CN117321055A

CN117321055A - Sting(干扰素基因刺激剂)的调节剂

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Publication number: CN117321055A
Application number: CN202280036065.4A
Authority: CN
Inventors: K·S·加吉瓦拉; 许璨宇; M·贾拉伊; R·L·帕特曼; E·Y·芮; 孙建敏; M·J·怀瑟斯
Original assignee: Pfizer Corp SRL
Current assignee: Pfizer Corp SRL
Priority date: 2021-03-18
Filing date: 2022-03-15
Publication date: 2023-12-29

Abstract

本文提供了通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐、这些化合物的制备方法、含有这些化合物的组合物以及这些化合物作为STING(干扰素基因刺激剂)的调节剂的用途。

Description

STING(干扰素基因刺激剂)的调节剂

发明领域

本发明涉及式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的化合物和它们的药学上可接受的盐，包含这样的化合物或其盐的药物组合物，以及用作药物的化合物。本发明的化合物、盐和组合物可用于治疗或改善疾病或病症诸如炎性疾病和病症、变态反应性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病、异常细胞生长(包括癌症)，以及用作疫苗佐剂。

背景

先天免疫系统是第一道防线，其由模式识别受体(PRR)在检测到来自病原体的配体以及损伤有关的分子模式后引发。已经鉴定了越来越多的这些受体，它们包括双链DNA和被称作环状二核苷酸(CDN)的独特核酸的传感器。PRR的活化导致参与炎性应答的基因的上调，包括抑制病原体复制和促进适应性免疫的1型干扰素(也被称作IFN或INF)、促炎性细胞因子和趋化因子。

衔接蛋白STING(也被称作TMEM173)已被鉴定为响应于细胞溶质核酸的先天性免疫传感途径中的中心信号传递分子。STING对于对来自病原体的细胞溶质DNA或宿主来源的细胞溶质DNA的应答是至关重要的。响应于细胞溶质DNA而产生的CDN对STING的活化导致IRF3和NFκB途径的上调，从而导致干扰素β(INF-β)和其它细胞因子的诱导。G.N.Barber，“Sting:infection,inflammation and cancer,”Nat.Rev.Immun.,2015,15，第760页。

CDN最初被鉴定为负责控制原核细胞中的众多应答的细菌信使。细菌CDN(诸如c-二-GMP)为对称分子，其特征在于两个3’,5’磷酸二酯键连。最近已通过X-射线晶体学证实了细菌CDN对STING的直接活化(Burdette D.L.和Vance R.E.,Nature Immunology,2013:1419-26)。因此，细菌CDN作为潜在的疫苗佐剂引起了人们的兴趣(Libanova R.等人,Microbial Biotechnology 2012:5,168-176)。最近，已证明对细胞溶质DNA的应答包括通过一种被称为环状鸟嘌呤腺嘌呤合酶(cGAS)的酶产生内源性CDN，从而产生一种新的哺乳动物CDN信号传递分子，该分子被鉴定为环状鸟嘌呤腺嘌呤单磷酸(cGAMP)，其结合并活化STING。cGAMP与STING的相互作用也已通过X-射线晶体学进行了证实。与细菌CDN不同，cGAMP是一种不对称分子，其特征在于其混合的2’,5’和3’,5’磷酸二酯键连。与细菌CDN一样，cGAMP活化STING，从而导致1型干扰素(1型INF)的诱导。1型INF响应于入侵病原体的作用得到了充分证实。重组干扰素α(IFNα)是首个获批的生物治疗剂并且已成为病毒感染和癌症的重要疗法。还已知INF是免疫应答的有效调节剂，作用于免疫系统的细胞。

可以刺激先天性免疫应答(包括1型INF和其它细胞因子的活化)的小分子化合物的施用可成为治疗和预防包括病毒感染和癌症在内的人类疾病的重要策略。这类免疫调节策略具有鉴定化合物的潜能，所述化合物可用于治疗疾病和病症诸如炎性疾病和病症、变态反应性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病、异常细胞生长(包括癌症)，以及用作疫苗佐剂。

鉴于其在调节各种生物过程中的作用，STING仍然是用小分子调节的有吸引力的靶标。仍然需要鉴定结合STING的其它化合物。仍然需要鉴定活化STING的其它化合物。仍然需要鉴定具有足够的细胞渗透性的其它化合物。此外，仍然需要结合STING和/或活化STING并且可以用作治疗剂的化合物。

治疗剂的人生物利用度，包括例如治疗剂的人口服生物利用度，由诸如治疗剂的吸收、分布、代谢和排泄性质等因素决定。仍然需要鉴定结合STING和/或活化STING且生物可利用的化合物。仍然需要鉴定结合STING和/或活化STING且具有口服生物利用度的化合物。因此，仍然需要鉴定结合STING和/或活化STING且具有适当性质(诸如、但不限于溶解度、渗透性、吸收、药代动力学等)的化合物。

发明概述

本发明部分提供新的化合物及其药学上可接受的盐。这样的化合物在与人树突细胞(DC)一起温育后可以结合STING、活化STING和/或诱导1型INF和/或其它细胞因子和/或共刺激因子，从而可用于治疗或改善疾病或病症诸如炎性疾病和病症、变态反应性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病、异常细胞生长(包括癌症)，以及用作疫苗佐剂。

还提供了药物组合物和药物，其包含单独的或与其它治疗剂或姑息剂组合的本发明的化合物或盐。本发明还部分提供制备所述新的化合物、其盐和组合物的方法，以及使用前述物质的方法。

在一个方面，本发明提供了式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

代表在5元杂芳基环中的两个共轭双键；

X¹选自CH和N；

X²选自CH和N；

R¹选自C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)和C₁-C₂亚烷基-(环丁基)，所述C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)或C₁-C₂亚烷基-(环丁基)任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基和-OC₁-C₄烷基；

Z¹、Z²和Z³经过选择，使得：

Z¹是C，Z²是NR²，且Z³是CR⁴；或

Z¹是N，Z²是CR³，且Z³是CR⁴；或

Z¹是C，Z²是CR³，且Z³是NR²；

R²选自C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)和C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)，所述C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)或C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基；

R³选自卤素、羟基、-CN、-OC₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)和C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)，所述-OC₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)或C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基；

R⁴选自H、卤素、羟基、C₁-C₄烷基和-OC₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基或-OC₁-C₄烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素和羟基；

R⁵选自H、卤素、羟基、-CN、C₁-C₄烷基和-OC₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基或-OC₁-C₄烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素和羟基；且

R⁶选自C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)和C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)，所述C₁-C₄烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)或C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。

在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本文描述的式中的任一个的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一个方面，本发明提供了本文描述的式中的任一个的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药物。

在另一个方面，本发明提供了包括施用本文描述的式中的任一个的化合物或其药学上可接受的盐的治疗方法和用途。

在本发明中还体现了一种用于治疗哺乳动物中的异常细胞生长的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的本文描述的式中的任一个的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明的再其它实施方案包括这样的实施方案，其中提供了一种上调哺乳动物中的STING活性的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的如本文中所述的化合物或盐的步骤；和/或一种提高哺乳动物中的干扰素-β水平的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的如本文中所述的化合物或盐的步骤。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

本发明的再其它实施方案包括这样的实施方案，其中提供了一种活化哺乳动物中的STING的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的本文描述的化合物或盐的步骤。也提供了在哺乳动物中刺激先天性免疫应答的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的本文描述的化合物或盐的步骤。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

详细描述

除非另有说明，否则在本说明书和权利要求书中使用的以下术语具有以下讨论的含义。在本部分中定义的变量，诸如R、X、n等，仅供在本部分内参考，并且无意具有与可以在本定义部分之外使用的相同的含义。此外，本文定义的许多基团可以任选地被取代。在本定义部分中典型取代基的列举是示例性的，并且无意限制在本说明书和权利要求书中在其它地方定义的取代基。

本文中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代，除非另外指出。例如，“一个”取代基包括一个或多个取代基。

“烷氧基”是指-O-烷基，其中，除非另有定义，否则烷基优选是C₁-C₈、C₁-C₇、C₁-C₆、C₁-C₅、C₁-C₄、C₁-C₃、C₁-C₂或C₁烷基，并且可以表示为例如-OC₁-C₄烷基。

“烷基”是指包括直链和支链基团的饱和一价脂族烃基，除非另有定义，否则其具有1至20个碳原子(“C₁-C₂₀烷基”)，优选1至12个碳原子(“C₁-C₁₂烷基”)，更优选1至8个碳原子(“C₁-C₈烷基”)，或1至6个碳原子(“C₁-C₆烷基”)，或1至4个碳原子(“C₁-C₄烷基”)。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基(也被称作2-丙基)、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基等。烷基可以是被取代的或未被取代的。特别是，除非另外指出，否则典型取代基包括环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环族基团、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷基硫基、芳基硫基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、C-羧基、O-羧基、硝基、氧代、硫代(thioxo)、氨基和-NR^xR^y，其中R^x和R^y是例如氢、烷基、环烷基、芳基、羰基、乙酰基、磺酰基、三氟甲磺酰基和(结合时的)5或6元杂脂环族环。“卤代烷基”是指具有一个或多个卤素取代基的烷基。在某些实施方案中，卤代烷基具有1、2、3、4、5或6个卤素取代基。在某些实施方案中，卤代烷基具有1、2或3个卤素取代基。在某些实施方案中，卤代烷基是氟代烷基。

“亚烷基”是指具有指定数目的碳原子的二价烃基，其可以将两个其它基团连接在一起。在某些实施方案中，亚烷基是-(CH₂)_n-，其中n是1-8。在某些实施方案中，n是1-4。在某些实施方案中，n是1-2。在其中指定的情况下，亚烷基还可以被其它基团取代。典型的取代基包括本文描述为适用于烷基的相同基团。亚烷基的开放价不必位于链的相对末端。在亚烷基被描述为任选地被取代的情况下，取代基包括通常存在于如本文描述的烷基上的那些。例如，“C₁-C₂亚烷基”是指-CH₂-、-CH₂CH₂-或-CH(CH₃)-，所述亚烷基可以如本文所定义被取代或未被取代。

“氨基”是指-NH₂基团。

“氰基”是指-C≡N基团。氰基可以表示为-CN。

如在本文中互换使用的，术语“环烃基”或“碳环的”是指非芳族的、单环的、稠合的或桥连的二环或三环碳环基团，在某些实施方案中，其含有3-10个碳原子。本文中使用的环烃基可以任选地含有一个或两个双键。术语“环烃基”也包括螺环碳环基团，包括通过单个原子连接的多环系统。术语“C₃-C₁₀环烃基”、“C₃-C₇环烃基”、“C₃-C₆环烃基”、“C₃-C₅环烃基”、“C₃-C₄环烃基”和“C₅-C₇环烃基”分别含有3-10个、3-7个、3-6个、3-5个、3-4个和5-7个碳原子。环烃基包括、但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、八氢并环戊二烯基、八氢-1H-茚基、二环[2.2.1]庚烷基、二环[3.2.1]辛烷基、二环[5.2.0]壬烷基、金刚烷基、环己二烯基、金刚烷基、环庚烷基、环庚三烯基等。环烃基可以是被取代的或未被取代的。典型取代基包括本文描述为适用于烷基的相同基团。

“卤素”或前缀“卤代”是指氟、氯、溴和碘。在某些实施方案中，卤素或卤代是指氟或氯。在某些实施方案中，卤素或卤代是指氟。

术语“杂环基”、“杂环的”或“杂脂环族”可以在本文中互换使用以表示非芳族的、单环的、饱和的或部分不饱和的、稠合的或桥连的二环或三环或螺环基团，在某些实施方案中，其含有共计3-10个环原子、3-7个环原子或4-6个环原子，其中1个、1-2个、1-3个或1-4个环原子是杂原子。所述杂原子独立地选自氮、氧和硫，且其中硫原子可以任选地被一个或两个氧原子氧化，其余环原子为碳，前提条件是，这样的环系统不可以含有两个邻近的氧原子或两个邻近的硫原子。杂环也可以在任何可利用的碳原子处被氧代(＝O)基团取代。所述环也可以具有一个或多个双键。杂环可以稠合至一个或多个其它杂环或碳环，所述稠合环可以是饱和的、部分不饱和的或芳族的。此外，这样的基团可以通过碳原子或杂原子(如果可能的话)键合至本文中公开的实施方案的化合物的其余部分。杂环基团的例子包括、但不限于：

所述杂环基可以任选地被取代。典型取代基包括本文描述为适合用于烷基、芳基或杂芳基的那些。另外，环N原子可以任选地被适合用于胺的基团(例如烷基、酰基、氨基甲酰基、磺酰基取代基)取代。

“羟基”是指-OH基团。

“氧代”是指═O基团。

“硫代”是指═S基团。

“芳基”或“芳族”是指具有众所周知的芳香性特征的任选地被取代的单环的、联芳基或稠合的二环或多环环系统，其中至少一个环含有完全共轭的π-电子系统。通常芳基含有6-20个碳原子(“C₆-C₂₀芳基”)作为环成员，优选6-14个碳原子(“C₆-C₁₄芳基”)或更优选6-12个碳原子(“C₆-C₁₂芳基”)。稠合的芳基可以包括与另一个芳基环稠合的或与饱和的或部分不饱和的碳环或杂环稠合的芳基环(例如，苯环)。与这样的稠合的芳基环系统上的基础分子的连接点可以是环系统的芳族部分的C原子或非芳族部分的C或N原子。芳基的例子包括、但不限于苯基、联苯、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基和四氢萘基。所述芳基可以是未被取代的或被取代的，如在本文中进一步描述的。

类似地，“杂芳基”或“杂芳族”是指具有众所周知的芳香性特征的单环的、杂联芳基或稠合的二环或多环环系统，其含有指定数目的环原子并且包括至少一个选自N、O和S的杂原子作为芳族环中的环成员。杂原子的包含允许5元环以及6元环的芳香性。通常，杂芳基含有5-20个环原子(“5-20元杂芳基”)，优选5-14个环原子(“5-14元杂芳基”)，和更优选5-12个环原子(“5-12元杂芳基”)。杂芳基环通过杂芳族环的环原子连接至基础分子，从而保持芳香性。因此，6元杂芳基环可以通过环C原子连接至基础分子，而5元杂芳基环可以通过环C或N原子连接至基础分子。未被取代的杂芳基的例子经常包括、但不限于吡咯、呋喃、噻吩、吡唑、咪唑、异噁唑、噁唑、异噻唑、噻唑、三唑、噁二唑、噻二唑、四唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、苯并咪唑、吲唑、喹啉、异喹啉、嘌呤、三嗪、萘啶和咔唑。在某些实施方案中，5或6元杂芳基选自吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、异噻唑基、噻唑基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和哒嗪基环。所述杂芳基可以是未被取代的或被取代的，如在本文中进一步描述的。

单环杂芳基的示例性例子包括、但不限于：

稠合环杂芳基的示例性例子包括、但不限于：

本文描述为任选地被取代的芳基和杂芳基部分可以被一个或多个取代基取代，所述取代基独立地进行选择，除非另外指出。取代基的总数可以等于芳基、杂芳基或杂环基部分上的氢原子的总数，只要这样的取代具有化学意义且在芳基和杂芳基环的情况下保持芳香性。任选地被取代的芳基、杂芳基或杂环基通常含有1至5个任选取代基，在某些实施方案中1至4个任选取代基，在某些实施方案中1至3个任选取代基，并在某些其它的实施方案中1至2个任选取代基。典型取代基包括烷基、芳基、杂芳基、杂脂环族基团、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷基硫基、芳基硫基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-羧基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、氧代、硫代和氨基。

“任选的”或“任选地”意指随后所描述的事件或情况可以但不必须发生，并且该描述包括其中事件或情况发生的情形，以及其中事件或情况不发生的情形。

术语“任选地被取代的”和“被取代的或未被取代的”可以互换地用于指示，所描述的特定基团可以不具有非氢取代基(即，未被取代的)，或者所述基团可以具有一个或多个非氢取代基(即，被取代)。如果未另行规定，则可以存在的取代基的总数等于在所描述的基团的未取代形式上存在的H原子的数目，只要这样的取代产生化学意义。在任选的取代基通过双键连接(诸如氧代(＝O)取代基)的情况下，所述基团占据两个可用化合价，使得可以被包括的其它取代基的总数减少两个。在任选的取代基独立地选自备选列表的情况下，所选择的基团可以相同或不同。例如，“任选地被烷基取代的杂环基团”表示，烷基可以但不必须存在，并且该描述包括其中杂环基团被烷基取代的情形以及杂环基团未被烷基取代的情形。在某些实施方案中，所述特定基团被1-6个非氢取代基取代。在某些实施方案中，所述特定基团被1-4个非氢取代基取代。在某些实施方案中，所述特定基团被1-2个非氢取代基取代。在某些实施方案中，任选的取代基独立地选自D、卤素、-CN、-NH₂、-OH、＝O、-NH(CH₃)、-N(CH₃)₂、-NH(环丙基)、-CH₃、-CH₂CH₃、-CF₃、-OCH₃和-OCF₃。

在一个方面，本发明提供了式(A)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

代表在5元杂芳基环中的两个共轭双键；

X¹选自CH和N；

X²选自CH和N；

R¹选自C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)和C₁-C₂亚烷基-(环丁基)，所述C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)或C₁-C₂亚烷基-(环丁基)任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基和-OC₁-C₆烷基；

Z¹、Z²和Z³经过选择，使得：

Z¹是C，Z²是NR²，且Z³是CR⁴；或

Z¹是N，Z²是CR³，且Z³是CR⁴；或

Z¹是C，Z²是CR³，且Z³是NR²；

Z⁴是N或NR⁷；

R²选自C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)和C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)，所述C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)或C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、氧代、氨基、-CN、-OC₁-C₆烷基和-OC₁-C₆卤代烷基；

R³选自H、卤素、羟基、-CN、-OC₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)和C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)，所述-OC₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)或C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₆烷基；

R⁴选自H、卤素、羟基、C₁-C₆烷基和-OC₁-C₆烷基，所述C₁-C₆烷基或-OC₁-C₆烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素和羟基；

R⁵选自H、卤素、羟基、-CN、C₁-C₆烷基和-OC₁-C₆烷基，所述C₁-C₆烷基或-OC₁-C₆烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素和羟基；

R⁶选自C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)和C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)，所述C₁-C₆烷基、环丙基、环丁基、氧杂环丁基、C₁-C₂亚烷基-(环丙基)、C₁-C₂亚烷基-(环丁基)或C₁-C₂亚烷基-(氧杂环丁基)任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、苯基、-CN和-OC₁-C₆烷基；且

R⁷是H或C₁-C₆烷基，所述C₁-C₆烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基和-OC₁-C₆烷基。

在某些实施方案中，Z⁴是N。在某些实施方案中，Z⁴是NR⁷。在某些实施方案中，R⁷是H。在某些实施方案中，R⁷是C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R⁷是-CH₃。在某些实施方案中，R⁷是-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R⁷是-CH₂F。在某些实施方案中，R⁷是-CH₂CF₃。

在另一个方面，本发明提供了式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

代表在5元杂芳基环中的两个共轭双键；

X¹选自CH和N；

X²选自CH和N；

Z¹、Z²和Z³经过选择，使得：

Z¹是C，Z²是NR²，且Z³是CR⁴；或

Z¹是N，Z²是CR³，且Z³是CR⁴；或

Z¹是C，Z²是CR³，且Z³是NR²；

在一个实施方案中，本发明提供了式(II)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

代表在5元杂芳基环中的两个共轭双键；且其中R¹、Z¹、Z²、Z³、R²、R³、R⁴、R⁵和R⁶如关于式(I)所定义。

在一个实施方案中，本发明提供了式(III)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶如关于式(I)所定义。

在一个实施方案中，本发明提供了式(IV)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R³、R⁴、R⁵和R⁶如关于式(I)所定义。

在一个实施方案中，本发明提供了式(V)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²、R³、R⁵和R⁶如关于式(I)所定义。

在一个实施方案中，本发明提供了式(VI)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

在一个实施方案中，本发明提供了式(VII)的化合物：

在一个实施方案中，本发明提供了式(VIII)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

在一个实施方案中，本发明提供了式(IX)的化合物：

在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R¹是C₁-C₄烷基，例如-CH₃或-CH₂CH₃。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R¹选自-CH₃和-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R¹是-CH₃。在某些实施方案中，R¹是-CH₂CH₃。

在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R²选自C₁-C₄烷基和C₁-C₂亚烷基-(环丙基)，所述C₁-C₄烷基或C₁-C₂亚烷基-(环丙基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R²是C₁-C₄烷基，例如-CH₃、-CH₂CH₃或-(CH₂)₂CH₃，所述C₁-C₄烷基任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基，以形成例如-CH₂CF₃、-(CH₂)₂CF₃、-(CH₂)₃OH、-(CH₂)₂OCH₃或-(CH₂)₃OCH₃。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R²是C₁-C₂亚烷基-(环丙基)，例如-CH₂(环丙基)，所述C₁-C₂亚烷基-(环丙基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R²选自-CH₃、-CH₂CH₃、-(CH₂)₂CH₃、-CH₂CF₃、-(CH₂)₂CF₃、-(CH₂)₃OH、-(CH₂)₂OCH₃、-(CH₂)₃OCH₃和-CH₂(环丙基)。在某些实施方案中，R²是-CH₃。在某些实施方案中，R²是-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₂CH₃。在某些实施方案中，R²是-CH₂CF₃。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₂CF₃。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₃OH。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₂OCH₃。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₃OCH₃。在某些实施方案中，R²是-CH₂(环丙基)。

在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R³是C₁-C₄烷基，例如-CH₂CH₃，所述C₁-C₄烷基任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。

在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R⁴选自H和C₁-C₄烷基，例如-CH₃，所述C₁-C₄烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素和羟基。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R⁴选自H和-CH₃。在某些实施方案中，R⁴是H。在某些实施方案中，R⁴是-CH₃。

在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R⁵选自H、卤素，例如氟或氯，和羟基。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R⁵选自H、氯和羟基。在某些实施方案中，R⁵是H。在某些实施方案中，R⁵是氯。在某些实施方案中，R⁵是羟基。

在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R⁶选自C₁-C₄烷基，例如-CH₃、-CH₂CH₃或-CH(CH₃)₂，和环丙基，所述C₁-C₄烷基或环丙基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素，例如氟，以形成例如-CH₂CHF₂、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。在本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐的一个实施方案中，R⁶选自-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CHF₂、-CH(CH₃)₂和环丙基。在某些实施方案中，R⁶是-CH₃。在某些实施方案中，R⁶是-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R⁶是-CH₂CHF₂。在某些实施方案中，R⁶是-CH(CH₃)₂。在某些实施方案中，R⁶是环丙基。

在另一个方面，本发明提供了式(III-A)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

R¹是C₁-C₄烷基或C₁-C₄氟代烷基；

R²是C₁-C₄烷基或(C₁-C₄亚烷基)-OC₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基或(C₁-C₄亚烷基)-OC₁-C₄烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、氧代和羟基；

R⁴是C₁-C₄烷基；

R⁵是H；且

R⁶是C₁-C₄烷基。

在式(III-A)的化合物的某些实施方案中，R¹是C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R¹是C₁-C₂烷基。在某些实施方案中，R¹是C₁-C₄氟代烷基。在某些实施方案中，R¹是C₁-C₂氟代烷基。在某些实施方案中，R¹是-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂F、-CHF₂、-CF₃、-CHFCH₃、-CF₂CH₃、-CH₂CH₂F、-CH₂CHF₂或-CH₂CF₃。在某些实施方案中，R¹是-CH₃、-CH₂CH₃或-CH₂F。在某些实施方案中，R¹是-CH₃。在某些实施方案中，R¹是-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R¹是-CH₂F。在某些实施方案中，R²是C₁-C₄烷基。在某些实施方案中，R²是C₁-C₂烷基。在某些实施方案中，R²是(C₁-C₄亚烷基)-OC₁-C₂烷基。在某些实施方案中，R²是-CH₃、-CH₂CH₃、-(CH₂)₂OCH₃、-(CH₂)₃OCH₃、-(CH₂)₂OCH₂CH₃或-(CH₂)₃OCH₂CH₃。在某些实施方案中，R²是-CH₃、-CH₂CH₃、-(CH₂)₂OCH₃或-(CH₂)₃OCH₃。在某些实施方案中，R²是-CH₃。在某些实施方案中，R²是-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₂OCH₃。在某些实施方案中，R²是-(CH₂)₃OCH₃。在某些实施方案中，R⁴是C₁-C₃烷基。在某些实施方案中，R⁴是C₁-C₂烷基。在某些实施方案中，R⁴是-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₃或-CH(CH₃)₂。在某些实施方案中，R⁴是-CH₃或-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R⁴是-CH₃。在某些实施方案中，R⁴是-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R⁶是C₁-C₃烷基。在某些实施方案中，R⁶是C₁-C₂烷基。在某些实施方案中，R⁶是-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₃或-CH(CH₃)₂。在某些实施方案中，R⁶是-CH₃或-CH₂CH₃。在某些实施方案中，R⁶是-CH₃。在某些实施方案中，R⁶是-CH₂CH₃。

本发明的其它实施方案包括选自以下的化合物：

或其中任一种的药学上可接受的盐。

本发明的其它实施方案包括选自以下的化合物：

或其中任一种的药学上可接受的盐。

用于合成本发明化合物的通用方案可以在本文实施例部分中找到。

除非另外指出，否则在本文中对本发明的化合物的所有提及包括对其盐、溶剂化物、水合物和复合物的提及，以及对其盐的溶剂化物、水合物和复合物的提及，包括其互变异构体、多晶型物、立体异构体和同位素标记的形式。

