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CN117098780A - 单域pd-l1抗体 - Google Patents

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CN117098780A
CN117098780A CN202280021890.7A CN202280021890A CN117098780A CN 117098780 A CN117098780 A CN 117098780A CN 202280021890 A CN202280021890 A CN 202280021890A CN 117098780 A CN117098780 A CN 117098780A
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蒋雯卿
刘岩
顾海娟
崔菲菲
王正毅
郭炳诗
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Tianjing Biotechnology Shanghai Co ltd
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Tianjing Biotechnology Shanghai Co ltd
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Abstract

本公开提供单域抗PD‑L1抗体和多肽，例如包含这些单域抗体的双特异性抗体和嵌合抗原受体。这些抗体，包括它们的人源化对应物，表现出优异的活性，适用于各种双特异性抗体的形式。本公开还提供使用所述抗体或多肽用于治疗和诊断疾病例如癌症、感染性疾病的方法。

Description

单域PD-L1抗体
相关申请的交叉引用
本发明要求2021年4月26日提交的PCT/CN2021/090058的优先权，其内容整体援引加入本文。
本发明要求2021年4月26日提交的PCT/CN2021/090046的优先权，其内容整体援引加入本文。
本发明要求2021年4月26日提交的PCT/CN2021/090049的优先权，其内容整体援引加入本发明。
背景技术
单域抗体(sdAb)，也称纳米抗体，是由单一单体可变抗体结构域组成的抗体片段。类似于完整的抗体，其能够选择性地与特定抗原结合。由于分子量仅为12-15kDa，单域抗体比常规抗体(150-160kDa)小得多。由于其小尺寸和单链性质，单域抗体特别适合作为片段包含在其他蛋白中(例如双特异性抗体)。
针对程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体，也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，正用于癌症治疗及其他临床应用。PD-L1是一种40kDa的Ⅰ型跨膜蛋白，据信在特定事件(如妊娠、组织移植、自身免疫性疾病)以及其他疾病状态(如肝炎)中发挥抑制免疫系统的重要作用。PD-L1与PD-1或B7.1的结合传递抑制性信号，降低淋巴结中CD8+T细胞的增殖，并且PD-1还能够通过进一步由下调Bcl-2基因介导的细胞凋亡来控制淋巴结中外源性抗原特异性T细胞的积累。
除了治疗癌症外，PD-L1抑制还在治疗感染性疾病方面显示出希望。在胞内感染的小鼠模型中，单核细胞增生李斯特氏菌(L.monocytogenes)诱导T细胞、NK细胞和巨噬细胞中PD-L1蛋白表达。PD-L1阻断(例如，使用阻断抗体)会导致受感染小鼠的死亡率增加。阻断减少巨噬细胞产生的TNFα和一氧化氮，减少NK细胞产生的颗粒酶B，以及减少单核细胞增生李斯特氏菌抗原特异性CD8 T细胞(但非CD4 T细胞)的增殖。这一证据表明，在胞内感染中，PD-L1起正向共刺激分子的作用。
发明内容
本公开提供一种靶向人PD-L1蛋白的新型单域抗体。尽管这些单域抗体体积较小，但其表现出卓越的结合亲和力和生物功能。当包含在各种不同形式的双特异性抗体中时，所得到的一些双特异性抗体表现出优异的特性。
在一方面，本公开提供一种单域抗体或包含所述单域抗体的多肽，其中所述单域抗体具有对人PD-L1蛋白的结合特异性，并且包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。在一些实施方案中，单域抗体具有对人PD-L1蛋白的结合特异性，并且包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)，且CDR1、CDR2和CDR3根据Kabat编号系统。
在抗体或多肽的一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3(1)分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列；或(2)分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含选自37F、47F、49A、78V和94A的回复突变的一个或多个。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37F、47F、49A、78V和94A的回复突变。在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:114-122中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含选自37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的一个或多个回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的回复突变。在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ IDNO:123-130中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:127或130的氨基酸序列。
在一些实施方案中，多肽是双特异性抗体，其具有对不同于PD-L1的抗原的结合特异性。
在另一方面，本公开提供一种双特异性抗体，其包含本申请的抗体和第二抗体或抗原结合片段，其中所述第二抗体或抗原结合片段具有对目标抗原(非PD-L1)结合特异性。
在另一方面，本公开提供一种双特异性抗体，其包含具有对人PD-L1蛋白结合特异性的抗PD-L1部分，以及具有对人TIGIT蛋白结合特异性的抗TIGIT部分，其中，所述抗TIGIT部分包含重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:171的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，以及轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:172的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗TIGIT部分包含重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:171的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，以及轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:172的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，并且VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3根据Kabat编号系统。在一些实施方案中，抗TIGIT部分包含重链可变区(VH)，其包含VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3，以及轻链可变区(VL)，其包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，其中VH CDR1、VH CDR1、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO:173-178的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TIGIT部分包括包含SEQ ID NO:171的VH和包含SEQ IDNO:172的VL。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1抗原结合部分包括全长抗体、Fab、F(ab')2、scFv、scFv-Fc或单域抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗原结合部分包含单域抗体。在一些实施方案中，单域抗体包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，单域抗体包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的CDR1、CDR2和CDR3，并且CDR1、CDR2和CDR3根据Kabat编号系统。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包括含有互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)的单域抗体，其中CDR1、CDR2和CDR3(1)分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列；或(2)分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1部分包括：包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR2，以及包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR3。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包括：包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2，以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR3。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1部分是人源化的。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包含选自SEQ ID NO:114-122和123-130的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包含SEQ ID NO:119或130的氨基酸序列。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗TIGIT部分的重链C-末端融合。在一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗TIGIT部分的重链N-末端融合。在一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗TIGIT部分的轻链C-末端融合。在一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗TIGIT部分的轻链N-末端融合。
在双特异性抗体的一些实施方案中，双特异性抗体是同源二聚体。在一些实施方案中，双特异性抗体包含两个抗PD-L1部分。在一些实施方案中，两个抗PD-L1部分中的每个与抗TIGIT部分的重链C-末端融合。在一些实施方案中，双特异性抗体包含四个抗PD-L1部分。
在双特异性抗体的一些实施方案中，双特异性抗体包含：(1)重组分，其包含选自SEQ ID NO:179、181、182和184中任一个的氨基酸序列，以及(2)轻组分，其包含选自SEQ IDNO:180和183中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，双特异性抗体包括：包含SEQ IDNO:179的氨基酸序列的重组分，以及包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的轻组分。在一些实施方案中，双特异性抗体包括：包含SEQ ID NO:184的氨基酸序列的重组分，以及包含SEQID NO:180的氨基酸序列的轻组分。
在另一方面，本公开提供一种双特异性抗体，其包含具有对人PD-L1蛋白结合特异性的抗PD-L1部分，以及具有对人CD47蛋白结合特异性的抗CD47部分，其中所述抗CD47部分包括：包含SEQ ID NO:131或133的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的重链可变区(VH)，以及包含SEQ ID NO:132或134的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的轻链可变区(VL)。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗CD47部分包括：包含SEQ ID NO:131或133的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的重链可变区(VH)，以及包含SEQ ID NO:132或134的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3的轻链可变区(VL)，并且VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VLCDR2和VL CDR31根据Kabat编号系统。
在一些实施方案中，抗CD47部分包括：包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的重链可变区(VH)，以及包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的轻链可变区(VL)，其中VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO:135-140的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD47部分包括：包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列的VH，以及包含SEQID NO:132的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，抗CD47部分包括：包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的重链可变区(VH)，以及包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3的轻链可变区(VL)，其中VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO:141-146的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD47部分包括：包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列的VH，以及包含SEQID NO:134的氨基酸序列的VL。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1抗原结合部分包括全长抗体、Fab、F(ab')2、scFv、scFv-Fc或单域抗体。在另一些实施方案中，抗PD-L1抗原结合部分包含单域抗体。在一些实施方案中，单域抗体包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，单域抗体包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的CDR1、CDR2和CDR3，并且CDR1、CDR2和CDR3根据Kabat编号系统。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包括：包含互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)的单域抗体，其中CDR1、CDR2和CDR3(1)分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列；或(2)分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1部分包括：包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR2，以及包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR3。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包括：包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的CDR1，包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2，以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR3。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1部分是人源化的。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包含选自SEQ ID NO:114-122和123-130的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗PD-L1部分包含119或130的氨基酸序列。
在双特异性抗体的一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗CD47部分的重链的C-末端融合。在一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗CD47部分的重链的N-末端融合。在一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗CD47部分的轻链的C-末端融合。在一些实施方案中，抗PD-L1部分与抗CD47部分的轻链的N-末端融合。
在双特异性抗体的一些实施方案中，双特异性抗体是同源二聚体。在一些实施方案中，双特异性抗体包含两个抗PD-L1部分。在一些实施方案中，两个抗PD-L1部分的每个与抗CD47部分的重链的C-末端融合。在一些实施方案中，双特异性抗体包含四个抗PD-L1部分。
在双特异性抗体的一些实施方案中，双特异性抗体包含：(1)重组分，其包含选自SEQ ID NO:147、149、151、153、155、157、159、161、163、164、166、167、169和170中任一个的氨基酸序列，以及(2)轻组分，其包含选自SEQ ID NO:148、150、152、154、156、158、160、162、165和168中任一个的氨基酸序列。
在另一方面，本公开提供一种编码本申请的抗体或多肽或本申请的双特异性抗体的多核苷酸。
在另一方面，本公开提供一种包含本申请的多核苷酸的载体。
在另一方面，本公开提供一种包含本申请的多核苷酸或载体的细胞。
在另一方面，本公开提供一种组合物，其包含：(1)本申请的抗体或多肽、双特异性抗体或多核苷酸，以及(2)药学上可接受的载剂。
在另一方面，本公开提供一种治疗有需要的患者的癌症的方法，其包括向所述患者给药有效量的本申请的抗体或多肽、双特异性抗体或多核苷酸。在另一方面，本公开提供本申请的抗体或多肽、双特异性抗体或多核苷酸在制备用于治疗癌症的药物的中的用途。在一些实施方案中，癌症是实体瘤。在一些实施方案中，癌症选自膀胱癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、食道癌、卵巢癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌和甲状腺癌。
附图说明
图1A-1C:图1A示出本申请的示例性抗PD-L1抗体有效地阻断PD-1和PD-L1之间的相互作用，图1B示出本申请的示例性抗PD-L1抗体与人PD-L1的特异性结合，图1C示出本申请的示例性抗PD-L1抗体与过表达人PD-L1的Raji细胞的特异性结合。
图2A-2C示出本申请的示例性抗PD-L1抗体阻断PD-1/PD-L1相互作用，可以以剂量依赖的方式增强NFAT介导的荧光素酶活性。
图3A-3F示出本申请的抗CD47/PD-L1双特异性抗体的示例性形式。
图4A-4B示出本申请的示例性抗CD47/PD-L1双特异性抗体以剂量依赖的方式阻断CD47/SIRPα相互作用。
图5A-5B示出本申请的示例性抗CD47/PD-L1双特异性抗体有效地阻断PD-1/PD-L1介导的NF-AT-荧光素酶活性。
图6A-6C示出本申请的示例性抗CD47/PD-L1双特异性抗体的ADCP效力。
图7A和7B示出本申请的示例性抗体的RKO结合能力。
图8A-8C:图8A和8B示出本申请的示例性抗CD47/PD-L1双特异性抗体表现最低或无RBC结合，图8C示出本申请的示例性抗CD47/PD-L1双特异性抗体的体内抗肿瘤效力。
图9示出本申请的抗TIGIT/PD-L1双特异性抗体的示例性形式。
图10A-10C示出本申请的抗TIGIT/PD-L1 bsAb与人PD-L1蛋白的结合特性。
图11示出本申请的示例性抗TIGIT/PD-L1 bsAb阻断PD-1/PD-L1相互作用，可以以剂量依赖的方式增强NFAT介导的荧光素酶活性。
图12A-12B示出本申请的示例性抗TIGIT/PD-L1 bsAb与人TIGIT蛋白的特异性结合。
图13示出本申请的示例性抗TIGIT/PD-L1 bsAb有效阻断TIGIT/CD155相互作用，可以以剂量依赖的方式增强NFAT介导的荧光素酶活性。
图14示出本申请的示例性抗TIGIT/PD-L1 bsAb在Jurkat细胞中基于双功能测定的拮抗活性。
图15示出本申请的示例性抗TIGIT/PD-L1 bsAb以浓度依赖的方式显著增强人原代CD8+T细胞的IFN-γ产生。
具体实施方式
定义
值得注意的是，术语“一个(a)”或“一种(an)”实体指的是该实体的一个或多个；例如，应理解“一种抗体”代表一种或多种抗体。因此，术语“一个(种)”、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可以互换使用。
比对时，多核苷酸或多核苷酸区域(或多肽或多肽区域)与另一序列具有一定百分比的“序列相同性”(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)意为在比较两个序列时，有该百分比的碱基(或氨基酸)是相同的。可以使用本领域已知的软件程序来进行比对和计算百分比同源性或序列相同性，例如描述于Ausubel et al.eds.(2007)Current Protocols in Molecular Biology的方法。优选地，使用默认参数进行比对。一种比对程序是BLAST，使用默认参数。特别地，程序是BLASTN和BLASTP，使用以下默认参数：Genetic code＝standard、filter＝none、strand＝both、cutoff＝60、expect＝10、Matrix＝BLOSUM62、Descriptions＝50sequences、sort by＝HIGH SCORE、Databases＝non-redundant、GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS translations+SwissProtein+SPupdate+PIR。生物学等效的多核苷酸是指具有上述指定百分比同源性并编码具有相同或类似生物活性的多肽的多核苷酸。
