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CN117279663A - 一种包括针对人cldn18.2的抗体的抗体药物偶联物及其用途 - Google Patents

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CN117279663A
CN117279663A CN202280026360.1A CN202280026360A CN117279663A CN 117279663 A CN117279663 A CN 117279663A CN 202280026360 A CN202280026360 A CN 202280026360A CN 117279663 A CN117279663 A CN 117279663A
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CN
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conjugate
solvate
pharmaceutically acceptable
group
amino acid
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CN202280026360.1A
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朴昌植
宋昊永
张太翼
郑哲雄
郑明晋
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Nuona Biological Suzhou Co ltd
Ligachem Biosciences Inc
Original Assignee
Nuona Biological Suzhou Co ltd
Legochem Biosciences Inc
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Publication date
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Abstract

本发明涉及一种靶向claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)的新的抗体‑药物偶联物(antibody‑drug conjugate，ADC)、其活性代谢物、其制备方法、用于治疗和/或预防疾病的其用途、以及用于生产药剂的其用途，所述药剂用于治疗和/或预防疾病，具体为过度增殖和/或血管生成疾病，例如癌症，更具体地，涉及一种抗体‑药物偶联物及包括其的药物组合物，所述抗体‑药物偶联物包括与CLDN18.2结合的抗体或其抗原结合片段。

Description

一种包括针对人CLDN18.2的抗体的抗体药物偶联物及其用途
技术领域
本发明涉及一种靶向claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)的新的抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate，ADC)、其活性代谢物、其制备方法、用于治疗和/或预防疾病的其用途、以及用于生产药剂的其用途，所述药剂用于治疗和/或预防疾病，具体为过度增殖和/或血管生成疾病，例如癌症，更具体地，涉及一种新的抗体-药物偶联物及包括其的药物组合物，所述抗体-药物偶联物包括与CLDN18.2结合的抗体或其抗原结合片段。
背景技术
癌症(cancer)是指因身体组织的自主过度生长而异常生长的块引起的疾病，其是各种组织中不受控制的细胞生长结果。早期肿瘤可以通过手术和放疗措施去除，转移性肿瘤通常采用化疗药物进行姑息治疗。
大多数肠胃外施用的化疗药物由于施用于全身而引起不必要的副作用甚至可能引起毒性这种严重的效果，因此一种新的化疗药物成为研发重点，通过其在肿瘤细胞或紧邻组织中的改进和选择性作用，可以同时提高药效并将毒性/副作用降到最低。
抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate，ADC)是一种靶向新技术，其使毒素或药物结合到与抗原结合的抗体后，在胞内释放毒性物质，从而使得癌细胞等凋亡。由于其能够对健康细胞提供最小限度的影响，同时将药物准确传递至靶癌细胞，并且仅在特定条件下释放药物，因此其为一种具有比抗体治疗药物本身优异的功效且比现有抗癌药物可大幅降低副作用风险的技术。
这种抗体-药物偶联物的基本结构由“抗体-连接子-低分子药物(毒素)”所组成。其中，连接子不仅需要简单地起到连接抗体和药物的功能性作用，还需要使抗体-药物偶联物在体内循环过程中稳定到达靶细胞后进入细胞内，从而因抗体-药物解离现象(例如，酶水解引起的结果)使得药物容易地掉落并对靶癌细胞发挥药效。即，根据连接子的稳定性，连接子在抗体-药物偶联物的功效以及系统毒性(systemic toxicity)等安全性方面具有非常重要的作用(Discovery Medicine 2010，10(53)：329-39).85-8 2018-08-14)。
本发明的发明人研发了一种包括自裂解基团(self-immolative group)的连接子，所述自裂解基团在血浆中更稳定，在体内循环过程中也稳定，并且通过使药物在癌细胞内容易地释放而发挥药效，发明人已对此获得专利(韩国注册专利第1,628,872号)。另一方面，使用单克隆抗体治疗癌症已取得相当大的成功。单克隆抗体适用于肿瘤组织和肿瘤细胞的靶向定位(addressing)。抗体药物偶联物已成为治疗淋巴瘤和实体癌的强有力的新型治疗选择，并且免疫调节抗体近期也在临床方面取得了相当的成功。治疗性抗体的研发基于对癌症血清学、蛋白质工程技术及其作用、耐药性机制以及免疫系统与癌细胞之间相互作用的深入了解。
在人类癌症的细胞表面表达的抗原是指与正常组织相比过度表达或突变以及选择性表达的多种靶标。关键问题是为基于抗体的疗法鉴定适当的抗原。这种治疗药物介导抗原或受体功能(即，作为刺激剂或拮抗剂的功能)的变化，通过Fc和T细胞激活调节免疫系统，并通过传递与针对特定抗原的抗体结合的特定药物来发挥其功效。能够改变抗体药代动力学(pharmacokinetics)、作用功能、大小和免疫刺激性的分子技术在研发基于新抗体的疗法方面成为关键因素。通过针对癌症患者的治疗性抗体的临床试验获得的证据表明，用于选择包括靶抗原和抗体的亲和力和结合性、抗体结构的选择以及治疗性接近法(信号传递阻断或免疫作用功能)的最佳抗体的接近法非常重要。
人claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)全长(full length)由261个氨基酸组成，其是一种由两个胞外环和四个跨膜结构域组成的跨膜型膜蛋白。与一些正常组织中表达的CLDN18.1相比，直到胞外环结构域1的氨基酸序列部分不同。
CLDN18.2属于作为紧密连接(tight junction)重要组成部分的claudin家族(claudin family)，claudin蛋白在多种癌症组织中表达，已知是诊断和治疗方式的潜在靶点。此外，已知其在肿瘤的形成以及炎症反应中发挥着重要作用，claudin蛋白表达的变化会导致紧密连接功能障碍，影响信号传递路径，并在部分上皮癌中具有肿瘤促进作用。此外，已知除了在部分胃粘膜的顶端区(apical region)表达之外，CLDN18.2在原发性和转移性胃癌中特异性表达，并且是与恶性转化有关的癌症特异性抗原，有报告指出其在胰腺癌、食管癌、卵巢癌和肺癌等中的异位激活。
在此技术背景下，本发明的发明人致力于研发一种抗体，其与在正常组织中也表达的CLDN18.2不同，与表现出肿瘤特异性表达的CLDN18.2特异性结合，最终研发出对CLDN18.2表现出优异结合能力的抗-CLDN18.2抗体，为了进一步增强抗体的效果，将包括有效自裂解基团(self-immolative group)(其在血浆中更稳定，在体内循环过程中也稳定，并且通过使药物在癌细胞内容易地释放而发挥药效)的连接子适用到与CLDN18.2特异性结合的抗癌治疗用抗体，进而确认到可提供靶向对治疗和/或预防过度增殖和/或转移性癌症疾病有效的CLDN18.2的新的抗体-药物偶联物(ADC)，以此完成了本发明。
发明内容
技术问题
本发明旨在提供一种新的抗体-连接子药物偶联物或其盐、溶剂化物，其靶向claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)。
本发明旨在提供一种抗体-药物偶联物以及包含其的药物组合物，所述抗体-药物偶联物包括与CLDN18.2特异性结合的抗体以及与其结合的药物。
本发明旨在提供一种抗体-连接子-药物(毒素)系统，其通过包括有效自裂解基团(self-immolative group)(其在血浆中更稳定，在体内循环过程中也稳定，并且通过使药物在癌细胞内容易地释放而使药效最大化)的连接子技术，可使药物和/或毒素稳定到达靶细胞，从而使药效发挥的同时显着降低毒性。
技术方案
在本发明一方面，提供一种由以下通式I表示的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物：
【通式I】
Ab-[LINKER-(B)l]m
在上式中，
Ab是claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)抗体或抗原结合片段，其包括重链可变区和轻链可变区，
重链可变区包括由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的重链CDR1、由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列组成的重链CDR2、以及由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列组成的重链CDR3，
轻链可变区包括由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列组成的轻链CDR1、由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成的轻链CDR2、以及由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列组成的轻链CDR3，
LINKER是连接子，
B是活化剂部分，
l和m各自独立地是选自1至20的整数，
当l是大于或等于2的整数时，每个B可以彼此相同或相异。
在本发明的一方面，所述CLDN18.2(claudin 18isoform 2)抗体或抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，
重链可变区包括由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的重链CDR1、由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列组成的重链CDR2、以及由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列组成的重链CDR3，
轻链可变区包括由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列组成的轻链CDR1、由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成的轻链CDR2、以及由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列组成的轻链CDR3。
此外，所述重链可变区包括人抗体的重链FR，编码所述重链FR的基因可以源自胚系V基因IGHV3-23(germline V gene IGHV3-23)。具体地，所述重链FR可以包括由S EQ IDNO：1所示的氨基酸序列组成的重链FR1、由SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列组成的重链FR2、由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列组成的重链FR3、由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列组成的重链FR4。
此外，所述轻链可变区包括人抗体的轻链FR，编码所述轻链FR的基因可以源自胚系V基因IGKV3-11或IGKV3-15。具体地，所述轻链FR可以包括由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列组成的轻链FR1、由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列组成的轻链FR2、由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列组成的轻链FR3、由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列组成的轻链FR4。
此外，所述轻链F4可以在C末端包括由SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列组成的部分，以与连接子结合。
在本发明的一方面，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括SEQID NO：15所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％同源性的氨基酸序列组成的重链可变区以及SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％同源性的氨基酸序列组成的轻链可变区。
更具体地，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源性的氨基酸序列组成的重链可变区以及SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源性的氨基酸序列组成的轻链可变区，并且与CLDN18.2特异性结合。
更具体地，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％同源性的氨基酸序列组成的重链可变区以及SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％同源性的氨基酸序列组成的轻链可变区，并且与CLDN18.2特异性结合。
在本发明的一方面，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括SEQID NO：17所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％同源性的氨基酸序列组成的重链以及SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％同源性的氨基酸序列组成的轻链。
更具体地，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源性的氨基酸序列组成的重链以及SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源性的氨基酸序列组成的轻链，并且与CLDN18.2特异性结合。
更具体地，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％同源性的氨基酸序列组成的重链以及SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％同源性的氨基酸序列组成的轻链，并且与CLDN18.2特异性结合。
在一实施方式中，所述由具有与SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列至少80％同源性的氨基酸序列组成的重链包括L237A和L238A突变。
在本发明的一方面，所述抗体或其抗原结合片段可以是选自由单克隆抗体(monocl onal antibody)、结构域抗体(domain antibody；dAb)、单链抗体(single chaina ntibody；scAb)、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFab片段、Fv片段、dsFv片段、单链可变抗体(single chain variable fragment；scFv)、scFv-Fc片段、单域重链抗体(singledomain heavy chain antibody)、单域轻链抗体(singledomain light chainantibody)、抗体变体(variant antibody)、多聚体抗体(multimeric antibody)、微型抗体、双抗体、双特异性抗体(bispecific antibody)以及多特异性抗体组成的组中的任一个。
