CN117562895B - 白术内酯ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及白术内酯Ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用。在过敏性紫癜大鼠的动物实验中，白术内酯Ⅰ可治疗缓解过敏性紫癜大鼠皮肤红肿、瘀斑、出血的症状，减少患处肥大细胞浸润，血管扩张，降低过敏性紫癜大鼠血清免疫球蛋白、免疫复合物、血清炎症因子的表达，在体大鼠给药剂量为5～20 mg/kg，具有明显的免疫调节，抗炎作用，有望开发成新的治疗过敏性紫癜的药物。

Description

白术内酯Ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及白术内酯Ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用。

背景技术

过敏性紫癜 (Henoch-Schonlein purpura, HSP) 是一种常见的累及皮肤、关节、胃肠道、肾脏等全身小血管的免疫性疾病，属于免疫性血管炎，又名IgA血管炎。过敏性紫癜的特征为非血小板减少性皮肤紫癜，可伴有关节肿痛、腹痛、肾脏病变等症状。

过敏性紫癜的病因复杂，与细菌（如溶血性链球菌、幽门螺杆菌、金黄色葡萄球菌等）感染、病毒（如流感病毒，新型冠状病毒等）感染、支原体感染、疫苗接种、药物因素（如水杨酸盐类药物、抗生素类药物、巴比妥类药物等）、遗传因素等关系密切。过敏性紫癜的主要发病机制为Ⅲ型变态反应，抗原与抗体（主要为IgA型）结合形成的循环免疫复合物在血管壁沉积，激活补体，导致毛细血管和小血管壁及周围产生炎症，使血管壁通透性增高，从而产生各种临床反应。

目前，针对过敏性紫癜尚无统一的特异性治疗方案，临床治疗主要应用糖皮质激素、免疫抑制剂、抗过敏及抗组胺药物、抗凝剂等缓解症状，但上述药物停药后易复发，长期疗效欠佳，且副作用较大。

相比之下，中医中药疗法更侧重于从体质调节入手，注重人体内环境的动态平衡，扶正培元，标本兼顾。因此，从中医中药角度开发防治过敏性紫癜的新药具有很大的潜力。

发明内容

发明目的：针对上述现有技术的不足，本发明公开了白术内酯Ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用。在过敏性紫癜大鼠的动物实验中，白术内酯Ⅰ具有明显的调节免疫、抗炎的作用，有望开发成新的治疗过敏性紫癜的药物。

技术方案：白术内酯Ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用。

白术内酯Ⅰ的结构式如式I所示：

。

式I

白术内酯Ⅰ作为唯一有效成分在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用。

进一步地，上述应用中，所述药物由白术内酯Ⅰ和药物上能够接受的载体组成。

更进一步地，所述药物以片剂、胶囊剂、口服液体剂、颗粒剂、中药药剂的形式存在。

更更进一步地，所述片剂为普通压制片、糖衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、缓释片、控释片中的一种。

更更进一步地，所述口服液体剂为溶液剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂中的一种。

更更进一步地，所述颗粒剂为可溶性颗粒剂、混悬型颗粒剂和泡腾型颗粒剂中的一种。

更更进一步地，所述中药药剂为汤剂、散剂、丸剂、丹剂中的一种。

一种用于治疗过敏性紫癜的药物，所述药物中含有白术内酯Ⅰ。

进一步地，所述药物中白术内酯Ⅰ为唯一有效成分。

众所周知，脾与机体免疫功能息息相关。中医认为“脾主运化、生肌血、统血”，脾被称为后天之本。应用健脾益气的方剂在一定程度上可提高机体免疫力。白术，作为中药补脾要药，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎的功效。白术内酯Ⅰ (Atractylenolide-Ⅰ, Atr-Ⅰ) 为白术的主要活性成分，在白术中含量较高，具有抗炎、抗肿瘤、调节胃肠功能、神经保护等作用。

