CN116769061B

CN116769061B - 一种中药成分的制备及在治疗高脂血症中的应用

Info

Publication number: CN116769061B
Application number: CN202310683702.3A
Authority: CN
Inventors: 姚海强; 万瑾毅
Original assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Current assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Priority date: 2023-06-09
Filing date: 2023-06-09
Publication date: 2025-03-04
Anticipated expiration: 2043-06-09
Also published as: CN116769061A

Abstract

本发明公开了一种中药成分的制备及在治疗高脂血症中的应用。高血脂对人体的危害极大，是导致冠心病、脑卒中、心脏猝死、心肌梗死等的危险因素。目前高血脂治疗指南中最广泛应用并相对有效的西药是他汀类、贝特类及烟酸类，但是西药又有诸多不良反应，如肝脏损害、胃肠道反应等。本发明制备了一种中药成分，其具有明显的降脂活性，具有开发成降脂、治疗高脂血症药物的前景。

Description

一种中药成分的制备及在治疗高脂血症中的应用

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种中药成分的制备及在治疗高脂血症中的应用。

背景技术

高脂血症是指血液中低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、总胆固醇升高和高密度脂蛋白胆固醇过低的一种全身脂代谢异常疾病。随着人们生活水平的提高以及生活方式的改变，高脂血症的人数日益增多，发病年龄也有所提前。高血脂对人体的危害极大，是导致冠心病、脑卒中、心脏猝死、心肌梗死等的危险因素。目前高血脂治疗指南中最广泛应用并相对有效的西药是他汀类、贝特类及烟酸类，但是西药又有诸多不良反应，如肝脏损害、胃肠道反应等。祖国医学源远流长，中药在治疗高脂血症、预防心脑血管疾病等方面有独特的优势，能有效防止动脉粥样硬化的发生，且药效温和、不良反应少等，受到越来越多患者的青睐。

白芥子为十字花科白芥Sinapis alba L.的干燥成熟种子，作为我国传统中药材，具有温肺豁痰利气，散结通络止痛的功效。在现代药理研究中，白芥子及相关提取物具有治疗小儿肺炎、哮喘、咳嗽的作用，对肝癌细胞、宫颈癌具有抑制作用。

白芥子多糖为从白芥子中提取的多糖类化合物。由于多糖一级结构组成以及二级结构等高级空间结构的差异，多糖成分复杂且生物活性差别巨大。寻找多糖中真正有活性的部分虽然很难，但具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药成分的制备及在治疗高脂血症中的应用，该中药成分为从白芥子多糖中分级精制获得。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种中药成分，为一种多糖，通过如下方法制备：

取适量白芥子，用石油醚浸泡脱脂后再用水加热提取，提取液减压浓缩，加入无水乙醇调至乙醇体积分数为90％，低温静置过夜，离心收集沉淀，水复溶后冷冻干燥，得到白芥子粗多糖；取适量白芥子粗多糖，加入适量水配制成多糖溶液，离心去除不溶性杂质，在溶液中加入无水乙醇使乙醇体积分数达到30％，低温静置过夜，离心，收集上清液，加入无水乙醇使乙醇体积分数达到60％，低温静置过夜，离心，收集上清液，在上清液中加入无水乙醇使乙醇体积分数达到90％，低温静置过夜，离心收集沉淀，水复溶后冷冻干燥，即得。

优选地，水加热提取的固液比为1kg:5L。

优选地，水加热提取的温度为90℃。

更优选地，水加热提取2次，每次4小时。

优选地，离心条件为4000r/分钟离心10分钟。

优选地，低温静置过夜指4℃静置过夜。

上述任一中药成分用于制备降脂药物的用途。

上述任一中药成分用于制备治疗高脂血症的药物的用途。

有益效果：

本发明从中药白芥子中分离得到一种中药成分，该中药成分为一种90％乙醇分级多糖，通过乙醇分级醇沉(30％、60％、90％)的方法制备得到。活性研究结果表明，本发明提供的90％乙醇分级多糖具有明显的降脂活性，而其他醇沉分级多糖(30％、60％)无明显降脂活性。因此，本发明提供的中药成分具有开发成降脂、治疗高脂血症药物的前景。

附图说明

图1为各组小鼠体重统计结果(n＝10)；注：与同时间对照组相比，*表示差异显著，P<0.05；与同时间模型组相比，#表示差异显著，P<0.05；

图2为；各组小鼠肝脏重量测定结果(n＝10)；注：与对照组相比，*表示差异显著，P<0.05；与模型组相比，#表示差异显著，P<0.05；

图3为各组小鼠肝脏油红O染色结果(n＝10)；注：与对照组相比，*表示差异显著，P<0.05；与模型组相比，#表示差异显著，P<0.05；

图4为各组小鼠附睾脂肪重量测定结果(n＝10)；注：与对照组相比，*表示差异显著，P<0.05；与模型组相比，#表示差异显著，P<0.05；

图5为各组小鼠附睾脂肪H&E染色结果(n＝10)；注：与对照组相比，*表示差异显著，P<0.05；与模型组相比，#表示差异显著，P<0.05。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

