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CN1163599C - 抗gpiib/iiia重组抗体 - Google Patents

抗gpiib/iiia重组抗体 Download PDF

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CN1163599C CNB988071630A CN98807163A CN1163599C CN 1163599 C CN1163599 C CN 1163599C CN B988071630 A CNB988071630 A CN B988071630A CN 98807163 A CN98807163 A CN 98807163A CN 1163599 C CN1163599 C CN 1163599C
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Abstract

本发明涉及编码针对血小板膜蛋白的人自身抗体和抗独特型抗体的新型核酸序列，本发明还涉及人抗体新的氨基酸序列，以及上述核酸序列和氨基酸序列诊断和治疗疾病的用途。

Description

抗GPIIB/IIIA重组抗体
描述
本发明涉及新的核酸序列，该序列编码针对血小板膜蛋白的人自身抗体并编码抗独特型抗体，本发明还涉及人抗体新的氨基酸序列，以及上述核酸序列和氨基酸序列在诊断和治疗疾病中的用途。
自身免疫性血小板减少性紫癜(AITP)是免疫病，其特征在于与正常或升高的巨核细胞生成相关的血小板数目降低。因抗血小板自身抗体的存在使得网状内皮系统(脾，肝脏和骨髓)中的血小板破坏增加。可在约75％AITP患者中检测到的这些自身抗体绝大多数针对的是血小板膜糖蛋白(GP)IIb/IIIa和Ib/IX。在一个和相同的患者中可发现几种不同的自身抗体特异性(参见Berchtold和Wenger，血液81(1993)，1246-1250；Kiefel等，英国血液学杂志，79(1991)，256-262；McMillan等，血液70(1987)，1040和Fujisawa等，血液79(1991)；1441)。然而，由于从AITP患者得到的自身抗体的量有限，目前仍难以鉴定结合表位并确定自身抗体的致病重要性。使用杂交瘤技术(Kunicki等，人抗体杂交瘤1(1990)83-95)仅能从AITP患者的淋巴细胞中得到一些可与GPIIb/IIIa AIPT反应的人单克隆抗体。
据报道，健康个体中也存在抗多种自身抗原的天然自身抗体，例如抗人血小板的细胞内和细胞骨架成分的自身抗体(Guilbert等，免疫学杂志，128(1982)，2779-2787；Hurez等，欧洲免疫学杂志，23(1993)，783-789和Pfueller等，临床实验免疫学，79(1990)，367-373)。健康个体血清中存在的一些自身抗体也可抗血小板膜蛋白(Souberbielle，欧洲血液学杂志，56(1996)，178-180)。然而，这些天然自身抗体的作用及其与疾病相关性自身抗体的关系仍是未知的。
皮质类固醇可用于治疗AITP，约一半患者在4周内对服用强的松产生反应；然而，长期减轻症状很少见。静脉内施用高剂量的免疫球蛋白(IVIgG)被推荐用于紧急治疗表现出严重出血或血小板数目极低的患者。大多数患者在接受这一治疗之后，血小板数目快速地，但通常为瞬时地增加。皮质类固醇和IVIgG在治疗AITP中的作用机理仍是未知的。Berchtold等(血液74(1989)，2414-2417和Berchtold和Wenger，血液81(1993)，1246-1250)进行的研究揭示出IVIgG中存在的抗独特型抗体可抑制自身抗体与血小板糖蛋白的结合。
本申请需解决的问题是鉴定新的DNA序列，该序列负责自身抗体与GPIIb/IIIa的结合。可使用此方法制备可用的新型药物制品，该制品可用于改善AITP的诊断和治疗。
令人惊奇地是：使用健康人供体的外周循环B细胞制备人抗体重链和轻链的组合噬粒展示文库之后，可以鉴定自身抗体的结合序列。人抗体重链和轻链Fab片断展示于丝状噬菌体M13的表面之后，可以鉴定出对GPIIb/IIIa表现出特异性结合的噬菌体克隆。
为此，将噬粒文库连续地与缺乏GPIIb/IIIa的血小板机能不全的血小板(负选择)和正常的血小板(正选择)接触。几轮选择和通过感染大肠杆菌进行扩增之后，得到23个克隆，它们能与GPIIb/IIIa复合物结合。使用针对GPIIb/IIIa的单克隆抗体库进行抑制研究，产生两组克隆：两组都被特异于GPIIb/IIIa复合物的单克隆抗体抑制，一组还被GPIIb特异性的单克隆抗体抑制。对克隆进行DNA分析，显示出2种不同的抗GPIIb/IIIa噬菌体克隆的存在，这进一步证实了上述发现。这些结果表明可从健康个体的基因组克隆2种GPIIb/IIIa特异性的噬菌体克隆，即自身抗体，这些克隆能识别属于GPIIb/IIIa复合物的构象表位。抑制研究还确定了两种噬菌体克隆都能抑制AITP患者的血小板相关性自身抗体与纯化的GPIIb/IIIa的结合，因此可能识别与AITP相关的GPIIb/IIIa表位。由于噬菌体克隆含有得自健康个体基因组之天然自身抗体的抗原结合序列，因此，此发现可导致对AITP中血小板相关性自身抗体的新认识。
另外，将抗GPIIb/IIIa噬菌体克隆用作抗原，可以使用这些新的噬菌体克隆产生针对抗GPIIb/IIIa自身抗体的重组型抗独特型抗体。以此方法得到的重组型抗独特型抗体构成了令人感兴趣的临床方法，可以替代IVIgG的使用。
序列表SEQ ID NO：1-8(自身抗体)和SEQ ID NO：9-18(抗独特型抗体)中显示了所鉴定的噬菌体克隆的核苷酸序列和由这些核苷酸序列推定的氨基酸序列。
I.自身抗体
本发明的第一方面涉及编码自身抗体的核酸，因此，本发明的部分主题是编码人抗体重链或其功能衍生物或其片断，包含选自下组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
VLPFDPISMDV                              (I)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