在本说明书中，“连接子”是指将细胞毒性化合物共价键到配体的化合物。
本发明描述的连接子可以是可切割的、不可切割的、亲水的或疏水的。
可切割连接子在细胞内条件下可切割，因此通过所述连接子的切割而在胞内环境下从抗体构建体-活化剂偶联物中释放活化剂。
可切割连接子可被存在于细胞内环境(例如，溶酶体或核内体或穴样内陷(caveolea))的切割剂切割。可切割连接子可以是被细胞内肽酶(包括但不限于溶酶体或核内体的蛋白酶)或蛋白酶切割的肽基连接子(peptidyl linker)。通常，所述肽基连接子的长度为至少2个氨基酸或至少3个氨基酸。切割剂可包括组织蛋白酶B、D以及纤溶酶，已知它们通过水解二肽药物衍生物而在靶细胞内释放活性药物(例如，参见Dubowchik and Walker，1999，Pharm.Therapeutics 83:67-123)。最常见的是可被存在于抗原表达细胞中的酶切割的肽基连接子。例如，能使用可被于癌组织中高度表达的硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶-B切割的肽基连接子(例如，Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly连接子)。其它此类连接子在例如美国专利号6,214,345中有描述。此外，可被细胞内蛋白酶切割的所述肽基连接子可以是例如，Val-Cit连接子、Phe-Lys连接子(例如，参见美国专利号6,214,345，其描述了利用Val-Cit连接子合成阿霉素)或Val-Ala连接子。Val-Cit连接子或Val-Ala连接子可以含有五氟苯基，并且可以含有琥珀酰亚胺基或马来酰亚胺基。此外，可以含有PABA基和五氟苯基，可以含有4-氨基苯甲酸(4-Aminobenzoic ac id，PABA)基和马来酰亚胺基，并且可以含有PABA基和琥珀酰亚胺基。
在本发明的说明书中，术语“细胞内裂解的(intracellularly cleaved)”和“细胞内切割的(intracellular cleavage)”指代针对抗体构建体-活化剂偶联物的细胞内部的代谢过程或反应，由此引起活化剂(B)和抗体构建体(Ab)之间的共价连接，例如因连接子被破坏而从游离药物或胞内抗体分离的偶联物的其它代谢产物。
此外，可切割连接子对pH敏感，即在特定pH值下容易水解。通常，所述pH敏感性连接子可以在酸性条件下水解。例如，可以使用可在溶酶体中水解的酸-不稳定性连接子(例如，腙(hydrazone)、缩氨脲(semicarbazone)、缩氨基硫脲(thiosemicarba zone)、顺乌头酰胺(cis-aconitic amide)、原酸酯(orthoester)、乙缩醛、缩酮等)(例如，参见美国注册专利第5,122,368号；第5,824,805号；第5,622,929号；D ubowchik and Walker，1999，Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville et al.，1989，Biol.Chem.264:14653-14661)。这些连接子在血液等中性pH条件下较为稳定，但在溶酶体大概的pH值，即pH5.5或低于pH5.0下不稳定。可水解连接子的实例可包括硫醚连接子(例如，通过酰腙键附着到治疗剂的硫醚等(参见美国注册专利第5,622,929号))。
此外，连接子在还原条件下可切割(例如，二硫化物连接子)。例如，已知有各种包括以下物质的二硫化物连接子，所述物质可利用SATA(N-琥珀酰亚胺基-5-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT来形成(例如，参见Thorpe et al.，1987，Cancer Res.47：5924-5931；美国注册专利第4,880,935号)。
此外，连接子可以是丙二酸连接子(Johnson et al.，1995，Anticancer Res.15:1387-93)，马来酰亚胺苯甲酰基连接子(Lau et al.，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10):1299-1304)，3’-N-酰胺类似物(Lau et al.，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10):1305-12)，β-葡糖苷酸(β-Glucuronide)连接子(Jeffery et al.，2006，Bioconjug Ch em.17(3):832-40)，或β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)连接子(Kolodych et a l.，2017，Eur J Med Chem.Dec15；142:376-382)。
不可切割的连接子可以是马来酰亚胺己酰基连接子。马来酰亚胺己酰基连接子可包括N-马来酰亚胺甲基环己烷-1-羧酸酯。马来酰亚胺己酰基连接子可含有琥珀酰亚胺基。马来酰亚胺己酰基连接子可含有五氟苯基。连接子可以是马来酰亚胺基和一个或多个聚乙二醇分子的组合。连接子可以是马来酰亚胺己酰基和一个或多个聚乙二醇分子的组合。连接子可以是马来酰亚胺-PEG4连接子。连接子可以是含有琥珀酰亚胺的马来酰亚胺己酰基连接子与一个或多个聚乙二醇分子的组合。连接子可以是五氟苯基与含有一个或多个聚乙二醇分子的马来酰亚胺己酰基连接子的组合。连接子可含有与聚乙二醇分子连接的马来酰亚胺，其中聚乙二醇允许更大的连接子柔性或者可使用更长的连接子。连接子可以是(马来酰亚胺己酰基)-(缬氨酸-瓜氨酸)-(对氨基-苄基氧)连接子。
在本发明的一方面，连接子可以是可切割连接子。
在本发明的一方面，连接子可以是蛋白酶可切割连接子、酸可切割连接子、二硫化物连接子、自裂解连接子(self-immolative linker)或自稳定连接子(self-stabiliz inglinker)、丙二酸连接子、马来酰亚胺苯甲酰基连接子、3’-N-酰胺类似物连接子、β-葡糖苷酸(β-Glucuronide)连接子、或β-半乳糖苷(β-galactoside)连接子。
在本发明的一方面，所述蛋白酶可切割连接子可以包括硫醇反应性间隔子(thiol-reactive spacer)或二肽，更具体地，蛋白酶可切割连接子可以包括硫醇反应性马来酰亚胺己酰基间隔子、缬氨酸-瓜氨酸二肽或对氨基苄氧基羰基间隔子。
在本发明的一方面，所述酸可切割连接子可以是肼(hydrazine)连接子或季铵连接子。
在本发明的一方面，所述连接子可以具有通式II的结构。
【通式Ⅱ】
在上式中，
波纹表示与抗体或抗原结合片段连接的位点，所述抗体或抗原结合片段与CLDN18.2特异性结合；*表示与活化剂连接的位点；
G是葡萄糖醛酸(glucuronic acid)部分(moiety)或所述R3是氢或羧基保护基团，所述每个R4独立地是氢或羟基保护基团；
R1和R2各自独立地是氢、C1-8烷基或C3-8环烷基；
W为-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SONR’-或-PO2NR’-，所述C、S或P直接结合到苯环(phenyl ring)，所述R’和R”各自独立地是氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基等化合物；
Z独立地是氢、C1-8烷基、卤素、氰基或硝基；
n为0至3的整数；
L为以下A)或B)中的任一个：
A)C1-50亚烷基或1-50个原子的杂亚烷基，并且满足以下至少一项：
(i)L包括一个或多个不饱和键；
(ii)被L中的两个原子与取代体相同的二价取代体所取代，其完成杂亚芳基(heteroarylene)；
(iii)L是1至50个原子的杂亚烷基；或者
(iv)所述亚烷基被一个或多个C1-20烷基取代；
B)包括至少一个以下通式III的异戊二烯基衍生物单元，其可以被类异戊二烯转移酶识别：
【通式Ⅲ】
在本发明的一方面，所述偶联物可以具有以下通式IIa的结构。
【通式IIa】
在上式中，
Ab是与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段，所述Ab包括重链可变区和轻链可变区，
B’各自独立地是相同或相异的活化剂，
G各自独立地是葡萄糖醛酸部分(glucuronic acid moiety)或
所述R3是氢或羧基保护基团，所述每个R4独立地是氢或羟基保护基团；
R1和R2各自独立地是氢、C1-8烷基或C3-8环烷基；
W各自独立地是-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SON R’-或-PO2NR’-，所述C、S或P直接结合到苯环(phenyl ring)，所述NR’结合到L，所述R’和R”各自独立地是氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基；
Z各自独立地是氢、C1-8烷基、卤素、氰基或硝基；
n是0至3的整数，当n为大于或等于2的整数时每个Z可以相同或相异；
L各自独立地是以下A)或B)中的任一个：
A)C1-50亚烷基或1-50个原子的杂亚烷基，并且满足以下至少一项：
(i)L包括一个或多个不饱和键；
(ii)彼L中的两个原子与取代体相同的二价取代体所取代，其完成杂亚芳基(heteroarylene)；
(iii)L是1至50个原子的杂亚烷基；
(iv)所述亚烷基进一步被一个或多个C1-20烷基取代；
B)包括至少一个以下通式III的异戊二烯基衍生物单元，其可以被类异戊二烯转移酶识别：
【通式Ⅲ】
m是选自1至20的整数。
此外，本发明涉及由以下通式IIa表示的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物。
【通式IIa】
在上式中，
Ab是与claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)特异性结合的抗体或抗原结合片段，
G各自独立地是葡萄糖醛酸部分(glucuronic acid moiety)或
所述R3是氢或羧基保护基团，所述每个R4独立地是氢或羟基保护基团；
R1和R2各自独立地是氢、C1-8烷基或C3-8环烷基；
W各自独立地是-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SON R’-或-PO2NR’-，所述C、S或P直接结合到苯环(phenyl ring)，所述NR’结合到L，所述R’和R”各自独立地是氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基；
Z各自独立地是氢、C1-8烷基、卤素、氰基或硝基；
n为0至3的整数；
L各自独立地是以下A)或B)中的任一个：
A)C1-50亚烷基或1-50个原子的杂亚烷基，并且满足以下至少一项：
(i)L包括一个或多个不饱和键；
(ii)被L中的两个原子与取代体相同的二价取代体所取代，其完成杂亚芳基(heteroarylene)；
(iii)L是1至50个原子的杂亚烷基；或者
(iv)所述亚烷基被一个或多个C1-20烷基取代；
B)包括至少一个以下通式III的异戊二烯基衍生物单元，其可以被类异戊二烯转移酶识别：
【通式Ⅲ】
B’是活化剂，
Ab结合到以波纹表示的部分；
l和m各自独立地是选自1至20的整数，
当l大于或等于2时，每个活化剂可以相同或相异。
在本发明的一方面，所述G是葡萄糖醛酸部分(glucuronic acid moiety)或具有以下化学式(IIIa)结构的化合物：
【化学式(IIIa)】
其中，
R3是氢或羧基保护基团，
每个R4各自独立地是氢或羟基保护基团。
在本发明的一方面，所述G各自独立地是
R3是氢或羧基保护基团，
所述每个R4各自独立地是氢或羟基保护基团。
在本发明的一方面，所述R3是氢，每个R4是氢。
在本发明的一方面，所述R1和R2各自是氢。
此外，所述Z各自独立地是氢、C1-8烷基、卤素、氰基或硝基。
另外，所述W为-C(O)-、-C(O)NR’-或-C(O)O-，更具体地，所述W为-C(O)NR’-，其中C(O)与苯环连接，NR’结合到L。其中，所述R’为氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基。
此外，所述n为0、1、2或3，更具体地是0、1或2，进一步具体地是0。
更具体地，所述G是具有以下化学式(IIIa)结构的化合物：
【化学式(IIIa)】
其中，
R3是氢或羧基保护基团，
每个R4各自独立地是氢或羟基保护基团，
W为-C(O)NR’-，其中C(O)与苯环连接，NR’结合到L，每个Z为C1-8烷基、卤素、氰基或硝基，n为0，m为1，R1和R2各自是氢。
在本发明的一方面，至少一个L是具有1至100个碳原子的亚烷基，其中亚烷基的碳原子可被选自由N、O以及S组成的组中的一个或多个杂原子取代，亚烷基可以进一步被具有1至20个碳原子的一个或多个烷基取代。
具体地，至少一个L是C1-50亚烷基或1-50个原子的杂亚烷基，并且可以满足以下一项或多项：
(i)包括一个或多个不饱和键；
(ii)被L中的两个原子与取代体相同的二价取代体所取代；其完成杂亚芳基(heteroarylene)，
(iii)L是1至50个原子的杂亚烷基；
(iv)所述亚烷基被一个或多个C1-20烷基取代。
此外，所述至少一个L为含氮的1-50个原子的杂亚烷基，连接子包括亲水性氨基酸的两个或多个原子，所述氮可以与亲水性氨基酸的羰基形成肽键。
在本发明的一方面，L是C2-50亚烷基、C2-50杂亚烷基、亲水性氨基酸、-C(O)-、-C(O)N”-、-C(O)O-、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t、-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-、-(CH2)s-NHC(O)-(C H2)t-C(O)-、-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-、-S(O)2NR”-、-P(O)R”'NR”-、-S(O)NR”-、或-PO2NR”-，
其中，R”和R”'各自独立地是氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C5-20芳基，s、t、u和v各自独立地是0至10的整数。
在本发明的一方面，所述L为含氮的1-5个原子的杂亚烷基，所述连接子包括亲水性氨基酸的两个或多个原子，所述氮与亲水性氨基酸的羰基形成肽键。
在本发明的一方面，所述L通过硫醚键与抗体共价键合，所述硫醚键包括抗体的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，至少一个L是亲水性氨基酸(hydrophilic amino acid)。
在本发明的一方面，亲水性氨基酸可以是精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸。
在本发明的一方面，亲水性氨基酸可以是包括侧链的氨基酸，所述侧链具有在水溶液中的中性pH下带电荷的残基。
在本发明的一方面，亲水性氨基酸是天冬氨酸或谷氨酸。
在本发明的一方面，亲水性氨基酸是鸟氨酸或赖氨酸。
在本发明的一方面，亲水性氨基酸是精氨酸。
在本发明的一方面，至少一个L是-C(O)-、-C(O)NR”-、-C(O)O-、-S(O)2NR”-、-P(O)R”NR”-、-S(O)NR”-、或-PO2NR”-，R”和R”'各自独立地为氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基。
在本发明的一方面，至少一个L是-C(O)NR”-、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-、-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v、-(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-、或-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-，其中，R''是氢、C1-5烷基、C3-8环烷基、C1-5烷氧基、C3-20杂芳基或C6-20芳基，并且s、t、u以及v各自独立地为0至10的整数。
在本发明的一方面，至少一个L是-C(O)NR”-，R”是氢。
在本发明的一方面，至少一个L是-(CH2)s-NHCO-，s是1至5的整数。