1、材料与试剂

白芥子药材购自北京同仁堂有限公司(产地：安徽)，经北京中医药大学万瑾毅副教授鉴定为十字花科植物白芥Sinapis alba L.的干燥成熟种子，凭证样本存放于北京中医药大学。高脂饲料(组成：77.5％基础饲料、2％胆固醇、10％蛋黄粉、10％猪油、0.5％胆酸钠)购自斯贝福(北京)生物技术有限公司。血清总胆固醇(total cholesterol，TC)检测试剂盒、甘油三酯(triglycerides，TG)检测试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(high-densitylipoprotein cholesterol，HDL-C)检测试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(low-densitylipoprotein cholesterol，LDL-C)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。油红O染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。其他试剂(分析纯)购自国药集团化学试剂有限公司。

2、实验动物

健康C57BL/6雄性小鼠60只，6-8周龄，体重20-25g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。饲养在北京中医药大学中医药研究院实验动物中心，SPF环境，饲养环境的温度始终保持在20-25℃，相对湿度控制在50％-60％，每天光照和黑暗交替，交替时间为12小时。预适应1周后，将小鼠随机分为如下6组：对照组、模型组、白芥子多糖30％醇沉组分(BJZP-30％)组、白芥子多糖60％醇沉组分(BJZP-60％)组、白芥子多糖90％醇沉组分(BJZP-90％)组和辛伐他汀组(阳性药)。

二、实验方法

1、白芥子多糖的制备

取白芥子2000g，粉碎，室温下用石油醚浸泡脱脂2次，每次2天，回收石油醚，残渣挥发至无醚味。以水(按固液比1:5，kg:L)为提取溶剂，于90℃加热提取2次，每次4小时，合并滤液减压浓缩得浓缩液，后加入无水乙醇调至乙醇终浓度为90％，以4℃静置过夜。以4000r/分钟离心10分钟，收集沉淀，水复溶后冷冻干燥，得到白芥子粗多糖。

将白芥子粗多糖加水配制成质量分数为10％的多糖溶液，4000r/分钟离心10分钟去除不溶性杂质，在溶液中加入无水乙醇使乙醇体积分数达到30％，于4℃冰箱中醇沉过夜，以4000r/分钟离心10分钟离心分离收集多糖获得30％醇沉组分(BJZP-30％)；在上清液中再加入一定量无水乙醇，使乙醇体积分数达到60％醇沉过夜(4℃)，以4000r/分钟离心10分钟离心分离收集多糖获得60％醇沉组分(BJZP-60％)；按同样的方法，获得90％醇沉组分(BJZP-90％)。BJZP-30％、BJZP-60％、BJZP-90％分别用水复溶后冷冻干燥，备用。

2、高血脂小鼠造模

6-8周龄C57BL/6J小鼠60只，适应性喂养1周后，随机分为如下6组：

对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、BJZP-30％组(灌胃200mg/kgBJZP-30％)、BJZP-60％组(灌胃200mg/kg BJZP-60％)、BJZP-90％组(灌胃200mg/kg BJZP-90％)和辛伐他汀组(灌胃50mg/kg辛伐他汀)，每组10只。

除对照组进食常规饲料外，其余各组每日自由进食高脂饲料建立肥胖模型。各给药组以相应剂量按0.2mL/10g连续灌胃给药30天，每天1次。实验期间每日记录小鼠体重。以模型组小鼠高于对照组小鼠体重的20％作为造模成功标志。实验结束后，取各组小鼠眼眶血液，以4000r/分钟离心10分钟取上层血清，置于-80℃冰箱保存。立即处死各组小鼠，解剖台上固定好小鼠，打开腹腔，剪取肝脏、附睾脂肪并称重，置于-80℃冰箱保存。

3、小鼠血清血脂指标测定

取小鼠血清，按试剂盒说明书实验步骤检测小鼠血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的含量。

4、小鼠肝脏油红O染色

取小鼠肝组织，置于4％多聚甲醛中固定24小时。酒精梯度脱水后用石蜡包埋，切片。用油红O染色试剂盒对各组切片进行染色，实验步骤按试剂盒说明书进行。用显微镜观察小鼠肝脏脂肪染色情况并分析。

