CN117202924A - 使用glp-1r和gcgr平衡激动剂降低血糖和/或体重的治疗方案和方法 - Google Patents

Abstract

本公开内容涉及双重GLP‑1R和GCGR激动剂的每周一次给药方案、制剂和使用其进行长期体重管理、肥胖和/或血糖控制的治疗的方法，所述激动剂包括但不限于SEQ ID NO.1的双重激动肽产品。

Description

使用GLP-1R和GCGR平衡激动剂降低血糖和/或体重的治疗方 案和方法

相关申请

本申请要求2020年12月07日提交的临时申请号为美国系列第63/122,117号；2021年6月16日提交的临时申请号为美国系列第63/211,157号；和2021年9月28日提交的临时申请号为美国系列第63/249,468号的优先权，所述申请的每一项在此以其整体并入本申请。

序列表

本申请包含序列表，该序列表已经经由EFS-Web以ASCII格式以电子形式提交，并且在此通过引用以其整体并入。创建于2021年12月07日的所述ASCII副本被命名为MED008PCT_ST25.TXT，并且大小是8453字节。

公开内容的领域

本公开内容涉及GLP-1R和GCGR激动剂、制剂和使用它们的方法的领域。

公开内容的背景

肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)及其晚期形式非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的日益流行是流行病级的世界健康危机，是患者发病率和死亡率的主要贡献者，也是主要的经济负担。肥胖是2型糖尿病和NASH的重要风险因素，并且大约90％的患有2型糖尿病的患者超重或肥胖。肥胖是全世界快速增加的问题，并且目前在美国多于65％的成年人超重(Hedley,A.A.,等人(2004)JAMA 291:2847-2850)。预计NASH在不久的将来成为肝移植的主要原因。对于开发用于肥胖和糖尿病的安全且有效的药物治疗存在需求。本公开内容提供了用于治疗与肥胖或/和糖尿病相关的紊乱诸如非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和多囊卵巢综合征(PCOS)的改进的肽药物。

在美国(US)，NASH已经成为终末期肝病或肝移植的主要原因。肥胖是NASH的核心驱动因素，并且体重减轻导致肝脂肪降低和NASH改善。多于80％的患有NASH的个体超重或肥胖，并且目前没有可得的美国食品和药品监督管理局(US Food and DrugAdministration，FDA)批准的用于诱导体重减轻的药理学选择，疗法主要基于旨在实现体重减轻的生活方式干预。然而，通过单独的生活方式改变难以达到并维持长期体重减轻。

胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)在批准的剂量下与适度的体重减轻相关，并且这些剂已成为患有NASH的患者的治疗选择。在最近的临床试验中，利拉鲁肽(一种每天服用的GLP-1RA)与NASH的消退相关，有改善肝纤维化的趋势。然而，患者仅减轻了5.5％的体重。在一项研究中，最佳的NASH消退需要10％或更大的体重减轻。较高水平的体重减轻也与心血管疾病和非肝恶性肿瘤的较低发生率相关，心血管疾病和非肝恶性肿瘤代表NASH患者面临的最严重的共病。

GLP-1RA对食欲和食物摄入发挥中枢作用，而GCR激动剂在动物模型和人类中驱动增加的能量消耗。已显示，与单独的GLP-1RA相比，GCR激动剂和GLP-1RA在驱动更大程度的体重减轻方面的作用是协同的。GCR还增强脂肪分解并抑制肝脂肪合成，为肝脂肪降低和NASH消退提供了另外的途径。

双重激动剂将GCR与GLP-1RA组合在同一分子中。在肥胖的非人类灵长类动物中，与GLP-1RA单激动剂相比，GLP-1R/GCR双重激动剂的长期施用在更大程度上降低体重并且改善葡萄糖耐受性。Cotadutide(一种具有5:1的GLP-1对胰高血糖素活性偏倚的GLP-1/GCR双重激动剂)的临床研究显示了在仅6周内令人印象深刻的39％的肝脂肪含量降低，和比单独的利拉鲁肽改善更大的NASH相关丙氨酸氨基转移酶(ALT)减少。然而，cotadutide施用在26周内的体重减轻程度与利拉鲁肽相当(5.4％与5.5％)，这表明5:1的比例对于肝脂肪降低是可接受的，但对于体重降低是次优的。平衡型(1:1)激动已显示与比偏倚比例更大的体重减轻和代谢作用相关，偏倚比例偏向一种激动剂胜于另一种激动剂。最近的关于平衡型双重激动剂JNJ 64565111的研究在仅12周内实现了令人印象深刻的8％的体重降低(NCT03586830)。

遗憾的是，GLP-1RA与高比例的恶心、呕吐和腹泻相关。这些剂还必须在长时间段内滴定以降低副作用，所以需要具有改善的耐受性和给药方案的剂。因此，对于不存在胃肠道副作用、以不需要滴定来达到治疗水平的治疗剂量方便给药(例如，每周一次而不是每天一次)来控制血糖和/或诱导体重减轻仍然存在需要。

公开内容的概述

本文描述了双重激动剂肽及其产品(例如制剂)及它们用于治疗与胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)的功能相关的紊乱的用途，所述紊乱包括但不限于胰岛素抵抗或/和肥胖，诸如2型糖尿病、代谢综合征、心血管疾病(包括冠状动脉疾病，诸如动脉粥样硬化和心肌梗死)、高血压、NASH、慢性肾病、长期体重管理和PCOS；以及在治疗与这样的紊乱相关的状况中的用途。这样的双重激动剂肽对GLP-1R和GCGR两者都具有亲和力，这可以例如通过如本文描述的细胞测定或使用用于进行这样确定的另一种测定来确定。在一些实施方案中，双重激动剂肽是SEQ ID NO.1-10中的任一种或其衍生物，诸如其保守取代的衍生物，和/或其组合。在一些实施方案中，双重激动剂肽对GLP-1R和GCGR表现出约相等的亲和力，这可以使用上文提及的细胞测定来确定，在优选的实施方案中，所述双重激动剂肽是SEQ ID NO:1或其衍生物。

在一些实施方案中，本公开内容提供了一种或更多种这样的双重激动剂肽的药物剂量制剂(pharmaceutical dosage formulation)，所述药物剂量制剂被配置为与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂(例如塞马鲁肽)或具有过大的最大浓度(C_max)的激动剂相比控制血糖且降低一个或更多个不良事件。在一些实施方案中，本公开内容提供了一种或更多种这样的双重激动剂肽的药物剂量制剂，所述药物剂量制剂被配置为与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比诱导用于长期体重管理的体重减轻且降低一个或更多个不良事件。在一些实施方案中，不良事件选自向哺乳动物施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘。这些不良事件通常在施用快速进入循环、导致过高的C_max的(双重)激动剂后被观察到。在一些实施方案中，与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂(例如塞马鲁肽)相比，施用本文公开的一种或更多种双重激动剂肽(例如，SEQ ID NO.1-10或其衍生物)可以导致其他结果(例如体重减轻、脂肪减轻、脂质谱)和/或药代动力学(PK)参数的改善。

在优选的实施方案中，本公开内容提供了用于降低人类的血糖和/或降低人类的体重的方法，所述方法包括向人类施用包含SEQ ID NO:1的药物剂量制剂，其中与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，一个或更多个不良事件的发生被减少，所述不良事件选自向人类施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘。

在某些实施方案中，本公开内容提供了被配置用于长期体重管理的治疗的一种或更多种这样的双重激动剂肽的药物剂量制剂。在实施方案中，提供了一种用于通过在具有至少25的体重指数(BMI kg/m²)的人类中诱导体重减轻来对所述人类进行长期体重管理的治疗的方法，所述方法包括向所述人类每周一次施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1的药物剂量制剂，其中所述人类的体重在第12周从基线降低至少5％(优选地至少约5％至约10％)。

如本领域普通技术人员将从中理解的，还设想了本公开内容的其他方面。

附图简述

图1示出了在43天内测量的以1.2mg和1.8mg剂量的ALT-801(本文也称为pemvidutide)施用后的体重减轻结果与安慰剂的比较(也参见表7)。

图2示出了遵循每周一次施用ALT-801(Pemvidutide)在6周和12周治疗之后不同剂量组(1.2mg、1.8mg和2.4mg)的体重减轻结果与安慰剂组的比较。

图3示出了遵循以1.8mg每周一次施用ALT-801持续12周与安慰剂的个体受试者的体重减轻结果。

图4示出了遵循以2.4mg每周一次施用ALT-801持续12周与安慰剂的个体受试者的体重减轻结果。

图5A和图5B分别示出了体重减轻与年龄或BMI(体重指数)之间不存在相关性。

图6示出了所有可测量受试者的治疗前与治疗后(ALT-801以1.2mg、1.8mg或2.4mg)肝脂肪水平，其中第一柱是筛查时的测量值(基线)，并且第二柱是第6周时的测量值。

图7示出了所有可测量受试者用ALT-801(1.2mg、1.8mg或2.4mg治疗)治疗后六周时肝脂肪水平的绝对改变与安慰剂的比较。

图8示出了所有可测量受试者用ALT-801(1.2mg、1.8mg或2.4mg治疗)治疗后六周时的肝脂肪水平的相对改变与安慰剂的比较。

图9示出了所有脂肪变性受试者用ALT-801(1.8mg或2.4mg治疗)治疗后六周时的肝脂肪水平的绝对改变与安慰剂的比较。

图10示出了所有脂肪变性受试者用ALT-801(1.8mg或2.4mg治疗)治疗后六周时的肝脂肪水平的相对改变与安慰剂的比较。

图11示出在用ALT-801(1.8mg和2.4mg剂量)治疗六周后，肝脂肪降低大于90％，至通过MRI-PDFF(磁共振成像质子密度脂肪分数)检测不到的水平，其中每个受试者分别具有19.5％、17％和12.5％的基线肝脂肪含量。每周一次用1.8mg或2.4mg剂量的ALT-801治疗将肝脂肪含量(LFC)降低至检测不到的水平(低于LOD(检测限))。

图12示出了用ALT-801(1.2mg、1.8mg和2.4mg剂量)治疗12周后所有组中改善的血压(作为心血管风险的生物标志)与安慰剂的比较，其中每组中的第一柱是收缩压，并且第二柱是舒张压。每周一次用ALT-801治疗跨所有剂量组(1.2mg、1.8mg或2.4mg)改善了血压

图13示出了治疗12周后跨所有剂量组(1.2mg、1.8mg和2.4mg剂量)作为心血管风险的生物标志的血脂水平的改善(总胆固醇(“Tot.Chol.”)、高密度脂蛋白(“HDL Chol.”)、低密度脂蛋白(“LDL Chol.”)和甘油三酯)与安慰剂的比较。

图14示出了在基线(筛查)和用ALT-801以1.2mg、1.8mg和2.4mg的每周剂量治疗12周后(第85天)测量的BMI(体重指数)与安慰剂的比较。所有治疗组都降低了BMI，1.8mg和2.4剂量治疗组与安慰剂相比显示出显著降低。

图15示出了用ALT-801以1.2mg、1.8mg和2.4mg的每周剂量治疗12周后且在早饱时测量的食欲抑制与安慰剂的比较。所有治疗组都显示出减少的食欲和剂量响应。

公开内容的详细描述

本公开内容涉及一种或更多种双重激动剂肽以及包含该一种或更多种双重激动剂肽的药物剂量制剂及使用该一种或更多种双重激动剂肽的方法。所述双重激动剂肽对胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)具有亲和力，并且在优选的实施方案中对胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)具有约相等的亲和力，这可以使用细胞测定来确定。在一些实施方案中，本公开内容提供了被配置为控制血糖的药物剂量制剂。在一些实施方案中，与选择性(例如塞马鲁肽)和/或不平衡激动剂相比，在施用双重激动剂肽后，血糖被更好控制(例如，降低和稳定)。在一些实施方案中，本公开内容提供了被配置为诱导体重减轻包括用于长期体重管理的治疗的药物剂量制剂。在一些实施方案中，与选择性(例如塞马鲁肽)和/或不平衡激动剂相比，在施用双重激动剂肽后，体重减轻被改善(例如，降低和稳定)。在一些实施方案中，与对GLP-1R和GCGR具有选择性(例如塞马鲁肽)和/或不平衡亲和力的激动剂相比，这样的药物剂量制剂表现出不良事件的降低。在一些实施方案中，不良事件可以包括通常在向哺乳动物施用对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂(例如塞马鲁肽)后施用后观察到的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和/或便秘。在一些实施方案中，本公开内容提供了旨在用于治疗导致非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的潜在代谢功能障碍的新的基于肽的双重GLP-1/胰高血糖素受体激动剂。

在一些实施方案中，双重激动剂肽是SEQ ID NO.1-10中的任一种或其衍生物。在优选的实施方案中，双重激动肽是EU-A1873(SEQ ID NO：1)、EU-A1588(SEQ ID NO：2)、EU-A1871(SEQ ID NO：3)、EU-A1872(SEQ ID NO：4)，如表1中示出的：

表1

在表1中，顶行中的数字1、5、10、15、20、25和30是指氨基酸残基数(SEQ ID NO.1-5中的每一种中存在总计29个氨基酸残基)。表1中示出的塞马鲁肽是SEQ ID NO.11(31个氨基酸残基)。如表1中示出的，SEQ ID NO：1(表1的EU-A1873；也称为ALT-801或pemvidutide)具有以下氨基酸序列：

¹His-²Aib-³Gln-⁴Gly-⁵Thr-⁶Phe-⁷Thr-⁸Ser-⁹Asp-¹⁰Tyr-¹¹Ser-¹²Lys-¹³Tyr-¹⁴Leu-¹⁵Asp-¹⁶Glu*-¹⁷Lys^#-¹⁸Ala-¹⁹Ala-²⁰Lys*-²¹Glu-²²Phe-²³Ile-²⁴Gln-²⁵Trp-²⁶Leu-²⁷Leu-²⁸Gln-²⁹Thr-NH₂，

其中*指示内酰胺桥在Glu16与Lys 20之间形成，并且17Lys#指示葡糖醛酸C-18*(EuPort G，Z17CO2H)的附接位点。

以不同的方式说明，SEQ ID NO：1是由29个氨基酸残基和附接至¹⁷Lys的葡糖醛酸/C₁₈二酸部分组成的肽酰胺，其中¹⁶Glu和²⁰Lys的侧链形成如下示出的分子内环：

在一些实施方案中，双重激动剂肽可以是以下中的任一种：

其中：Xaa1是任何氨基酸，优选地Aib(α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Cα-甲基丙氨酸))；Xaa2是Lys(N-ω(1-(17-羧基-十七烷基氧基)β-D-葡糖醛酸基)或Lys(Z17CO2H)，其中Z17CO2H是(β-D-葡糖醛酸-1-基)-1-氧杂)17-羧基十七烷；并且，Glu16和Lys20通过它们各自的侧链彼此环化以形成内酰胺键；或其衍生物；

其中：Xaa1是任何氨基酸，优选地Aib(α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Cα-甲基丙氨酸))；Xaa2是Lys(Me17CO2H)，其中Me17CO2H是β-D-蜜二糖醛酸基-1-基)-1-氧杂)17-羧基十七烷；并且，Glu16和Lys20通过它们各自的侧链彼此环化以形成内酰胺键；或其衍生物；

其中：Xaa1是任何氨基酸，优选地Aib(α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Cα-甲基丙氨酸)；Glu16和Lys20通过它们各自的侧链彼此环化以形成内酰胺键；Xaa3是Lys(Z15CO2H)，其中Z15CO2H是(β-D-葡糖醛酸-1-基)-1-氧杂)15-羧基十七烷；或其衍生物；

其中：Xaa1是任何氨基酸，优选地Aib(α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Cα-甲基丙氨酸)；Glu16和Lys20通过它们各自的侧链彼此环化以形成内酰胺键；Xaa4是Lys(Z17CO2H)，其中Z17CO2H是(β-D-葡糖醛酸-1-基)-1-氧杂)17-羧基十七烷；或其衍生物；

或者，

其中：Xaa1是任何氨基酸，优选地Aib(α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Cα-甲基丙氨酸))；Xaa2是Lys(N-ω(1-(17-羧基-十七烷基氧基)β-D-葡糖醛酸基)或Lys(Z17CO2H)，其中Z17CO2H是(β-D-葡糖醛酸-1-基)-1-氧杂)17-羧基十七烷；Xaa5是Arg，并且，Glu16和Lys20通过它们各自的侧链彼此环化以形成内酰胺键；或其衍生物。

在优选的实施方案中，双重激动剂肽是具有SEQ ID NO:1-10中的任一种的氨基酸序列的肽或其衍生物。在优选的实施方案中，双重激动肽是SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，本文提供了SEQ ID NO:1在水性缓冲溶液中的药物制剂，本文称为ALT-801。本文的双重激动剂肽产品(包括SEQ ID NO:1)包含氨基酸侧链酰胺键(内酰胺桥)和包含连接至脂肪酸侧链的葡糖醛酸的EuPort侧链。侧链(包含经由接头氨基酸共价附接至肽的亲水性糖基团和疏水性烃基(alkyl)链部分的表面活性剂)导致皮下(SC)注射之后胶束的形成，减缓进入循环。与较慢进入相关的较低最大浓度(C_max)可以导致更少的GI副作用和更好的耐受性。该后一个特征还增强与血浆蛋白的结合，并且改善代谢稳定性，延长半衰期(t_1/2)。SEQ IDNO:1的设计已经成功地产生了对两个受体具有等效(1:1)活性(大约40pM和100％活性)的共激动剂。

双重激动剂肽(例如，SEQ ID NO.1-10或其衍生物)的合成描述于本文(例如，实施例1)和在美国专利第9,856,306B2号中，该专利通过引用以其整体并入本公开内容中。在一些实施方案中，双重激动剂肽可以包含如本文描述的一个或更多个保守取代的氨基酸。在优选的实施方案中，SEQ ID NO:1可以包括一个或更多个保守取代的氨基酸，但优选地不包括在氨基酸残基16、17或20处。在优选的实施方案中，SEQ ID NO:2可以包括一个或更多个保守取代的氨基酸，但优选地不包括在氨基酸残基16、17或20处。在优选的实施方案中，SEQID NO:3可以包括一个或更多个保守取代的氨基酸，但优选地不包括在氨基酸残基16、20或24处。在优选的实施方案中，SEQ ID NO:4可以包括一个或更多个保守取代的氨基酸，但优选地不包括在氨基酸残基16、20或24处，SEQ ID NO:5可以包括一个或更多个保守取代的氨基酸，但优选地不包括在氨基酸残基12、16、17或20处。

SEQ ID NO.1-10的肽在本文可以统称为“双重激动剂肽(dual agonistpeptides)”(或单独称为“双重激动剂肽(dual agonist peptide)”)，因为每一种都是胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)的激动剂。在一些实施方案中，肽是GLP-1R和GCGR的双重激动剂，这可以通过细胞测定诸如本文实施例2中描述的细胞测定来确定。简言之，在一些实施方案中，细胞测定可以通过测量表达人类GLP-1R或GCGR的CHO细胞中的cAMP刺激或制动蛋白(arrestin)激活来进行((LeadHunter测定(DiscoveRx))。优选地，与可能是典型的0.1％牛血清白蛋白(BSA)相比，这样的测定在存在0.1％卵清蛋白的情况下进行，因为SEQ ID NO.1-10的双重激动剂肽可以与血清白蛋白非常紧紧地结合(>99％)，并且使结果失真(参见，例如，本文实施例2)。在一些实施方案中，如使用这样的测定所确定的，双重激动剂肽可以对GLP-1R和GCGR两者都具有亲和力，并且在优选的实施方案中，对GLP-1R和GCGR具有约相等的亲和力。“约相等的亲和力”意指双重激动剂肽对GLP-1R或GCGR比对另一种具有不多于约2倍至3倍优选地不多于2倍的亲和力，这可以通过这样的细胞测定来确定。例如，如本文实施例中示出的，双重激动剂肽SEQ ID NO:1(EU-A1873)令人惊讶地被发现是对GLP-1R和GCGR具有约相等的亲和力的双重激动剂肽(例如，对GLP-1R的约39pm的EC50(115％固有活性)，和对GCGR的约44pm的EC50(115％固有活性))。这不同于GLP-1“特异性”化合物，包括塞马鲁肽和激动肽-4(Exendin-4)，它们呈现出强烈朝向GLP-1R偏倚或仅对GLP-1R的亲和力；或强烈GCGR偏倚的激素胰高血糖素，其对GLP-1R和GCGR两者都没有显示出高的或约相等的亲和力。天然激素胃泌酸调节素对GLP-1和胰高血糖素受体两者都具有激动作用，但这种活性不强并且也不平衡。本领域普通技术人员将理解，对GLP-1R和GCGR的亲和力可以通过除了本文描述的方法和/或测定以外的方法和/或测定来确定，并且用于确定亲和力的这样的方法和/或测定是本文设想的(例如，约相等的亲和力的确定可以通过这样的其他方法和/或测定来进行)。

在实施方案中，如本文使用的“对胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)具有约相等的亲和力的双重激动剂肽”意指对GLP-1R或GCGR具有为对另一种的不多于约两倍亲和力的双重激动剂肽，这可以通过这样的细胞测定来确定。在实施方案中，本发明双重激动剂肽对一种受体的结合亲和力与对另一种受体的结合亲和力相比不多于1.9倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍或1.2倍，这可以通过已知的细胞测定来确定。在实施方案中，如本文使用的“对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂”意指对GLP-1R或GCGR具有为对另一种的至少约1.5倍亲和力的激动剂肽，这可以通过已知的细胞测定来确定。在实施方案中，对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂的结合亲和力是至少1.6倍、1.8倍、2倍、2.5倍、3倍、5倍、7.5倍、10倍、20倍或更多倍，这可以通过已知的细胞测定来确定。

“肽”(例如，双重激动剂肽)包含通常经由肽键连接的两个或更多个天然或/和非天然氨基酸残基。这样的氨基酸可以包括天然存在的结构变体、天然存在的非蛋白原性氨基酸或/和合成的天然氨基酸的非天然存在的类似物。术语“肽”和“多肽”在本文可互换使用。肽包括短肽(约2个-20个氨基酸)、中长肽(约21个-50个氨基酸)和长肽(>约50个氨基酸，也可以称为“蛋白”)。在一些实施方案中，肽产品包含共价且稳定附接至具有不多于约50个、40个或30个氨基酸的肽的表面活性剂部分。例如，合成肽可以使用自动化肽合成仪来合成。肽也可以在表达编码该肽的核酸序列的细胞中重组产生。本文使用常规符号来描述肽序列：肽序列的左手末端是氨基(N)末端，并且肽序列的右手末端是羧基(C)末端。本文使用常见氨基酸的标准单字母和三字母缩写。尽管本文公开的氨基酸序列中使用的缩写代表L-氨基酸，但是除非另外指定为D-氨基酸或DL-氨基酸或者氨基酸是非手性的，否则对应物D-异构体通常可以在任何位置处使用(例如，抵抗蛋白水解降解)。本文中使用的其他氨基酸的缩写包括：Aib＝α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Ca-甲基丙氨酸)；Xaa：任何氨基酸，通常在式中明确定义。可以如本文描述使用的其他氨基酸的缩写包括：Ac3c＝1-氨基环丙烷-l-羧酸；Ac4c＝l-氨基环丁烷-l-羧酸；Ac5c＝l-氨基环戊烷-l-羧酸；Ac6c＝l-氨基环己烷-l-羧酸；Aib＝α-氨基异丁酸(或2-甲基丙氨酸或Cα-甲基丙氨酸)；Bip＝3-(联苯基-4-基)丙氨酸；Bip2Et＝3-(2’-乙基联苯基-4-基)丙氨酸；Bip2EtMeO＝3-(2’-乙基-4’-甲氧基联苯基-4-基)丙氨酸；Cit＝瓜氨酸；Deg＝2,2-二乙基甘氨酸；Dmt＝(2,6-二甲基)酪氨酸；2FPhe＝(2-氟苯基)丙氨酸；2FMePhe或2FaMePhe＝Ca-甲基-(2-氟苯基)丙氨酸；hArg＝高精氨酸；MeLys或aMeLys＝Ca-甲基赖氨酸；MePhe或aMePhe＝Ca-甲基苯基丙氨酸；MePro或aMePro＝Ca-甲基脯氨酸；Nall或Nal(l)＝3-(l-萘基)丙氨酸；Nal2或Nal(2)＝3-(2-萘基)丙氨酸；Nle＝正亮氨酸；Om＝鸟氨酸；和Tmp＝(2,4,6-三甲基苯基)丙氨酸；l,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)，并且残基之间具有还原酰胺键的Tic-Phe二肽部分(指定为Tic-Ψ[CFl2-NFl]-Ψ-Phe)具有以下结构：