除非另有说明，否则本文中使用的术语“药学上可接受的盐”包括可以存在于本文公开的各式的化合物中的酸性或碱性基团的盐。

例如，碱性性质的本发明的化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。虽然这样的盐对于向动物施用而言必须是药学上可接受的，但是在实践中经常需要在最初将本发明的化合物从反应混合物中分离为药学上不可接受的盐，然后将药学上不可接受的盐通过用碱性试剂处理简单地转化回游离碱化合物，随后将后者游离碱转化为药学上可接受的酸加成盐。通过在水性溶剂介质中或在合适的有机溶剂如甲醇或乙醇中用基本当量的所选无机酸或有机酸处理碱性化合物，可以制备本发明的碱性化合物的酸加成盐。蒸发溶剂后，得到所需的固体盐。通过向溶液中加入适当的无机酸或有机酸，也可以从游离碱在有机溶剂中的溶液中沉淀出所需的酸式盐。

可用于制备这样的碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒的酸加成盐的那些，所述盐即含有药理学上可接受的阴离子的盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐[即，1,1’-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。

盐的例子包括、但不限于乙酸盐、丙烯酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐(诸如氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐和甲氧基苯甲酸盐)、碳酸氢盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁炔-1,4-二酸盐、依地酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、己酸盐、辛酸盐、克拉维酸盐、柠檬酸盐、癸酸盐、二盐酸盐、磷酸二氢盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、乙基琥珀酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、乙醇酰基对氨基苯胂酸盐、庚酸盐、己炔-1,6-二酸盐、己基间苯二酚盐、哈胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、γ-羟基丁酸盐、碘化物、异丁酸盐、异硫代硫酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、磷酸一氢盐、粘酸盐、萘磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、扑酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、苯基乙酸盐、苯基丁酸盐、苯基丙酸盐、邻苯二甲酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙磺酸盐、丙酸盐、丙炔酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式醋酸盐、辛二酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐、亚硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、triethiodode和戊酸盐。

合适的盐的示例性例子包括衍生自氨基酸诸如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及环胺诸如哌啶、吗啉和哌嗪的有机盐，以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

除了上述酸之外，包括碱性部分如氨基基团的本发明的化合物可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。

那些在性质上呈酸性的本发明的化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。这样的盐的例子包括碱金属或碱土金属盐，特别是钠盐和钾盐。这些盐都是通过常规技术制备。用作试剂以制备本发明的药学上可接受的碱盐的化学碱是与本文中的酸性化合物形成无毒碱盐的那些。这些盐可以通过任何合适的方法制备，例如，用无机或有机碱诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离酸。也可以如下制备这些盐：用含有所需的药理学上可接受的阳离子的水溶液处理对应的酸性化合物，然后优选在减压下将所得溶液蒸发至干燥。可替换地，它们也可以如下制备：将酸性化合物的低级烷醇溶液和所需的碱金属烷醇盐混合在一起，然后以与前面相同的方式将所得溶液蒸发至干燥。在某些实施方案中，采用化学计量的量的试剂，以便确保反应完全和所需终产物的最大收率。

可以用作试剂以制备酸性性质的本发明化合物的药学上可接受的碱盐的化学碱是与这样的化合物形成无毒碱盐的那些。这样的无毒碱盐包括、但不限于衍生自这样的药理学上可接受的阳离子诸如碱金属阳离子(例如，钾和钠)和碱土金属阳离子(例如，钙和镁)的那些，铵或水溶性胺加成盐诸如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)，和低级烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其它碱盐。

也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。

关于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth的Handbook of PharmaceuticalSalts:Properties,Selection,and Use(Wiley-VCH,2002)。制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法是本领域技术人员已知的。

根据本领域技术人员已知的方法可以制备本发明的盐。通过将化合物和视情况所需的酸或碱的溶液混合在一起，可以容易地制备本发明的化合物的药学上可接受的盐。盐可以从溶液中沉淀并可以通过过滤收集或可以通过蒸发溶剂来回收。盐中的离子化程度可能从完全离子化到几乎未离子化不等。

本领域技术人员将理解，通过用化学计量过量的适当酸处理，可以将具有碱性官能团的游离碱形式的本发明的化合物转化为酸加成盐。通过通常在水性溶剂存在下和在约0℃至约100℃的室温用化学计量过量的合适的碱(诸如碳酸钾或氢氧化钠)处理，可以将本发明的化合物的酸加成盐再转化成相应的游离碱。可以通过常规方式分离游离碱形式，例如用有机溶剂萃取。此外，通过利用盐的差别溶解度、酸的挥发性或酸性，或通过用适当负载的离子交换树脂处理，可以交换本发明的化合物的酸加成盐。例如，本发明的化合物的盐与略微化学计量过量的pK低于起始盐的酸组分的酸反应可能影响交换。通常在约0℃至用作该程序的介质的溶剂的沸点之间的温度进行这种转化。与碱加成盐的交换是可能的，通常通过游离碱形式的中间体。

本发明的化合物可以以非溶剂化和溶剂化的形式存在。当溶剂或水紧密结合时，复合物将具有明确的化学计量学，与湿度无关。但是，当溶剂或水弱结合时，如在通道溶剂化物和吸湿性化合物中，水/溶剂含量将取决于湿度和干燥条件。在这样的情况下，非化学计量学可能存在。术语“溶剂化物”在本文中用于描述包含本发明的化合物和一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如，乙醇)的分子复合物。当溶剂是水时，术语“水合物”可以任选地与术语“溶剂化物”互换使用。根据本发明的药学上可接受的溶剂化物包括水合物和溶剂化物，其中结晶的溶剂可以被同位素替代，例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

在本发明范围内还包括复合物，诸如笼形化合物、药物-宿主包合复合物，其中，与上述溶剂化物相反，药物和宿主以化学计量的或非化学计量的量存在。还包括含有可为化学计量的或非化学计量的量的两种或更多种有机和/或无机组分的药物的复合物。所得复合物可以是离子化的、部分离子化的或非离子化的。关于这样的复合物的综述，参见Haleblian的J Pharm Sci,64(8),1269-1288(1975年8月)，其公开内容通过引用整体并入本文。

本发明化合物的多晶型物、前药和异构体(包括光学异构体、几何异构体和互变异构体)也在本发明的范围内。

本发明化合物的衍生物本身可能几乎没有或没有药理学活性，但是当施用给受试者或患者时，可以转化为本发明的化合物，例如，通过水解裂解。这样的衍生物被称为“前药”。关于前药的应用的进一步信息，可以参见：‘Pro-drugs as Novel Delivery Systems，第14卷,ACS Symposium Series(T Higuchi和W Stella)以及‘Bioreversible Carriersin Drug Design’,Pergamon Press,1987(E B Roche编,American PharmaceuticalAssociation)，其公开内容通过引用整体并入本文。

例如，可以如下生产根据本发明的前药：用本领域技术人员已知为‘前药部分’的某些部分替换在本发明的化合物中存在的适当官能团，所述前药部分如例如在HBundgaard的“Design of Prodrugs”(Elsevier,1985)中描述，其公开内容通过引用整体并入本文。

前药的一些非限制性例子包括：

(i)在化合物含有羧酸官能团-(COOH)的情况下，为其酯，例如，用(C₁-C₈)烷基替代氢；

(ii)在化合物含有醇官能团(-OH)的情况下，为其醚，例如，用(C₁-C₆)烷酰氧基甲基替代氢；和

(iii)在化合物含有伯或仲氨基官能团(-NH₂或-NHR，其中R≠H)的情况下，为其酰胺，例如，用适当的代谢不稳定的基团(诸如酰胺、氨基甲酸酯、脲、膦酸酯、磺酸酯等)替代一个或两个氢。

可以在前述参考文献中找到根据前述实例的替代基团的其它例子和其它前药类型的例子。

最后，本发明的某些化合物本身可以充当本发明的其它化合物的前药。

含有一个或多个不对称碳和/或磷原子的本发明化合物可以作为两种或更多种立体异构体存在。在本文中使用实线、实心楔形或点状楔形可以描绘本发明的化合物的碳-碳键。用实线描绘与不对称碳原子的键意指包括在该碳原子处的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。用实心或点状楔形描绘与不对称碳原子的键意指仅意图包括所示的立体异构体。本发明的化合物可能含有超过一个的不对称原子。在根据本发明的化合物具有至少一个手性中心的情况下，它们可以相应地作为对映异构体存在。在化合物具有两个或更多个手性中心的情况下，它们可另外作为非对映异构体存在。

具有手性中心的本发明的化合物可以作为立体异构体诸如外消旋体、对映异构体或非对映异构体存在。

在本发明的范围内包括本发明的化合物的所有立体异构体、几何异构体和互变异构形式，包括表现出超过一种类型的异构现象的化合物、及其一种或多种的混合物。本文各式的化合物的立体异构体可以包括本发明的化合物的顺式和反式(或Z/E)异构体、光学异构体诸如(R)和(S)对映异构体、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、阻转异构体、构象异构体和互变异构体，包括表现出超过一种类型的异构现象的化合物；及其混合物(诸如外消旋体和非对映体对)。还包括酸加成盐或碱盐，其中抗衡离子是光学活性的，例如，D-乳酸或L-赖氨酸，或外消旋的，例如，DL-酒石酸或DL-精氨酸。

当外消旋体结晶时，可能有两种不同类型的晶体。第一类是上面提到的外消旋化合物(真正的外消旋体)，其中产生含有等摩尔量的两种对映异构体的一种均一形式的晶体。第二类是外消旋混合物或混合体，其中两种形式的晶体以等摩尔量产生，各自包含单一的对映异构体。

本发明的化合物可以表现出互变异构现象和结构异构现象。例如，所述化合物可以以数种互变异构形式存在，包括烯醇和亚胺形式、酮和烯胺形式和几何异构体及其混合物。所有这样的互变异构形式被包括在本发明的化合物的范围内。互变异构体作为在溶液中的互变异构集合的混合物存在。在固体形式中，通常一种互变异构体占优势。即使可能描述一种互变异构体，但本发明包括所提供的各式的化合物的所有互变异构体。

此外，本发明的一些化合物可以形成阻转异构体(例如，取代的联芳)。阻转异构体是构象立体异构体，其在围绕分子中单键的旋转被阻止或大大减慢时发生，所述阻止或大大减慢归因于与分子的其它部分的空间相互作用以及在单键两端的取代基不对称。阻转异构体的互变是足够慢的以允许在预定条件下分开和分离。通过形成手性轴的一个或多个键的自由旋转的空间位阻，可以确定对热外消旋化的能垒。

在本发明的化合物含有烯基或亚烯基的情况下，可能存在几何顺/反(或Z/E)异构体。通过本领域技术人员众所周知的常规技术，例如，色谱法和分步结晶，可以分离顺式/反式异构体。

用于制备/分离各对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯的前体手性合成，或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)或超临界流体色谱法(SFC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。

可替换地，外消旋体(或外消旋的前体)可以与合适的光学活性化合物例如醇反应，或在化合物含有酸性或碱性部分的情况下与酸或碱诸如酒石酸或1-苯基乙胺反应。得到的非对映异构体混合物可以通过色谱法和/或分步结晶分离，并且非对映异构体之一或两者通过本领域技术人员众所周知的方式转化成对应的纯的对映异构体。

通过本领域技术人员已知的常规技术，可以分离立体异构体混合体；参见，例如，EL Eliel的“Stereochemistry of Organic Compounds”(Wiley,New York,1994)，其公开内容通过引用整体并入本文。

本发明还包括同位素标记的本发明的化合物，其与所提供的各式之一中所示的那些相同，除了一个或多个原子被原子质量或质量数与通常在自然界中发现的原子质量或质量数不同的原子替换。

通过本领域技术人员已知的常规技术，或通过类似于本文描述的那些的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替否则会采用的未标记的试剂，通常可以制备同位素标记的本发明的化合物。

适用于包含在本发明化合物中的同位素的例子包括以下元素的同位素：氢，诸如²H和³H，碳，诸如¹¹C、¹³C和¹⁴C，氯，诸如³⁶Cl，氟，诸如¹⁸F，碘，诸如¹²³I和¹²⁵I，氮，诸如¹³N和¹⁵N，氧，诸如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O，磷，诸如³²P，和硫，诸如³⁵S。某些同位素标记的本发明的化合物，例如，掺入放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。考虑到它们易于掺入和检测手段方便，放射性同位素氚(³H)和碳-14(¹⁴C)对于该目的是特别有用的。用较重同位素诸如氘(²H)替代可能提供某些由更大代谢稳定性带来的治疗优点，例如，增加的体内半衰期或减小的剂量需求，并因此在某些情况下可能是优选的。用发射正电子的同位素(诸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N)替代可用于正电子发射断层摄影术(PET)研究中以检查底物受体占有率。

意图用于药物用途的本发明的化合物可以作为结晶或无定形产物或其混合物施用。它们可以如下获得：例如，通过沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥的方法，以固体栓、粉末或薄膜的形式。微波或射频干燥可以用于该目的。

药物组合物和施用途径

在一个实施方案中，本发明涉及药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。

“药学上可接受的赋形剂”是指将惰性物质添加到药物组合物中以进一步促进化合物的施用。赋形剂的非限制性例子包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。赋形剂的选择在较大程度上取决于诸如以下因素：特定施用模式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响和剂型的性质。

“药物组合物”是指本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或前药中的一种或多种与其它化学组分(诸如生理学上/药学上可接受的载体和赋形剂)的混合物。药物组合物的目的是便于将化合物施用给生物体。

本文中使用的“生理学上/药学上可接受的载体”是指不会对生物体造成明显刺激并且不会消除所施用的化合物的生物活性和性质的载体或稀释剂。

适用于递送本发明的化合物的药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。这样的组合物及其制备方法可以参见例如‘Remington’sPharmaceutical Sciences’，第19版(Mack Publishing Company,1995)，其公开内容通过引用整体并入本文。

所述药学上可接受的载体可以包含任何常规药物载体或赋形剂。载体和/或赋形剂的选择在很大程度上取决于诸如以下因素：特定施用模式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响、以及剂型的性质。

合适的药用载体包括惰性稀释剂或填充剂、水和各种有机溶剂(诸如水合物和溶剂化物)。如果需要的话，药物组合物可以含有另外的成分，诸如调味剂、粘合剂、赋形剂等。因此，对于口服施用，含有各种赋形剂(如柠檬酸)的片剂可以与各种崩解剂(如淀粉、海藻酸和某些复合硅酸盐)以及与粘合剂(如蔗糖、明胶和阿拉伯胶)一起使用。赋形剂的非限制性例子包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。另外，润滑剂诸如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠和滑石经常可用于压片目的。也可以在软和硬填充明胶胶囊中使用类似类型的固体组合物。因此，材料的非限制性例子包括乳糖或奶糖和高分子量聚乙二醇。当需要水性混悬液或酏剂用于口服施用时，其中的活性化合物可以与以下试剂组合：各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料，和如果需要的话，乳化剂或助悬剂，以及稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇、甘油或它们的组合。

在一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施方案中，所述药物组合物包含两种或更多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。任选地，这样的组合物可以包含如本文中所述的化合物或盐，其为抗体-药物缀合物的组分；和/或可以包含如本文所述的化合物，其为基于颗粒的递送系统的组分。

在一个实施方案中，可以口服施用本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。口服施用可以包括吞咽，使得所述化合物进入胃肠道；或者可以采用含服或舌下施用，使得所述化合物从口腔直接进入血流。因此，所述药物组合物可以是例如适合口服施用的形式，如片剂、胶囊剂、丸剂、粉末、持续释放制剂、溶液或混悬液。

适用于口服施用的制剂包括固体制剂诸如片剂、含有微粒、液体或粉末的胶囊剂、锭剂(包括液体填充的锭剂)、咀嚼剂、多颗粒和纳米颗粒、凝胶、固溶体、脂质体、膜剂(包括粘膜粘着性膜剂)、胚珠样制剂(ovules)、喷雾剂和液体制剂。

液体制剂包括混悬液、溶液、糖浆剂和酏剂。这样的制剂可以用作软或硬胶囊剂中的填充剂，并且通常包括载体，例如，水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂还可以通过将固体(例如得自药囊)重构来制备。

本发明的化合物也可以以快速溶解、快速崩解剂型使用，诸如在Liang和Chen(2001)的Expert Opinion in Therapeutic Patents，11(6)，981-986中描述的那些，其公开内容通过引用整体并入本文。

对于片剂剂型，活性剂可以占所述剂型的1重量％至80重量％，更通常占所述剂型的5重量％至60重量％。除活性剂外，片剂通常含有崩解剂。崩解剂的例子包括淀粉羟乙酸钠、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基取代的羟丙基纤维素、淀粉、预胶化淀粉和海藻酸钠。通常，崩解剂可以占所述剂型的1重量％至25重量％，且在某些实施方案中为5重量％至20重量％。

通常使用粘合剂给片剂制剂赋予粘合性。合适的粘合剂包括微晶纤维素、明胶、糖、聚乙二醇、天然的和合成的树胶、聚乙烯吡咯烷酮、预胶化淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。片剂还可以含有稀释剂，诸如乳糖(一水合物、喷雾干燥的一水合物、无水乳糖等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素、淀粉和磷酸氢钙二水合物。

片剂还可任选地包括表面活性剂，诸如月桂基硫酸钠和聚山梨酯80，以及助流剂，例如二氧化硅和滑石。当存在时，表面活性剂的量通常为片剂的0.2重量％至5重量％，助流剂的量通常为片剂的0.2重量％至1重量％。

片剂通常还含有润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂基富马酸钠，以及硬脂酸镁与月桂基硫酸钠的混合物。润滑剂通常以片剂的0.25重量％至10重量％且在某些实施方案中0.5重量％至3重量％的量存在。

其它常规成分包括抗氧化剂、着色剂、调味剂、防腐剂和掩味剂。

示例性的片剂可以含有最多约80重量％活性剂，约10重量％至约90重量％的粘合剂，约0重量％至约85重量％的稀释剂，约2重量％至约10重量％的崩解剂，和约0.25重量％至约10重量％的润滑剂。

片剂掺合物可以直接或通过辊压缩以形成片剂。可替换地，可以将片剂掺合物或掺合物的一部分湿法、干法或熔融造粒、熔融凝固或挤出，然后压片。最终制剂可以包括一个或多个层，并可包衣或不包衣；或包囊。

在H.Lieberman和L.Lachman的“Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets，Vol.1”，Marcel Dekker,N.Y.,N.Y.,1980(ISBN 0-8247-6918-X)中详细讨论了片剂的配制，其公开内容通过引用整体并入本文。

用于口服施用的固体制剂可以配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。

合适的调释制剂描述于美国专利号6,106,864中。其它合适的释放技术(诸如高能量分散体和渗透和包衣颗粒)的细节可以参见Verma等人，Pharmaceutical TechnologyOn-line，25(2),1-14(2001)。在WO 00/35298中描述了使用咀嚼胶(chewing gum)来实现控释。这些参考文献的公开内容通过引用整体并入本文。

本发明的化合物还可以直接施用进血流、肌肉或内脏器官。用于胃肠外施用的合适方式包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内、膀胱内(例如，膀胱)、皮下和肿瘤内。胃肠外施用的合适装置包括针(包括显微针)式注射器、无针注射器和输注技术。用于胃肠外施用的合适制剂包括但不限于无菌的溶液、混悬液或乳剂。

在一个实施方案中，可以静脉内施用本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，可以膀胱内施用本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

胃肠外制剂通常是可以含有赋形剂诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(例如至3-9的pH)的水溶液，但是，对于一些应用，它们可以更适当地配制为无菌的非水性溶液或配制为要与合适的媒介物(诸如无菌的、无热原的水)结合使用的干燥形式。

使用本领域技术人员众所周知的标准制药技术可以容易地完成胃肠外制剂在无菌条件下的制备，例如，通过冻干法。

通过使用适当的制剂技术，诸如掺入增溶剂，可能增加用于制备胃肠外溶液的本发明的化合物的溶解度。

可以将用于胃肠外施用的制剂配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。因此，本发明的化合物可能配制成固体、半固体或触变液体以用于作为植入的贮库施用，所述贮库提供活性化合物的调释。这样的制剂的例子包括药物涂覆的支架和PGLA微球。

示例性的胃肠外施用形式包括活性化合物在无菌水溶液(例如，丙二醇或右旋糖水溶液)中的溶液或混悬液。如果需要的话，可以适当地缓冲这样的剂型。

本发明的化合物还可能局部施用于皮肤或粘膜，即，通过皮肤施用或透皮施用。用于此目的的典型制剂包括凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、乳膏剂、软膏剂、扑粉剂、敷料、泡沫、薄膜、皮肤贴剂、糯米纸囊剂、植入物、海绵、纤维、绷带和微乳剂。也可以使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体矿脂、白矿脂、甘油、聚乙二醇和丙二醇。可以掺入穿透促进剂；参见，例如，Finnin和Morgan的J Pharm Sci,88(10),955-958(1999年10月)。其它局部施用方式包括通过电穿孔、离子电渗法、超声透入疗法、超声促渗和显微针或无针(例如Powderject^TM，Bioject^TM等)注射进行的递送。这些参考文献的公开内容通过引用整体并入本文。

用于局部施用的制剂可配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。

本发明的化合物还可能鼻内施用或通过吸入施用，通常以干粉形式(单独，作为混合物，例如，与乳糖的干掺合物，或作为混合组分颗粒，例如与磷脂诸如磷脂酰胆碱混合)从干粉吸入器施用，或者作为气雾剂喷雾从加压容器、泵、喷雾器、雾化器(优选用电流体动力学产生细雾的雾化器)或喷散器施用，其中用或不用合适的抛射剂，诸如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷。对于鼻内使用，粉末可以包括生物粘附剂，例如壳聚糖或环糊精。

加压容器、泵、喷雾剂、雾化器或喷散器可以含有本发明的化合物的溶液或混悬液，其包含例如乙醇、含水乙醇或合适的替代试剂(用于活性物的分散、增溶或延长释放)、作为溶剂的抛射剂和任选的表面活性剂诸如脱水山梨糖醇三油酸酯、油酸或低聚乳酸。

在用于干粉或混悬液制剂之前，可以将所述化合物微粉化至适于通过吸入递送的尺寸(通常小于5微米)。这可以通过任何适当的粉碎方法实现，例如螺旋喷射研磨、流化床喷射研磨、超临界流体处理以形成纳米颗粒、高压匀浆化或喷雾干燥。

用于吸入器或吹入器的胶囊(例如由明胶或HPMC制成)、泡罩和药筒可配制成含有本发明的化合物、合适的粉末基质(诸如乳糖或淀粉)和性能修饰剂(诸如l-亮氨酸、甘露醇或硬脂酸镁)的粉末混合物。乳糖可以是无水的或一水合物形式，优选后者。其它合适的赋形剂包括葡聚糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。

用于使用电流体动力学产生细雾的雾化器的合适溶液制剂每次致动可含有1μg至20mg本发明的化合物，并且致动体积可在1μL至100μL之间变化。典型的制剂包括本发明的化合物、丙二醇、无菌水、乙醇和氯化钠。可用于代替丙二醇的替代溶剂包括甘油和聚乙二醇。

可以将合适的调味剂(诸如薄荷醇和左薄荷脑)或甜味剂(诸如糖精或糖精钠)加入到意图用于吸入/鼻内施用的本发明的那些制剂中。

用于吸入/鼻内施用的制剂可以使用例如聚(DL-乳酸-羟基乙酸共聚物)(PGLA)配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。

在干粉吸入器和气雾剂的情况下，借助于递送计量的量的阀确定剂量单位。通常将根据本发明的单元设置成施用含有所需量的本发明的化合物的计量剂量或“喷气(puff)”。总日剂量可以以单剂量施用，或者更通常地，以在一天中的分剂量施用。

本发明的化合物可能直肠或阴道施用，例如以栓剂、子宫托或灌肠剂的形式施用。可可脂是传统的栓剂基质，但可以在适当时使用各种替代物。

用于直肠/阴道施用的制剂可以配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向及程序化的释放。

本发明的化合物还可能直接施用于眼睛或耳朵，通常以在等渗的、调过pH的无菌盐水中的微粉化混悬液或溶液的液滴的形式。适于眼和耳施用的其它制剂可以包括软膏剂、可生物降解的(例如可吸收的凝胶海绵、胶原)和不可生物降解的(例如硅酮)植入物、糯米纸囊剂、透镜和微粒或囊状系统，诸如类脂质体或脂质体。聚合物诸如交联的聚丙烯酸、聚乙烯醇、透明质酸、纤维质聚合物(例如，羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素或甲基纤维素)或杂多糖聚合物(例如，结冷胶(gelan gum))可以与防腐剂诸如苯扎氯铵一起掺入。这样的制剂还可以通过离子电渗法递送。

用于眼/耳施用的制剂可配制成立即释放和/或调节释放。调释制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向或程序化的释放。

本发明的化合物可以与可溶性大分子实体(诸如环糊精及其合适的衍生物或含有聚乙二醇的聚合物)组合，以便改进其溶解度、溶出速率、味道掩蔽性、生物利用度和/或稳定性以用于前述施用模式中的任一种中。

例如，药物-环糊精复合物可用于不同的剂型和施用途径。可能使用包合和非包合复合物。作为与药物直接复合的替代方案，环糊精可以用作辅助添加剂，即作为载体、稀释剂或增溶剂。最常用于这些目的的是α-、β-和γ-环糊精，其例子可以参见PCT公开号WO 91/11172、WO 94/02518和WO 98/55148，其公开内容通过引用整体并入本文。

