±0.28

0.51±0.17

0.45±0.15

5h

0.03±0.04**

0.71±0.31

0.34±0.21**

0.39±0.22*

0.52±0.18

0.46±0.19*

6h

0.04±0.05**

0.68±0.29

0.40±0.17*

0.39±0.23*

0.51±0.13

0.45±0.17*

7h

0.03±0.06**

0.60±0.28

0.34±0.14*

0.33±0.25*

0.46±0.16

0.40±0.16

8h

0.03±0.07**

0.55±0.24

0.31±0.13*

0.32±0.24*

0.39±0.12

0.35±0.16*

24h

0.00±0.06**

0.41±0.18

0.21±0.14*

0.24±0.26

0.29±0.12

0.28±0.15

结果表明：大鼠踝关节注射MSU后，关节出现红肿胀大，各时相模型组关节周长和关节肿胀度都较空白对照有明显增加(P<0.05或P<0.01)，本申请大、中剂量能降低关节肿胀度，与模型组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

大鼠经麻醉后放血处死，置有冰块的干燥托盘内快速分离受试关节周围软组织及关节液，低温(-20℃)冰箱中保存备用。在4℃条件下，取关节周围软组织及关节液，加入0.2ml PH7.2PBS缓冲液匀浆后，4℃离心(3500rpm，10min)，取上清液，采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)检测匀浆液IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ的含量，如表3所示。

表3本发明对痛风性关节炎大鼠细胞因子水平的影响(n＝10)

组别

剂量(g/kg)

IL-1β(pg/ml)

IL-2(pg/ml)

IL-6(pg/ml)

IL-10(pg/ml)

IFN-γ(pg/ml)

空白对照组

/

42.0±21.5**

34.1±15.2**

41.4±20.1**

80.5±18.4**

45.9±15.1**

模型对照组

/

114.8±34.3

87.1±27.6

277.8±94.4

22.0±7.4

133.4±31.2

低剂量组

0.6

76.2±30.2*

62.9±22.2*

93.2±42.6**

63.6±15.2**

115.0±21.7*

中剂量组

1.2

74.7±23.3**

58.7±20.9*

84.7±55.2**

65.1±21.6**

100.7±27.5**

高剂量组

2.4

68.7±36.1**

51.0±19.7**

68.4±24.1**

71.9±12.5**

83.3±21.9**

阳性对照组

0.5mg/kg

78.6±35.0*

48.2±19.6**

153.6±53.4**

79.3±22.1**

94.8±17.8**

结果表明：与空白对照组比较，模型组血清IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ的水平明显升高，IL-10明显降低，有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。本申请给药后可明显降低炎性增高的IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ的水平，与模型组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。本申请给药组可升高降低的IL-10的水平。

取关节周围软组织，置福尔马林固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋，4μm切片，按试剂说明书行血管粘附因子(VCAM-1)、环氧化酶(COX-2)免疫组化染色，光学显微镜下观察，统计实验结果于表4和表5。

表4本申请对痛风性关节炎VCAM-1表达的影响(n＝10)

组别	剂量(g/kg)	面积(×104)	IOD(×104)
				空白对照组	/	5.14±1.50**	1.43±0.38**
模型对照组	/	9.56±3.03	2.23±0.64
				低剂量组	0.6	5.67±2.17**	1.54±0.46*
中剂量组	1.2	5.54±1.65**	1.23±0.46**
				高剂量组	2.4	3.96±1.42**	1.12±0.36**
阳性对照组	0.5mg/kg	3.93±1.03**	1.40±0.57**

结果表明：镜下见血管粘附因子表达在滑膜血管全层及少量成纤维细胞内；空白对照组也可见血管粘附因子的表达，模型组较空白对照组表达面积及强度均可见增强(P<0.05)；本申请各给药组表达面积及强度较模型组均有不同程度的减少，与模型组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。

表5本申请对痛风性关节炎试验动物模型COX-2表达的影响(n＝10)

组别	剂量(g/kg)	面积(×102)	IOD(×102)
				空白对照组	/	6.21±1.84**	1.47±0.47**
模型对照组	/	13.18±3.12	3.52±0.89
				低剂量组	0.6	7.67±3.71**	2.42±1.15*
中剂量组	1.2	7.40±2.36**	2.26±0.59**
				高剂量组	2.4	6.75±3.31**	1.56±0.81**
阳性对照组	0.5mg/kg	5.22±1.35**	1.66±0.83**

结果表明：镜下见环氧化酶主要表达在大鼠关节滑膜细胞、血管及纤维细胞内；空白对照组关节也可见少量环氧化酶表达；模型组环氧化酶表达面积及强度较空白对照有显著性的增强(P<0.01)；本申请各给药组有不同程度的减弱，与模型比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，