有益效果：本发明公开的白术内酯Ⅰ在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用具有以下有益效果：

（1）白术内酯Ⅰ可明显减轻由过敏性紫癜引起的大鼠背部皮肤反应程度，减小背部斑点直径，缓解皮肤组织静脉血管淤血扩张、出血，减少肥大细胞浸润；

（2）白术内酯Ⅰ可降低过敏性紫癜大鼠血清中IgA、IgG、CIC含量，发挥免疫调节作用；

（3）白术内酯Ⅰ可降低过敏性紫癜大鼠血清中TNF-α、IL-6含量，发挥抗炎作用。

附图说明

图1为各组大鼠抗原攻击后背部红肿直径统计示意图。

图2为各组大鼠背部皮肤斑点情况示意图。

图3为各组大鼠皮肤组织H&E染色结果示意图。

图4为各组大鼠血清中IgA水平的示意图。

图5为各组大鼠血清中IgG水平的示意图。

图6为各组大鼠血清中CIC水平的示意图。

图7为各组大鼠血清中炎症因子TNF-α水平的示意图。

图8为各组大鼠血清中炎症因子IL-6水平的示意图。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式详细说明。

本发明所公开的“范围”以下限和上限的形式来限定，给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的，选定的下限和上限限定了特别范围的边界。这种方式进行限定的范围可以是包括端值或不包括端值的，并且可以进行任意地组合，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围。例如，如果针对特定参数列出了10～50的范围，理解为10～40和20～50的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围值3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1～3、1～4、1～5、2～3、2～4和2～5。在本申请中，除非有其他说明，数值的范围“a～b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0～5”表示本文中已经全部列出了“0～5”之间的全部实数，“0～5”只是这些数值组合的缩略表示。

如果没有特别的说明，本申请的所有实施方式以及可选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。

如果没有特别的说明，本申请的所有技术特征以及可选技术特征可以相互组合形成新的技术方案。

如果没有特别的说明，本申请的所有步骤可以顺序进行，也可以随机进行，优选是顺序进行的。例如，所述方法包括步骤(a)和(b)，表示所述方法可包括顺序进行的步骤(a)和(b)，也可以包括顺序进行的步骤(b)和(a)。例如，所述提到所述方法还可包括步骤(c)，表示步骤(c)可以任意顺序加入到所述方法，例如，所述方法可以包括步骤(a)、(b)和(c)，也可包括步骤(a)、(c)和(b)，也可以包括步骤(c)、(a)和(b)等。

如果没有特别的说明，本申请所提到的“包括”和“包含”表示开放式，也可以是封闭式。例如，所述“包括”和“包含”可以表示还可以包括或包含没有列出的其他组分，也可以仅包括或包含列出的组分。

如果没有特别的说明，则反应在常温、常压的条件进行。

如果没有特别的说明，则所有份数或百分数均为重量份或重量百分数。

在本发明中，所用物质均为已知物质，可以购得或通过已知的方法合成。

在本发明中，所用装置或设备均为所述领域已知的常规装置或设备，均可购得。

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

1、实验材料

大鼠：SPF级SD大鼠，雌雄各半，购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，为正常饲养大鼠，8周龄，大鼠生长过程处于同一环境，均喂养维持饲料。

2、实验动物及分组

SPF级SD大鼠，雌雄各半，同一环境适应性饲养1周后，随机分为对照组、模型组、白术内酯Ⅰ低剂量组(5 mg/kg)、白术内酯Ⅰ中剂量组(10 mg/kg)、白术内酯Ⅰ高剂量组(20 mg/kg)，下文中：

白术内酯Ⅰ低剂量组简称白术内酯Ⅰ低；

白术内酯Ⅰ中剂量组简称白术内酯Ⅰ中；

白术内酯Ⅰ高剂量组简称白术内酯Ⅰ高。

3、模型建立及给药

3.1、配制卵蛋白-弗氏不完全佐剂和卵蛋白-弗氏完全佐剂：

卵蛋白溶于适量生理盐水配制浓度为0.5 g/L的卵蛋白溶液，其中：

该卵蛋白溶液与等量弗氏完全佐剂混悬制成卵蛋白-弗氏完全佐剂；

该卵蛋白溶液与等量弗氏不完全佐剂混悬制成卵蛋白-弗氏不完全佐剂。

3.2、给药

模型组、白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠前3周肌肉注射卵蛋白-弗氏完全佐剂，后3周注射卵蛋白-弗氏不完全佐剂，每只0.5 mL，每周1次，对照组注射等量生理盐水。