ALGSWGGWDHYMDV                           (II)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列，和
(d)编码具有同等的与GPIIb/IIIa结合之能力的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR1区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
GYSWR                                   (III)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
SYAMH                                   (IV)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR2区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
DISYSGSTKYKPSLRS                      (V)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
VISYDGSNKYYADSVKG                     (VI)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
本发明的第二方面是编码人抗体轻链或其功能衍生物或其片断，包含选自下组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
ATWDDGLNGPV                           (VII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
AAWDDSLNGWV                           (VIII)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列，和
(d)编码具有同等的与GPIIb/IIIa结合之能力的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR1区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
SGSSSNIRSNPVS                         (IX)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
SGSSSNIGSNTVN                         (X)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸含有选自下组的CDR2区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
GSHQRPS                               (XI)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
SNNQRPS                               (XII)
(c)编码与(a)或(b)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
II.抗独特型抗体
本发明的第二方面涉及编码抗独特型抗体的核酸，因此，本发明的部分主题是编码人抗体重链或其功能衍生物或其片断、包含选自下组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
VRDLGYRVLSTFTFDI                     (XIII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
DGRSGSYARFDGMDV                      (XIV)
(c)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
MGSSVVATYNAFDI                       (XV)
(d)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
DADGDGFSPYYFPY                       (XVI)
(e)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
LRNDGWNDGFDI                         (XVII)
(f)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
DSETAIAAAGRFDI                       (XVIII)
(g)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
EDGTTVPSQPLEF                        (XIX)
(h)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
GSGSYLGYYFDY                         (XX)
(i)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
GLRSYNYGRNLDY                        (XXI)
(j)编码与(a)，(b)，(c)或(d)中的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列，
(k)编码具有同等的与抗GPIIb/IIIa的自身抗体结合之能力的氨基酸序列的核苷酸序列。