5、小鼠附睾脂肪H&E染色

取小鼠附睾脂肪组织，置于4％多聚甲醛中固定24小时。酒精梯度脱水后用石蜡包埋，切片。采用苏木素和伊红染色，脱水封片。用显微镜观察小鼠附睾脂肪染色情况并分析。

6、数据处理

实验结果均服从正态分布，数据以平均值±标准差表示，采用SPSS20.0统计软件进行单因素方差分析，P<0.05认为实验数据差异具有统计学意义。

三、实验结果

1、白芥子多糖对肥胖小鼠体重的影响

为考察白芥子多糖对肥胖小鼠体重的影响，对各组小鼠体重进行了记录，结果见图1。结果显示，自造模第15天起，模型组小鼠与对照组小鼠相比体重有显著提升(P<0.05)，随后与对照组体重差距逐渐加大；与模型组相比，自给药第25天起，BJZP-90％组小鼠体重显著降低(P<0.05)；与模型组相比，辛伐他汀组小鼠体重给药第30天呈现显著降低(P<0.05)；而BJZP-30％组和BJZP-60％组小鼠体重与同时间段模型组相比，无显著性差异。

2、白芥子多糖对肥胖小鼠血清血脂指标的影响

表1列出了各组小鼠血清血脂指标的测定结果，与对照组相比，模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C含量均显著升高(P<0.05)，HDL-C含量显著降低(P<0.05)，呈现高血脂状态；与模型组相比，BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠血清TC、TG、LDL-C含量均显著降低(P<0.05)，HDL-C含量显著升高(P<0.05)；BJZP-30％组小鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量与模型组相比几乎无差异，BJZP-60％组小鼠各血脂指标略优于模型组，但无显著性差异。上述结果表明BJZP-90％具有显著降血脂作用，而BJZP-30％、BJZP-60％均无明显降血脂作用。

因此，以BJZP-90％为测试多糖继续进行其他降脂实验。

表1各组小鼠血清血脂指标检测结果(n＝10，mM)

3、白芥子多糖对肥胖小鼠肝脏重量及脂肪组织含量的影响

在以上研究的基础上，重点考察BJZP-90％对肥胖小鼠肝脏的影响。分别称量对照组、模型组、BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠肝脏的重量，结果如图2所示，与对照组相比，模型组小鼠肝脏重量显著增加(P<0.05)，与模型组相比，BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠肝脏重量显著降低(P<0.05)，表明BJZP-90％能够显著降低肥胖小鼠的肝脏重量。此外，肝脏油红O染色结果和量化分析表明，与对照组小鼠相比，模型组小鼠肝脏细胞散在大量脂滴；与模型组相比，BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠肝细胞间散在脂滴显著降低(图3)，说明BJZP-90％能够显著降低肥胖小鼠的肝脏脂肪含量。

4、白芥子多糖对肥胖小鼠附睾脂肪重量及脂肪组织含量的影响

小鼠的附睾脂肪分布较为集中，且结构完整易取材。对照组、模型组、BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠附睾脂肪称重结果如图4所示，与对照组相比，模型组小鼠附睾脂肪重量显著增加(P<0.05)，与模型组相比，BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠附睾脂肪重量显著降低(P<0.05)，表明BJZP-90％能够显著降低肥胖小鼠的附睾脂肪重量。附睾脂肪的H&E染色结果和量化分析如图5所示，在相同放大倍数下，与对照组小鼠相比，模型组小鼠附睾脂肪细胞尺寸明显增大；与模型组相比，BJZP-90％组和辛伐他汀组小鼠附睾脂肪细胞大小均匀且尺寸较小，说明BJZP-90％能够显著降低肥胖小鼠的附睾脂肪含量。

上述实验结果表明，白芥子90％乙醇分级多糖具有明显的降脂活性，而其他醇沉分级多糖(30％、60％)无明显降脂活性。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims

1.一种中药成分，为一种多糖，其特征在于，通过如下方法制备：

取适量白芥子，用石油醚浸泡脱脂后再用水加热提取，提取液减压浓缩，加入无水乙醇调至乙醇体积分数为90%，低温静置过夜，离心收集沉淀，水复溶后冷冻干燥，得到白芥子粗多糖；取适量白芥子粗多糖，加入适量水配制成质量分数为10%的多糖溶液，离心去除不溶性杂质，在溶液中加入无水乙醇使乙醇体积分数达到30%，低温静置过夜，离心，收集上清液，加入无水乙醇使乙醇体积分数达到60%，低温静置过夜，离心，收集上清液，在上清液中加入无水乙醇使乙醇体积分数达到90%，低温静置过夜，离心收集沉淀，水复溶后冷冻干燥，即得；其中：水加热提取的固液比为1kg:5L；水加热提取的温度为90℃；水加热提取2次，每次4小时；低温静置过夜指4℃静置过夜。

2.根据权利要求1所述的中药成分，其特征在于：离心条件为4000r/分钟离心10分钟。

3.权利要求1或2所述的中药成分用于制备降脂药物的用途。

4.权利要求1或2所述的中药成分用于制备治疗高脂血症药物的用途。