纳米颗粒也代表适用于大多数施用途径的药物递送系统。多年来，已经探索了多种天然的和合成的聚合物来制备纳米颗粒，其中聚(乳酸)(PLA)、聚(羟基乙酸)(PGA)和它们的共聚物(PLGA)因为它们的生物相容性和生物可降解性已经被广泛研究。纳米颗粒和其它纳米载体作为几类药物诸如抗癌剂、抗高血压剂、免疫调节剂和激素以及大分子诸如核酸、蛋白、肽和抗体的潜在载体起作用。参见，例如，Crit.Rev.Ther.Drug CarrierSyst.21:387-422,2004；Nanomedicine:Nanotechnology,Biology and Medicine I:22-30,2005。

本发明的化合物和组合物可以作为抗体-药物缀合物或其它靶向递送模态的组分施用。

所述药物组合物可以是适合于精确量的单次施用的单位剂型。

治疗方法和用途

本发明进一步提供了治疗方法和用途，其包括单独的或与一种或多种治疗剂或姑息剂组合的本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)或(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

本文中使用的术语“治疗”是指减轻或消除细胞障碍和/或其附随症状的方法。特别是对于癌症，这些术语简单地是指受癌症影响的个体的预期寿命将增加，或疾病的一种或多种症状将减轻。

“体外”是指在人工环境中(例如，但不限于在试管或培养基中)进行的操作。

“体内”是指在活生物体(例如，但不限于小鼠、大鼠、兔和/或人)内进行的操作。

“生物体”是指由至少一个细胞构成的任何活实体。活生物体可以像例如单个真核细胞一样简单，或像哺乳动物(包括人类)一样复杂。

本文中使用的术语”受试者”是指人或动物受试者。在某些优选的实施方案中，所述受试者是人。

本文中使用的术语“患者”是指需要治疗的“受试者”。在某些优选的实施方案中，所述患者是人。

术语“异常细胞生长”和“过度增殖障碍”互换使用。除非另外指出，否则“异常细胞生长”是指不依赖正常调节机制的细胞生长(例如，接触抑制的丧失)。异常细胞生长可以是良性的(非癌性的)或恶性的(癌性的)。

本文中使用的“癌症”是指由异常细胞生长造成的任何恶性的和/或侵袭性的生长或肿瘤。本文中使用的“癌症”是指以最初形成它们的细胞的类型命名的实体瘤，血液癌、骨髓癌或淋巴系统癌。实体瘤的例子包括、但不限于肉瘤和癌。血液癌的例子包括、但不限于白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。术语“癌症”包括、但不限于起源于体内特定部位的原发性癌症、已经从其开始的地方扩散到身体的其它部位的转移性癌症、在减轻后原始原发性癌症的复发、以及第二原发性癌症，所述第二原发性癌症为在具有与后一种癌症不同类型的先前癌症史的人中的新原发性癌症。特别是，本发明的化合物可用于预防和治疗多种人过度增殖障碍，诸如恶性的或良性的异常细胞生长。

干扰素基因刺激剂(STING)蛋白在1型干扰素信号传递中作为细胞溶质DNA传感器和衔接蛋白起作用。术语“STING”和“干扰素基因刺激剂”是指任何形式的STING蛋白，以及至少保留STING的部分活性的变体、亚型和物种同源物。除非另外指出，诸如通过特别提及人STING，否则STING包括天然序列STING的所有哺乳动物物种，例如人、猴和小鼠。

本文中使用的术语“STING活化剂”或“STING激动剂”是指这样的化合物，其在结合后，(1)刺激或活化STING，并诱导以与STING功能相关的分子的活化为特征的下游信号转导；(2)增强、增加、促进、诱导或延长STING的活性、功能或存在，或(3)增强、增加、促进或诱导STING的表达。这样的作用包括、但不限于STING、IRF3和/或NF-κB的直接磷酸化，并且还可以包括STAT6。STING途径活化导致例如1型干扰素(主要是IFN-α和IFN-β)的生成增加以及干扰素刺激的基因的表达(Chen H等人.“Activation of STAT6 by STING is Criticalfor Antiviral Innate Immunity”.Cell,2011，第14卷:433-446；和Liu S-Y.等人.“Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviralfactors”.Proc.Natl.Acad.Sci.2012:第109卷，4239-4244)。

本文中使用的术语“STING-调节的”是指STING直接影响或通过STING途径影响的病症，包括、但不限于炎性疾病和病症、变态反应性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病、异常细胞生长(包括癌症)，以及用作疫苗佐剂。

在一个实施方案中，本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐结合STING。

在一个实施方案中，本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐活化STING，包括，例如如通过干扰素-β诱导的调节、IRF3的磷酸化等所确定的。

在一个方面，本发明提供了用作药物的本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

在一个方面，本发明提供了治疗方法和用途，包括施用本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

在一个方面，本发明是一种用于治疗哺乳动物中的炎性疾病和病症、变态反应性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病和异常细胞生长的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。该方法可以任选地采用如本文中所述的化合物或盐作为抗体-药物缀合物的组分或作为基于颗粒的递送系统的组分。本发明的一个实施方案是一种用于治疗哺乳动物中的炎性疾病和病症的方法。本发明的一个实施方案是一种用于治疗哺乳动物中的变态反应性疾病的方法。本发明的一个实施方案是一种用于治疗哺乳动物中的自身免疫性疾病的方法。本发明的一个实施方案是一种用于治疗哺乳动物中的感染性疾病的方法。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

在一个方面，本发明是一种用于治疗哺乳动物中的异常细胞生长的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

在另一个方面，本发明提供了一种用于治疗哺乳动物中的异常细胞生长的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效治疗异常细胞生长的量的本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

在这样的实施方案中，所述异常细胞生长可以是癌症。如果异常细胞生长是癌症，则要治疗的癌症可以是肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域的癌症、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食管癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管的癌症、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。在一个实施方案中，所述癌症是膀胱癌。在一个实施方案中，所述膀胱癌是泌尿道上皮癌。在一个实施方案中，所述膀胱癌是非肌肉侵袭性膀胱癌(NMIBC)。在一个实施方案中，所述膀胱癌是肌肉侵袭性膀胱癌(MIBC)。在一个实施方案中，所述膀胱癌是非转移性泌尿道上皮癌。在一个实施方案中，所述膀胱癌是转移性泌尿道上皮癌。在一个实施方案中，所述膀胱癌是非泌尿道上皮癌。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

在再一个实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中的癌细胞增殖的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效抑制癌细胞增殖的量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

本文描述的本发明的这些方法可以任选地采用如本文中所述的化合物或盐作为抗体-药物缀合物的组分或作为基于颗粒的递送系统的组分。

在本发明中还体现了用于治疗哺乳动物中的异常细胞生长的本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。在这样的实施方案中，所述异常细胞生长可以是癌症。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

在本发明中还体现了本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物可用于治疗哺乳动物中的异常细胞生长。在这样的实施方案中，所述异常细胞生长可以是癌症。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

本发明的再其它实施方案包括这样的实施方案，其中提供了一种活化哺乳动物中的STING的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的本文描述的化合物或盐的步骤。还提供了一种在哺乳动物中刺激先天性免疫应答的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的本文描述的化合物或盐的步骤。在一个实施方案中，所述哺乳动物是人。在这样的实施方案中，所述哺乳动物是需要治疗的人。

给药方案

所施用的活性化合物的量将取决于所治疗的受试者、障碍或病症的严重程度、施用率、化合物的处置和处方医师的判断。

可以调节剂量方案以提供最佳的所需应答。例如，可以施用单次大剂量，可以随时间施用几个分剂量，或可以根据治疗形势的急迫性所指示而按比例降低或增加剂量。本文中使用的“剂量单位形式”是指适合作为用于要治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的物理上离散的单元，每个单元含有与所需药用载体结合的经计算会产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。

熟练的技术人员基于本文提供的公开内容会明白，根据治疗领域中众所周知的方法调节所述剂量和给药方案。也就是说，可以容易地确立最大耐受剂量，也可以确定给患者提供可检测的治疗益处的有效量，还可以确定施用每种药剂以给患者提供可检测的治疗益处的时间要求。

应当指出，剂量值可以随要减轻的病症的类型和严重程度而变化，且可以包括单剂量或多剂量。进一步应当理解，对于任何特定受试者，应当根据个体需要以及管理或监督所述组合物的施用的人士的专业判断随时间调节具体剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅仅是示例性的，且无意限制要求保护的发明的范围或实践。例如，可以基于药代动力学或药效动力学参数来调节剂量，所述参数可以包括临床效应诸如毒性效应和/或实验室值。因而，本发明涵盖由熟练的技术人员确定的患者内剂量增加。确定化疗剂的施用的适当剂量和方案是在相关领域中公知的，并且一旦提供本文公开的教导，熟练的技术人员会理解为涵盖在内。

一种可能的剂量是在约0.001至约100mg/千克体重的范围内，每天、每隔一天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每隔一周、每三周、每月或按其它给药计划施用。在某些情况下，在上述范围的下限之下的剂量水平可能是绰绰有余的，而在其它情况下，可能使用再更大的剂量而不引起任何有害的副作用，其中这样的更大的剂量通常分成数个用于在一天中施用的更小剂量。

在一个实施方案中，将本文描述的组合物单独地或与药学上可接受的赋形剂组合地以足以诱导、改变或刺激适当免疫应答的量施用给受试者。免疫应答可以包含，但不限于特异性免疫应答、非特异性免疫应答、特异性和非特异性应答、先天性应答、初级免疫应答、适应性免疫、继发性免疫应答、记忆免疫应答、免疫细胞活化、免疫细胞增殖、免疫细胞分化和细胞因子表达。

联合疗法

本文中使用的术语“联合疗法”是指与至少一种另外的治疗剂(例如，抗癌剂)或疗法一起依次或同时施用本发明的化合物(包括式(A)、(I)、(II)、(III)、(III-A)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)和(IX)的那些)或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，在施用本发明的化合物之前，将所述另外的治疗剂或疗法施用给哺乳动物(例如，人)。在另一个实施方案中，在施用本发明的化合物之后，将所述另外的治疗剂或疗法施用给哺乳动物(例如，人)。在另一个实施方案中，在施用本发明的化合物的同时，将所述另外的治疗剂或疗法施用给哺乳动物(例如，人)。

本发明也涉及一种用于治疗哺乳动物(包括人)中的异常细胞生长(包括癌症)的药物组合物，其包含一定量的如上定义的本发明的化合物以及一种或多种(优选一种、两种或三种)另外的治疗剂和药学上可接受的载体，其中所述活性剂和所述另外的治疗剂的量当作为一个整体时对于治疗所述异常细胞生长而言是治疗上有效的。

可以施用本发明的化合物及其组合物作为初次治疗，或者用于治疗对常规疗法无应答的癌症。另外，本发明的化合物及其组合物可以与其它疗法(例如，外科手术切除、辐射、另外的抗癌药物等)联合使用，从而引起累加的或增强的治疗效果和/或降低某些抗癌剂的细胞毒性。本发明的化合物及其组合物可以与另外的药剂共同施用或共同配制，或者配制用于与另外的药剂以任何顺序连续施用。对于联合疗法，在适合进行预期疗法的任何时间范围内施用所述化合物。因此，可以基本上同时(即，作为单一制剂或在数分钟或数小时内)或以任何顺序连续施用单一药剂。例如，可以在彼此的约一年内，诸如在约10、8、6、4或2个月内，或在4、3、2或1周内，或在约5、4、3、2或1天内施用单一药剂治疗。

在某些实施方案中，本文描述的方法进一步包括给所述受试者施用一定量的抗癌治疗剂或姑息剂，特别是适合于特定癌症的护理标准药剂，所述量可以一起有效治疗或改善所述异常细胞生长。

在一个实施方案中，所述另外的治疗剂是一种或多种姑息剂。

在一个实施方案中，所述另外的治疗剂是一种或多种抗癌治疗剂。在某些实施方案中，所述一种或多种抗癌治疗剂选自抗肿瘤剂、抗血管生成剂、信号转导抑制剂和抗增殖剂，所述量一起有效治疗所述异常细胞生长。

在本发明的一个方面，本文描述的方法进一步包括用另外的疗法形式治疗受试者的步骤。在一个方面，所述另外的疗法形式是另外的抗癌疗法，包括、但不限于化学疗法、辐射、外科手术、激素疗法和/或另外的免疫疗法。

在某些实施方案中，将本发明的化合物及其组合物与一种或多种另外的组合物联合施用，所述另外的组合物包括旨在刺激针对一种或多种预定抗原或佐剂的免疫应答的疫苗。

本发明的化合物及其组合物可以与其它治疗剂联合使用，所述其它治疗剂包括、但不限于治疗性抗体、抗体药物缀合物(ADC)、免疫调节剂、细胞毒性剂和细胞生长抑制剂。细胞毒性效应是指靶细胞(即，肿瘤细胞)的消耗、消除和/或杀死。细胞毒性剂是指对细胞具有细胞毒性和/或细胞生长抑制性作用的药剂。细胞生长抑制性作用是指细胞增殖的抑制。细胞生长抑制剂是指对细胞具有细胞生长抑制性作用、由此抑制细胞的特定子集(即，肿瘤细胞)的生长和/或繁殖的药剂。免疫调节剂是指这样的药剂：其通过产生细胞因子和/或抗体和/或调节T细胞功能来刺激免疫应答，由此通过使另一种药剂更有效而直接地或间接地抑制或减少细胞子集(即，肿瘤细胞)的生长。本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂可以作为相同或分开的剂型的一部分根据本领域普通技术人员已知的标准药学实践通过相同的或不同的施用途径和按照相同或不同的施用计划施用。

本发明的化合物及其组合物还可以与其它治疗剂联合使用，所述其它治疗剂包括、但不限于：B7共刺激分子，白介素-2，干扰素，干扰素-7，GM-CSF，CTLA-4拮抗剂，PD-1途径拮抗剂，抗-41BB抗体，OX-40/OX-40配体，CD40/CD40配体，沙格司亭，左旋咪唑，痘苗病毒，卡介苗(BCG)，脂质体，明矾，弗氏完全或不完全佐剂，脱毒的内毒素，矿物油，表面活性物质诸如脂卵磷脂，pluronic多元醇，聚阴离子，肽，油或烃乳剂，佐剂，脂质，双层间交联的多层囊泡，可生物降解的基于聚(D,L-乳酸-共-羟乙酸)[PLGA]的或基于聚酸酐的纳米颗粒或微米颗粒，以及纳米多孔颗粒支持的脂质双层诸如脂质体，诱导先天性免疫的灭活细菌(例如，灭活的或减毒的单核细胞增生李斯特菌)，通过Toll-样受体(TLR)、(NOD)-样受体(NLR)、基于视黄酸诱导型基因的(RIG)-I-样受体(RLR)、C-型凝集素受体(CLR)、病原体相关的分子模式(“PAMP”)而介导先天性免疫活化的组合物，化学治疗剂，等。用于诱导T细胞免疫应答的载体(其相对于抗体应答优先刺激细胞裂解性T细胞应答)是优选的，尽管也可以使用刺激两种类型应答的载体。在药剂为多肽的情况下，可以施用多肽本身或编码所述多肽的多核苷酸。所述载体可以是细胞，诸如抗原呈递细胞(APC)或树突细胞。抗原呈递细胞包括诸如巨噬细胞、树突细胞和B细胞等细胞类型。其它专业的抗原呈递细胞包括单核细胞、边缘区库普弗细胞、小胶质细胞、朗格汉斯细胞、交错树突细胞、滤泡树突细胞和T细胞。也可以使用兼性抗原呈递细胞。兼性抗原呈递细胞的例子包括星形胶质细胞、滤泡细胞、内皮和成纤维细胞。所述载体可以是细菌细胞，其被转化以表达多肽或递送多核苷酸，所述多核苷酸随后在接种的个体的细胞中表达。可以添加佐剂，诸如氢氧化铝或磷酸铝，以增加疫苗触发、增强或延长免疫应答的能力。另外的物质也是可能的佐剂，诸如细胞因子、趋化因子和细菌核酸序列，如CpG、toll-样受体(TLR)9激动剂，以及TLR 2、TLR 4、TLR 5、TLR 7、TLR 8、TLR9的其它激动剂，包括脂蛋白、LPS、单磷酸脂质A、脂磷壁酸、咪喹莫特、瑞喹莫德和此外视黄酸诱导型基因I(RIG-I)激动剂诸如聚I:C，它们单独使用或与所描述的组合物联合使用。佐剂的其它代表性例子包括合成的佐剂QS-21，其包含从皂树(Quillajasaponaria)皮和短小棒状杆菌(Colynebacterium parvum)纯化的均质皂苷(McCune等人,Cancer,1979；43:1619)。应该理解，将所述佐剂进行优化。换而言之，熟练的技术人员可以进行例行实验以确定要使用的最佳佐剂。

在一个实施方案中，所述其它治疗剂是干扰素。术语“干扰素”或“IFN”或“INF”(它们每个可以互换使用)是指抑制病毒复制和细胞增殖并调节免疫应答的高度同源的物种-物种蛋白家族的任何成员。例如，人干扰素被分为三类：I型，其包括干扰素-α、干扰素-β和干扰素-ω；II型，其包括干扰素-γ；和III型，其包括干扰素-λ。本文中使用的术语“干扰素”涵盖已开发且商购可得的干扰素的重组形式。干扰素的亚型，诸如化学修饰的或突变的干扰素，也被涵盖在本文所用的术语“干扰素”中。化学修饰的干扰素可包括聚乙二醇化的干扰素和糖基化的干扰素。干扰素的例子还包括、但不限于干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α-n1、干扰素-β-1a、干扰素-β-1b、干扰素-λ-1、干扰素-λ-2和干扰素-λ-3。聚乙二醇化的干扰素的例子包括聚乙二醇化的干扰素-α-2a和聚乙二醇化的干扰素-α-2b。

在一个实施方案中，所述其它治疗剂是CTLA-4途径拮抗剂。

在一个实施方案中，所述其它治疗剂是抗-4-1BB抗体。本文中使用的术语“4-1BB抗体”是指如本文所定义的能够结合人4-1BB受体的抗体(在本文中也被称作“抗-4-1BB抗体”)。术语“4-1BB”和“4-1BB受体”在本申请中互换使用，并且是指4-1BB受体的任何形式，以及保留至少一部分4-1BB受体活性的其变体、亚型和物种同源物。因此，如本文所定义和公开的结合分子也可以结合来自人以外的物种的4-1BB。在其它情况下，结合分子可能对人4-1BB具有完全特异性，并且可能不显示物种或其它类型的交叉反应性。除非另外指出，诸如通过具体提及人4-1BB，否则4-1BB包括天然序列4-1BB的所有哺乳动物物种，例如人、犬、猫、马和牛。一种示例性的人4-1BB是255氨基酸蛋白(登记号NM_001561；NP_001552)。4-1BB包含一个信号序列(氨基酸残基1-17)，随后是一个细胞外结构域(169个氨基酸)、一个跨膜区域(27个氨基酸)和一个细胞内结构域(42个氨基酸)(Cheuk ATC等人.2004Cancer GeneTherapy 11:215-226)。该受体以单体和二聚体形式在细胞表面上表达，并可能与4-1BB配体三聚化以发出信号。本文中使用的“4-1BB激动剂”是指如本文中定义的任何化合物或生物分子，其在结合4-1BB后，(1)刺激或活化4-1BB，(2)增强、增加、促进、诱导或延长4-1BB的活性、功能或存在，或(3)增强、增加、促进或诱导4-1BB的表达。可用于本发明的治疗方法、药物和用途中的任一种的4-1BB激动剂包括特异性地结合4-1BB的单克隆抗体(mAb)或其抗原结合片段。4-1BB的替代名称或同义词包括CD137和TNFRSF9。在其中治疗人个体的本发明的治疗方法、药物和用途中的任一种中，4-1BB激动剂增加4-1BB介导的应答。在本发明的治疗方法、药物和用途的某些实施方案中，4-1BB激动剂显著增强细胞毒性T-细胞应答，在几种模型中产生抗肿瘤活性。人4-1BB包含一个信号序列(氨基酸残基1-17)，随后是一个细胞外结构域(169个氨基酸)、一个跨膜区域(27个氨基酸)和一个细胞内结构域(42个氨基酸)(Cheuk ATC等人.2004Cancer Gene Therapy 11:215-226)。受体以单体和二聚体形式在细胞表面上表达，并可能与4-1BB配体三聚化以发出信号。结合人4-1BB并且可用于本发明的治疗方法、药物和用途的mAb的例子描述于US 8,337,850和US20130078240。在某些实施方案中，抗-4-1BB抗体具有如在WO2017/130076的SEQ ID NO:17中所示的VH和如在SEQ IDNO:18中所示的VL。

在一个实施方案中，所述其它治疗剂是PD-1途径拮抗剂。在一个实施方案中，所述其它治疗剂是抗-PD-1抗体。在一个实施方案中，所述其它治疗剂是抗-PD-L1抗体。程序性死亡1(PD-1)受体和PD-1配体1和2(分别是PD-L1和PD-L2)在免疫调节中发挥着不可或缺的作用。在活化的T细胞上表达的PD-1被在间质细胞、肿瘤细胞或两者上表达的PD-L1(也被称作B7-H1)和PD-L2活化，从而引发T细胞死亡和局部免疫抑制(Dong等人,Nat Med 1999；5:1365-69；Freeman等人.J Exp Med 2000；192:1027-34)，可能为肿瘤发展和生长提供免疫耐受环境。相反，这种相互作用的抑制可以在非临床动物模型中增强局部T细胞应答并介导抗肿瘤活性(Iwai Y等人，Proc Natl Acad Sci USA 2002；99:12293-97)。可用于本发明的治疗方法、药物和用途的抗-PD-1抗体的例子包括BCD-100、卡瑞利珠单抗、西米普利单抗、杰诺单抗(CBT-501)、MEDI0680、纳武单抗、派姆单抗、RN888(参见WO2016/092419)、信迪利单抗、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、STI-A1110、替雷利珠单抗和TSR-042。在某些实施方案中，所述抗-PD-1抗体具有如在US10155037的SEQ ID NO:4中所示的VH和如在SEQ ID NO:8中所示的VL。可用于本发明的治疗方法、药物和用途的抗-PD-L1抗体的例子包括阿特珠单抗、度伐单抗、BMS-936559(MDX-1105)和LY3300054。

所公开的联合疗法可以引起协同治疗效果，即大于其各自效果或治疗结果之和的效果。例如，协同治疗效果可以是单一药剂引起的治疗效果或单一药剂的给定组合引起的治疗效果的总和的至少约两倍的效果，或至少约五倍，或至少约十倍，或至少约二十倍，或至少约五十倍，或至少约一百倍。协同治疗效果也可观察为，与单一药剂引起的治疗效果或单一药剂的给定组合引起的治疗效果的总和相比至少10％的治疗效果增加，或至少20％，或至少30％，或至少40％，或至少50％，或至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少90％，或至少100％，或更多。协同效果还是允许在联合使用一种或多种治疗剂时减少所述治疗剂的给药的效果。

成套试剂盒：

由于可能需要施用活性化合物的组合，例如，为了治疗特定疾病或病症的目的，在本发明的范围内包括：两种或更多种药物组合物(其中至少一种含有根据本发明的化合物)可以方便地以适合于组合物的共同施用的试剂盒形式组合。因此，本发明的试剂盒包括两种或更多种单独的药物组合物(其中至少一种含有本发明的化合物)，和用于分别保留所述组合物的装置，诸如容器、分开的瓶子或分开的箔包。这样的试剂盒的一个例子是用于包装片剂、胶囊剂等的熟悉的泡罩包。

本发明的试剂盒特别适用于施用不同的剂型，例如口服和胃肠外剂型，适用于以不同的剂量间隔施用单独的组合物，或适用于将单独的组合物相互滴定。为了有助于依从性，该试剂盒通常包括施用指导并且可以提供有记忆辅助器。

实施例

一般方法

合成实验程序：

通常在惰性气氛(氮或氩)下进行实验，特别是在采用对氧或水分敏感的试剂或中间体的情况下。市售的溶剂和试剂通常不经进一步纯化而使用，并在分子筛(通常是来自Aldrich Chemical Company,Milwaukee,Wisconsin的Sure-Seal^TM产品)上干燥。由液相色谱-质谱(LC-MS)、大气压化学电离(APCI)、电喷雾电离(ESI)或液相色谱-飞行时间(LC-TOF)法报告质谱数据。以参考来自所用氘代溶剂的残留峰的百万份数(ppm)表示核磁共振(NMR)数据的化学位移。

对于参考其它实施例或方法中的程序的合成，反应方案(反应时间长度和温度)可能变化。一般而言，反应之后是薄层色谱法、LC-MS或HPLC，并在适当时进行后处理。纯化可能因实验而异：一般而言，对用于洗脱剂/梯度的溶剂和溶剂比率进行选择以提供适当的保留时间。除非另外指出，否则反相HPLC级分通过冻干/冷冻干燥进行浓缩。将中间体和最终化合物在(0℃)或室温在氮气下储存在密闭的管形瓶或烧瓶中。使用Chemdraw或ACD Labs软件生成化合物名称。