该新的核酸还优选含有CDR1区域，其选自：编码表7a所示氨基酸序列NFAMS，SYTMH，DYALH或SHYWS的核苷酸序列，编码氨基酸序列TYYWS的核苷酸序列，编码表7b所示氨基酸序列DYGMH，SHTIS，KYAIH或ELSMH的核苷酸序列和编码与上述氨基酸序列之一具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
该新的核酸还优选含有选自下组的CDR2区域：
编码表7a所示下述氨基酸序列GISGGGLLTHYA(D/N)SVKG，
LISYDGSNKYYADSVKG，
GISWDSTSIGYADSVKG或
FIYDGARTRFNPSLRS
的核苷酸序列；
编码氨基酸序列YIYYSGNTNYNPSLKS的核苷酸序列；
编码表7b所示下述氨基酸序列
AISYDGSNKYYADSVKG，
GITPIFGTVNYAQKFQG，
AISSNGGNTYYADSVKG或
GFDPEDGETIYAQKFQG
的核苷酸序列；和编码与上述氨基酸序列之一具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
本发明的另一部分主题是编码人抗体轻链或其功能衍生物或其片断、包含选自下组的CDR3区域的核酸：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
CSYVHSSTN                           (XXII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
QVWDNTNDQ                           (XXIII)
(c)编码与(a)或(b)的氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列，和
(d)编码具有同等的与抗GPIIb/IIIa的自身抗体结合之能力的氨基酸序列的核苷酸序列。
优选该新的核酸还含有选自下述的CDR1区域：编码表7a所示氨基酸序列TGTSSAIGNYNFVP的核苷酸序列，编码表7b所示氨基酸序列GGYKIGSKSVH的核苷酸序列和编码与上述氨基酸序列具有至少80％、优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
另外，优选该新的核酸还含有选自下述的CDR2区域：编码表7a所示氨基酸序列EGSKRPS的核苷酸序列，编码表7b所示氨基酸序列EDSYRPS的核苷酸序列和编码与上述氨基酸序列具有至少80％，优选至少90％同源性的氨基酸序列的核苷酸序列。
在本发明的意义上，术语“人抗体链的功能性衍生物”指的是至少包括上文所定义的重链和/或轻链CDR3区域的多肽，适当时，该多肽与人抗体的相关互补链(或该链的衍生物)一起能形成抗体衍生物，该衍生物对抗原具有等同于非衍生化抗体所具有的识别特异性。优选这种抗体衍生物对相关抗原的结合常数至少为10-6l/mol，优选为至少10-8l/mol。
通过例如使用重组DNA技术缺失，取代和/或插入编码相关多肽的基因区段可制备人抗体链的功能衍生物。
单链抗体可由例如H和L链的可变区或者一个或两个H链结构域组成，适当时还可具有恒定区，这是特别优选的抗体链或抗体功能衍生物。这种构建体的制备描述于Hoogenboom等，免疫学评论，130(1992)，41-68；Barbas III，Methods：Companion MethodsEnzymol，2(1991)，119和Pluckthun，免疫化学(1994)，MarcelDekker Inc.，第9章，210-235。
在本发明的意义上，术语“同等的结合能力”指的是结合亲和性和/或特异性(即表位识别)与具体公开序列所具有的相同。
本发明的另一部分主题是含有至少1拷贝新核酸的载体，此载体可以是原核载体或真核载体。质粒，粘粒和噬菌体是原核载体的例子，这种载体详细描述于例如Sambrook等，分子克隆，实验室手册，第2版(1989)，冷泉港实验室出版社的第1-4章中。优选原核载体为质粒或噬菌体。
另一方面，载体也可以是真核载体，例如酵母载体，昆虫载体(杆状病毒)或哺乳动物载体(质粒载体或病毒载体)。真核载体的例子描述于Sambrook等，文献同上，第16章和Winnacker，基因和克隆，EineEinfuhrung fur die Gentechnologie[基因和克隆，基因工程导言](1985)，VCH Verlagsgesellschaft，尤其是第5，8和10章。
本发明的另一部分主题是表达新核酸的细胞，或被新核酸或新载体转化的细胞。细胞可以是原核细胞(如革兰氏阴性细菌细胞，尤其是大肠杆菌)或真核细胞(如酵母，植物或哺乳动物细胞)。适当细胞和将新核酸导入这种细胞的方法的例子见于上述参考文献中。
本发明的另一部分主题是由新核酸编码的多肽，尤其是重组多肽。特别优选多肽含有人抗体H链和/或L链的可变区。
特别优选的是表现出抗体特性，其亚单位成分是重链或其功能衍生物和轻链或其功能衍生物的多肽。该多肽可由两个独立的链组成或以单链多肽的形式存在。
本发明的另一部分主题是抗新多肽的抗体，所述抗体针对的是负责识别抗原的多肽区域。此抗体可以是多克隆的抗血清，单克隆抗体或者多克隆或单克隆抗体的片断(如Fab，F(ab)2，Fab’或F(ab’)2片断)。优选此抗体针对的是新多肽抗体之重链和/或轻链CDR3区域，或其部分区域。通过用含有新CDR3区域的肽或多肽免疫实验动物，并从实验动物中分离所得的多克隆抗体，即可使用已知方法得到这种抗体。另外，根据Kohler和Milstein的方法或其改良方法，通过将实验动物中产生抗体的B细胞与白血病细胞融合可得到单克隆抗体。另外，通过以新多肽为抗原，筛选适当的噬粒文库，例如健康人供体的噬粒文库，也可得到针对新多肽CDR3区域的重组抗体。
本发明还涉及药物组合物，其含有上述核酸、载体、多肽、抗体或细胞作为有效成分，适当时还添加有其它活性成分和药学上常用的佐剂、添加剂或赋形剂。
该药物组合物可用于制备诊断或治疗剂。诊断用途的例子是诊断AITP或AITP诱因。另一个优选的诊断用途是监测AITP疾病的进程。
该药物组合物作为诊断剂的用途包括例如检测将新多肽表达为抗体的B细胞亚群。通过核酸杂交试验(适当时需先进行扩增)可在核酸水平上检测此抗体。另一方面，通过使用抗原或与多肽特异性反应的抗体进行的免疫测定法可在蛋白质水平上检测此抗体。