除非另外特别说明或上下文另外清楚地指示，否则本公开内容涵盖可以产生的任何和所有形式的双重激动剂肽，无论该双重激动剂肽是合成产生的(例如，使用肽合成仪)还是由细胞产生的(例如，通过重组产生)。这样的形式的双重激动剂肽可以包含在肽的合成或细胞生产过程期间可以进行的一种或更多种修饰，诸如一种或更多种翻译后修饰，无论所述一种或更多种修饰是否是有意的。双重激动剂肽可以具有在两个或更多个不同位置处的相同类型的修饰，或/和可以具有两种或更多种不同类型的修饰。在双重激动剂肽的合成或细胞生产过程期间可以进行的修饰，包括化学和翻译后修饰，包括但不限于糖基化(例如N-连接的糖基化和O-连接的糖基化)、脂质化、磷酸化、硫酸化、乙酰化(例如N末端的乙酰化)、酰胺化(例如C末端的酰胺化)、羟基化、甲基化、分子内或分子间二硫键的形成、两个侧链之间内酰胺的形成、焦谷氨酸的形成和泛素化。双重激动剂肽可以在任何地方具有一种或更多种修饰，诸如N末端、C末端、一个或更多个氨基酸侧链或双重激动剂肽主链或其任何组合。在一些实施方案中，双重激动剂肽在N末端处乙酰化或/和在C末端处具有羧酰胺(-CONH₂)基团，这可以增加双重激动剂肽的稳定性。

双重激动剂肽的可能的修饰还包括一个或更多个氨基酸的缺失、一个或更多个天然或/和非天然氨基酸的添加/插入、或用一个或更多个天然或/和非天然氨基酸取代、或其任何组合或全部。取代可以是保守的或非保守的。这样的修饰可以是有意的，诸如经由定点诱变或在双重激动剂肽的化学合成中，或者可以是偶然的，诸如经由产生双重激动剂肽的宿主细胞中发生的突变或经由PCR扩增引起的错误。非天然氨基酸可以具有与对应物天然氨基酸相同的化学结构，但具有D立体化学，或者它可以具有不同的化学结构和D立体化学或L立体化学。非天然氨基酸可以用于例如促进α-螺旋形成或/和增加双重激动剂肽的稳定性(例如，抵抗蛋白水解降解)。相对于参考双重激动剂肽具有一种或更多种修饰的双重激动剂肽可以酌情称为参考双重激动剂肽的“类似物”或“变体”。“类似物”通常保留参考双重激动剂肽的一种或更多种基本特性(例如，受体结合、受体或酶的激活、受体或酶的抑制或其他生物活性)。“变体”可以保留或可以不保留参考双重激动剂肽的生物活性，或/和可以具有不同的生物活性。优选的是，这样的变体维持其充当GLP-1R和GCGR的激动剂的能力，并且在更优选的实施方案中，对GLP-1R和GCGR具有约相等的亲和力。在一些实施方案中，参考肽的类似物或变体具有与参考双重激动剂肽不同的氨基酸序列。

术语“保守取代”是指用功能、结构或化学相似的天然或非天然氨基酸取代双重激动剂肽中的氨基酸。在某些实施方案中，以下组各自包含彼此是保守取代的天然氨基酸：1)甘氨酸(Gly/G)、丙氨酸(Ala/A)；2)异亮氨酸(Ile/I)、亮氨酸(Leu/L)、甲硫氨酸(Met/M)、缬氨酸(Val/V)；3)苯丙氨酸(Phe/F)、酪氨酸(Tyr/Y)、色氨酸(Trp/W)；4)丝氨酸(Ser/S)、苏氨酸(Thr/T)、半胱氨酸(Cys/C)；5)天冬酰胺(Asn/N)、谷氨酰胺(Gln/Q)；6)天冬氨酸(Asp/D)、谷氨酸(Glu/E)；以及7)精氨酸(Arg/R)、赖氨酸(Lys/K)、组氨酸(His/H)。在另外的实施方案中，以下组各自包含彼此是保守取代的天然氨基酸：1)非极性：Ala、Val、Leu、Ile、Met、Pro(脯氨酸/P)、Phe、Trp；2)疏水性：Val、Leu、Ile、Phe、Trp；3)脂肪族：Ala、Val、Leu、Ile；4)芳香族：Phe、Tyr、Trp、His；5)不带电荷的极性或亲水性：Gly、Ala、Pro、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln、Tyr；6)含羟基或巯基的脂肪族：Ser、Thr、Cys；7)含酰胺：Asn、Gln；8)酸性：Asp、Glu；9)碱性：Lys、Arg、His；以及，10)小的：Gly、Ala、Ser、Cys。在其他实施方案中，氨基酸可以分组为如以下列出的保守取代：1)疏水性：Val、Leu、Ile、Met、Phe、Trp；2)芳香族：Phe、Tyr、Trp、His；3)中性亲水性：Gly、Ala、Pro、Ser、Thr、Cys、Asn、Gln；4)酸性：Asp、Glu；5)碱性：Lys、Arg、His；以及6)影响主链取向的残基：Pro。

非天然或非蛋白原性氨基酸的实例包括但不限于丙氨酸类似物(例如，α-乙基Gly[α-氨基丁酸或Abu]、α-正丙基Gly[正缬氨酸或Nva]、α-叔丁基Gly[Tbg]、α-乙烯基Gly[Vg或Vlg]、α-烯丙基Gly[Alg]、α-炔丙基Gly[Prg]、3-环丙基Ala[Cpa]和Aib)、亮氨酸类似物(例如正亮氨酸、Nle)、脯氨酸类似物(例如，α-MePro)、苯丙氨酸类似物(例如，Phe(2-F)、Phe(2-Me)、Tmp、Bip、Bip(2’-Et-4’-OMe)、Nal1、Nal2、Tic、α-MePhe、α-MePhe(2-F)和α-MePhe(2-Me))、酪氨酸类似物(例如Dmt和α-MeTyr)、丝氨酸类似物(例如高丝氨酸[异苏氨酸或hSer])、谷氨酰胺类似物(例如Cit)、精氨酸类似物(例如hArg、N,N’-g-二烃基-hArg)、赖氨酸类似物(例如高赖氨酸[hLys]、Orn和α-MeLys)、α,α-二取代的氨基酸(例如，Aib、α,α-二乙基Gly[Deg]、α-环己基Ala[2-Cha]、Ac3c、Ac4c、Ac5c和Ac6c)，以及公开于A.Santoprete等人，Pept.Sci.,17:270-280(2011)中的其他非天然氨基酸。α,α-二取代的氨基酸可以提供构象限制或/和α-螺旋稳定。两个残基之间还原的酰胺键(如在例如Tic-Ψ[CFl2-NFl]-Ψ-Phe中)增加了蛋白酶耐受性，并且也可以例如改变受体结合。本公开内容涵盖双重激动剂肽的所有药学上可接受的盐，包括具有正净电荷的盐、具有负净电荷的盐和没有净电荷的盐。

“烃基(alkyl)”基团是指脂肪族烃基团。烃基基团可以是饱和的或不饱和的，并且可以是直链的(线性的)、支化的或环状的。在一些实施方案中，烃基基团不是环状的。在一些实施方案中，烃基基团包含1个-30个、6个-30个、6个-20个或8个-20个碳原子。“取代的”烃基基团被一个或更多个取代基取代。在一些实施方案中，一个或更多个取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、羟基、烃氧基、卤代烃氧基、芳氧基、硫醇、烃基硫基、芳基硫基、烃基亚砜、芳基亚砜、烃基砜、芳基砜、氨基、烃基氨基、二烃基氨基、芳基氨基、烃酰基、羧基、羧酸酯、酯、酰胺、碳酸酯、氨基甲酸酯、脲类、烃基、卤代烃基、氟烃基、芳烃基、包含酰基基团的烃基链、杂烃基、杂脂环(heteroali-cyclic)、芳基、烃氧基芳基、杂芳基、疏水性天然化合物(例如类固醇)等。在一些实施方案中，作为取代基的烃基基团是线性或支化的C₁-C₆烃基，可以称为“低级烃基”。低级烃基基团的非限制性实例包括甲基、乙基、丙基(包括正丙基和异丙基)、丁基(包括所有异构体形式，诸如正丁基、异丁基、仲丁基和/叔丁基)、戊基(包括所有异构体形式，诸如正戊基)和己基(包括所有异构体形式，诸如正己基)。在一些实施方案中，烃基基团附接至肽残基(例如Tyr或Dmt)的Na原子。在某些实施方案中，N-烃基基团是直的或支化的C₁-C₁₀烃基或芳基取代的烃基诸如苄基、苯乙基等。一个或两个烃基基团可以附接至N末端残基的Na原子。在一些实施方案中，烃基基团是经由糖苷键(例如O-糖苷键、S-糖苷键、N-糖苷键或C-糖苷键)附接至糖(例如葡萄糖)的C-l位置的1-烃基基团。在一些实施方案中，这样的1-烃基基团是未取代的或取代的C₁-C₃₀、C₆-C₃₀、C₆-C₂₀或C₈-C₂₀烃基基团。在一些实施方案中，烃基基团(例如1-烃基基团)被一个或更多个(例如2个或3个)基团取代，这些基团独立地选自芳基、-OH、-OR¹、-SH、-SR¹、-NH₂、-NHR¹、-N(R¹)₂、氧代(＝O)、-C(＝O)R²、羧基(-CO₂H)、羧酸酯(-CO₂_)、-C(＝O)OR¹、-OC(＝O)R³、-C(＝O)N(R¹)₂、-NR⁴C(＝O)R³、-OC(＝O)OR⁵、-OC(＝O)N(R¹)₂、-NR⁴C(＝O)OR⁵和-NR⁴C(＝O)N(R¹)₂，其中：R¹在每次出现时独立地是氢、烃基或芳基，或R¹的两次出现和与它们连接的氮原子形成杂环基环或杂芳基环；R²在每次出现时独立地是烃基、杂环基、芳基或杂芳基；R³在每次出现时独立地是氢、烃基、杂环基、芳基或杂芳基；R⁴在每次出现时独立地是氢或烃基；并且，R⁵在每次出现时独立地是烃基或芳基。在一些实施方案中，烃基基团(例如1-烃基基团)在内部或/和末端被羧基基团/羧酸酯基团、芳基基团或-O-芳基基团取代。在某些实施方案中，烃基基团(例如1-烃基基团)在该烃基基团的远侧末端处被羧基基团或羧酸酯基团取代。在另外的实施方案中，烃基基团(例如l-烃基基团)在该烃基基团的远侧末端处被芳基基团取代。在其他实施方案中，烃基基团(例如l-烃基基团)在该烃基基团的远侧末端处被-O-芳基基团取代。术语“卤素(halogen)”、“卤化物”和“卤素(halo)”是指氟化物、氯化物、溴化物和碘化物。术语“酰基”是指-C(＝O)R，其中R是可以是饱和的或不饱和的并且可以是线性的、支化的或环状的脂肪族基团。在某些实施方案中，R包含1个-20个、1个-10个或1个-6个碳原子。酰基基团可以任选地被一个或更多个基团取代，诸如卤素、氧代、羟基、烃氧基、硫醇、烃基硫基、氨基、烃基氨基、二烃基氨基、环烃基、芳基、酰基、羧基、酯、酰胺、疏水性天然化合物(例如类固醇)等。术语“杂环基”和“杂环”是指包含至少一个非芳香族环的单环非芳香族基团或多环基团，其中至少一个非芳香族环包含独立地选自O、N和S的一个或更多个杂原子。包含一个或更多个杂原子的非芳香族环可以附接或并合至一个或更多个饱和、部分不饱和或芳香族环。在某些实施方案中，杂环基或杂环基团具有3个至15个、或3个至12个、或3个至10个、或3个至8个、或3个至6个环原子。杂环基或杂环基团包括但不限于氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚烷基(azepanyl)、氮杂环辛烷基(azocanyl)、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基(氧杂环戊烷基(oxolanyl))、四氢吡喃基、氧杂环庚烷基(oxepanyl)和氧杂环辛烷基(oxocanyl)。术语“芳基”是指单环芳香族烃基团或包含至少一个芳香族烃环的多环基团。在某些实施方案中，芳基基团具有6个至15个、或6个至12个、或6个至10个环原子。芳基基团包括但不限于苯基、萘基(naphthalenyl)(萘基(naphthyl))、芴基、薁基(azulenyl)、蒽基、菲基、联苯基和三联苯基。芳基基团的芳香族烃环可以附接或并合至一个或更多个饱和、部分不饱和或芳香族环，例如二氢萘基、茚基、茚满基和四氢萘基(四萘基)。芳基基团可以任选地被独立地选自以下的一个或更多个(例如2个或3个)取代基取代：卤素(包括-F和-Cl)、氰基、硝基、羟基、烃氧基、硫醇、烃基硫基、烃基亚砜、烃基砜、氨基、烃基氨基、二烃基氨基、烃基、卤代烃基(包括氟烃基诸如三氟甲基)、酰基、羧基、酯、酰胺等。术语“杂芳基”是指包含至少一个芳香族环的单环芳香族基团或多环基团，其中至少一个芳香族环包含独立地选自O、N和S的一个或更多个杂原子。杂芳香族环可以附接或并合至可以仅包含碳原子或可以包含一个或更多个杂原子的一个或更多个饱和、部分不饱和或芳香族环。在某些实施方案中，杂芳基基团具有5个至15个、或5个至12个、或5个至10个环原子。单环杂芳基基团包括但不限于吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基(thienyl)(噻吩基(thiophenyl))、噁二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、吡啶酮基(pyridonyl)、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、哒嗪酮基(pyridazinonyl)和三嗪基。双环杂芳基基团的非限制性实例包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻吩基(苯并苯硫基)、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲嗪基(indolizinyl)、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、色酮基(chromonyl)、香豆素基(coumarinyl)、噌啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、吲唑基、萘啶基、酞嗪基、喹唑啉基、嘌呤基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩并吡啶基、二氢异吲哚基和四氢喹啉基。

在一些实施方案中，例如，双重激动剂肽可以与糖缔合，诸如在药学上可接受的组合物或冻干物中。糖类包括单糖、二糖和寡糖(例如三糖、四糖等)。还原糖以环形式和开链形式平衡地存在，通常偏向于环形式。表面活性剂部分的官能化糖具有适用于与双重激动剂肽的氨基酸形成稳定共价键的官能团。

术语“药学上可接受的”是指适用于与受试者的组织和器官接触使用而没有过度刺激、过敏反应、免疫原性和毒性，与合理的获益/风险比相称和对其预期用途有效的物质(例如活性成分或赋形剂)。药物组合物的“药学上可接受的”赋形剂或载体也与组合物的其他成分相容。在一种实施方案中，其中双重激动剂肽可以被配制的药学上可接受的组合物包含在蒸馏(DI)水中的聚山梨醇酯20(例如，约0.050％(w/w))；任选地，对羟基苯甲酸甲酯(例如，约0.300％(w/w))；精氨酸(约0.348％(w/w))和甘露醇(例如，约4.260％(w/w))。

术语“治疗有效量”是指这样的化合物的量，在向受试者施用时，所述化合物的量至少在服用该化合物的受试者的一部分中，足以预防正在治疗的医学状况、降低正在治疗的医学状况的发展风险、延迟正在治疗的医学状况的发作、减缓正在治疗的医学状况的进展或引起正在治疗的医学状况的消退，或在一定程度上减轻医学状况或该状况的一种或更多种症状或并发症。术语“治疗有效量”还指医生或临床医师所寻求的足以引发细胞、组织、器官或人类的生物学或医学反应的化合物的量。

术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”包括减轻、改善、抑制医学状况或与该状况相关的一种或更多种症状或并发症的进展，逆转或消除医学状况或与该状况相关的一种或更多种症状或并发症，以及减轻、改善或根除该状况的一种或更多种原因。对医学状况的“治疗”的提及包括对该状况的预防。术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”包括排除、降低医学状况或与该状况相关的一种或更多种症状或并发症的发展风险和延迟医学状况或与该状况相关的一种或更多种症状或并发症的发作。术语“医学状况”(或为了简洁起见“状况”)包括疾病和紊乱。术语“疾病”和“紊乱”在本文可互换使用。

本公开内容还提供了包含本文描述的双重激动剂肽产品或其药学上可接受的盐和一种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。药物组合物包含治疗有效量的肽产品或其适当级分。组合物可以任选地包含另外的治疗剂。在一些实施方案中，肽产品是至少约90％、95％或98％纯的。药学上可接受的赋形剂和载体包括药学上可接受的物质、材料和媒介物。赋形剂类型的非限制性实例包括液体和固体填料、稀释剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、表面活性剂、分散剂、崩解剂、乳化剂、润湿剂、助悬剂、增稠剂、溶剂、等张剂、缓冲液、pH调节剂、吸收延迟剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、螯合剂、佐剂(adjuvant)、甜味剂、调味剂、着色剂、包封材料和包衣材料。这样的赋形剂在药物制剂中的使用是本领域已知的。例如，常规媒介物和载体包括但不限于油(例如，植物油，诸如橄榄油和芝麻油)、水性溶剂(例如，盐水、缓冲盐水(例如，磷酸盐缓冲盐水[PBS])和等张溶液(例如，林格氏溶液))、以及有机溶剂(例如，二甲基亚砜和醇类[例如，乙醇、甘油和丙二醇])。除非任何常规赋形剂或载体与肽产品不相容，否则本公开内容涵盖常规赋形剂和载体在包含肽产品的制剂中的使用。参见，例如，Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,第2l版,Lippincott Williams&Wilkins(Philadelphia,Pennsylvania)(2005)；Handbook of Pharmaceutical Excipients,第5版,Rowe等人,编著,ThePharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association(2005)；Handbook of Pharmaceutical Additives,第3版,Ash和Ash,编著,Gower Publishing Co.(2007)；以及Pharmaceutical Pre-formulation and Formulation,Gibson,编著,CRCPress(Boca Raton,Florida)(2004)。

在实施方案中，药物制剂包含肽产品和在去离子水(pH 7.7±0.1)中的约0.025％-0.075％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.2％-0.5％(w/w)精氨酸、约3％-6％(w/w)甘露醇；任选地在去离子水(pH 7.7±0.1)中的约0.050％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.348％(w/w)精氨酸、约4.260％(w/w)甘露醇。在某些实施方案中，本发明的药物制剂包含SEQ ID NO:1和在去离子水(pH 7.7±0.1)中的约0.050％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.348％(w/w)精氨酸、约4.260％(w/w)甘露醇。在某些实施方案中，药物制剂包含SEQ ID NO:1并且被配置用于每周一次治疗剂量的皮下(SC)施用。

适当或合适的制剂可以取决于各种因素，诸如所选择的施用途径。包含肽产品的药物组合物的可能的施用途径包括但不限于口服、胃肠外(包括皮内、皮下、肌内、血管内、静脉内、动脉内、腹膜内、腔内和表面(topical))和表面(包括透皮、经粘膜、鼻内(例如通过鼻喷雾剂或滴剂)、眼部(例如通过滴眼剂)、肺部(例如通过口服吸入或鼻吸入(oral ornasal inhalation))、含服、舌下、直肠(例如通过栓剂)和阴道(例如通过栓剂))。在某些实施方案中，本发明的双重激动剂肽产品被胃肠外施用(例如，皮下、静脉内或肌内)。在其他实施方案中，肽产品通过口服吸入或鼻吸入或吹入施用。在一些实施方案中，载体是基于水的载体，诸如在胃肠外(例如，皮下、静脉内或肌内)制剂中。在其他实施方案中，载体是基于非水的载体(nonaqueous-based carrier)。在某些实施方案中，基于非水的载体是可以包括亚微米无水α-乳糖或/和其他赋形剂的氢氟烷烃(HFA)或HFA样溶剂，诸如在用于通过口服吸入或鼻吸入或吹入施用的制剂中。

在一些实施方案中，肽产品通过注射胃肠外施用(例如，皮下、静脉内或肌内)。胃肠外施用绕过了胃的强酸性环境、胃肠(GI)吸收和首过代谢。可以用于制备胃肠外制剂的赋形剂和载体包括但不限于溶剂(例如，水性溶剂，诸如水、盐水、生理盐水、缓冲盐水[例如PBS]、平衡盐溶液[例如，格林氏BSS]和水性右旋糖溶液)、等张(isotonic)/等渗(iso-osmotic)剂(例如，盐[例如，NaCl、KC1和CaCl₂]和糖[例如蔗糖])、缓冲剂和pH调节剂(例如，磷酸二氢钠[sodium dihydrogen phosphate，monobasic sodium phosphate]/磷酸氢二钠[di sodium hydrogen phosphate，dibasic sodium phosphate]、柠檬酸/柠檬酸钠和L-组氨酸/L-组氨酸HC1)，以及乳化剂(例如，非离子表面活性剂，诸如聚山梨醇酯[例如，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80]和泊洛沙姆[例如，泊洛沙姆188])。肽制剂和递送系统讨论于例如A.J.Banga,Therapeutic Peptides and Proteins:Formulation,Processing,andDelivery Systems,第3版,CRC Press(Boca Raton,Florida)(2015)中。赋形剂可以任选地包括增加肽稳定性、增加肽溶解度、抑制肽聚集或降低溶液粘度的一种或更多种物质，或其任何组合或全部。这样的物质包括但不限于亲水性氨基酸(例如，精氨酸和组氨酸)、多元醇(例如，肌醇、甘露醇和山梨醇)、糖类(例如，葡萄糖(包括D-葡萄糖[右旋糖])、乳糖、蔗糖和海藻糖}、渗透剂(例如，海藻糖、牛磺酸、氨基酸[例如，甘氨酸、肌氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、b-丙氨酸和g-氨基丁酸]和甜菜碱[例如，三甲基甘氨酸和三甲胺N-氧化物])，和非离子表面活性剂(例如，烃基多糖苷、烃基糖类(例如，与长链脂肪酸或对应的长链醇偶联的单糖[例如，葡萄糖]或二糖[例如，麦芽糖或蔗糖])和聚丙二醇/聚乙二醇嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆[例如，Pluronic^TMF-68]和PF-10及其变体)。因为这样的物质增加了肽的溶解度，所以它们可以用于增加制剂中的肽浓度。制剂中较高的肽浓度对于皮下施用特别有利，皮下施用具有有限的推注(bolus)施用体积(例如，<约1.5mL)。此外，这样的物质可以用于在冻干肽的制备、储存和重构期间使肽稳定。示例性胃肠外制剂包含肽产品、甘露醇、甲硫氨酸、巯基乙酸钠、聚山梨醇酯20、pH调节剂(例如，NaOH或/和HC1)和去离子水。适用于与本文描述的双重激动剂肽一起使用的胃肠外制剂的赋形剂(例如，包含NaCl等的赋形剂的各种组合)是熟知的，并且对于本领域普通技术人员是可得的。

对于胃肠外(例如，皮下、静脉内或肌内)施用，肽产品在包含一种或更多种赋形剂的水性溶剂中的无菌溶液或悬浮液可以预先制备，并且可以提供在例如单次使用笔或带有剂量计数器的笔的预填充注射器中。可选地，肽产品可以在冻干(冷冻干燥)之前溶解或悬浮在可以任选地包含一种或更多种赋形剂的水性溶剂中。在胃肠外施用之前不久，储存在合适容器(例如小瓶)中的冻干肽产品可以用例如可以任选地包含一种或更多种赋形剂的无菌水重构。在其他实施方案中，激动剂肽产品被鼻内施用。鼻粘膜提供了大的表面面积、多孔内皮、高血管上皮下层和高吸收率，并且因此允许高生物可利用度。鼻内制剂可以包含肽产品以及赋形剂，诸如溶解度增强剂(例如，丙二醇)、湿润剂(例如，甘露醇或山梨醇)、缓冲液和水，以及任选地防腐剂(例如，苯扎氯铵)、粘膜粘附剂(例如，羟乙基纤维素)或/和渗透增强剂。鼻内溶液或混悬液制剂可以通过任何合适的装置，包括但不限于滴液器、移液器或使用例如计量雾化喷雾泵的喷雾器施用至鼻腔。表2示出了鼻喷雾制剂的示例性赋形剂。