在本发明的一方面，至少一个L是-(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-，u是1至5的整数，v是1至5的整数。
在本发明的一方面，L包括
其中，L1为键或具有1至30个碳原子的亚烷基，R11为氢或具有1至10个碳原子的烷基，L2为具有1至30个碳原子的亚烷基。
在本发明的一方面，所述L进一步包括由通式VIII或通式IX表示的第二单元。
在本发明的一方面，至少一个第二单元由通式VIII或通式IX表示：
【通式VIII】
-(CH2)r(V(CH2)p)q-
【通式IX】
-(CH2CH2X)w-
所述V为单键、-O-、-S-、NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-；
X是-O-、C1-8亚烷基或-NR21-；
R21至R25各自独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷基C6-20芳基或C1-6烷基C3-20杂芳基；
r为0至10的整数；
p为0至10的整数；
q为1至20的整数；以及
w为1至20的整数。
在本发明的一方面，q可以是4至20，更具体地，可以是5至20。此外，q可以是1至10、或2至12，更具体地，可以是2、4、5或11。此外，r可以是1或2。此外，p可以是1或2。此外，V可以是-O-。
更具体地，r可以是2，p可以是2，q可以是2、4、5或11，V可以是-O-。
此外，在本发明的一方面，X可以是-O-。此外，w可以是4至20的整数。
更具体地，X可以是-O-，w可以是1至10、或4至20。
在本发明的一方面，至少一个第二单元是至少一个聚乙二醇单元，并具有的结构，其中，n为1至12。
在本发明的一方面，至少一个第二单元是1至12个-OCH2CH2-单元、或3至12个-OCH2CH2-单元、或5至12个-OCH2CH2-单元、或6至12个-OCH2CH2-单元、或3个-OCH2CH2-单元。
在本发明的一方面，至少一个第二单元是-(CH2CH2X)w-，
其中X是单键、-O-、C1-8亚烷基或-NR21-；
R21为氢、C1-6烷基、C1-6烷基-C6-20芳基、或C1-6烷基-C3-20杂芳基，w为1至20的整数，具体为1、3、6或12。
在本发明的一方面，X是-O-，w是6至20的整数。
在本发明的一方面，所述L包括肟，至少一个聚乙二醇单元使肟与活化剂共价键合。
在本发明的一方面，所述连接子包括第三单元，所述第三单元通过1，3-偶极环加成反应(1,3-dipolar cycloaddition reactions)、杂-第尔斯-阿尔德反应(hetero-Diels-Alder reactions)、亲核取代(nucleophilic substitution)反应、非醇醛型羰基反应(non-aldol type carbonyl reactions)、碳-碳多重键加成(addition to car bon-carbon multiple bond)、氧化反应(osidation reactions)或点击反应(clickreactions)形成。
在本发明的一方面，第三单元通过炔烃与叠氮化物之间的反应、或者醛基或酮基与肼或烷氧基胺之间的反应形成。
在本发明的一方面，所述L进一步包括由以下通式IVa、IVb、IVc、IVd、或IVe表示的第三单元。
【通式Ⅳa】
【通式Ⅳb】
【通式Ⅳc】
【通式Ⅳd】
【通式Ⅳe】
在上式中，L1为单键或具有1至30个碳原子的亚烷基，R11是氢或C1-10的烷基。
在本发明的一方面，第三单元包括
其中，
L1为单键或具有1至30个碳原子的亚烷基，优选为具有10、11、12、13、14、15或16个碳原子的亚烷基；
R11为氢或具有1至10个碳原子的烷基，具体地为甲基，
L2是具有1至30个碳原子的亚烷基。
在本发明的一方面，所述L1和L2各自独立地是单键或C1-30的亚烷基；R11是氢或C1-10的烷基。
在本发明的一方面，L1是单键，或具有11个碳原子的亚烷基，或具有12个碳原子的亚烷基。
此外，在本发明的一方面，第三单元包括
所述V为单键、-O-、-S-、NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-、或-SO2NR25-；
R21至R25各自独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷基C6-20芳基、或C1-6烷基C3-20杂芳基；
r为1至10的整数；
p为0至10的整数；
q为1至20的整数；以及
L1是单键。
在本发明的一方面，所述r可以是2或3。此外，p可以是1或2。此外，q可以是1至至6。
更具体地，在所述第三单元中，r可以是2或3；p可以是1或2；q可以是1至6。
此外，在本发明的一方面，包括所述第三单元的连接子可以是
其中，波纹是与抗体构建体连接的位点，*表示与活化剂连接的位点，n为0至20的整数。
在本发明的一方面，第三单元包括
此外，在本发明的一方面，连接子在前体状态下包括此外，在上述结构中，可通过炔烃和叠氮化物之间的反应，具体地，通过点击反应形成第三单元。
在本发明的一方面，连接子在前体状态下包括可以通过上述结构形成第三单元，并且第三单元包括
在本发明的一方面，所述L为含肟的3至50个原子的杂亚烷基，
所述肟的氧原子在与W连接的L的侧面，所述肟的碳原子在与Ab连接的L的侧面；或者
所述肟的碳原子在与W连接的L的侧面，所述肟的氧原子在与Ab连接的L的侧面。
在本发明的一方面，所述L包括肟，并且一个或多个异戊二烯基单元使肟与Ab共价键合。
在本发明的一方面，连接子可以进一步含有具有中结构的至少一个异戊二烯单元，其中n至少为2。
在本发明的一方面，至少一个异戊二烯基单元是类异戊二烯转移酶的底物或类异戊二烯转移酶的产物。
在本发明的一方面，连接子的异戊二烯基单元通过硫醚键与抗体共价键合，硫醚键包括抗体构建体的半胱氨酸的硫原子。
此外，异戊二烯基单元可以使包括在连接子中的肟与抗体构建体共价键合。
在本发明的一方面，抗体构建体包括由类异戊二烯转移酶识别的氨基酸基序，硫醚键包括氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，抗体构建体包括由类异戊二烯转移酶识别的氨基酸基序，硫醚键包括氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，氨基酸基序是选自CXX、CXC、XCXC、XXCC以及CYYX所组成的组中的序列，其中C表示半胱氨酸；Y在不同情况下独立地表示脂肪族氨基酸；X在不同情况下独立地表示谷氨酰胺、谷氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸或亮氨酸；硫醚键包括氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，氨基酸基序是CYYX序列，Y在不同情况下独立地是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸。
在本发明的一方面，氨基酸基序是CVIM或CVLL序列。
在本发明的一方面，在所述氨基酸基序之前的1至20个氨基酸中的至少一个可以各自独立地选自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸以及丝氨酸。
在本发明的一方面，在所述氨基酸基序之前的1至20个氨基酸中的至少一个是甘氨酸。
在本发明的一方面，在氨基酸基序之前的1至10个氨基酸中的一个或多个可以各自独立地选自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸以及丝氨酸。例如，在本发明的一方面，在氨基酸基序之前的7个氨基酸中的至少一个是甘氨酸。或者，在氨基酸基序之前的7个氨基酸中的3个或更多个各自独立地选自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸以及丝氨酸。或者，在氨基酸基序之前的1至10个氨基酸是甘氨酸，具体地，在氨基酸基序之前的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸是甘氨酸。
在本发明的一方面，抗体可以包括GGGGGGGCVIM的氨基酸序列。
在本发明的一方面，所述L可以在C末端包括氨基酸序列GGGGGGGCVIM。
在本发明的另一方面，连接子可以含有
(a)一个或多个L；(b)一个或多个第二单元；(c)一个或多个第三单位；和(d)一个或多个第四单元。
其中，第二单元连接L和第三单元，L和第四单元或第三单元和第四单元，
其中一个或多个第四单元能够释放一种或多种药物或毒素，
其中，L连接第二单元和第四单元，第二单元和第三单元或第二单元和另一个第二单元。
在本发明的一方面，第四单元具有以下化学式(IIb)的结构：
【化学式(IIb)】
在上式中，
G是糖(sugar)、糖酸(sugar acid)或糖衍生物(sugar derivatives)，
W是-C(O)-、-C(O)NR'-、-C(O)O-、-S(O)2NR'-、-P(O)R”NR'-、-S(O)NR'-、或-PO2NR'-，
当C(O)、S或P直接与苯环连接时，R'和R”各自独立地是氢、(C1-8)烷基、(C3-8)环烷基、(C1-8)烷氧基、(C1-8)烷硫基、单-(C1-8)烷氨基或二-(C1-8)烷氨基、(C3-20)杂芳基或(C6-20)芳基，W与L或第二单元连接，
每个Z各自独立地是氢、(C1-8)烷基、卤素、氰基或硝基，
n为1至3的整数，
m为0或1，
R1和R2各自独立地是氢、(C1-8)烷基或(C3-8)环烷基，或者R1和R2与其附着的碳原子一同形成(C3-8)环烷基。
在本发明的一方面，所述糖或糖酸是单糖。
在本发明的一方面，G是具有以下化学式(IIIa)结构的化合物：
【化学式(IIIa)】
其中，
R3是氢或羧基保护基团，
每个R4各自独立地是氢或羟基保护基团。
在本发明的一方面，R3是氢，每个R4是氢。
在本发明的一方面，W是-C(O)NR'-，其中C(O)与苯环连接，NR'与L或第二单元连接。
在本发明的一方面，Z是氢。
在本发明的一方面，R1和R2各自是氢。
在本发明的一方面，第二单元由-(CH2)r(V(CH2)p)q-、-((CH2)pV)q-、-(CH2)r(V(CH2)p)qY-、-((CH2)pV)q(CH2)r-、-Y((CH2)pV)q-或-(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2-表示，
其中，
r为0至10的整数；
p为1至10的整数；
q为1至20的整数，
V和Y各自独立地是单键、-O-、-S-、NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-，
R21至R25各自独立地是氢、(C1-6)烷基、(C1-6烷基)(C6-20)芳基或(C1-6)烷基(C3-20)杂芳基。
在本发明的一方面，r为2。
在本发明的一方面，p为2。
在本发明的一方面，q为6至20的整数。
在本发明的一方面，q为2、5或11。
在本发明的一方面，V和Y各自独立地是-O-。
在本发明的一方面，L或第三单元包括
其中，L1是键或具有1至30个碳原子的亚烷基，R11是氢或具有1至10个碳原子的烷基，具体地是甲基，L2是具有1至30个碳原子的亚烷基。
在本发明的一方面，L1是具有12个碳原子的亚烷基。
在本发明的一方面，R11是甲基。
在本发明的一方面，L2是具有11个碳原子的亚烷基。
在本发明的一方面，结合单元通过硫醚键与抗体共价键合，硫醚键包括抗体的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，抗体包括由类异戊二烯转移酶识别的氨基酸基序，硫醚键包括氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，氨基酸基序是选自CXX、CXC、XCXC、XXCC以及CYYX所组成的组中的序列，其中C表示半胱氨酸；Y在不同情况下独立地表示脂肪族氨基酸；X在不同情况下独立地表示谷氨酰胺、谷氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸或亮氨酸；硫醚键包括氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
在本发明的一方面，氨基酸基序是CYYX序列，Y在不同情况下独立地是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸。
在本发明的一方面，氨基酸基序是CVIM或CVLL序列。
在本发明的一方面，在氨基酸基序之前的1至20个氨基酸中的至少一个是甘氨酸。
在本发明的一方面，在氨基酸基序之前的1至20个氨基酸中的一个或多个可以各自独立地选自甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸以及丝氨酸。
在本发明的一方面，在氨基酸基序之前的1至20个氨基酸是甘氨酸，具体地，在氨基酸基序之前的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸是甘氨酸。
在本发明的一方面，抗体可以包括GGGGGGGCVIM的氨基酸序列。
在本发明的一方面，所述类异戊二烯转移酶是法尼基蛋白转移酶(FTase)或香叶基香叶基转移酶(GGTase)。
在本发明的一方面，L包括与Ab共价键合的一个或多个支化连接子，
i)每个支化连接子包括第五单元，所述第五单元通过第一连接子(PL)与Ab共价键合；
ii)每个支化连接子包括第一分支(B1)，在所述第一分支中，第一活化剂通过第二连接子(SL)和切割基团(CG)来与第五单元共价键合。
iii)每个支化连接子进一步包括，a)第二分支(B2)，在所述第二分支中，第二活化剂通过第二连接子(SL)和切割基团(CG)来与第五单元共价键合；或者b)第二分支(B2)，在所述第二分支中，聚乙二醇部分与第五单元共价键合，
所述每个切割基团可以被水解，以从抗体构建体-活化剂偶联物释放活化剂。
在本发明的一方面，i)支化的连接子包括第五单元，所述第五单元通过第一连接子(PL)与反应性部分共价键合；
ii)第五单元与第一分支(B1)共价键合，并且包括与第二连接子(SL)和切割基团(CG)共价键合的第一活化剂；
iii)第五单元与第二分支(B2)共价键合，并且包括a)与第二连接子(SL)和切割基团(CG)共价键合的第二活化剂，或者b)聚乙二醇，其中每个切割基团(CG)可以被水解后释放活化剂。
在本发明的一方面，所述切割基团如以上化学式II所示。
在本发明中，第二连接子(例如，使活化剂与第五单元连接的)可以包括第三单元，所述第三单元通过1，3-偶极环加成反应(1,3-dipolar cycloaddition reactions)、杂-第尔斯-阿尔德反应(hetero-Diels-Alder reactions)、亲核取代(nucleophilicsubstitution)反应、非醇醛型羰基反应(non-aldol type carbonyl reactions)、碳-碳多重键加成(addition to carbon-carbon multiple bond)、氧化反应(osidationreactions)或点击反应(click reactions)形成。其中，如上所述，第三单元可通过炔烃和叠氮化物的反应、或者非醇醛型羰基反应，例如醛或酮基与肼或羟胺的反应来形成，这使活化剂和/或切割基团与L轻度偶合(mild coupling)。
在本发明的一方面，所述第五单元是
所述L2、L3、L4各自独立地是键或-CnH2n-，所述n为1至30的整数，
所述G1、G 2、G 3各自独立地是键、
所述R30是氢或C1-30烷基，
所述R40是氢、C1-10烷基或-L5-COOR50，其中L5是键或-CnH2n-，
其中，n是1至10的整数，R50是氢或C1-30烷基。
在本发明的一方面，所述第五单元是
所述L2、L3、L4、G1、G2、G3、R30、R40以及L5可以如上所述。
在本发明的一方面，所述切割基团在靶细胞内可切割。
在本发明的一方面，所述切割基团可以释放一个或多个活化剂。
此外，在本发明的一方面，所述偶联物包括Ab；
包括与Ab共价键合的1、2、3、4或更多个支化连接子；
每个支化连接子与一个或两个或更多个活化剂结合；
其中，活化剂可以分别相同或相异。
此外，在本发明的一方面，所述每个活化剂通过可切割的连接来与支化连接子结合。
在本发明的一方面，所述L是包括至少一个第五单元和第一连接子(PL)的连接子。
在本发明的一方面，抗体-药物偶联物的第一连接子包括亚烷基，所述亚烷基具有1至100个碳原子，优选地具有1至50个碳原子，或者；
亚烷基包括至少一个不饱和键；
亚烷基包括至少一个杂亚芳基；
亚烷基的碳原子被选自氮(N)、氧(O)以及硫(S)的一个或多个杂原子取代；或者
亚烷基进一步被一个或多个具有1至20个碳原子的烷基取代。
此外，在本发明的一方面，所述每个支化连接子包括第五单元，每个活化剂通过第二连接子与第五单元结合，所述第五单元通过第一连接子与抗体结合。