术语“等效核酸或多核苷酸”指的是具有与核酸的核苷酸序列或其互补物具有一定程度同源性或序列相同性的核酸。双链核酸的同源物意图包括具有与其或其互补物有一定程度同源性的核苷酸序列的核酸。在一方面，核酸同源物能够与核酸或其互补物杂交。同样，“等效多肽”指的是具有与参考多肽的氨基酸序列一定程度同源性或序列相同性的多肽。在一些方面，序列相同性至少为约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。在一些方面，与参考多肽或多核苷酸相比，等效多肽或多核苷酸具有一、二、三、四或五个添加、缺失、取代及其组合。在一些方面，等效序列保留参考序列的活性(例如，表位结合)或结构(例如，盐桥)。
如本文所用，“抗体”或“抗原结合多肽”指的是特异性地识别并结合抗原的多肽或多肽复合物。抗体可以是完整抗体及其任何抗原结合片段或单链。因此，术语“抗体”包括含有分子的任何蛋白或多肽，该分子包含具有结合抗原的生物活性的免疫球蛋白分子的至少一部分。其实例包括但不限于，重链或轻链或其配体结合部分的互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架(FR)区，或其任何部分，或结合蛋白的至少一部分。
如本文所用，术语“抗体片段”或“抗原结合片段”是抗体的一部分，例如F(ab')2、F(ab)2、Fab'、Fab、Fv、scFv等。无论结构如何，抗体片段都与完整抗体识别的相同抗原结合。术语“抗体片段”包括适体、镜像异构体(spiegelmer)和双抗体。术语“抗体片段”还包括任何合成的或基因工程蛋白，其通过与特定抗原结合形成复合物从而像抗体一样发挥作用。
“单链可变片段”或“scFv”是指免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白。在一些方面，这些区域通过10到约25个氨基酸的短接头肽相连。接头肽可以富含甘氨酸以增加灵活性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以提高溶解性，可以连接VH的N-末端与VL的C-末端，或反之亦然。尽管去除恒定区并引入接头肽，但该蛋白保留原始免疫球蛋白的特异性。ScFv分子在本领域是已知并描述于例如，美国专利5,892,019。
术语“抗体”涵盖可生化区分的各种宽泛类别的多肽。本领域技术人员会理解，重链分类为γ、μ、α、δ或ε，其中还有一些亚类(例如，γ1-γ4)。这条链的性质决定抗体的“类别”，分别是IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5等已充分表征，并已知具有功能专门化。鉴于本发明，对本领域技术人员而言这些类别和亚型的每种修饰形式是容易辨别的，并因此在本公开的范围内。所有免疫球蛋白类别明确在本公开的范围内，以下讨论将一般针对免疫球蛋白分子的IgG类别。关于IgG，标准免疫球蛋白分子包含分子量约为23,000道尔顿的两个相同的轻链多肽和分子量为53,000-70,000的两个相同的重链多肽。这四条链通常通过二硫键连接在“Y”构型中，其中轻链架着重链，从“Y”的口开始并继续穿过可变区。
本公开的抗体、抗原结合多肽、变体或其衍生物包括但不限于多克隆、单克隆、多特异性、人、人源化、灵长类化、或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段(例如Fab、Fab'和F(ab')2)、Fd、Fv、单链Fv(scFv)、单链抗体、二硫键连接Fv(sdFv)、包含VK或VH结构域的片段、由Fab表达文库产生的片段，以及抗独特型抗体(抗Id)(包括，例如本文公开的针对LIGHT抗体的抗Id抗体)。本公开的免疫球蛋白或抗体分子可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或免疫球蛋白分子的亚类。
就“特异性结合”或“具有对…的特异性”而言，通常指的是抗体通过其抗原结合结构域与表位结合，结合需要抗原结合域和表位之间的一些互补性。根据该定义，当抗体通过其抗原结合结构域与表位结合时候，认为是其与表位“特异性结合”，而不是与随机的、无关的表位结合。本文使用术语“特异性”来限定某种抗体与某个表位结合的相对亲和力。例如，可认为抗体“A”对给定的表位具有比抗体“B”更高的特异性，或者可认为抗体“A”与表位“C”的结合具有比与相关表位“D”更高的特异性。
如本文所用，术语“治疗”指的是治疗性治疗以及预防或预防性措施，其目标是防止或减缓(减轻)不期望的生理变化或病症，例如癌症的进展。有益或期望的临床结果包括但不限于无论是可检测还是不可检测的症状的减轻、疾病范围的缩小、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善或减轻，以及缓解(无论是部分还是全部)。“治疗”还可以意味着相比于未接受治疗，预期生存期延长。需要治疗的对象包括已经患有病况或病症的对象，以及易于患有病况或病症的对象，或者要预防病况或病症的对象。
就“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”而言，通常指的是需要诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、家养动物、农场动物以及动物园、运动或宠物动物，如狗、猫、豚鼠、兔子、大鼠、小鼠、马、牛、奶牛等。
如本文所用，诸如“需要治疗的患者”或“需要治疗的受试者”的短语包括受试者，例如哺乳动物受试者，其受益于给药本公开使用的抗体或组合物，例如用于检测、诊断程序和/或治疗。
抗PD-L1单域抗体
本公开提供一种对人PD-L1蛋白具有高亲和力的单链抗PD-L1抗体。所述抗体表现出强结合和抑制活性，可用于治疗和诊断用途。同样重要的是，当并入各种不同形式的双特异性抗体中作为靶向单位之一时，所得的某些双特异性抗体表现出优异的特性，从而确立这些单域抗PD-L1抗体的附加用途。
因此，在本公开的一个实施方案中，提供包含此类单域抗体的单域抗体和多肽。在一些实施方案中，多肽是双特异性抗体、三特异性抗体或多特异性抗体。
在一些实施方案中，其中单域抗体具有对人PD-L1蛋白结合的特异性，并包含互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含表1提供的抗体任何一个的CDR1、CDR2和CDR3(例如，SEQ ID NO:1-36)。
在一个实施方案中，在抗体中，CDR1包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。SEQ ID NO:55、56和57是抗体ALP-Tan-3p-93及其人源化对应物93_VH-1到93_VH-9的CDR。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57，但具有一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失和/或取代。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，人源化抗体包含一个或多个经测试以改善移植抗体特性的回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，回复突变选自37F、47F、49A、78V和94A。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37F、47F、49A、78V和94A全部回复突变。
示例性人源化抗体包括93_VH-1、93_VH-2、93_VH-3、93_VH-4、93_VH-5、93_VH-6、93_VH-7、93_VH-8和93_VH-9。示例性序列为SEQ ID NO:114-122。在一些实施方案中，人源化抗体具有SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在抗体中，CDR1包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。SEQ ID NO:113、49和50是人源化抗体112-VHH1-PTM、112-VHH2-PTM、112-VHH3-PTM、112-VHH4-PTM、112-VHH5-PTM、112-VHH6-PTM或112-VHH7-PTM的CDR。与原始抗体ALP-Tan-3p-112相比，这些人源化抗体在CDR1(SEQ ID NO:48)中包含N34Q取代(Kabat编号)，以防止翻译后修饰。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:113、49和50，但具有一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失和/或取代。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含选自37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的一个或多个回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V全部回复突变。在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:123-130的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:130的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在抗体中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含表1提供的抗体的任一个的CDR1、CDR2和CDR3(例如，SEQ ID NO:1-36)。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、38和39的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和42的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQID NO:43、44和45的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ IDNO:40、46和47的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、46和47的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:48、49和50的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ IDNO:40、51和52的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、53和54的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和47的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、46和47的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和58的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、53和39的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、59和60的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:61、62和63的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、65和66的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:67、68和69的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:70、71和72的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、73和74的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、75和76的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、77和66的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、78和79的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:80、81和82的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、83和47的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、85和86的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、87和66的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、88和89的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、90和91的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:92、93和94的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:95、96和97的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、98和99的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:100、101和102的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:103、104和105的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、85和106的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:107、108和109的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:110、111和112的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:1-36的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开还提供与本文公开的任何抗体竞争结合人PD-L1的抗PD-L1抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开还提供与本文公开的任何抗体结合相同表位的抗PD-L1抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开还提供抗PD-L1抗体和抗原结合片段，其包含本文公开的抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3。
本公开还提供包含抗体或多肽以及药学上可接受的载剂的组合物。
本领域普通技术人员还会理解，可以修饰本文公开的抗体，从而其氨基酸序列与其所衍生自的天然存在的结合多肽不同。例如，衍生自指定蛋白的多肽或氨基酸序列可能相似，例如，具有与起始序列一定百分比的相同性，例如，可以与起始序列60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。在一些实施方案中，经修饰的抗体或片段保留指定的CDR序列。
本公开还提供双特异性和多特异性抗体，其中包含如本文公开的单域抗PD-L1抗体的一个、两个、三个或四个单元，以及一种或多种另外的特异性(非PD-L1)。
本公开提供具有至少对人PD-L1和CD47蛋白的结合特异性的双特异性和多特异性抗体。PD-L1是对适应性免疫系统重要的“别找到我(don’t find me)”信号，而CD47向先天性免疫系统传递抗吞噬的“别吃我(don’t eat me)”信号。它们通常在人肿瘤中过表达。因此，双重靶向先天性和适应性免疫检查点可能最大化抗肿瘤治疗效果并引发更持久的应答。
在一些实施方案中，双特异性和多特异性抗体包含抗PD-L1部分，其包含至少一个单域抗PD-L1抗体。如所证实的，单链抗PD-L1抗体对人PD-L1蛋白具有高亲和力。这些抗体表现出强结合和抑制活性，并可用于治疗和诊断用途。
在一些实施方案中，单域抗体具有对人PD-L1蛋白的结合特异性，并包含互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含表1提供的抗体的任一个的CDR1、CDR2和CDR3(例如，SEQ ID NO:1-36)。
在一个实施方案中，在抗体中，CDR1包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。SEQ ID NO:55、56和57是抗体ALP-Tan-3p-93及其人源化对应物93_VH-1到93_VH-9的CDR。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57，但具有一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失和/或取代。在一些实施方案中，取代为保守取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，人源化抗体包含一个或多个经测试以改善移植(grafted)抗体特性的回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，回复突变选自37F、47F、49A、78V和94A。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37F、47F、49A、78V和94A的全部回复突变。
示例性人源化抗体包括93_VH-1、93_VH-2、93_VH-3、93_VH-4、93_VH-5、93_VH-6、93_VH-7、93_VH-8和93_VH-9。示例性序列为SEQ ID NO:114-122。在一些实施方案中，人源化抗体具有SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在抗体中，CDR1包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。SEQ ID NO:113、49和50是人源化抗体112-VHH1-PTM、112-VHH2-PTM、112-VHH3-PTM、112-VHH4-PTM、112-VHH5-PTM、112-VHH6-PTM或112-VHH7-PTM的CDR。与原始抗体ALP-Tan-3p-112相比，这些人源化抗体在CDR1(SEQ ID NO:48)中包含N34Q取代(Kabat编号)，以防止翻译后修饰。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:113、49和50，但具有一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失和/或取代。在一些实施方案中，取代为保守取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含选自37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的一个或多个回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的全部回复突变。在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:123-130的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:130的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在抗体中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含表1提供的抗体的任一个的CDR1、CDR2和CDR3(例如，SEQ ID NO:1-36)。