溶剂和/或试剂的缩写是基于美国化学学会指南，并在下面突出显示：

Ac＝乙酰基；AcOH＝乙酸；Ac₂O＝乙酸酐；Ad＝金刚烷基；Bipy＝2,2'-联吡啶＝2,2'-二吡啶＝2,2'-二吡啶基；Bn＝苄基；Bu＝丁基；CataCXium A＝二-(1-金刚烷基)-正丁基膦；CataXCium A-Pd-G3＝[(二(1-金刚烷基)-丁基膦)-2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)甲磺酸盐；CO＝一氧化碳；DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯；DBU＝1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯；DCE＝1,2-二氯乙烷；DCM＝二氯甲烷；DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺；DMA＝二甲基乙酰胺；DMB＝2,4-二甲氧基苄基；DMF＝N,N-二甲基甲酰胺；DMF·DMA＝N,N-二甲基甲酰胺缩二甲醇；DMSO＝二甲亚砜；dppf＝1,1'-二茂铁二基-双(二苯基膦)；dtbbpy＝4,4'-二叔丁基-2,2'-二吡啶；Et＝乙基；EtOAc＝乙酸乙酯；h＝hr＝小时；HFIP＝1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇；HPLC＝高效液相色谱法；[Ir(cod)OMe]₂＝双(1,5-环辛二烯)二-μ-甲氧基二铱(I)＝[Ir(OMe)(1,5-cod)]₂＝(1,5-环辛二烯)(甲氧基)铱(I)二聚体；KOAc＝乙酸钾；LC＝液相色谱；LCMS＝液相色谱质谱法；m-CPBA＝3-氯过氧苯甲酸＝间氯过苯甲酸＝mCPBA；Me＝甲基；MeOH＝甲醇；MeCN＝ACN＝乙腈；MsOH＝甲磺酸；n-Bu＝正丁基；n-BuLi＝正丁基锂；NCS＝N-氯琥珀酰亚胺；Pin＝频哪醇＝2,3-二甲基-2,3-丁二醇＝四甲基乙二醇；Pd(OAc)₂＝乙酸钯(II)；Pd(dppf)Cl₂＝[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)；Phen＝1,10-菲咯啉；Ph＝苯基；PMB＝对甲氧基苄基；PhMe＝Tol＝甲苯；PivOH＝新戊酸；rt＝室温；TEA＝三乙胺；TFA＝三氟乙酸；Tf₂O＝三氟甲磺酸酐；THF＝四氢呋喃；TMS＝三甲基甲硅烷基；Ts＝Tosyl＝甲苯磺酰基；T3P＝2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷(phosphorinane)-2,4,6-三氧化物；Xantphos＝4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨。

一般方案I：

如在一般方案I中所示，可以将类型GS1a的化合物在适当的溶剂(诸如THF、PhMe或类似的溶剂)中在-20℃至室温范围内的温度采用合适的活化剂(诸如偶氮二甲酸二异丙酯)和三烷基/三芳基膦(诸如三正丁基膦或三苯基膦)在Mitsunobu烷基化条件下用醇(HO-R²)烷基化，以提供化合物诸如GS1b。可以将化合物诸如GS1b在合适的溶剂(诸如THF、MeOH、水或类似的溶剂)中使用适当的碱(MOH，其中M＝Li、Na、K或Cs)在碱性条件下水解，随后在合适的溶剂(诸如THF、PhMe、DCM、DCE或DMF)中用合适的氯化剂(诸如草酰氯或亚硫酰氯)氯化，以提供化合物诸如GS1c。可以将化合物诸如GS1c在合适的溶剂(诸如乙醚、THF、MeCN或类似的溶剂)中用重氮甲烷或其等效物(诸如三甲基甲硅烷基重氮甲烷)烷基化，随后在合适的溶剂(诸如AcOH、DCM、乙醚、MeCN、EtOAc或类似的溶剂)中用合适的溴化剂(诸如HBr、溴化铁(III)或类似的试剂)溴化，以提供化合物诸如GS1d。可以将化合物诸如GS1d在纯净的甲酰胺中缩合，通常在>140℃的温度，以提供化合物诸如GS1e。可以将化合物诸如GS1e在适当的溶剂(DMF、DMSO、THF或类似的溶剂)中用适当的碱(诸如Cs₂CO₃，MH，其中M＝Na、K，或类似的碱)用带有合适离去基团(LG)(诸如Cl、Br、OTs或类似的离去基团)的烷基基团(R⁶-LG)烷基化，以提供化合物诸如GS1f。在合适的催化剂系统(诸如Pd(dppf)Cl₂或Pd(OAc)₂或类似的催化剂)存在下，有时在铜助催化剂(诸如CuCl、CuBr、CuI、Cu(Xantphos)Cl、Cu(MeCN)₄PF₆、Cu(Phen)PPh₃Br或类似的催化剂)存在下，有时在另外的膦配体(诸如PPh₃、cataCXiumA、Xantphos、PCy₃·HBF₄或类似的膦配体)存在下，用合适的碱(诸如CsOPiv、CsOAc、K₂CO₃+PivOH、TMPMgCl·LiCl或TMPZnCl·LiCl、DBU、n-BuLi+ZnCl₂或类似的碱/组合)，在适当的溶剂(诸如PhMe、二氧杂环己烷、MeCN、TFE、叔戊醇或类似的溶剂)中，在室温至150℃范围内的温度，可以使类型GS1f的化合物通过C-H活化与类型GS1g的化合物交叉偶联，以提供化合物诸如GS1h。化合物诸如GS1h可以含有酸不稳定的保护基，其可以在该阶段使用本领域已知的条件(诸如TFA/DCM或MsOH/HFIP)除去(Protective Groups in Organic Synthesis,A.Wiley-Interscience Publication,1981或Protecting Groups,10Georg ThiemeVerlag,1994)，以提供化合物诸如GS1i。在每个步骤的化合物可以通过标准技术诸如柱色谱法、结晶或反相SFC或HPLC进行纯化。如果必要的话，在本领域已知的标准方法诸如手性SFC或HPLC下，可以进行在合成顺序中的任何产物的位置异构体或立体异构体的分离，以提供单一位置异构体或立体异构体。变量诸如PG、LG和R¹-R⁶如在本文实施方案、方案、实例和权利要求中所定义和/或描绘。

头基(HG)中间体的制备：

根据方案HG-1制备4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)。

方案HG-1

步骤1:1-甲基-5-{[(4Z)-2-甲基-5-氧代-1,3-噁唑-4-亚基]甲基}吡唑-4-甲酸乙酯(HG-1a)的合成

在室温向5-甲酰基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(10.7g,58.6mmol)和N-乙酰基甘氨酸(10.3g,88.0mmol,1.5当量)在乙酸酐(15mL,4M)中的溶液中加入乙酸钾(9.09g,88.0mmol,1.5当量)，并向该浆料中加入另外的5mL Ac₂O以重新诱导搅拌。然后在其顶部放置空气冷凝器(Findenser)并加热至100℃。在加热过程中，白色混浊悬浮液变成澄清黄色溶液，并在10分钟以后变成棕色溶液。1小时以后，将反应物冷却至室温。TLC分析(2:1庚烷/EtOAc，KMnO4染料)显示起始原料(Rf＝0.61)的消耗并伴随着产物(Rf＝0.29)的形成。然后将反应转移至100mL烧杯，用DCM冲洗反应瓶，并在磁力搅拌下逐滴加入饱和碳酸氢钠水溶液直到泡腾停止。此后，将该烧杯的内容物转移至分液漏斗，在那里将有机层分离。随后，将水层用4x 100mL 3:1DCM/iPrOH和2x 150mL DCM萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下除去溶剂。将得到的深棕色残余物溶解在约5mL DCM中。向其中逐滴加入MTBE(约5mL)，随后将该混合物倒入含有200mL庚烷的烧瓶中。在声处理后，黄色固体从溶液中沉淀并在减压下滤出。然后将母液在0℃静置2小时，此后另一批产物沉淀出来并再次在减压下过滤。将这两批合并以产生为浅黄色固体的标题化合物1-甲基-5-{[(4Z)-2-甲基-5-氧代-1,3-噁唑-4-亚基]甲基}吡唑-4-甲酸乙酯(HG-1a)(15.2g,98％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ7.93(s,1H),7.53(s,1H),4.29(q,J＝7.1Hz,2H),3.98(s,3H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H)。

步骤2:1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸(HG-1b)的合成

向在甲醇(57.8mL,1M)中的1-甲基-5-{[(4Z)-2-甲基-5-氧代-1,3-噁唑-4-亚基]甲基}吡唑-4-甲酸乙酯(HG-1a)(15.2g,57.8mmol)中加入碳酸钾(16.8g,116mmol,2当量)，随后给容器盖帽并加热至70℃。搅拌16小时以后，先前的深棕色浑浊溶液变浅至棕褐色。基于LCMS，所有起始原料都被消耗，因此将冷却的混合物在减压下过滤并用MeOH和MTBE洗涤滤饼。向所得滤液中添加MTBE以导致另外固体的沉淀，使用相同的装置将其重新过滤。然后将固体滤饼悬浮于H₂O中并加入浓HCl以酸化至pH 1。黄褐色固体沉淀，将其在减压下滤出，此后将滤液用1:1MeOH/MTBE稀释并再次在减压下过滤。将这两批合并以提供为黄褐色固体的标题化合物1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸(HG-1b)(10.46g,94％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),8.11(d,J＝0.9Hz,1H),7.40(d,J＝0.9Hz,1H),4.03(s,3H)。

步骤3:1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(HG-1c)的合成

向在甲醇(40mL,1.4M)中的1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸(HG-1b)(10.46g,54.17mmol)中逐滴加入浓硫酸(90mmol,5mL,2当量)。这导致在每滴添加时放热。将所得黄色浆料加热至70℃。17小时以后，将反应冷却至室温，在此时起始原料似乎已经被消耗并且白色微晶固体开始从溶液中沉淀出来。将反应混合物在减压下过滤并用水洗涤滤饼。收集该第一批，然后将滤液用5mL ACN、5mL MTBE和10mL EtOH稀释，然后在0℃静置。2小时以后，将从溶液中沉淀出的白色微晶通过真空过滤进行收集并与前一批合并，以提供为白色固体的标题化合物1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(HG-1c)(11.1g,99.0％)。¹H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.56(d,J＝0.9Hz,1H),4.12(s,3H),4.04(s,3H)。

步骤4:4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(HG-1d)的合成

向在乙腈(53.9mL,1.0M)中的1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸酯(HG-1c)(11.1g)中一次性加入吡啶(6.51mL,80.8mmol,1.5当量)，随后以每份大约1mL逐份加入Tf₂O酸酐(13.6mL,80.8mmol,1.5当量)。加入6mL以后，溶液从黄色变成红色(尽管仍浑浊)，并在添加剩余的三氟甲磺酸酐以后，反应再次变黄并开始澄清。45分钟以后，LCMS显示起始原料的消耗以及三氟甲磺酸酯的明显形成。然后向反应混合物中添加溴化锂(23.4g,269mmol,5当量)和三氟乙酸(5.23mL,59.3mmol,1.1当量)以产生橙色悬浮液。从此时起1小时以后，LCM分析显示三氟甲磺酸酯的消失并转化为溴化物。然后将反应混合物在磁力搅拌下缓慢倒入含有200mL饱和NaHCO₃的锥形烧瓶中。在气体产生停止后，将两相转移至含有800mL EtOAc的分液漏斗中，摇动，并弃去水层。然后将有机层用硫代硫酸钠洗涤一次以脱色，并分离两层。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并在减压下除去溶剂。将得到的棕色油溶解在10mL DCM中，并向其中加入10mL MeCN和10mL丙酮。将该混浊溶液在0℃放置过夜，此后产物已沉淀并通过真空过滤进行收集以提供作为黄褐色固体的标题化合物4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(HG-1d)(11.77g,81％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.23(1H,d,J＝1Hz),8.14(1H,d,J＝1.0Hz),4.16(3H,s),4.05(3H,s)。

步骤5:4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸(HG-1e)的合成

将4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸酯(HG-1d)(1333mg,4.935mmol)加入含有5mL四氢呋喃和2mL H₂O的烧瓶中。在室温向该溶液中加入氢氧化锂(177mg,7.40mmol,1.5当量)并搅拌。2小时以后，LCMS分析表明起始原料的消耗并伴随产物形成。将反应混合物用浓HCl酸化至pH 1，在此时反应液变混浊。将得到的酸性悬浮液在0℃放置1小时，此后观察到产物已经沉淀。将该固体使用真空过滤进行收集以提供为白色半结晶固体的标题化合物4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸(HG-1e)(1.15g,90％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.43(1H,br s),8.49(1H,d,J＝0.8Hz),8.32(1H,d,J＝0.8Hz),4.18(3H,s)

步骤6:4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)的合成

向4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸(HG-1e)(1.90g,9.79mmol)在DMF(2mL)中的悬浮液中加入第一份三乙胺(4.13mL,29.4mmol)，然后加入二甲氧基苄胺(1.64g,9.79mmol)，其中后者导致澄清溶液。向溶液中加入T₃P(8.60mL,50％在EtOAc中，14.7mmol)，此后溶液变成黄色并显著变热。30分钟以后，浑浊黄色悬浮液的LCMS分析显示起始原料的消耗和产物的形成。将其在磁力搅拌下用5mL EtOAc稀释，然后在减压下过滤。将固体用EtOAc洗涤并干燥以提供为白色固体的标题化合物4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(3.18g,81％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.53-8.38(1H,m),8.26(1H,d,J＝1Hz),8.09(1H,d,J＝1.0Hz),7.28(1H,s),6.50(2H,dd,J＝8.2,2.4Hz),6.45(2H,dd,J＝8.2,2.4Hz),4.63(2H,d,J＝6.1Hz),4.13(3H,s),3.90(3H,s),3.80(3H,s)。

根据方案HG-2制备4,6-二氯-1-乙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-2)。

方案HG-2

步骤1:4,6-二氯-1-乙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-2)的合成

将含有4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-2a)(1000mg,5.35mmol)在THF(16mL)中的溶液的反应烧瓶在冰水浴中冷却至0℃并逐份加载NaH(60重量％，在矿物油中,428mg,10.7mmol)。将反应混合物搅拌10分钟，在此时得到棕色溶液。向反应混合物中加入碘乙烷(917mg,5.88mmol)，随后在0℃搅拌另外30分钟。在该阶段，移开冰浴并使反应逐渐温热至室温并搅拌另外16小时。LCMS分析表明起始原料仍然存在，因此将反应加热至50℃并搅拌另外2小时。加入碘乙烷的另外等分试样(415mg,2.66mmol)并将反应在室温搅拌17小时。将反应用MeOH(5mL)淬灭并将溶液在真空下浓缩以提供黄色油。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Isco,0-20％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物4,6-二氯-1-乙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-2)(482.3mg,42％)。LCMS[M+H]＝215.9观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝8.12(d,J＝0.8Hz,1H),7.30(d,J＝0.9Hz,1H),4.39(q,J＝7.3Hz,2H),1.54(t,J＝7.3Hz,4H)。

采用商购可得的4,6-二氯-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶作为起始原料和本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，根据方案HG-2根据在用于合成4,6-二氯-1-乙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-2)的步骤1中使用的方法制备下表中的中间体。

根据方案HG-3制备4-氯-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(Int-HG-3)。

方案HG-3

步骤1:1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸乙酯(HG-3b)的合成

向含有5-氨基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(HG-3a)(1.5g,10.70mmol)的反应烧瓶中加入乙二酸二乙酯(25mL)。将反应在185℃加热过夜。将烧瓶从加热移开并逐渐冷却至室温，这导致灰色固体的沉淀。将灰色固体过滤，并用石油醚洗涤。将固体收集以提供为灰色固体的标题化合物1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸乙酯(HG-3b)(582mg,25％)。GC/MS m/z 222.1[M]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.68-12.41(m,1H),8.27-7.99(m,1H),4.52-4.27(m,2H),4.03-3.82(m,3H),1.44-1.18(m,3H)。

步骤2:4-羟基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸(HG-3c)的合成

向含有1-甲基-4-氧代-4,5-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸乙酯(HG-3b)(300.0mg,1.35mmol)的反应烧瓶中加入THF(12mL)和氢氧化锂(80.8mg,3.38mmol)在水(3mL)中的溶液。将反应在25℃搅拌过夜，然后在50℃加热2小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将溶液在减压下浓缩。将如此得到的水溶液通过逐滴加入HCl(1N)进行酸化直到达到pH＝2-3。将溶液用水稀释并转移至分液漏斗。将水相用2份DCM/IPA(3:1，各60mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在减压下浓缩。将如此得到的残余物在高真空下进一步干燥过夜以提供为黄色固体的标题化合物4-羟基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸(HG-3c)(240mg,91％)。LC/MS m/z 195.1[M+1]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.37-12.16(m,1H),8.23-8.03(m,1H),4.09-3.83(m,3H)。

步骤3:4-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-碳酰氯(HG-3d)的合成

向含有4-羟基-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸(HG-3c)(300mg,1.55mmol)的反应烧瓶中加入磷酰氯(4.74g,30.9mmol,2.88ml)。给烧瓶配备回流冷凝器并将反应在90℃加热4小时。将反应混合物在减压下浓缩，然后与PhMe一起共沸蒸馏2次以提供为棕色固体的标题化合物4-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-碳酰氯(HG-3d)(357mg,98％)。LC/MS m/z 227[M-1](甲酯)。

步骤4:4-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(Int-HG-3)的合成

向含有4-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-碳酰氯(HG-3d)(357mg,1.55mmol)的反应烧瓶中加入DCM(8mL)。将溶液冷却至0℃，随后加入三乙胺(938mg,9.27mmol,1.29ml)。向该混合物中加入1-(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(775mg,4.64mmol,0.696ml)。将反应在0℃搅拌3小时。将溶液在真空下浓缩，并将粗残余物通过快速柱色谱法(12g SiO₂,Isco,3％MeOH/DCM)纯化以提供为浅黄色固体的标题化合物4-氯-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(Int-HG-3)(224mg,40％)。LC/MS m/z 362[M+1]。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.22-9.13(m,1H),8.59-8.54(m,1H),7.17-7.10(m,1H),6.61-6.56(m,1H),6.52-6.46(m,1H),4.48-4.41(m,2H),4.18-4.11(m,3H),3.87-3.82(m,3H),3.77-3.74(m,3H)。

根据方案HG-4制备4,6-二氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-4)。

方案HG-4：

步骤1:2,4,6-三氯吡啶-3-甲醛(HG-4b)的合成。

在N₂气氛下将2,4,6-三氯吡啶(HG-4a)(9.00g,49.3mmol)在无水THF中的溶液冷却至-68℃(内部温度)，并逐滴加入n-BuLi(2.5M在己烷中，20.7mL,51.8mmol)，维持反应温度低于-63℃(内部温度)。将混合物在-68℃(内部温度)搅拌30分钟。逐滴加入甲酸乙酯(4.75g,64.1mmol)，维持反应温度低于-63℃(内部温度)。将混合物在-68℃(内部温度)搅拌1小时。TLC分析表明起始原料的消耗。将混合物倒入冰和饱和NH₄Cl水溶液的1:1混合物(100mL)中。将混合物搅拌10分钟，然后用EtOAc(2x200 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2x100 mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩至干燥。将残余物通过快速色谱法(80gSiO₂,0-5％EtOAc/石油醚)纯化。将混合的级分通过快速色谱法(20g SiO₂,0-5％EtOAc/石油醚)重新纯化。将产物批次合并以提供为白色固体的标题化合物2,4,6-三氯吡啶-3-甲醛(HG-4b)(8.62g,83％收率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.42(s,1H),7.46(s,1H)。

步骤2:4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-4c)的合成。

在N₂气氛下将2,4,6-三氯吡啶-3-甲醛(HG-4b)(4.00g,19.0mmol)和DIPEA(7.62g,58.9mmol)在EtOH(100mL)中的溶液冷却至-20℃，并逐滴加入肼一水合物(3.81g,76.0mmol)。将混合物在-20℃搅拌24小时，然后在30℃搅拌16小时。LCMS分析表明形成所需的产物质量。将溶液浓缩至干燥。将得到的固体用1:2EtOAc/石油醚(300mL)制浆30分钟。将固体通过过滤进行收集。将滤饼通过快速色谱法(40gSiO₂,8-50％EtOAc/石油醚)纯化以提供为白色固体的标题化合物4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-4c)(1.6g,45％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ14.06(br s,1H),8.41(s,1H),7.78(d,J＝1.0Hz,1H)。

步骤3:4,6-二氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-4)的合成。

在0℃向4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-4c)(1.25g,6.65mmol)在无水THF中的溶液中加入NaH(在矿物油中的60％分散体,500mg,12.5mmol)。将混合物在0℃搅拌10分钟，然后在相同温度逐滴加入碘甲烷(1.89g,13.3mmol)。将混合物在0℃搅拌1小时，然后在25℃搅拌16小时。TLC分析(2:1EtOAc/石油醚)显示起始原料的完全消耗。将反应通过加入饱和NH₄Cl水溶液(20mL)淬灭，然后浓缩以除去THF。将水性混合物用EtOAc(3x20 mL)萃取。将合并的有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩至干燥。将残余物通过快速色谱法(40gSiO₂,5-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为灰白色固体的标题化合物4,6-二氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-4)(510mg,38％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.42(d,J＝1.0Hz,1H),8.05(d,J＝0.9Hz,1H),4.12(s,3H)。

根据方案HG-5制备4-(4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-5)。

方案HG-5

步骤1:4-(4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-5)的合成

将4-溴-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(7.23g,17.8mmol)、溴-1-甲基-咪唑(HG-5a)(2.34g,14.5mmol)、Pd(OAc)₂(320mg,1.43mmol)、CuIXantphos(3.29g,4.27mmol)、dppf(397mg,0.717mmol)和Cs₂CO₃(14.0g,42.9mmol)在PhMe(130mL)中的稠的浅棕色悬浮液用N₂净化5个周期，并在搅拌下加热至125℃保持17小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将悬浮液在硅藻土垫上过滤，并将滤饼用DCM(100mL)和EtOAc(100mL)洗涤。将滤液在真空下浓缩并将粗残余物通过快速柱色谱法(330gSiO₂,Isco,0-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供被微量杂质污染的所需产物。将该物质通过制备型HPLC(YMC Triart C18250x50mmx7um柱，36-76％MeCN/H₂O(含有0.05％NH₄OH)，60mL/min)进一步纯化。将含有产物的级分在真空下浓缩并与MeOH一起研磨1小时。将悬浮液过滤并将固体收集。将分离的物质在真空下进一步干燥以提供为白色固体的标题化合物4-(4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-5)(2,47g,31％)。LCMS[M+H]＝486.1观察值；¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δ＝8.88(d,J＝1.0Hz,1H),8.26(d,J＝1.0Hz,2H),7.30(d,J＝8.2Hz,1H),7.04(s,1H),6.50(d,J＝2.2Hz,1H),6.47(dd,J＝2.4,8.3Hz,1H),5.31(s,1H),4.65(d,J＝6.0Hz,2H),4.16(s,3H),4.13(s,3H),3.88(s,3H),3.81(s,3H)。

根据方案HG-7制备4,6-二氯-1-环丙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-7)。

方案HG-7

步骤1:4,6-二氯-1-环丙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-7)的合成

将含有在1,2-二氯乙烷(2.5mL)中的4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-2a)(150mg,0.798mmol)、环丙基硼酸(129mg,1.50mmol)、Na₂CO₃(159mg,1.50mmol)、Cu(OAc)₂(136mg,0.749mmol)和2,2'-联吡啶(117mg,0.749mmol)的反应容器加热至70℃并搅拌3小时。然后将混合物冷却至室温，用水(20mL)、CH₂Cl₂(20mL)稀释，并穿过硅藻土垫过滤。分离各相，并将水相用CH₂Cl₂(10mL x 2)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na₂SO₃干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(12g SiO₂,Combi-flash,5-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物4,6-二氯-1-环丙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-7)(132mg,72％)。LCMS[M+H]＝227.9观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:8.06(s,1H),7.46(s,1H),3.57-3.63(m,1H),1.21-1.26(m,4H)。

根据方案HG-8制备4,6-二氯-1-(二氟甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-8)

方案HG-8

步骤1:4,6-二氯-1-(二氟甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-8)的合成

在室温(30℃)向4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-2a)(300mg,1.60mmol)和KF(275mg,4.73mmol)在MeCN(10mL)中的溶液中加入(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(HG-8a)(511mg,1.91mmol)并搅拌18小时。然后将反应在真空下浓缩，然后通过快速柱色谱法(40gSiO₂,Combi-flash,5-20％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物4,6-二氯-1-(二氟甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-8)(120mg,32％)。LCMS[M+H]＝237.9观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:8.24(s,1H),7.67(s,1H),7.46(t,J＝59.0Hz,1H)。

根据方案HG-9制备4,6-二氯-1-(氟甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-9)

方案HG-9

步骤1:4,6-二氯-1-(氟甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-9)的合成

向4,6-二氯-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(HG-2a)(150mg,0.798mmol)和Cs₂CO₃(520mg,1.60mmol)在无水DMF(3mL)中的黄色悬浮液中加入氟(碘)甲烷(162.3mg,1.015mmol)。将得到的深灰色混合物在室温(27℃)搅拌1.5小时。TLC(石油醚:EtOAc＝2:1,UV和I₂)显示反应完全。将得到的混合物用水(10mL)稀释，并用EtOAc(10mL*3)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10mL*3)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(EtOAc/石油醚＝0％至12％,12g硅胶柱)纯化以提供为浅黄色固体的标题化合物4,6-二氯-1-(氟甲基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-9)(131mg,74.6％)。¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δ＝8.24(s,1H),7.48(s,1H),6.30(d,J＝53.8Hz,2H)。

根据方案HG-11制备6-氯-4-(甲基氨基)-5-硝基吡啶-2-甲酸甲酯(Int-HG-11)