实验例3

研究本申请对痛风性肾病实验动物模型的影响。将实施例3的中药组合物分别稀释为高剂量(2.4g/kg)、中剂量(1.2g/kg)以及低剂量(0.6g/kg)。将SPF级SD实验大鼠60只，随机分为空白对照组、模型组、本申请高剂量组(2.4g/kg)，中剂量组(1.2g/kg)，低剂量组(0.6g/kg)，苯溴马隆组(12mg/kg)，每组10只。除空白对照组动物外，各组动物均用含1.25％腺嘌呤的10％干酵母液，ig10ml/kg，每天一次，共4周，造成痛风性肾病模型。本申请治疗组分别给予本申请2.4g/kg、1.2g/kg、0.6g/kg灌胃；苯溴马隆对照组每天每只大鼠给予苯溴马隆12mg/kg灌胃；空白对照组和模型组每日灌以等量蒸馏水。连续给药或水14天后用代谢笼收集24小时尿液，麻醉动物，腹主动脉采血处死，分离血清；取肾脏。肾脏用10％福尔马林液固定，石蜡包埋、HE染色进行病理检测。血清采用酶法测定血尿酸、尿酸肾脏清除率、尿酸，采用苦味酸法检测血清肌酐，采用脲酶法测定血清尿素氮，比色法测定血清黄嘌呤氧化酶(XOD)活性，如表6、表7所示。

表6本申请对痛风性肾病实验动物模型尿酸水平的影响(n＝10)

结果表明：模型组动物尿量明显增加，血液中尿酸浓度明显增高，尿液中尿酸浓度降低，24小时尿酸排出量也明显减少，尿酸清除率明显降低，与空白对照组比较都有显著性差异(P<0.01)。本申请给药14天能降低血液中尿酸浓度，增加24小时尿酸排出量，增加尿酸清除率，与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)，说明本申请对痛风性肾病大鼠尿酸增高有较好改善作用。

表7本申请对痛风性肾病大鼠血清XOD水平及肾功能的影响(n＝10)

结果表明：模型组动物血清BUN、Crea和XOD浓度明显升高，与空白对照组比较都有显著性差异(P<0.01)。本申请给药14天能降低血液中BUN、Crea的水平，并能抑制增高的XOD活性，与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)，说明本申请对痛风性肾病大鼠肾功能和XOD活性有较好改善作用。

取关节周围软组织，置福尔马林固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋，4μm切片，按试剂说明书行血管粘附因子(VCAM-1)、环氧化酶(COX-2)免疫组化染色，光学显微镜下观察。

镜下见空白对照组肾被膜光滑完整，实质内肾小球、肾小管形态结构正常；间质无充血、炎细胞浸润及纤维增生，肾盂粘膜光滑完整。

模型组肾脏形态结构遭到严重破坏，肾间质内可见大量尿酸盐沉积伴大量炎细胞浸润，肾小管及肾小球明显减少，被大量增生的间质细胞取代，肾体积呈增生性肥大，残留肾小管管腔扩张，管腔内可见炎性或蛋白管型。

本申请给药组可见与模型组相同病变，但肾小球的损伤数量、炎细胞的浸润、间质细胞的增生和尿酸盐的沉积均明显减少。

对比例1-3

将本申请组方按功效拆解成三个组方，分别用于高尿酸血症及痛风性肾病模型，并与原组方等比较，探讨不同组方对高尿酸血症及痛风性肾病的作用。

对比例1：方中起补肝肾、强筋骨、行血脉作用的药物(续断、川牛膝、骨碎补三味药)

对比例2：方中起活血通络、止痛作用的药物(葛根、鸡血藤、甘草、三七四味药)

对比例3：方中起活血定痛、除湿浊、利关节作用的药物(虎杖、草红藤、萆薢、土茯苓四味药)

实验例4

研究本申请拆方对高尿酸血症实验动物模型的影响。取70只雄性SD大鼠，随机分为空白对照组、模型组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、本申请全方组(实施例5)以及本申请核心处方组(实施例8)以酵母膏10g/kg灌胃，1次/d，连续20d，造模第11天开始灌胃给药，1次/d，连续10d，对照组和模型组给等量的0.5％CMC-Na溶液。收集第(19～20)d大鼠24h尿液，记录尿量，第20天给药后60min取血，分离血清，测定血清和尿液尿酸水平，结果如表8所示。

表8本申请拆方对高尿酸血症大鼠尿酸水平的影响(n＝10)

结果表明：与空白对照组比较，模型组尿量明显增加，血液中尿酸浓度明显增高，尿液中尿酸浓度降低，24小时尿酸排出量也明显减少，有显著性差异(P<0.01)。本申请组方三个拆方组仅能降低24h尿量，增加尿液尿酸浓度；对24小时尿酸排出量仅有少量增加，对血清尿酸水平降低幅度也不是很大。而全方组却能明显降低血清尿酸水平，增加24小时尿酸排出量，与模型组比较有明显差异(P<0.01)，提示本申请组方各部份配伍具有互相促进作用。核心处方组作用较全方组为弱，但优于对比例的拆方组。可以看出，本发明的全方组相较于拆方组，在同等给药量下，治疗高尿酸血症效果有明显提高，说明本申请的各组分之间具有协同作用。