表2

鼻和肺部制剂的示例性赋形剂和载体

在另外的实施方案中，肽产品经由肺部途径施用，诸如通过口服吸入或鼻吸入。药物的肺部施用可以治疗肺部紊乱或/和全身紊乱，因为肺用作体循环的入口。肺部药物递送的优点包括，例如：1)避免首过代谢；2)快速药物作用；3)用于吸收的肺泡区域的大表面面积、肺的高渗透性(薄的空气-血液屏障)和气道的丰富脉管系统；以及4)由于大的肺泡表面面积，与GI道相比降低的细胞外酶水平。口服吸入相比鼻吸入的优点包括药物更深地渗透/沉积到肺中，尽管鼻吸入可以在鼻腔以及肺中经粘膜将药物递送到体循环中。口服吸入或鼻吸入可以通过例如计量剂量吸入器(MDI)、雾化器或干粉吸入器(DPI)实现。例如，肽产品可以被配制用于通过口服吸入或鼻吸入向呼吸道的气溶胶施用。药物以小颗粒尺寸(例如，在约0.5微米与约5微米之间)递送，所述小颗粒尺寸可以通过微粉化来获得，以改善例如药物在肺中的沉积和药物悬浮液的稳定性。药物可以以具有合适的推进剂的加压包装提供，所述推进剂诸如氢氟烷烃(HFA，例如，l,l,l,2-四氟乙烷[HFA-l34a])、氯氟烃(CFC，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)或合适的气体(例如，氧气、压缩空气或二氧化碳)。气雾剂制剂中的药物溶解在推进剂中，或者更常见的是悬浮在推进剂中，用于递送至肺。气雾剂可以包含赋形剂，诸如表面活性剂(其通过降低肺泡内空气-水界面处的高表面张力来增强进入肺的渗透，也可以使药物乳化、溶解或/和稳定，并且可以是例如磷脂，诸如卵磷脂)或/和稳定剂，尽管肽产品的表面活性剂部分可以执行表面活性剂的功能。例如，MDI制剂可以包含肽产品、推进剂(例如，HFA，诸如l,l,l,2-四氟乙烷)和共溶剂(例如，醇，诸如乙醇)，以及任选地表面活性剂(例如，脂肪酸，诸如油酸)。MDI制剂可以任选地包含溶解的气体(例如，CO₂)。装置致动之后，喷出的气雾剂液滴内CO₂气泡的爆发将液滴分解成更小的液滴，从而增加药物的可呼吸部分。作为另一个实例，雾化器制剂可以包含肽产品、螯合剂或防腐剂(例如，依地酸二钠)、等张剂(例如，NaCl)、pH缓冲剂(例如，柠檬酸/柠檬酸钠)和水，以及任选地表面活性剂(例如，诸如聚山梨醇酯80)。药物可以通过例如具有或没有间隔物的雾化器或MDI来递送，并且递送的药物剂量可以由计量室(雾化器)或计量阀(MDI)来控制。

表2示出了示例性MDI、雾化器和DPI制剂。计量剂量吸入器(也称为加压计量剂量吸入器[pMDI])是使用最广泛的吸入装置。每次致动该装置时，计量阀递送精确量的气雾剂(例如，约20pL-100pL)。MDI通常比使用者可以吸入的更快地产生气溶胶，这可能导致许多气溶胶沉积在口和喉咙中。装置致动与吸入之间差的协调的问题可以通过使用例如呼吸致动的MDI或协调装置来解决。在呼吸致动的MDI(例如，Easi)感测到使用者的吸气时，该装置被激活并释放药物剂量作为响应。吸入流量通过致动器协调，并且使用者在吸入期间有时间可靠地致动装置。在协调装置中，为附接至吸入器的衔口(mouthpiece)端的管的间隔物(或带阀的保持室)用作保持由吸入器喷射的药物的储库或室，并且降低气雾剂进入口的速度，从而允许推进剂从较大的液滴中蒸发。间隔物简化了吸入器的使用，并且增加了沉积在肺而不是上呼吸道中的药物的量。间隔物可以由抗静电聚合物制成，以使喷出的药物颗粒对间隔物内壁的静电粘附最小化。雾化器产生约1微米-5微米的气溶胶液滴。它们不需要使用者在设备致动与吸入之间进行协调，这可能显著影响沉积在肺中的药物的量。与MDI和DPI相比，雾化器可以递送更大剂量的药物，但施用时间更长。雾化器的实例包括但不限于人力雾化器、喷射雾化器(例如，II BAN[呼吸致动]、CompAIR^TMNE-C80l[虚拟阀]、Plus[呼吸增强]和SideStream Plus[呼吸增强])、超声波雾化器和振动网状雾化器(例如，Apixneb、具有计量室的I-neb AAD系统、NE-U22、Omron U22和PARIrapid)。作为实例，脉冲超声雾化器可以每个脉冲雾化固定量的药物，并且可以包含允许使用者将每次呼吸与每个脉冲同步的光声触发器。对于使用干粉吸入器(DPI)的口服吸入或鼻吸入，可以以干燥微粉化粉末的形式提供肽产品，其中药物颗粒具有特定的小尺寸(例如，在约0.5微米与约5微米之间)，以改善例如分散粉末的空气动力学特性和药物在肺中的沉积。约0.5微米与约5微米之间的颗粒通过沉降沉积在末端细支气管和肺泡区域中。相比之下，大多数较大的颗粒(>5微米)并不跟随气流进入气道的许多分叉中，而是通过撞击沉积在上气道中，包括喉咙的口咽区域。DPI制剂可以包含单独的药物颗粒或与合适的较大基底(base)/载体(诸如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(例如，羟丙基甲基纤维素)或聚乙烯吡咯烷)的粉末混合。载体颗粒增强流动，降低聚集，改善剂量均匀性，并且有助于药物颗粒的分散。DPI制剂可以任选地包含赋形剂，诸如硬脂酸镁或/和亮氨酸，其通过干扰颗粒间结合(通过抗粘附作用)来改善制剂的性能。粉末制剂可以以单位剂型提供，诸如可以手动装载或预装载在吸入器中的泡罩包装中的胶囊(例如，明胶胶囊)或药筒。可以如下将药物颗粒吸入肺中：通过将吸入器的衔口或管口(nosepiece)放入口或鼻中，剧烈深呼吸以产生湍流气流，并且屏住呼吸持续一定时间段(例如，约5秒-10秒)以允许药物颗粒在细支气管和肺泡区域中沉淀。在使用者致动DPI并且吸气时，通过该装置的气流产生剪切和湍流，吸入的空气被引入粉末床，并且静态粉末混合物被流化并进入使用者的气道。在那里，药物颗粒由于湍流而与载体颗粒分离，并且被携带到肺深处，而较大的载体颗粒撞击口咽表面并被清除。因此，使用者的吸气气流实现粉末解聚和空气电离，并且决定药物在肺中沉积。(虽然被动DPI需要快速吸气气流来使药物颗粒解聚，但对于MDI或雾化器不推荐用快速吸气，因为它产生湍流气流和快速速度，这通过撞击而增加药物在上气道中的沉积。)与MDI相比，DPI(包括呼吸激活的DPI)可能能够向肺递送更大剂量的药物和更大尺寸的药物(例如，大分子)。

乳糖(例如α-乳糖一水合物)是DPI制剂中最常用的载体。用于DPI制剂的乳糖一水合物的等级/类型的实例包括但不限于DCL 11、100、230、300、SD 250(喷雾干燥的乳糖)、SV003和400。DPI制剂可以包含单一乳糖等级或不同乳糖等级的组合。例如，细乳糖等级如300或400可能不是合适的DPI载体，并且可能需要与粗乳糖等级如DCL 11、100、230或SV003混合(例如，约1:9的细乳糖与粗乳糖比)以改善流动性。

表3和表4示出了可以在DPI制剂中使用的乳糖等级/类型的非限制性实例。载体颗粒尺寸的分布影响药物的细颗粒级分/剂量(FPF或FPD)，而药物递送至肺需要高的FPF。FPF/FPD是吸入空气中从DPI装置出来的空气动力学颗粒尺寸<5微米的可呼吸部分/剂量质量。高FPF和因此良好的DPI性能可以从例如具有大约1:9的细乳糖(例如，300)与粗乳糖(例如，SV003)比和约20％w/w过量的DPI制剂获得，以避免药物沉积在胶囊壳或DPI装置中，并且将基本上所有的药物递送至气道。

表3

表4

用于DPI制剂的其他载体包括但不限于葡萄糖、甘露醇(例如，结晶甘露醇[Pearlitol 110C]和喷雾干燥甘露醇[Pearlitol 100SD])、麦芽糖醇(例如，结晶麦芽糖醇[Maltisorb P90])、山梨醇和木糖醇。大多数DPI是呼吸激活的(“被动”)，依赖于使用者的吸气来产生气溶胶。被动DPI的实例包括但不限于和Otsuka DPI(压缩块(compact cake))。空气分类器技术(ACT)是DPI中采用的有效的被动粉末分散机制。在ACT中，多于一个供应通道产生切向气流，该切向气流在吸入期间在装置内产生旋风。还存在使用能量帮助例如颗粒解聚的动力辅助(“主动”)DPI(基于例如气动、撞击力或振动)。例如，吸入器的主动机制利用储存在弹簧或压缩空气室中的机械能。主动DPI的实例包括但不限于(单一单位剂量)、(多剂量)、(单一单位剂量)、(多单位剂量和电子激活)、(单一单位剂量)、Pfeiffer DPI(单一单位剂量)和(多单位剂量)。肽产品也可以通过其他途径施用，诸如口服。口服制剂可以包含本领域已知的肽产品和常规赋形剂，以及任选地吸收增强剂，诸如V-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基辛酸]钠(SNAC)。SNAC经由局部缓冲作用防止酶促降解，并且增强GI吸收。口服剂型(例如，片剂、胶囊或丸剂)可以任选地具有肠溶包衣，以保护其内容物免受胃的强酸和蛋白水解酶。在一些实施方案中，肽产品从持续释放组合物中递送。如本文使用的，术语“持续释放组合物”涵盖持续释放(sustained-release)、长期释放(prolonged-release)、延长释放(extended-release)、延迟释放、缓慢释放和控制释放组合物、系统和装置。在一些实施方案中，持续释放组合物在至少约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月或更长的时间段内递送肽产品。在一些实施方案中，持续释放组合物被配制为包含生物可降解聚合物并掺入了肽产品的纳米颗粒或微粒。在某些实施方案中，生物可降解的聚合物包括乳酸或/和乙醇酸[例如，基于L-乳酸的共聚物，诸如聚(L-丙交酯-共-乙交酯)或聚(L-乳酸-共-D,L-2-羟基辛酸)]。在另外的实施方案中，持续释放组合物呈在肽产品和聚合物的混合物肌内或皮下注射到受试者体内时产生的储库形式。在某些实施方案中，聚合物是或包括PEG、聚乳酸(PLA)或聚乙醇酸(PGA)，或其共聚物(例如，PLGA或PLA-PEG)。

药物组合物可以以作为单一剂量的单位剂型呈现，其中所有活性成分和非活性成分在合适的系统中组合，并且组分不需要被混合来形成待施用的组合物。单位剂型通常包含治疗有效剂量的药物，但也可以包含其适当比例，使得服用多单位剂型实现治疗有效剂量。单位剂型的实例包括用于口服摄入的片剂、胶囊或丸剂；用于胃肠外(例如，静脉内、皮下或肌内)注射的单次使用笔或带有剂量计数器的笔的预填充注射器中的溶液；以及预先装载或手动装载到吸入器的胶囊、药筒或泡罩。可选地，药物组合物可以作为试剂盒呈现，其中活性成分、赋形剂和载体(例如，溶剂)被提供在两个或更多个单独的容器(例如，安瓿、小瓶、管、瓶或注射器)中，并且需要组合以形成待施用的组合物。试剂盒可以包含储存、制备和施用组合物(例如，待胃肠外注射的溶液)的说明。试剂盒可以包含单位剂型的所有活性成分和非活性成分，或者包含两个或更多个单独容器中的活性成分和非活性成分，并且可以包含用于施用或使用药物组合物来治疗本文公开的医学状况的说明。试剂盒还可以包含用于递送组合物的装置，诸如注射笔或吸入器。在一些实施方案中，试剂盒包含肽产品或其药学上可接受的盐、或包含该肽产品或其药学上可接受的盐的药物组合物、以及用于施用或使用该肽产品或该组合物以治疗本文公开的医学状况的说明，本文公开的医学状况诸如胰岛素抵抗、糖尿病、代谢综合征、心血管疾病、肥胖(包括“慢性肥胖”，其意指持续多于一年或导致肥胖症相关状况诸如但不限于胰岛素抵抗、糖尿病、代谢综合征和/或心血管疾病的肥胖)，或与之相关的状况(例如，NASH或PCOS)。在某些实施方案中，试剂盒还包含用于递送肽产品或组合物的装置，诸如注射笔或吸入器。

本公开内容还提供了本文描述的双重激动剂肽产品用于预防和/或治疗与GLP1R和/或GCGR相关的状况的用途，该状况诸如但不限于胰岛素抵抗、糖尿病、肥胖、代谢综合征和心血管疾病，以及与之相关的状况，诸如NASH和PCOS。在一些实施方案中，双重激动剂肽产品可以用于治疗高血糖症、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖尿病前期、糖尿病(包括1型糖尿病和2型糖尿病、妊娠糖尿病和青少年糖尿病)、糖尿病性并发症、糖尿病性神经病变、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、游离脂肪酸血液水平升高、肥胖、代谢综合征、综合征X、心血管疾病(包括冠状动脉疾病)、动脉粥样硬化、急性心血管综合征、缺血(包括心肌缺血和脑缺血/中风)、缺血-再灌注损伤(包括心肌和脑IRI)、梗塞(包括心肌和脑梗塞)、心绞痛、心力衰竭(例如，充血性心力衰竭)、外周血管疾病、血栓形成(例如，深静脉血栓形成)、栓塞(例如，肺栓塞)、全身炎症(例如，以升高的C-反应蛋白血液水平为特征的炎症)，和高血压。双重激动剂肽产品可以通过各种机制实现其治疗作用，包括刺激血糖依赖性胰岛素分泌、胰岛素敏感性增加、刺激脂肪燃烧和体重降低。双重激动剂肽产品还可以促进例如胰腺β细胞保护、心脏保护和伤口愈合。

本文描述的肽产品可以用于治疗与胰岛素抵抗或/和肥胖相关的其他状况。与胰岛素抵抗或/和肥胖相关的其他状况包括但不限于关节炎(例如，骨关节炎)、下背痛、呼吸紊乱(例如，哮喘、肥胖通气不足综合征[Pickwickian综合征]和阻塞性睡眠呼吸暂停)、皮肤病学紊乱(例如，糖尿病性溃疡、黑棘皮病、蜂窝组织炎、多毛症、擦烂和淋巴水肿)、胃肠病学紊乱(例如，胆石症[胆结石]、胃食管反流病[GERD]和胃轻瘫)、痛风、皮质醇增多症(例如，库欣综合征)、肾紊乱(例如，慢性肾病)、肝紊乱(例如，脂肪性肝病[FLD]，包括酒精性和非酒精性FLD)、神经紊乱(例如，腕管综合征、痴呆[例如，阿尔茨海默病和血管性痴呆]、感觉异常性股痛、偏头痛和多发性硬化)、泌尿系统紊乱(例如，勃起功能障碍、性腺功能减退和尿失禁)、多囊卵巢综合征、不孕症、月经紊乱、情绪障碍(例如，抑郁症)和癌症(例如，子宫内膜癌、食道癌、结肠直肠癌、胆囊癌、肾癌、肝癌(例如，肝细胞癌)、胰腺癌和皮肤癌(例如，黑素瘤]和白血病)。在某些实施方案中，本文描述的双重激动剂肽产品用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)。在其他实施方案中，肽产品用于治疗慢性肾病(CKD)，也称为慢性肾(kidney)/肾(renal)衰竭(CKF/CRF)。CKD最常见的原因是糖尿病和长期不受控制的高血压。在另外的实施方案中，本文描述的双重激动剂肽产品用于治疗脂肪性肝病(FLD)。在一些实施方案中，FLD是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。在某些实施方案中，NAFLD是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。FLD，也称为肝脂肪变性，通过肝中过度的脂肪积累表征。FLD包括酒精性脂肪性肝病(AFLD)和NAFLD。慢性酒精中毒引起脂肪肝，这是由于酒精在肝中代谢期间产生毒性代谢物诸如醛。NAFLD描述如下。FLD与糖尿病、肥胖和代谢综合征相关。脂肪肝可能发展为肝硬化或肝癌(例如，肝细胞癌[HCC])。少于约10％的患有肝硬化AFLD的人发展为HCC，但多达约45％的患有非肝硬化的NASH的人可能发展为HCC。HCC是成人中最常见类型的原发性肝癌，并且在慢性肝炎症的背景下发生。NAFLD通过脂肪肝表征，当脂肪，特别是游离脂肪酸和甘油三酯，由于除了过度饮酒以外的原因，诸如营养过载、高热量摄入和代谢功能障碍(例如，血脂异常和血糖控制受损)，在肝细胞中积累时(肝脂肪变性)，就会发生脂肪肝。肝可以保持是脂肪性的而不干扰肝功能，但是脂肪肝可以进展成为NASH，NASH是脂肪变性伴有炎症、肝细胞气球样变性和细胞损伤伴有或不伴有肝纤维化的状况。纤维化是NASH造成的死亡率的最强预测因素。NAFLD可以通过以下表征：单独的脂肪变性；脂肪变性伴有小叶或肝门炎症(portal inflammation)，但不伴有气球样变性；脂肪变性伴有气球样变性但不伴有炎症；或者脂肪变性伴有炎症和气球样变性。NASH是NAFLD的最极端形式。NASH是进行性疾病，约20％的患者发展为肝硬化，并且约10％死于肝病，诸如肝硬化或肝癌(例如，HCC)。NAFLD是发达国家最常见的肝紊乱，并且预计到2020年，NASH将取代丙型肝炎成为美国肝移植的主要原因。约12％-25％的美国人具有NAFLD，其中NASH影响约2％-5％的美国人。NAFLD，包括NASH，与胰岛素抵抗、肥胖和代谢综合征相关。例如，胰岛素抵抗对脂肪肝进展为肝炎症和纤维化并且因此的NASH有贡献。此外，肥胖驱动并加剧NASH，并且体重减轻可以缓解NASH。因此，本文描述的肽产品，包括GLP-l受体(GLP1R)激动剂、胰高血糖素受体(GCGR)激动剂和双重GLP1R/GCGR激动剂，可以用于治疗NAFLD，包括NASH。在一些实施方案中，本文公开的用于治疗与胰岛素抵抗或/和肥胖相关的状况诸如NAFLD(例如，NASH)或PCOS的双重激动剂肽产品选自SEQ.ID.NO.1-10的双重激动剂肽产品和/或其衍生物以及其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，如与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂(例如，塞马鲁肽)相比，本发明的一种或更多种双重激动剂肽可以用于控制血糖，同时降低一个或更多个不良事件(即，负面地影响患者和/或动物福利的意外事件)。示例性的非限制性不良事件可以包括恶心、呕吐、腹泻、腹痛和/或便秘。不良事件还可以包括本领域普通技术人员已知的任何事件，诸如行业资源中列出和/或本领域普通技术人员以其他方式已知的事件(参见，例如，Medical Dictionary for Regulatory Activities(MedDRA)(Pharm.,Med.Transl.Med.2018)和/或Clark,M.J.Biomed.Inf.,54,April2015，第167页-第173页)。这样的不良事件可以使用通常在临床试验中使用的标准技术(例如，医生访问(doctorvisit)、调查/问卷)在人类中确定。与向受试者施用对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂(例如，塞马鲁肽)时发生的这样的不良事件的频率和/或严重程度相比，本公开内容的双重激动剂肽(例如，SEQ ID NO.1-10中任一种或其衍生物)可以将不良事件的这样的频率和/或严重程度减少例如，20％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高(多达100％)。在一些实施方案中，本公开内容的双重激动剂肽(例如，SEQ ID NO.1-10中任一种或其衍生物)不引起任何不良事件。

本发明的双重激动剂肽产品可以通过任何合适的途径施用，用于治疗本文公开的状况。肽产品的可能的施用途径包括但不限于口服、胃肠外(包括皮内、皮下、肌内、血管内、静脉内、动脉内、腹膜内、腔内和表面)和表面(包括透皮、经粘膜、鼻内(例如通过鼻喷雾剂或滴剂)、眼部(例如通过滴眼剂)、肺部(例如通过口服吸入或鼻吸入)、含服、舌下、直肠(例如通过栓剂)和阴道(例如通过栓剂))。在一些实施方案中，肽产品被胃肠外，诸如皮下、静脉内或肌内施用。在其他实施方案中，肽产品通过口服吸入或鼻吸入或吹入施用。用于治疗本文公开的状况的肽产品的治疗有效量和施用频率以及用肽产品治疗的时间长度可以取决于各种因素，包括状况的性质和严重程度、化合物的效力、施用途径、受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食以及受试者对治疗的响应，并且可以由治疗医师确定。在一些实施方案中，肽产品以约0.01mg至约0.1mg、1mg、5mg或10mg或约0.1mg-1mg或1mg-10mg的剂量在约一周的时间段内胃肠外(例如，皮下(sc)、静脉内(iv)或肌内(im))施用，用于治疗本文公开的状况(例如，与胰岛素抵抗或/和肥胖相关的状况，诸如NASH或PCOS)。在另外的实施方案中，肽产品以约0.1mg-0.5mg、0.5mg-1mg、1mg-5mg或5mg-10mg的剂量在约一周的时间段内胃肠外施用(例如，sc、iv或im)。在某些实施方案中，肽产品以约0.1mg-1mg、或约0.1mg-0.5mg或0.5mg-1mg的剂量在约一周的时间段内胃肠外(例如，皮下(SC)、静脉内(IV)或肌内(IM))施用。本领域技术人员理解，小鼠或其他临床前动物模型中的有效剂量可以针对人类进行缩放。这样，通过异速缩放(allometric scaling)(也称为生物缩放)，可以从小鼠的剂量中推断出较大动物的剂量，以获得基于动物体重或体表面面积的等同剂量。

肽产品可以以任何合适的频率施用，用于治疗本文公开的状况(例如，与胰岛素抵抗或/和肥胖相关的状况，诸如NASH或PCOS)。在一些实施方案中，双重激动剂肽产品以例如，每天一次、每两天一次、每三天一次、一周两次、一周一次或每两周一次sc或iv施用。在某些实施方案中，肽产品以例如，一周一次SC、IV或IM施用。双重激动剂肽产品可以在一天中患者方便的任何时间施用。双重激动剂肽产品可以基本上与食物一起服用(例如，随餐或在餐前或餐后约1小时或30分钟内)或基本上不与食物一起服用(例如，餐前或餐后至少约1小时或2小时)。用双重激动剂肽产品治疗医学状况的时间长度可以基于例如状况的性质和严重程度以及受试者对治疗的响应，并且可以由治疗医师确定。在一些实施方案中，双重激动剂肽产品被长期施用以治疗本文公开的状况，诸如至少约2个月、3个月、6个月、1年、1.5年、2年、3年、5年、10年或更长。双重激动剂肽产品也可以需要时(根据需要)服用，直到状况的临床表现消失或实现临床目标，诸如血糖水平、血压、血脂水平、体重或体重指数、腰臀比或体脂百分比或其任何组合。如果状况的临床表现再次发生或临床目标没有得到维持，可以恢复双重激动剂肽产品的施用。本公开内容提供了一种治疗本文描述的医学状况的方法，包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的本文描述的肽产品或其药学上可接受的盐或包含该肽产品或其药学上可接受的盐的药物组合物。本公开内容还提供了本文描述的肽产品或其药学上可接受的盐或包含该肽产品或其药学上可接受的盐的组合物，用于作为药物使用。此外，本公开内容提供了本文述的肽产品或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途。包含肽产品的药物可以用于治疗本文描述的任何医学状况。肽产品可以任选地与一种或更多种另外的治疗剂组合使用。