在本发明的一方面，所述第五单元是酰胺，一次连接子包括酰胺的羰基。
在本发明的一方面，所述第五单元是赖氨酸单元。
在本发明的具体一方面，亚烷基的至少一个碳原子被氮取代，第一连接子包括亲水性氨基酸的至少两个原子，并且氮与亲水性氨基酸的主链羰基一同形成肽键。亲水性氨基酸可以是，例如精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸。
在本发明的一方面，抗体-活化剂的支化连接子包括具有侧链的氨基酸，所述侧链具有在水溶液中的中性pH条件下带电荷的部分，优选地包括精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸或鸟氨酸。氨基酸可以位于已支化连接子的任何位置。例如，可以使支化连接子的肟与支化连接子的聚乙二醇单元共价键合。另外或替代地，这种氨基酸可以存在于第二连接子中，任选地可以存在于每个第二连接子内。
在本发明的具体一方面，所述连接子-活化剂包括具有以下结构式的化合物。
包括
所述B'和B”表示可能相同或相异的活化剂；
n1至n3各自独立地表示0至30的整数；
AA表示氨基酸基团。
在本发明的一方面，所述AA表示氨基酸基团，氨基酸基团意指一个或多个氨基酸组合的形式。
在本发明的一方面，i)连接子包括多个氨基酸的肽序列；ii)至少两个活化剂通过与氨基酸的侧链共价键合而连接。
在本发明的具体一方面，所述氨基酸基团是1至20个氨基酸的主链键；或侧链键。
在本发明的具体一方面，所述氨基酸基团是通过1至20个精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸的主链键；或侧链键形成的基团。
在本发明的具体一方面，所述氨基酸基团是通过1至20个精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸或鸟氨酸的主链键；或侧链键形成的基团。
在本发明的具体一方面，所述氨基酸基团在1至20个氨基酸中包括一个或多个赖氨酸。
此外，所述氨基酸基团包括赖氨酸的主链键和侧链键。
在本发明的一方面，包括所述第五单元的支化连接子可以是
在本说明书中，“活化剂部分”是指，使得与连接件或部分连接件共价键合的化合物，包括活化剂。
在本发明中，活化剂部分可以与连接子直接键合，并且一个或多个，具体地，至少2个、至少3个、至少4个活化剂部分可以与连接子直接键合。
此外，在本发明中，活化剂部分可以包括用于使活化剂与连接子直接键合的化合物单元。此外，本发明中的活化剂部分的一部分可切割，并且一部分被切割后可在细胞内环境中释放活化剂。此外，本发明中的活化剂部分和连接子可以通过考虑偶联物的药物抗体比(DAR)、药理活性等来确定键合数量。在一实例中，活化剂部分可以意指包括以下结构和活化剂的整体，以此可以使活化剂和连接子直接键合。然而，这具有示例性，不限于此。
(在此，每个部分如上述定义)
在本发明的一方面，活化剂各自独立地选自化疗剂和毒素。
此外，活化剂可以是免疫调节化合物、抗癌剂、抗病毒剂、抗菌剂、抗真菌剂、抗寄生虫剂或其组合，并且可以选择性地使用下列活化剂：
(a)埃罗替尼(erlotinib)、硼替佐米(bortezomib)、氟维司群(fulvestrant)、舒癌特(sutent)、来曲唑(letrozole)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、PTK787/ZK222584、奥沙利铂(oxaliplatin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、雷帕霉素、拉帕替尼(lapatinib)、洛那法尼(lonafa rnib)、索拉非尼(sorafenib)、吉非替尼(gefitinib)、AG1478、AG1571、噻替派(thiotepa)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌、米特多巴(meturedopa)、尤利多巴(uredopa)、乙烯亚胺(ethylenimine)、蜜胺(altretamine)、三亚乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(trietylenephospho ramide)、三亚乙基硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)、三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)、布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullataciionone)、喜树碱(camptothecin)、托泊替康(topotecan)、藓虫素(bryostatin)、卡利他汀、CC-1065、阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)、比折来新(bizelesin)、念珠藻环肽1(cryptophycin 1)、念珠藻环肽8(cryptophycin 8)、多拉司他汀dolastatin)、多卡霉素(duocarmycin)、KW-2189、CB1-TM1、艾榴塞洛素(eleutherobin)、盘克斯他汀(pancratistatin)、沙考地汀(sarcodictyin)、海绵毒素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)、卡奇霉素(calicheamicin)、卡奇霉素γ1(calicheamicin gamma 1)、卡奇霉素ω1(calicheamicin omega 1)、达尼霉素(dynemicin)、达尼霉素A(dynemicin A)、氯屈膦酸盐(clodronate)、埃斯培拉霉素(esperamicin)、新抑癌蛋白发色团(neocarzinostatinchromophore)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放射菌素(actinomycin)、安曲霉素(antrymycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、卡新霉素(catcinomycin)、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素(carninomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycins)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、多特柔比星(detorubucin)、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、多柔比星(doxoru bicin)、N-吗啉基-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基-N-吗啉基-多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉基-多柔比星(2-pyrrolino-doxorubucin)、脂质体多柔比星(liposomal doxorubicin)、脱氧多柔比星(deoxydoxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素C(mitomycin C)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、奎那霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptomigrin)、链脲霉素(streptozocin)、杀结核菌素(tudercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他汀(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)、氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thiguanine)、安西他滨(ancitabine)、氮杂胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷、二甲睾酮(calusterone)、甲雄烷醇酮(dromostanolone)、丙酸盐(propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、亚叶酸(folinic acid)、醋葡醛内酯(aceglatone)、醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)、恩尿嘧啶(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、贝他布昔(bestrabucil)、比山群(bisantrene)、依达曲沙(edatraxate)、得弗伐胺(defofamine)、德莫西林(democolcine)、地吖醌(diaziquone)、依氟鸟氨酸(elfornithine)、依利醋铵(elliptinium acetate)、依托格鲁(etoglucid)、硝酸镓(gallium nitrate)、羟基脲(hydroxyurea)、香菇多糖(lentinan)、罗尼达宁(lonidainine)、美登素(maytansine)、安丝菌素(ansamitocins)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫哌达醇(mopidanmol)、硝拉维林(nitraerine)、喷司他汀(pentostatin)、凡那明(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙酰肼(2-ethylhydrazide)、丙卡巴肼(procarbazine)、多糖-k(polysaccharidek)、雷佐生(razoxane)、根霉素(rhizoxin)、西佐糖(sizofiran)、螺旋锗(spirogermanium)、细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三嗪佐(triaqizuone)、2，2'，2”-三氯三乙基胺(2,2',2”-trichlorotriethylamine)、T-2毒素、粘液霉素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)、蛇形菌素(anguidine)、氨基甲酸酯(urethane)、长春地辛(vindesine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴卫矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、甲托辛(gacytosine)、阿拉伯糖苷(arabinoside)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、噻替派(thiotepa)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇的经白蛋白工程改造的纳米粒子配制物(albumin-engineered nanoparticle formulation ofpaclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)、苯丁酸氮芥、吉西他滨、6-硫代鸟嘌呤、巯基嘌呤、顺铂、卡铂(carboplatin)、长春碱(vinblastine)、铂(platinum)、依托泊苷(etoposide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、长春新碱、长春瑞滨(vinorelbine)、能灭瘤(novantrone)、替尼泊苷(teniposide)、依达曲沙(edatrexate)、柔红霉素(daunomycin)、氨基喋呤(aminopterin)、希罗达(xeloda)、伊班膦酸盐(ibandronate)、CPT-11、拓扑异构酶抑制剂RFS2000、二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine)、视黄酸(retinoic acid)、卡培他滨(capecitabine)、或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酸；
(b)单核因子(monokine)、淋巴因子(lympokine)、传统的多肽激素(traditionalpolypeptide hormone)、甲状旁腺激素(parathyroid hormone)、甲状腺素(thyroxine)、松弛素(relaxin)、松弛素原(prorelaxin)、糖蛋白激素(glycoprotein hormone)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone)、促黄体激素(luteinizing hormone)、肝生长因子(hepatic growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)、促乳素(prolactin)、胎盘催乳激素(placentallactogen)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor)、肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β、苗勒抑制物质(mullerian inhibiting substance)、小鼠促性腺激素相关肽(mousegonadotropin associated peptide)、抑制素(inhibin)、活化素(activin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor)、血小板生成素(thrombopoietin)、红血球生成素(erythropoietin)、骨诱导因子(osteoinductive factor)、干扰素、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子(colony stimulating factor，CSF)、巨噬细胞-CSF、粒细胞-巨噬细胞-CSF(granulocyte-macrophage-CSF)、粒细胞-巨噬细胞-CSF、粒细胞-CSF、白介素(IL)、IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、I L-12、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor)、多肽因子、LIF、kit配体(kit ligand)或其混合物；
(c)白喉毒素、肉毒杆菌毒素、破伤风毒素、痢疾毒素、霍乱毒素、鹅膏素、α-鹅膏素、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓衍生物、吲哚啉二氮呯、吡啶并二氮呯、河豚毒素碱、短裸甲藻毒素(brevetoxin)、雪卡毒素(ciguatoxin)、蓖麻毒素(ricin)、AM毒素、奥瑞他汀(auristatin)、微管溶素(tubulysin)、格尔德霉素(geldanamycin)、美登素(maytansinoid)、卡奇霉素(calicheamycin)、柔红霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、长春地辛(vindesine)、SG2285、多拉司他汀(dolastatin)、多拉司他汀类似物(dolastatinanalog)、念珠藻环肽(cryptophycin)、喜树碱(camptothecin)、根霉素(rhizoxin)、根霉素衍生物(rhizoxin derivatives)、CC-1065、CC-1065类似物或衍生物、多卡霉素(duocarmycin)、烯二炔抗生素(enediyneantibiotic)、埃斯培拉霉素(esperamicin)、埃坡霉素(epothilone)、类毒素(toxoid)或其混合物；
(d)亲和配体(affinity ligand)，其中亲和配体为底物、抑制剂、活化剂、神经传递物质、放射性同位素、或其混合物；