实验例5

研究发明拆方对痛风性肾病实验动物模型的影响。将SPF级SD实验大鼠60只，随机分为空白对照组，模型组，对比例1组、对比例2组、对比例3组、本申请全方组(实施例3，每组10只。除空白对照组动物外，各组动物均用含1.25％腺嘌呤的10％干酵母液，ig10ml/kg，每天一次，共4周，造成痛风性肾病模型。本申请治疗组分别给予本申请拆方或全方1.8g/kg灌胃，空白对照组和模型组每日灌以等量蒸馏水。连续给药或水14天后用代谢笼收集24小时尿液，麻醉动物，腹主动脉采血处死，分离血清，测定血清和尿液尿酸水平，如表9所示。

表9本申请拆方对痛风性肾病实验动物模型尿酸水平的影响(n＝10)

结果表明：给药14天，模型组动物尿量明显增加，血液中尿酸浓度明显增高，尿液中尿酸浓度降低，24小时尿酸排出量也明显减少，尿酸清除率明显降低，与空白对照组比较都有显著性差异(P<0.01)。本申请给药拆方各部份能降低血液中尿酸浓度，增加24小时尿酸排出量，增加尿酸清除率，但改变幅度均较小，与模型组比较无显著性差异(P>0.05)；而全方组对上述指标的改变与模型组有明显差异(P<0.05或P<0.01)。进一步提示本申请组方各部份对痛风性肾病也有互相促进作用。

实验例6

对本申请安全性进行评价。单次给药毒性试验：取实施例5的中药组合物，按最大给药量法，本申请1次灌胃小鼠18.9g/kg，动物出现一过性活动减少，短时间内有耸毛现象，1～2小时内恢复常态。给药当日粪便呈褐色，次日恢复。自给药后经过14天观察，小鼠食欲、外观、自主活动、分泌物和体重增长等均未见异常，未见一只死亡。观察期结束，处死动物大体解剖，肉眼观察，心、肝、脾、肺、肾和胃等主要脏器未见肿胀、瘀血、出血等异常现象，给药组与空白对照组动物比较未见明显异常。

重复给药毒性试验：取实施例5的中药组合物稀释，大鼠按2.6g/kg、5.2g/kg和10.4g/kg的剂量灌胃给予本申请，连续给药3个月，停药恢复3周。各组均无动物死亡，且没有出现明显的临床毒副反应，根据体重增长情况、摄食量、血液学、血液生化学、系统尸检、脏器系数及组织病理学检查结果分析，本申请三个剂量均无明显毒性。

以上所述仅是本申请的优选实施方式，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。

Claims (11)

1.一种中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的原料包括：虎杖、萆薢、川牛膝、鸡血藤、三七粉以及土茯苓。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，按重量份计，所述原料包括：虎杖35-65份、萆薢47.6-86.9份、川牛膝35-65份、鸡血藤47.6-86.9份、三七粉21.4-39.1份以及土茯苓35-65份。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于，所述原料还包括：草红藤、酒续断、葛根、骨碎补以及炙甘草。

4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，按重量份计，所述原料包括：虎杖35-65份、萆薢47.6-86.9份、川牛膝35-65份、鸡血藤47.6-86.9份、三七粉21.4-39.1份、草红藤47.6-86.9份、土茯苓35-65份、酒续断35-65份、葛根35-65份、骨碎补35-65份以及炙甘草14.3-26.1份。

5.根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，按重量份计，所述原料包括：虎杖50份、萆薢66.6份、川牛膝50份、鸡血藤66.6份、三七粉30份、草红藤66.6份、土茯苓50份、酒续断50份、葛根50份、骨碎补50份以及炙甘草20份。

6.一种制备如权利要求1-5中任一项所述的中药组合物的方法，其特征在于，包括：称取所述中药组合物的原料，进行提取、过滤、浓缩、干燥，得到所述中药组合物。

7.一种口服制剂，其特征在于，所述口服制剂由如权利要求1-5中任一项所述的中药组合物与药学上可接受的辅料按制剂工艺制备而成。

8.根据权利要求7所述的口服制剂，其特征在于，所述口服制剂的剂型包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、浓缩丸、口服液以及合剂中的至少一种。

9.如权利要求1-5中任一项所述的中药组合物或如权利要求7或8所述的口服制剂在制备具有清热、化湿、驱邪、补肝肾以及强筋骨中的至少一种功效的药物中的用途。

10.如权利要求1-5中任一项所述的中药组合物或如权利要求7或8所述的口服制剂在制备用于治疗高尿酸血症的药物中的用途。

11.如权利要求1-5中任一项所述的中药组合物或如权利要求7或8所述的口服制剂在制备用于治疗痛风、痛风性肾病以及痛风性关节炎中的至少一种的药物中的用途。