方案HG-11

步骤1:2,6-二氯-N-甲基-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11b)的合成

在室温向含有在MeCN(30mL)中的2,6-二氯-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11a)(2.00g,9.61mmol)和K₂CO₃(2.66g,19.2mmol)的反应容器中加入碘甲烷(0.921mL,14.8mmol)。将混合物加热至90℃保持5小时，然后加入另外的碘甲烷(0.898mL,14.4mmol)并在90℃搅拌5小时。然后向反应中加入另外的碘甲烷(1.20mL,19.2mmol)，并将反应在90℃搅拌8小时。将反应冷却至室温，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(80g SiO₂,Combi-flash,5-20％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物2,6-二氯-N-甲基-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11b)(960mg,45％)。LCMS[M+H]＝221.8观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:6.80(br s,1H),6.68(s,1H),3.02(d,J＝5.0Hz,3H)。

步骤2:2-氯-6-乙烯基-N-甲基-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11c)的合成

将2,6-二氯-N-甲基-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11b)(1.06g,4.77mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(882mg,5.73mmol)、CsF(2.18g,14.3mmol)、Pd(PPh₃)₂Cl₂(335mg,0.477mmol)在1,4-二氧杂环己烷(10.6mL)和H₂O(5.3mL)中的溶液用N₂脱气3次，加热至90℃，并搅拌16小时。将反应冷却至室温，用EtOAc(20mL)稀释，经Na₂SO₄干燥，穿过硅藻土垫过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(80g SiO₂,Combi-flash,3-15％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物2-氯-6-乙烯基-N-甲基-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11c)(385mg,38％)。LCMS[M+H]＝213.9观察值；¹HNMR(氯仿-d)δ:6.96-7.08(m,2H),6.60(s,1H),6.53(dd,J＝16.6,1.8Hz,1H),5.68(dd,J＝10.5,1.7Hz,1H),2.99(d,J＝5.1Hz,3H)。

步骤3:6-氯-4-(甲基氨基)-5-硝基吡啶-2-甲酸(HG-11d)的合成

在27℃向含有在丙酮(9mL)中的2-氯-6-乙烯基-N-甲基-3-硝基吡啶-4-胺(HG-11c)(340mg,1.59mmol)的反应容器中加入NaHCO₃(67mg,0.80mmol)和KMnO₄(755mg,4.77mmol，历时30分钟逐份加入)。将溶液搅拌4小时，然后用MeOH(3mL)、H₂O(3mL)稀释，并用NaOH(2N)碱化至pH 10。分离各相，并将水相用EtOAc(10mL x 3)萃取。然后将得到的水层用HCl(2N)酸化至pH 1～2，并过滤以除去沉淀物。将滤液用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机相经Na₂CO₃干燥，过滤，并在真空下浓缩以提供为黄色固体的粗制标题化合物6-氯-4-(甲基氨基)-5-硝基吡啶-2-甲酸(HG-11d)(208mg,56％)，将其不经进一步纯化而使用。

步骤4:6-氯-4-(甲基氨基)-5-硝基吡啶-2-甲酸甲酯(Int-HG-11)的合成

向含有在DMF(1.8mL)中的6-氯-4-(甲基氨基)-5-硝基吡啶-2-甲酸(HG-11d)(178mg,0.769mmol)的反应容器中加入K₂CO₃(212mg,1.54mmol)和碘甲烷(0.057mL,0.922mmol)。将反应在室温搅拌2小时，然后用H₂O(5mL)稀释。分离各相，将水相用EtOAc(10mL x 3)萃取，并将合并的有机相用盐水(15mL x 3)洗涤。将有机相经Na₂CO₃干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,5-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物6-氯-4-(甲基氨基)-5-硝基吡啶-2-甲酸甲酯(Int-HG-11)(108mg，三个合并批次43％)。LCMS[M+H]＝245.9观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:8.07(br s,1H),6.81(s,1H),3.98(s,3H),3.08(d,J＝5.0Hz,3H)。

尾基(TG)中间体的制备：

根据方案TG-1制备1-乙基-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-1)。

方案TG-1

步骤1:2-溴-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)乙-1-酮(TG-1b)的合成

向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-1a)(3g,19.4mmol)在无水DCM(100mL)中的黄色悬浮液中加入DMF(0.1mL)，随后缓慢加入(COCl)₂(3.0mL,35mmol)。将反应在室温搅拌0.5小时。将溶液在真空下浓缩并将粗残余物用DCM(各50mL)共蒸发2次。将产物不经进一步纯化用在下一反应中。将产物溶解在MeCN(100mL)中，在冰水浴中冷却，并在0℃加入TMSCHN₂(4890mg,42.8mmol)。将反应在室温搅拌2小时，然后将HBr(在AcOH中的33％溶液,8.3mL,50mmol)以维持内部温度低于30℃的速率加入溶液中。将反应在室温搅拌2小时。将反应混合物用EtOAc(100mL)和水(100mL)稀释并转移至分液漏斗。分离各相，并将水层用EtOAc(100mL)萃取。将合并的有机萃取物用3份盐水(各50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(220g SiO₂,Combi-flash,85-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色油的标题化合物2-溴-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)乙-1-酮(TG-1b)(2.65g,59％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝6.68(s,1H),4.52(q,J＝7.1Hz,2H),4.29(s,2H),2.31(s,3H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H)。

步骤2:1-乙基-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-1)的合成

将2-溴-1-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)乙-1-酮(TG-1b)(3.20g13.8mmol)在甲酰胺(14.0mL)中的浅黄色混合物加热至140℃并搅拌16小时。将反应混合物用DCM(40mL)稀释并转移至分液漏斗。分离各相，并将甲酰胺相用3份DCM(各30mL)萃取。将合并的DCM萃取物在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(80g SiO₂,Combi-flash,0-100％EtOAc/石油醚，然后0-5％MeOH/EtOAc)纯化以提供含有残余甲酰胺的所需产物。将混合物溶解在EtOAc中，用1NHCl水溶液(4mL)稀释，并转移至分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(各30mL)萃取。然后，将水相的pH用2N NaOH水溶液调节直到pH＝～10。将水相用3份EtOAc(各50mL)萃取。将来自该阶段的合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(80g SiO₂,Combi-flash,0-5％MeOH/EtOAc)纯化以提供为黄色固体的标题化合物1-乙基-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-1)(790mg,32％)，其被约2当量的甲酰胺污染。将如此得到的物质不经进一步纯化使用。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.71(d,J＝0.9Hz,1H),7.18(d,J＝1.0Hz,1H),6.16(s,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),2.28(s,3H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H)。

采用商购可得的1-乙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-甲酸作为起始原料和本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，根据在用于合成1-乙基-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-1)的步骤1-2中使用的方法制备下表中的中间体。

根据方案TG-2制备2-乙基-1',4-二甲基-1'H-1,4'-联咪唑(Int-TG-2)。

方案TG-2

步骤1:2-乙基-1',4-二甲基-1'H-1,4'-联咪唑(Int-TG-2)的合成

向4-碘-1-甲基咪唑(TG-2a)(500mg,2.40mmol)和2-乙基-5-甲基-1H-咪唑(TG-2b)(530mg,4.81mmol)在无水DMF(10mL)中的混合物中加入Cs₂CO₃(3.13g 9.62mmol)、CuI(458mg,2.40mmol)、L-脯氨酸(332mg,2.88mmol)。将得到的混合物用N₂冲洗2分钟，密封，加热至120℃(加热块)，并搅拌40小时。将反应混合物用水(20mL)稀释并转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(各20mL)萃取。将水相用盐水饱和，并用另外3份EtOAc(各20mL)萃取。将合并的有机萃取物用3份盐水(各15mL)洗涤。将合并的水性盐水洗液用3份EtOAc(各10mL)反萃取。将有机萃取物再次合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,0-10％MeOH/DCM)纯化以产生为黄色油的所需产物，其被残余DMF污染。将所述油用DCM/MeOH(10:1,20mL)稀释并转移至分液漏斗。将溶液用3份盐水(各15mL)洗涤。将有机相干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,0-10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色油的标题化合物2-乙基-1',4-二甲基-1'H-1,4'-联咪唑(Int-TG-2)(140mg,30％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.36(s,1H),6.83(d,J＝1.5Hz,1H),6.80(s,1H),3.74(s,3H),2.77(q,J＝7.5Hz,2H),2.24(d,J＝0.8Hz,3H),1.28(t,J＝7.5Hz,3H)。

根据方案TG-3制备1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)。

方案TG-3

步骤1:1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(TG-3b)的合成

将3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(TG-3a)(11.5g,74.6mmol)和3-(苄氧基)丙-1-醇(13.0g,78.3mmol)在THF(300mL)中的溶液在冰水浴中冷却，随后逐滴加入P(n-Bu)₃(33.2g,164mmol)和DIAD(31.7g,157mmol)，同时维持内部反应温度低于10℃。移开冰浴并将无色反应溶液在室温搅拌16小时。将反应混合物在真空下浓缩并将如此得到的粗残余物通过快速柱色谱法(330g SiO₂,Combi-flash,0-15％EtOAc/石油醚)纯化以提供为无色油的标题化合物1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(TG-3b)(21.4g,94％)。LCMS[M+H]＝302.8观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.43-7.25(m,5H),6.64(s,1H),4.50(t,J＝7.1Hz,2H),4.44(s,2H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),3.41(t,J＝6.1Hz,2H),2.18(s,3H),2.06-1.95(m,2H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)。

步骤2:1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-3c)的合成

向1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(TG-3b)(21.4g,70.8mmol)在MeOH(70mL)中的溶液中加入THF(350mL)和LiOH(4.45g,106mmol)的1N水溶液(106mL)。将反应在室温搅拌24小时。将反应混合物在真空下浓缩以除去挥发性溶剂。将如此得到的水性悬浮液转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用EtOAc(50mL)萃取。然后将水相的pH用1N HCl水溶液调至pH＝～1，并用2份EtOAc(各150mL)萃取。将这些有机萃取物合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩以提供为白色固体的标题化合物1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-3c)(18.3g,94％)。LCMS[M+H]＝274.8观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝13.20(br s,1H),7.39-7.23(m,5H),6.59(s,1H),4.50(t,J＝7.2Hz,2H),4.44(s,2H),3.41(t,J＝6.3Hz,2H),2.17(s,3H),2.00(quin,J＝6.7Hz,2H)。

步骤3:1-{1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-2-溴乙-1-酮(TG-3d)的合成

反应以两批一组的方式进行，每批6.6g起始原料。向1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-3c)(6.60g,24.1mmol)在DCM(2000mL)中的无色溶液中加入DMF(0.3mL)，随后逐滴加入(COCl)₂(3.66mL,43.3mmol)。将反应在室温搅拌1小时，然后在真空下浓缩。将粗残余物与DCM(各100mL)一起共蒸发另外3次。将产物不经进一步纯化用在下一步中。将粗产物溶解在MeCN(200mL)中，将溶液在冰水浴中冷却，随后在0℃在惰性气氛下逐滴加入TMSCHN₂(在己烷中的2M溶液，26.5mL,52.9mmol)。将反应在室温搅拌18小时。在该阶段，以维持内部温度的速率加入HBr(在AcOH中的33％溶液,10.3mL,62.6mmol)。将反应在室温搅拌1.5小时。将两个反应批次合并，用水(100mL)淬灭，并转移至含有EtOAc(200mL)的分液漏斗。分离各相，并将水相用EtOAc(100mL)萃取。将合并的有机萃取物用1份盐水(200mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(330g SiO₂,Biotage,0-19％EtOAc/石油醚)纯化以提供为淡黄色油的标题化合物1-{1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-2-溴乙-1-酮(TG-3d)(11.3g,66％)。LCMS[M+H]＝351.8观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.37-7.34(m,4H),7.33-7.29(m,1H),6.68(s,1H),4.63(t,J＝7.2Hz,2H),4.51(s,2H),4.27(s,2H),3.53(t,J＝6.1Hz,2H),2.32(s,3H),2.16-2.09(m,2H)。

步骤4:1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)的合成

反应以10批一组的方式进行，每批1.13g起始原料。将1-{1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-2-溴乙-1-酮(TG-3d)在甲酰胺(2.0mL)中的溶液加热至140℃并搅拌16小时。使所有批次历时24小时冷却至室温，然后合并。将合并的溶液用DCM稀释并转移至分液漏斗。分离各相，并将甲酰胺相用DCM(30mL)萃取。将合并的DCM萃取物用水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法[220g SiO₂,Biotage,0-7％MeOH/(EtOAc/DCM 1:1)]纯化以在静置后提供为棕色固体的标题化合物1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)(5.4g,47％)。LCMS[M+H]＝297.0观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝12.31(br s,1H),7.75(s,1H),7.44(s,1H),7.38-7.25(m,5H),6.16(s,1H),4.46(br t,J＝6.9Hz,2H),4.41(s,2H),3.42(t,J＝6.2Hz,2H),2.14(s,3H),2.04-1.95(m,2H)。

根据用于合成1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的中间体。

采用3-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(PCT Int.Appl.,2017198341,2017年11月23日)作为起始原料和本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，根据在用于合成1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)的步骤2-4中使用的方法制备下表中的中间体。

根据方案TG-10制备1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-10)。

方案TG-10

步骤1:1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1H-吡唑(TG-10a)的合成

向含有1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(1.0g,7.24mmol)的100mL烧瓶中加入DCM和间氯过氧苯甲酸(mCPBA)(3.24g,77％纯度,14.5mmol)。将溶液加热至40℃保持1小时。将反应冷却至室温，用DCM稀释，用饱和Na₂SO₃水溶液、2份饱和Na₂CO₃水溶液、盐水的混合物洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空下浓缩以提供甲酸1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基酯(1g)，将其不经进一步纯化而使用。向含有甲酸1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基酯(1g,6.49mmol)的100mL烧瓶中加入MeOH和Et₃N(0.9mL,6.48mmol)。将溶液在室温搅拌30分钟。将溶液在真空中浓缩以提供为粉红色油的1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-醇，将其不经进一步纯化而使用。向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-醇(546mg,4.33mmol)和PMBCl(749mg,4.78mmol)在DMF(8.5mL)中的溶液中加入K₂CO₃(660mg,4.77mmol)。将反应在25℃搅拌16小时。将反应用H₂O(25mL)淬灭并转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(各20mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20gSiO₂,Combi-flash,60-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供为白色固体的标题化合物1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1H-吡唑(TG-10a)(903mg,84％)。LCMS[M+H]＝247.0观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.33(d,J＝8.8Hz,2H),6.96(s,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),4.81(s,2H),4.00(q,J＝7.3Hz,2H),3.83(s,3H),2.19(s,3H),1.41(t,J＝7.4Hz,3H)。

步骤2:1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(TG-10b)的合成

在N₂气氛下向1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1H-吡唑(TG-10a)(186mg,0.756mmol)在无水THF(3.7mL)中的无色溶液中加入(1,5-环辛二烯)(甲氧基)铱(I)二聚体(18.0mg,0.027mmol)、4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶(203mg,0.756mmol)和4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂硼杂环戊烷(246mg,1.92mmol)。将反应混合物加热至60℃并在惰性气氛下搅拌18小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将溶液在真空下浓缩并将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,5-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为无色油的标题化合物1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(TG-10b)(108mg,38％)。LCMS[M+H]＝373.2观察值。

步骤3:1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-10)的合成

向1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(TG-10b)(108mg,0.291mmol)和4-碘-1-甲基-1H-咪唑(89.3mg,0.429mmol)在DMF(2.0mL)/H₂O(0.50mL)中的混合物中加入K₃PO₄(185mg,0.874mmol)和cataCXium A-Pd-G3(10.6mg,0.015mmol)。将反应用N₂冲2分钟，密封，加热至80℃，并在惰性气氛下搅拌16小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将溶液用H₂O(5mL)稀释并转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(各10mL)萃取。将合并的有机萃取物用3份盐水(各15mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,0-7.5％MeOH/DCM)纯化以提供为淡黄色胶的标题化合物1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-10)(45.6mg,48％)。LCMS[M+H]＝327.2观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.58(br s,1H),7.26(d,J＝8.8Hz,2H),7.17(d,J＝0.8Hz,1H),6.87(d,J＝8.5Hz,2H),4.75(s,2H),4.51(q,J＝7.0Hz,2H),3.82(s,3H),3.72(s,3H),2.14(s,3H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。

根据方案TG-11制备4-氯-1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-11)。

方案TG-11

步骤1:4-氯-1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-11)的合成

向1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(A-1)(100mg,0.526mmol)在无水DMF(3.5mL)中的黄色悬浮液中加入NCS(105mg,0.788mmol)。将反应在室温搅拌10小时。将反应用H₂O(5mL)淬灭并转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(各10mL)萃取。将合并的有机萃取物在真空下浓缩并将粗残余物通过制备型薄层色谱法(SiO₂,10％MeOH/DCM)纯化以提供为橙色油的标题化合物4-氯-1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-11)(101mg,85％)。LCMS[M+H]＝225.0观察值；¹HNMR(400MHz，甲醇-d₄)δ＝8.31(s,1H),7.69(d,J＝1.0Hz,1H),4.25(q,J＝7.3Hz,2H),3.90(s,3H),2.24(s,3H),1.32(t,J＝7.2Hz,3H)。

根据方案TG-15制备5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-15)。

方案TG-15

步骤1:1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-15a)的合成

在0℃在N₂下向1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)(900mg,3.04mmol)在THF(25mL)中的深黄色部分溶解溶液中加入NaH(60重量％矿物油)(364mg,9.11mmol)。将反应在0℃搅拌15分钟，在此期间观察到气体产生并形成深黄色悬浮液。在该阶段，加入碘乙烷(616mg,3.95mmol)在THF(2mL)中的溶液。将反应在0℃搅拌30分钟，在此时移开冰浴。将反应温热至25℃并搅拌16小时。将反应在冰水浴(0℃)中冷却并通过逐滴加入H₂O(20mL)进行淬灭。将反应混合物转移至含有EtOAc的分液漏斗并进行相分离。将水相用3份EtOAc(20mL)萃取。将合并的有机萃取物用1份盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,0-10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色油的标题化合物1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-15a)(858mg,87％)。LCMS[M+H]＝325.1观察值；¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.50(s,1H),7.38-7.30(m,5H),7.18(s,1H),6.24(s,1H),4.54-4.46(m,4H),3.89-3.80(m,2H),3.55(t,J＝6.0Hz,2H),2.30(s,3H),2.24-2.16(m,2H),1.39(t,J＝7.3Hz,3H)。

步骤2:3-[5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]丙-1-醇(TG-15b)的合成

在0℃在N₂下向1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-15a)(859mg,2.65mmol)在DCM(25mL)中的黄色溶液中逐滴加入BCl₃(931mg,7.94mmol)。将得到的黄色悬浮液温热至室温(22℃)并搅拌16小时。将反应在冰水浴(0℃)中冷却并用MeOH(5mL)淬灭。将溶液通过加入NH₃/MeOH(7M)中和至pH～7。将溶液从冰浴移开并在搅拌下历时30分钟逐渐温热至室温。将悬浮液过滤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SIO₂,0-10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色固体的标题化合物3-[5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]丙-1-醇(TG-15b)(180mg,29％)。LCMS[M+H]＝235.2观察值。

步骤3:5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-15)的合成

在0℃在N₂下向3-[5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]丙-1-醇(TG-15b)(180mg,0.768mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入NaH(60重量％矿物油)(76.8mg,1.92mmol)。将反应在0℃搅拌15分钟，在此期间观察到气体产生并形成深黄色悬浮液。在该阶段，加入碘甲烷(164mg,1.15mmol)在THF(1mL)中的溶液。将反应在0℃搅拌30分钟，在此时移开冰浴。将反应温热至25℃并搅拌1小时。将反应在冰水浴(0℃)中冷却并通过逐滴加入H₂O(15mL)进行淬灭。将反应混合物转移至含有EtOAc的分液漏斗并进行相分离。将水相用3份EtOAc(20mL)萃取。将合并的有机萃取物用1份盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(4g SiO₂,0-10％MeOH/DCM)纯化以提供为棕色油的标题化合物5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-15)(148mg,77％)。LCMS[M+H]＝249.0观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.65(s,1H),7.23(s,1H),6.27(s,1H),4.47(t,J＝7.1Hz,2H),4.07(q,J＝7.3Hz,2H),3.41(t,J＝6.1Hz,2H),3.31(s,3H),2.30(s,3H),2.14(quin,J＝6.6Hz,2H),1.54(t,J＝7.4Hz,3H)。

根据方案TG-16制备4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-16)。

方案TG-16

步骤1:2-烯丙基肼-1-甲酸叔丁酯(TG-16a)的合成

在室温(15℃)向烯丙基溴(35.8mL,413mmol)和肼甲酸叔丁酯(65.5g,496mmol)在DMSO(150mL)中的溶液中加入NEt₃(72.0mL,413mmol)。将混合物加热至50℃并搅拌15小时。然后将反应用EtOAc(400mL)稀释并用NaHCO₃水溶液碱化至pH 8-9。分离各相，并将水相用EtOAc(400mL)萃取。将有机萃取物用盐水(100mL x 2)、水(100mL)洗涤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(220g x 2和80g SiO₂柱,Combi-flash,0-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为无色油的标题化合物2-烯丙基肼-1-甲酸叔丁酯(TG-16a)(31g,44％)，其在静置后固化。¹H NMR(DMSO-d₆)δ:8.16(br s,1H),5.71-5.83(m,1H),5.14(dq,J＝17.3,1.7Hz,1H),5.01-5.08(m,1H),4.41-4.49(m,J＝4.8Hz,1H),3.27-3.32(m,2H),1.38(s,9H)。

步骤2:烯丙基肼(TG-16b)的合成

在15℃向2-烯丙基肼-1-甲酸叔丁酯(TG-16a)(28g,163mmol)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液中加入HCl/二氧杂环己烷(224mL,894mmol,4M)并在25-30℃搅拌20小时。然后向混合物中加入MeOH(100mL)并在25℃搅拌4小时。将反应浓缩至3/4体积，并加入另外的MeOH(50mL)，随后加入HCl/MeOH(200mL,800mmol,4M)和HCl/二氧杂环己烷(100mL,400mmol,4M)。将混合物在25-30℃搅拌另外20小时，然后在真空下浓缩以提供为白色固体的标题化合物烯丙基肼(TG-16b)(24g,100％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ:5.79-5.93(m,1H),5.25-5.39(m,2H),3.49-3.56(m,2H)。

步骤3:1-烯丙基-2-(丙-2-亚基)肼(TG-16c)的合成

在15℃向烯丙基肼(TG-16b)(24.0g,165mmol)在CH₂Cl₂(331mL)中的溶液中加入丙酮(14.0mL,190mmol)和K₂CO₃(80.0g,579mmol)。将反应在20℃搅拌20小时，然后将混合物过滤，用CH₂Cl₂(300mL x 2)洗涤，并将滤液在真空下浓缩以提供为黄色油的标题化合物1-烯丙基-2-(丙-2-亚基)肼(TG-16c)(16.8g,90％)。¹H NMR(氯仿-d)δ:5.92-6.04(m,1H),5.09-5.24(m,2H),4.45(br s,1H),3.75-3.82(m,2H),1.94(s,3H),1.76(s,3H)。

步骤4:1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(TG-16d)的合成

在0℃向含有DMF(100mL)的反应容器中逐滴加入POCl₃(37.1mL,406mmol)并搅拌1小时。将混合物冷却至-20至-30℃并逐滴加入1-烯丙基-2-(丙-2-亚基)肼(TG-16c)(17.9g,159mmol)在DMF(100mL)中的溶液。将反应在-15℃搅拌1.5小时，温热至室温，然后加热至80℃保持5小时。然后将反应冷却至室温，缓慢地倒入冰水(200mL)中，并用30％NaOH水溶液(约70g的固体NaOH)碱化至pH 9-10。然后将各相分离，并将水相用CH₂Cl₂(500mL x1,200mL x 2)萃取，用盐水(300mL x 3)洗涤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(120g SiO₂,Combi-flash,4-45％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色油的标题化合物1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(TG-16d)(19g,79％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ:9.81(s,1H),8.35(s,1H),5.95-6.06(m,1H),5.13-5.26(m,2H),4.74(dt,J＝5.9,1.4Hz,2H),2.35(s,3H)。

步骤5:1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-醇(TG-16f)的合成

在10℃向1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(TG-16d)(19.0g,126mmol)在CHCl₃(316mL)中的溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(benzoperoxoic acid)(25.7g,127mmol)并在25-30℃搅拌40小时。然后将反应过滤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(120g SiO₂,Combi-flash,0-20％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色半固体的化合物甲酸1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基酯(TG-16e)(21g)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝167.0观察值。在15℃向甲酸1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基酯(TG-16e)(21g)在MeOH(150mL)和H₂O(20mL)中的溶液中加入NaHCO₃(12.7g,152mmol)并搅拌5小时。将反应混合物过滤，用MeOH洗涤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(80g SiO₂,Combi-flash,10-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色油的标题化合物1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-醇(TG-16f)(11g，经两步63％)。LCMS[M+H]＝138.9观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.02(s,1H),5.90-6.01(m,1H),5.14-5.26(m,2H),4.51-4.59(m,2H),2.19(s,3H)。

步骤6:1-烯丙基-4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16g)的合成

在15℃向1-烯丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-醇(TG-16f)(11.1g,80.2mmol)和K₂CO₃(16.6g,120mmol)在DMF(186mL)中的溶液中加入苄基溴(10.5mL,88.2mmol)。将混合物加热至50℃并搅拌20小时。然后将反应冷却至室温，缓慢地倒入冰水(400mL)中，并用EtOAc(300mL)稀释。然后将各相分离，并将水相用EtOAc(200mL x 2)萃取，用水(200mL x 2)、盐水(200mL x 2)洗涤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(120g SiO₂,Combi-flash,0-40％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色油的标题化合物1-烯丙基-4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16g)(14.6g,80％)。LCMS[M+H]＝229.0观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.30-7.43(m,5H),6.97(s,1H),5.91-6.03(m,1H),5.14-5.26(m,2H),4.89(s,2H),4.54-4.59(m,2H),2.21(s,3H)。

