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CN118064436B - 一种增强基因表达的嵌合启动子 - Google Patents

一种增强基因表达的嵌合启动子 Download PDF

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CN118064436B CN202410472508.5A CN202410472508A CN118064436B CN 118064436 B CN118064436 B CN 118064436B CN 202410472508 A CN202410472508 A CN 202410472508A CN 118064436 B CN118064436 B CN 118064436B
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Abstract

本公开涉及一种嵌合启动子多核苷酸。此外，本公开还涉及包含本公开中所述的多核苷酸在驱使基因转录表达的核酸构建体、载体、病毒颗粒和组合物，以及在制备用于治疗相关疾病的基因疗法中的用途。

Description

一种增强基因表达的嵌合启动子
技术领域
本公开属于生物医学领域，尤其涉及到一种嵌合启动子的多核苷酸。此外，本公开还涉及包含本公开中所述的多核苷酸在驱使基因转录表达的核酸构建体、载体、病毒颗粒和组合物，以及在制备用于治疗相关疾病的基因疗法中的用途。
背景技术
基因治疗（Gene therapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷或异常引起的疾病，最终实现治疗目的，近年来，用rAAV作基因治疗载体已成为基因治疗研究的热点。一个高效的启动子能够持续高强度的启动目的基因的表达，降低达到治疗效果所需剂量，从而大大降低治疗成本。通过优化启动子序列来提高目的基因的转录或特异性表达，从而降低采用rAAV作为递送载体的治疗成本是本发明需要解决的问题。
发明内容
本公开提供了一种多核苷酸，其中，所述多核苷酸为SEQ ID NO：2所示的核酸序列。
本公开提供了一种核酸构建体，其包含：
1）感兴趣的多核苷酸序列；
2）与感兴趣的多核苷酸序列可操作连接的转录调控元件，其中所述转录调控元件包含如前所述的多核苷酸，并且，所述转录调控元件位于所述感兴趣的多核苷酸序列的上游。
在一些实施方式中，其中所述感兴趣的多核苷酸序列是编码 β-葡萄糖脑苷脂酶（GCase）的GBA1或其变体的核酸序列。
另一方面，本公开提供了一种载体，其包含如前所述的多核苷酸或如前所述的核酸构建体。
在一些实施方式中，其中所述载体是病毒载体，优选地，所述病毒载体是AAV载体、腺病毒载体或慢病毒载体。
另一方面，本公开提供了一种腺相关病毒（AAV）颗粒，其包含如前所述的载体和衣壳蛋白。
在一些实施方式中，其中所述AAV选自由血清型9、8、1、2、3、3B、4、5、6、7、10、11、12、13、rh10或hu37以及从人类和非人类哺乳动物或其变体中分离的任何一种AAV血清型组成的组。
另一方面，本公开提供了一种药物组合物，包括如前所述的载体、或如前所述的AAV颗粒，以及药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本公开提供了如前所述的多核苷酸、如前所述的核酸构建体、如前所述的载体、如前所述的AAV颗粒或如前所述的药物组合物在制备在受试者中治疗或预防疾病的药物中的用途。
在一些实施方式中，向受试者施用有效量的如前所述的载体、如前所述的AAV颗粒或如前所述的药物组合物。
在一些实施方式中，其中所述疾病是戈谢病。
在一些实施方式中，其中所述受试者是哺乳动物，优选地，所述受试者是人。
附图说明
参考下述附图，本公开可以被更完全地理解。
图1示出了含不同启动子的质粒体外转染的结果。
具体实施方式
下面关于本公开的描述仅仅旨在说明本公开的各种不同的实施方式。因此，所讨论的特定修改不应被解释为对本公开范围的限制。对本领域技术人员来说，显然可以在不脱离本公开范围的情况下做出各种不同的等效、改变和修改方案，并且应当理解这些等效实施方式将被包含在本文中。本文引用的包含出版物、专利和专利申请在内的所有参考文献均通过引用整体并入本文。
除非另有技术人员通常理解相同的含义。
多核苷酸
本文所使用的术语“核苷酸”和“多核苷酸”可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合物形式，可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。因此，该术语包括但不限于单链、双链或多链DNA或RNA、基因组DNA、cDNA、DNA-RNA杂合体，或包含嘌呤和嘧啶碱基或其他天然、化学或生物化学修饰、非天然或衍生的核苷酸碱基、基本上由所述碱基组成或由所述碱基组成的聚合物。
本文所使用的术语“启动子”意指一种控制序列，其是多核苷酸序列的控制编码序列例如基因或转入基因的转录起始和速率的区域。启动子可以是组成型、诱导型、阻遏型或组织特异性的。
本文所使用的术语“载体”是指包含完整复制子、基本上由其组成或由其组成的核酸，使得当所述载体通过例如转染、感染或转化过程置于细胞内时可以被复制。在本领域中应该理解，一旦进入细胞内，载体可以作为染色体外（游离体）元件复制，或者可以整合到宿主细胞染色体中。载体可以包括源自反转录病毒、腺病毒、疱疹病毒、杆状病毒、修饰的杆状病毒、乳头状病毒、AAV病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、甲病毒载体等的核酸，优选地，本文所述的载体选自AAV载体、腺病毒载体、或慢病毒载体。
本文所使用的术语“腺相关病毒”或“AAV”是指与该名称相关并属于细小病毒科依赖性细小病毒属的病毒类别的成员。腺相关病毒是一种单链DNA病毒，仅在细胞中生长，其中某些功能由共同感染的辅助病毒提供。所有AAV血清型均明显表现出由同源rep基因介导的非常相似的复制特性；并且都带有三种相关的衣壳蛋白。在本领域中已知至少13种顺序编号的天然存在的AAV血清型。用于本文公开的方法中的非限制性示例性血清型包括这13种血清型中的任一者，例如AAV2、AAV8、AAV9，或变体血清型例如AAV-DJ和AAV PHP.B。AAV颗粒包含三种主要病毒蛋白VP1、VP2和VP3，基本上由所述蛋白组成或由所述蛋白组成。在实施方式中，所述AAV包含选自由AAVPHP.B、AAVrh74、AAV 110、AAV 204、AAV 214、AAV 214A、AAV 214e、AAV 214e8、AAV 214e9、AAV 214el 0、AAV ITB102_45和AAV 214AB组成的组的AAV衣壳蛋白。在实施方式中，AAV是指血清型AAV1、AAV2、AAV3、AAV3B、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12或AAV13、AAVrh10、AAVhu37或从人类和非人哺乳动物分离的AAV血清型中的任一者或其变体。