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、38和39的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和42的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQID NO:43、44和45的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ IDNO:40、46和47的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、46和47的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:48、49和50的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、51和52的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、53和54的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和47的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、46和47的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和58的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、53和39的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、59和60的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含EQ ID NO:61、62和63的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、65和66的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:67、68和69的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:70、71和72的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、73和74的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、75和76的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、77和66的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、78和79的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:80、81和82的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、83和47的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、85和86的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、87和66的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、88和89的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、90和91的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:92、93和94的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:95、96和97的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、98和99的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:100、101和102的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:103、104和105的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、85和106的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:107、108和109的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:110、111和112的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:1-36的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开还提供与本文公开的任何抗体竞争结合人PD-L1的抗PD-L1抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开还提供与本文公开的任何抗体结合相同表位的抗PD-L1抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开还提供抗PD-L1抗体和抗原结合片段，其包含本文公开的抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体的抗CD47部分具有一对(或，在一些实施方案中两对)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。VH可以包含VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3。VL可以包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别含SEQ ID NO:141-146的氨基酸序列。这些CDR来自于亲本抗CD47抗体34C5。在一些实施方案中，VH包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列，而VL包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列(表5)。
在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO:135-140的氨基酸序列。这些CDR来自于亲本抗CD47抗体13H3。在一些实施方案中，VH包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列，而VL包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列(表5)。
双特异性抗体可以采用任何形式，包括图3所示的形式。在一个实施方案中，双特异性抗体是对称的。图3A提供一个示例，其中两个单域抗PD-L1抗体任选地通过接头融合到抗CD47抗体的每个重链的N-末端。在图3B的示例中，单域抗PD-L1抗体任选地通过接头融合到抗CD47抗体的每个轻链的N-末端。
在图3C的示例中，单域抗PD-L1抗体任选地通过接头融合到抗CD47抗体的每个轻链(恒定区)的C-末端。在图3D的示例中，单域抗PD-L1抗体任选地通过接头融合到抗CD47抗体重链的Fc部分的C-末端。
双特异性抗体也可以是非对称的，例如图3E-3F所示的。在图3E中，两个单域抗PD-L1抗体串联连接到Fc链之一的N-末端。在另一个Fc链上，抗CD47 Fab单元与N-末端融合。稍有不同的是，在图3F中，抗CD47部分包含单链片段(scFv)。
双特异性抗体可以包含来自任何IgG类型的恒定区，例如IgG1和IgG4。
本公开还提供包含抗体或多肽以及药学上可接受的载剂的组合物。
本领域普通技术人员还会理解，可以修饰本文公开的抗体，从而其氨基酸序列与其所衍生自的天然存在的结合多肽不同。例如，衍生自指定蛋白的多肽或氨基酸序列可能相似，例如，具有与起始序列一定百分比的相同性，例如可以与起始序列60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。在一些实施方案中，经修饰的抗体或片段保留指定的CDR序列。
本公开提供具有至少对人PD-L1和TIGIT蛋白的结合特异性的双特异性和多特异性抗体。PD-L1是对适应性免疫系统的重要的“别找到我”信号，而TIGIT则帮助肿瘤和感染细胞逃避免疫应答。它们通常在人肿瘤中过表达。因此，双重靶向先天性和适应性免疫检查点可能最大化抗肿瘤治疗效果并引发更持久的应答。
在一些实施方案中，双特异性和多特异性抗体包含抗PD-L1部分，其至少包含一个单域抗PD-L1抗体。如所证实的，单链抗PD-L1抗体对人PD-L1蛋白具有高亲和力。这些抗体表现出强结合和抑制活性，并可用于治疗和诊断用途。
在一些实施方案中，单域抗体对人PD-L1蛋白具有结合特异性，并包含互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含表1提供的抗体的任一个的CDR1、CDR2和CDR3(例如，SEQ ID NO:1-36)。
在一个实施方案中，在抗体中，CDR1包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。SEQ ID NO:55、56和57是抗体ALP-Tan-3p-93及其人源化对应物93_VH-1至93_VH-9的CDR。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57，但具有一个、两个或三个氨基酸添加、缺失和/或取代。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，人源化抗体包含一个或多个经测试以改善移植抗体特性的回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，回复突变选自37F、47F、49A、78V和94A。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37F、47F、49A、78V和94A的全部回复突变。
示例性人源化抗体包括93_VH-1、93_VH-2、93_VH-3、93_VH-4、93_VH-5、93_VH-6、93_VH-7、93_VH-8和93_VH-9。示例性序列为SEQ ID NO:114-122。在一些实施方案中，人源化抗体具有SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在抗体中，CDR1包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列，CDR2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且CDR3包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。SEQ ID NO:113、49和50是人源化抗体112-VHH1-PTM、112-VHH2-PTM、112-VHH3-PTM、112-VHH4-PTM、112-VHH5-PTM、112-VHH6-PTM或112-VHH7-PTM的CDR。与原始抗体ALP-Tan-3p-112相比，这些人源化抗体在CDR1(SEQ ID NO:48)中包含N34Q取代(Kabat编号)，以防止翻译后修饰。在一些实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列，但具有一个、两个或三个氨基酸的添加、缺失和/或取代。在一些实施方案中，取代是保守取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化的。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含一个或多个选自37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的回复突变。在一些实施方案中，根据Kabat编号，人源化抗体包含37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的全部回复突变。在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:123-130的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:130的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在抗体中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含表1提供的抗体的任一个的CDR1、CDR2和CDR3(例如，SEQ ID NO:1-36)。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、38和39的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和42的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQID NO:43、44和45的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ IDNO:40、46和47的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、46和47的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:48、49和50的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、51和52的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、53和54的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和47的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、46和47的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、41和58的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、53和39的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、59和60的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:61、62和63的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、65和66的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:67、68和69的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:70、71和72的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、73和74的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、75和76的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、77和66的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:37、78和79的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:80、81和82的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:40、83和47的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、85和86的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:64、87和66的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、88和89的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、90和91的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:92、93和94的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:95、96和97的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、98和99的氨基酸序列。
在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:100、101和102的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:103、104和105的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:84、85和106的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:107、108和109的氨基酸序列。在一个实施方案中，CDR1、CDR2和CDR3分别包含SEQ ID NO:110、111和112的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体包含选自SEQ ID NO:1-36的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开还提供与本文公开的任何抗体竞争结合人PD-L1的抗PD-L1抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开还提供与本文公开的任何抗体结合相同表位的抗PD-L1抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开还提供抗PD-L1抗体和抗原结合片段，其包含本文公开的抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中，双特异性或多特异性抗体的抗TIGIT部分具有一对(或，在一些实施方案中，两对)重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。VH可以包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。VL可以包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。
在一些实施方案中，VH CDR1、VH CDR、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO:173-178的氨基酸序列。在一些实施方案中，VH包含SEQ ID NO:171的氨基酸序列，VL包含SEQ ID NO:172的氨基酸序列(表7)。
双特异性抗体可以采用任何形式，包括图9所示的形式。在一个实施方案中，双特异性抗体优选是对称的。在一个实施方案中，单域抗PD-L1抗体位于抗TIGIT部分的C-末端侧。
在图9A提供的示例性形式中，两个单域抗PD-L1抗体任选地通过接头融合到抗-TIGIT抗体的每个重链恒定区的C-末端。在图9B的示例中，每个重链包含两个单域抗PD-L1抗体的拷贝。
在图9C的示例中，单域抗PD-L1抗体任选地通过接头融合到抗TIGIT抗体的每个轻链(恒定区)C-末端。
双特异性抗体可以包含来自任何IgG类型的恒定区，例如IgG1和IgG4。
本公开还提供包含抗体或多肽及药学上可接受的载剂的组合物。
本领域普通技术人员也会理解，可以修饰本文公开的抗体，从而其氨基酸序列与其所衍生自的天然存在的结合多肽不同。例如，衍生自指定蛋白的多肽或氨基酸序列可能相似，例如，具有与起始序列一定百分比的相同性，例如，可以与起始序列60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。在一些实施方案中，经修饰的抗体或片段保留指定的CDR序列。
编码抗体的多核苷酸以及抗体制备方法
本公开还提供编码本公开的抗体、其变体或衍生物的分离的多核苷酸或核酸分子。本公开的多核苷酸可以在同一多核苷酸分子上或不同的多核苷酸分子上编码抗原结合多肽的整个重链和轻链可变区、其变体或衍生物，此外，本公开的多核苷酸可以在同一多核苷酸分子上或不同的多核苷酸分子上编码抗原结合多肽的部分重链和轻链可变区、其变体或衍生物。
制备抗体的方法在本领域中是众所周知的，并描述于本文。在某些实施方案中，本公开的抗原结合多肽的可变区和恒定区均为完全人的。可以使用本领域中描述的以及本文描述的技术来制备完全的人抗体。例如，可以通过向转基因动物施用抗原来制备针对特定抗原的完全人抗体，所述转基因动物已改造成通过产生这种抗体来响应抗原刺激，但其内源基因座是失效的。可用于制备这种抗体的示例性技术描述于美国专利号：6,150,584、6,458,592、6,420,140，其内容整体援引加入本发明。
癌症治疗
如本文所述，本公开的抗体、双特异性抗体、多肽、变体或衍生物可用于某些治疗和诊断方法。
本公开还涉及基于抗体的疗法，其包括向患者(例如动物、哺乳动物和人)给药本公开的抗体以治疗一种或多种本文所述的病症或病况。本公开的治疗性化合物包括但不限于本公开的抗体(包括如本文所述的变体和衍生物)以及编码本公开的抗体(包括如本文所述的变体和衍生物)的核酸或多核苷酸。
本公开的抗体还可以用于治疗或抑制癌症。PD-L1可以在肿瘤细胞中过表达。肿瘤来源的PD-L1可以与免疫细胞上的PD-1结合，从而限制抗肿瘤T细胞免疫力。小分子抑制剂或靶向PD-L1的单克隆抗体在小鼠肿瘤模型中的结果表明，靶向PD-L1疗法是有效控制肿瘤生长的一种重要的替代和实际的方法。如实验例所证实的，抗PD-L1抗体激活适应性免疫应答机制，可以使得癌症患者的生存率提高。
因此，在某些实施方案中，本公开提供用于治疗有需要的患者的癌症的方法。在一个实施方案中，所述方法需要向患者给药有效量的本公开的抗体。在某些实施方案中，患者中的至少一个癌细胞(例如，基质细胞)表达、过表达或被诱导表达PD-L1。例如，可以通过给药肿瘤疫苗或放疗来诱导PD-L1表达。
表达PD-L1蛋白的肿瘤包括膀胱癌、非小细胞肺癌、肾癌、乳腺癌、尿道癌、结直肠癌、头颈癌、鳞状细胞癌、默克尔(Merkel)细胞癌、胃肠癌、胃癌、食道癌、卵巢癌、肾癌和小细胞肺癌等。因此，本公开的抗体可以用于治疗任何一种或多种这样的癌症。
组合物
本发明还提供药物组合物。这种组合物包含有效量的抗体和可接受的载剂。在某些实施方案中，组合物进一步包含第二抗癌剂(例如，免疫检查点抑制剂)。
在特定的实施方案中，术语“药学上可接受”表示得到联邦或州政府的监管机构批准，或者列于美国药典或其他广泛认可的药典中，用于动物，尤其是用于人。此外，“药学上可接受的载剂”通常是非毒性的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或任何类型的配方助剂。
术语“载剂”指的是与治疗剂一起给药的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。这些药学上的载剂可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内给药药物组合物时，水是优选的载剂。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液也可以用作液体载剂，特别是用于注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。组合物还可以包含少量的润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂(如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐)。还预期有抗菌剂(如苯甲醇或对羟基苯甲酸酯)、抗氧化剂(如抗坏血酸或亚硫酸氢钠)、螯合剂(如乙二胺四乙酸)、以及调节张力的物质(如氯化钠或葡萄糖)。这些组合物可以采用溶液、悬浮液、乳剂、片剂、药丸、胶囊、粉末、缓释制剂等形式。组合物可以制成栓剂，其中包含传统粘合剂和载剂，如甘油三酯。口服制剂可以包括标准载剂，如药品级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。E.W.Martin在Remington's Pharmaceutical Sciences描述合适的药物载剂的示例，其援引加入本文。这样的组合物含有治疗有效量的抗原结合多肽(优选为纯化形式)，并与适量的载剂一起以便为患者提供适当的给药形式。剂型应与给药方式相符合。肠胃外(parental)制品可以封装在玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量的小瓶中。
在一个实施方案中，按照常规程序将组合物配制为适用于人体静脉内给药的药物组合物。通常，用于静脉内给药的组合物是无菌等渗含水缓冲液中的溶液。必要时，组合物还可以包含助溶剂和局部麻醉剂(如利多卡因)，以减轻注射部位的疼痛。通常，在单位剂量形式中，成分可以分别或混合提供，例如在密封的容器(如标明活性剂的量的安瓿或小袋)中作为干燥冻干粉末或无水浓缩物。如果组合物通过输注给药，可以用含有药用级无菌水或盐水的输液瓶来分配。如果组合物通过注射给药，可以提供注射用无菌水或盐水的安瓿瓶，以便在给药前混合成分。
实施例
实施例1.针对人PD-L1的羊驼单域抗体的产生
本实施例示出如何通过免疫羊驼，接着构建和选择噬菌体文库来产生抗人PD-L1的单域抗体。
抗原：用重组人PD-L1/hFc融合蛋白作为免疫原来产生抗人PD-L1抗体。用包含人PD-L1的整个胞外区与人免疫球蛋白Fc结构域融合的融合蛋白作为免疫原。
免疫