步骤7:4-(苄氧基)-1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16i)的合成

在0℃在N₂下向1-烯丙基-4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16g)(4.40g,19.3mmol)在THF(110mL)中的溶液中逐滴加入9-硼杂二环[3.3.1]壬烷(77.1mL,38.5mmol,0.5M在THF中)。将混合物加热至20-30℃并搅拌3小时。然后将反应冷却至0℃并逐滴加入NaOH水溶液(4.75mL,71.3mmol,6M)，随后加入H₂O₂(7.28mL,71.3mmol)。将混合物在0-15℃搅拌30分钟。将反应冷却至0-5℃，用Na₂SO₃水溶液(30g,150mL H₂O)淬灭，并搅拌15分钟。然后将各相分离，并将水相用MTBE/EtOAc(100mL x 2,1:1v/v)萃取，将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,10-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色油的化合物3-(4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)丙-1-醇(TG-16h)(5.30g)。¹H NMR(氯仿-d)δ:7.31-7.44(m,5H),6.96(s,1H),4.89(s,2H),4.07-4.11(m,2H),3.60(q,J＝5.5Hz,2H),2.91(t,J＝5.8Hz,1H),2.19(s,3H),1.97(quin,J＝6.0Hz,2H)。在0℃向3-(4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)丙-1-醇(TG-16h)(5.30g)在CH₂Cl₂(100mL)中的溶液中加入咪唑(2.20g,32.3mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(3.57g,32.7mmol)。将混合物温热至室温(15-25℃)并搅拌15小时。然后将反应用H₂O(100mL)淬灭并用CH₂Cl₂(50mL)稀释。然后将各相分离，并将水相用CH₂Cl₂(50mL)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(80g SiO₂,Combi-flash,0-15％EtOAc/石油醚)纯化以提供为无色油的标题化合物4-(苄氧基)-1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16i)(5.2g,75％)。

步骤8:3-(4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)丙-1-醇(TG-16j)的合成

在室温向4-(苄氧基)-1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16i)(1.49g,4.13mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(4.2mL,4.2mmol,1.0M在THF中)。然后将混合物在真空下浓缩，并将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,0-5％MeOH/(1:1EtOAc:CH₂Cl₂))纯化以提供为黄色油的标题化合物3-(4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)丙-1-醇(TG-16j)(974mg,96％)，其在静置后固化。¹H NMR(氯仿-d)δ:7.30-7.44(m,5H),6.96(s,1H),4.89(s,2H),4.06-4.14(m,2H),3.60(t,J＝5.7Hz,2H),2.20(s,3H),1.97(quin,J＝6.0Hz,2H)。

步骤9:4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16k)的合成

在0℃向3-(4-(苄氧基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)丙-1-醇(TG-16j)(971mg,3.94mmol)在THF(13mL)中的溶液中加入NaH(190mg,4.70mmol)。将混合物温热至20℃并搅拌15分钟。然后向反应中逐滴加入碘甲烷(655mg,4.62mmol)在THF(2mL)中的溶液，并在20℃搅拌1小时。将反应用H₂O(5mL)淬灭并分离各相。将水相用EtOAc(5mL x3)萃取，将有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空中浓缩以提供为黄色油的标题化合物4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16k)(1.03mg,101％)。¹H NMR(氯仿-d)δ:7.30-7.45(m,5H),6.95(s,1H),4.90(s,2H),4.04(t,J＝6.8Hz,2H),3.26-3.31(m,5H),2.22(s,3H),1.98-2.08(m,2H)。

步骤10:4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-16)的合成

在-65℃(内部温度)向4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-16k)(373mg,1.43mmol)在无水THF(7.2mL)中的溶液中逐滴加入n-BuLi(1.5mL,3.8mmol,2.5M在己烷中)以维持内部温度低于-60℃，并将混合物搅拌1.5小时。然后向反应中加入硼酸三异丙酯(3.3mL,14mmol)，将反应从冷浴移开，逐渐温热至室温，并搅拌16小时。将反应用饱和NH₄Cl水溶液(3mL)、随后用H₂O淬灭。分离各相，将水相用EtOAc(8mL x 3)萃取，将有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空中浓缩以提供为黄色胶的化合物(4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)硼酸(TG-16l)(529mg)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝305.1观察值。将含有在DMF(8mL)和H₂O(2mL)中的(4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基)硼酸(TG-16l)(529mg)、4-碘-1-甲基-1H-咪唑(325mg,1.56mmol)、K₃PO₄(885mg,4.17mmol)、cataCXium A Pd G3(56mg,0.077mmol)的反应容器用N₂回填，加热至80℃并搅拌22小时。然后将反应用H₂O(20mL)稀释，分离各相，将水相用EtOAc(20mL x 4)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,0-21％EtOAc/石油醚，然后20％MeOH/EtOAc)纯化并通过制备型薄层色谱法(EtOAc/MeOH 10:1)重新纯化以提供为黄色胶的标题化合物4-(苄氧基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-16)(31mg，经两步6.4％)。LCMS[M+H]＝341.1观察值。¹H NMR(氯仿-d)δ:7.47(s,1H),7.30-7.39(m,5H),7.15(s,1H),4.82(s,2H),4.53(t,J＝7.0Hz,2H),3.69(s,3H),3.36(t,J＝6.4Hz,2H),3.27(s,3H),2.15(s,3H),2.03-2.11(m,2H)。

根据方案TG-17制备4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-丙基-1H-吡唑(Int-TG-17)。

方案TG-17

步骤1:4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑(TG-17a)的合成

将含有在MeOH(10mL)和THF(10mL)中的4-(苄氧基)-3-甲基-1-(丙-2-烯-1-基)-1H-吡唑(TG-16g)(505mg,2.21mmol)、湿Pd/C(10％,230mg,0.22mmol)、NEt₃(1.0mL,7.2mmol)的反应容器在H₂(15psi，气球)下在20℃搅拌2小时。然后将反应穿过硅藻土垫过滤并将滤液在真空下浓缩以提供为灰色油的3-甲基-1-(丙-2-烯-1-基)-1H-吡唑-4-醇(378mg)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝140.8观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:6.99(s,1H),3.88(t,J＝7.1Hz,2H),2.18(s,3H),1.79(sxt,J＝7.3Hz,2H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H)。向3-甲基-1-(丙-2-烯-1-基)-1H-吡唑-4-醇(378mg)和1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(390mg,2.49mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入K₂CO₃(342mg,2.48mmol)并在20℃搅拌17小时。然后将反应加热至50℃保持30分钟，然后用H₂O(20mL)稀释。分离各相，并将水相用EtOAc(20mL x 4)萃取。将有机萃取物用盐水(20mL x 3)洗涤，经Na₂SO₃干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(12g SiO₂,Combi-flash,0-80％EtOAc/石油醚)纯化并通过快速柱色谱法(12g SiO₂,Combi-flash,0-60％EtOAc/石油醚)重新纯化以提供为黄色油的标题化合物4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑(TG-17a)(419mg，经两步73％)。LCMS[M+H]＝260.9观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.29-7.35(m,2H),6.88-6.96(m,3H),4.81(s,2H),3.89(t,J＝7.1Hz,2H),3.82(s,3H),2.18(s,3H),1.80(sxt,J＝7.3Hz,2H),0.89(t,J＝7.4Hz,3H)。

步骤2:{4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基}硼酸(TG-17b)的合成

在-65℃(内部温度)向4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑(TG-17a)(337mg,1.29mmol)在无水THF(6.0mL)中的溶液中逐滴加入n-BuLi(1.4mL,3.5mmol,2.5M在己烷中)以维持内部温度低于-60℃，并将混合物搅拌1.5小时。然后向反应中加入硼酸三异丙酯(3.0mL,13mmol)，将反应从冷浴移开，逐渐温热至室温，并搅拌16小时。将反应用H₂O(5mL)淬灭，分离各相，并将水相用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空中浓缩以提供为灰白色油状固体的{4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基}硼酸(TG-17b)(564mg)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝305.0观察值。

步骤3:4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-丙基-1H-吡唑(Int-TG-17)的合成

将含有在1,4-二氧杂环己烷(8.8mL)和H₂O(2.2mL)中的{4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基}硼酸(TG-17b)(564mg)、4-碘-1-甲基-1H-咪唑(299mg,1.44mmol)、K₃PO₄(834mg,3.93mmol)、cataCXium A Pd G3(95mg,0.13mmol)的反应容器用N₂回填，加热至80℃并搅拌22小时。然后将反应用H₂O(20mL)稀释，分离各相，将水相用EtOAc(20mL x 4)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL x 2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过制备型薄层色谱法(SiO₂,EtOAc:MeOH 20:1)纯化以提供为黄色胶的不纯化合物4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-丙基-1H-吡唑(Int-TG-17)(268mg)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝341.1观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.48(s,1H),7.23-7.26(m,2H),7.12-7.16(m,1H),6.85-6.89(m,2H),4.74(s,2H),4.39-4.43(m,2H),3.82(s,3H),3.70(s,3H),2.13(s,3H),1.77-1.85(m,2H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H)。

根据方案TG-18制备1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(Int-TG-18)

方案TG-18

步骤1:1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(Int-TG-18)的合成

向1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(13.0g,71.3mmol)在MeCN(150mL)中的溶液中加入Selectfluor(75.8g,214mmol)，加热至90℃，并搅拌14小时。然后将反应冷却至室温，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(0-5％EtOAc/石油醚)纯化并通过快速柱色谱法(0-5％EtOAc/石油醚)重新纯化以提供为无色油的1-乙基-4-氟-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(Int-TG-18)(11.5g,80％)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝201.0观察值。¹H NMR(氯仿-d)δ:4.35-4.50(m,4H),2.24(s,3H),1.37-1.43(m,6H)。

根据在用于合成1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)的方案TG-3的步骤2-4中使用的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的中间体。

根据方案TG-20制备1-乙基-4-碘-1H-咪唑(Int-TG-20)

方案TG-20

步骤1:1-乙基-4,5-二碘-1H-咪唑(TG-20b)的合成

在0℃向4,5-二碘-1H-咪唑(TG-20a)(1.00g,3.13mmol)在THF(8.0mL)中的溶液中加入分成小份的NaH(138mg,3.44mmol,60％在矿物油中)。将混合物温热至20℃并搅拌1小时。然后向反应中加入乙基溴(1.56mL,20.9mmol)并搅拌18小时。将混合物在真空下浓缩，将残余物溶解于EtOAc(10mL)中，过滤，并在真空下浓缩。然后将残余物在EtOAc:石油醚(1:1,10mL)中在室温研磨15分钟，过滤，并在真空下浓缩以提供为无色固体的标题化合物1-乙基-4,5-二碘-1H-咪唑(TG-20b)(690mg,63％)。LCMS[M+H]＝348.8观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.65(s,1H),4.03(q,J＝7.3Hz,2H),1.42(t,J＝7.3Hz,3H)。

步骤2:1-乙基-4-碘-1H-咪唑(Int-TG-20)的合成

在0℃向1-乙基-4,5-二碘-1H-咪唑(TG-20b)(690mg,1.98mmol)在THF(7.0mL)中的溶液中逐滴加入异丙基氯化镁(0.992mL,1.98mmol,2.0M在THF中)。将混合物在0℃搅拌并搅拌20分钟。然后向反应中加入H₂O(0.5mL)，温热至20℃并搅拌1小时。将混合物在真空下浓缩，并将残余物溶解于EtOAc(5mL)中并过滤。将滤液用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₃干燥，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(12g SiO₂,Combi-flash,0-30％MeOH/CH₂Cl₂)纯化以提供为无色油的标题化合物1-乙基-4-碘-1H-咪唑(Int-TG-20)(300mg,68％)。LCMS[M+H]＝222.9观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.55(s,1H),7.04(d,J＝1.3Hz,1H),4.02(q,J＝7.3Hz,2H),1.47(t,J＝7.4Hz,3H)。

根据在用于合成1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-10)的方案TG-10的步骤3中使用的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的中间体。

根据方案TG-23制备3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(Int-TG-23)

方案TG-23

步骤1:5-溴-3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(TG-23c)和3-溴-5-甲基-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(TG-23c’)的合成

在室温(19℃)向5-溴-3-甲基-1H-吡唑(TG-23a)(1500mg,9.317mmol)和(氧杂环丁烷-3-基)甲醇(TG-23b)(1.5mL,19mmol)在二氧杂环己烷(37.5mL)中的溶液中加入(氰基亚甲基)三丁基膦(4500mg,18.6mmol)。将棕色溶液在室温(19℃)搅拌16小时。LCMS分析表明起始原料仍然剩余。在该阶段，加入(氰基亚甲基)三丁基膦(1000mg,4.143mmol)和(氧杂环丁烷-3-基)甲醇(TG-23b)(334μL,4.15mmol)的另外等分试样并将反应在室温(20℃)搅拌19小时。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并转移至分液漏斗。将溶液用3份盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过反相制备型HPLC(YMC TriartC18250*50mm*7um柱,11-51％MeCN/水(0.05％NH₄OH v/v),60mL/min)纯化。将含有产物的级分收集，并用2份EtOAc(100mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩以提供为黄色油的标题化合物5-溴-3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(TG-23c)和3-溴-5-甲基-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(TG-23c’)(1.71g，约3:2r.r.,79％)。TG-23c(主要产物)¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝6.06(s,1H),4.82(br d,J＝4.9Hz,2H),4.57(t,J＝6.2Hz,2H),4.39(d,J＝7.3Hz,2H),3.60-3.46(m,1H),2.23(s,3H)。TG-23c’(次要产物)¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝6.02(s,1H),4.87-4.77(m,2H),4.49(t,J＝6.1Hz,2H),4.29(d,J＝7.5Hz,2H),3.61-3.43(m,1H),2.29(s,3H)。将位置异构产物的混合物(1588mg)通过制备型SFC进一步纯化以提供为黄色油的所需主要位置异构体5-溴-3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(TG-23c)(950mg)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝6.07(s,1H),4.81(d,J＝6.4Hz,1H),4.79(d,J＝6.5Hz,1H),4.57(t,J＝6.2Hz,2H),4.39(d,J＝7.4Hz,2H),3.62-3.43(m,1H),2.23(s,3H)。

步骤2:3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(Int-TG-23)的合成

在室温(20℃)向5-溴-3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(TG-23c)(325mg,1.41mmol)在甲苯(9mL)中的溶液中加入1-甲基-4-(三丁基甲锡烷基)-1H-咪唑(TG-23d)(650mg,1.4mmol)和Pd(PPh₃)₄(325mg,0.281mmol)。加入以后，将反应混合物在N₂下在100℃搅拌16小时。将反应混合物过滤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Isco,0-5％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色油的标题化合物3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(Int-TG-23)(199mg,61％)。LCMS[M+H]＝233.2观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.50(s,1H),7.05(s,1H),6.09(s,1H),4.83-4.69(m,4H),4.55(t,J＝6.2Hz,2H),3.74(s,3H),3.65-3.51(m,1H),2.25(s,3H)。

根据用于合成3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[(氧杂环丁烷-3-基)甲基]-1H-吡唑(Int-TG-23)的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的中间体。

根据方案TG-25制备1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-25)

方案TG-25

步骤1:1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-25c)的合成

向3-甲基-1H-吡唑(TG-25a)(5.00g,60.9mmol)和1-溴-3-甲氧基丙烷(TG-25b)(18.6g,122mmol)在CH₂Cl₂(40mL)中的溶液中加入Cs₂CO₃(29.3g,89.9mmol)。将反应加热至回流并搅拌14小时。然后将混合物过滤，将滤饼用CH₂Cl₂(60mL)洗涤，并将滤液在真空下浓缩。将残余的1-溴-3-甲氧基丙烷(TG-25b)通过蒸馏(约0.1MPa,33-36℃)除去，并将剩余的粗制的1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-25c)和1-(3-甲氧基丙基)-5-甲基-1H-吡唑(TG-25c’)(7.50g)分离为约3:2位置异构体混合物，将其不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝155.1观察值。

步骤2:三氟[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]硼酸钾(TG-25d)的合成

在0℃向1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(TG-25c)和1-(3-甲氧基丙基)-5-甲基-1H-吡唑(TG-25c’)(1.65g)在THF(43mL)中的溶液中逐滴加入n-BuLi(7.4mL,18mmol,2.5M在己烷中)。将反应搅拌10分钟，然后温热至室温保持2小时。然后将反应冷却至0℃并逐滴加入硼酸三异丙酯(9.9mL,43mmol)。在加入结束后，将反应温热至室温并搅拌2小时。然后将反应冷却至0℃，随后加入KHF₂(3.35g,42.9mmol)和H₂O(3mL)。将反应温热至60℃(内部温度＝45℃)并搅拌2小时。然后加入另外的KHF₂(2.51g,32.1mmol)和H₂O(3mL)，并将反应在80℃(内部温度＝60℃)搅拌1小时。然后将粗制物倾析并在真空下浓缩以提供为棕色油的化合物三氟[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]硼酸钾(TG-25d)(2.20g)，将其不经进一步纯化而使用。

步骤3:1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-25)的合成

将含有三氟[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]硼酸钾(TG-25d)(2.20g)、4-碘-1-甲基-1H-咪唑(1.35g,6.49mmol)、K₃PO₄(4.09g,19.3mmol)、cataCXium A-Pd-G3(237mg,0.326mmol)、H₂O(6.0mL)和1,4-二氧杂环己烷(30mL)的反应容器用N₂回填并在80℃(内部温度)搅拌13小时。将反应过滤，分离各相，并将水相用EtOAc(6mL x 3)萃取。向合并的有机相中加入盐水(20mL)和水(20mL)，分离各相，并将水相用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,0-100％EtOAc/石油醚，然后0-20％MeOH/EtOAc)纯化以提供为棕色油的标题化合物1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-25)(498mg，经3步26％)。LCMS[M+H]＝235.4观察值；¹H NMR(甲醇-d₄)δ:7.73(s,1H),7.41(d,J＝1.2Hz,1H),6.25(s,1H),4.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.81(s,3H),3.32-3.36(m,2H),3.26(s,3H),2.26(s,3H),1.97-2.05(m,2H)。

根据方案TG-27制备[5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]乙腈(Int-TG-27)

方案TG-27

步骤1:1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(TG-27b)的合成

向3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(TG-3a)(3.00g,19.5mmol)和2-溴乙腈(2.80g,2.34mmol)在MeCN(30mL)中的溶液中加入K₂CO₃(5.38g,38.9mmol)，加热至85℃并搅拌5小时。然后将混合物过滤，并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,0-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为灰白色固体的标题化合物1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(TG-27b)(1.75g,46％)。¹H NMR(氯仿-d)δ:6.71(s,1H),5.45(s,2H),4.38(q,J＝7.3Hz,2H),2.30(s,3H),1.39(t,J＝7.0Hz,3H)。

步骤2:1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-27c)的合成

在0℃向1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(TG-27b)(1.85g,9.57mmol)在THF(37mL)和H₂O(9.25mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(442mg,10.5mmol)并搅拌4小时。然后将混合物用HCl水溶液(1N)酸化至pH 1，分离各相，并将水相用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₃干燥，过滤，并在真空下浓缩以提供为黄色固体的标题化合物1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-27c)(1.55g,98％)。LCMS[M+H]＝166.0观察值；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:6.73(s,1H),5.60(s,2H),2.20(s,4H)。

步骤3:1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-27d)的合成

向1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-27c)(1.38g,8.36mmol)和甲氧基胺盐酸盐(978mg,10.0mmol)在无水DMF(23mL)中的溶液中加入HATU(4.77g,12.5mmol)并搅拌10分钟。然后向反应中加入N-N-二异丙基乙胺(2.98mL,16.7mmol)，并将反应搅拌16小时。将反应用H₂O(20mL)稀释，分离各相，并将水相用CH₂Cl₂(20mL x 3)萃取。将合并的有机相用饱和NH₄Cl水溶液(20mL x 3)、饱和Na₂CO₃水溶液(20mL x 3)、盐水(20mL x 3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空中浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,12.5-75％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-27d)(1.91g，经三个合并批次94％)，其含有一些杂质。将该物质不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝209.1观察值。¹H NMR(氯仿-d)δ:6.70(s,1H),5.47(s,2H),3.71(s,3H),2.31(s,3H)。

步骤4:(5-甲酰基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)乙腈(TG-27e)的合成

在-10℃在N₂下向1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(TG-27d)(1.60g,7.68mmol)在无水THF(76.8mL)中的溶液中逐滴加入二丁基氢化铝(15.4mL,15.4mmol,1M)以维持内部温度低于-5℃。将反应在-5℃搅拌2小时，然后用饱和NH₄Cl水溶液(50mL)淬灭，用硅藻土处理，并在室温搅拌15分钟。将混合物过滤，并将滤饼用EtOAc(20mL x 5)洗涤。分离各相，并将水相用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机相经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,5-30％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物(5-甲酰基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)乙腈(TG-27e)(465mg,41％)。¹H NMR(氯仿-d)δ:9.81(s,1H),6.78(s,1H),5.43(s,2H),2.34(s,3H)。

步骤5:N-{(E)-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]亚甲基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(TG-27f)的合成

向(5-甲酰基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)乙腈(TG-27e)(385mg,2.58mmol)在无水THF(7.7mL)中的溶液中加入2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(375mg,3.10mmol)和四乙氧基钛(1.18g,5.16mmol)。将反应在室温搅拌2小时，然后在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20gSiO₂,Combi-flash,10-50％EtOAc/石油醚)纯化以提供为灰白色固体的标题化合物N-{(E)-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]亚甲基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(TG-27f)(607mg,93％)。LCMS[M+H]＝253.8观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:8.52(s,1H),6.60(s,1H),5.62(d,J＝17.1Hz,1H),5.33(d,J＝17.3Hz,1H),2.33(s,3H),1.31(s,9H)。

步骤6:[5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]乙腈(Int-TG-27)的合成

在-5℃向N-{(E)-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]亚甲基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(TG-27f)(540mg,2.14mmol)在MeOH(6.8mL)中的溶液中加入1-((异氰基甲基)磺酰基)-4-甲基苯(460mg,2.35mmol)和K₂CO₃(355mg,2.57mmol)并搅拌30分钟。将反应用饱和NH₄Cl水溶液(10mL)淬灭，分离各相，并将水相用EtOAc(15mL x 3)萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,0-7％MeOH/EtOAc)纯化以提供为灰白色固体的标题化合物[5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]乙腈(Int-TG-27)(78mg,19％)。LCMS[M+H]＝188.0观察值；¹HNMR(甲醇-d₄)δ:7.81(s,1H),7.48(s,1H),6.33(s,1H),5.55(s,2H),2.26(s,3H)。

实施例的制备：

根据方案A制备4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIA01)。

方案A：

步骤1:1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(A-1)的合成

向1-乙基-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-1)(790mg,2.9mmol)和K₂CO₃(1.21g,8.74mmol)在无水MeCN(8.0mL)中的黄色混合物中逐滴加入MeI(455mg,3.21mmol)。将反应在室温搅拌3小时。将反应过滤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,50％EtOAc/DCM)纯化以产生被甲酰胺污染的所需产物。将产物通过制备型薄层色谱法(10％MeOH/DCM)重新纯化以提供为黄色油的标题化合物1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(A-1)(869mg,55％)。LCMS[M+H]＝191.3观察值；¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.49(d,J＝0.7Hz,1H),7.04(d,J＝1.3Hz,1H),6.13(s,1H),4.45(q,J＝7.2Hz,2H),3.74(s,3H),2.29(s,3H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H)。

步骤2:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(A-2)的合成

给反应容器装入1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(A-1)(660mg,3.47mmol)、4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(2.10g,5.17mmol)、Pd(OAc)₂(236mg,1.09mmol)、CuI(200mg,1.05mmol)、PPh₃(273mg,1.04mmol)、Cs₂CO₃(3401.7mg,10.440mmol)、PivOH(385mg,3.77mmol)和PhMe(26mL)。将溶液用N₂冲洗2分钟，密封，并加热至110℃保持27小时。LCMS分析指示起始原料的不完全转化，所以加入Pd(OAc)₂(124mg,0.551mmol)、CuI(101mg,0.529mmol)、PPh₃(139mg,0.529mmol)、Cs₂CO₃(1.14g,3.51mmol)和PivOH(184mg,1.80mmol)的另外等分试样。将反应混合物再次用N₂冲洗2分钟，密封，并加热至110℃保持19小时。将反应物穿过硅藻土垫过滤，并将滤饼用DCM(20mL)洗涤，然后用3份DCM/MeOH(10:1，各10mL)洗涤。将合并的滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Isco,0-100％EtOAc/石油醚，然后10％MeOH/EtOAc)纯化以提供为黄色胶的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(A-2)(1.15g,65％)，其含有一些残余物(A-1)起始原料。将所述物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝515.1观察值。