另外，该新的药物组合物也可用于治疗领域，尤其是预防或治疗AITP。此治疗用途可基于例如刺激抗自身抗体之抗体的产生。为此，可给患者施用新的自身抗体多肽，从而引发和/或刺激抗独特型抗体的形成。在此方面，根据常规的免疫方法即可进行给药(Fox等，J.Pharmacol.Exp.Ther.279(1996)，1000-1008；Whittum-Hudson等，天然药物2(1996)，1116-1121；Jardieu，免疫学最新观点，7(1995)，779-782)。另一方面，通过施用适当的反义核酸可特异性地抑制抗体基因的表达。可给患者施用该新的抗独特型抗体多肽以直接抑制自身抗体的活性。
对新的自身抗体多肽的研究表明：这些多肽令人惊奇地可抑制血纤蛋白原与血小板的结合，因此，新的自身抗体多肽和抗独特型抗体多肽(适当时可联合使用这两种多肽)可在心肌梗塞或中风，或静脉形成血栓并发肺栓塞或局部缺血等之后用作调节血液凝结，尤其是预防血栓的药剂。
鼠单克隆抗体，如单克隆抗体7E3(参见美国专利5440020)或其片断(如可商购的Fab片断ReoPro)，或短的合成肽已被用作血纤蛋白原的拮抗剂以用于治疗的目的。然而，鼠单克隆抗体和抗体片断的缺点在于具有免疫原性，当用于治疗人患者时会产生不必要的副反应，而短肽一般会很快地降解。与已知的药剂相比，该新多肽的优点在于它们由来源于人的氨基酸序列组成，因此表现出的不必要的副作用比相应的鼠抗体或抗体片断的小，而由于其大小比肽大，因此它不会象肽那样快速地降解。
因此，本发明涉及新的核酸、尤其是编码自身抗体多肽的核酸、含有此核酸的载体、被上述核酸或载体转化的细胞，由核酸编码的多肽、含有一种或多种上述物质的药物组合物用于制备影响尤其是抑制血纤蛋白原与血小板之结合的药剂的用途。优选使用药剂调节血液凝结，尤其是溶解血栓和/或防止血栓形成。根据已建立的鼠抗体或抗体片断的施用方法可施用该新的药物组合物。
本发明的另一部分主题是分离表达核酸的噬粒克隆的方法，所述核酸编码抗GPIIb/IIIa之自身抗体或编码针对这些自身抗体的抗独特型抗体，所述方法的特征在于由人供体的淋巴细胞制备噬粒文库，通过亲和选择，包括负和正选择步骤分离所需的噬粒克隆。优选此方法还包括从克隆中分离编码抗体的核酸和/或使用编码抗体的核酸表达重组的抗体链或其衍生物或其片断。
下列实施例、图和序列表也对本发明作出解释，其中
SEQ ID NO.1表示新抗体(噬粒克隆PDG7)H链的核苷酸序列，其中H链构架区(FR)1从bp1延伸至90，互补决定区(CDR)1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至195，FR3为bp196至291，CDR3为bp292至324，FR4为bp325至357。
SEQ ID NO.2表示对应于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至65，FR3为AA66至97，CDR3为AA98至108，FR4为AA109至119。
SEQ ID NO.3表示新多肽(噬粒克隆PDG7)L链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至60，CDR1为bp61至99，FR2为bp100至144，CDR2为bp145至165，FR3为bp166至261，CDR3为bp262至294，FR4为bp295至333。
SEQ ID NO.4表示对应于SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至33，FR2为AA34至48，CDR2为AA49至55，FR3为AA56至87，CDR3为AA88至98，FR4为AA99至111。
SEQ ID NO.5表示新多肽(噬粒克隆PDG13)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至109，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至336，FR4为bp337至369。
SEQ ID NO.6表示对应于SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至112，FR4为AA113至123。
SEQ ID NO.7表示新多肽(噬粒克隆PDG13)L链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至60，CDR1为bp61至99，FR2为bp100至144，CDR2为bp145至165，FR3为bp166至261，CDR3为bp262至294，FR4为bp295至333。
SEQ ID NO.8表示对应于SEQID NO.7所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至33，FR2为AA34至48，CDR2为AA49至55，FR3为AA56至87，CDR3为AA88至98，FR4为AA99至111。
SEQ ID NO.9表示新多肽(噬粒克隆AI-X16)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至288，CDR3为bp289至336，FR4为bp337至369。
SEQ ID NO.10表示对应于SEQ ID NO.9所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至96，CDR3为AA97至112，FR4为AA113至123。
SEQ ID NO.11表示新多肽(噬粒克隆AI-X16)L链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至60，CDR1为bp61至102，FR2为bp103至147，CDR2为bp148至168，FR3为bp169至264，CDR3为bp265至291，FR4为bp292至375。
SEQID NO.12表示对应于SEQ ID NO.11所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至34，FR2为AA35至49，CDR2为AA50至56，FR3为AA57至88，CDR3为AA89至97，FR4为AA98至125。