(e)放射性标记(radioactive label)、32P、35S、荧光染料、电子致密试剂(electron dense reagent)、酶、生物素、链霉亲和素(streptavidin)、地高辛(dioxigenin)、半抗原(hapten)、免疫原性蛋白质(immunogenic protein)、具有与靶互补的序列的核酸分子(nucleic acid molecule with a sequence complementary to atarget)或其混合物；
(f)免疫调节化合物(immunomodulatory compound)、抗癌剂(anticanceragent)、抗病毒剂(anti-viral agent)、抗细菌剂(anti-bacterial agent)、抗真菌剂(anti-fungal agent)、抗寄生虫剂(anti-parasitic agent)、或其混合物；
(g)他莫昔芬(tamoxifen)、雷诺昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)或托瑞米芬(toremifene)；
(h)4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrolacetate)、依西美坦(exemestane)、来曲唑(letrozole)或阿那曲唑(anastrozole)；
(i)氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡普胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)或曲沙他滨(troxacitabine)；
(j)芳香酶抑制剂；
(k)蛋白激酶抑制剂；
(l)脂质激酶抑制剂；
(m)反义寡核苷酸；
(n)核酶；
(o)疫苗；以及
(p)抗血管生成剂(anti-angiogenic agent)
在本发明的一方面，活化剂是
其中，y是1至10的整数。
此外，在本发明的另一方面，活化剂为吡咯并苯并二氮杂卓二聚体，并且连接子和抗体通过所述吡咯并苯并二氮杂卓二聚体的N10或N10'位置连接。
选自由-C(O)O-*、-S(O)O-*、-C(O)-*、-C(O)NR-*、-S(O)2NR-*、-(P(O)R')NR-*、-S(O)NR-*以及-PO2NR-*基团组成的组中的任一个附着到吡咯并苯并二氮杂卓二聚体的N10和N10'的位置，
其中，*是连接子附着的部分，
其中，R和R'各自独立地是H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、取代或未取代的C1-8烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的C1-8烷氧基、取代或未取代的C1-8烷硫基、取代或未取代的C3-20杂芳基、取代或未取代的C5-20芳基、或单C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基，
其中，当C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基被取代时，其被选自由H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-6烷基、C1-6烷氧基以及C6-12芳基组成的组中的取代基所取代，
吡咯并苯并二氮杂卓二聚体前体(pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug)、其药学上可接受的盐或溶剂化物可用作活化剂。
更具体地，在吡咯并苯并二氮杂卓二聚体的N10位置被X取代，或者在N'10位置被X'取代，其中，X或X'使吡咯并苯并二氮杂卓二聚体与连接子连接；
X和X'各自独立地选自-C(O)O*、-S(O)O-*、-C(O)-*、-C(O)NRX-*、-S(O)2NRX-*、-P(O)R'NRX-*、-S(O)NRX-*、或-PO2NRX-*；
RX和RX'独立地选自H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基。
在本发明的一方面，提供吡咯并苯并二氮杂卓二聚体前体作为所述活化剂。当以根据本发明的前体形式施用时，需要在暴露于血液时通过附加反应转化为有效药物，因此可以事先防止当连接子意外分解时可能发生的副作用，对正常细胞的毒性降低，并且从药物更稳定这一点来说，比现有PBD药物有利。
此外，在制备抗体-药物偶联物时，通过常规方法制备的抗体-药物偶联物的杂质含量高，并且暴露的亚胺基团受到亲核试剂(nucleophile)的攻击而有可能生成不必要结构的药物，与此相反，通过根据本发明的方法制备的抗体-药物偶联物具有纯度高且易于分离的优点，并且比现有PBD或PBD二聚体显示出提高的物理性质。
在本发明的一方面，吡咯并苯并二氮杂卓二聚体前体是特点在于具有以下通式X或通式XI结构的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体前体、其学上可接受的盐或溶剂化物：
【通式X】
【通式XI】
在上式中，
所述虚线表示C1和C2之间、C2和C3之间、C'1和C'2之间、或C'2和C'3之间的双键选择性存在；
RX1和RX1'独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、Rm、ORm、＝CH-Rm'＝C(Rm')2、O-SO2-Rm、CO2Rm、CORm、卤基以及二卤基；
Rm'选自Rm、CO2Rm、CORm、CHO、CO2H以及卤基，
每个Rm独立地选自由C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基组成的组；
RX2、RX2'、RX3、RX3'、RX5、以及RX5'独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRm 2、NO2以及卤基，
RX4和RX4'独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRm 2、NO2、卤基、C1-6烷基C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C5-12芳基、5至7元杂芳基、-CN、-NCO、-ORn、-OC(O)Rn、-OC(O)NRnRn'、-OS(O)Rn、-OS(O)2Rn、-SRn、-S(O)Rn、-S(O)2Rn、-S(O)NRnRn'、-S(O)2NRnRn'、-OS(O)NRnRn'、-OS(O)2NRnRn'、-NRnRn'、-NRnC(O)Ro、-NRnC(O)ORo、-NRnC(O)NRoRo'、-NRnS(O)Ro、-NRnS(O)2Ro、-NRnS(O)NRoRo'、-NRnS(O)2NRoRo'、-C(O)Rn、-C(O)ORn以及-C(O)NRnRn'；
X和X'独立地选自-C(O)O*、-S(O)O-*、-C(O)-*、-C(O)NRX-*、-S(O)2NRX-*、-P(O)R'NRX-*、-S(O)NRX-*、或-PO2NRX-*；
RX和RX'独立地选自H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基；
Y和Y'独立地选自O、S以及N(H)；
RX6独立地选自C3-12亚烷基、C3-12亚烯基或C3-12杂亚烷基；
RX7和RX7'独立地选自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-10芳基、5至7元杂芳基、-ORr、-OC(O)Rr、-OC(O)NRrRr'、-OS(O)Rr、-OS(O)2Rr、-SRr、-S(O)Rr、-S(O)2Rr、-S(O)NRrRr'、-S(O)2NRrRr'、-OS(O)NRrRr'、-OS(O)2NRrRr'、-NRr Rr'、-NRrC(O)Rs、-NRrC(O)ORs、-NRrC(O)NRsRs'、-NRrS(O)Rs、-NRrS(O)2Rs、-NRrS(O)NRsRs'、-NRrS(O)2NRsRs、-C(O)Rr、-C(O)ORs或-C(O)NRrRr'；
每个Rr、Rr'、Rs以及Rs'独立地选自H、C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C3-13环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基、以及5至7元杂芳基；
每个RX8和RX8'独立地选自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6杂烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基、5至7元杂芳基-S(O)Rm、-S(O)2Rm、-S(O)NRmRm'、-S(O)2NRmRm'、-NRmR m'、-NRmC(O)Rm、-NRmC(O)ORn、-NRmC(O)NRnRn'、-NRmS(O)Rn、-NRmS(O)2Rn、-NRmS(O)NRnRn'、-NRmS(O)2NRnRn'、-C(O)Rm、-C(O)ORm以及-C(O)NRmRm'；
Za选自ORX12a，NRX12aRX12a、或SRX12a；
Zb选自ORX13a、NRX13aRX13a或SRX13a；
Za'选自ORX12a'、NRX12a'RX12a'或SRX12a'；
Zb'选自ORX13a'、NRX13'RX13a'或SRX13a'；
每个RX12a、RX12a'、RX13a以及RX13a'独立地选自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基、5至7元杂芳基-C(O)RX15a、-C(O)ORX15a以及-C(O)NRX15aRX15a'；
每个RX15a和RX15a'独立地选自C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基；
所述Za和Zb通过与其附着的原子一同任意结合而形成3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、或3至7元杂芳基，并且Za'和Zb'通过与其附着的原子一同任意结合而形成3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、或3至7元杂芳基；以及
所述每个Rn、Rn'、Ro、Ro'、Rp、以及Rp'独立地选自H、C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C3-13环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基、以及5至7元杂芳基。
在本发明的一方面，所述Rm独立地选自由C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基组成的组，
在本发明的一方面，Rm进一步被C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、或5至7元杂芳基取代。
在本发明的一方面，所述RX4和RX4'独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRmRm'、NO2、卤基、C1-6烷基C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3-7元杂环烷基、C5-12芳基、5-7元杂芳基、-CN、-NCO、-ORn、-OC(O)Rn、-OC(O)NRnRn'、-OS(O)Rn、-OS(O)2Rn、-SRn、-S(O)Rn、-S(O)2Rn、-S(O)NRnRn'、-S(O)2NRnRn'、-OS(O)NRnRn'、-OS(O)2NRnRn'、-NRnRn'、-NRnC(O)Ro、-NRnC(O)ORo、-NRnC(O)NRoRo'、-NRnS(O)Ro、-NRnS(O)2Ro、-NRnS(O)NRoRo'、-NRnS(O)2NRoRo'、-C(O)Rn、-C(O)ORn以及-C(O)NRnRn'，
所述RX4或RX4'是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C5-12芳基或5至7元杂芳基，并且进一步被一个或多个C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基、5至7元杂芳基、-ORp、-OC(O)Rp、-OC(O)NRpRp'、-OS(O)Rp、-OS(O)2Rp、-SRp、-S(O)Rp、-S(O)2Rp、-S(O)NRpRp'、-S(O)2NRpRp'、-OS(O)NRpRp'、-OS(O)2NRpRp'、-NRpRp'、-NRpC(O)Rq、-NRpC(O)ORq、-NRpC(O)NRqRq'、-NRpS(O)Rq、-NRpS(O)2Rq、-NRpS(O)NRqRq'、-NRpS(O)2NRqRq'、-C(O)Rp、-C(O)ORp或-C(O)NRpRp取代。
在本发明的一方面，所述RX7和RX7'独立地选自H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-10芳基、5至7元杂芳基、-ORr、-OC(O)Rr、-OC(O)NRrRr'、-OS(O)Rr、-OS(O)2Rr、-SRr、-S(O)Rr、-S(O)2Rr、-S(O)NRrRr'、-S(O)2NRrRr'、-OS(O)NRrRr'、-OS(O)2NRrRr'、-NRrRr'、-NRrC(O)Rs、-NRrC(O)ORs、-NRrC(O)NRsRs'、-NRrS(O)Rs、-NRrS(O)2Rs、-NRrS(O)NRsRs'、-NRrS(O)2NRsRs、-C(O)Rr、-C(O)ORs -C(O)NRrRr'，
所述RX7和RX7'是C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-10芳基、5至7元杂芳基，并且进一步被C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、3至7元杂环烷基、C6-10芳基、5至7元杂芳基、-ORt、-OC(O)Rt、-OC(O)NRtRt'、-OS(O)Rt、-OS(O)2Rt、-SRt、-S(O)Rt、-S(O)2Rt、-S(O)NRtRt'、-S(O)2NRtRt'、-OS(O)NRtRt'、-OS(O)2NRtRt'、-NRtRt'、-NRtC(O)Ru、-NRtC(O)ORu、-NRtC(O)NRuRu'、-NRtS(O)Ru、-NRtS(O)2Ru、-NRtS(O)NRuRu'、-NRtS(O)2NRuRu'、-C(O)Rt、-C(O)ORt或-C(O)NRtRt'取代，
所述Rr、Rr'、Rs、Rs'、Rt、Rt'、Ru以及Ru'独立地选自H、C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C3-13环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基、以及5至7元杂芳基。
在本发明的一方面，所述RX1和RX1'独立地选自Rm；以及
Rm选自C1-6烷基、C2-6烯基、C5-7芳基以及C3-6杂芳基。
在本发明的一方面，所述RX2、RX2'、RX3、RX3'、RX5、以及RX5'独立地选自H或OH。
在本发明的一方面，所述RX4和RX4'独立地选自Rm；以及
Rm是C1-6烷氧基。
在本发明的一方面，所述RX4和RX4'是独立地选自由甲氧基、乙氧基以及丁氧基组成的组中的任一个。
在本发明的一方面，所述Y和Y'为O。
在本发明的一方面，所述RX6是C3-12亚烷基、C3-12亚烯基或C3-12杂亚烷基，并且所述RX6被-NH2、-NHRm、-NHC(O)Rm、-NHC(O)CH2-[OCH2CH2]n-RXX、或-[CH2CH2O]n-RXX取代；
所述RXX是H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基；以及
n是1至6的整数。
在本发明的一方面，所述吡咯并苯并二氮杂卓二聚体由以下通式X表示。
【通式X】
在上式中，
所述虚线表示C1和C2之间、C2和C3之间、C'1和C'2之间、或C'2和C'3之间的双键选择性存在；
RX1和RX1'各自独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、Rm、ORm、＝CH-Rm、＝C(Rm')2、OSO2-Rm、CO2Rm、CORm、卤基或二卤基；
RX2、RX2'、RX3、以及RX3'各自独立地选自H、Rm、OH、ORm、NRm 2、NO2和卤基；
RX4和RX4’各自独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRm 2、卤基以及C1-6烷基；