首先，在第0天使用包含600μg小鼠PD-L1和完全弗氏佐剂的1:1混合物对羊驼进行皮下(SC)免疫，并在第21天使用250μg小鼠PD-L1和不完全弗氏佐剂进行免疫，以及在第42天使用250μg人PD-L1和不完全弗氏佐剂进行免疫。通过测量抗PD-L1结合滴度来监测免疫应答。
文库构建和筛选
收集羊驼的PBMC，通过RNA分离、cDNA反转录、PCR扩增和克隆到噬菌体展示载体来生成抗体噬菌体展示文库。然后对文库进行一轮液相淘选和一轮固相淘选。一般来说，在生物素化的PD-L1包被的免疫管或珠中孵育文库。用PBST洗涤5-20次来去除未结合的噬菌体。对每个选择，进行总计三轮淘选。
通过PCR从抗原结合阳性噬菌体中扩增结合物序列，并由DNA测序确认。下表提供独特抗体及其CDR区域的序列。
表1.抗体序列
表1A.CDR序列
实施例2.羊驼单克隆抗体针对人PD-L1的结合和阻断活性
用Gator表征一些抗体的结合和阻断特性。首先将抗his探针加到芯片上，然后加入人PD-L1-his以捕获抗原。接着，注射抗体以记录结合曲线。最后，注射人PD1/hFc以确定抗体是否能够阻断PD-1与PD-L1之间的相互作用。如图1所示，ALP-Tan-3p-112、ALP-Tan-3p-93和ASP-30-46均有效地阻断PD-1和PD-L1之间的相互作用。由Biacore T200进一步确认亲和力。
表2.亲和力
Kon(1/Ms) Koff(1/s) KD(M)
ALP-Tan-3p-112 4.9×105 0.000235 4.79×10-10
ALP-Tan-3p-93 1.54×105 7.8×10-5 4.59×10-10
ASP-3p-46 7.1×105 0.00128 1.81×10-9
实施例3.羊驼单克隆抗体的人源化
使用mAb ALP-Tan-3p-93和ALP-Tan-3p-112可变区基因创建人源化mAb。在此过程的第一步中，将ALP-Tan-3p-93和ALP-Tan-3p-112的氨基酸序列与可用的人Ig基因序列数据库进行比较，以找到总体最佳匹配的人种系Ig基因序列。对于ALP-Tan-3p-93，最接近的人匹配是IGHV3-23*04基因。然后设计人源化的可变结构域序列，其中将ALP-Tan-3p-93的CDR1、CDR2和CDR3移植到IGHV3-23*04基因的框架序列上。对于ALP-Tan-3p-112，最接近的人匹配是IGHV3-48*03基因。然后设计人源化的可变结构域序列，其中将ALP-Tan-3p-112的CDR1、CDR2和CDR3移植到IGHV3-48*03基因的框架序列上。同时，在CDR1中引入一个残基突变(N34Q，Kabat编号)，以降低转录后修饰的风险。然后生成3D模型，以确定是否有羊驼氨基酸替换为人氨基酸可能会影响结合和/或CDR构象的任何框架位置。
表3.人源化抗体和回复突变
表3A.CDR序列
实施例4.人源化抗PD-L1单克隆抗体的完整动力学
为探索人源化抗体的结合动力学，本实施例进一步通过Biacore监测不同剂量(100nM、50nM、25nM、12.5nM、6.15nM、3.125nM、1.5625nM)的抗原针对不同单克隆抗体的结合和解离来进行完整动力学亲和力测试。如表4所示，112-VHH5-PTM的亲和力与ALP-Tan-3p-112嵌合抗体相当。93VH-4、93VH-6和93VH-8的亲和力与ALP-Tan-3p-93嵌合抗体相当。
表4.亲和力
Kon(1/Ms) Koff(1/s) KD(M)
ALP-Tan-3p-112(嵌合) 2.14×106 5.66×10-4 2.64×10-10
112-VHH3-PTM 2.07×106 4.98×10-3 2.40×10-9
112-VHH5-PTM 1.62×106 1.49×10-3 9.20×10-10
112-VHH7-PTM 1.69×106 3.93×10-3 2.32×10-9
ALP-Tan-3p-93(嵌合) 1.92×105 1.07×10-4 5.59×10-10
93-VH-2 6.15×104 1.62×10-3 2.63×10-8
93-VH-3 4.86×105 1.15×10-3 2.36×10-9
93-VH-4 8.05×104 1.47×10-4 1.82×10-9
93-VH-5 4.52×105 1.25×10-3 2.77×10-9
93-VH-6 9.59×104 1.97×10-4 2.06×10-9
93-VH-7 8.76×104 3.39×10-4 3.87×10-9
93-VH-8 1.33×105 2.39×10-4 1.80×10-9
93-VH-9 1.40×105 3.10×10-4 2.20×10-9
实施例5.人源化抗PD-L1抗体的结合特性
首先通过ELISA测定评估本申请的人源化抗PD-L1抗体的结合特性。简言之，如图1B所示，将100μl不同浓度的抗PD-L1抗体93-VH6或112-VH47孵育在预包被有人His-PD-L1的96孔板中的每个孔中，然后加入羊抗人IgG Fc HRP，通过HRP与其底物的显色反应来分析。如图1B所示，示例性抗PD-L1抗体93-VH6和112-VH47均表现出以剂量依赖方式与人PD-L1特异结合。
进一步通过使用过表达人PD-L1的Raji细胞来评估本申请的抗PD-L1抗体的结合能力。简言之，将50μl过表达人PD-L1的Raji细胞以2*105细胞/孔的浓度接种到96孔板中。如图1C所示，将50μl不同浓度的抗PD-L1抗体93-VH6或112-VH47加到每个孔中，并在冰上孵育1小时。然后用FACS缓冲液洗涤细胞两次，并添加100μl PE-抗hu IgG，随后在冰上孵育1小时。孵育后收集每个孔中的细胞，用65μl FACS缓冲液重悬以进行流式细胞分析。如图1C所示，示例性抗PD-L1抗体93-VH6和112-VH47均表现出以剂量依赖方式与过表达人PD-L1的Raji细胞特异结合。
实施例6.T细胞活化生物学测定(NFAT)
使用表达hPD-1的Jurkat细胞测试抗PD-L1抗体刺激T细胞应答的能力。Jurkat是一种人T细胞白血病细胞系，可以在TCR刺激下激活NFAT介导的荧光素酶表达。在这个实验中，将由慢病毒转染人PD-1基因的Jurkat细胞用作响应细胞。将Raji-PD-L1细胞用作抗原呈递细胞(APC)。将葡萄球菌肠毒素E(SEE)用于刺激TCR信号。在该系统中，异位表达的huPD-L1可以抑制Jurkat细胞中SEE刺激的NF-AT-荧光素酶活性，而抗PD-L1抗体可以逆转NFAT-荧光素酶活性。简言之，将APC(2.5×104)与表达PD-1的Jurkat T细胞(1×105)在SEE刺激下共培养。在培养开始时加入抗PD-L1抗体。六小时后，评估所得细胞的荧光素酶活性。
如图2A-2C所示，所有测试的抗PD-L1抗体都阻断PD-1/PD-L1相互作用，由此增强NFAT介导的荧光素酶活性。
实施例7.PD-L1/CD47双特异性抗体的产生
选择两种先前鉴定的抗CD47抗体13H3和34C5，以及抗PD-L1抗体93-VH-6，以“二对二”和“一对二”形式(结构如图3所示)产生抗CD47/PD-L1双特异性抗体。
图3A示例“二对二”对称形式的双特异性抗体分子。这样的双特异性抗体可以包含两个抗PD-L1单域抗体，每个单域抗体通过GS接头连接到与IgG1或IgG4 Fc相连的抗CD47Fab的重链。
图3B示例另一种“二对二”对称形式的双特异性抗体分子。这样的双特异性抗体可以包含两个抗PD-L1单域抗体，每个单域抗体通过GS接头连接到与IgG1或IgG4 Fc相连的抗CD47 Fab的轻链。
图3C示例另一种“二对二”对称形式的双特异性抗体分子。这样的双特异性抗体可以包含两个抗PD-L1单域抗体，每个单域抗体通过GS接头连接到与抗CD47 Fab相连的IgG1或IgG4 Fc的CL。
图3D示例另一种“二对二”对称形式的双特异性抗体分子。这种双特异性抗体包含抗CD47 Fab和一个IgG1 Fc或一个IgG4 Fc，以及通过GS接头连接到CH3的抗PD-L1单域抗体。
图3E显示“二对一”不对称形式的双特异性抗体分子。这种双特异性抗体包含两个串联的抗PD-L1单域抗体，通过一个GS接头连接到IgG1或IgG4 Fc，其还连接有抗CD47 Fab。Fc部分包含CH3中的杵臼(knob in hole)突变，以减少错配。
图3F显示另一种“二对一”不对称形式的双特异性抗体分子。这种双特异性抗体包含两个串联的抗PD-L1单域抗体，通过GS接头连接到IgG1或IgG4 Fc，还连接着抗CD47scFv。Fc部分包含CH3中的杵臼突变，以减少错配。
用蛋白A亲和柱从100mL HEK293F细胞的瞬时转染上清中纯化这些双特异性抗体。通过HPLC和SDS-PAGE测试每种双特异性抗体的纯度。
表5.亲本抗体序列
表6.双特异性抗体
实施例8.抗CD47/PD-L1双特异性抗体阻断CD47与SIRPα的结合
根据CD47/SIRPα结合测定试剂盒(Cisbio)的说明进行实验。简言之，将系列稀释的抗体、Tag1-CD47和Tag2-SIRPa预混合，室温下孵育15分钟，然后加入预混合的抗Tag1-Tb3和抗Tag2-XL665，室温下孵育1小时。使用激光作为光源，在PerkinElmer Envision平板检测仪读取荧光数据。将抗CD47抗体(13H3或34C5)用作本研究的阳性对照。
结果显示在图4A和4B中，表明34C5的阻断活性比13H3强。此外，34C5-IgG1-93VH-6、93VH6-13H3-H-IgG1和93VH6-13H3-L-IgG1相较于亲本抗CD47单克隆抗体，有一定的活性损失。然而，其余的PD-L1/CD47双特异性抗体具有与其亲本抗CD47抗体相当或甚至更强的SIRPα阻断活性。
实施例9.T细胞激活生物测定(NFAT)
使用表达hPD-1的Jurkat细胞测试抗CD47/PD-L1双特异性抗体刺激T细胞应答的能力。Jurkat是一种人T细胞白血病细胞系，在TCR刺激下可以激活NF-AT活化的荧光素酶表达。在这个实验中，将由慢病毒转染人PD-1基因的Jurkat细胞作为响应细胞。将Raji-PD-L1细胞用作抗原提呈细胞(APC)。使用葡萄球菌肠毒素E(SEE)来刺激TCR信号。在这个系统中，异位表达的huPD-L1可以抑制Jurkat细胞中SEE刺激的NF-AT荧光素酶活性，而抗PD-L1抗体可以逆转NF-AT荧光素酶活性。简言之，将APC(2.5×104)与表达PD-1的Jurkat T细胞(1×105)在SEE刺激下共培养。在培养开始时加入抗PD-L1抗体。六小时后，评估所得细胞的荧光素酶活性。
如图5所示，相较于亲本PD-L1单克隆抗体93-VH-6，所有2对2形式的双特异性抗体在阻断PD-1/PD-L1介导的NF-AT-荧光素酶活性方面具有相当或更强的效果。
实施例10.抗CD47/PD-L1双特异性抗体增强人巨噬细胞(MΦ)对肿瘤细胞的吞噬作用
从人血液中分离单核细胞，并在hGCSF的存在下分化成巨噬细胞，持续6天。刮取单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)并在24孔培养皿中再接种(re-plate)，允许贴壁24小时。选择人肿瘤细胞系RKO作为靶细胞，并使用1mM的CellTrace-Far红标记20分钟，并且使用1mM的CellTrace-Violet标记MDM 20分钟，然后以3:1肿瘤细胞/吞噬细胞的比例混合，添加不同剂量的抗CD47/PD-L1双特异性抗体及相应的对照mAb和组合。孵育3小时后，通过流式细胞术分析靶细胞的吞噬作用。通过门控(gating)巨噬细胞来测量吞噬作用，然后评估双阳性细胞的百分比。
如图6A和6B所示，抗CD47/PD-L1双特异性抗体表现出比亲本单克隆抗体和临床基准抗体的组合治疗更高的ADCP效力。
进行另一项研究以进一步测试同种型是否影响ADCP效力。该研究比较具有hIgG1Fc和hIgG4 Fc的双特异性抗体在ADCP测定中的差异。结果如图6C所示。当同种型从hIgG1变为hIgG4时，抗CD47/PD-L1双特异性抗体的ADCP效力总体相当。
实施例11.基于RKO细胞的抗CD47/PD-L1双特异性抗体结合
RKO细胞是人结肠癌细胞系，在表面表达内源水平的人CD47和人PD-L1。将RKO细胞与系列稀释的抗CD47/PD-L1双特异性抗体、亲本CD47或PD-L1单特异性抗体在4℃下孵育30分钟。然后用FACS缓冲液洗涤细胞三次，随后用APC标记的二抗在4℃下孵育30分钟。然后用FACS缓冲液洗涤细胞三次。通过流式细胞术测量结合。
如图7A和7B所示，对称形式的抗CD47/PD-L1双特异性抗体显示出比亲本PD-L1单特异性抗体更强或相当的结合能力。
实施例12.抗CD47/PD-L1双特异性抗体的RBC结合和RBC凝集试验
10.1RBC结合实验
将人RBC在PBS中稀释至1％，并与抗CD47/PD-L1双特异性抗体(抗体滴度从200nM开始，并向下滴定3倍)在4℃下孵育1小时，然后加入PE偶联的二抗，在4℃下孵育30分钟。通过流式细胞术检查抗CD47/PD-L1抗体与人RBC的结合。
如图8A所示，与13H3抗体相当，93VH6-13H3-H-IgG1、93VH6-13H3-L-IgG1和13H3-L-93VH6-IgG1显示出极小或没有RBC结合。在所有测试的抗体中，亲本CD47抗体34C5显示出最强的RBC结合。
10.2RBC凝集试验
将人RBC在PBS中稀释至1％，并在圆底96孔板中用抗CD47/PD-L1抗体滴定(抗体滴度从200nM开始，并向下滴定3-4倍)，在室温下孵育2小时。凝血反应的证据通过存在未沉淀的RBC证实，与未凝血的RBC的点状红点相比，RBC呈现雾状。
如图8B所示，93VH6-13H3-H-IgG1和93VH6-13H3-L-IgG1显示无明显的RBC凝集，这与亲本CD47抗体13H3相似。参考抗体5F9在4个测试浓度下均显示RBC凝集。
实施例13.抗CD47/PD-L1双特异性抗体的体内抗肿瘤效力
分别向12只NOG小鼠注射人PBMC，0.2mL DPBS中(i.v.，每5×106/小鼠)。8天后，在小鼠右侧皮下接种1×106个RKO细胞。当平均肿瘤体积达到57mm3时，将荷瘤小鼠随机分为三组，每组4只小鼠，分别腹腔内给药PBS、93VH6-13H3-L-IgG1(12mg/kg)和93VH6-13H3-L-IgG4(12mg/kg)。每周两次测量和记录肿瘤体积和体重。于第19天对动物实施安乐死。如图8C所示，与PBS相比，93VH6-13H3-L-IgG1和93VH6-13H3-L-IgG4治疗表现为显著抑制肿瘤生长，表明本申请的抗CD47/PD-L1 bsAb具有强抗肿瘤效力。
实施例14.PD-L1/TIGIT双特异性抗体产生
选择示例性抗PD-L1单域抗体(sdAb)93-VH6和112-VH47，以产生不同形式的抗PD-L1/TIGIT双特异性抗体(结构见图9)。
在一种形式中，通过G4S接头将两个PD-L1 sdAb融合到抗TIGIT部分的重链C-末端(称为TIGIT-Fc-PD-L1)或抗TIGIT部分的轻链C-末端(称为TIGIT-CL-PD-L1)。或者，通过G4S接头将四个PD-L1 sdAb(每个串联组两个)连接到TIGIT部分的重链C-末端(称为TIGIT-Fc-PD-L1*2)。
用蛋白A亲和柱从100mL HEK293F细胞的瞬时转染上清中纯化这些双特异性抗体。通过HPLC和SDS-PAGE证实每种双特异性抗体的纯度。
表7.亲本抗体序列
表8.PD-L1/TIGIT bsAb
实施例15.PD-L1/TIGIT bsAb对PD-L1的结合特性
通过测试PD-L1/TIGIT bsAb与重组人his标记的PD-L1蛋白的结合亲和力。通过蛋白A芯片捕获PD-L1/TIGIT bsAb分子或亲本抗PD-L1 sdAb。将一系列稀释的人PD-L1蛋白(6.25nM-100nM)以流速10μL/min注射到捕获的抗体上。使抗原结合180秒，并解离1200秒。在Biacore T200上进行所有实验。使用Biacore T200评估软件进行数据分析。
数据显示，与其亲本抗PD-L1抗体相比，PD-L1/TIGIT bsAb分子中的PD-L1结合亲和力未受到影响(表9)。
表9.PD-L1/TIGIT bsAb分子与人PD-L1的亲和力
进一步通过ELISA分析抗PD-L1/TIGIT bsAb分子与人PD-L1的结合。简言之，将100μl不同浓度的抗PD-L1/TIGIT bsAb TIGIT-Fc-93-VH6、TIGIT-Fc-93-VH6*2、TIGIT-CL-93-VH6和TIGIT-Fc-112-VH47(如图10A和图10B所示)在预包被有人His-PD-L1的96孔板中的每个孔中孵育，然后通过羊抗人IgG Fc HRP分析抗PD-L1/TIGIT bsAb与人His-PD-L1之间的结合。如图10A和图10B所示，测试的包括TIGIT-Fc-93-VH6、TIGIT-Fc-93-VH6*2、TIGIT-CL-93-VH6和TIGIT-Fc-112-VH47的PD-L1/TIGIT bsAb均呈现与人PD-L1以剂量依赖性特异结合。
此外，通过使用Raji-PD-L1细胞分析本申请的抗PD-L1/TIGIT bsAb与表达PD-L1的细胞的结合能力。简言之，将50μl过表达人PD-L1的Raji细胞以2*105个细胞/孔接种到96孔板中。将50μl抗PD-L1抗体112-VH47或TIGIT-Fc-112-VH47以不同浓度(如图10C所示)加入到每个孔中，并在冰上与细胞一起孵育1小时。然后，用FACS缓冲液洗涤细胞两次，并补充100μl PE-抗人IgG，随后在冰上孵育1小时。孵育后，收集每个孔中的细胞并重悬于65μlFACS缓冲液中，用以通过流式细胞术分析。如图10C所示，TIGIT-Fc-112-VH47呈现与表达人PD-L1的Raji细胞以剂量依赖方式特异性结合。
实施例16.PD-L1/TIGIT bsAb分子的PD-L1拮抗活性
为评估PD-L1/TIGIT bsAb分子的PD-L1拮抗活性，进行基于PD-L1细胞的功能测定，如实施例6所述。
如图11所示，TIGIT-Fc-93-VH6*2bsAb分子显示出与亲本93-VH6 sdAb相当的拮抗活性。当与抗93-VH6 sdAb相比时，TIGIT-Fc-93-VH6显示出在PD-L1拮抗活性中最大效果增强，但EC50降低。当与93-VH6 sdAb相比时，TIGIT-CL-93-VH6 bsAb显示出在PD-L1拮抗活性中最大效果相当，但EC50降低。
实施例17.PD-L1/TIGIT bsAb对TIGIT的结合特性
通过Biacore T200检查PD-L1/TIGIT bsAb和亲本TIGIT抗体对重组His标记的人TIGIT-ECD蛋白的结合。通过蛋白A芯片捕获抗体。在10μl/min的流速下，将系列浓度的His标记的人TIGIT-ECD蛋白(0.78nM-12.5nM)注射到捕获抗体上。结合期为180秒，解离期为1200秒。
结果如下表10所示。PD-L1/TIGIT抗体的Biacore结果表明，这些双特异性抗体对人TIGIT具有高亲和力。如表格所示，PD-L1/TIGIT抗体具有与其亲本TIGIT抗体相当的亲和力。
表10.抗PD-L1/TIGIT bsAb分子与人TIGIT的亲和力
为评估对TIGIT蛋白的结合能力，进行PD-L1/TIGIT bsAb对His标记的人TIGIT的ELISA结合测试。如图12所示，所有测试的PD-L1/TIGIT bsAb均呈现出与TIGIT以剂量依赖的方式特异性结合。
实施例18.PD-L1/TIGIT bsAb的TIGIT拮抗活性特性
为了评估PD-L1/TIGIT bsAb的TIGIT阻断功能，在体外使用基于Jurkat细胞的功能性测定。简言之，同时在Jurkat T细胞中过表达人TIGIT及其反受体(counter-receptor)CD226，而在Raji细胞中过表达它们的共配体(co-ligand)人CD155。当这两种细胞类型在超抗原存在下共培养时，TIGIT-CD155连接传递至Jurkat细胞的负信号抑制Jurkat细胞的活化。与PD-L1阻断测定相似，使用类似荧光素酶报告系统来评估Jurkat细胞的激活状态。当向培养系统中添加系列稀释的PD-L1/TIGIT bsAb或抗TIGIT抗体时，抗体可以剂量依赖地增强Jurkat-TIGIT-CD226细胞的荧光素酶表达。
对于这个测定，当与它们的亲本TIGIT抗体相比时，TIGIT-Fc-93-VH6 bsAb分子在阻断TIGIT/CD155信号以增强Jurkat细胞激活中显示出优异的效力(图13)。另外两种形式，TIGIT-Fc-93-VH6*2和TIGIT-CL-93-VH6 bsAb，显示出与亲本TIGIT抗体相比相当的TIGIT阻断活性。
实施例19.PD-L1/TIGIT bsAb体外协同效果
为了评估PD-L1/TIGIT bsAb在促进T细胞激活中的协同效果，我们建立一个可靠的基于细胞的双功能的体外测定。简言之，在Jurkat T细胞上同时过表达人TIGIT、CD226和PD1，而在Raji细胞上过表达它们各自的配体CD155和PD-L1。当这两种细胞类型在超抗原存在下共培养时，由TIGIT-CD155和PD-1-PD-L1相互作用传递至Jurkat细胞的负信号协同抑制Jurkat细胞激活，表现为荧光素酶报告基因的表达。
如图14所示，当向培养系统中添加系列稀释的TIGIT抗体或PD-L1抗体时，抗体可以剂量依赖地增强Jurkat-TIGIT-CD226-PD-1细胞的荧光素酶表达。然而，抗TIGIT和抗PD-L1抗体的组合显著增强荧光素酶的产生，表明这两种抗体的强协同效果。值得注意的是，PD-L1/TIGIT bsAb形式TIGIT-Fc-93-VH6和TIGIT-Fc-PD-93-VH6*2显示出比组合治疗更显著增强的T细胞激活，然而TIGIT-CL-93-VH6 bsAb显示出与组合治疗相当的T细胞激活。
为进一步证实基于Jurkat细胞系双功能测定中的观察结果，进一步研究PD-L1/TIGIT bsAb对人PBMC衍生的初级CD8+T细胞激活的协同效果。简言之，将组成型表达工程化的T细胞受体(TCR)激活剂、人CD155和PD-L1的CHO-K1细胞(CHO-TCR-CD155-PD-L1细胞)以35,000个细胞/孔的密度接种到在每个孔中，并过夜孵育。将从两个健康供体中分离的纯化CD8+T细胞，与CHO-TCR-CD155-PD-L1细胞，以50,000个细胞/孔的密度一起孵育。然后，将系列稀释的PD-L1/TIGIT bsAb、抗TIGIT、抗PD-L1或这两种抗体的组合加入共培养系统中培养3天并收集培养基，使用标准ELISA试剂盒测量IFN-γ。
如图15所示，虽然抗TIGIT或抗PD-L1抗体几乎不能刺激初级CD8+T细胞产生IFN-γ，但这两种抗体的组合以浓度依赖性方式显著增强IFN-γ的产生。最重要的是，与组合治疗相比，TIGIT-Fc-93-VH6 bsAb显示出在T细胞激活诱导的IFN-γ产生上显著更优的效力，证明这种PD-L1/TIGIT bsAb形式在体外对初级CD8+T细胞激活有强协同效果。
***
本公开不受限于所描述的具体实施方式的范围，这些实施方式旨在作为本公开单个方面的单一说明，并且在功能上等同的任何组合物或方法均在本公开的范围内。对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不偏离本公开的精神或范围的情况下，可以对本公开的方法和组合物进行各种修改和变化。因此，本公开旨在涵盖落入所附权利要求及其等同的范围内的本公开的修改和变化。
本说明书中提到的所有公开和专利申请均援引加入本文，其程度等同于明确和单独表明援引加入的每个单独公开或专利申请。
序列表
<110> 天境生物科技（上海）有限公司
<120> 单域PD-L1抗体
<130> 54LW-333210-WO2
<150> PCT/CN2021/090058
<151> 2021-04-26
<150> PCT/CN2021/090046
<151> 2021-04-26
<150> PCT/CN2021/090049
<151> 2021-04-26
<160> 184
<170> PatentIn version 3.5
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20 25 30
Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala
35 40 45
Val Gly Arg Ser Pro Arg Ser Pro Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Thr Val
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
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Cys Ala Ala Gly Gly Ile Leu Gly Pro Arg Ala Gln Tyr Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Ser
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Gly Ser Thr Phe Ala Met
20 25 30
Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala
35 40 45
Val Gly Arg Ser Pro Arg Gly Pro Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Thr Val
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ala Gly Gly Ile Leu Gly Pro Arg Ala Gln Tyr Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<223> 合成
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Val Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Leu Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
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65 70 75 80
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Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Ser Thr Phe Ala Met
20 25 30
Ala Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala
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Val Gly Arg Ser Pro Arg Ser Pro Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
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Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Glu Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
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<400> 15
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Glu Ile Ala Phe Ser Val Phe
20 25 30
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Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ser Phe Ser Gly Tyr
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Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp
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<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
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<223> 合成
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ser Phe Ser Gly Tyr
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Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
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<220>
<223> 合成
<400> 23
Gln Leu His Phe Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ala Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
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<220>
<223> 合成
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Val Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Ser Thr Phe Ala Met
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<223> 合成
<400> 25
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala His Ser Gly Ser Ile Arg Ser Ile Asn
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<223> 合成
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Tyr
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<223> 合成
<400> 27
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 28
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 29
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Val Ser Gly Ser Ile Phe Ser Gly Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 30
Gln Pro Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 31
Gln Leu His Phe Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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115 120 125
<210> 32
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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20 25 30
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115 120 125
<210> 33
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 33
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Ser Val Phe Ser Val Leu
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<220>
<223> 合成
<400> 34
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1 5 10 15
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100 105 110
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115 120 125
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<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 35
Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Glu Ser Ile Phe Lys Phe Pro
20 25 30
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Arg Ser Ile Asn Gly Met
20 25 30
Glu Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Glu Arg Arg Glu Leu Val Ala Gly
35 40 45
Ile Thr Ala Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Asp Thr Val Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Gly Tyr Leu Gln Met
65 70 75 80
Asn Ser Leu Ser Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Arg Gln
85 90 95
Tyr Gly Pro Asn Trp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 37
Ser Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 38
Arg Ile Thr Trp Thr Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 39
Asp Leu Glu Gly Ala Met Val Ser Arg Arg Arg Glu Ile Glu Tyr Gly
1 5 10 15
His
<210> 40
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is any amino acid or empty
<400> 40
Ala Met Ala Xaa
1
<210> 41
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 41
Ala Val Gly Arg Ser Pro Arg Ser Pro Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly
20
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 42
Gly Gly Ile Leu Gly Pro Arg Ala His Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 43
Arg Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 44
Ala Ile Ser Trp Ser Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 45
Gly Lys Arg Leu Thr Leu Arg Ser Ser Gly Tyr Lys Tyr
1 5 10
<210> 46
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 46
Ala Val Gly Arg Ser Pro Arg Gly Pro Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly
20
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 47
Gly Gly Ile Leu Gly Pro Arg Ala Gln Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 48
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 48
Ser Gly Thr Asn Phe Ser Asp Ser Lys Ile Asp
1 5 10
<210> 49
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 49
Gly Ile Phe Ser Thr Gly Ser Thr Ile Tyr Glu Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 50
Ile Gly Arg Gly Ile Leu Ala
1 5
<210> 51
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 51
Ala Val Gly Arg Ser Pro Leu Gly Pro Val Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly
20
<210> 52
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 52
Cys Gly Ile Leu Gly Pro Arg Ala His Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 53
Arg Ile Thr Trp Ser Gly Arg Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 54
Asp Leu Glu Gly Ala Met Val Ser Arg Arg Arg Glu Ile Glu Tyr Gly
1 5 10 15
Gln
<210> 55
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 55
Arg His Tyr Val Met Gly
1 5
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 56
Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 57
Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 58
Gly Gly Ile Leu Gly Pro Arg Ala Glu Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 59
Ala Ile Ser Ala Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 60
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 60
Ala Gly Pro Arg Ile Arg Ile Ala Thr Ile Thr Leu Ser Arg Glu Tyr
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 61
Val Phe Asp Met Gly
1 5
<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 62
Ser Ile Gly His Asp Gly Arg Ile Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 63
Arg Asn Ser Phe Arg Asp Leu
1 5
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 64
Gly Tyr Ala Met Gly
1 5
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 65
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 66
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 66
Ala Gly Pro Ala Ile Thr Ile Ala Thr Met Thr Leu Arg Gly Lys Tyr
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 67
Ser Arg Ala Met Gly
1 5
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 68
Ala Ile Ser Ala Ser Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 69
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 69
Ala Gly Pro Arg Ile Thr Ile Ala Thr Met Thr Leu Ser Arg Glu Tyr
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 70
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 70
Ser Tyr Ala Leu Gly
1 5
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 71
Ala Ile Ser Ala Ser Gly Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 72
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 72
Ala Gly Pro Arg Ile Arg Ile Ala Thr Met Thr Leu Ser Arg Glu Tyr
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 73
Ala Ile Ser Ala Ser Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 74
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 74
Gly Gly Pro Ser Ile Thr Ile Arg Thr Met Gly Ser Ser Ser Lys Tyr
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 75
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 75
Ala Val Ser Ala Ser Gly Gly Arg Ser Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 76
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 76
Ala Gly Arg Ser Ile Thr Ile Ala Thr Met Thr Glu Arg Tyr Lys Tyr
1 5 10 15
Asp Tyr
<210> 77
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 77
Ala Ile Ser Gly Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 78
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 78
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ala Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 79
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 79
Asp Ala Thr Arg Ile Ala Ser Val Asp Val Pro Lys Ser Trp Gly Tyr
1 5 10 15
<210> 80
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 80
Gly Tyr Ala Arg Thr
1 5
<210> 81
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 81
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ala Ser Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 82
Asp Gln Ser Ile Arg Ile Ala Thr Met Arg Thr His Ala Ala Tyr Gly
1 5 10 15
Tyr
<210> 83
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 83
Ala Val Gly Arg Ser Pro Arg Gly Pro Gly Ile Thr Asn Tyr Ala Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly
20
<210> 84
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 84
Ile Asn Val Met Asn
1 5
<210> 85
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 85
Thr Ile Thr Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 86
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 86
Asp Lys Ile Leu Thr Tyr Asn Gly Val Ile Tyr Arg Ala Glu Tyr Asp
1 5 10 15
Val
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 87