步骤3:4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIA01)的合成

向含有N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(A-2)(1.15g,1.60mmol)的反应容器中加入HFIP(10mL)，随后逐滴加入MsOH(1.50g,15.6mmol)。将反应在室温搅拌1小时，其伴随暗红色溶液的逐渐形成。将反应在真空下浓缩，并将残余物溶解在DCM(8mL)中。将溶液用7M NH₃/MeOH中和以将pH调至约8，这导致固体的沉淀。将悬浮液在真空下浓缩，并将粗残余物用DCM(20mL)和水(20mL)稀释。在该阶段将未溶解的固体滤出。将滤液转移至分液漏斗并分离各相。将水相用3份DCM(各10mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型薄层色谱法(EtOAc/MeOH/NH₄OH,20:1:0.1)纯化以提供被一些残余物(A-1)污染的所需产物。将如此得到的物质通过快速柱色谱法(SiO₂,Isco,DCM/MeOH,10:1)进行进一步纯化以提供所需产物，其仍然含有残余物(A-1)。将如此得到的米色固体用DMSO稀释并过滤。将滤液通过制备型HPLC(Boston PrimeC18150x30mmx5um柱，27-57％MeCN/H₂O(含有0.05％NH₄OH)，25mL/min)进一步纯化以提供为蓬松白色固体的标题化合物4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIA01)(114mg,20％)。LCMS[M+H]＝365.3观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝8.73(d,J＝0.9Hz,1H),8.35(d,J＝0.6Hz,1H),7.94(br s,1H),7.90(br s,1H),7.86(s,1H),6.32(s,1H),4.55(q,J＝7.1Hz,2H),4.24(s,3H),4.19(s,3H),2.18(s,3H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H)。

根据用于合成4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIA01)的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案B制备4-[1-环丙基-4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIB01)。

方案B：

步骤1:5-(1-环丙基-1H-咪唑-4-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑(B-1)的合成

向含有1-乙基-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-1)(106mg,0.430mmol)的反应容器中加入2,2’-联吡啶(64.3mg,0.412mmol)、Cu(OAc)₂(73.3mg,0.404mmol)、环丙基硼酸(103.6mg,1.21mmol)、Na₂CO₃(134.3mg,1.27mmol)和DCE(1.2mL)。将反应加热至70℃并搅拌3小时。将反应从加热移开并允许冷却至室温。将溶液用水(10mL)稀释并转移至含有DCM(10mL)的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份DCM(各10mL)萃取。将合并的有机萃取物用2份饱和NH₄Cl水溶液(各10mL)、1份盐水(15mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型薄层色谱法(SiO₂,DCM/MeOH 10:1)纯化以提供为深棕色油的标题化合物5-(1-环丙基-1H-咪唑-4-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑(B-1)(45.3mg)，其含有微量杂质。将所述物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝216.8观察值。

步骤2:4-[1-环丙基-4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(B-2)的合成

向含有5-(1-环丙基-1H-咪唑-4-基)-1-乙基-3-甲基-1H-吡唑(B-1)(111mg,0.293mmol)的反应容器中加入4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(175.4mg,0.433mmol)、Pd(OAc)₂(6.6mg,0.029mmol)、CuI(Xantphos)(67.1mg,0.087mmol)、dppf(8.8mg,0.016mmol)、Cs₂CO₃(285mg,0.876mmol)和PhMe(2.7mL)。将容器用N₂净化5个周期。将反应混合物加热至110℃并搅拌15小时。在该阶段的LCMS分析显示，起始原料已经耗尽。加入Pd(OAc)₂(7.8mg,0.035mmol)、4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(60.5mg,0.149mmol)、dppf(10.2mg,0.018mmol)的另外等分试样，并将反应加热至110℃保持8小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将溶液用DCM(10mL)稀释并穿过硅藻土垫过滤。将滤饼用3份DCM(各5mL)洗涤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型薄层色谱法(SiO₂,100％EtOAc)纯化以提供被微量杂质污染的所需产物。将该物质通过制备型薄层色谱法(EtOAc/MeOH 10:1)重新纯化以提供标题化合物4-[1-环丙基-4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(B-2)(109mg)，其含有微量的残余物(B-1)。将所述物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝541.2观察值。

步骤3:4-[1-环丙基-4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(AIB01)的合成

向4-[1-环丙基-4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(B-2)(109mg,0.12mmol)在HFIP(2.0mL)中的黄色溶液中加入MsOH(118mg,1.23mmol)。将反应在室温搅拌2小时，其伴随深紫色溶液的逐渐形成。将溶液在真空下浓缩并与DCM(各5mL)一起共蒸发3次。将粗残余物悬浮于DMSO和MeOH中，随后过滤。将滤液通过制备型HPLC(Boston PrimeC18150x30mmx5um柱,28-58％MeCN/H₂O(含有0.05％NH₄OH),25mL/min)纯化以提供为白色固体的标题化合物4-[1-环丙基-4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(AIB01)(10mg,22％)。LCMS[M+H]＝391.2观察值；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝8.67(d,J＝0.6Hz,1H),8.38(s,1H),7.98(br s,1H),7.87(s,1H),7.84(br d,J＝1.8Hz,1H),6.35(s,1H),4.55(q,J＝7.1Hz,2H),4.48-4.40(m,1H),4.19(s,3H),2.17(s,3H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H),1.08-1.00(m,2H),1.00-0.93(m,2H)。

根据方案C制备1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIC01)。

方案C：

步骤1:6-氯-1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(C-1)的合成

向含有1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(A-1)(196mg,1.03mmol)的反应容器中加入THF(5mL)。将溶液在干冰/AcMe浴中冷却至-78℃。在惰性气氛下向溶液中逐滴加入n-BuLi(505μL,1.26mmol)。加入以后，将反应混合物在-78℃搅拌1小时。然后，在-78℃加入ZnCl₂(1.4mL,380mg,2.8mmol)，然后移开冰浴以使反应逐渐温热至室温。在该阶段，加入4,6-二氯-1-乙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-2)(235mg,1.09mmol)和Pd(PPh₃)₄(255mg,0.221mmol)，将混合物加热至60℃并在惰性气氛下搅拌14小时。将溶液在真空下浓缩，并将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Isco,100％DCM至1％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色固体的标题化合物6-氯-1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(C-1)(115mg,30％)。LCMS[M+H]＝370.1观察值；¹HNMR(400MHz，氯仿-d)δ＝8.86(s,1H),7.29(s,1H),7.24(s,1H),6.22(s,1H),4.67(q,J＝7.2Hz,2H),4.41(q,J＝7.3Hz,2H),4.28(s,3H),2.32(s,3H),1.55(t,J＝7.2Hz,6H)。

步骤2:1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲腈(C-2)的合成

向含有6-氯-1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(C-1)(115mg,0.310mmol)的反应容器中加入DMA(5mL)、Zn(CN)₂(50.0mg,0.426mmol)、Zn粉末(14.4mg,0.220mmol)和(t-Bu₃P)₂Pd(32.7mg,0.064mmol)。将反应溶液用N₂冲洗2分钟，密封，加热至120℃并搅拌16小时。将反应混合物从加热移开，并逐渐冷却至室温。将溶液在硅藻土垫上过滤并将滤饼用2份EtOAc(各5mL)和2份H₂O(各3mL)洗涤。将滤液转移至分液漏斗并分离各相。将水相用3份EtOAc(5mL)萃取。将合并的有机萃取物用3份盐水(各10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩以提供标题化合物1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲腈(C-2)(143mg)，将其不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝361.1观察值。

步骤3:1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIC01)的合成

向含有1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲腈(C-2)(143mg,0.311mmol)的反应容器中加入DMSO(2.7mL)、MeOH(5.5mL)、H₂O₂(243μL,3.11mmol)和NaOH(2M在H₂O中，777μL,1.55mmol)。将反应在25℃搅拌16小时，然后用饱和Na₂SO₃水溶液(2mL)淬灭。将溶液在真空下浓缩并将DMSO悬浮液过滤。将滤液通过制备型HPLC(Waters Xbridge BEH C18100x25mmx5um柱,21-61％MeCN/H₂O,25mL/min)纯化以提供含有微量杂质的所需产物。将该物质通过与MTBE(2mL)一起研磨进一步纯化，并在室温搅拌10分钟。将悬浮液过滤并将滤饼用MTBE(1mL)洗涤。将固体收集并在真空下干燥以提供为淡黄色固体的标题化合物1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIC01)(37mg,31％)。LCMS[M+H]＝379.4观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝8.75(s,1H),8.37(s,1H),7.94(br s,1H),7.89(br s,1H),7.85(s,1H),6.30(s,1H),4.60(q,J＝7.3Hz,2H),4.55(q,J＝7.0Hz,2H),4.24(s,3H),2.18(s,3H),1.45(t,J＝7.1Hz,3H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H)。

根据用于合成1-乙基-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIC01)的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案D制备4-(2-乙基-1',4-二甲基-1'H-[1,4'-联咪唑]-2'-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AID01)。

方案D：

步骤1:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-(2-乙基-1',4-二甲基-1'H-[1,4'-联咪唑]-2'-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(D-1)的合成

向含有2-乙基-1',4-二甲基-1'H-1,4'-联咪唑(Int-TG-2)(135mg,0.710mmol)的反应容器中加入无水THF(5.0mL)，并将溶液在干冰/AcMe浴中冷却至-78℃。在-78℃在惰性气氛下向溶液中逐滴加入n-BuLi(0.6mL,1.50mmol)。将得到的混合物在-78℃搅拌2小时。在该阶段，在-78℃逐滴加入ZnCl₂(2M在Me-THF中，0.88mL,1.8mmol)并将反应搅拌10分钟，在此时移去干冰/AcMe浴，使溶液历时30分钟逐渐温热至室温。然后给容器装入4-溴-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(317mg,0.782mmol)和Pd(PPh₃)₄(82.0mg,0.071mmol)。将得到的棕色悬浮液用N₂冲洗2分钟，密封，并在搅拌下在80℃加热18小时。将反应容器从加热移开并逐渐冷却至室温。将溶液用DCM/MeOH(10:1)稀释并穿过硅藻土垫过滤。将滤液在真空下浓缩并将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,2.5-15％MeOH/DCM)纯化以提供被微量杂质污染的所需产物。将该物质通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,50-100％EtOAc/石油醚)重新纯化以提供为黄色固体的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-(2-乙基-1',4-二甲基-1'H-[1,4'-联咪唑]-2'-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(D-1)(162mg,44％)，其含有微量杂质。将所述物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝515.4观察值。

步骤2:4-(2-乙基-1',4-二甲基-1'H-[1,4'-联咪唑]-2'-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AID01)的合成

向含有N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-(2-乙基-1',4-二甲基-1'H-[1,4'-联咪唑]-2'-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(D-1)(160mg,0.311mmol)的反应容器中加入HFIP(3mL)和MsOH(299mg,3.11mmol)。将得到的棕红色溶液在室温搅拌2小时，这导致紫色溶液的逐渐形成。将溶液用DCM(20mL)稀释，并通过加入NH₃(在MeOH中的7M溶液)来调节pH以达到pH＝～8，随后在真空下浓缩。将粗制的固体与DCM/MeOH(10:1,5mL)一起在搅拌下研磨5分钟，过滤，并将固体用3份DCM/MeOH(10:1，各2mL)洗涤。将滤液在真空下浓缩并将粗残余物通过制备型HPLC(YMC Triart C18250x50mmx7um柱，16-56％MeCN/H₂O(含有0.05％NH₄OH),60mL/min)纯化以提供为白色固体的标题化合物4-(2-乙基-1',4-二甲基-1'H-[1,4'-联咪唑]-2'-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AID01)(68mg,61％)。LCMS[M+H]＝365.1观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝8.71(s,1H),8.36(s,1H),7.94(br s,1H),7.88(br s,1H),7.68(s,1H),7.16(s,1H),4.24(s,3H),4.18(s,3H),2.84(q,J＝7.5Hz,2H),2.13(s,3H),1.24(t,J＝7.5Hz,3H)。

根据方案E制备4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIE01)。

方案E：

步骤1:1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(E-1)的合成

向含有1-[3-(苄氧基)丙基]-5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-3)(4.40g,14.9mmol)的反应容器中加入THF(140mL)。将溶液在冰水浴中冷却至0℃，随后逐份加入NaH(60重量％矿物油,831mg,20.8mmol)。将反应在0℃搅拌15分钟，这导致深黄色悬浮液的形成。向溶液中加入MeI(3.08g,21.7mmol)，并将反应在0℃搅拌30分钟，在此时移开冰浴。将反应历时1小时逐渐温热至室温。将反应通过小心地加入水(50mL)淬灭并转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(各100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物(3.5g)与来自另一批的粗制物质(1.16g)合并，并通过快速柱色谱法(120g SiO₂,Biotage,0-10％MeOH/EtOAc)纯化以提供被微量杂质污染的所需产物。将该物质通过快速柱色谱法(120g SiO₂,Combi-flash,0-10％MeOH/EtOAc)重新纯化以提供为棕色油的标题化合物1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(E-1)(2.82g,52％)。LCMS[M+H]＝311.0观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝7.66(s,1H),7.42(s,1H),7.37-7.24(m,6H),6.12(s,1H),4.43(t,J＝7.2Hz,2H),4.40(s,2H),3.63(s,3H),3.41(t,J＝6.2Hz,2H),2.13(s,3H),2.03-1.95(m,2H)。

步骤2:4-(4-{1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-2)的合成

向含有1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(E-1)(1.08g,3.48mmol)的反应容器中加入4-溴-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(2.82g,6.96mmol)、PhMe(36mL)、Cs₂CO₃(3.40g,10.4mmol)、Pd(OAc)₂(391mg,1.74mmol)、PPh₃(456mg,1.74mmol)、CuI(331mg,1.74mmol)和PivOH(711mg,6.96mmol)。将得到的混合物用N₂脱气3个周期，密封，并在搅拌下加热至130℃保持18小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将溶液用DCM/MeOH(10:1,30mL)稀释，穿过硅藻土过滤，并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(120gSiO₂,Combi-flash,20-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供为浅黄色固体的标题化合物4-(4-{1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-2)(1.10g,49％)，其被一些微量杂质污染。将该物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝635.5观察值。

步骤3:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-3)的合成

向含有4-(4-{1-[3-(苄氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-2)(1.10g,1.73mmol)的反应容器中加入DCM(26mL)，并将溶液在冰水浴中冷却至0℃。在0℃向溶液中逐滴加入BCl₃(1M在DCM中的溶液，5.2mL,5.20mmol)。移开冰浴并将反应在搅拌下逐渐温热至室温21小时。将溶液在冰水浴中冷却至0℃并小心地用MeOH(12mL)淬灭。将溶液的pH用NH₃(在MeOH中的7M溶液)调至pH＝～8并搅拌30分钟，从而导致淡黄色悬浮液的形成。将悬浮液过滤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40gSiO₂,Combi-flash,0-10％MeOH/DCM)纯化以提供为灰白色固体的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-3)(680mg,72％)。LCMS[M+H]＝545.4观察值。

步骤4:4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIE01)的合成

向含有N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-3)(680mg,1.25mmol)的反应容器中加入HFIP(12.5mL)和MsOH(1.20g,12.5mmol)。将反应在室温搅拌2.5小时，在此时形成深紫色溶液。将溶液在真空下浓缩并用DCM/MeOH(10:1,30mL)稀释。然后将溶液的pH用NH₃(在MeOH中的7M溶液)调至pH＝～8，这导致固体的沉淀。将悬浮液过滤，并将滤饼用4份DCM/MeOH(10:1，各5mL)洗涤。将滤液在真空下浓缩并将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,0-10％MeOH/DCM)纯化。将含有所需产物的级分收集，浓缩，并进一步冻干以提供为淡黄色固体的标题化合物4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIE01)(400mg,82％)。LCMS[M+H]＝395.3观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝8.77(d,J＝1.0Hz,1H),8.35(d,J＝0.9Hz,1H),7.94(br s,1H),7.87(br s,1H),7.85(s,1H),6.32(s,1H),4.65-4.53(m,3H),4.23(s,3H),4.19(s,3H),3.45(q,J＝6.1Hz,2H),2.18(s,3H),1.97(quin,J＝6.7Hz,2H)。

根据方案E根据用于合成4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIE01)的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案F制备1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)。

方案F：

步骤1:3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-丙基-1H-吡唑(F-1)的合成

向含有5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1-丙基-1H-吡唑(Int-TG-4)(417mg,1.33mmol)的反应容器中加入K₂CO₃(461mg,3.34mmol)、MeCN(10mL)。向溶液中逐滴加入MeI(91.4μL,1.47mmol)并将得到的黄色悬浮液在25℃搅拌16小时。将溶液用H₂O(10mL)稀释并转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用2份EtOAc(各10mL)萃取。将合并的有机萃取物在真空下浓缩，并将粗残余物通过制备型TLC(SiO2,10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色油的标题化合物3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-丙基-1H-吡唑(F-1)(233mg,63％)，其被微量杂质污染。将该物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝205.0观察值。

步骤2:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(F-2)的合成

向含有4-溴-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(553mg,1.36mmol)的反应容器中加入在PhMe(7mL)中的3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-丙基-1H-吡唑(F-1)(233mg,0.91mmol)、Cs₂CO₃(874mg,2.68mmol)、PivOH(94.3mg,0.923mmol)、PPh₃(59.2mg,0.226mmol)、CuI(34.3mg,0.180mmol)和Pd(OAc)₂(53.1mg,0.237mmol)。将得到的混合物用N₂冲洗0.5分钟，密封，加热至110℃，并搅拌16小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将悬浮液过滤，并将滤饼用2份DCM(各10mL)洗涤。将滤液在真空下浓缩，并将粗残余物通过快速柱色谱法(SiO₂,Isco,0-3％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色油的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(F-2)(435mg,90％)，其被微量杂质污染。将该物质不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝529.3观察值。

步骤3:1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)的合成

向含有N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(F-2)(435mg,0.51mmol)的反应容器中加入HFIP(6mL)和MsOH(490mg,5.10mmol)。将反应在25℃搅拌1小时，在这期间溶液逐渐变成紫色。将溶液在真空下浓缩并通过制备型HPLC(PhenomenexGemini-NX 80x40mmx3um柱，22-62％ MeCN/H₂O(含有0.05％NH₄OH)，25mL/min)纯化。将含有产物的级分冻干以提供为白色固体的标题化合物1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)(86mg,38％)。LCMS[M+H]＝379.0观察值；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝8.73(s,1H),8.35(s,1H),7.93(br s,1H),7.88(br s,1H),7.84(s,1H),6.31(s,1H),4.50(t,J＝7.3Hz,2H),4.24(s,3H),4.19(s,3H),2.18(s,3H),1.84(sxt,J＝7.3Hz,2H),0.89(t,J＝7.4Hz,3H)。

根据用于合成1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

采用1-乙基-4-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-10)作为起始原料和本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，根据在用于合成1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)的步骤2-3中使用的方法制备下表中的实施例。

采用4-氯-1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-11)作为起始原料和本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，根据在用于合成1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)的步骤2-3中使用的方法制备下表中的实施例。

根据在用于合成1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIF01)的步骤2-3中使用的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案G制备4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(实施例AIG01)。

方案G：

步骤1:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(G-1)的合成

向4-氯-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(Int-HG-3)(173mg,0.478mmol)和1-乙基-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(A-1)(70mg,0.37mmol)在PhMe(3.8mL)中的溶液中加入Cs₂CO₃(360mg,1.10mmol)、Pd(OAc)₂(25mg,0.110mmol)、PPh₃(29mg,0.110mmol)、CuI(21mg,0.110mmol)和PivOH(78mg,0.736mmol)。将反应混合物在110℃加热2小时。将反应从加热移开并冷却至室温。将溶液用DCM(30mL)稀释，在硅藻土上过滤，并将硅藻土饼用10％MeOH/DCM(30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩并将粗残余物通过柱色谱法(12g SiO₂,MeOH/DCM 1:10)纯化以提供为黄色油的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(G-1)(22mg,12％)。LC/MSm/z 516[M+1]。

步骤2:4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(AIG01)的合成

向含有N-(2,4-二甲氧基苄基)-4-(4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(G-1)(22mg,0.041mmol)的反应烧瓶中加入TFA(1.0mL)。将反应在35℃加热过夜。将反应混合物在减压下浓缩，然后与PhMe一起共沸蒸馏。将粗残余物溶解在DMSO(0.7mL)中，通过反相色谱法纯化以提供为白色固体的标题化合物4-[4-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-5-基)-1-甲基-1H-咪唑-2-基]-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-甲酰胺(AIG01)(2.6mg,17％)。LC/MS m/z 366[M+1]。

根据方案H制备实施例AIH01-AIH19。

方案H

步骤1:Suzuki交叉偶联一般程序

在惰性气氛下向每个反应瓶中加入适当的商购可得的硼酸杂芳酯(120μM,1.2当量)，随后加入4-(4-溴-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-5)(100μmol的0.125M在二氧杂环己烷中的溶液,1.0当量)、K₃PO₄(300μmol的1.5M水溶液,3.0当量)和Pd(dppf)Cl₂(5μmol,0.05当量)。给瓶盖帽，加热至100℃，并搅拌16小时。将反应溶液通过Speedvac浓缩并将瓶用H₂O(各1mL)稀释。将水溶液用3份EtOAc(各1mL)萃取。将合并的有机萃取物收集并通过Speedvac浓缩。

步骤2:酰胺脱保护一般程序

向含有来自步骤1的独特中间体的每个反应瓶中加入TFA/H₂O(10:1)的溶液。给瓶盖帽，加热至80℃，并搅拌16小时。将反应溶液通过Speedvac浓缩，并将粗制的残余物通过制备型HPLC纯化以提供实施例AIH01-AIH19。

根据方案J制备1-乙基-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIJ01)。

方案J：

步骤1:1-乙基-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIJ01)的合成

在N₂下向用冰水浴冷却的1-乙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(AIC03)(120mg,0.284mmol)在DCM(6mL)中的黄色溶液中逐滴加入BCl₃(99.8mg,0.852mmol)。将得到的黄色悬浮液在搅拌下逐渐温热至室温(20℃)48小时。LCMS分析指示反应不完全，因此将溶液在冰水浴中冷却，并在N₂下逐滴加入BCl3(99.8mg,0.852mmol)的另外等分试样。移开冰浴并将得到的黄色悬浮液在搅拌下逐渐温热至室温(20℃)21小时。LCMS分析指示反应不完全，因此将溶液在冰水浴中冷却，并在N₂下逐滴加入BCl3(166mg,1.42mmol)的另外等分试样。移开冰浴并将得到的黄色悬浮液在搅拌下逐渐温热至室温(20℃)21小时。将反应混合物冷却至0℃，用MeOH(2mL)淬灭，用NH₃/MeOH(7M)碱化至pH 7～8，然后温热至室温并搅拌30分钟。将得到的溶液在真空下浓缩。将粗残余物用水(5mL)稀释并转移至分液漏斗。将溶液用2份DCM/MeOH(10:1,5mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(5mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在真空下浓缩以提供为黄色固体的粗产物。将粗残余物通过制备型TLC(硅胶,DCM:MeOH＝10:1,Rf～0.3)纯化以提供浅黄色固体，将其进一步冻干16小时以提供为浅黄色固体的标题化合物1-乙基-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIJ01)(15.78mg,14％)。LCMS[M+H]＝409.2观察值；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:8.80(s,1H),8.38(s,1H),7.84-8.01(m,3H),6.32(s,1H),4.55-4.68(m,4H),4.23(s,3H),3.46(q,J＝5.3Hz,2H),2.19(s,3H),1.93-2.03(m,2H),1.45(t,J＝7.3Hz,3H)。

根据在方案C的步骤1-3中使用的方法和接着在用于合成1-乙基-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIJ01)的方案J中所用的程序，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案K制备4-{1-乙基-4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIK01)。

方案K：

步骤1:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{1-乙基-4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(K-1)的合成

向5-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)-1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑(Int-TG-15)(510mg,2.05mmol)和4-溴-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(916mg,2.26mmol)在无水甲苯(16mL)中的溶液中加入Pd(OAc)₂(46mg,0.205mmol)、dppf(228mg,0.411mmol)、((噻吩-2-羰基)氧基)铜(157mg,0.823mmol)和新戊酸铯(961mg,4.11mmol)。将混合物用N₂冲洗2分钟，密封，加热至100℃，并搅拌16小时。然后将反应过滤，在真空下浓缩，用CH₂Cl₂稀释，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,20-80％CH₂Cl₂/EtOAc)纯化以提供为棕色胶的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{1-乙基-4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(K-1)(1.067g,91％)。LCMS[M+H]＝573.2观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:8.92(s,1H),8.24(s,1H),8.09(br t,J＝5.7Hz,1H),7.29(s,1H),7.23(s,1H),6.42-6.48(m,2H),6.22(s,1H),4.54-4.68(m,6H),4.13(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.40(t,J＝6.1Hz,2H),3.25(s,3H),2.28(s,3H),2.11-2.23(m,2H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H)。

步骤2:4-{1-乙基-4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIK01)的合成

在室温向N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{1-乙基-4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(K-1)(1.067g,1.86mmol)在HFIP(15mL)中的溶液中加入甲磺酸(895mg,9.32mmol)并搅拌1小时。然后将反应用NH₃/MeOH碱化至pH＝8，在真空下浓缩，用CH₂Cl₂稀释，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,97-100％CH₂Cl₂/MeOH)纯化，然后通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,97-100％CH₂Cl₂/MeOH)重新纯化。然后将该物质通过冻干法干燥，与MTBE(50mL)一起研磨3小时，并将固体通过过滤收集。将该物质再次通过快速柱色谱法(40g SiO₂,Combi-flash,99-100％EtOAc/MeOH)纯化以提供为灰色固体的化合物4-{1-乙基-4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIK01)(559mg,56％))。LCMS[M+H]＝423.3观察值。¹HNMR(DMSO-d₆)δ:8.80(d,J＝0.8Hz,1H),8.36(d,J＝0.9Hz,1H),7.89-7.93(m,2H),7.75(br s,1H),6.33(s,1H),4.75(q,J＝7.3Hz,2H),4.62(t,J＝7.3Hz,2H),4.19(s,3H),3.36(t,J＝6.1Hz,2H),3.19(s,3H),2.18(s,3H),2.01-2.09(m,2H),1.45(t,J＝7.2Hz,3H)。