SEQ ID NO.13表示新多肽(噬粒克隆AI-X20)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至195，FR3为bp196至291，CDR3为bp292至333，FR4为bp334至366。
SEQID NO.14表示对应于SEQ ID NO.13所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至65，FR3为AA66至97，CDR3为AA98至111，FR4为AA112至122。
SEQ ID NO.15表示新多肽(噬粒克隆AI-X39)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至339，FR4为bp340至372。
SEQ ID NO.16表示对应于SEQ ID NO.15所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至113，FR4为AA114至124。
SEQ ID NO.17表示新多肽(噬粒克隆AI-X40)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至297，CDR3为bp298至339，FR4为bp340至372。
SEQ ID NO.18表示对应于SEQ ID NO.17所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至99，CDR3为AA100至113，FR4为AA114至124。
SEQ ID NO.19表示新多肽(噬粒克隆AI-X2)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至195，FR3为bp196至291，CDR3为bp292至327，FR4为bp328至360。
SEQ ID NO.20表示对应于SEQ ID NO.19所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至65，FR3为AA66至97，CDR3为AA98至109，FR4为AA110至120。
SEQ ID NO.21表示新多肽(噬粒克隆AI-B14)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至336，FR4为bp337至369；
该序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第9位可以是G，第13位为G，15位为G，91位为A，92位为G，98位为C，149位为T，205位为A，228位为A，251位为A，253位为T和/或284位为A。变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ ID NO.22)中第3位可以为Q，而第5位为V，31位为S，33位为A，50位为V，69位为T，76位为K，84位为N，85位为S和/或95位为Y。
SEQ ID NO.22表示对应于SEQ ID NO.21所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至112，FR4为AA113至123。
SEQ ID NO.23表示新多肽(噬粒克隆AI-B18)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至333，FR4为bp334至366；
该核苷酸序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第13位可以是G，第16位为C，56位为A，94位为T，97位为G，155位为T，173位为C，223位为T，252位为T或C，261位为G，267位为G，271位为A，275位为C和/或277位为G。变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQID NO.24)中第3位可以为Q，而第5位为V，6位为Q，19位为K，32位为Y，33位为A，52位为I，58位为A，75位为S，84位为S，87位为R，89位为E，91位为T，92位为A和/或93位为V。
SEQ ID NO.24表示对应于SEQ ID NO.23所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至111，FR4为AA112至122。
SEQ ID NO.25表示新多肽(噬粒克隆AI-B24)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至330，FR4为bp331至363；
该核苷酸序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第9位可以是G，第13位为G，15位为G，31位为G，46位为A，67位为G，89位为G，92位为G，93位为C，98位为G，102位为G，140位为G，141位为G，145位为G，149位为T，157位为T，158位为A，160位为G，166位为A，173位为A，235位为T，251位为A，290位为C和/或293位为A。变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ ID NO.26)中第3位为Q，而第5位为V，11位为V，16位为R，23位为A，30位为S，31位为S，33位为G，34位为M，47位为W，49位为A，50位为V，53位为Y，54位为D，56位为S，58位为K，79位为L，84位为N，97位为A和/或98位为K。
SEQ ID NO.26表示对应于SEQ ID NO.25所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至110，FR4为AA111至121。
SEQ ID NO.27表示新多肽(噬粒克隆AI-B24)L链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至60，CDR1为bp61至96，FR2为bp97至138，CDR2为bp139至159，FR3为bp160至255，CDR3为bp256至282，FR4为bp283至366；