本文描述的双重激动剂肽产品可作为唯一活性剂施用，或任选地与一种或更多种其他双重激动剂肽产品和/或另外的治疗剂组合使用，以治疗本文公开的任何紊乱，诸如胰岛素抵抗、糖尿病、肥胖、代谢综合征或心血管疾病，或与之相关的任何状况，诸如NASH或PCOS。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂选自抗糖尿病剂、抗肥胖剂(包括降脂剂和促饱腹剂)、抗动脉粥样硬化剂、抗炎剂、抗氧化剂、抗纤维化剂、抗高血压剂及其组合。抗糖尿病剂包括但不限于：AMP激活的蛋白激酶(AMPK)激动剂，包括双胍类(例如，丁双胍(buformin)和二甲双胍)；过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)激动剂，包括噻唑烷二酮类(例如，巴格列酮、环格列酮、达格列酮、恩格列酮、洛贝格列酮、奈格列酮、吡格列酮、利格列酮、罗格列酮和曲格列酮)、MSDC-0602K和沙罗格列扎(saroglitazar)(双重PPAR-α/γ激动剂)；胰高血糖素样肽-l(GLP-l)受体激动剂，包括激动肽-4、阿必鲁肽、度拉糖肽、艾塞那肽(exenatide)、利拉鲁肽、利西拉肽(lixisenatide)、塞马鲁肽、他司鲁肽、CNT0736、CNT03649、HM11260C(LAPS-激动肽)、NN9926(OG9S7GT)、TT401和ZYOGl；二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂，包括阿格列汀、阿拉格列汀(anagliptin)、度格列汀、依格列汀(evogliptin)、吉格列汀、戈塞列汀(gosogliptin)、利格列汀(linagliptin)、奥格列汀(omarigliptin)、沙格列汀、septagliptin、西格列汀、特力利汀(teneligliptin)、曲格列汀和维格列汀；钠-葡萄糖转运蛋白2(SGLT2)抑制剂，包括卡格列净(canagliflozin)(还抑制SGLT1)、达格列净、恩格列净、埃格列净、伊格列净、鲁格列净、依碳酸瑞格列净(remogliflozin etabonate)、索格列净(还抑制SGLT1)和托格列净；胰腺β细胞上的ATP依赖性K⁺(K_ATP)通道阻断剂，包括美格替耐类(meglitinides)(例如，米格列奈、那格列奈和瑞格列奈)和磺酰脲类{包括第一代(例如，醋磺环己脲、氨磺丁脲、氯丙酰胺、格列环脲[甲磺环己脲]、美他己脲(metahexamide)、妥拉磺脲和甲苯磺丁脲)和第二代(例如，格列本脲(glibenclamide)、格列本脲(glyburide)、格列波脲(glibornuride)、格列齐特、格列美脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列派特和格列吡脲)；胰岛素及其类似物，包括速效胰岛素(例如，门冬胰岛素(insulinaspart)、谷赖胰岛素(insulin glulisine)和赖脯胰岛素(insulin lispro))、中效胰岛素(例如，NPH胰岛素)和长效胰岛素(例如，德谷胰岛素(insulin degludec)、地特胰岛素和甘精胰岛素)；和/或其类似物、衍生物和盐。在某些实施方案中，抗糖尿病剂是或者包括双胍(例如，二甲双胍)、噻唑烷二酮(例如，吡格列酮或罗格列酮)或SGLT2抑制剂(例如，恩格列净或托格列净)或其任何组合。抗肥胖剂包括但不限于：食欲抑制剂(减食欲药(anorectics))，包括安非他命、右旋安非他命、安非拉酮、氯苄雷司、马吲哚、芬特明(含或不含托吡酯)和氯卡色林(lorcaserin)；促饱腹剂，包括睫状神经营养因子(例如，阿索开(axokine))和胰淀素、降钙素、胆囊收缩素(CCK)、GLP-l、瘦素、胃泌酸调节素、胰多肽(PP)、肽YY(PYY)和神经肽Y(NPY)的长效类似物；脂酶抑制剂，包括蕨藻炔(caulerpenyne)、西替利司他(cetilistat)、厄比内酯(ebelactone)A和厄比内酯B、抑酯酶素(esterastin)、利普司他汀、奥利司他、percyquinin、panclicin A-E、缬氨内酯(valilactone)和韧革菌素(vibralactone)；抗高脂血症剂(antihyperlipidemic agent)；及其类似物、衍生物和盐。抗高脂血症剂包括但不限于：HMG-CoA还原酶抑制剂，包括他汀类{例如，阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、美伐他汀、莫那可林类(monacolins)(例如，莫那可林K(洛伐他汀)、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀}以及黄烷酮类(例如，柚皮素)；鲨烯合酶抑制剂，包括拉帕司他(lapaquistat)、萨拉哥酸(zaragozic acid)和RPR-107393；乙酰CoA羧化酶(ACC)抑制剂，包括花青素、燕麦曲菌素类(avenaciolides)、氯乙酰化生物素、cyclodim、禾草灵(diclofop)、高效氟吡甲禾灵(haloxyfop)、soraphens(例如，soraphen A_la)、5-(十四烷基氧基)-2-呋喃羧酸(TOFA)、CP-640186、GS-0976、NDI-010976；7-(4-丙氧基-苯基乙炔基)-3,3-二甲基-3,4二氢-2H-苯并[b][l,4]二氧庚烷；N-乙基-N’-(3-{[4-(3,3-二甲基-l-氧代-2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]十二-7-基)哌啶-l-基]-羰基}-l-苯并噻吩-2-基)脲；5-(3-乙酰氨基丁-l-炔基)-2-(4-丙氧基苯氧基)噻唑；和l-(3-{[4-(3,3-二甲基-l-氧代-2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]十二-7-基)哌啶-l-基]-羰基}-5-(吡啶-2-基)-2-噻吩基)-3-乙基脲；PPAR-α激动剂，包括贝特类(例如，苯扎贝特、环丙贝特、克利贝特、氯贝酸、氯贝特、氯贝酸铝(aluminum clofibrate)[氯贝酸铝(alfibrate)]、氯贝胺(clofibride)、依托贝特(etofibrate)、非诺贝特酸、非诺贝特、吉非贝齐、氯烟贝特和双贝特)、异黄酮类(isoflavones)(例如，黄豆苷元(daidzein)和染料木素)以及全氟烷酸类(perfluoroalkanoic acids)(例如，全氟辛酸和全氟壬酸)；PPAR-δ激动剂，包括elafibranor(双重PPAR-α/γ激动剂)、GFT505(双重PPAR-α/γ激动剂),GW0742、GW501516(双重PPAR-β/δ激动剂)、索格列扎(GW677954)、MBX-8025和异黄酮类(例如，黄豆苷元和染料木素)；PPAR-γ激动剂，包括噻唑烷二酮类{同上)、索格列扎(saroglitazar)(双重PPAR-α/γ激动剂)、4-氧代-2-硫代噻唑啉类(例如，罗丹宁)、小檗碱、和厚朴酚、全氟壬酸、环戊烯酮前列腺素(cyclopentenone prostaglandins)(例如，环戊烯酮15-脱氧-A-前列腺素J₂[15d-PGJ₂])和异黄酮类(例如，黄豆苷元和染料木素)；肝X受体(LXR)激动剂，包括内源配体(例如，氧化胆固醇类(oxysterols)诸如22(i？)-羟基胆固醇、24(A)-羟基胆固醇、27-羟基胆固醇和胆甾烯酸)和合成激动剂(例如，乙酰基-罗汉松酸二聚体、次胆酰胺(hypocholamide)、A(X-二甲基-3b-羟基-胆甾酰胺[A(X-di methyl-3b-hydroxy-cholenamide，DMHCA]、GW3965和T0901317)；类视黄醇X受体(RXR)激动剂，包括内源配体(例如，9-顺式-视黄酸)和合成激动剂(例如，贝沙罗汀(bexarotene)、AGN 191659、AGN 191701、AGN 192849、BMS649、LG100268、LG100754和LGD346)；酰基CoA胆固醇酰基转移酶(ACAT，也称甾醇G-酰基转移酶[SOAT]，包括ACAT1[SOAT1]和ACAT2[SOAT2])的抑制剂，包括阿伐麦布、帕替麦布(pactimibe)、派立托胺(pellitorine)、terpendole C和黄烷酮类(flavanones)(例如，柚皮素)；硬脂酰CoA去饱和酶-l(SCD-l，也称硬脂酰CoA δ-9去饱和酶)活性或表达的抑制剂，包括aramchol、CAY-10566、CVT-11127、SAR-224、SAR-707、XEN-103；3-(2-羟基乙氧基)-4-甲氧基-N-[5-(3-三氟甲基苄基)噻唑-2-基]苯甲酰胺和4-乙基氨基-3-(2-羟基乙氧基)-N-[5-(3-三氟甲基苄基)噻唑-2-基]苯甲酰胺；1’-{6-[5-(吡啶-3-基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基]哒嗪-3-基}-5-(三氟甲基)-3,4-二氢螺[色烯-2,4’-哌啶]；5-氟-1’-{6-[5-(吡啶-3-基甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基]哒嗪-3-基}-3,4-二氢螺[色烯-2,4’-哌啶]；6-[5-(环丙基甲基)-4,5-二氢-1’H,3H-螺[1,5-苯并氧氮杂卓-2,4’-哌啶]-1’-基]-N-(2-羟基-2-吡啶-3-基乙基)哒嗪-3-羧酰胺；6-[4-(2-甲基苯甲酰基)哌啶-1-基]哒嗪-3-羧酸(2-羟基-2-吡啶-3-基乙基)酰胺；4-(2-氯苯氧基)-N-[3-(甲基氨基甲酰基)苯基]哌啶-1-羧酰胺；共轭亚油酸的顺式-9,反式-11异构体和反式-10,顺式-12异构体，WO 2009/129625A1中公开的取代的杂芳基化合物，靶向SCD-1的mRNA的反义多核苷酸和肽核酸(PNA)，和靶向SCD-1的siRNA；胆固醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂，包括安塞曲匹(anacetrapib)、达塞曲匹(dalcetrapib)、evacetrapib、托彻普(torcetrapib)和AMG 899(TA-8995)；微粒体甘油三酯转移蛋白(MTTP)活性或表达的抑制剂，包括英普他派、洛美他派、dirlotapide、米瑞他匹(mitratapide)、CP-346086、JTT-130、SLx-4090、靶向MTTP的mRNA的反义多核苷酸和PNA，靶向MTTP的微RNA (例如，miRNA-30c)，和靶向MTTP的siRNA；GLP-l受体激动剂；成纤维细胞生长因子21(FGF21)及其类似物和衍生物，包括BMS-986036(聚乙二醇化的FGF21)；前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)活性或表达的抑制剂，包括小檗碱(降低PC8K9水平)、膜联蛋白(annexin)A2(抑制PCSK9活性)、抗PCSK9抗体(例如，阿利库单抗(alirocumab)、伯考赛珠单抗(bococizumab)、依伏库单抗(evolocumab)、LGT-209、LY3015014和RG7652)，模拟与PCSK9结合的LDL受体的表皮生长因子A (EGF-A)结构域的肽，结合PCSK9的adnectins(例如，BMS-962476)，靶向PCSK9的mRNA的反义多核苷酸和PNA，和靶向PCSK9的siRNA (例如，英克西兰(inclisiran)[ALN-PCS]和ALN-PCS02)；载脂蛋白模拟物肽，包括apoA-I模拟物(例如，2F、3F、3F-1、3F-2、3F-14、4F、4F-P-4F、4F-IHS-4F、4F2、5F、6F、7F、18F、5A、5A-C1、5A-CH1、5A-CH2、5A-H1、18A、37pA [18A-P-18A]、ELK、ELK-1A、ELK-1F、ELK-1K1A1E、ELK-1L1K、ELK-1W、ELK-2A、ELK-2A2K2E、ELK-2E2K、ELK-2F、ELK-3E3EK、ELK-3E3K3A、ELK-3E3LK、ELK-PA、ELK-P2A、ELKA、ELKA-CH2、ATI-5261、CS-6253、ETC-642、FAMP、FREL和KRES以及apoE模拟物(例如，Ac-hEl8A-NH₂、AEM-28、Ac-[R]hEl8A-NH₂、AEM-28-14、EpK、hEp、mRl8L、COG-112、COG-133和COG-1410)；ω-3脂肪酸，包括二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十碳五烯酸(EPA)、α-亚麻酸(ALA)、鱼油(其包含，例如，DHA和EPA)，以及其酯类(例如，甘油酯和乙酯)；以及其类似物、衍生物和盐。在某些实施方案中，抗肥胖剂是或包括脂肪酶抑制剂(例如，奥利司他)或/和抗高脂血症剂(例如，他汀类诸如阿托伐他汀，或/和贝特类药物诸如非诺贝特)。抗高血压剂包括但不限于：肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的拮抗剂，包括肾素抑制剂(例如，阿利吉仑)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如，贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利和群多普利)、血管紧张素II受体1型(ATII1)拮抗剂(例如，阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、非马沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、奥美沙坦酯(olmesartanmedoxomil)、奥美沙坦、替米沙坦和缬沙坦)和醛固酮受体拮抗剂(例如，依普利酮和螺内酯)；利尿剂，包括髓袢利尿剂(例如，布美他尼、依他尼酸、呋塞米和托拉塞米)、噻嗪类利尿剂(例如，苄氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、依匹噻嗪、甲氯噻嗪和泊利噻嗪)、噻嗪类样利尿剂(例如，氯噻酮、吲达帕胺和美托拉宗)、西氯他宁(早期远端肾小管利尿剂(early distaltubular diuretic))、保钾利尿剂(例如，阿米洛利、依普利酮、螺内酯和氨苯蝶啶)和可可碱；钙通道阻断剂，包括二氢吡啶类(例如，氨氯地平、左旋氨氯地平、西尼地平、氯维地平、非洛地平、伊拉地平、乐卡地平、尼卡地平、硝苯地平、尼莫地平、尼索地平和尼群地平)和非二氢吡啶类(例如，地尔硫卓和维拉帕米)；α₂-肾上腺素受体激动剂，包括可乐定、胍那苄(guanabenz)、胍法辛、甲基多巴和莫索尼定；α1-肾上腺素受体拮抗剂(α阻断剂)，包括多沙唑嗪、吲哚拉明、尼麦角林、苯氧苄胺、酚妥拉明、哌唑嗪、特拉唑嗪和妥拉唑啉；β-肾上腺素受体(β1或/和β₂)拮抗剂(β阻断剂)，包括阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、卡替洛尔、卡维地洛、拉贝洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、奈必洛尔、氧烯洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔和噻吗洛尔；混合α/β阻断剂，包括布新洛尔、卡维地洛和拉贝洛尔；内皮素受体拮抗剂，包括选择性ETA受体拮抗剂(例如，安贝生坦、阿曲森坦、艾多南坦、西他生坦、齐泊腾坦和BQ-123)和双重ET_A/ET_B拮抗剂(例如，波生坦、马西替坦和替唑生坦)；其他血管扩张剂，包括肼屈嗪、米诺地尔、可可碱、硝普钠、有机硝酸酯(例如，单硝酸异山梨酯、二硝酸异山梨酯和硝酸甘油，它们在体内转化为一氧化氮)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)刺激剂(例如，西氯他宁)、可溶性鸟苷酸环化酶激活剂(例如，cinaciguat和利奥西呱(riociguat))、磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制剂(例如，阿伐那非(avanafil)、苯酰胺那非(benzamidenafil)、达生他非、dynafil、洛地那非、米罗那非、西地那非、他达拉非、乌地那非、伐地那非、双嘧达莫、罂粟碱、普罗潘非林(propentofylline)、扎普司特和T-1032)、前列腺素Ei(前列地尔)及其类似物(例如，利马前列素和米索前列醇)、前列环素及其类似物(例如，阿他前列素(ataprost)、贝前列素[例如，伊苏贝前列素(esuberaprost)]、5,6,7-三并-4,8-间-w-亚苯基-9-氟-PGl₂、卡巴环素(carbacyclin)、异卡巴环素、克林前列素、西前列烯(ciprostene)、依他前列素、西卡前列素、伊洛前列素、匹米前列素、SM-10906(去甲基匹米前列素)、那前列烯(naxaprostene)、他前列烯、曲前列尼尔(treprostinil)、CS-570、OP-2507和TY-11223)、非前列腺素类前列环素受体激动剂(例如，l-phthalazinol、雷利帕格(ralinepag)、赛乐西帕(selexipag)、ACT-333679[MRE-269，赛乐西帕的活性代谢物]和TRA-418)、磷脂酶C(PLC)抑制剂和蛋白激酶C(PKC)抑制剂(例如，BIM-1、BIM-2、BIM-3、BIM-8、白屈菜红碱(chelerythrine)、西氯他宁、棉酚(gossypol)、宫本醇C(miyabenol C)、杨梅苷(myricitrin)、ruboxistaurin和毛蕊花苷(verbascoside)；矿物质，包括镁和硫酸镁；及其类似物、衍生物和盐。在某些实施方案中，抗高血压剂是或包括噻嗪类或噻嗪类利尿剂(例如，氢氯噻嗪或氯噻酮)、钙通道阻断剂(例如，氨氯地平或硝苯地平)、ACE抑制剂(例如，贝那普利、卡托普利或培哚普利)或血管紧张素II受体拮抗剂(例如，奥美沙坦酯、奥美沙坦、替米沙坦或缬沙坦)，或其任何组合。在一些实施方案中，本文描述的肽产品与一种或更多种另外的治疗剂组合使用来治疗NAFLD，诸如NASH。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂选自抗糖尿病剂、抗肥胖剂、抗炎剂、抗纤维化剂、抗氧化剂、抗高血压剂及其组合。可以用于治疗NAFLD(例如，NASH)的治疗剂包括但不限于：PPAR激动剂，包括PPAR-δ激动剂(例如，MBX-8025，elafibranor[双重PPAR-α/δ激动剂]和GW501516[双重PPAR-β/δ激动剂])和PPAR-γ激动剂(例如，噻唑烷二酮类，诸如吡格列酮和沙罗格列扎[双重PPAR-α/γ激动剂])——PPAR-δ和PPAR-γ激动增加胰岛素敏感性，PPAR-α激动降低肝脂肪变性，并且PPAR-δ激动剂抑制巨噬细胞和库普弗细胞的激活；类法呢醇X受体(FXR)激动剂，诸如肥胖胆酸和非甾体FXR激动剂，如GS-9674降低肝糖异生、脂肪生成、脂肪变性和纤维化；成纤维细胞生长因子19(FGF19)及其类似物和衍生物，诸如NGM-282——FGF19类似物降低肝糖异生和脂肪变性；成纤维细胞生长因子21(FGF21)及其类似物和衍生物，诸如BMS-986036(聚乙二醇化的FGF21)——FGF21类似物降低肝脂肪变性、细胞损伤和纤维化；HMG-CoA还原酶抑制剂，包括他汀类(例如，罗苏伐他汀)——他汀类降低脂肪性肝炎和纤维化；ACC抑制剂，诸如NDI-010976(靶向肝)和GS-0976——ACC抑制剂降低新生脂肪生成和肝脂肪变性；SCD-l抑制剂，诸如aramchol——SCD-l抑制剂降低肝脂肪变性并且增加胰岛素敏感性；SGLT2抑制剂，诸如卡格列净、伊格列净和鲁格列净——SGLT2抑制剂降低体重、肝ALT水平和纤维化；CCR2或/和CCR5的拮抗剂，诸如cenicriviroc——CCR2(与CCL2[MCP1]结合)和CCR5(与CCL5[RANTES]结合)的拮抗剂抑制炎性细胞(例如，巨噬细胞)的激活和向肝迁移，并且降低肝纤维化；凋亡抑制剂，包括凋亡信号调节激酶1(ASK1)抑制剂(例如，司隆色替(selonsertib))和胱天蛋白酶抑制剂(例如，emricasan[泛胱天蛋白酶抑制剂])——凋亡抑制剂降低肝脂肪变性和纤维化；赖氨酰氧化酶样2(LOXL2)抑制剂，诸如辛妥珠单抗(simtuzumab)——LOXL2是胶原形成中的关键基质酶，并且在肝中高度表达；半乳凝素-3抑制剂，诸如GR-MD-02和TD139——半乳凝素-3对肝纤维化的发展至关重要；抗氧化剂，包括维生素E(例如，α-生育酚)和活性氧物类(ROS)和自由基的清除剂(例如，半胱胺、谷胱甘肽、褪黑素和己酮可可碱[也经由抑制TNF-a和磷酸二酯酶抗炎])——维生素E降低肝脂肪变性、肝细胞气球样变性和小叶炎症；及其类似物、衍生物和盐。在一些实施方案中，本文描述的肽产品与PPAR激动剂(例如，PPAR-δ激动剂诸如elafibranor或/和PPAR-γ激动剂诸如吡格列酮)、HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，他汀类诸如罗苏伐他汀)、FXR激动剂(例如，奥贝胆酸)或抗氧化剂(例如，维生素E)或其任何组合联合使用，以治疗NAFLD(例如，NASH)。在某些实施方案中，用于治疗NAFLD(例如，NASH)的一种或更多种另外的治疗剂是或包括维生素E或/和吡格列酮。如本领域普通技术人员将理解的，也可以使用其他组合。

药代动力学(“PK”)参数可以使用8.1版或更高版本(Certara USA,Inc.,Princeton,New Jersey)进行估计。可以使用与血管外施用途径一致的非区室(non-compartmental)方法用于参数估计。可以使用个体血浆浓度-时间数据用于药代动力学计算。除了个体动物的参数估计以外，描述性统计(例如平均值、标准偏差、变异系数、中位数、最小值、最大值)可以酌情确定。对于描述性统计的确定和药代动力学分析，低于定量限值的浓度值可以作为零被处理。低于定量限值的嵌入(embedded)浓度值可以从药代动力学分析中排除。可以从来自在给药当天(第1天)的测试物品治疗组的血浆中的单独双重激动剂肽(或其衍生物和/或代谢物)浓度产生所有参数。可以使用标称剂量水平估计参数，除非获得超出规格的剂量制剂分析结果，在该情况下，可以使用实际剂量水平。可以使用标称采样时间估计参数；如果记录到了生物分析样品收集偏差，则可以在受影响的时间点使用实际采样时间。生物分析数据可以按收到的原样(as received)用于药代动力学分析，并且可以以所提供的单位在表和图中呈现。药代动力学参数可以以由分析实验室提供的单位计算和呈现(为了在报告中呈现，可以适当地调节数量级，例如h*ng/mL转换为h*μg/mL)。描述性统计量(例如，平均值、标准偏差、变异系数、中位数、最小值、最大值)和药代动力学参数可以酌情确定为三位有效数字。可以根据需要记录另外的数据处理项目。在数据允许的情况下，待确定的PK参数可以包括但不限于以下内容：C_max：最大观察浓度；DNC_max：剂量归一化最大浓度，计算为C_max/剂量；T_max：最大观察浓度的时间；AUC_0-t：从时间0至最后一次可测量浓度时间的曲线下面积，使用线性梯形法则计算；AUC_0-96：从时间0至96小时的曲线下面积，使用线性梯形规则计算；DN AUC_0-96：剂量归一化AUC_0-96，计算为AUC_0-96/剂量；AUC_0-inf：从时间0至无穷大(仅第1天)的曲线下面积，计算为AUC_0-inf＝AUC_0-t+C_t/λ_z，其中C_t是最后一次观测到的可定量浓度并且λ_z是消除速率常数；t_1/2：消除半衰期，计算为ln(2)/λ_z。还可以确定另外的参数和比较(例如，性别比、剂量比例比(proportionality ratio)等)，如本领域普通技术人员将理解的。

在一些实施方案中，本公开内容提供了包含对胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)具有亲和力的至少一种双重激动剂肽的一种或更多种药物剂量制剂，其中：肽用疏水性表面活性剂修饰；剂量被配置为控制血糖和/或诱导体重减轻，与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，降低一个或更多个不良事件，不良事件选自向哺乳动物施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘。在一些实施方案中，双重激动剂肽是SEQ ID NO.1-10中的任一种或其衍生物或其组合。在一些实施方案中，双重激动剂肽对GLP-1R和GCGR具有约相等的亲和力，并且在甚至更优选的实施方案中双重激动剂肽是SEQID NO:1。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向哺乳动物施用双重激动剂肽导致：在施用后约48小时或96小时较低的血糖(任选地低至少约10％、20％、30％、40％或50％中的任一种，优选地低至少约50％)；在施用后约72小时较低的血糖(任选地低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地低至少约100％)；和/或在施用后约120小时较低的血糖。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向哺乳动物施用双重激动剂肽诱导全身体重减轻；和/或诱导肝重量减轻。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向哺乳动物施用双重激动剂肽表现出较低的C_max(任选地低至少约10％、20％、30％、40％、50％中的任一种，优选地低至少约50％)；表现出大约相等或更大的T_max(任选地大至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任何一种，优选地大至少约100％)；表现出相似的AUC_(0-inf)(任选地至少约为其50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％中的任一种，优选地至少约为其80％-90％，诸如约为其85％-93％)；表现出约相等或更高的T_1/2(hr)(任选地至少约为其10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地至少约为其50％或75％，诸如约为其50％-75％)；表现出延长的MRT(hr)(任选地高至少约10％、20％、30％、40％或50％中的任一种，优选地高至少约25％)；表现出延长的PK/PD谱；表现出相等或更大的血糖调节作用；诱导更大的全身体重减轻，任选地约为其两倍；诱导更低的体脂质量，任选地低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地低至少约100％)；和/或，在施用以治疗NASH时，诱导增加的全身重量降低、肝重量减轻、改善的NAS评分、改善的肝脂肪变性、改善的气球样变性、改善的col1A1染色、改善的ALT、改善的肝TG/TC和改善的血浆TG/TC。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向哺乳动物施用双重激动剂肽导致在施用该剂量制剂后约14天在体重上更大的减轻(任选地大至少约10％、20％、30％、40％或50％，优选地大至少约15％)；和/或，在施用该剂量制剂后大约20天-28天在体重上更大的减轻(任选地大至少约10％、20％、30％、40％或50％中的任一种，优选地大至少约25％)。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向哺乳动物施用双重激动剂肽导致肥胖哺乳动物中足以使该哺乳动物恢复至瘦的正常哺乳动物的正常体重范围的体重减轻。

“降低(reducing)”或“降低(reduction of)”不良作用或不良事件是指与对GLP1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，在施用对GLP1R和GCGR具有大约平衡的亲和力的激动剂后，受试者所经历的不良作用的程度、持续时间和/或频率以及在一组受试者中的发生率降低。这样的降低包括预防受试者在响应对GLP1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂时本来会经历的一些不良作用。这样的降低还包括消除受试者在施用对GLP1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂后先前经历的不良作用。在一些实施方案中，“降低(reducing)”不良作用或不良作用的“降低(reduction of)”包括胃肠道副作用的降低，其中不良事件降低至零或检测不到的水平。在其他实施方案中，不良作用降低至等同于未治疗受试者的水平，但未完全消除。此外，向哺乳动物施用对GLP-1R或GCGR具有不平衡亲和力的类似物可能导致需要过高剂量以最大地激活对配体具有较弱敏感性的受体，从而导致超过另一配体的生物有效剂量水平的可能性，并且引起剂量相关的不期望的副作用。