RX5和RX5’各自独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRm 2、-NRmRm'、NO2、-NRmC(O)Rm'、-NRmC(O)ORm'、-NRmC(O)NRmRm'、-S(O)Rm、-S(O)2Rm、-S(O)NRmRm'、-S(O)2NRmRm'、-NRmS(O)Rm'、-NRmS(O)2Rm'、-P(O)Rm、-P(O)2Rm、-P(O)NRmRm'、-P(O)2NRmRm'、-NRmP(O)Rm'、-NRmP(O)2Rm'以及卤基；
Y和Y'各自独立地是O、S或N(H)；
RX6独立地是C3-12亚烷基、C3-12亚烯基、或C3-12杂亚烷基；并且RX6被-NH2、-NHRm、-NHC(O)Rm、-NHC(O)CH2-[OCH2CH2]n-RXX、或-[CH2CH2O]n-RXX取代或未取代；
所述RXX是H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基，其中n为1至6的整数；
RX7和RX7’各自独立地是H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C(0)Rr、-C(O)ORs或-C(O)NRrRr'；
Rr、Rr'以及Rs各自独立地是H、C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C3-13环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基或5至7元杂芳基；
每个Rm'独立地选自Rm、CO2Rm、CORm、CHO、CO2H以及卤基，
每个Rm独立地选自H、OH、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C2-12烯基、C2-12炔基、C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基所组成的组，其中，C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基的一个或多个氢原子可以被OH、＝O、C1-12烷基或C1-12烷氧基取代。
在本发明的一方面，所述RX1和RX1’各自独立地选自＝CH2；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C2-6烯基；C5-7芳基；C3-6杂芳基；或者被C1-6烷基或C1-6烷氧基取代的C5-7芳基。
在本发明的一方面，所述RX2、RX2'、RX3以及RX3'各自独立地选自H或OH。
在本发明的一方面，所述RX5和RX5’各自独立地选自由H、OH、S(O)Rm、S(O)2Rm、-P(O)Rm、以及-P(O)2Rm组成的组，其中，Rm是H、OH、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C2-12烯基或C2-12炔基。
在本发明的一方面，所述RX4和RX4'各自独立地是C1-6烷氧基。
在本发明的一方面，所述RX4和RX4'是独立地选自由甲氧基、乙氧基以及丁氧基组成的组中的任一个。
在本发明的一方面，所述Y和Y'为O。
在本发明的一方面，所述RX6是C3-12亚烷基、C3-12亚烯基或C3-12杂亚烷基，并且所述RX6被-NH2、-NHRm、-NHC(O)Rm、-NHC(O)CH2-[OCH2CH2]n-RXX、或-[CH2CH2O]n-RXX取代；
所述RXX是H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基；以及
n是1至6的整数。
此外，在本发明的一方面，所述活化剂是通式XII或通式XIII所示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
【通式XII】
【通式XIII】
所述Xa和Xa’独立地选自键或C1-6亚烷基；
ZX'和ZX独立地选自氢、C1-8烷基、卤基、氰基、硝基、 或-(CH2)m-OCH3；
每个R80、R90和R100选自氢、C1-8烷基、C2-6烯基和C1-6烷氧基；以及
m为0至12的整数。
所述ZX'和ZX是独立地选自由氢、以及-(CH2)m-OCH3组成的组中的任一个，
所述每个R80、R90和R100是选自由氢、C1-3烷基和C1-3烷氧基组成的组中的任一个，
m为1至6的整数。
在本发明的一方面，所述[LINKER-(B)l]前体是选自由
组成的组中的任一个。
此外，在本发明的一方面，所述[LINKER-(B)l]前体是
其中，MMAE是一甲基澳瑞他汀E(monomethyl auristatin E)，
MMAF是一甲基澳瑞他汀F(monomethyl auristatin F)。
在本发明的一方面，所述[LINKER-(B)l]前体包括以下结构。
所述B'和B”表示可能相同或相异的活化剂；
m和和n各自独立地表示0至30的整数。
具体地，上述
表示通式X的X和X'连接的部分。更具体地，是
此外，本发明涉及一种用于预防或治疗过度增殖、癌症或血管生成疾病的药物组合物，其包括所述偶联物。
在本发明的一方面，所述药物组合物进一步包括药学上有效量的化疗剂(chemothe rapeutic agent)。
在本发明的一方面，所述癌症是选自由肺癌、小细胞肺癌、胃肠癌、大肠癌、肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤和黑色素瘤组成的组中的任一个。
此外，本发明涉及一种药物制剂，其包括所述偶联物。
本发明的偶联物施用途径可以是，例如口服或肠胃外。其中，肠胃外是指广义的施用途径，例如包括经皮、静脉内、动脉内、腹腔内、肌肉内、皮下、鼻内、舌下、脊髓內(鞘内，intrathecal)、吸入、眼部、直肠、阴道、脑室施用等。
当配制所述组合物时，通过使用常规使用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制备。
用于口服施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、锭剂等，这种固体制剂通过在一个或多个根据本发明的化合物中混合至少一种赋形剂，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)或明胶而制备。此外，除简单的赋形剂外，还使用苯乙烯酸镁、滑石粉等润滑剂。用于口服施用的液体制剂有混悬剂、内溶液剂、乳剂或糖浆剂等，除常规使用的水、液体石蜡等简单稀释剂外，可以包括各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、非水溶液剂、悬浮溶剂、乳剂、注射剂、冻干制剂、栓剂等。在用于肠胃外施用的制剂中，非水溶剂和悬浮溶剂可使用丙二醇、聚乙二醇、橄榄油等植物油、油酸乙酯等可注射的酯类等。作为栓剂的基质，可以使用witepsol、聚乙二醇(Macrogol)、吐温(tween)61、可可脂、月桂脂、甘油、明胶等。
根据本发明的偶联物以药学上的有效量施用。在本发明中，“药学上的有效量”是指足够以可适用于医学治疗的合理效益/风险比来治疗疾病的量，有效剂量水平可根据患者的疾病类型、患病程度、严重程度、药物活性、对药物的敏感性、施用时间、施用途径和排出率、治疗期限、包括同时使用的药物在内的因素以及其它医学领域已知的因素而决定。本发明的组合物可作为单独的治疗剂来施用，或者与其它治疗剂组合施用，可与传统的治疗剂依次或同时施用，并且可以单次或多次施用。重要的是在考虑上述所有因素的情况下施用能够以最少的量获得最大的效果且无副作用地量，这可以由所属领域技术人员容易地确定。
具体地，根据本发明的偶联物的有效量可以根据患者的年龄、性别、体重而变化，通常能够以每1kg体重0.01mg至150mg、更具体地，以每1kg体重0.1mg至100m g的量每天或隔天施用，或者每天分1至3次施用。然而，所述施用量可根据施用途径、严重程度、性别、体重、年龄等而有所增减，因此其不限制本发明的范围。
有益效果
根据本发明的抗体-药物偶联物包括抗-CLDN18.2抗体，其通过与claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)表达细胞特异性结合而内化到细胞中，因此可以有效且特异性以及选择性地传递药物，使得抗体与药物稳定结合，从而保持体内稳定性的同时使其表现出所需的细胞毒性。特别地，表现出可提供一种抗体-连接子-配体系统的效果，该系统通过适用包括自裂解基团(其在血浆中更稳定，在体内循环过程中也稳定，并且通过使药物在癌细胞内容易地释放而使药效最大化)的连接子技术，可使药物和/或毒素稳定到达靶细胞，从而使药效有效发挥的同时显著降低毒性。
附图说明
图1示出为了确认抗体的癌细胞结合能力而利用流式细胞仪进行细胞结合试验的结果。
图2和图3是示出ADC试样的体内试验结果的图。
图4至图7是根据本发明的ADC的制备过程示意图。
具体实施方式
以下，通过实施例和试验例进一步详细描述本发明。
以下实施例和试验例旨在助于理解本发明，而不旨在限制本发明的范围。
<实施例1>制备claudin18亚型2(claudin 18isoform 2，CLDN18.2)特异性抗体
通过国际专利申请第PCT/CN2020/118650号中描述的方法制备了与CLDN18.2特异性结合的抗体。此外，所述与CLDN18.2特异性结合的抗体的氨基酸序列示于下表1。
【表1】
为了ADC合成，制备了抗体克隆PR301839，其具有在表1中抗体(PR002726)的轻链(SEQ ID NO：18)C末端融合CaaX肽部分(GGGGGGGCVIM；SEQ ID NO：19)的形式，并通过基于CHO cell的临时表达生产了抗体。将产出的PR301839抗体用于下一步ADC合成。
【表2】
<实施例2>化合物1和化合物2的制备
通过韩国公开专利第10-2018-0110645号描述的方法制备了所述化合物1和2。
<实施例3>化合物3的制备
通过国际公开专利第WO2017-089895号中描述的方法制备了所述化合物3。所述化合物3中的MMAE的结构如下。
<实施例4>化合物4和化合物5的制备
通过专利WO2017-089890中描述的方法制备了所述化合物4和所述化合物5。
所述化合物5中的MMAF的结构如下。
<实施例5>ADC的制备
通过以下两个步骤制备了ADC，共同使用的LCB14-0606和LCB14-0512通过韩国公开专利第10-2014-0035393号描述的方法制备。LCB14-0606和LCB14-0512的结构式如下：
步骤1：异戊二烯化抗体(prenylated antibody)的制备
制备了在实施例1中制备的抗体的异戊二烯化反应混合物，并在30℃下反应了16小时。反应混合物由24μM抗体、400nM的FTase(Calbiochem#344145)以及包括0.25mM的LCB14-0511或LCB14-0606的缓冲溶液(50mM Tris-HCl(pH 7.4)、5mM Mg Cl2、10μM的ZnCl2、0.25mM的DTT)组成。反应终止后，使用以PBS缓冲溶液平衡的G25琼脂糖凝胶管柱(AKTA纯化器，通用电气医疗集团)来脱盐异戊二烯化的抗体。
步骤2：药物偶联(drug-conjugation)方法
<肟键结合反应(conjugation by oxime bond formation)>
通过混合100mM的乙酸钠缓冲溶液pH 5.2、10％ DMSO、20μM抗体以及200μM的连接子-药物(室内，实施例1、2中的化合物1、2、3、4、5、7以及8)，并在30℃下轻轻搅拌。反应6小时或24小时后，通过FPLC(AKTA纯化器，通用电气医疗集团)去除已使用的过量的低分子化合物，并收集、浓缩蛋白质级分。
<无铜点击结合反应(conjugation by Copper-free click reaction)>
ADC利用异戊二烯化的抗体和连接子-药物之间的无铜点击(Copper-free click)结合反应，通过混合所述ADC、PBS缓冲溶液(pH 7.4)、1％的DMSO、10μM的异戊二烯化的抗体、以及100μM的连接子-药物(室内，实施例1的化合物2)来制备反应混合物后在25℃下反应6小时，然后经FPLC(AKTA纯化器，通用电气医疗集团)或G25琼脂糖凝胶管柱过程去除了已使用的过量的低分子化合物，并收集、浓缩了蛋白质级分。
【表3】
ADC制备目录
<实验例1>抗体的癌细胞结合能力评价
通过利用流式细胞仪(FACS)的细胞结合试验确认了以CaaX肽融合至抗-CLDN18.2抗体(PR002726)和轻链C末端的形式用于ADC制备的抗体(PR301839)的癌细胞结合能力。
将已知表达CLDN18.2的胃癌细胞株SNU-601和SNU-620以及胰腺癌细胞株PATU-8988s用作癌细胞，并将处理IgG的组以及仅处理二抗的组用作对照组抗体。
实验结果证实，在SNU-601中PR002726和PR301839的结合能力分别为IgG对照组的22.95倍和17.5倍。证实在SNU-620中PR002726和PR301839的结合能力分别为对照组的15.09倍和11.21倍。经证实，在PATU-8988s中PR301839的结合能力为对照组的16.21倍。总体而言，证实PR002726和PR301839两种抗体能够与表达CLDN18.2的癌细胞结合。(参见图1)
<实验例2>体外细胞毒性评价
检测了下表4中列出的药物和ADC对癌细胞株的抑制细胞增值活性。使用了市售的人胃癌细胞株NUGC-4、SNU-601、SNU-602以及胰腺癌细胞株PATU-8988s作为癌细胞株，并使用了正常细胞株HaCaT、Fa2N-4、HK-2以及HS738.st/Int。作为药物，将MMAE和S G2057作为ADC，使用了表3的ADC。将在96孔板中处理144小时每个癌细胞株的组以每个孔2500至10000个接种(seeding)后培养24小时，然后在癌细胞中以0.256pM至100pM(5倍连续稀释)的浓度处理了药物和ADC，并在正常细胞株中以2.56pM至1000pM(5倍连续稀释)的浓度处理了药物和ADC。144小时后，用SRB(Sulforhodamin e B)染料对存活的细胞数进行定量，并用Celltiter glo对Hs738.st/Int细胞株进行定量。
【表4】
以NUGC-4细胞株为例，证实在反应相同时间的细胞毒性试验中，奥瑞他汀系的抗体-药物偶联物(ADC3)比吡咯并苯并二氮杂卓系的抗体-药物偶联体(ADC1、ADC2)表现出相等或更强的细胞毒性。此外，证实CLDN18.2抗体的结合程度高，并且以表现出最强细胞毒性的SNU-601细胞株为例，在反应相同时间的细胞毒性试验中，吡咯并苯并二氮杂卓系的抗体-药物偶联物(ADC1、ADC2)比奥瑞他汀系的抗体-药物偶联物(ADC3、A DC4、ADC5)表现出更强的细胞毒性。证实在抗体表现出高结合能力的SNU-620细胞株中，两个系的抗体-药物偶联物的抗癌功效无明显差异。在作为胰腺癌细胞株的PATU-8988s中比较奥瑞他汀系的三种抗体-药物偶联物的细胞毒性结果证实，三种ADC均表现出很强的细胞毒性。
在正常细胞株HaCaT、Fa2N-4、HK-2以及Hs738.st/Int中，ADC1至ADC5均未在有效剂量范围内表现出细胞毒性，并且细胞毒性比单独施用毒素或施用于癌细胞株时显着降低，因此可以看出根据本发明的ADC表现出癌细胞特异性的细胞毒性。
<实验例3>体内功效评价
培养胃癌细胞株SNU-601后，将100μl的基底膜基质混合至100μl的装有20000个细胞的PBS中，并将其移植到小鼠。当肿瘤大小达到150mm3至200mm3时，如下表5和6所示，通过静脉注射施用抗体-药物偶联物。
【表5】
比较ADC试样的体内功效(第一次)
【表6】
比较ADC试样的体内功效(第二次)
第一次试验结果证实，在吡咯并苯并二氮杂卓系的抗体-药物偶联物ADC1的0.2mg/kg、0.4mg/kg中，均比对照组表现出肿瘤生长抑制功效。证实在奥瑞他汀系的抗体-药物偶联物ADC3的0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg中，均比对照组表现出剂量依赖性的肿瘤生长抑制功效。ADC试样的体内功效对比试验结果(第一次)如图2所示。
第二次试验结果证实，1mg/kg的ADC3组的肿瘤生长抑制功效与第一次试验的结果相似。在任何剂量的ADC4和ADC5下确认到剂量依赖性的肿瘤生长抑制功效。ADC试样的体内功效对比试验结果(第二次)如图3所示。
参考文献
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工业实用性
本发明可通过靶向claudin18亚型2的新的抗体-药物偶联物、其活性代谢物、其制备方法、用途以及包括其的药物组合物，可有效用于医学领域。
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 1
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Val Met Ser