该核苷酸序列中可见下列变异：第4位可以是C或T，而第37位可以是G，第40位为A，50位为G，67位为A，72位为T，133位为A，136位为T，138位为T或C，148位为G，160位为T，161位为T，162位为T或C，200位为C，217位为T，218位为G，220位为A或C，269位为G，271位为T，272位为G，275位为G和/或282位为T或C。变异的结果是相应氨基酸序列(参见SEQ ID NO.28)中第2位为L，而第13位为G，14位为K，17位为R，23位为N，24位为N，45位为I，47位为Y，50位为D，54位为F，67位为T，73位为S，74位为R，90位为S，91位为S，92位为S和/或94位为H。
SEQ ID NO.28表示对应于SEQ ID NO.27所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至20，CDR1为AA21至32，FR2为AA33至46，CDR2为AA47至53，FR3为AA54至85，CDR3为AA86至94，FR4为AA95至122。
SEQ ID NO.29表示新多肽(噬粒克隆AI-B38)H链的核苷酸序列，其中FR1从bp1延伸至90，CDR1为bp91至105，FR2为bp106至147，CDR2为bp148至198，FR3为bp199至294，CDR3为bp295至333，FR4为bp334至366；
该核苷酸序列中可见下列变异：第7位可以是C，而第9位可以是G，第13位为G，15位为A和/或16位为C。变异的结果是相应的氨基酸序列中第3位为Q，而第5位为V和/或第6位为Q。
SEQ ID NO.30表示对应于SEQ ID NO.29所示核苷酸序列的氨基酸序列，其中FR1从AA1延伸至30，CDR1为AA31至35，FR2为AA36至49，CDR2为AA50至66，FR3为AA67至98，CDR3为AA99至111，FR4为AA112至122。
图1显示出因加入抗独特型抗体phab AI-X17而使自身抗体phab(PDG-X)与GPIIb/IIIa的结合受到抑制。
图2显示出因加入抗独特型抗体phab AI-B而使自身抗体phab(PDG-B)与血小板的结合受到抑制。
图3显示出自身抗体phab与未经处理的和经EDTA处理的血小板的结合。
图4显示出由自身抗体phab引起的对血纤蛋白原与GPIIb/IIIa结合的抑制作用。
图5-7显示出由抗体7E3和抗体片断ReoPro引起的对自身抗体phab与GPIIb/IIIa结合的抑制作用。
实施例
1.鉴定自身抗体序列
1.1.分离自身抗体
自身抗体得自12个AITP患者(8个患原发性AITP，3个患与SLE相关的AITP，1个患与斯耶格伦综合征相关的AITP)，制备方法如下：4℃下将患者血浆与纯化的GPIIb/IIIa保温过夜，随后于室温下用0.2mol/l甘氨酸和0.15mol/l NaCl，pH2.5洗脱15分钟。100,000g离心30分钟之后，用1mol/l Tris-HCl中和上清液，对Tris缓冲的盐溶液(TBS)透析过夜。
提取血浆时，所有患者皆为血小板减少症(血小板数目＜150×109/l)，其骨髓中的巨核细胞正常或增大，没有其它可测形式的免疫性血小板减少症。
1.2.分离纯化的抗原
所用抗原为纯化的GPIIb/IIIa，它是GPIIIa的胞质片断(氨基酸721-744)和GPIIIa的细胞外片断(氨基酸468-690)(Beardsley，Blut59(1989)，47-51和Phillips等，酶学方法，215(1992)，244-263)。
1.3.分离血小板以用于淘选和免疫印迹
通过差速离心取自健康人供体的经EDTA抗凝结的血样来制备富含血小板的血浆。通过2000g离心15分钟分离出血小板，然后用含有50mmol/l柠檬酸钠，100mmol/l NaCl和125mmol/l葡萄糖的柠檬酸缓冲液(pH6.2)洗涤6次，最后重新悬浮于相同缓冲液中。
使用相同的富集方法从患有格兰茨曼I型血小板功能不全病的14岁男孩体内得到功能不全的血小板。
1.4.单克隆抗体
使用了识别复合形式的GPIIb/IIIa的鼠单克隆抗体和选择性识别GPIIb或GPIIIa的抗体。这些抗体是使用相应的抗原，通过常规的免疫方法分离得到的，它们与AITP不相关。所述抗体的分离描述于Kouns等(生物化学杂志267(1992)，18844-18851)，Steiner等(Biochim.Biophys.Acta 1119(1992)，12-21)和Haring等(美国国家科学院院报82(1985)，4837-4841)。
1.5.噬粒文库
使用得自健康、预先免疫过的人供体的外周血淋巴细胞，根据Vogel等(欧洲免疫学杂志，24(1994)，1200-1207)所述的方法制备组合Fab文库。除了Taq聚合酶(Perkin Elmer，NJ，USA)外，所有酶和寡核苷酸都得自Boehringer Mannheim GmbH(Mannheim，德国)。通过PCR扩增Fab分子H和L链的引物，VCSM13辅助噬菌体和大肠杆菌菌株XL-Blue都得自Stratacyte(La Jolla，CA，美国)。噬粒pComb3得自Scripps Research Institute(La Jolla，CA，美国)。按BarbasIII和Lerner(Methods：Companion Methods Enzymol，2(1991)，119)所述进行克隆，转化至XL-Blue细胞和制备phab。用4％(w/v)聚乙二醇8000和3％(w/v)NaCl沉淀phab，重新悬浮于PBS，pH7.4中。所得表达文库含有1×107特异性。
1.6.分离GPIIb/IIIa特异性phab
利用总共5轮亲和选择(“淘选”)制备GPIIb/IIIa特异性phab。用5×107个功能不全的血小板预吸附(负选择)之后，将phab与108个正常的血小板一起保温45分钟(正选择)。然后用0.05mol/l柠檬酸钠，pH2.5洗脱结合的phab，并用1mol/l Tris缓冲液中和。每一轮淘选之后，通过滴定噬菌体集落形成单位监测GPIIb/IIIa特异性phab的富集。5轮选择之后，发现洗脱的phab被富集了100倍以上。