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 88
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 88
Thr Ile Thr Ser Gly Gly Thr Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 89
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 89
Asp Lys Val Leu Tyr Tyr Asn Gly Val Ile Tyr Gly Ala Glu Tyr Asp
1 5 10 15
Val
<210> 90
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 90
Thr Ile Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 91
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 91
Asp Lys Val Leu Tyr Tyr Asn Gly Val Leu Tyr Gly Ala Glu Tyr Asp
1 5 10 15
Val
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 92
Gly Thr His Phe Ser Phe Asn Thr Met Gly
1 5 10
<210> 93
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 93
Leu Gly Arg Gly Ser Arg Gly Ile Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 94
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 94
Arg Arg Pro Ser Gly Ser Tyr Ala Gly Gln Tyr Tyr Pro Asp Ser Ser
1 5 10 15
Glu Tyr
<210> 95
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 95
Phe Glu Tyr Ile Ala
1 5
<210> 96
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 96
Leu Ile Ser Pro Gln Ser Ile Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 97
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is any amino acid or empty
<400> 97
Arg Glu Tyr Xaa
1
<210> 98
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 98
Thr Ile Ser Ser Val Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 99
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 99
Asp Lys Val Leu Tyr Tyr Asn Gly Val Met Tyr Gly Val Glu Ser Asp
1 5 10 15
Val
<210> 100
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 100
Arg Tyr Ile Met Gly
1 5
<210> 101
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 101
Ala Ile Ser Arg Ile Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 102
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 102
Lys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Tyr Thr Ala Arg Gly Ala Asp Ala
1 5 10 15
Tyr Asp Tyr
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 103
Val Leu Val Met Gly
1 5
<210> 104
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 104
Thr Ile Ser Asn Glu Gly Tyr Ser Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 105
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 105
Ala Trp Gly Asn Gly Arg Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 106
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 106
Asp Lys Val Leu Ser Tyr Asn Gly Val Ile Tyr Arg Ala Glu Tyr Asp
1 5 10 15
Val
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 107
Phe Pro Arg Met Gly
1 5
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 108
Leu Ser Arg Ser Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Ala Asp Phe Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 109
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 109
Arg Arg Pro Ser Gly Ser Phe Asn Gly Arg Trp Tyr Thr Asp Pro Ser
1 5 10 15
Asp Asp
<210> 110
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa is any amino acid or empty
<400> 110
Gly Met Glu Xaa
1
<210> 111
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 111
Gly Ile Thr Ala Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Thr Asp Thr Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 112
Gln Tyr Gly Pro Asn Trp Tyr
1 5
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 113
Ser Gly Thr Gln Phe Ser Asp Ser Lys Ile Asp
1 5 10
<210> 114
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Trp Val Ser Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Lys Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 115
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 115
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Trp Val Ser Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 116
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Lys Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 117
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 118
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 118
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Lys Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 126
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 119
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
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115 120 125
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
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65 70 75 80
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<223> 合成
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
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65 70 75 80
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<220>
<223> 合成
<400> 122
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1 5 10 15
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20 25 30
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65 70 75 80
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Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Gly
20 25 30
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Gly
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<220>
<223> 合成
<400> 125
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1 5 10 15
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20 25 30
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115 120
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Gly
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<223> 合成
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 128
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Gly
20 25 30
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 129
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Thr Gln Phe Ser Asp Ser Lys Ile Asp Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 130
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Thr Gln Phe Ser Asp Ser Lys Ile Asp Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly
35 40 45
Lys Gly Leu Val Trp Val Ala Gly Ile Phe Ser Thr Gly Ser Thr Ile
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Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 131
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Glu Arg Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
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65 70 75 80
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115
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 132
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ala
20 25 30
Gly Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Asn Gln Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
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100 105 110
Lys
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 133
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 134
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 134
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 135
Arg Ala Trp Met Asn
1 5
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 136
Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 137
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 137
Ser Asn Arg Ala Phe Asp Ile
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 138
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ala Gly Asn Asn Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 139
Gln Ala Ser Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 140
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 140
Gln Gln Tyr Tyr Thr Pro Pro Leu Ala
1 5
<210> 141
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 141
Ser Tyr Tyr Met His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 142
Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Thr
<210> 143
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 143
Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr
1 5 10
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 144
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 145
Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 146
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 146
Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 147
<211> 594
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 147
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro
145 150 155 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Glu
165 170 175
Arg Ala Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Val Gly Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr
195 200 205
Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
210 215 220
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Ser Asn Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
245 250 255
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
275 280 285
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
290 295 300
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
305 310 315 320
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
325 330 335
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
340 345 350
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
355 360 365
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
370 375 380
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
385 390 395 400
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
405 410 415
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
420 425 430
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
435 440 445
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
450 455 460
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
465 470 475 480
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
485 490 495
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
500 505 510
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
515 520 525
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
530 535 540
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
545 550 555 560
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
565 570 575
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
580 585 590
Gly Lys
<210> 148
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 148
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ala
20 25 30
Gly Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Asn Gln Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Thr Pro Pro Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 149
<211> 596
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 149
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
145 150 155 160
Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser
165 170 175
Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu
195 200 205