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Thr Ile Ser Gly Ser Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His Leu Gln
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Ala Ala Ala Gly Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
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<220>
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<400> 17
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Ala Ala Ala Gly Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 18
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PR002726 LC
<400> 18
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CaaX peptide
<400> 19
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Cys Val Ile Met
1 5 10
<210> 20
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PR301839 VL FR4
<400> 20
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Cys Val Ile Met
20
<210> 21
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PR301839 VL
<400> 21
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Cys Val Ile Met
115

Claims (54)

1.一种偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其由以下通式I表示：
【通式1】
Ab-[LINKER-(B)l]m
在上式中，
Ab是claudin18亚型2(CLDN18.2)抗体或抗原结合片段，其包括重链可变区和轻链可变区，
重链可变区包括由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成的重链CDR1、由SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列组成的重链CDR2、以及由SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列组成的重链CDR3，
轻链可变区包括由SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列组成的轻链CDR1、由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成的轻链CDR2、以及由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列组成的轻链CDR3，
LINKER是连接子，
B是活化剂部分，
l和m各自独立地是选自1至20的整数，
当l是大于或等于2的整数时，B可以彼此相同或相异。
2.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
重链可变区包括人抗体的重链FR，编码所述重链FR的基因源自胚系V基因IGHV3-23。
3.根据权利要求2所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
重链FR包括由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的重链FR1、由SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列组成的重链FR2、由SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列组成的重链FR3、由SEQ IDNO：7所示的氨基酸序列组成的重链FR4。
4.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
轻链可变区包括人抗体的轻链FR，编码所述轻链FR的基因源自胚系V基因IGHV3-11或IGKV3-15。
5.根据权利要求4所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
轻链FR包括由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列组成的轻链FR1；
由SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列组成的轻链FR2；
由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列组成的轻链FR3；
由SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列组成的轻链FR4，或由SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列组成的轻链FR4。
6.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
与CLDN18.2特异性结合的抗体或抗原结合片段包括：SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％同源性的氨基酸序列组成的重链可变区；以及
SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列；或由具有与其至少80％同源性的氨基酸序列组成的轻链可变区。
7.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述抗体或其抗原结合片段是选自由单克隆抗体、结构域抗体、单链抗体、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFab片段、Fv片段、dsFv片段、单链可变抗体(scF v)、scFv-Fc片段、单域重链抗体、单域轻链抗体、抗体变体、多聚体抗体、微型抗体、双抗体、双特异性抗体以及多特异性抗体组成的组中的任一个。
8.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述抗体和活化剂之间的连接子是可切割的。
9.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述偶联物具有以下通式IIa的结构：
【通式IIa】
在上式中，
Ab是CLDN18.2抗体或抗原结合片段，其包括重链可变区和轻链可变区，
B’各自独立地是相同或相异的活化剂，
G和G'各自独立地是葡萄糖醛酸部分或
所述R3是氢或羧基保护基团，所述每个R4独立地是氢或羟基保护基团；
R1和R2各自独立地是氢、C1-8烷基或C3-8环烷基；
W各自独立地是-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SON R’-或-PO2NR’-，所述C、S或P直接结合到苯环，所述NR’结合到L，所述R’和R”各自独立地是氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基；
Z各自独立地是氢、C1-8烷基、卤素、氰基或硝基；
n是0至3的整数，当n为大于或等于2的整数时每个Z可以相同或相异；
L各自独立地是以下A)或B)中的任一个：
A)C1-50亚烷基或1-50个原子的杂亚烷基，并且满足以下至少一项：
(i)L包括一个或多个不饱和键；
(ii)被L中的两个原子与取代体相同的二价取代体所取代，其完成杂亚芳基；
(iii)L是1至50个原子的杂亚烷基；
(iv)所述亚烷基进一步被一个或多个C1-20烷基取代；
B)包括至少一个以下通式III的异戊二烯衍生物单元，其可以被类异戊二烯转移酶识别：
【通式Ⅲ】
m是选自1至20的整数。
10.一种偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其由以下通式IIa表示：
【通式IIa】
在上式中，
Ab是与claudin18亚型2(CLDN18.2)特异性结合的抗体或抗原结合片段，
G各自独立地是葡萄糖醛酸部分或
所述R3是氢或羧基保护基团，所述每个R4独立地是氢或羟基保护基团；
R1和R2各自独立地是氢、C1-8烷基或C3-8环烷基；
W各自独立地是-C(O)-、-C(O)NR’-、-C(O)O-、-SO2NR’-、-P(O)R”NR’-、-SON R’-或-PO2NR’-，所述C、S或P直接结合到苯环，所述NR’结合到L，所述R’和R”各自独立地是氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基；
Z各自独立地是氢、C1-8烷基、卤素、氰基或硝基；
n为0至3的整数；
L各自独立地是以下A)或B)中的任一个：
A)C1-50亚烷基或1-50个原子的杂亚烷基，并且满足以下至少一项：
(i)L包括一个或多个不饱和键；
(ii)被L中的两个原子与取代体相同的二价取代体所取代，其完成杂亚芳基；
(iii)L是1至50个原子的杂亚烷基；或者
(iv)所述亚烷基被一个或多个C1-20烷基取代；
B)包括至少一个以下通式III的异戊二烯衍生物单元，其可以被类异戊二烯转移酶识别：
【通式Ⅲ】
B’是活化剂，
Ab结合到以波纹表示的部分；
l和m各自独立地是选自1至20的整数，
当l大于或等于2时，每个活化剂可以相同或相异。
11.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述G各自独立地是
R3是氢或羧基保护基团，
所述每个R4独立地是氢或羟基保护基团。
12.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述R1和R2均为氢；
n为0；
所述W各自独立地是-C(O)NR’-，所述C直接结合到苯环，所述R’为氢、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基、C3-20杂芳基或C6-20芳基，NR’结合到L。
13.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L是含氮的1-5个原子的杂亚烷基，
所述连接子包括亲水性氨基酸的两个或多个原子，
所述氮与亲水性氨基酸的羰基形成肽键。
14.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L通过硫醚键与抗体共价键合，
所述硫醚键包括抗体的半胱氨酸的硫原子。
15.根据权利要求14所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述抗体在抗体的C末端包括可被类异戊二烯转移酶识别的氨基酸基序，
所述硫醚键包括所述氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
16.根据权利要求15所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述氨基酸基序是CYYX序列，C为半胱氨酸，Y为脂肪族氨基酸，X为选自由谷氨酰胺、谷氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸以及亮氨酸组成的组中的任一个；以及
所述硫醚键包括所述氨基酸基序的半胱氨酸的硫原子。
17.根据权利要求15所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述氨基酸基序为CYYX序列，Y为选自由丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸以及缬氨酸组成的组中的任一个；或者CVIM或CVLL序列。
18.根据权利要求15所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
在氨基酸基序之前的1至20个氨基酸中的至少一个是甘氨酸。
19.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L在C末端包括氨基酸序列GGGGGGGCVIM。
20.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L为含肟的3至50个原子的杂亚烷基，
所述肟的氧原子在与W连接的L的侧面，
所述肟的碳原子在与Ab连接的L的侧面；或者
所述肟的碳原子在与W连接的L的侧面，
所述肟的氧原子在与Ab连接的L的侧面。
21.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L包括肟，一个或多个异戊二烯基单元使肟与Ab共价键合。
22.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L进一步包括由通式VIII或通式IX表示的第二单元：
【通式VIII】
-(CH2)r(V(CH2)p)q-
【通式IX】
-(CH2CH2X)w-
所述V为单键、-O-、-S-、NR21-、-C(O)NR22-、-NR23C(O)-、-NR24SO2-或-SO2NR25-；
X是-O-、C1-8亚烷基或-NR21-；
R21至R25各自独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷基C6-20芳基或C1-6烷基C3-20杂芳基；
r为0至10的整数；
p为0至10的整数；
q为1至20的整数；以及
w为1至20的整数。
23.根据权利要求22所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述q为1至10的整数；
r和p各自为1或2；
V为-O-。
24.根据权利要求22所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述X为-O-；
w为1至10的整数。
25.根据权利要求21所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L包括由表示的至少一个聚乙二醇单元。
26.根据权利要求21所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L包括肟，
至少一个聚乙二醇单元使肟与活化剂共价键合。
27.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L进一步包括第三单元，所述第三单元通过炔烃与叠氮化物之间的反应、或者醛基或酮基与肼或羟胺之间的反应形成。
28.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其特征在于，
所述L进一步包括由以下通式IVa、IVb、IVc、IVd、或IVe表示的L或第三单元：
【通式Ⅳa】
【通式Ⅳb】
【通式Ⅳc】
【通式Ⅳd】
【通式Ⅳe】
在上式中，
所述L1和L2各自独立地是单键或C1-30的亚烷基；
R11是氢或C1-10的烷基。
29.根据权利要求28所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L1和L2各自独立地是单键；或C11的亚烷基；或C12的亚烷基。
30.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
类异戊二烯转移酶是法尼基蛋白转移酶(FTase)或香叶基香叶基转移酶(GGTas e)。
31.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述L包括与Ab共价键合的一个或多个支化连接子，
i)每个支化连接子包括第五单元，所述第五单元通过第一连接子(PL)与Ab共价键合；
ii)每个支化连接子包括第一分支(B1)，在所述第一分支中，第一活化剂通过第二连接子(SL)和切割基团(CG)来与第五单元共价键合；以及