本公开内容还提供了用于降低和/或稳定哺乳动物血糖的方法，所述方法包括向哺乳动物施用包含SEQ ID NO.1-10的双重激动剂肽(或其衍生物)，优选地对GLP-1R和GCGR具有约相等亲和力的双重激动剂肽(优选地SEQ ID NO:1)的药物剂量制剂，其中与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂(例如，塞马鲁肽)相比，所述方法降低了一个或更多个不良事件的发生率或严重性，不良事件选自在向哺乳动物施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽的方法相比，这样的方法导致在施用后大约48小时或96小时较低的血糖(低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，优选地低至少约50％)，在施用后大约72小时较低的血糖(任选地，低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地低至少约100％)，和/或在施用后大约120小时较低的血糖(任选地低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任何一种，优选地低至少约100％)；诱导全身体重减轻和/或诱导肝重量减轻；较低的C_max(任选地低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，优选地低至少约50％)，大约相等或更大的T_max(任选地低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，优选地大至少约100％的T_max)，相似的AUC_(0-inf)(任选地至少约为其50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％中的任一种，优选地至少约为其80％-90％，诸如约85％-93％)，大约相等或更大的T_1/2(hr)(任选地，低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地至少约为其50％或75％，或约为其50％-75％)；延长的MRT(hr)(任选地延长至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地至少约25％)；延长的PK/PD谱；相等或更大的血糖调节作用；更大的全身体重减轻(任选地约两倍全身体重减轻)；较低的体脂质量(任选地低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地低至少约100％)；在施用剂量制剂后大约14天更大的体重减轻(任选地大至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地大至少约15％)；在施用剂量制剂后大约20-28天更大的体重减轻(任选地大至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一种，优选地大至少约25％)；和/或肥胖哺乳动物中足以使该哺乳动物的体重恢复至瘦的正常哺乳动物的正常体重范围的体重减轻；和/或，在所述方法用于治疗NASH时，增加的全身重量降低、肝重量减轻、改善的NAS评分、改善的肝性脂肪变性、改善的气球样变性、改善的col1A1染色、改善的ALT、改善的肝TG/TC和改善的血浆甘油三酯(TG)/总胆固醇(TC)。

在一些实施方案中，本公开内容提供了包含激动剂肽产品(例如，SEQ ID NO:1)和在去离子水(pH 7.7±0.1)中的约0.025％-0.075％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.2％-0.5％(w/w)精氨酸、约3％-6％(w/w)甘露醇的药物剂量制剂。在优选的实施方案中，药物剂量制剂是包含SEQ ID NO:1，在去离子水(pH 7.7±0.1)中的约0.050％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.348％(w/w)精氨酸和约4.260％(w/w)甘露醇的ALT-801。

在一些实施方案中，本公开内容提供了被配置为以少于约0.15mg/kg/剂量，任选地约0.03mg/kg/剂量-0.10mg/kg/剂量向哺乳动物施用激动剂肽产品(例如，SEQ ID NO:1)的药物剂量制剂。在一些实施方案中，药物剂量制剂被配置为向哺乳动物施用少于0.15mg/kg/剂量的激动剂肽产品。在一些实施方案中，药物剂量制剂被配置为施用0.03mg/kg/剂量-0.15mg/kg/剂量之间。在一些实施方案中，药物剂量制剂可以被配置为每周施用约0.5mg至约10mg之间；任选地每周约1mg至约7mg；或任选地每周约1mg至5mg。在一些实施方案中，药物剂量制剂被配置为每周一次向哺乳动物施用，持续多达六周。在一些实施方案中，本公开内容提供了被配置为使得达到治疗剂量的时间是约四周或更少的药物剂量制剂。在一些实施方案中，治疗剂量表现出约400ng/ml至约1300ng/ml的C_max；约10小时至约36小时的T_max；和/或约15,000h*ng/mL至45,000h*ng/mL的AUC_0-48。

在一些实施方案中，本公开内容提供了用于降低人类的血糖和/或降低人类的体重的方法，所述方法包括向人类施用包含SEQ ID NO:1的药物剂量制剂，其中与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，一个或更多个不良事件的发生被减少，所述不良事件选自向动物施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘。在一些实施方案中，所述方法：a)与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，降低一个或更多个不良事件的发生率，不良事件选自在向哺乳动物施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘；b)与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽的方法相比，导致：在施用后大约48小时或96小时低大约50％的血糖，在施用后大约72小时低大约100％的血糖，和/或在施用后大约120小时较低的血糖；c)诱导全身体重减轻和/或诱导肝重量减轻；d)与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽的方法相比，导致：较低的C_max或任选地低约50％的C_max；大约相等或更大的T_max或任选地大了约100％的T_max；相似的AUC(0-inf)或任选地大约85％-93％的AUC_(0-inf)；大约相等或更少的T_1/2(hr)或任选地大约50％-75％的T_1/2(hr)；延长的MRT(hr)或任选地高至少大约25％的MRT(hr)；延长的PK/PD谱，表现出相等或更大的血糖调节作用；更大的全身体重减轻或任选地大约两倍的全身体重减轻；较低的体脂质量，任选地低约100％的体脂质量；和/或在所述方法治疗NASH时，增加的全身重量降低、肝重量减轻、改善的NAS评分、改善的肝性脂肪变性、改善的气球样变性、改善的col1A1染色、改善的ALT、改善的肝TG/TC和改善的血浆TG/TC；e)与以大约等摩尔剂量施用的塞马鲁肽相比：导致到施用剂量制剂后大约14天在体重上更大的减轻，任选地大了约15％的减轻；和/或，导致到施用剂量制剂后大约20天-28天在体重上更大的减轻，任选地大了约25％的减轻；和/或，f)肥胖哺乳动物中足以使该哺乳动物的体重恢复至瘦的正常哺乳动物的正常体重范围的体重减轻。在优选的实施方案中，所述方法用于诱导体重减轻。

在一些实施方案中，本文公开的方法不包括治疗起始阶段。换言之，第一次施用的剂量是治疗性的，不需要滴定以避免不良的胃肠副作用。例如，在一些实施方案中，所述方法可以包括施用本公开内容的肽诸如SEQ ID NO:1的第一一个或更多个剂量(治疗起始阶段)，随后是该肽的后续第二一个或更多个且更高剂量，第一剂量和第二剂量中的每一个被施用持续一周或更多周。在一些实施方案中，一个或更多个第一剂量和一个或更多个第二剂量之后可以是一个或更多个第三剂量，第三剂量可以高于第二剂量。从第一剂量、第二剂量和第三剂量的转换可以基于每周一次进行。例如，如果第一剂量在一周或更多周之后显示没有诱导较低的血糖和/或体重减轻，则可以施用第二更高剂量持续一周或更多周，随后分析第二剂量的作用。如果观察到有益作用(例如，较低的血糖和/或体重)，可以继续施用第二剂量。如果没有观察到有益作用，可以施用第三剂量持续一周或更多周，随后确定有益作用。如果每个剂量都没有观察到不良事件，这种给药和分析循环可以酌情重复。在一些实施方案中，可以施用随后的第二一个或更多个且更高剂量的肽，因为在施用第一一个或更多个剂量的约四周之后没有实现血糖控制(例如，降低的血糖)。在一些实施方案中，第一一个或更多个剂量可以在不意图产生治疗作用(例如，降低的血糖和/或体重减轻)的情况下施用。然而，在一些实施方案中，所述方法可以在不包括治疗起始阶段的情况下进行。

在一些实施方案中，所述方法可以是人类血糖控制和/或体重减轻的一线指示(indication)，这意味着它是为了控制人类血糖和/或诱导人类体重减轻的目的向患者施用的第一且唯一的活性剂。在一些实施方案中，本文公开的方法可以包括饮食和/或锻炼的辅助治疗。在这样的实施方案中，可以向人类施用药物剂量，并且向人类提供关于可以增强药物剂量的有益作用的饮食和/或锻炼的指导。在一些实施方案中，被施用药物剂量的人类患有2型糖尿病。在一些实施方案中，人类可以表现出已确立的心血管疾病，伴有或不伴有2型糖尿病。

在一些实施方案中，药物剂量约每周一次施用。在一些实施方案中，药物剂量约每周一次向人类施用约2周至约8周或更长时间。在一些实施方案中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向人类施用作为每周剂量的药物剂量持续约4周至约8周，任选地约6周，导致在向人类施用后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周或约7周更大的全身体重减轻。在一些实施方案中，药物剂量在约第1天、第8天、第15天、第22天、第29天和第36天施用。在一些实施方案中，所述方法可以包括向人类施用单剂量，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，导致在施用后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天较低的血糖。在一些实施方案中，所述方法可以包括每周剂量向人类的施用持续约4周至约8周，任选地约6周，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，导致在施用后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周或约7周更大的全身体重减轻。在一些实施方案中，所述方法可以包括，向所述人类施用单剂量，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，表现出在施用后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天较低的C_max。在一些实施方案中，所述方法可以包括以约0.5mg/剂量、约1.0mg/剂量、约1.5mg/剂量、约2.0mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3.0mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4.0mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5.0mg/剂量或约5.5mg/剂量向成年人类施用药物剂量。在一些实施方案中，药物剂量可以约每周一次或每两周一次施用，任选地持续至少一个月；任选地，其中每个剂量包含约相同量的激动肽产品。在一些实施方案中，药物剂量可以皮下施用。在一些实施方案中，剂量中的一个或更多个可以经由第一途径(例如，皮下)施用，并且随后通过不同途径(例如，口服)施用。在一些实施方案中，达到治疗剂量的时间是约四周或更少的时间。在一些实施方案中，施用药物剂量制剂表现出约400ng/ml至约1300ng/ml的C_max；约10小时至约36小时的T_max；和/或约15,000h*ng/mL至45,000h*ng/mL的AUC_0-48。在优选的实施方案中，人类的体重减轻是至少5％、至少10％；或约1％至约20％；或约5％至约10％(w/w)。在一些实施方案中，施用包含约1.8mg SEQ IDNO:1的药物剂量制剂被每周一次施用(优选地皮下)持续至少六周，导致施用该制剂的群体大于约3％-5％的全身体重减轻，优选地大于约5％的全身体重减轻(“平均体重减轻”)，和/或相对于安慰剂的约6％，优选地约6.3％的净改变。在一些实施方案中，施用包含约1.2mg SEQ ID NO:1的药物剂量制剂被每周一次施用(优选地皮下)持续至少六周，导致施用该制剂的群体约2％的全身体重减轻，优选地约1.8％的全身体重减轻(“平均体重减轻”)，和/或相对于安慰剂的约3％，优选地约2.7％的净改变。本公开内容还提供了表7(体重减轻)和/或表8(不良事件)中示出的另外的结果，这也是优选的实施方案。在一些实施方案中，将其向哺乳动物施用导致肥胖哺乳动物中足以使人类恢复至瘦的正常人类的正常体重范围的体重减轻。在一些实施方案中，药物剂型是包含聚山梨醇酯20、精氨酸或甘露醇中的一种或更多种的水性制剂。

如本领域普通技术人员将理解的，还设想了本公开内容的其他方面

除非通过其在本文中的使用另外定义或另外清楚地指示，否则在本文中使用的所有技术和科学术语具有本申请所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如在说明书和所附权利要求书中使用的，词“一个/种(a)”或“一个/种(an)”意指一个/种或更多个/种。如本文使用的，词“另一个/种(another)”意指第二个/种或更多个/种。首字母缩略词“也称(aka)”意指也被称为。如本文使用的术语“示例性的”意指“用作示例、实例或说明”。本文中表征为“示例性”的任何实施方案或特征不一定被解释为相比于其他实施方案或特征是优选的或有利的。在一些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在指定值的±10％或5％之内。每当术语“约”或“大约”在一系列两个或更多个数值或一系列两个或更多个数值范围中的第一数值之前时，术语“约”或“大约”应用于该系列数值或该系列数值范围中的每一个数值。范围在本文中可以表示为从约一个特定值，和/或至约另一个特定值。在表示这样的范围时，另一方面包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，在值被表示为近似值时，通过使用先行词约或大约，可以理解该特定值形成另一方面。将进一步理解，每个范围的端点既与另一个端点关联又独立于另一个端点是有意义的。范围(例如，90％-100％)意指包括范围本身以及该范围内的每个独立值，如同每个值被单独列出。任选的或任选地意指随后描述的事件或情况可以发生或可以不发生，并且该描述包括事件或情况发生的实例以及事件或情况不发生的实例。本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请通过引用以其整体并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被特别和单独地指明通过引用并入。

在以下实施例中进一步描述某些实施方案。这些实施方案仅作为实施例提供，并不意图以任何方式限制权利要求的范围。

实施例

实施例1.肽合成

存在可以成功地用于典型的基于N-α-Fmoc的肽合成的许多标准的保护基团和偶联剂。典型的实例列于美国专利第9,856,306B2号中，该专利通过引用以其整体并入本公开内容中。另外的实例可以见于许多综述和方案中，例如由Novabiochem在线公布和定期更新的那些和更专业的综述(例如Behrendt,R.等人(2015)J Peptide Sci 22:4-27以及其中的参考文献)。许多承包肽合成公司(contract peptide synthesis houses)使用的典型商业方案用于本文的合成。下文给出了更特化的方案。

制备C末端酰胺类似物–SEQ.ID.NO.1.

Boc-His(Trt)-Aib-Gln(Trt)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Leu-Asp(tBu)-Glu*-Lys(ivDDE)-Ala-Ala-Lys*-Glu(tBu)Phe-Ile-Gln(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Rink酰胺树脂(SEQ ID NO:1)的样品如下制备：通过使用标准偶联方案例如二异丙基碳二亚胺(DIC)/羟基苯并三唑(HBT)偶联顺序添加N-α-Fmoc保护的氨基酸，随后用哌嗪的标准脱保护，下一步偶联等(Glu*和Lys*指示侧链环状内酰胺键，通过使用Pd(PPh₃)₄/1,3-二甲基巴比妥酸催化对基于烯丙基的侧链保护的脱保护，用在NMP中的DIPEA和用0.5％二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物和DIPEA洗涤，然后与DIC/Oxyma偶联来实现)。通过与在DMF中的2％或更多水合肼孵育，随后通过DMF/CH₂Cl₂洗涤，对在残基17处的Lys-N-ε位置上的ivDDE基团脱保护，通过使用DIC/HBt或其他偶联剂，用在DMF/CH₂Cl₂中的18-([β-D-葡糖醛酸-1-基]氧基)十八烷酸叔丁酯对Lys侧链酰化。通过茚三酮检查偶联的完成，并且用CH₂Cl₂充分洗涤产物。

通过用裂解混合物(cocktail)(94％TFA：2％EDT；2％H₂O；2％TIS)在室温处理持续240min的时间段，使产物树脂进行最终脱保护并从树脂裂解。将混合物用Et₂O处理以沉淀产物，并且用Et₂O充分洗涤以在真空干燥之后产生粗标题肽产物。

通过反相(C18)hplc分批进行纯化。将粗肽装载到流量约为15mL/min的4.1x25 cmhplc柱上(在0.1％三氟乙酸水溶液中的CH₃CN有机改性剂，缓冲液A；CH3CN与0.1％TFA，缓冲液B)，并且用40％-70％缓冲液B的梯度洗脱。将产物级分冻干以产生纯度＞94％的标题产物肽(SEQ.ID NO：1)，该纯度是依据分析型hplc(10.5min；在0.1％TFA中的40％-70％CH₃CN)/质谱(M+1峰＝1937.44；分子量实测3872.88)。以相似的方式，使用如实施例中指示制备的葡糖醛酸或蜜二糖醛酸(melibiouronic acids)，制备本发明的其他类似物。

分析数据示于表A中：

表A

SEQ ID NO：	预期MW	实测(M+2)	k’值；hplc梯度	柱
					1.	3873.34	3872.94	3.0；在20min内40％-70％B	Luna C-18 5μ
2.	3977.47	3977.67	3.8；在20min内45％-75％B	Luna C-18 5μ
					3.	3845.28	3845.16	3.1；在20min内40％-70％B	Luna C-18 5μ
4.	3873.34	3873.46	6.5；在20min内40％-70％B	PLRP-S 8μ

通过HPLC/MS分析化合物，以提供纯度数据和身份数据(分子离子检测)。HPLC技术利用填充有所列材料的分析柱，所述材料具有所列的颗粒尺寸，并且数据在此报告为k’值(k’＝(Tr-T₀)/T₀)，该值预计在很大程度上独立于系统配置和死体积(dead volume)，但取决于梯度和填充材料。所有化合物报告为约95％纯。

标题化合物的对应1-甲基和1-辛基类似物以相似方式制备，但使用试剂1’-甲基β-D-葡糖醛酸和1’-辛基β-D-葡糖醛酸(Carbosynth)。对应的1-癸基、1-十二烷基、1-十四烷基、1-十六烷基、1-十八烷基和1-二十烷基和更高类似物使用如以上描述制备的对应单糖和二糖糖醛酸制备。可选地，1-烷基葡糖醛酸基或其他糖醛酸酰化类似物可以通过初始纯化脱保护或部分脱保护的肽，随后用所期望的糖醛酸试剂酰化来制备。可选地，1-烷基葡糖醛酸基或其他糖醛酸酰化类似物可以通过初始纯化重组制备的肽，随后用所期望的糖醛酸试剂选择性酰化侧链氨基官能团来制备。

A.1-烃基β-d-葡糖醛酸。一般氧化法。

向在20mL乙腈和20mL去离子水中的1-十二烷基β-d-吡喃葡萄糖苷[2.0g,5.74mmol]的溶液中添加(二乙酰氧基碘)苯[4.4g,13.7mmol]和TEMPO[0.18g,1.15mmol]。将所得混合物在室温搅拌直到反应完成(20h)。将反应混合物用水稀释并且冻干至干燥，以给出纯度足以直接用于偶联肽Lys侧链的白色粉末粗产物(1.52g,73％)。以类似的方式制备用于酰化本文描述的其他肽产物的其他1-烃基β-d-葡糖醛酸或蜜二糖醛酸。使用在这些实施例中的程序制备对应的1-取代的葡萄糖苷或蜜二糖苷(meliboside)，但取代适当链长的二羧酸起始材料，以从实施例的合成程序产生所期望的链长，例如用十六烷二酸、十二烷二酸等替代十八烷二酸。

B.18-(叔丁氧基)-18-氧代十八烷酸

将在甲苯(500ml)中的十八烷二酸(40g,127mmol)的悬浮液在氮气下在95℃加热。在3-4小时内向所得溶液中逐滴添加N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(98g,434mmol)。将反应物在相同温度搅拌过夜，在真空浓缩至干燥并且在高真空下放置过夜。在加热和超声处理下，将所得固体悬浮在CH2Cl2(200ml)中，并且在RT过滤，用CH2Cl2洗涤。将滤液(2)浓缩以给出作为固体的产物(45g,86％)，该产物无需进一步纯化即可使用。

C.18-羟基十八烷酸叔丁酯

将在THF中的18-(叔丁氧基)-18-氧代十八烷酸(45g,121mmol)的溶液在氮气下在冰浴中冷却，并且用硼烷二甲基硫络合物(16ml,158mmol)逐滴处理。在最初几毫升的添加过程中发生了剧烈的气体析出。在添加之后，允许混合物缓慢升温至RT，并且搅拌过夜。将反应物在冰浴上冷却，用饱和碳酸钠溶液猝灭，用乙酸乙酯稀释，并且用饱和碳酸钠溶液洗涤。将有机层在真空浓缩并且在高真空下放置过夜。将剩余物溶解在温甲苯(200ml)中，并且在室温静置数小时。通过硅藻土过滤去除沉淀的二醇，用甲苯洗涤滤饼。将甲苯溶液直接施加至硅胶柱上，并且用10％乙酸乙酯/己烷、然后用20％乙酸乙酯/己烷、然后用30％乙酸乙酯/己烷洗脱，并且浓缩以给出作为油状物的产物(24g,51％)，该产物在静置时固化。¹HNMR(500MHz,d₄-MeOH):δ＝3.64(m,2H),2.21(t,2H,J＝9),1.44(s,9H)1.50-1.62(m,4H),1.20-1.40(m,27H)。

D.18-([1-β-D-葡萄糖-1-基]氧基)十八烷酸叔丁酯

将18-羟基十八烷酸叔丁酯(46g,129mmol)溶解在甲苯(400ml)中，在真空浓缩至约250ml，并且允许在氮气下达到室温。在剧烈搅拌下，向该溶液中添加HgO(黄色)(22.3g,103mmol)、HgBr₂(37g,103mmol)和乙酰溴葡萄糖。继续搅拌过夜，直到消耗完醇类并且将混合物通过硅藻土过滤。将滤液用三氟甲磺酸铜(II)(1g)处理，并且搅拌1小时，直到原酸酯(TLC上产物上方的点)降解。然后将反应物用水洗涤并且将有机层在真空浓缩。将剩余物溶解在甲醇(500ml)中，并且用0.5ml份甲醇钠(在甲醇中的5.4M)处理，以使pH值达到9(直接点样到pH纸上)。每0.5小时检查一次pH值，并且根据需要添加更多的甲醇钠以保持pH值为9。反应在4小时内完成。逐滴添加乙酸以使pH值达到7,并且将混合物在真空浓缩。将剩余物装载到硅胶上并且通过硅胶色谱纯化，用5％甲醇/CH2Cl2洗脱，然后用10％甲醇/CH2Cl2洗脱，以产生作为白色固体的产物(55g,82％)。¹H NMR(400MHz,d₄-MeOH):δ＝4.30(d,1H,J＝7.6),3.84(m,1H),3.77(d,1H,J＝9.6),3.45-3.60(m,2H),3.36(t,1H,J＝9.2),3.21(t,1H,J＝8.4),2.20(t,2H,J＝7.2),1.50-1.67(m,4H),1.43(s,9H),1.43-1.33(m,2H),1.28(br s,24H)。

E.18-([β-D-葡糖醛酸-1-基]氧基)十八烷酸叔丁酯

在机械搅拌下，将18-([1-β-D-葡萄糖-1-基]氧基)十八烷酸叔丁酯(50g,96mmol)溶解在2000ml三颈烧瓶中的二氧六环(800ml)中，并且冷却至10℃。向该溶液中添加入2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基(TEMPO)(150mg,0.96mmol)和KBr(1.14g,9.6mmol)。将包含饱和Na₂CO₃溶液和13％NaOCl溶液(120ml)的滴液漏斗固定至烧瓶。碳酸盐溶液以快速滴注开始，并且将NaOCl以缓慢滴注(约1滴/秒)添加。在添加100ml碳酸盐之后，检查pH，并且根据需要添加更多碳酸盐以维持约pH 10。在整个过程中，将温度始终维持在10℃至15℃。在3小时之后，起始材料仍然存在，因此快速添加更多的NaOCl(10ml)。在0.5小时之后，将反应用甲醇(10ml)猝灭。将混合物倒入4000ml锥形烧瓶中，浸没在冰浴中，并且用6N HCl调节至pH 3。将混合物用乙酸乙酯稀释，并且用1N HCl洗涤和用蒸馏水洗涤2X，允许各层在最终洗涤时分离。将有机层在真空浓缩，以给出作为白色泡沫的产物(38g,74％)。

使用2,3,4,5-四氯硝基苯(TCNB)内标物相对于异头CH的定量¹H NMR(500MHz,d₄-MeOH)给出了预期重量的94.8％。依据TLC，纯度>95％(20％MeOH/DCM/2滴HOAc，使用20％H₂SO₄/EtOH+加热染色)¹H NMR(500MHz,d₄-MeOH):δ＝4.30(d,1H,J＝9.5),3.85(m,1H),3.77(d,1H,J＝7.5),3.48-3.56(m,2H),3.37(t,1H,J＝11.5),3.21(t,1H,J＝9.5),2.20(t,2H,J＝9.5),1.52-1.66(m,4H),1.44(s,9H),1.34-1.42(br,2H),1.28(s,25H)。

实施例2.双重激动肽-体外测定

使用标准细胞测定(DiscoveRx,LeadHunter assays)进行细胞测定，使用cAMP刺激或制动蛋白激活的读出。将化合物以大约1mg的量精确称重，并且运送至DiscoverX(Fremont,CA)用于稀释和测定。使用的测定是针对于细胞测定中的胰高血糖素(人类，克隆到CHO细胞中)和GLP-1(人类，克隆到CHO细胞中)受体。测定在存在0.1％卵清蛋白的情况下进行。历史上，这样的测定是在0.1％ BSA存在的情况下进行的，但是对于这些与血清白蛋白结合非常紧密(>99％)的化合物，它会扭曲结果，并且使化合物的效力看起来低得多。使用0.1％卵清蛋白可以避免这个问题。使用卵清蛋白后观察到的改善可以被视为血清白蛋白与肽结合的相对紧密度的指标(indicator)。