更仔细地分析第4轮选择之后所得phab库的GPIIb/IIIa特异性。为此，随机选择40个phab克隆，在免疫斑点试验中确定其结合特异性。将1微升正常的和功能不全的血小板(109个/ml)，以及纯化的GPIIb/IIIa(500μg/ml)滴加至硝酸纤维素条上(Millipor公司，Bedford，MA，美国)。将条置于含0.15％酪蛋白的TBS(TBS-酪蛋白)中封闭，然后与用TBS-酪蛋白稀释的phab一起保温过夜。用TBS-0.1％吐温20(TBS-吐温)洗涤3次后，与用TBS-酪蛋白稀释1000倍的辣根过氧化物酶缀合的多克隆兔抗噬菌体抗体(Vogel等，文献同上)保温之后，用4-氯-1-α-萘酚(Merck，Darmstadt，德国)检测结合的phab。
还检测了滴加前通过加热(70℃)或酸处理(0.5N HCl，pH2)变性蛋白质之后phab与血小板和纯化的GPIIb/IIIa的结合。
在40个随机选择的克隆中，23个(57.5％)与GPIIb/IIIa反应，而17个未表现出任何结合。保温前通过加热或pH2处理变性抗原之后，未观察到抗GPIIb/IIIa与phab的结合，从而阐明phab的结合需要完整的GPIIb/IIIa。在阴性phab中检测Fab的存在情况揭示出15个克隆(88％)不含任何Fab分子。2个不与GPIIb/IIIa结合的Fab阳性克隆对GPIIb/IIIa可能有低结合亲和性。
1.7.Fab分析
为了检测阳性phab的κ，λ和Fd链，将抗GPIIb/IIIa phab滴加至硝酸纤维素上，将滤膜与已用TBS-酪蛋白稀释1000倍的经过氧化物酶标记的小鼠抗人λ，κ(The Binding Site Limited，Birmingham，英国)和Fd抗体(得自HP6045杂交瘤细胞系，ATCC1757，Rockville，MD，美国)保温4小时，然后通过化学发光法(ECL，Amersham，Switzerland，Zurich，Switzerland)显色。检测15个随机选择的抗GPIIb/IIIa Fab克隆的κ，λ和Fd链，结果表明Fd链存在于12个克隆(80％)中，而λ链存在于所有克隆中。
通过将集中的phab与多种浓度的血小板一起预保温以定量测定Fab与血小板上GPIIb/IIIa的结合。然后通过免疫斑点法分析上清液。在此方面，确定每个血小板结合1-3×104个phab。这表明每个血小板上约10-50％GPIIb/IIIa分子可以被phab占据。
1.8.鉴定phab结合表位
通过使用多种单克隆抗体(见1.4.)进行抑制试验来测定phab的表位特异性。在双份重复试验中，各将1微升融化的正常和功能不全的血小板(109个/ml)，纯化的GPIIb/IIIa(500μg/ml)，GPIIIa的肽片断(氨基酸468-690，500μg/ml)和GPIIb/IIIa的胞质区段(500μg/ml)滴加至硝酸纤维素条上。封闭后，将phab克隆(0.4μg/mlFab)在加或不加单克隆抗体(1μg/ml)的情况下保温过夜。使用经过氧化物酶标记的抗噬菌体抗体和4-氯-1-α-萘酚检测结合的phab。
在这些研究中鉴定出两组phab克隆，A组(5个克隆)被所有抗体的汇集物中度抑制，但被GPIIb/IIIa复合物特异性抗体强烈抑制。抗GPIIb抗体没有反应。B组(10个克隆)被所有抗体的汇集物完全抑制，但被复合物特异性抗体和IIb特异性抗体抑制的程度较低。两组与GPIIIa特异性的抗体都未表现出反应。使用血小板或纯化的GPIIb/IIIa作为抗原也得到相同的结果。未发现phab与胞质肽或GPIIIa的胞外片断结合。
这些结果概述于表1。
表1
                                       抑制phab结合(平均值±SD，％)
用于抑制的单克隆抗体群            A组phab克隆(n＝5)           B组phab克隆(n＝10)
    血小板     纯化的GPIIb/IIIa     血小板     纯化的GPIIb/IIIa
(1)Anti-GPIIB     0     0     49.1±5.9     49.4±9.2
(2)Anti-GPIIIa     0     0     0     0
(3)Anti-GPIIb/IIIa复合物     77.8±2.9     43.6±2.1     58.6±4.4     45.5±8.0
所有抗体的汇集物(1)-(3)     47.6±7.7     33.0±10.8     95.9±2.7     97.5±7.5
1.9.抑制试验
通过抑制试验测定抗GPIIb/IIIa phab对患者自身抗体与GPIIb/IIIa结合的封闭作用。为此，使用两个按上文所述鉴定的phab克隆(PDG16和PDG31)。
从1∶3至1∶1000连续稀释洗脱的患者自身抗体，分析其与纯化的GPIIb/IIIa的结合。通过免疫斑点试验可以实现此目的。在3份重复试验中，各将100ng纯化的GPIIb/IIIa滴加至硝酸纤维素条上，然后用TBS-酪蛋白封闭滤膜。为了用phab封闭AITP自身抗体与GPIIb/IIIa的结合，将滤膜条与1011个phab保温1小时，然后与不同稀释度的AITP自身抗体保温4小时。使用经过氧化物酶标记的抗人IgG-Fc抗体和ECL检测结合的自身抗体。
抗GPIIb/IIIa phab抑制得自8个AITP患者的自身抗体的结合。对PTG16，PTG31和两种phab的汇集物的抑制范围分别为10至46％，32至60％和20至67％。这些phab对得自4个AITP患者的自身抗体的结合没有影响。两组都含有得自原发性AITP患者和与疾病相关之AITP患者的自身抗体。
所得结果概述于表2。
表2
    对纯化的GPIIb/IIIa之结合的抑制作用(％)
  AITP患者     Phab克隆PDG16     Phab克隆PDG31     两个Phab克隆的汇集物
  WS16     13     19     40
  WS37     14     20     36
  KC     24     22     28
  KK     22     22     40
  KP     10     36     60
  WS2     25     55     65
  KS     60     56     64
  KL     0     15     10