Lys Phe Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr
210 215 220
Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp
245 250 255
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
260 265 270
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
275 280 285
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
290 295 300
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
305 310 315 320
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
325 330 335
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
340 345 350
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
355 360 365
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
370 375 380
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
385 390 395 400
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
405 410 415
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
420 425 430
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
435 440 445
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
450 455 460
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
465 470 475 480
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
485 490 495
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
500 505 510
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
515 520 525
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
530 535 540
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
545 550 555 560
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
565 570 575
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
580 585 590
Ser Pro Gly Lys
595
<210> 150
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 150
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 151
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 151
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Glu Arg Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Gly Ser Asn Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 152
<211> 366
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 152
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser
145 150 155 160
Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu
165 170 175
Tyr Ala Gly Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
180 185 190
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Asn Gln Ala Ser Thr Arg Ala Ser
195 200 205
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
210 215 220
Leu Ile Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Gln Gln Tyr Tyr Thr Pro Pro Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
245 250 255
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
260 265 270
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
275 280 285
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
290 295 300
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
305 310 315 320
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
325 330 335
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
340 345 350
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
355 360 365
<210> 153
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 153
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 154
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 154
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
145 150 155 160
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser
165 170 175
Asp Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
180 185 190
Leu Ile Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
210 215 220
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu
225 230 235 240
Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
245 250 255
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
260 265 270
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
275 280 285
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
290 295 300
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
305 310 315 320
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
325 330 335
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
340 345 350
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
355 360
<210> 155
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 155
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Glu Arg Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Gly Ser Asn Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 156
<211> 366
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 156
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ala
20 25 30
Gly Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Asn Gln Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Thr Pro Pro Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
130 135 140
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
145 150 155 160
Thr Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro
165 170 175
Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
195 200 205
Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser
225 230 235 240
Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
260 265 270
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
275 280 285
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
290 295 300
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
305 310 315 320
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
325 330 335
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
340 345 350
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
355 360 365
<210> 157
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 157
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 158
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 158
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg His
145 150 155 160
Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe
165 170 175
Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser
180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu Tyr
225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Arg Thr Val
245 250 255
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
260 265 270
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
275 280 285
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
290 295 300
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
305 310 315 320
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
325 330 335
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
340 345 350
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
355 360
<210> 159
<211> 594
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 159
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Glu Arg Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Arg Lys Thr Asp Gly Glu Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Gly Ser Asn Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
465 470 475 480
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
485 490 495
Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly
500 505 510
Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser
515 520 525
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
530 535 540
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
545 550 555 560
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln
565 570 575
Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
580 585 590
Ser Ser
<210> 160
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 160
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ala
20 25 30
Gly Asn Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Asn Gln Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Thr Pro Pro Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 161
<211> 596
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 161
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
465 470 475 480
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
485 490 495
Phe Thr Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala
500 505 510
Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser
515 520 525
Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
530 535 540
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
545 550 555 560
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met
565 570 575
Ser Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
580 585 590
Thr Val Ser Ser
595
<210> 162
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 162
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 163
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 163
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr
165 170 175
Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
180 185 190
Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr
195 200 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
210 215 220
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser
245 250 255
Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
275 280 285
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
290 295 300
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
305 310 315 320
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
325 330 335
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
340 345 350
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
355 360 365
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
370 375 380
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
385 390 395 400
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
405 410 415
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
420 425 430
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
435 440 445
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
450 455 460
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
465 470 475 480
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
485 490 495
Pro Gly Lys
<210> 164
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 164
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 165
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 165
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 166
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 166
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr
165 170 175
Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
180 185 190
Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr
195 200 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
210 215 220
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser
245 250 255
Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
275 280 285
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
290 295 300
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
305 310 315 320
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