表5

EU-A1588＝SEQ ID NO:2；EU-A1871＝SEQ ID NO:3；EU-A1872＝SEQ ID NO:4；EU-A1873＝SEQ ID NO:1；塞马鲁肽＝SEQ ID NO:11。

测定在存在0.1％卵清蛋白的情况下进行。历史上，这样的测定是在0.1％BSA存在的情况下进行的，但是对于这些与血清白蛋白结合非常紧密(>99％)的化合物，它会扭曲结果，并且使化合物的效力看起来低得多。使用0.1％卵清蛋白可以避免这个问题。使用卵清蛋白后观察到的改善可以被视为血清白蛋白与肽结合的相对紧密度的指标，参见下表。

表6

在细胞测定中卵清蛋白替代BSA对于紧密BSA结合物的影响

这里可以观察到，非常紧密的血清白蛋白结合物(具有含CO2H的取代基，模拟脂肪酸头部基团)在用卵清蛋白替代BSA后显示出显著的倍数改善，卵清蛋白明显不结合脂肪酸模拟物。倍数改善的程度可以给出与BSA上的脂肪酸结合位点结合的紧密度的读数。因此，塞马鲁肽改善了12倍(紧密结合)，而EU-A1873从30倍改善至40倍，这意味着血清白蛋白结合显著增加。可以预计这种程度的血清白蛋白结合导致抑制的C_max和延长的作用持续时间，如在SEQ ID NO:1的生物测定中观察到的。

以上表5和表6中呈现的数据显示，测试的化合物是GLP-1R和GCGR两者的激动剂(“双重激动剂”)，不同于塞马鲁肽，塞马鲁肽显示出偏向GLP-1的高亲和力。该数据还显示出SEQ ID NO:1是对GLP-1R和GCGR具有约相等亲和力的双重激动剂肽。

实施例3.确定健康超重和肥胖受试者中单次和重复SC剂量ALT-801的安全性和耐受性，以及基于PK-PD关系表征有效剂量范围的临床试验

本研究旨在评价健康超重和肥胖受试者(BMI 25.0–40.0kg/m²)中单次和重复SC剂量ALT-801的安全性和耐受性并且基于药代动力学-药效学(PK-PD)关系表征有效剂量范围。研究超重和肥胖的健康志愿者，因为这样的受试者的PK可能不同于正常体重个体的PK。此外，这些受试者能够更好地耐受体重减轻的预测PD作用，并且甚至可以从治疗中获益。已经采取了适当的避孕措施，以尽量使怀孕的机会最小化，并且采取了预防措施，以排除将使受试者由于GLP-1或胰高血糖素类似物治疗而处于风险的预先存在的状况。排除糖尿病受试者，直到ALT-801对葡萄糖稳态的影响在非糖尿病群体中被更好地表征。由于预计超重和肥胖受试者具有不同水平的胰岛素抵抗，这些研究中的进行的观察，连同该类别其他化合物的数据，应可预测在研究糖尿病受试者时观察到的影响。已经对可能以其他方式影响ALT-801对安全性、PK或PD的影响的准确评价的那些制定了排除。进行分析以评价本研究中采用的BMI范围对PK和PD参数的影响。该研究将显示ALT-801对体重的影响，为其作为肥胖的主要治疗的用途提供支持。

本研究的主要目的是通过评价不良事件(AE)、生命体征、临床安全性实验室、尿液分析、体检和注射部位反应；葡萄糖稳态；血压；心电图(ECK)、动态心电图监测等，评价健康超重和肥胖受试者单次和多次递增皮下(SC)剂量施用之后ALT-801的安全性和耐受性。研究的次要目的是评价：1)单次和多次递增SC剂量施用之后ALT-801的PK；以及2)单次和多次剂量施用后ALT-801的PD作用。本研究的探索性目的包括评价：1)多次剂量施用之后ALT-801的扩大的PD作用；以及2)ALT-801对心率校正QT间期(QTc)延长的影响。研究评价(包括依据MRI-PDFF的肝脂肪含量、体重、依据全身MRI的身体组成、胰岛素抵抗、全身炎症以及GLP-1和胰高血糖素靶结合)是基于ALT-801的预期的PD特性，包括体重减轻和身体组成变化。葡萄糖稳态的测量是基于GLP-1和胰高血糖素类似物对葡萄糖控制的可能作用。由于GLP-1和胰高血糖素激动剂与血压和心率的临床上无显著改变相关，因此包括了动态血压监测(ABPM)和动态心电图监测。还包括动态心电图监测，以提供ALT-801对QT间期延长的任何可能的影响的信息。基于GLP-1和GLP-1/胰高血糖素双重激动剂的药理学和安全性经验，可能会发生剂量相关的GI AE，包括恶心和呕吐。还将评价葡萄糖稳态，包括高血糖和低血糖的发生率和严重程度。由于体重减轻是这种化合物的期望特性，因此对其效力而非安全性进行监测。然而，如果认为体重减轻过度，则可以调节随后队列中的剂量。如果认为体重减轻水平不安全或过度，则可以暂停或停止个体受试者的研究药物。还将监测受试者的药物诱导的肝损伤。在提供单独的知情同意书的受试者中，在研究药物的给药前和最终剂量之后收集血液样品，用于建立生物库(biobanking)。这些样品用于发现和/或验证NASH和相关疾病中的生物标志物，包括可能的遗传分析。

本文描述的这项研究是在健康超重和肥胖受试者中进行ALT-801单次递增剂量(SAD)和多次递增剂量(MAD)的人类首次(first-in-human，FIH)、1期、随机、双盲、安慰剂对照、两部分研究。将超重至肥胖受试者(体重指数[BMI]25.0–40.0kg/m²)纳入。在第1部分，单次递增剂量(SAD)阶段，受试者经历多达28天的筛查时间段。符合纳入标准且不符合排除标准的超重至肥胖受试者将以3:1的比例随机分为8名受试者的队列，其中6名受试者接受ALT-801，并且2名受试者接受安慰剂。在所有SAD队列中，研究药物(SEQ ID NO:1，配制为ALT-801，用于SC施用)在腹部部位处皮下(SC)施用。受试者在研究药物施用之前大约1天(第-1天)进入研究单位，并且将在第8天出院。受试者将在第1天接受1个SC剂量的ALT-801或安慰剂。对于第1部分，计划了六个队列，以及2个另外任选的队列。计划了以下剂量水平：基于60kg人类，0.4mg、1.2mg、2.4mg、4.8mg、7.2mg和9.4mg作为每周一次(QW)施用的每周剂量。这些剂量可以基于临床观察或PK数据(当可得时)进行修改。每个SAD队列中的前2名受试者(1名ALT-801和1名安慰剂)在剩余受试者之前至少48小时以前哨(sentinel)方式给药。受试者在第-1天至第5天的评价之前和第8天的评价之前经历至少10小时的过夜禁食，并且餐食将标准化。受试者经历研究评价以评估安全性，包括ECG、CGM和ABPM，并且将按照下文描述的评价时间表如描述的收集血液样品用于PK。从研究单位出院后，受试者将每3天返回门诊就诊至第26天用于PK和安全性评价，并且在第35天或至少5个半衰期(如在给药过程中确定的)进行随访就诊。在完成6个计划队列之后，如果未实现基于药物计量学建模的预测有效剂量和暴露量和/或如果未鉴定单剂量的最大耐受剂量(MTD)，则在第1部分中纳入多达2个另外的单剂量队列。第2部分，在SAD队列3的第8天完成并且该队列的安全性被评价后，开始多次递增剂量(MAD)阶段。第2部分中的起始剂量通常是SAD队列3的剂量的一半。

在提供知情同意书之后，超重至肥胖的受试者经历多达28天的筛查时间段。指示受试者在筛查期间维持其正常的饮食和活动，并且在参与研究期间的任何时间都不开始任何新的饮食、补充剂或锻炼计划。受试者在研究药物施用之前大约4天(第-4天)进入研究单位，接受饮食和锻炼导入(run-in)适应期，在此期间，他们将接受标准化餐食。标准化饮食以使用预测BMR×1.5个体化的每天卡路里来提供，以考虑基于体重、身高、年龄和性别的受试者间差异。研究参与者的活动水平也被标准化。符合纳入标准且不符合排除标准的受试者在第-1天以5:1的比例随机分为12名受试者的队列，其中10名受试者接受ALT-801QW，并且2名受试者接受安慰剂QW，持续6周。在所有MAD队列中，研究药物在腹部部位处皮下(SC)施用。

受试者在第1天接受第一剂量的研究药物，并且留在研究单位，直到他们在第8天接受第二剂量之后。然后，受试者以每周时间间隔(第15天、第22天和第29天)返回进行3次门诊给药就诊，并且在第32天至第43天再次入院。受试者将在第36天接受最后一个剂量的研究药物。在第43天出院后，受试者在第70天或给药之后5个半衰期(以较早者为准)返回进行随访就诊。受试者经历几项研究评价，以评价如本文描述的ALT-801的安全性、PD和PK。安全性评价将包括ECG、CGM和ABPM。PD评价包括拟人化测量、饮食评价、成像和用于生物标志物的血液收集。执行患者胃肠道紊乱症状严重程度指数评价(The Patient Assessment ofGastrointestinal Disorders Symptom Severity Index，PAGI-SYM)以评价治疗对GI症状的影响。收集血液样品用于PK和免疫原性。受试者在第-1天到第5天之前以及第7天、第8天、第36天、第37天、第42天和43天之前经历至少10小时的过夜禁食。此外，受试者将在第-1天、第7天和第42天接受标准早餐餐食，用于混合餐耐受性测试。

MAD的剂量将基于临床数据和来自先前完成的SAD和MAD队列的PK数据(在可用时)来选择。计划三个MAD队列和多达2个任选的另外的队列(如果需要)，以实现基于药物计量学建模的预测有效剂量和暴露量，以扩大先前研究的剂量水平，如果未鉴定到该阶段的MTD，则继续剂量递增，或者如果在达到基于药物计量学建模的最大有效剂量之前观察到GI不耐受性，则探索剂量滴定方案。

第1部分中的最大推荐起始剂量(MRSD)基于在关键良好实验室实践毒理学研究中在动物(大鼠和猴)中确定的NOAEL人体等效剂量(HED)的十分之一。大鼠和猴两者都被认为对ALT-801具有相似的临床响应，但在NOAEL的暴露量在大鼠中略低，导致更保守的人类起始剂量。大鼠NOAEL是高剂量，为0.45mg/kg/周，基于体表面积缩放，其相当于60kg人类中的0.44mg/周。值得注意的是，猴的NOAEL也是高剂量，为0.25mg/kg，基于体表面积缩放，其相当于60kg人类中的0.49mg/周。为了安全性使用10倍缩放因子，对于60kg人类选择0.40mg/周的人类起始剂量。此外，外推的在最大推荐起始剂量(MRSD)的人类暴露量远低于在猴NOAEL的暴露量，值得注意的是，这与在大鼠NOAEL的暴露量相当。这特别相关，因为猴虽然不是最敏感的物种，但在生物学上是最具临床相关性毒性(即减少食物摄入和呕吐)的更相关物种。第1部分中的临床观察和PK将最终指导第2部分中的剂量考虑。

ALT-801在大鼠和猴研究中的主要发现是体重减轻(参见，例如实施例4)。将大鼠每天给药的时间表修改为每周3天，通过降低ALT-801对食物消耗和体重减轻的影响来改善耐受性，这与作用机制一致。GLP-1和胰高血糖素激动剂的毒性也已在人类研究中被很好表征。临床前安全性发现支持SAD队列2的3倍剂量递增增量。在研究的任何一部分，随后的递增将不超过2倍。如果需要改善耐受性，可以探索剂量滴定方案。加上这些预测的置信度，基于数种临床前物种(小鼠、大鼠、小型猪和猴)的群体PK模型，人类的剂量-暴露量关系被预测为线性。随着研究进行，该模型会根据人类数据更新。在人类中ALT-801的预测t_1/2在100小时的范围内，这一假设也将在第1部分中得到确认。基于每周一次(QW)给药，稳态时重复给药的估计积累不大于2倍。为了确保多次剂量暴露量将保持在单次剂量暴露量范围内，第2部分的起始剂量计划为第1部分队列3剂量的一半。然而，随后的第2部分队列可能基于安全性和PK数据进行调节。递增至每个连续剂量水平的决定基于第1部分中至第8天(单个剂量后7天)和第2部分中第15天(第二剂量后7天)的安全性和耐受性的评价。第二周完成之后剂量递增的决定基于早期GLP-1和GLP-1/胰高血糖素双重激动剂研究的观察，即预期主要为恶心或呕吐的AE将在给药的前2周发生。此外，预期给药的最终一周的C_max和AUC_tau将不超过先前完成且安全性评价的SAD队列中的剂量的C_max或AUC_inf。基于动物的有效剂量的暴露量和预测人类PK的动物PK参数的药物计量学建模，估计成年人类的最大效力的目标剂量(对应于ED80至ED90)在1mg与5mg之间，并且目标血浆浓度在50ng/ml与100ng/ml之间。因此，估计的起始剂量比最低预测有效剂量低大约2.5倍，并且预期是无效的。

为了使安全性最大化，计划单次递增剂量(SAD)和多次递增剂量(MAD)递增不超过大鼠中在NOAEL的暴露量。然而，如果PD和耐受性表明超重和肥胖受试者将从预期超过在大鼠NOAEL的暴露量的剂量中获益，则向IEC呈现支持性安全性和效力数据，并且在继续SAD和MAD递增之前获得同意。

第1部分中最少需要6名受试者，并且第2部分中最少需要8名受试者进行剂量递增，每个队列中至少有1名受试者接受安慰剂。如果观察结果表明剂量递增超过MTD，则可以基于对先前治疗队列中观察到的安全性和耐受性数据的评价，向下调节建议的下一剂量水平。可以继续给药，直到鉴定MTD，MTD是对于研究的每个部分单独确定的。可得的PK数据可以用于指导决策，并且如果预期暴露量超过大鼠的NOAEL，则明确考虑使用PK数据。为了使安全性最大化，计划的SAD和MAD递增将不超过大鼠中在NOAEL的暴露量。

完成筛查活动后，通过交互式网络响应系统(interactive web responsesystem，IWRS)对符合所有纳入标准且不符合任何排除标准的受试者进行随机化。在第1部分中，每个队列中的2名受试者以1:1随机分配至ALT-801或安慰剂治疗组，用于前哨给药。每个队列8名受试者中的剩余6名受试者随机分配至ALT-801或安慰剂治疗组，其中5名分配至ALT-801组，并且1名分配至安慰剂组，使得每个队列中ALT-801和安慰剂的总比例为3:1。在第2部分中，12名受试者的队列以5:1的比例随机分配至ALT-801或安慰剂治疗组，其中10名分配至ALT-801组，并且2名分配至安慰剂组。

SEQ ID NO:1在玻璃小瓶中在无菌缓冲水性溶液(例如，在去离子水(pH 7.7±0.1)中的约0.050％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.348％(w/w)精氨酸、约4.260％(w/w)甘露醇))中配制为ALT-801，并且以2.5mg/mL的最终浓度和1.2mL的总填充体积包含SEQ ID NO:1，并且作为皮下(SC)注射施用。在第1部分中，在第1天施用单次剂量研究药物。每个SAD队列中的前2名受试者(1名ALT-801和1名安慰剂)在剩余受试者之前至少48小时以前哨方式给药。在第2部分中，QW施用研究药物持续6周。在第1天、第8天、第15天、第22天、第29天和第36天施用剂量。第1部分中的起始剂量是0.40mg，对应于在大鼠中未观察到不良作用水平(NOAEL)的人类等效剂量的十分之一(为了安全性，从0.44mg/周向下舍入)，并且剂量递增将遵循修改的Fibonacci方案，并且是3倍或更少，其中计划剂量水平为0.40mg、1.2mg、2.4mg、4.8mg、7.2mg和9.4mg(相当于每7天一次施用的周剂量)。第2部分中的起始剂量计划为第1部分队列3剂量的一半。然而，随后的第2部分队列可能基于安全性和PK数据进行调节。递增至每个连续剂量水平的决定基于第1部分中至第8天(单个剂量后7天)和第2部分中第15天(第二剂量后7天)的安全性和耐受性的评价。可以酌情或如本文描述修改剂量递增和剂量滴定方案。ALT-801或安慰剂的每个剂量由经过适当培训的临床工作人员在腹部区域以SC注射施用。施用体积基于选择的剂量和最终药物产品的2.5mg/mL的浓度。盐水安慰剂的体积基于在该队列中施用的ALT-801的剂量和体积进行匹配。由于体重减轻是这种化合物的期望特性，因此对其效力而非安全性进行监测。然而，如果认为体重减轻过度，则可以调节随后队列的剂量。如果认为体重减轻水平过度，则可以暂停或停止个体受试者的研究药物。如果尽管进行了止吐治疗，但仍认为GI不良事件水平过高且不可耐受(例如，重度的GI AE持续>24小时)，则可以暂停或停止个体受试者的研究药物。如果存在持续呕吐，则可以给予受试者止吐药。在这种情况下，5HT3受体拮抗剂(例如，昂丹司琼(ondansetron))是优选的。如果观察表明剂量递增超过MTD，则可以基于对先前治疗队列中观察到的安全性和耐受性数据的评价，向下调节建议的剂量水平。可以继续给药，直到鉴定MTD，MTD是对于研究的每个部分单独确定的。可得的PK数据可以用于指导决策。

对于第1部分，在第-1天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第8天、第11天、第14天、第17天、第20天、第23天和第26天的第0小时、第1小时、第4小时、第6小时、第8小时、第12小时和第16小时，对于第2部分，在第-1天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第8天、第15天、第22天、第29天和第36-38天的第0小时、第1小时、第4小时、第6小时、第8小时、第12小时和第16小时，收集血液样品用于PK评价。来自PK样品的剩余血浆可以无时间限制地冷冻储存，并且可以用于ALT-801生物分析方法开发或探索ALT-801代谢物。ECG读数与PK采样时间进行时间匹配。当多于一个活动在同一时间点发生时，应首先收集ECG，并且PK抽血应在标称时间进行。PD评价仅在第2部分中进行。

使用壁挂式测距仪或安装在平衡木秤上(无论哪个是可得的)的测距仪测量高度(以厘米计)。受试者应穿袜子或赤脚。除了筛查就诊以外，在每天大约相同的时间，在每个标称时间点使用校准秤以千克计测量体重。受试者应穿着睡衣(或由临床研宄单位提供的其他标准服装)、内衣和袜子(无鞋)，在禁食期和要求其排尿(即排空膀胱)之后进行测量。应在受试者穿着睡衣的情况下测量腰围。在髂嵴上侧和肋骨下外侧边缘之间的中间水平进行测量。测量不需要在脐的水平。卷尺保持水平。根据第1部分和第2部分中的时间表，测量身高、体重和腰围，并且计算和记录BMI。仅在筛查时需要测量身高。仅在第2部分中测量受试者的腰围。

是能够分别通过振动控制瞬态弹性成像(Vibration-ControlledTransient Elastography，VCTE)和CAP同时测量肝硬度和脂肪变性的超声样仪器。对于第2部分中的受试者，在至少10小时的过夜禁食后，在筛查期间测量CAP。CAP在MRI-PDFF之前测量。MRI-PDFF是能够对整个肝的肝脂肪进行准确、可重复和可再现的定量评价的定量成像生物标志物。对于第2部分中的受试者，在筛查期间(仅在CAP≥300dB/m时发生)并且在最少10小时禁食后在EOS就诊时测量MRI-PDFF。肝脂肪百分比针对总肝体积进行校正，总肝体积与肝脂肪含量同时测量。全身MRI是用于测量身体组成(包括瘦体重)的确立的成像技术。对于第2部分中的受试者，在筛查和EOS就诊期间联合MRI-PDFF进行全身MRI。

在第1部分和第2部分中，研究单位住院时间段期间为受试者提供标准化饮食。每天卡路里使用预测BMR方程乘以1.5的活性系数进行个体化，并且将大量营养素组成标准化为40％-50％碳水化合物、15％-25％蛋白和30％-40％脂肪。在第2部分中，在第-1天和第42天的PD评价之前，在第-4天至第-2天和第39天至第41天提供相同的标准化餐食。餐食的时间和类型也将针对ECG、MRI-PDFF和MMTT评价是特定的，如各对应手册中描述的。

使用自由(ad libitum)餐食测试和VAS问卷评价食物摄入和食欲。VAS问卷是食欲研究中的标准技术，记录饥饿感、饱腹感(satiety)、饱足感(fullness)以及对进食特定味道(诸如甜、咸、美味和高脂肪)的期望[Flint2000]。受试者将在评价时间表中指定的日期自由餐食之前及之后完成VAS问卷。自由餐食的量将超过健康超重和肥胖志愿者的预期摄入量。在测试餐食期间，受试者被隔离，并且使环境因素最小化(例如，没有TV、手机、电脑等)。通知受试者他们有30分钟的时间消耗如他们想要的多或少的食物，并且他们应进食至舒服饱腹。记录餐食前和餐食后体重以获取食物摄入量，并且确定卡路里消耗。

在禁食条件下和禁食至少10小时时间段后，在早晨评价基础代谢率(BMR)和静息能量暴露量(REE)。在第-1天和第42天进行静息能量消耗。使用通风罩法(间接量热法)确定BMR和REE。因为BMR通常是每天能量消耗的主要组分，所以在以能量消耗为目标的代谢药物开发计划的背景下，BMR的改变可能具有临床相关性。

在最少10小时禁食后，受试者将经历混合餐食耐受性测试(MMTT)，该测试将包括在5分钟内消耗标准化液体餐食(6液体盎司的Ensure Plus[700kcal]，一种包含脂肪、碳水化合物和蛋白组分的营养补充剂，构成标准MMTT)。t＝0分钟样品(即在标准化液体餐食之前)是最后的HOMAIR 2血液样品(参见以上)。激素标志物将包括葡萄糖、胰岛素和C肽。在消耗标准化液体餐食之后的前15分钟和此后的30分钟至240分钟(在此期间没有另外的食物摄入)，以5分钟的时间间隔收集样品。MMTT程序在评价时间表中指定的日期进行。为了使测试标准化并且降低易变性，每次测试之前是在进入临床研究单位之后的3天标准化饮食和标准化身体活动导入期。

在受试者禁食过夜至少10小时之后、第一剂量和第二剂量之前1天以及最后一个剂量之后6天，收集血液样品用于评价酮体。在受试者禁食过夜至少10小时之后收集用于评价FGF-21和脂联素的血液样品。禁食最少10小时后，在研究药物的第一剂量之前和最后一个剂量之后6天，收集血液以评价脂质，包括胆固醇(总胆固醇、HDL、LDL)、Apo A和Apo B、脂蛋白(a)、TG和三棕榈精(tripalmitin)，如表4中指示的。在研究药物的第一剂量之前和最后一个剂量之后6天，收集血液用于评价炎性标志物，包括TNF-α、hs-CRP、瘦素、MCP-1和IL-6，如表4中指示的。在第1部分和第2部分所指示的时间段期间，使用Dexcom G6 CGM通过24小时CGM评价葡萄糖稳态。

安全性群体包括接受至少1次剂量研究药物的所有随机受试者。受试者根据他们接受的治疗进行分析。PK群体包括接受至少1次剂量ALT-801且具有足够PK数据用于分析的所有随机受试者。QT群体包括PK群体中在基线时有至少1个时间匹配的ECG以及给药后有对应的时间匹配的PK-ECG的所有受试者。PD群体包括接受至少1次剂量研究药物并且具有基线和至少1次基线后PD评价结果的所有随机受试者。

在使用的统计方法中，描述性统计用于评价人口统计学和基线特征的差异。将病史使用最新的监管活动医学词典(Medical Dictionary for Regulatory Activities，MedDRA)版本进行编码，并且按受试者列出。连续安全性数据用描述性统计(算术平均值、标准偏差[SD]、中位数、最小值和最大值)按剂量水平和治疗(活性或安慰剂)进行总结。分类安全性数据用频率计数和百分比，按研究部分、剂量水平、治疗和天数(在适用的情况下)进行总结。

将AE使用最新的MedDRA版本进行编码。提供了按受试者划分的AE数据列表，包括逐字术语(verbatim term)、首选术语(preferred term)、SOC、治疗、严重程度以及与研究药物的关系。经历治疗中发生的AE(TEAE)的受试者数量以及个体TEAE和注射部位反应的数量按治疗组、SOC和首选术语进行总结。TEAE还将按严重程度(1级至4级)以及按与研究药物的关系(不太可能、可能、很可能)进行总结。停止规则的相关性被定义为可能或很可能相关。实验室评价、生命体征评价、连续心脏监测、ECG参数(不包括动态心电图监测)、CGM测量、ABPM测量和餐食耐受性测试参数按研究部分、治疗组、剂量水平和方案指定的收集时间点进行总结。还将按治疗组呈现对在每个方案指定的时间点相对于基线的改变的总结。列出了每个受试者的体检改变。PAGI-SYM的分析详见统计分析计划(SAP)。伴随药物按受试者列出，并且使用最新的WHO药物词典进行编码。