末次致敏当日按照对照组、模型组、白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20mg/kg)剂量组给药，每组10只。均灌胃给药，连续给药14天，对照组、模型组给予等量溶媒。

模型组、白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠于给药第13天背部备皮，第14天给药后1小时进行抗原攻击，于背部皮内注射1%卵蛋白溶液（生理盐水配制），每点注射量为0.2 mL，共3点，对照组于背部皮内注射等量的生理盐水。

4、一般状况观察

观察动物整体状态，活动情况，摄食、毛发、口唇、结膜、耳廓、粪便颜色，气味等。

5、皮肤反应观察

（1）抗原攻击后2h、4h、6h、8h、24 h观察每点局部红肿的最大直径，求平均值。

（2）反应的程度分级根据《药理实验方法学》，Bena-cerraf氏标准分级，即：“+++”为3分：2 h或5 h明显充血、出血，呈融合状；24 h明显出血性变色。

“++”为2分：2 h或5 h中度充血出血，呈斑块状；24 h中度出血性变色。

“+”为1分：2 h或5 h轻度充血、出血；24 h轻度出血性变色。

“-”为0分：2 h或24 h无反应。

各组综合评分为皮肤反应评分的平均值。

6、皮肤组织病理学观察

大鼠皮肤4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，常规切片，苏木素-伊红（Hematoxylin andEosin，H&E）染色后于光学显微镜下观察组织病理变化。

7、血清中免疫相关指标检测

按试剂盒说明书，散射比浊法检测血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、循环免疫复合物（CIC）含量。

8、血清中炎症相关因子检测

分离血清，采用酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）的表达水平。

9、统计学方法

采用GraphPad Prism 8.0软件进行统计学分析，实验数据以平均值±标准误（x±s）表示，采用One-way Anova方法分析组间差异。以P < 0.05为差异有统计学意义。

背部皮肤反应程度评级采用Ridit分析。

实施例1

按照上述方法构建模型，给药完成后，观察各组大鼠的一般状态。

对照组的大鼠摄食、活动等状态均正常。

给药前，肌肉注射卵蛋白-弗氏完全佐剂和卵蛋白-弗氏不完全佐剂期间，模型组、白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠出现不同程度的精神萎靡、摄食下降、鼠毛蓬乱、软便等情况。在给药后，与模型组大鼠相比，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠活动量明显增加、摄食增加、大便逐步恢复正常，一般状态得到明显改善。

综上所述，白术内酯Ⅰ可改善过敏性紫癜大鼠的一般状态。

实施例2

按照上述的方法构建模型，给药完成后，进行背部斑点直径统计及皮肤反应程度评分。

与对照组大鼠相比，抗原攻击后2小时，模型组及白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠背部皮肤均未出现红肿现象。

抗原攻击后4小时，模型组大鼠背部出现明显红肿，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠可降低红肿直径，其中仅白术内酯Ⅰ高剂量组具有统计学差异（P < 0.05）。

抗原攻击后6小时，模型组大鼠背部斑点颜色明显加深，但局部斑点变小；与模型组大鼠相比白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠红肿程度降低，其中：白术内酯Ⅰ高剂量组红肿直径明显小于模型组（P < 0.05）。

抗原攻击后8小时，模型组大鼠背部斑点颜色持续增加，呈中度出血性变色，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠局部斑点直径增加，但均小于模型组。

抗原攻击后24小时，模型组大鼠背部呈中度出血性变色，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠呈轻度出血性变色，白术内酯Ⅰ中、高剂量组斑点直径明显小于模型组（P < 0.05或P < 0.01），结果见图1。提示白术内酯Ⅰ可降低过敏性紫癜大鼠背部皮肤斑点直径，并呈剂量依赖性。