iii)每个支化连接子包括：a)第二分支(B2)，在所述第二分支中，第二活化剂通过第二连接子(SL)和切割基团(CG)来与第五单元共价键合；或者b)第二分支(B2)，在所述第二分支中，聚乙二醇部分与第五单元共价键合，
所述每个切割基团被水解，以从偶联物释放活化剂。
32.根据权利要求31所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述第五单元为
所述L2、L3、以及L4各自独立地是键或-CnH2n-，所述n为1至30的整数，所述G1、G2以及G3各自独立地是键、
所述R30是氢或C1-30烷基；
所述R40是氢或L5-COOR6；
所述L5是键或-Cn'H2n'-，其中n’是1至10的整数，R6是氢或C1-30烷基。
33.根据权利要求31所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述切割基团在靶细胞内可切割；或者可释放一个或多个活化剂。
34.根据权利要求33所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
偶联物包括Ab；
包括与Ab共价键合的1、2、3、4个或更多个支化连接子，
每个支化连接子与一个或两个或更多个活化剂结合；
其中，活化剂各自相同或相异。
35.根据权利要求32所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
每个支化连接子包括第五单元，每个活化剂通过第二连接子与第五单元结合，所述第五单元通过第一连接子与抗体结合。
36.根据权利要求35所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述第五单元是酰胺，第一连接子包括酰胺的羰基；或者
是赖氨酸单元。
37.根据权利要求33所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
其包括以下结构式：
所述B和B'表示可能相同或相异的活化剂；
n1至n3各自独立地表示0至30的整数；
AA表示氨基酸基团。
38.一种偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其包括[LINKER-B]结构，并且由以下结构式表示：
所述B'和B”表示可能相同或相异的活化剂；
m和n各自独立地表示0至30的整数。
39.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述活化剂是化疗剂或毒素。
40.根据权利要求9或10所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述活化剂是免疫调节化合物、抗癌剂、抗病毒剂、抗菌剂、抗真菌剂、抗寄生虫剂或其组合。
41.根据权利要求9或10所述的抗体偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述活化剂是选自以下的任一种：
(a)埃罗替尼、硼替佐米、氟维司群、舒癌特、来曲唑、甲磺酸伊马替尼、PTK787/ZK222584、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸、雷帕霉素、拉帕替尼、洛那法尼、索拉非尼、吉非替尼、AG1478、AG1571、噻替派、环磷酰胺、白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、苯唑多巴、卡波醌、米特多巴、尤利多巴、乙烯亚胺、蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺、三羟甲基蜜胺、布拉他辛、布拉他辛酮、喜树碱、托泊替康、藓虫素、卡利他汀、CC-1065、阿多来新、卡折来新、比折来新、念珠藻环肽1、念珠藻环肽8、多拉司他汀、多卡霉素、KW-2189、CB1-TM1、艾榴塞洛素、盘克斯他汀、沙考地汀、海绵毒素、苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥、卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、卡奇霉素、卡奇霉素γ1、卡奇霉素ω1、达尼霉素、达尼霉素A、氯屈膦酸盐、埃斯培拉霉素、新抑癌蛋白发色团、阿克拉霉素、放射菌素、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、卡新霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、道诺霉素、多特柔比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、N-吗啉基-多柔比星、氰基-N-吗啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星、脂质体多柔比星、脱氧多柔比星、表柔比星、依索比星、麻西罗霉素、丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泼非霉素、嘌呤霉素、奎那霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他汀、左柔比星、5-氟尿嘧啶、二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、噻咪嘌呤、硫鸟嘌呤、安西他滨、氮杂胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双去氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、二甲睾酮、甲雄烷醇酮、丙酸盐、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯、氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦、亚叶酸、醋葡醛内酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、恩尿嘧啶、安吖啶、贝他布昔、比山群、依达曲沙、得弗伐胺、德莫西林、地吖醌、依氟鸟氨酸、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、羟基脲、香菇多糖、罗尼达宁、美登素、安丝菌素、米托胍腙、米托蒽醌、莫哌达醇、硝拉维林、喷司他汀、凡那明、吡柔比星、洛索蒽醌、2-乙酰肼、丙卡巴肼、多糖-k、雷佐生、根霉素、西佐糖、螺旋锗、细交链孢菌酮酸、三嗪佐、2，2'，2”-三氯三乙基胺、T-2毒素、粘液霉素A、杆孢菌素A、蛇形菌素、氨基甲酸酯、长春地辛、达卡巴嗪、甘露氮芥、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、哌泊溴烷、甲托辛、阿拉伯糖苷、环磷酰胺、噻替派、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇的经白蛋白工程改造的纳米粒子配制物、多烯紫杉醇、苯丁酸氮芥、吉西他滨、6-硫代鸟嘌呤、巯基嘌呤、顺铂、卡铂、长春碱、铂、依托泊苷、异环磷酰胺、米托蒽醌、长春新碱、长春瑞滨、能灭瘤、替尼泊苷、依达曲沙、柔红霉素、氨基喋呤、希罗达、伊班膦酸盐、CPT-11、拓扑异构酶抑制剂RFS2000、二氟甲基鸟氨酸、视黄酸、卡培他滨、或其药学上可接受的盐、溶剂化物或酸；
(b)单核因子、淋巴因子、传统的多肽激素、甲状旁腺激素、甲状腺素、松弛素、松弛素原、糖蛋白激素、卵泡刺激素、促甲状腺激素、促黄体激素、肝生长因子、成纤维细胞生长因子、促乳素、胎盘催乳激素、肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β、苗勒抑制物质、小鼠促性腺激素相关肽、抑制素、活化素、血管内皮生长因子、血小板生成素、红血球生成素、骨诱导因子、干扰素、干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、集落刺激因子、巨噬细胞-CSF、粒细胞-巨噬细胞-CSF、粒细胞-巨噬细胞-CSF、粒细胞-CSF、白介素(IL)、IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、多肽因子、LIF、kit配体或其混合物；
(c)白喉毒素、肉毒杆菌毒素、破伤风毒素、痢疾毒素、霍乱毒素、鹅膏素、α-鹅膏素、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓衍生物、吲哚啉二氮呯、吡啶并二氮呯、河豚毒素碱、短裸甲藻毒素、雪卡毒素、蓖麻毒素、AM毒素、奥瑞他汀、微管溶素、格尔德霉素、美登素、卡奇霉素、柔红霉素、多柔比星、甲氨蝶呤、长春地辛、SG2285、多拉司他汀、多拉司他汀类似物、澳瑞他汀、念珠藻环肽、喜树碱、根霉素、根霉素衍生物、CC-1065、CC-1065类似物或衍生物、多卡霉素、烯二炔抗生素、埃斯培拉霉素、埃坡霉素、类毒素或其混合物；
(d)亲和配体，其中亲和配体为底物、抑制剂、活化剂、神经传递物质、放射性同位素、或其混合物；
(e)放射性标记、32P、35S、荧光染料、电子致密试剂、酶、生物素、链霉亲和素、地高辛、半抗原、免疫原性蛋白质、具有与靶互补的序列的核酸分子或其混合物；
(f)免疫调节化合物、抗癌剂、抗病毒剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗寄生虫剂、或其混合物；
(g)他莫昔芬、雷诺昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐、LY117018、奥那司酮或托瑞米芬；
(h)4(5)-咪唑、氨鲁米特、乙酸甲地孕酮、依西美坦、来曲唑或阿那曲唑；
(i)氟他胺、尼鲁米特、比卡普胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林或曲沙他滨；
(j)芳香酶抑制剂；
(k)蛋白激酶抑制剂；
(l)脂质激酶抑制剂；
(m)反义寡核苷酸；
(n)核酶；
(o)疫苗；以及
(p)抗血管生成剂。
42.根据权利要求1所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述活化剂是吡咯并苯并二氮杂卓二聚体；
所述吡咯并苯并二氮杂卓二聚体在N10位置被X取代，或者在N'10位置被X'取代，其中，X或X'使吡咯并苯并二氮杂卓二聚体与连接子连接；
X和X’各自独立地是-C(O)O-*、或-C(O)-*；
*是吡咯并苯并二氮杂卓二聚体和连接子之间的结合位点。
43.根据权利要求42所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述吡咯并苯并二氮杂卓二聚体由以下通式X或通式XI表示：
【通式X】
在上式中，
所述虚线表示C1和C2之间、C2和C3之间、C'1和C'2之间、或C'2和C'3之间的双键选择性存在；
RX1和RX1'各自独立地选自H、OH、＝O、＝CH2、CN、Rm、ORm、＝CH-Rm、＝C(Rm')2、OSO2-Rm、CO2Rm、CORm、卤基或二卤基；
RX2、RX2'、RX3、以及RX3'各自独立地选自H、Rm、OH、ORm、NRm 2、NO2和卤基；
RX4和RX4’各自独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRm 2、卤基以及C1-6烷基；
RX5和RX5’各自独立地选自H、Rm、OH、ORm、SH、SRm、NH2、NHRm、NRm 2、-NRmRm'、NO2、-NRmC(O)Rm'、-NRmC(O)ORm'、-NRmC(O)NRmRm'、-S(O)Rm、-S(O)2Rm、-S(O)NRmRm'、-S(O)2NRmRm'、-NRmS(O)Rm'、-NRmS(O)2Rm'、-P(O)Rm、-P(O)2Rm、-P(O)NRmRm'、-P(O)2NRmRm'、-NRmP(O)Rm'、-NRmP(O)2Rm'以及卤基；
Y和Y'各自独立地是O、S或N(H)；
RX6独立地是C3-12亚烷基、C3-12亚烯基、或C3-12杂亚烷基；
并且RX6被-NH2、-NHRm、-NHC(O)Rm、-NHC(O)CH2-[OCH2CH2]n-RXX、或-[CH2CH2O]n-RXX取代或未取代；
所述RXX是H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基，其中n为1至6的整数；
RX7和RX7’各自独立地是H、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C(0)Rr、-C(O)ORs或-C(O)NRrRr'；
Rr、Rr'以及Rs各自独立地是H、C1-7烷基、C2-7烯基、C2-7炔基、C3-13环烷基、3至7元杂环烷基、C5-10芳基或5至7元杂芳基；
每个Rm'独立地选自Rm、CO2Rm、CORm、CHO、CO2H以及卤基，
每个Rm独立地选自H、OH、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C2-12烯基、C2-12炔基、C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基所组成的组，其中，C5-20芳基、C5-20杂芳基、C3-6环烷基、3至7元杂环基、3至7元杂环烷基、以及5至7元杂芳基的一个或多个氢原子可被OH、＝O、C1-12烷基或C1-12烷氧基取代。
44.根据权利要求43所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述RX1和RX1’各自独立地选自＝CH2；C1-6烷基；C1-6烷氧基；C2-6烯基；C5-7芳基；C3-6杂芳基；或者被C1-6烷基或C1-6烷氧基取代的C5-7芳基。
45.根据权利要求43所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述RX2、RX2'、RX3以及RX3'各自独立地选自H或OH。
46.根据权利要求43所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
RX5和RX5’各自独立地选自由H、OH、S(O)Rm、S(O)2Rm、-P(O)Rm、以及-P(O)2Rm组成的组，其中，Rm是H、OH、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C2-12烯基或C2-12炔基。
47.根据权利要求43所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述RX4和RX4'各自独立地是C1-6烷氧基。
48.根据权利要求43所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述Y和Y'为O。
49.根据权利要求43所述的偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述RX6是C3-12亚烷基、C3-12亚烯基或C3-12杂亚烷基，并且所述RX6被-NH2、-NHRm、-NHC(O)Rm、-NHC(O)CH2-[OCH2CH2]n-RXX、或-[CH2CH2O]n-RXX取代；
所述RXX是H、OH、N3、CN、NO2、SH、NH2、ONH2、NHNH2、卤基、C1-8烷基、C3-8环烷基、C1-8烷氧基、C1-8烷硫基、C3-20杂芳基、C5-20芳基或单-C1-8烷氨基或二-C1-8烷氨基；以及
n是1至6的整数。
50.根据权利要求1或10所述的抗体偶联物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其中，
所述[Linker-(B)l]选自由以下结构式：
以及组成的组，
其中，MMAE是一甲基澳瑞他汀E，
MMAF是一甲基澳瑞他汀F。
51.一种用于预防或治疗过度增殖、癌症或血管生成疾病的药物组合物，其包括根据权利要求1或10所述的偶联物。
52.根据权利要求51所述的药物组合物，其进一步包括：
药学上有效量的化疗剂。
53.根据权利要求51所述的药物组合物，其中，
所述癌症是选自由肺癌、小细胞肺癌、胃肠癌、大肠癌、肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤和黑色素瘤组成的组中的任一个。
54.一种药物制剂，其包括：
根据权利要求1或10所述的偶联物；以及药物学上可接受的载体，并且其选自由注射剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、锭剂、混悬剂、内溶液剂、乳剂、糖浆剂、冻干剂以及栓剂组成的组。
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