药代动力学包括用描述性统计(样品量[N]、算术平均值、SD、变异系数[CV％]、中位数、最小值和最大值)按队列列出并总结的个体ALT-801浓度数据。每个队列的个体和平均值±SD ALT-801浓度-时间谱也将以图形方式呈现。估计SAD部分的血浆ALT-801非区室(NCA)PK参数C_max、达到最大血浆浓度的时间(T_max)、AUC0-t、AUC0-inf、消除速率常数(Kel)、t_1/2、表观总身体清除率(CL/F)和终末阶段期间的表观分布体积(Vz/F)(其中数据足以确定参数)。对于MAD部分，在第一剂量和最后一个剂量(第1周和第6周)后估计T_max、C_max和AUCtauPK参数。如果数据允许，在第6周给药后估计Kel、t_1/2、稳态时的表观总身体清除率(CLSS/F)和稳态时的表观分布体积(VSS/F)。列出每个个体的药代动力学参数并且使用描述性统计(N、算术平均值、SD、CV％、中位数、最小值、最大值、几何平均值和几何CV％)按队列进行总结。基线BMI对PK参数的影响通过相关性分析进行评价。酌情使用功效模型方法(powermodel approach)评价剂量比例。积累被评价为在第6周与第1周的C_max和AUC0-tau的比例。稳态通过比较从第一剂量至最后一个剂量的波谷浓度来评价。

从动态心电监护仪中提取的ECG由中心ECG实验室的选择的对受试者、就诊、治疗和标称时间点不知情的一组熟练阅片人进行分析。单个阅片人将核查个体受试者的ECG，除非需要基于质量控制或可用性的第二次核查。对于个体受试者，使用相同的导联分析所有ECG。主要分析导联是导联II，除非导联II不可分析，否则V2或V5用于个体受试者的整个数据集。

初步分析是使用Fridericia校正的QT间期(ΔΔQTcF)的安慰剂校正的给药后时间点从基线的改变的平均改变和单侧95％置信上限。可以探索和比较其他校正方法，诸如Bazett(QTcB)、个体校正(QTcI)或群体校正(QTcP)。至少分析并呈现了Fridericia和Bazett校正。二次分析将包括使用线性混合效应模型的时间匹配血浆浓度与ΔΔQTcF之间的关系。ALT-801的重复剂量施用的免疫原性通过使用在MAD阶段的最后一次就诊时收集的血清样品的基于ELISA的测定的评价来评价。如果研究结束时，样品呈阳性，还将对研究中期的样品进行分析。如果适用，免疫原性可能与安全性和PK相关。

药效学研究包括肝脂肪含量、拟人化参数、GLP-1结合和胰岛素抵抗、胰高血糖素结合以及脂质和炎性标志物的改变按治疗组用描述性统计(样品量[N]、算术平均值、SD、中位数、最小值、最大值、几何平均值和几何CV％)列出并进行总结。如适用，应用推断统计。基线BMI对PD参数的影响通过协变量分析进行评价。

在MAD队列3中完成2次剂量或更多次剂量后，可以进行中期分析。该分析的目的是允许为后续试验选择剂量。对于该分析，研究将保持不知情，并且受试者水平的安全性、PD和可得的PK数据将被去标识化(de-identified)用于分析。报告了按研究部分、剂量水平、治疗组(活性或安慰剂)和按天数(在适用的情况下)的总结数据。中期分析的进行详见于SAP中。

实施例4.在超重和肥胖志愿者中的ALT-801 1期研究(6周中期数据)

本实施例呈现了ALT-801 1期临床试验的结果，该临床试验是根据临床试验应用正在澳大利亚进行的超重和肥胖志愿者的安慰剂对照、人类首次、单次递增剂量(SAD)和多次递增剂量(MAD)研究。该研究的主要目的是评价ALT-801接受者在每周一次给药的12周内与安慰剂相比的安全性和耐受性、药代动力学和体重减轻。MAD阶段的给药始于每周一次接受ALT-801 1.2mg SC或安慰剂的队列，并且通过更高剂量的队列进展，其中1.2mg和1.8mg队列中的受试者目前已经完成了六周的治疗。已经对前两个研究队列进行了在给药六周的中期分析，并且将其呈现于本实施例中。

该研究显示，ALT-801诱导健康超重和肥胖志愿者的快速且稳健的体重减轻。ALT-801在健康超重和肥胖志愿者中正在进行的为期12周、1期、安慰剂对照的单次和多次递增剂量研究的预先指定的6周中期分析的体重减轻结果呈现于表7中。使用1.8mg皮下(SC)的每周一次ALT-801剂量，分析显示，到第6周(第43天)，与安慰剂组的0.9％的体重增加相比，实现5.4％的平均体重减轻(相对于安慰剂的净改变为6.3％)，超过2％体重减轻的研究前治疗目标(表7、图1)。在接受皮下(sc)1.8mg SC剂量的9名受试者中，除了一名受试者以外，所有受试者到第6周实现至少3％的体重减轻。接受每周一次1.2mg SC剂量的较低剂量队列在同一时间点实现1.8％的体重减轻(相对于安慰剂的净改变为2.7％)。

表7

体重-按时间点观察到的结果和相对于基线的改变-多次递增剂量(MAD)

本实施例中呈现的研究还显示出ALT-801是良好耐受的而无需剂量滴定。ALT-801在健康超重和肥胖志愿者中正在进行的为期12周、1期、安慰剂对照的单次和多次递增剂量研究的预先指定的6周中期分析的不良事件结果呈现于表8中。数据显示，ALT-801是良好耐受的而无需剂量滴定，短暂恶心率分别为在1.2mg剂量的14.3％和在1.8mg剂量的22.2％，并且在任一剂量不存在呕吐、腹泻或便秘的报告。在1.8mg剂量的所有恶心事件在严重程度方面是轻度。这些结果使ALT-801成为最有效且良好耐受的基于GLP-1的治疗药物之一。胃肠事件需要其他基于GLP-1的剂在16周至20周内进行剂量滴定，以维持足够的耐受性。

表8

受试者按不良事件项目和严重程度的总结-多次递增剂量(MAD)

分析显示，使用1.8mg皮下(SC)的每周一次ALT-801剂量，到第6周，与安慰剂组的0.9％的体重增加相比，实现5.4％的平均体重减轻(相对于安慰剂组的净改变为6.3％)，超过2％体重减轻的研究前治疗目标。在接受1.8mg SC剂量的9名受试者中，除了一名受试者以外，所有受试者到第6周实现至少3％的体重减轻。接受每周一次1.2mg SC剂量的较低剂量队列在同一时间点实现1.8％的体重减轻(相对于安慰剂的净改变为2.7％)。ALT-801是良好耐受的而无需剂量滴定，短暂恶心率分别为在1.2mg剂量的14.3％和在1.8mg剂量的22.2％，并且在任一剂量不存在呕吐、腹泻或便秘的报告。这些结果使ALT-801成为最有效且良好耐受的基于GLP-1的治疗药物之一。胃肠事件需要其他基于GLP-1的剂在16周至20周内进行剂量滴定，以维持足够的耐受性。

实施例5.ALT-801(Pemvidutide)在超重和肥胖志愿者中的1期研究-12周结果

本实施例呈现了用ALT-801(Pemvidutide)的1期临床试验的结果，该临床试验是根据临床试验应用正在澳大利亚进行的超重和肥胖志愿者的安慰剂对照、人类首次、单次递增剂量(SAD)和多次递增剂量(MAD)研究。该研究的主要目的是评价在12周内每周一次给药施用ALT-801的受试者与安慰剂相比的安全性和耐受性、药代动力学和体重减轻。该研究是在不存在卡路里限制或行为性体重减轻计划的情况下进行的。在某些实施方案中，ALT-801(也称为Pemvidutide)可以作为主要和独立治疗用作用于肥胖(即，BMI为30或更大)或超重(即，BMI为25或更大)受试者的长期体重管理的治疗。在某些其他实施方案中，ALT-801(也称为Pemvidutide)可以与降低的卡路里饮食和/或增加的身体活动组合，用作用于肥胖(即，BMI为30或更大)或超重(即，BMI为25或更大)受试者的长期体重管理的辅助治疗。

合格的参与者包括具有25kg/m²最小体重指数(BMI)的健康、非糖尿病受试者。该研究的MAD部分的三十四(34)名受试者被分配接受Pemvidutide的三种皮下剂量中的一种(1.2mg、1.8mg和2.4mg)或安慰剂，每周一次，持续12周，无需剂量滴定。不采用行为性和卡路里限制干预。MAD阶段的给药始于每周一次接受1.2mg SC ALT-801或安慰剂的队列，并且通过更高剂量的队列进展，其中1.2mg、1.8mg和2.4mg ALT-801剂量队列中的受试者已经完成了12周的治疗，如本实施例中呈现的。MAD阶段参与者的人口统计数据呈现于表9中。

表9：参与者的人口统计(MAD)

注：BMI＝体重指数

健康超重和肥胖志愿者用ALT-801每周一次给药后体重减轻的结果呈现于表10中。结果显示，ALT-801诱导健康超重和肥胖志愿者的快速且稳健的体重减轻。使用1.8mg皮下(SC)的每周一次ALT-801剂量，到第12周(第85天)，实现10.25％的平均体重减轻，相比之下，安慰剂组的平均体重减轻仅为1.6％(表10、图2)。此外，在1.8mg剂量，100％的受试者到第12周实现5％或更多的体重减轻，并且55％的受试者到第12周减轻其体重的至少10％。(图2)。在第12周，接受每周1.2mg SC剂量的较低剂量队列实现4.87％的体重减轻，而接受每周2.4mg SC剂量的较高剂量队列实现8.95％的体重减轻(表10)。在2.4mg剂量，除了一名受试者以外，所有受试者到第12周实现5％的体重减轻(图3)。鉴于样品量和重叠的置信区间，在1.8mg和2.4mg剂量的体重减轻的量基本相同。如图3和图4中示出的，体重减轻趋势维持到第12周，指示如果剂量维持更长时间段，预期的体重减轻水平更高。相比之下，在具有超重或肥胖的参与者中，在每周一次的2.4mg塞马鲁肽剂量加上生活方式干预，至第12周相对于基线的体重平均改变仅是6％(Wilding JPH,Batterham RL,Calanna S,Davies M,VanGaal LF,Lingvay I,McGowan BM,Rosenstock J,Tran MTD,Wadden TA,Wharton S,YokoteK,Zeuthen N,Kushner RF；STEP 1研究组。Once-Weekly Semaglutide in Adults withOverweight or Obesity.N Engl J Med.2021Mar 18；384(11):989)。有趣的是，跨不同ALT-801剂量组在第12周的体重减轻与受试者年龄或BMI(体重指数；kg/m²)之间未发现相关性(图5)，这意味着在该研究中观察到的稳健体重减轻在所有年龄和体重组中都将是预期的。

表10

体重-按时间点的观察到的结果和相对于基线的改变-多次递增剂量(MAD)

注：SD＝标准偏差、最小值(min)＝最小值(minimum)、最大值(max)＝最大值(maximum)

[1]基线定义为在接受第一剂量的研究药物之前收集的最后一个无丢失值。

[2]Bonferroni调节的p值。P值来自学生t检验，比较每个ALT-801剂量组相对于基线的改变％与合并的安慰剂的改变％。

持续12周监测的不良事件呈现于表11中。结果显示，ALT-801是良好耐受的，无需剂量滴定。所有治疗发生的不良事件本质上是轻度至中度的，伴随药物后消退，并且不需要特殊治疗。一名患者经历升高的ALT水平，在暂停给药之后快速缓解。特别是，胃肠不良事件大多是暂时的、轻度的，伴随药物后消退。此外，这些胃肠不良事件在本质上是暂时的，受试者通常经历单次发作，并且在治疗时间段内频率减少。无受试者因不良事件退出研究(参见表12)。胃肠事件需要其他基于GLP-1的剂在16周至20周内剂量滴定，以维持足够的耐受性。例如，批准用于成人患者长期体重管理的WEGOVY(塞马鲁肽)(https:// www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2021/215256s000lbl.pdf)需要从0.5mg至2.4mg的16周剂量递增，以管理不良事件的发生。这些结果使ALT-801成为最有效且良好耐受的基于GLP-1的治疗药物之一。

表11：

按系统器官类别、首选术语和最大严重程度划分的治疗发生的不良事件(TEAE)：第2部分(MAD)安全性群体

注：TEAE＝治疗发生的不良事件；

注：PLT＝可能危及生命

注：不良事件使用MedDRA版本MedDRA v23.1-Sep 2020进行编码。对于每个系统器官类别和首选术语，每个系统器官类别和首选术语仅计数受试者一次。

[1]对于最大严重程度：危及生命>重度>中度>轻度。

表12：研究处置(MAD)

¹被随机分组、给药并进行一次或更多次给药后评价的受试者

如表13中呈现的，用ALT-801治疗还倾向于显示出降低的收缩压和舒张压(收缩压和舒张压被认为是心血管风险的生物标志)。此外，用ALT-801治疗还倾向于降低脂质(表14)(脂质也被认为是心血管风险的生物标志物)。此外，ALT-801降低糖尿病前期和代谢综合征，如表15中示出的。用ALT-801治疗维持葡萄糖稳态，指示ALT-801的GLP-1活性有效地平衡了胰高血糖素对血糖的作用(表16)。表17示出了酮体产生的结果，指示ALT-801对脂肪燃烧增加的影响，脂肪燃烧作用可以归因于ALT-801的胰高血糖素活性。

表13：收缩压和舒张压-相对于基线的改变(MAD)

¹与基线相比第1周-第12周的每周测量的平均值，

表14：LDL(低密度脂蛋白)和HDL(高密度脂蛋白)

表15：糖尿病前期和代谢综合征

¹分析仅包括在第1天和第84天具有无丢失数据的受试者

表16：空腹血糖和血红蛋白A1c(HbA1c％)

¹与基线相比第1周-第12周的每周测量的平均值，

表17：酮体产生

ALT-801还呈现支持每周给药并且可能与可接受的胃肠耐受性相关的有利的药物动力学(PK)谱，如表18中示出的。

表18：ALT-801的药代动力学(PK)参数

总之，在该研究中，在仅用以1.8mg皮下剂量的ALT-801治疗12周之后，观察到令人印象深刻的10.3％的体重减轻。这种作用在2.4mg剂量得以维持。大多数(55％)受试者在1.8mg剂量实现多于10％的体重减轻。体重减轻趋势维续到第12周。ALT-801是良好耐受的，主要具有轻度的不良事件。治疗未导致研究由于不良事件而中断。线性体重减轻率表明这些作用将持续。与其他GLP-1受体偏倚的激动剂如塞马鲁肽相比，不需要剂量滴定即实现快速体重减轻，具有良好患者依从性。此外，未观察到高血糖AE，并且也未观察到对血糖控制或心率的不良作用。

实施例6：评价ALT-801在患有2型糖尿病的超重和肥胖受试者中的安全性和耐受性、药效学和药代动力学的1期、随机、双盲、安慰剂对照、平行分组研究

这是1期、随机、双盲、安慰剂对照、平行分组研究，以评价在患有T2DM的超重和肥胖(具有28.0kg/m²-40.0kg/m²体重指数(BMI)的18岁至65岁男性或未怀孕女性受试者)受试者中ALT-801的安全性和耐受性、药效学(PD)和药代动力学(PK)及其对血糖控制的作用，该受试者在筛查之前至少三个月，接受以下的任何组合：(1)饮食和锻炼，(2)二甲双胍，伴随不存在或轻度的胃肠症状(恶心、呕吐或腹泻)，和/或(3)钠葡萄糖协同转运蛋白(SGLT-2)疗法。在该研究中，将ALT-801或安慰剂通过皮下(SC)注射(优选地在腹部)每周一次向患有2型糖尿病(T2DM)的患者(例如，48名受试者)施用多达12个剂量，持续大约4.5个月，包括多达35天的筛查时间段、85天的治疗时间段和25天的随访时间段。

主要安全性目的是评价ALT-801在T2DM受试者中的安全性和耐受性，并且次要安全性目的是评价ALT-801对T2DM受试者的血糖参数和高血糖症及低血糖症发生率的影响。主要安全性终点包括不良事件(AE)、生命体征、心率-血压乘积(平均心率x平均收缩压)、肝功能测试、高血糖和低血糖不良事件的发生率、体检、注射部位反应和免疫原性。次要安全性终点包括相对于基线血糖参数的改变，包括空腹血清葡萄糖、CGM参数(葡萄糖浓度-时间曲线下面积、范围内时间以及高血糖症和低血糖症)和HbA1c。连续安全性数据将用描述性统计(算术平均值、标准偏差[SD]、中位数、最小值和最大值)按剂量水平和治疗(活性或安慰剂)进行总结。分类安全性数据将用频率计数和百分比按剂量水平、治疗组和天数(在适用的情况下)进行总结。AE将使用最新的监管活动医学词典(MedDRA)版本进行编码。将提供按受试者划分的AE数据列表，包括逐字术语、首选术语、系统器官类别(SOC)、治疗、严重程度以及与研究药物的关系。经历治疗发生的AE(TEAE)的受试者数量以及个体TEAE和注射部位反应的数量将按治疗组、SOC和首选术语进行总结。TEAE也将按严重程度和按与研究药物的关系进行总结。实验室评价，包括肝功能测试和空腹血清葡萄糖、生命体征(包括RPP计算)和ECG评价，将按治疗组、剂量水平和方案指定的收集时间点进行总结。还将按治疗组呈现在每个方案指定的时间点相对于基线的改变的总结。将列出每个受试者的体检改变。伴随药物将按受试者列出，并且使用世界卫生组织(World Health Organization，WTO)药物词典的最新版本进行编码。病史将使用最新的MedDRA版本进行编码，并且将按受试者列出。

主要药效学(PD)目的是评价ALT-801对T2DM受试者胰岛素敏感性和分泌的影响。这些包括通过MMTT(血清葡萄糖、C肽和胰岛素的四小时内曲线下面积(AUC0-4))和胰岛素抵抗稳态模型评价(Homeostasis Model Assessment for Insulin Resistance，HOMA IR)(空腹血糖和胰岛素)测量的相对于基线胰岛素分泌和敏感性的改变。次要PD目的是评价ALT-801对以下的影响：胃排空(延滞期、半衰期、胃排空系数)(如通过T2DM受试者的¹³C-螺旋藻呼气测试(spirulina breath test)测量的)、人体测量参数(例如，体重、腰围、BMI)、脂质代谢(胆固醇(总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白(Apo)A和载脂蛋白B、脂蛋白(a)和甘油三酯(TG))、代谢标志物(瘦素、脂联素)、炎性标志物(肿瘤坏死因子(TNF)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-6(IL-6))和脂毒性标志物。胰岛素敏感性和分泌、人体测量参数、脂质代谢、代谢标志物、脂毒性标志物和炎性标志物的改变将用描述性统计(样品量(N)、算术平均值、SD、中位数、最小值、最大值、几何平均值和几何变异系数(CV％))按治疗组列出并进行总结。基线BMI对PD参数的影响将通过协变量分析进行评价。相对于基线延滞期、半衰期、胃排空系数数据的改变将用描述性统计(N、算术平均值、SD、CV％、中位数、最小值和最大值)列出并进行总结。

还监测生活质量(QoL)的影响(与基线相比，简表-36(Short Form-36)和体重对生活质量的影响-Lite(Impact of Weight on Quality of Life-Lite)临床试验版本(用于CT的IWQoL-Lite)的改变)。身体健康和精神健康的两个总结评分、以及SF-36的八个领域评分和用于CT的IWQoL-Lite综合评分相对于基线的改变将用描述性统计(N、算术平均值、SD、中位数、最小值、最大值、几何平均值和几何CV％)按治疗组列出并进行总结。如以上描述的，将应用适用于连续终点的推断统计。

药代动力学(PK)目的是评价ALT-801浓度以及相对于基线二甲双胍浓度的改变。个体ALT-801和二甲双胍浓度数据将用描述性统计(N、算术平均值、SD、CV％、中位数、最小值和最大值)按治疗组和时间点列出并进行总结。每个队列的个体和平均值±SD ALT-801浓度-时间谱也将以图形方式呈现。相对于基线二甲双胍浓度的改变用描述性统计(N、算术平均值、SD、CV％、中位数、最小值和最大值)按治疗组和时间点列出并进行总结。将开发群体PK模型，以能够预测个体受试者ALT-801血浆浓度时间曲线和相关PK参数。将尽可能探索协变量，包括性别、年龄、体重、BMI和伴随药物，并且尽可能探索暴露量响应关系的效力和安全性终点。

在提供知情同意书之后，受试者将经历多达35天的筛查时间段。受试者将被指导如何维持其正常的饮食、饮酒和体育活动，并且在参与研究期间的任何时间都不开始任何新的饮食、补充剂或锻炼计划。从第-8天就诊开始，将提供饮食和锻炼方面的建议，并且在治疗时间段期间的每次就诊中将加强。符合纳入标准且不符合排除标准的受试者将被以1:1:1:1随机分配至以下治疗组之一：ALT-801 1.2mg皮下(SC)，每周一次，持续12周；ALT-8011.8mg SC，每周一次，持续12周；ALT-801在第1周0.6mg SC，在第2周1.2mg Sc，每周一次1.8mg SC，持续2周(第3周和第4周)，以及每周一次2.4mg SC，持续第5周至第12周；以及安慰剂(0.9％ NaCl)SC每周一次，持续12周。受试者将按基线时二甲双胍使用的存在或不存在进行分层。每个治疗组将存在12名受试者。受试者将在第1天接受第一剂量研究药物。随后的就诊将每周在诊所、家中或工作场所进行，到第85天或表1中的提前终止。受试者将在第110天返回进行安全性随访就诊。研究人员将遵循对在12周治疗时间段期间发生肝功能测试异常恶化的受试者进行干预的时间和方法的决策标准。受试者将经历7天的连续血糖监测(CGM)，以在筛查时、在第5周期间和在研究的最后一周期间测量血糖。在筛查和在治疗时间段结束时，将进行混合餐食耐受性测试(MMTT)，伴随测量葡萄糖和激素标志物。受试者还将经历在筛查期间(第-8天)和在第8周(第50天)的¹³C螺旋藻胃排空呼气测试，以评价ALT-801对胃排空速率的影响。空腹血糖水平将由血糖仪测量，并且由研究人员从第-35天开始以及在治疗时间段期间的每次就诊时记录。在非就诊日期，受试者还将监测和记录每天早上的空腹血糖，并且如果读数>240mg/dL或<70mg/dL，将联系研究中心。。在进行CGM时的几周期间(筛查、第4周和第12周)，<70mg/dL的任何CGM读数将通过血糖仪读数确认。受试者还将接受低血糖症的症状和治疗方面的教育，并且如果他们经历血糖<70mg/mL或提示低血糖症的症状，将获得血糖仪读数。受试者将在日志中记录在家中经历的任何低血糖症症状连同在事件发生时的血糖仪读数，研究人员将在每次就诊时对其进行核查。研究人员将建议受试者如何将其空腹血糖保持在限值内，包括重复的饮食建议，并且将遵循对12周治疗时间段期间患有持续高血糖症的受试者进行干预的时间和方法的决策标准。如果重复观察到空腹血糖显著减少(<50mg/dL)或受试者需要干预或外部帮助来治疗低血糖症，则该受试者可能退出研究并被替代。将收集稀少血液样品用于ALT-801PK，以与来自群体PK和PK-PD建模中的其他研究的数据以及用于二甲双胍PK的数据组合，以评价ALT-801存在的情况下二甲双胍浓度随时间的改变。还将收集血液样品以评价免疫原性。

该试验的结果显示，在患有T2DM的受试者中，通过每周一次皮下(SC)注射施用多达12个剂量的ALT-801是安全且可耐受的，具有积极的PD、生活质量和PK作用以及对受试者的血糖控制。