325 330 335
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
340 345 350
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
355 360 365
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
370 375 380
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
385 390 395 400
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
405 410 415
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
420 425 430
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
435 440 445
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
450 455 460
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
465 470 475 480
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
485 490 495
Pro Gly Lys
<210> 167
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 167
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 168
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 168
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 169
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 169
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg
20 25 30
His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
35 40 45
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr
165 170 175
Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
180 185 190
Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr
195 200 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
210 215 220
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser
245 250 255
Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
275 280 285
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
290 295 300
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
305 310 315 320
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
325 330 335
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
340 345 350
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
355 360 365
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
370 375 380
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
385 390 395 400
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
405 410 415
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
420 425 430
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
435 440 445
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
450 455 460
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
465 470 475 480
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
485 490 495
Pro Gly Lys
<210> 170
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 170
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Ala Arg Ile Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Thr Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ala Trp Phe Gly Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
130 135 140
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ile Ser Arg Leu His Ser Gly
180 185 190
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln Gly His Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
225 230 235 240
Ile Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
245 250 255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
340 345 350
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Pro Gly Lys
465
<210> 171
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 171
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Ser Tyr Asp Phe Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 172
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 172
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Ala Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 173
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 173
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 174
Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 175
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 175
Gln Ser Ser Tyr Asp Phe Val Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 176
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 176
Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 177
Trp Ala Ser Ala Arg His Thr
1 5
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 178
Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 179
<211> 595
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 179
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Ser Tyr Asp Phe Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
450 455 460
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
465 470 475 480
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
485 490 495
Thr Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro
500 505 510
Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly
515 520 525
Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
530 535 540
Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
545 550 555 560
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser
565 570 575
Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
580 585 590
Val Ser Ser
595
<210> 180
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 180
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Ala Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 181
<211> 741
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 181
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Ser Tyr Asp Phe Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
450 455 460
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
465 470 475 480
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
485 490 495
Thr Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro
500 505 510
Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly Ser Gly
515 520 525
Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
530 535 540
Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
545 550 555 560
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg Met Ser
565 570 575
Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
580 585 590
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
595 600 605
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
610 615 620
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
625 630 635 640
Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln
645 650 655
Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Gly
660 665 670
Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
675 680 685
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
690 695 700
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met Thr Thr Arg
705 710 715 720
Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
725 730 735
Val Thr Val Ser Ser
740
<210> 182
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 182
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Ser Tyr Asp Phe Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 183
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 183
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Ala Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
225 230 235 240
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
245 250 255
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Phe Arg His Tyr Val Met Gly Trp
260 265 270
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser
275 280 285
Trp Ser Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
290 295 300
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
305 310 315 320
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Met
325 330 335
Thr Thr Arg Met Ser Gln Ala Ser Arg Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
340 345 350
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
355 360
<210> 184
<211> 590
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 184
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Ser Ser Tyr Asp Phe Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
450 455 460
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
465 470 475 480
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
485 490 495
Thr Phe Ser Ser Gly Thr Gln Phe Ser Asp Ser Lys Ile Asp Trp Tyr
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515 520 525
Thr Gly Ser Thr Ile Tyr Glu Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
530 535 540
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Gly Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
545 550 555 560
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg Val Ile Gly Arg Gly
565 570 575
Ile Leu Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
580 585 590

Claims (25)

1.一种单域抗体或包含所述单域抗体的多肽，其中
所述单域抗体具有对人PD-L1蛋白的结合特异性，并且包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区3(CDR3)。
2.权利要求1的抗体或多肽，其中
所述单域抗体具有对人PD-L1蛋白的结合特异性，并且包含选自SEQ ID NO:1-36、114-122和123-130中任一个的互补决定区1(CDR1)、互补决定区2(CDR2)和互补决定区2(CDR3)，并且所述CDR1、CDR2和CDR3根据Kabat编号系统。
3.权利要求1或2的抗体或多肽，其中所述CDR1、CDR2和CDR3
(a)分别包含SEQ ID NO:55、56和57的氨基酸序列；或
(b)分别包含SEQ ID NO:113、49和50的氨基酸序列。
4.权利要求1至3中任一项的抗体或多肽，其中
所述CDR1包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，
所述CDR2包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列，并且
所述CDR3包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。
5.权利要求4的抗体或多肽，其中所述抗体是人源化的。
6.权利要求5的抗体或多肽，其中根据Kabat编号，所述人源化抗体包含选自37F、47F、49A、78V和94A的一个或多个回复突变。
7.权利要求5的抗体或多肽，其中根据Kabat编号，所述人源化抗体包含37F、47F、49A、78V和94A的回复突变。
8.权利要求5的抗体或多肽，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO:114-122中任一个的氨基酸序列。
9.权利要求8的抗体或多肽，其中所述抗体包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
10.权利要求1至3中任一项的抗体或多肽，其中
所述CDR1包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列，
所述CDR2包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，并且
所述CDR3包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。
11.权利要求10的抗体或多肽，其中所述抗体是人源化的。
12.权利要求11的抗体或多肽，其中根据Kabat编号，所述人源化抗体包含选自37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的一个或多个回复突变。
13.权利要求11的抗体或多肽，其中根据Kabat编号，所述人源化抗体包含37Y、44Q、45R、49A、68A、93R和94V的回复突变。
14.权利要求11的抗体或多肽，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO:123-130中任一个的氨基酸序列。
15.权利要求14的抗体或多肽，其中所述抗体包含SEQ ID NO:127或130的氨基酸序列。
16.权利要求1至15中任一项的抗体或多肽，其中所述多肽是双特异性抗体，其具有对不同于PD-L1的抗原的结合特异性。
17.一种双特异性抗体，其包含权利要求1至15中任一项的抗体，以及第二抗体或抗原结合片段，其具有对并非PD-L1的目标抗原的结合特异性。
18.一种多核苷酸，其编码权利要求1至16中任一项的抗体或多肽或者权利要求17的双特异性抗体。
19.一种载体，其包含权利要求18的多核苷酸。
20.一种细胞，其包含权利要求19的多核苷酸或权利要求19的载体。
21.一种组合物，其包含：
(1)权利要求1至16中任一项的抗体或多肽、权利要求17的双特异性抗体或者权利要求18的多核苷酸，以及
(2)药学上可接受的载剂。
22.一种治疗有需要的患者的癌症的方法，其包括向所述患者给药有效量的权利要求1至16中任一项的抗体或多肽、权利要求17的双特异性抗体或权利要求18的多核苷酸。
23.权利要求1至16中任一项的抗体或多肽、权利要求17的双特异性抗体或者权利要求18的多核苷酸在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
24.权利要求22的方法或权利要求23的用途，其中所述癌症是实体瘤。
25.权利要求22的方法或权利要求23的用途，其中所述癌症选自膀胱癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、头颈癌、胃肠癌、胃癌、食道癌、卵巢癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌和甲状腺癌。
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