根据方案L制备4-(4-{1-[3-(二氟甲氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIL01)。

方案L：

步骤1:4-(4-{1-[3-(二氟甲氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(L-1)的合成。

向N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-3)(195mg,0.358mmol)在CH₂Cl₂(0.4mL)中的溶液中加入在H₂O(0.4mL)中的(溴二氟甲基)三甲基硅烷(73mg,0.36mmol)和KOAc(70mg,0.72mmol)，并在18℃搅拌16小时。然后向反应中加入MeOH并在真空下浓缩。将残余物溶解于CH₂Cl₂(15mL)和H₂O(25mL)中并分离各相。将水相收集并在真空下浓缩以产生为棕色固体的4-(4-{1-[3-(二氟甲氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(L-1)(170mg)，将其不经进一步纯化而使用。LCMS[M+H]＝595.4观察值。

步骤2:4-(4-{1-[3-(二氟甲氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺甲酸盐(实施例AIL01)的合成。

在室温(18℃)向4-(4-{1-[3-(二氟甲氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(L-1)(250mg)在HFIP(2.5mL)中的溶液中加入甲磺酸(402mg,4.18mmol)并搅拌1.5小时。将粗制混合物通过制备型HPLC(Boston Prime C18150 x 30mm x 5um柱，2-42％MeCN/H₂O(含有甲酸(0.225％)),25mL/min)纯化以提供为白色固体的4-(4-{1-[3-(二氟甲氧基)丙基]-3-甲基-1H-吡唑-5-基}-1-甲基-1H-咪唑-2-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺甲酸盐(AIL01)(38mg，经两批17％)。LCMS[M+H]＝445.4观察值。¹H NMR(甲醇-d₄)δ:8.80(s,1H),8.52(s,1H),8.42(br s,2H),8.22(t,J＝54.0Hz,1H),7.26(s,1H),5.48(t,J＝7.5Hz,2H),4.37(s,3H),4.23(s,3H),3.66(t,J＝5.8Hz,2H),2.74(s,3H),2.14-2.26(m,2H)；¹⁹F NMR(甲醇-d₄)δ:-97.73(s,1F)。

根据方案M制备1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIM01)。

方案M：

步骤1:(外消旋)-1-甲基-4-(1-甲基-4-{3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-2-基)甲基]-1H-吡唑-5-基}-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-1)的合成

给反应容器装入(外消旋)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1-[(氧杂环丁烷-2-基)甲基]-1H-吡唑(Int-TG-24)(297.8mg,1.28mmol)、4-溴-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(HG-1d)(519mg,1.92mmol)、Pd(OAc)₂(57.6mg,0.256mmol)、CuI(48.8mg,0.256mmol)、PPh₃(67.3mg,0.256mmol)、Cs₂CO₃(1250mg,3.85mmol)、PivOH(157mg,1.54mmol)和PhMe(8mL)。将溶液用N₂冲洗2分钟，密封，并加热至110℃保持20小时。将反应从加热移开并逐渐冷却至室温。将悬浮液过滤并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC(Boston Prime C18150x30mmx5μm柱,20-60％MeCN/H₂O(0.05％NH₄OH v/v),25mL/min)纯化以提供为白色固体的标题化合物(外消旋)-1-甲基-4-(1-甲基-4-{3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-2-基)甲基]-1H-吡唑-5-基}-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-1)(80mg,15％)。LCMS[M+H]＝422.3观察值；¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ＝8.76(s,1H),8.27(s,1H),7.61(s,1H),6.36(s,1H),5.27(quin,J＝6.4Hz,1H),5.00(dd,J＝6.2,14.1Hz,1H),4.83-4.80(m,1H),4.68-4.62(m,1H),4.55-4.48(m,1H),4.30(s,3H),4.15(s,3H),4.01(s,3H),2.77-2.60(m,2H),2.27(s,3H)。

步骤2:1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-2)和1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-3)的合成

将(外消旋)-1-甲基-4-(1-甲基-4-{3-甲基-1-[(氧杂环丁烷-2-基)甲基]-1H-吡唑-5-基}-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-1)(90mg,0.214mmol)的外消旋混合物通过手性制备型SFC(Daicel Chiralpak IC 250mm*30mm,10μm柱,50％EtOH(0.1％NH₄OH)/CO₂,80mL/min)纯化以提供分别为白色固体的标题化合物1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-2)(40mg,44％)(LCMS[M+H]＝422.3观察值)和1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2S)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-3)(50mg,56％)(LCMS[M+H]＝422.3观察值)。任意指定对映异构体的绝对立体化学(第1个洗脱峰(R)和第2个洗脱峰(S))。

步骤3:1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIM01)的合成

向含有1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酸甲酯(M-2)(40.0mg,0.0949mmol)的反应容器中加入NH₃(在MeOH中的7M溶液)(5mL,30mmol)。将反应在20℃搅拌18小时，然后在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC(Phenomenex Gemini-NX 80*40mm*3μm柱,13-53％MeCN/H₂O(0.05％NH₄OH v/v),25mL/min)纯化以提供为白色固体的标题化合物1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIM01)(28mg,73％)。LCMS[M+H]＝407.4观察值；¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ＝8.80(d,J＝1.0Hz,1H),8.31(d,J＝1.0Hz,1H),7.68(s,1H),6.38(s,1H),5.28(quin,J＝6.3Hz,1H),5.00(dd,J＝6.3,14.3Hz,1H),4.85-4.79(m,1H),4.68-4.62(m,1H),4.50(td,J＝6.0,9.0Hz,1H),4.27(s,3H),4.19(s,3H),2.78-2.58(m,2H),2.28(s,3H)。

根据在用于合成1-甲基-4-[1-甲基-4-(3-甲基-1-{[(2R)-氧杂环丁烷-2-基]甲基}-1H-吡唑-5-基)-1H-咪唑-2-基]-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIM01)的方案M的步骤3中使用的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案N制备1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIN01)

方案N

步骤1:6-氯-1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(N-1)的合成

向4,6-二氯-1-环丙基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(Int-HG-7)(129.4mg,0.567mmol)和1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑(Int-TG-25)(160mg,0.681mmol)在无水甲苯(3mL)中的黄色溶液中加入Pd(OAc)₂(25.5mg,0.113mmol)、dppf(62.9mg,0.113mmol)、噻吩-2-甲酸亚铜(I)(CuTC)(43.3mg,0.227mmol)和CsOPiv(266mg,1.13mmol)。将得到的混合物用N₂冲洗2分钟，密封，并加热至100℃(加热块)保持16小时。将反应从加热块移开并逐渐冷却至室温。将溶液用10％MeOH/DCM稀释，穿过硅藻土垫过滤，并将滤液在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,12-75％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色胶的标题化合物6-氯-1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(N-1)(160mg,66％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝8.84(s,1H),7.44(d,J＝0.8Hz,1H),7.28(s,1H),6.24(s,1H),4.69(t,J＝7.2Hz,2H),4.25(s,3H),3.64-3.55(m,1H),3.43(t,J＝6.1Hz,2H),3.29(s,3H),2.31(s,3H),2.24-2.15(m,2H),1.25-1.21(m,4H)。

步骤2:1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲腈(N-2)的合成

向6-氯-1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(N-1)(160mg,0.376mmol)和Zn粉末(21.1mg,0.323mmol)、(t-Bu₃P)₂Pd(38.4mg,0.0751mmol)在DMA(2mL)中的溶液中加入Zn(CN)₂(90.0mg,0.766mmol)。将得到的混合物用N₂冲洗2分钟，密封，加热至120℃，并搅拌18小时。将反应从加热块移开并逐渐冷却至室温。将溶液用EtOAc(5mL)稀释并穿过硅藻土垫过滤。将滤液转移至含有EtOAc的分液漏斗并用H₂O(5mL)稀释。分离各相，并将水相用3份EtOAc(5mL)萃取。将合并的有机萃取物用3份盐水(10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩以提供为黄色固体的粗制1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲腈(N-2)(150mg)，将其不经进一步纯化用在下一步中。LCMS[M+H]＝417.3观察值。

步骤3:1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIN01)的合成

在5℃向粗制的1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲腈(N-2)(150mg,0.360mmol)在DMSO(1.2mL)/MeOH(3.6mL)中的浅黄色悬浮液中逐滴加入NaOH(72mg,1.80mmol,2M在H₂O中)以维持内部温度低于10℃。加入结束后，加入H₂O₂(408mg,3.60mmol,30％溶液)。在该阶段，移开冰浴并将反应在搅拌下逐渐温热至室温(27℃)3小时。将反应反淬进含有冰冷的饱和Na₂SO₃(10mL)的烧瓶中。将溶液转移至含有EtOAc的分液漏斗并分离各相。将水相用3份EtOAc(10mL)萃取。将合并的有机萃取物用3份盐水(10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型HPLC(YMC-Triart Prep C18150*40mm*7μm柱,21-61MeCN/H₂O(0.05％NH₄OH v/v),60mL/min)纯化以提供为白色固体的标题化合物1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIN01)(85mg,经2步骤52％)。LCMS[M+H]＝435.2观察值；1HNMR(DMSO-d6)δ:8.75(s,1H),8.31(s,1H),7.89-7.99(m,2H),7.84(s,1H),6.30(s,1H),4.61(t,J＝7.3Hz,2H),4.22(s,3H),3.95-4.00(m,1H),3.34-3.37(m,2H),3.19(s,3H),2.18(s,3H),2.00-2.08(m,2H),1.16-1.24(m,4H)。

根据在用于合成1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIN01)的方案N的步骤1-3中使用的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据用于合成1-环丙基-4-{4-[1-(3-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIN01)的方案N的步骤1-3所用的方法和接着方案B的步骤3中所用的程序，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案P制备4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP01)和4-{4-[1-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP02)

方案P

步骤1:[3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙腈(P-1)的合成

向[5-(1H-咪唑-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基]乙腈(Int-TG-27)(70mg,0.37mmol)在无水DMF(2.0mL)中的溶液中加入K₂CO₃(129mg,0.935mmol)，随后逐滴加入碘甲烷(66mg,0.47mmol)。将反应在室温搅拌16小时。然后将混合物用盐水(5mL)稀释，分离各相，并将水相用EtOAc(5mL x 3)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(5mL x 3)洗涤，经无水Na₂SO₃干燥，过滤，并在真空下浓缩以提供为黄色固体的标题化合物[3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙腈(P-1)(68mg,91％)。LCMS[M+H]＝202.1观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:7.51(s,1H),7.14(d,J＝1.0Hz,1H),6.16(s,1H),5.65(s,2H),3.76(s,3H),2.28(s,3H)。

步骤2:4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(P-2)的合成

向[3-甲基-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-1H-吡唑-1-基]乙腈(P-1)(65mg,0.32mmol)和4-溴-N-(2,4-二甲氧基苄基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Int-HG-1)(144mg,0.355mmol)在无水甲苯(5.0mL)中的溶液中加入Pd(OAc)₂(27mg,0.12mmol)、dppf(36mg,0.065mmol)、((噻吩-2-羰基)氧基)铜(25mg,0.129mmol)和新戊酸铯(151mg,0.646mmol)。将混合物用N₂冲洗2分钟，密封，加热至100℃，并搅拌40小时。然后将反应穿过硅藻土垫过滤并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(20g SiO₂,Combi-flash,20-100％EtOAc/石油醚)纯化以提供为黄色固体的标题化合物4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(P-2)(30mg,18％)。LCMS[M+H]＝526.4观察值；¹H NMR(氯仿-d)δ:8.85(s,1H),8.26-8.34(m,2H),7.28-7.35(m,2H),6.43-6.53(m,2H),6.26(s,1H),5.72(s,2H),4.62-4.71(m,2H),4.17-4.22(m,6H),3.89(s,3H),3.81(s,3H),2.32(s,3H)。

步骤3:4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP01)和4-{4-[1-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP02)的合成

向4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(P-2)(32mg,0.061mmol)在HFIP(1.0mL)中的溶液中加入甲磺酸(58mg,0.61mmol)并搅拌2小时。然后将反应在真空下浓缩，用CH₂Cl₂/MeOH(10:1v:v,5mL)稀释，用NH₃/MeOH(7M)碱化至pH7-8，过滤，将滤饼用CH₂Cl₂/MeOH(10:1v:v,1mL x 3)洗涤，并将滤液在真空下浓缩。将粗制混合物通过制备型薄层色谱法(CH₂Cl₂/MeOH,10:1v:v)纯化以提供为白色固体的标题化合物4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP01)(9mg,39％)。LCMS[M+H]＝376.2观察值；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:8.84(s,1H),8.38(s,1H),7.85-8.02(m,3H),6.46(s,1H),5.81(s,2H),4.17-4.29(m,6H),2.22(s,3H)。另外，将标题化合物4-{4-[1-(2-氨基-2-氧代乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP02)(4mg,17％)分离为白色固体。LCMS[M+H]＝394.4观察值；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:8.76(d,J＝1.0Hz,1H),8.35(d,J＝1.0Hz,1H),7.95(br s,1H),7.83-7.90(m,2H),7.27(s,1H),7.18(br s,1H),6.37(s,1H),5.24(s,2H),4.22(s,3H),4.19(s,3H),2.19(s,3H)。

根据用于合成4-{4-[1-(氰基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIP01)的方案P的步骤1-3所用的方法，采用本领域技术人员能够认识到的示例程序的非关键性变化或置换，制备下表中的实施例。

根据方案Q制备4-{4-[1-(2-氰基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIQ01)

方案Q

步骤1:N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-4-{1-甲基-4-[3-甲基-1-(3-氧代丙基)-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-1)的合成

向N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-4-{4-[1-(3-羟基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(E-3)(600mg,0.83mmol)在DCM(20mL)中的橙色溶液中加入戴斯-马丁氧化剂(526mg,1.24mmol)。将得到的混合物在20℃搅拌16小时。将得到的黄色悬浮液用DCM(20mL)稀释，在硅藻土垫上过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(40g SiO₂,0-10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色固体的标题化合物N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-4-{1-甲基-4-[3-甲基-1-(3-氧代丙基)-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-1)(500mg,83％)。LCMS[M+H]＝543.1观察值；¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝9.86(t,J＝1.2Hz,1H),8.80(d,J＝1.0Hz,1H),8.31(br t,J＝6.4Hz,1H),8.28(d,J＝0.9Hz,1H),7.31(d,J＝8.3Hz,1H),7.27(br s,1H),6.51(d,J＝2.3Hz,1H),6.48(dd,J＝2.4,8.3Hz,1H),6.21(s,1H),4.98(t,J＝7.0Hz,2H),4.67(d,J＝6.0Hz,2H),4.20(s,3H),4.17(s,3H),3.89(s,3H),3.82(s,3H),3.14(dt,J＝1.3,7.0Hz,2H),2.30(s,3H)。

步骤2:3-{5-[2-(6-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基甲酰基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基]-3-甲基-1H-吡唑-1-基}丙酸(Q-2)的合成

向N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-4-{1-甲基-4-[3-甲基-1-(3-氧代丙基)-1H-吡唑-5-基]-1H-咪唑-2-基}-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-1)(420mg,0.774mmol)在THF(10mL)中的无色混合物中加入t-BuOH(5mL)和2-甲基-2-丁烯(1630mg,23.2mmol)。将得到的溶液在冰水浴(0℃)中冷却，随后缓慢加入NaClO₂(700mg,7.74mmol)和NaH₂PO₄(929mg,7.74mmol)在H₂O(5mL)中的溶液。加入结束后，移开冰浴，并将反应在室温(20℃)搅拌16小时。将反应用Na₂S₂O₃水溶液(3mL)淬灭，通过加入饱和NaHSO₄水溶液将pH调至约3-4，并将溶液转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(15mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过快速柱色谱法(SiO₂,Isco,0-10％ MeOH/DCM)纯化以提供为白色固体的标题化合物3-{5-[2-(6-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基甲酰基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基]-3-甲基-1H-吡唑-1-基}丙酸(Q-2)(355mg,82％)。LCMS[M+H]＝559.1观察值。

步骤3:4-{4-[1-(3-氨基-3-氧代丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-3)的合成

将3-{5-[2-(6-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基甲酰基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基]-3-甲基-1H-吡唑-1-基}丙酸(Q-2)(355mg,0.636mmol)在DMF(10mL)中的溶液在冰水浴中冷却至0℃。向溶液中加入DIPEA(246mg,1.91mmol)、HATU(290mg,0.763mmol)，并将反应在0℃搅拌15分钟。在该阶段，加入NH₄Cl(170mg,3.18mmol)并将反应在20℃搅拌16小时。将反应反淬进含有冰水(5mL)的烧瓶中并将溶液转移至含有EtOAc的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份EtOAc(10mL)萃取。将合并的有机萃取物用1份NH₄Cl水溶液、1份盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型TLC(SiO₂,10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色固体的标题化合物4-{4-[1-(3-氨基-3-氧代丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-3)(280mg,79％)。LCMS[M+H]＝558.1观察值。

步骤4:4-{4-[1-(2-氰基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-4)的合成

向4-{4-[1-(3-氨基-3-氧代丙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-3)(280mg,0.502mmol)在DCM(20mL)中的搅拌悬浮液中加入N-(三乙基铵基磺酰基)氨基甲酸甲酯(Burgess试剂)(359mg,1.51mmol)，并将反应在N₂下在25℃搅拌16小时。将反应用H₂O(10mL)稀释并转移至含有DCM的分液漏斗。分离各相，并将水相用3份DCM(10mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na₂SO₄)，过滤，并在真空下浓缩。将粗残余物通过制备型TLC(SiO₂,10％MeOH/DCM)纯化以提供为黄色固体的标题化合物4-{4-[1-(2-氰基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-4)(160mg,59％)。LCMS[M+H]＝540.1观察值。

步骤5:4-{4-[1-(2-氰基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIQ01)的合成

向4-{4-[1-(2-氰基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-N-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(Q-4)(160mg,0.297mmol)在HFIP(5mL)中的浅黄色溶液中加入MeSO₃H(214mg,2.22mmol)。反应颜色变为紫色并将其在室温(20℃)搅拌1小时。将溶液在真空下浓缩，并将粗残余物通过制备型HPLC(Boston Prime C18150*30mm*5μm柱,15-45MeCN/H₂O(0.05％NH₄OH v/v),30mL/min)纯化。将含有产物的级分收集并冻干以提供为白色固体的标题化合物4-{4-[1-(2-氰基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-5-基]-1-甲基-1H-咪唑-2-基}-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-甲酰胺(实施例AIQ01)(18mg,31％)。LCMS[M+H]＝390.3观察值；¹H NMR(DMSO-d₆)δ:8.74(s,1H),8.37(s,1H),7.85-8.00(m,3H),6.37(s,1H),4.86(t,J＝6.6Hz,2H),4.16-4.28(m,J＝15.4Hz,6H),3.12(t,J＝6.5Hz,2H),2.20(s,3H)。

生物学实施例

生化测定方法

闪烁迫近测定(SPA)竞争性结合

开发了一种放射性配体结合测定以确定化合物相互作用是否与氚标记形式的天然STING配体³H-环状鸟嘌呤(2',5')单磷酸腺嘌呤(3',5')单磷酸(³H-cGAMP)竞争。STING构建体(WT和H232R)由具有N端和C端截断的残基155-341构成；除去了N-端跨膜结构域(1-154)以及C端尾巴(342-379)。用大肠杆菌生物素连接酶(BirA)酶促和包含高亲和力生物素化肽AviTag^TM，实现高特异性的N端生物素化。将100nM STING蛋白在150mM NaCl、25mMHepes(pH 7.5)、0.1mM EDTA、1mM DTT、0.005％(v/v)吐温-20、1％(v/v)DMSO中固定化在20μg链霉亲和素聚乙烯基甲苯(SA-PVT)珠子上。加入100nM ³H-cGAMP和化合物并在室温下达到平衡(20min)。从100μM起始浓度以3倍稀释系列测试化合物，并相对于完全阻断³H-cGAMP结合的阳性对照化合物和阴性对照DMSO标准化。用Cheng-Prusoff方程(Cheng&Prusoff,Biochemical Pharmacology,22(1973)，第3099-3108页)从IC₅₀确定竞争性结合的K_I。在Cheng-Prusoff方程中使用的³H-cGAMP的K_D值根据经验确定为1nM(对于WT STING)和750nM(对于R232H STING)。在表1中提供了SPA竞争性结合数据。

表1:

IRF3的磷酸化：THP-1细胞ELISA

STING活化导致TBK1的募集和IRF3转录因子的磷酸化，然后诱导I型干扰素。在添加了2mM L-谷氨酰胺、10％胎牛血清和0.5％Pen-Strep的RPMI培养基中培养THP-1细胞(InvivoGen)。将10⁴个细胞接种在96-孔板中并在37℃、5％CO₂下温育过夜。将培养基中的化合物系列稀释的化合物(最终0.5％DMSO)添加给细胞并温育另外3小时。温育后，将平板以2000rpm离心5min。然后将细胞在100μl RIPA缓冲液中裂解并在室温涡旋30分钟。然后将25μl裂解物转移到先前已用小鼠抗-人IRF-3捕获抗体(BD Pharmigen)包被的透明聚苯乙烯High Bind平板中，并将其在4℃温育16小时。然后将平板洗涤并与兔抗-磷酸化IRF3检测抗体(Cell Signaling Technologies)在室温温育1.5小时。最后，加入HRP-连接的二抗(CellSignaling Technologies)保持30min，然后使用Glo Substrate试剂(R&D Systems)产生发光信号。使用Perkin-Elmer Envision微孔板读数器测量信号。使用已知将磷酸化IRF3信号最大化的阳性对照STING激动剂和阴性对照DMSO，将数据标准化为“％效应”。在表2中提供了IRF3磷酸化数据。

表2:

干扰素-β诱导:THP-1ISG报道细胞系

THP-1Lucia^TM ISG细胞(InvivoGen)表达分泌的萤光素酶“Lucia”报道基因，其在由5个干扰素应答元件构成的IRF诱导型复合启动子的控制下。在添加了2mM L-谷氨酰胺、10％胎牛血清和0.5％Pen-Strep的RPMI培养基中培养THP-1Lucia^TM ISG细胞。存在潮霉素B和Zeocin以维持稳定的转染。将10⁴个细胞接种在96-孔板中，并在37℃、5％CO₂下温育过夜。加入在培养基中的50μL的系列稀释化合物，并温育另外24小时。温育后，将平板以2000rpm离心10min。将每个孔的50μl细胞培养物上清液转移至白色不透明96-孔板中。在25mL无内毒素的水中制备一袋QUANTI-Luc^TM(InvivoGen)粉末，并将100μL制备的温QUANTI-Luc溶液添加到每个含有上清液的孔中。使用Perkin-Elmer Envision微孔板读数器测量发光信号。使用已知将萤光素酶信号最大化的阳性对照STING激动剂和阴性对照DMSO，将数据标准化为“％效应”。在表3中提供了干扰素-β诱导数据。

表3:

提供这些实施例仅用于例证目的，并且不限制本文提供的权利要求的范围。本领域普通技术人员会明白，可以对其做出某些变化和修改而不脱离权利要求的精神或范围。

在说明书中引用的所有出版物和专利申请通过引用整体并入本文。

Claims

1.式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中

代表在5元杂芳基环中的两个共轭双键；

X¹选自CH和N；

X²选自CH和N；

Z¹、Z²和Z³经过选择，使得：

Z¹是C，Z²是NR²，且Z³是CR⁴；或

Z¹是N，Z²是CR³，且Z³是CR⁴；或

Z¹是C，Z²是CR³，且Z³是NR²；

2.根据权利要求1所述的式(II)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1所述的式(III)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基和-OC₁-C₄烷基。

5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹选自-CH₃和-CH₂CH₃。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²选自C₁-C₄烷基和C₁-C₂亚烷基-(环丙基)，所述C₁-C₄烷基或C₁-C₂亚烷基-(环丙基)任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。

7.根据权利要求6所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²选自-CH₃、-CH₂CH₃、-(CH₂)₂CH₃、-CH₂CF₃、-(CH₂)₂CF₃、-(CH₂)₃OH、-(CH₂)₂OCH₃、-(CH₂)₃OCH₃和-CH₂(环丙基)。

8.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³是C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选地被1、2、3、4、5或6个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴选自H和C₁-C₄烷基，所述C₁-C₄烷基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素和羟基。

10.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴选自H和-CH₃。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵选自H、卤素和羟基。

12.根据权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵选自H、氯和羟基。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶选自C₁-C₄烷基和环丙基，所述C₁-C₄烷基或环丙基任选地被1、2或3个取代基取代，所述取代基各自独立地选自卤素、羟基、-CN和-OC₁-C₄烷基。

14.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶选自-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CHF₂、-CH(CH₃)₂和环丙基。

15.选自以下的化合物：

或其中任一种的药学上可接受的盐。

16.选自以下的化合物：

或其中任一种的药学上可接受的盐。

17.药物组合物，其包含根据权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。

18.用于治疗哺乳动物中的异常细胞生长的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述异常细胞生长是癌症。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述癌症是肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区域的癌症、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食管癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管的癌症、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)的肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。

21.根据权利要求18至20中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

22.根据权利要求18至21中任一项所述的方法，所述方法包括施用另外的治疗剂。

23.权利要求22所述的方法，其中所述另外的治疗剂选自干扰素、CTLA-4途径拮抗剂、抗-4-1BB抗体、抗-PD-1抗体和抗-PD-L1抗体。