实施例7：ALT-801在患有非酒精性脂肪性肝病的糖尿病和非糖尿病超重和肥胖受试者中的1期、12周、随机、双盲、安慰剂对照研究

ALT-801是修饰的29氨基肽，对胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)具有等效的双重激动剂特性。ALT-801正在开发用于非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，这是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的亚组，其中脂肪变性导致肝细胞损伤和炎症(脂肪性肝炎)，伴有或不伴有纤维化。在美国(US)，NASH已经成为终末期肝病或肝移植的主要原因[Goldberg2017]。肥胖是NASH的核心驱动因素，并且体重减轻导致肝脂肪降低和NASH改善[Vilar-Gomez 2015]。多于80％的患有NASH的个体超重或肥胖[Diehl 2017]，并且目前没有可得的美国食品和药品监督管理局批准的用于诱导体重减轻的药理学选择，疗法主要基于旨在实现体重减轻的生活方式干预。然而，通过单独的生活方式改变难以达到并维持长期体重减轻。胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)已经成为患有NASH的患者的治疗选择。利拉鲁肽(一种每天服用的GLP-1RA)与NASH的消退相关，有改善肝纤维化的趋势[Armstrong 2016]。在最近的试验中，多达0.4mg/天的塞马鲁肽剂量与多达12.5％的平均体重减轻连同显著更高的NASH消退率相关。10％或更大的体重减轻被认为是最佳NASH消退和纤维化改善的截止值[Vilar-Gomez 2015]。较高水平的体重减轻也与心血管疾病和非肝恶性肿瘤的较低发生率相关，这些心血管疾病和非肝恶性肿瘤代表NASH患者面临的最严重的共病。不幸的是，这些研究中采用的利拉鲁肽和塞马鲁肽的剂量与胃肠(GI)AE的高比例相关，所述AE可能导致患者不适和不依从性。GLP-1RA对食欲和食物摄入发挥中枢作用，而GCGR激动剂(GCGRA)在动物模型和人类中驱动增加的能量消耗[Lynch 2014]。已经显示，与单独的GLP-1RA相比，GCGRA和GLP-1RA的作用在驱动更大程度的体重减轻方面是协同的[Day 2012]。GCGRA还增强脂肪分解和抑制肝脂肪合成，为肝脂肪降低和NASH消退提供了另外的途径[Schade 1979]。双重激动剂将GCGRA与GLP-1RA组合在同一分子中。在肥胖的非人类灵长类动物中，与GLP-1RA单激动剂相比，长期施用GLP-1RA/GCGRA双重激动剂在更大程度上降低体重并且改善葡萄糖耐受性[Tschop 2016]。Cotadutide(一种具有5:1的GLP-1对胰高血糖素活性偏倚的GLP-1/GCGR双重激动剂)的临床研究显示了在仅6周内令人印象深刻的39％的肝性脂肪分数降低，和比单独的利拉鲁肽改善更大的NASH相关丙氨酸氨基转移酶(ALT)减少。然而，cotadutide施用的26周内的体重减轻程度不比利拉鲁肽显著更大(5.4％与5.5％)，这表明5:1的比例对于肝脂肪降低是可接受的，但对于体重降低是次优的[Alba 2021,Ambery 2018,Nahra 2021,Armstrong 2016]。平衡(1:1)的激动已显示与偏向一种激动剂而非另一种激动剂的偏倚比例相比，与更大的体重减轻和代谢作用相关[Day2012]。最近的关于平衡双重激动剂JNJ 64565111[Alba 2021]的研究在仅12周内实现了令人印象深刻的在体重上的降低(NCT03586830)。有证据表明，GLP-1RA/GCGRA双重激动剂也可能对血糖控制发挥积极作用[Nahra 2021]。偏向GLP-1的基于GLP-1R和GLP-1的双重受体激动剂通常与GI不良作用相关，不良作用包括恶心、呕吐和腹泻[Filippatos 2014]。这些剂还必须在长时间段内滴定以降低副作用[Ambery 2018,Newsome 2020,Frias 2018]，并且需要具有改善的耐受性和给药方案的剂。因为GLP-1R和GCGR激动两者都有助于体重减轻，所以预期用单分子GLP-1R/GCGR双重激动剂进行较少侵袭性给药，这提供更低GI毒性率的可能性。

本实施例描述了1期、随机、双盲、安慰剂对照、平行分组研究，以评价ALT-801的安全性及其在患有非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的糖尿病和非糖尿病超重和肥胖(体重指数[BMI]28.0-40.0kg/m²)受试者中对肝脂肪分数、人体测量参数、脂质代谢、炎性标志物和纤维化标志物的影响。该研究旨在通过MRI-PDFF评价患有NAFLD的糖尿病和非糖尿病超重和肥胖受试者在ALT-801治疗12周之后肝脂肪分数的改变。该研究还将评价在治疗12周之后的体重、脂质代谢、代谢标志物和炎性标志物的改变以及ALT-801的安全性和耐受性。受试者将针对基线时糖尿病的存在或不存在进行分层。该研究旨在通过MRI-PDFF评价患有NAFLD的糖尿病和非糖尿病超重和肥胖受试者在ALT-801治疗12周之后肝脂肪分数的改变。该研究还将评价在治疗12周之后的体重、脂质代谢、代谢标志物和炎性标志物的改变以及ALT-801的安全性和耐受性。受试者将针对基线时糖尿病的存在或不存在进行分层。

对于该研究，合适的受试者是那些患有没有显著纤维化的NAFLD的受试者，定义为受控衰减参数(CAP)≥280dB/m，并且肝硬度测量值(LSM)<8.5kPa，并且磁共振成像得出的质子密度脂肪分数(MRI-PDFF)≥10％。如果受试者患有2型糖尿病(T2DM)，在筛查之前至少3个月采取稳定方案，接受以下任意组合：(1)饮食和锻炼，(2)二甲双胍，伴随不存在或轻度胃肠症状或(恶心、呕吐或腹泻)，和/或(3)钠葡萄糖协同转运蛋白-2(SGLT-2)疗法。在提供知情同意书之后，受试者将经历多达35天的筛查时间段。受试者将被指导如何维持其正常的饮食、饮酒和体育活动，并且在参与研究期间的任何时间都不开始任何新的饮食、补充剂或锻炼计划。将在第一天就诊时提供饮食和锻炼方面的建议，并且在随后的就诊中将加强。符合纳入标准且不符合排除标准的受试者将以1:1:1:1随机分配至以下治疗组之一：1)ALT-801 1.2mg SC，每周一次，持续12周；2)ALT-801 1.8mg Sc，每周一次，持续12周；3)ALT-801在第1周0.6mg SC，在第2周1.2mg SC，每周一次1.8mg SC，持续2周(第3周和第4周)，以及每周一次2.4mg SC，持续第5周至第12周；或安慰剂(0.9％ NaCl)皮下(SC)，每周一次，持续12周。受试者将通过基线时糖尿病的存在或不存在进行分层。每个治疗组将存在18名受试者。受试者将在第1天接受第一剂量研究药物。随后的就诊将每周在诊所、家中或工作场所进行，到第85天或提前终止。受试者将在第110天返回进行安全性随访就诊。研究人员将遵循在对12周治疗时间段期间发生肝功能测试异常恶化的受试者进行干预的时间和方法的决策标准。空腹血糖(FPG)水平将在基线和每个剂量之前由血糖仪测量，并且由研究人员记录。在非就诊日期，受试者还将监测和记录每天早上的FPG，并且如果读数>240mg/dL或<70mg/dL，将联系研究中心。受试者还将接受低血糖症的症状和治疗方面的教育，并且如果他们经历血糖<70mg/mL或提示低血糖症的症状，将获得血糖仪读数。受试者将在日志中记录在家中经历的任何低血糖症症状，研究人员将在从第8天开始的每次就诊中对其进行核查。研究人员将建议受试者如何将其FPG保持在限值内，包括重复的饮食建议，并且将遵循对12周治疗时间段期间患有持续高血糖症的受试者进行干预的时间和方法的决策标准。如果重复观察到FPG显著减少(FPG<50mg/dL)或受试者需要干预或外部帮助来治疗低血糖症，则该受试者可能退出研究并被替代。将收集稀少血液样品用于ALT-801药代动力学(PK)，以与来自群体PK和PK-PD(药效学)建模中的其他研究的数据以及用于二甲双胍PK的数据组合，以评价ALT-801存在的情况下二甲双胍浓度随时间的改变。还将收集血液样品以评价免疫原性。

安全性终点包括不良事件(AE)、生命体征和心率-血压乘积(RPP计算为平均心率×平均收缩压)、安全性实验室，包括肝功能测试和血清葡萄糖、尿液分析、体检、注射部位反应和免疫原性(中和抗体)。药效学(PD)终点包括与基线相比肝脂肪分数(依据MRI-PDFF)的改变(相对和绝对改变％，肝脂肪分数实现30％、40％和50％相对降低的受试者比例，肝脂肪正常化的受试者比例)，人体测量参数(体重、腰围和通过MRI扫描的身体组成)与基线相比的改变，脂质代谢(总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A(Apo A)和载脂蛋白B(Apo B)、脂蛋白(a)、甘油三酯(TG))，代谢标志物(血红蛋白A1c(HbA1c)、脂联素、瘦素)，炎性标志物(TNF、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、纤维化标志物(N末端III型胶原前肽(Pro-C3)、增强肝纤维化(ELF)测试)，脂毒性标志物、生活质量终点和药代动力学(PK)终点。基于在先前NAFLD研究中观察到的治疗作用，该研究具有足够的能力检测用ALT-801的受试者与接受安慰剂SC注射的受试者相比，肝脂肪分数(依据MRI-PDFF)改变与基线相比的有意义差异，在0.05显著性水平(双侧)。所有接受至少一个剂量研究药物的随机受试者(安全性群体)将被纳入安全性分析。

安全性目的是评价ALT-801在患有NAFLD的受试者中的安全性和耐受性。主要安全性终点包括不良事件(AE)、生命体征、心率-血压乘积(平均心率x平均收缩压)、肝功能测试、高血糖和低血糖不良事件的发生率、体检、注射部位反应和免疫原性。次要安全性终点包括相对于基线血糖参数的改变，包括空腹血清葡萄糖、CGM参数(葡萄糖浓度-时间曲线下面积、时间范围以及高血糖症和低血糖症)和HbA1c。连续安全性数据将用描述性统计(算术平均值、标准偏差[SD]、中位数、最小值和最大值)按剂量水平和治疗(活性或安慰剂)进行总结。分类安全性数据将用频率计数和百分比按剂量水平、治疗组和天数(在适用的情况下)进行总结。AE将使用最新的监管活动医学词典(MedDRA)版本进行编码。将提供按受试者划分的AE数据列表，包括逐字术语、首选术语、系统器官类别(SOC)、治疗、严重程度以及与研究药物的关系。经历治疗发生的AE(TEAE)的受试者数量以及个体TEAE和注射部位反应的数量将按治疗组、SOC和首选术语进行总结。TEAE也将按严重程度和按与研究药物的关系进行总结。实验室评价，包括肝功能测试和空腹血清葡萄糖、生命体征(包括RPP计算)和ECG评价，将按治疗组、剂量水平和方案指定的收集时间点进行总结。还将按治疗组呈现在每个方案指定的时间点相对于基线的改变的总结。将列出每个受试者的体检改变。伴随药物将按受试者列出，并且使用世界卫生组织(WTO)药物词典的最新版本进行编码。病史将使用最新的MedDRA版本进行编码，并且将按受试者列出。

药效学(PD)的目的是评价ALT-801对NASH受试者中肝脂肪分数、人体测量参数(例如，体重、腰围、BMI)、脂质代谢(例如，胆固醇(总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白(Apo)A和载脂蛋白(Apo)B、脂蛋白(a)和甘油三酯(TG))、代谢标志物(例如，瘦素、血红蛋白A1c(HbA1c)、脂联素)、炎性标志物(例如，肿瘤坏死因子(TNF)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(Il-6)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1))、纤维化标志物(例如，N末端III型胶原前肽(Pro-C3)、增强肝纤维化(ELF)测试)和脂毒性标志物的影响。胰岛素敏感性和分泌、人体测量参数、脂质代谢、代谢标志物、脂毒性标志物和炎性标志物的改变将用描述性统计(样品量(N)、算术平均值、SD、中位数、最小值、最大值、几何平均值和几何变异系数(CV％))按治疗组列出并进行总结。基线BMI对PD参数的影响将通过协变量分析进行评价。

还监测生活质量(QoL)的影响(与基线相比，简表-36和体重对生活质量的影响-Lite临床试验版本(用于CT的IWQoL-Lite)的改变)。身体健康和精神健康的两个总结评分、以及SF-36的八个领域评分和用于CT的IWQoL-Lite综合评分相对于基线的改变将用描述性统计(N、算术平均值、SD、中位数、最小值、最大值、几何平均值和几何CV％)按治疗组列出并进行总结。如以上描述的，将应用适用于连续终点的推断统计。

药代动力学(PK)目的是评价ALT-801浓度以及相对于基线二甲双胍浓度的改变。个体ALT-801和二甲双胍浓度数据将用描述性统计(N、算术平均值、SD、CV％、中位数、最小值和最大值)按治疗组和时间点列出并进行总结。每个队列的个体和平均值±SD ALT-801浓度-时间谱也将以图形方式呈现。相对于基线二甲双胍浓度的改变用描述性统计(N、算术平均值、SD、CV％、中位数、最小值和最大值)按治疗组和时间点列出并进行总结。将开发群体PK模型，以能够预测个体受试者ALT-801血浆浓度时间曲线和相关PK参数。将尽可能探索协变量，包括性别、年龄、体重、BMI和伴随药物，并且尽可能探索暴露量响应关系的效力和安全性终点。

该试验的结果将显示，在患有NASH的受试者中，通过每周一次皮下(SC)注射施用多达12个剂量的ALT-801是安全且可耐受的，具有积极的PD、生活质量和PK作用以及对受试者的血糖控制。

实施例8：通过用ALT-801治疗降低肝脂肪

本实施例描述了评价ALT-801对人类受试者肝脂肪分数的影响的研究。符合纳入标准且不符合排除标准的受试者将被以1:1:1:1随机分配至以下治疗组之一：1)ALT-8011.2mg SC，每周一次，持续12周；2)ALT-801 1.8mg Sc，每周一次，持续12周；3)ALT-801在第1周0.6mg SC，在第2周1.2mg SC，每周一次1.8mg SC，持续2周(第3周和第4周)，以及每周一次2.4mg SC，持续第5周至第12周；或安慰剂(0.9％ NaCl)皮下(SC)，每周一次，持续12周。结果示于表19-23(还参见前面实施例的表11和表16-18)以及图6-图13。图6-图8呈现了与所有可测量受试者相关的数据，并且示出了肝脂肪降低且无显著安全性问题。图9-图10呈现了与脂肪变性受试者(具有脂肪性肝病的受试者)相关的数据。

表19

依据MRI-PDFF的肝脂肪含量的稳健改变*

*LOD(检测限)＝1.5％；对于绝对和相对改变(Δ)，值<LOD设置为0.75％

表20

在第6周依据MRI-PDFF的肝脂肪含量的改变(个体受试者)*

*LOD(检测限)＝1.5％；对于绝对和相对改变(Δ)，值<LOD设置为0.75％

表22

安全性概述*

*一名接受1.8mg剂量的受试者和一名接受安慰剂的受试者经历了3-5倍的ALT升高，随后消退。最常见的轻度剂量为1.8mg，伴随药物后消退，并且不需要治疗。没有由于不良事件(AE)而中止研究。

表23

酮体产生

如以上示出的，在用1.8mg和2.4mg的ALT-801治疗6周后，在具有基线时MRI-PDFF≥5％的受试者中，如通过MRI-PDFF确定的肝脂肪含量的稳健改变(平均相对改变大于90％)。在ALT-801 1.2mg、1.8mg和2.4mg，在第6周的平均体重减轻分别是1.8％、5.4％和4.7％，安慰剂组的平均体重增加0.9％。该试验的结果显示，ALT-801降低受试者的肝脂肪，包括那些具有脂肪变性(脂肪性肝病)的受试者。药代动力学谱确认了每周给药是适当的。所有组的血压和血脂水平也得到改善。葡萄糖稳态得以维持。酮体产生，一种脂肪燃烧增加的指标(预期的胰高血糖素效应)，也得到改善。

如本领域普通技术人员将理解的，本文还提供了试剂和使用所述试剂的方法的其他优点。虽然已经根据优选实施方案描述了某些实施方案，但是应当理解，本领域技术人员将会想到变化和修改。因此，所附权利要求旨在覆盖落入以下权利要求范围内的所有这样的等同变化。

序列表

<110> 斯皮特弗尔制药有限责任公司

<120> 使用GLP-1R和GCGR平衡激动剂降低血糖和/或体重的治疗方案和方法

<130> MED008.PCT

<150> 63/122,117

<151> 2021-12-07

<150> 63/211,157

<151> 2021-06-16

<150> 63/249,468

<151> 2021-09-28

<160> 11

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> MOD_RES

<222> (17)..(17)

<223> Z17CO2H

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> NH2

<400> 1

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Gln Thr Xaa

20 25 30

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> MOD_RES

<222> (17)..(17)

<223> Me15CO2H

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> NH2

<400> 2

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Gln Thr Xaa

20 25 30

<210> 3

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (24)..(24)

<223> Z15CO2H

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> NH2

<400> 3

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Lys Trp Leu Leu Gln Thr Xaa

20 25 30

<210> 4

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (24)..(24)

<223> Z17CO2H

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> NH2

<400> 4

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Lys Trp Leu Leu Gln Thr Xaa

20 25 30

<210> 5

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> MOD_RES

<222> (17)..(17)

<223> Z17CO2H

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> NH2

<400> 5

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Gln Thr Xaa

20 25 30

<210> 6

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (17)..(17)

<223> Lys(N-ω(1-(17-羧基-十七烷基氧基)β-D-葡糖醛酸基))或

Lys(Z17CO2H)

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<400> 6

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Gln Thr

20 25

<210> 7

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (17)..(17)

<223> Me17CO2H

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<400> 7

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Gln Thr

20 25

<210> 8

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (24)..(24)

<223> Lys(Z15CO2H)

<400> 8

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Leu Gln Thr

20 25

<210> 9

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (24)..(24)

<223> Lys(Z17CO2H)

<400> 9

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Leu Gln Thr

20 25

<210> 10

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial squence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (12)..(12)

<223> Arg

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(20)

<223> 环状的

<220>

<221> SITE

<222> (16)..(16)

<223> Glu至Lys的侧链内酰胺键

<220>

<221> MOD_RES

<222> (17)..(17)

<223> Lys(N-ω(1-(17-羧基-十七烷基氧基)β-D-葡糖醛酸基))或

Lys(Z17CO2H)

<220>

<221> SITE

<222> (20)..(20)

<223> Lys至Glu的侧链内酰胺键

<400> 10

His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Glu

1 5 10 15

Xaa Ala Ala Lys Glu Phe Ile Gln Trp Leu Leu Gln Thr

20 25

<210> 11

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> Lys(yGlu-2xOEG)

<400> 11

His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly

20 25 30

Claims (39)

1.一种用于降低人类的血糖、降低人类的体重和/或降低人类的肝脂肪的方法，所述方法包括向所述人类每周一次施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1的药物剂量制剂，其中与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，一个或更多个不良事件的发生被减少，所述不良事件选自向所述人类施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法：

a)与对GLP-1R和GCGR具有不平衡亲和力的激动剂相比，降低一个或更多个不良事件的发生率，所述不良事件选自向人类施用后的恶心、呕吐、腹泻、腹痛和便秘；

b)与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽的方法相比，导致：在施用后大约48小时或96小时低大约50％的血糖，在施用后大约72小时大约低100％的血糖，和/或在施用后大约120小时较低的血糖；

c)诱导全身体重减轻和/或诱导肝脂肪减轻；

d)与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽的方法相比，导致：

较低的C_max或任选地低约50％的C_max；

大约相等或更大的T_max或任选地长约100％的T_max，

相似的AUC(0-inf)或任选地大约85％-93％的AUC_(0-inf)；

大约相等或更小的T_1/2(hr)或任选地大约50％-75％的T_1/2(hr)；

延长的MRT(hr)或任选地至少高大约25％的MRT(hr)；

延长的PK/PD谱，表现出相等或更大的葡萄糖调节作用；

更大的全身体重减轻或任选地大约两倍的全身体重减轻；

较低的体脂质量，任选地约低100％的体脂质量；和/或，

在所述方法治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)时，增加的全身体重降低、肝重量减轻、改善的NAS评分、改善的肝脂肪变性、改善的气球样变性、改善的col1A1染色、改善的ALT、改善的肝TG/TC和改善的血浆TG/TC；

e)与以大约等摩尔剂量施用的塞马鲁肽相比：导致到施用所述剂量制剂后大约14天体重的更大减轻，任选地大了约15％的减轻；和/或，到施用所述剂量制剂后大约20-28天导致体重的更大减轻，任选地大了约25％的减轻；和/或，

f)肥胖人类中足以使所述人类的体重恢复至瘦的正常人类的正常体重范围的体重减轻。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法是用于肥胖的治疗。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法是用于血糖控制的治疗。

5.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述方法不包括滴定所述药物剂量制剂的治疗剂量的治疗起始阶段。

6.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述方法是用于血糖控制、肥胖、NAFLD、NASH和/或脂肪变性的一线治疗。

7.根据任一项前述权利要求所述的方法，所述方法是饮食和/或锻炼的辅助治疗。

8.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述人类患有2型糖尿病，任选地，其中所述人类还表现出已确立的心血管疾病。

9.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量约每周一次施用约2周至约8周或更长时间。

10.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向人类施用所述药物剂量作为每周剂量持续约4周至约8周，任选地约6周，导致在向所述人类施用后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周或约7周更大的全身体重减轻。

11.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量在约第1天、第8天、第15天、第22天、第29天和第36天施用。

12.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向所述人类施用单剂量导致在施用后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天较低的血糖。

13.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向人类施用每周剂量持续约4周至约8周，任选地约6周，导致在施用后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周或约7周更大的全身体重减轻。

14.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中，与施用大约等摩尔剂量的塞马鲁肽相比，向所述人类施用单剂量表现出在施用后约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天较低的C_max。

15.根据任一项前述权利要求所述的方法，包括以每周约0.5mg至约10mg施用所述药物剂量；任选地以约以下中的任一种施用所述药物剂量：每周约1mg至约7mg，每周约1mg至约5mg；每周约1mg至约2mg；每周约1.2mg；或每周约1.8mg。

16.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量约每周一次或每两周一次施用，任选地持续至少一个月；任选地，其中每个剂量包含约相同的约SEQ ID NO:1。

17.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中达到治疗剂量的时间是约四周或更少的时间。

18.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量以第一剂量每周一次施用，持续一周或更多周，并且随后以第二更高剂量每周一次施用，持续一周或更多周。

19.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中施用所述药物剂量制剂表现出约400ng/ml至约1300ng/ml的C_max；约10小时至约36小时的T_max；和/或约15,000h*ng/mL至45,000h*ng/mL的AUC_0-48。

20.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述人类中的体重减轻为至少5％、至少10％；或约1％至约20％；或约5％至约10％(w/w)。

21.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中，向人类施用所述药物剂量制剂导致肥胖人类中足以使所述人类恢复瘦的正常人类的正常体重范围的体重减轻。

22.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量制剂被皮下施用。

23.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量是包含聚山梨醇酯20、精氨酸或甘露醇中的一种或更多种的水性制剂。

24.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述药物剂量制剂包含在去离子水(pH7.7±0.1)中的约0.025％-0.075％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.2％-0.5％(w/w)精氨酸、约3％-6％(w/w)甘露醇；任选地在去离子水(pH7.7±0.1)中的约0.050％(w/w)聚山梨醇酯20、约0.348％(w/w)精氨酸、约4.260％(w/w)甘露醇。

25.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中包含约1.8mg SEQ ID NO:1的药物剂量制剂被每周一次向所述人类施用，持续至少六周，并且导致至少约3％-5％的全身体重减轻，任选地大于5％的全身体重减轻。

26.根据权利要求25所述的方法，其中与安慰剂相比，全身体重减轻的净改变是至少约6％，任选地约6.3％。

27.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中包含约1.2mg SEQ ID NO:1的药物剂量制剂被每周一次向所述人类施用，持续至少六周，并且导致至少约2％的全身体重减轻，任选地约1.8％的全身体重减轻。

28.根据权利要求27所述的方法，其中与安慰剂相比，全身体重减轻的净改变是至少约3％，任选地约2.7％。

29.根据权利要求25-28中任一项所述的方法，其中所述药物剂量制剂被皮下施用。

30.一种用于通过在具有至少25的体重指数(BMI kg/m²)的人类中诱导体重减轻对所述人类进行长期体重管理的治疗的方法，所述方法包括向所述人类施用每周一次的治疗有效量的包含SEQ ID NO:1的药物剂量制剂，其中在第12周，所述人类的体重从基线降低至少5％。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述人类的体重在第12周从基线降低至少6％；在第12周从基线降低至少7％；在第12周从基线降低至少8％；在第12周从基线降低至少9％或在第12周从基线降低至少10％。

32.根据权利要求30所述的方法，其中每周一次的治疗有效量的包含SEQ ID NO:1的药物剂量制剂是约1.8mg的SEQ ID NO:1。

33.根据权利要求30所述的方法，其中所述治疗是增加的身体活动和/或降低的卡路里饮食的辅助治疗。

34.根据权利要求30所述的方法，其中所述治疗不与增加的身体活动和/或降低的卡路里饮食组合。

35.根据权利要求30所述的方法，其中所述人类的BMI是至少30kg/m²。

36.根据权利要求所述30的方法，其中所述人类在第0周是非糖尿病的。

37.根据权利要求30所述的方法，其中所述药物剂量制剂向所述人类皮下施用。

38.根据权利要求32所述的方法，其中所述药物剂量制剂每周一次向所述人类施用，持续至少六周，并且导致至少约3％的全身体重减轻。

39.根据任一项前述权利要求所述的方法，所述方法降低肝脂肪。