在实施方式中，AAV颗粒包含选自由AAV1、AAV2、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、AAVrh8R、AAVrh8R A586R突变体、AAVrh8R R533A突变体、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAV SM 10-2、AAVShuffle 100-1、AAV Shuffle 100-3、AAV Shuffle 100-7、AAV Shuffle 10-2、AAVShuffle 10-6、AAV Shuffle 10-8、AAV Shuffle 100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAVSM 100-3、AAV SM 100-10、BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、AAV128.1/hu.43、真型（true type）AAV（ttAAV）、UPENNAAV 10、日本AAV 10血清型、AAV CBr-7.1、AAV CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAVCBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAVCBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAVCBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAVCHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAVCKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAVCSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/HSC9、AAV-PHP.B（PHP.B）、AAV-PHP.A（PHP.A）、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32、TH1.1-35、AAVPHP.B2、AAVPHP.B3、AAVPHP.N/PHP.B-DGT、AAVPHP.B-EST、AAVPHP.B-GGT、AAVPHP.B-ATP、AAVPHP.B-ATT-T、AAVPHP.B-DGT-T、AAVPHP.B-GGT-T、AAVPHP.B-SGS、AAVPHP.B-AQP、AAVPHP.B-QQP、AAVPHP.B-SNP（3）、AAVPHP.B-SNP、AAVPHP.B-QGT、AAVPHP.B-NQT、AAVPHP.B-EGS、AAVPHP.B-SGN、AAVPHP.B-EGT、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-STP、AAVPHP.B-PQP、AAVPHP.B-SQP、AAVPHP.B-QLP、AAVPHP.B-TMP、AAVPHP.B-TTP、AAVPHP.S/G2A12、AAVG2A15/G2A3、AAVG2B4、AAVG2B5及其变体组成的组。
如本文所用，术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、大鼠、小鼠、两栖动物、爬行动物等。除非另有说明，否则术语“患者”或“受试者”可互换使用。在本公开中，优选的受试者是人类。
如本文所用，术语“治疗”是指向受试者施用有效量的具有根据本文所述的多核苷酸、核酸构建体、载体、AAV颗粒或药物组合物，以使得所述受试者具有所述疾病的至少一种症状的减少或所述疾病的改善，例如，有益的或所需的临床结果。出于本公开的目的，有益的或所需的临床结果包括但不限于一种或多种症状的减轻、疾病程度的减小、疾病状态的稳定（即不恶化）、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和，以及缓解（无论是部分缓解还是全部缓解），无论是可检测的或是不可检测的。治疗可指与未接受治疗情况下的预期存活期相比，延长存活期。因此，本领域的技术人员意识到治疗可改善疾病状况，但可能不是疾病的完全治愈。如本文所用，术语“治疗”包括预防。或者，治疗在疾病的进展减少或停止的情况下是“有效的”。“治疗”还可意指与在未接受治疗情况下的预期存活期相比，延长存活期。如本文所用，术语“有效量”意指足以达到所需效果的量。在用于治疗或预防的情况下，有效量取决于所讨论的病症的类型和严重程度以及个体受试者的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物组合物的耐受性。在基因治疗中，例如在一些实施方式中，有效量是足以调节相关基因的部分或全部功能的量。在其他实施例中，AAV病毒颗粒的有效量是足以调节受试者中表达基因的量。本领域技术人员将能够根据这些和其他因素确定适当的数量。
实施例
下面的实施例仅仅是说明性的，并且不打算以任何方式限制本发明的范围或内容。
体外转染
转染前24 h，将肝细胞系Huh7以1.5 × 105细胞/孔的细胞密度置于24孔板中。每孔均加入500 μL细胞培养基。转染采用基于PEI的转染试剂，每孔均共转染0.15 μg含不同启动子的质粒，以及0.15 μg含荧光素酶报告基因的质粒。转染48 h后，每孔加入300 μL新鲜的完整细胞培养基，细胞再孵育24 h。收集细胞培养上清采用酶促反应检测GCase酶活性；用细胞裂解缓冲液（Promega）裂解细胞后收集细胞裂解上清细胞采用Steady-Glo荧光素酶检测系统（Promega）用Varioskan LUX阅读器读取荧光强度。所有GCase酶活性报告值用荧光素酶强度进行归一化处理。
统计分析
使用Prism 7（Graph Pad）软件进行t检验统计学分析。
实施例
实施例1：嵌合肝脏特异性启动子
转录因子为提高基因治疗对肝脏引发疾病的治疗效果，本专利通过合理设计获得了一种嵌合型肝脏特异性启动子片段，具体核苷酸序列见表1。
表1. 不同元件的核苷酸序列
实施例2：体外转染
首先将人源葡萄糖脑苷脂酶基因（GBA1）分别克隆到含TTRm启动子和嵌合肝脏特异性启动子的AAV载体中获得PG170和PG171质粒（见表2）。然后将构建的质粒在Huh7肝细胞中进行体外转染，通过检测GCase酶活性比较不同启动子在肝细胞中启动外源蛋白的能力。检测结果如图1所示，与TTRm启动子相比，嵌合肝脏特异性启动子可增强外源蛋白GCase在肝细胞中的表达量。
表2. 质粒信息
通过引用并入
本文中提到的每个专利和科学文献的全部内容为所有目的通过引用并入本文。
等同性
本公开可以以其他特定方式体现，而不背离其精神或本质特征。因此，上述实施方式在所有情况下应该被当作是说明性的，而不是对本文描述的发明的限制。因此，本公开的范围由随附的权利要求书而不是由上述描述指明，并打算将在权利要求书的等同性意义和范围之内的所有变化涵盖在其中。