抗原攻击后2小时或5小时，模型组大鼠背部皮肤中度充血、出血，呈斑块状；24小时轻度出血性变色。各给药组大鼠背部皮肤2小时或5小时轻度充血、出血，24小时轻度出血性变色，反应程度等级明显轻于模型组，并呈剂量依赖性（P < 0.05或P < 0.01）。结果见下表，24小时各组大鼠的皮肤斑点见图2。提示白术内酯Ⅰ可改善过敏性紫癜大鼠皮肤反应程度。

注：与对照组比较，^## P <0.01；与模型组比较，^* P <0.05，^** P <0.01。

综上所述：白术内酯Ⅰ可降低过敏性紫癜大鼠背部皮肤斑点直径，改善皮肤反应程度。

实施例3

按照上述的方法构建模型，给药完成后，进行皮肤组织病理学观察。

对照组大鼠表皮未见明显异常，结构完整，部分可见轻度增厚；鳞状上皮细胞形态结构正常、排列紧密；真皮层胶原纤维含量丰富，可见毛囊皮脂腺等附属器官，未见明显炎症。

与对照组相比，模型组大鼠表皮多见表皮层增厚，少量鳞状上皮细胞胞质空泡化，部分皮肤局部可见少量上皮细胞坏死及核碎裂，真皮层与皮下组织可见大量水肿，肥大细胞浸润，出血，并伴有细胞成分增多，静脉血管可见淤血扩张。

与模型组相比，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠部分可见表皮少量增厚，大鼠皮肤真皮层出现少量肥大细胞浸润，个别出现实质细胞坏死，核破裂，静脉血管淤血扩张、出血等情况较模型组明显减轻，结果见图3。

综上所述，白术内酯Ⅰ可减轻过敏性紫癜大鼠皮肤组织病理学损伤。

实施例4

按照上述的方法构建模型，给药完成后，进行血清中免疫相关指标检测。

研究表明：过敏性紫癜的发生与血清中IgA、IgG、CIC的水平相关。临床中过敏性紫癜的诱发因素会引起患者血清中IgA或IgG类免疫复合物升高，沉积于血管壁形成CIC，CIC无法清除，造成血管炎症。

与对照组相比，模型组的大鼠血清中IgA、IgG、CIC含量显著升高（P < 0.01）。

与模型组相比，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠血清中IgA、IgG、CIC的含量明显降低，并呈剂量依赖性（P < 0.05或P < 0.01）。结果见图4-6。

综上所述：白术内酯Ⅰ可降低过敏性紫癜大鼠血清中IgA、IgG、CIC的含量。

实施例5

按照上述的方法构建模型，给药完成后，进行血清中炎症相关因子检测。

与对照组相比，模型组大鼠血清中TNF-α及IL-6的含量显著升高（P < 0.01）。

与模型组相比，白术内酯Ⅰ低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组的大鼠血清中TNF-α及IL-6的含量明显减低，因此，白术内酯Ⅰ可降低血清中TNF-α及IL-6的含量，其中高剂量组降低效果最为显著（P < 0.01）。结果见图7,8。

综上所述：白术内酯Ⅰ可降低过敏性紫癜大鼠血清中炎症因子TNF-α及IL-6的含量。

针对实施例1-5综上所述：白术内酯Ⅰ可治疗缓解过敏性紫癜大鼠皮肤红肿、瘀斑、出血的症状，减少患处肥大细胞浸润，血管扩张，降低血清中免疫球蛋白，免疫复合物及炎症因子含量。

上面对本发明的实施方式做了详细说明。但是本发明并不限于上述实施方式，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。

Claims (6)

1.白术内酯Ⅰ作为唯一有效成分在制备用于治疗过敏性紫癜的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物由白术内酯Ⅰ和药物上能够接受的载体组成。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物以片剂、胶囊剂、口服液体剂或颗粒剂的形式存在。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述片剂为糖衣片。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述口服液体剂为混悬剂。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述颗粒剂为混悬型颗粒剂。