Claims (11)

1.一种多核苷酸，其中所述多核苷酸为SEQ ID NO：2所示的核酸序列。
2.一种核酸构建体，其包含：
1）感兴趣的多核苷酸序列；
2）与感兴趣的多核苷酸序列可操作连接的转录调控元件，其中所述转录调控元件包含如权利要求1所述的多核苷酸，并且，所述转录调控元件位于所述感兴趣的多核苷酸序列的上游，其中所述感兴趣的多核苷酸序列是编码β-葡萄糖脑苷脂酶（GCase）的GBA1的核酸序列。
3.一种载体，其包含如权利要求1所述的多核苷酸。
4.一种载体，其包含如权利要求2所述的核酸构建体。
5.如权利要求4所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
6.如权利要求5所述的载体，其中所述病毒载体是腺相关病毒（AAV）载体、腺病毒载体、或慢病毒载体。
7.一种腺相关病毒（AAV）颗粒，其包含权利要求4至6中任一项所述的载体和衣壳蛋白。
8.如权利要求7所述的腺相关病毒（AAV）颗粒，其中所述AAV选自从人类和非人类哺乳动物或其变体中分离的任何一种AAV血清型。
9.如权利要求7所述的腺相关病毒（AAV）颗粒，其中所述AAV选自由血清型9、8、1、2、3、3B、4、5、6、7、10、11、12、13、rh10或hu37组成的组。
10.一种药物组合物，包括如权利要求4至6中任一项所述的载体、或如权利要求7至9中任一项所述的腺相关病毒（AAV）颗粒，以及药学上可接受的赋形剂。
11.如权利要求2所述的核酸构建体、如权利要求4至6中任一项所述的载体、如权利要求7至9中任一项所述的腺相关病毒（AAV）颗粒或如权利要求10所述的药物组合物在制备在受试者中治疗或预防戈谢病的药物中的用途。
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