  KG     0     0     0
  KM     0     0     0
  KE     0     0     0
  KR     0     0     0
1.10.DNA序列分析
使用NukleobondAX PC 20纯化试剂盒(Macherey-Nagel AG，Oensingen，Switzerland)从4个A组phab克隆和4个B组phab克隆中纯化质粒DNA。
使用PRISM Ready Reaction DyeDeoxy Terminator CycleSequencing试剂盒，在ABI373A测序系统上进行核酸测序。引物得自Microsynth，Balgach，Switzerland。使用下列引物测定H链的序列：Chγ1(5’-CGC TGT GCC CCC AGA GGT-3’)和PCH(5’-GGC CGC AAA TTC TATTTC AAG G-3’)。使用下列引物测定L链的序列：cλ(5’-GAG ACA CACCAG TGT GGC-3’)，Ck(5’-CAC AAC AGA GGC AGT TCC-3’)和PCL(5’-CTAAAC TAG CTA GTC TCC-3’)。将由DNA序列推定的氨基酸序列与GenEMBL-Genbank相比较，株系被定为VH和Vλ家族。
通过自动测序分析各组中的4个phab克隆(A组：PDG7，PDG8，PDG10和PDG16；B组：PDG13，PDG17，PDG31和PDG37)的VH和Vλ核苷酸序列，并与已知株系的基因序列相比较(表3和4)。各组中H和L链推定的氨基酸序列之间有100％的同源性。与之形成对照的是，A组和B组H链氨基酸序列之间的同源性仅为36.9％，L链氨基酸序列之间的同源性为81.9％。
就H链而言，A组克隆与VH4家族株系基因VH4.11(Sanz等，EMBOJ.8(1989)，3741-3748)的序列同一性程度最高。构架区(FR)有7个氨基酸差异，互补决定区(CDR)有8个氨基酸的差异。B组克隆与VH3家族最同源的1.9III株系序列(Berman等，EMBO J.7(1988)，727-738)在FR内有4个氨基酸不同，在CDR内有1个氨基酸不同。
就L链而言，A组和B组克隆与Vλ1家族DPL2株系基因序列(Williams和Winter，欧洲免疫学杂志，323(1993)，1456)同源性最高。A组克隆在FR内有9个氨基酸差异，在CDR内有10个氨基酸的差异，B组克隆在FR内有1个氨基酸差异，在CDR内有2个氨基酸的差异，所得结果简述于表3和4。
表3
A.         重链
克隆        FR1                            CDR1      FR2                CDR2               FR3                             CDR3                FR4
VN4.11     QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS     SYYWS     WIRQPPGKGLEWIG     YIYYSGSTNYNPSLKS      RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR
PDpG7      --K-L---------------N-----R---     G-S-R     ----S---------     D-S-----K-K---R-      ---L-------------N--------------       VLPFDPISMDV         WGKGTTVTVSS
PDG8       ------------------------------     -----     --------------     ----------------      --------------------------------       VLPFDPISMDV         WGKGTTVTVSS
PDG10      ------------------------------     -----     --------------     ----------------      --------------------------------       VLPFDPISMDV         WGKGTTVTVSS
PDG16      ------------------------------     -----     --------------     ----------------      --------------------------------       VLPFDPISMDV         WGKGTTVTVSS
1.9III     QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS     SYGMH     WVRQAPGKGLEWVA     VISYDGSNKYYADSVKG     RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
PDG13      --K-L-------------------------     --A--     --------------     -----------------     --A----------------------------R       ALGSWGGWDHYMDV      WGKGTTVTVSS
PDG17      ------------------------------     -----     --------------     -----------------     --------------------------------       ALGSWGGWDHYMDV      WGKGTTVTVSS
PDG31      ------------------------------     -----     --------------     -----------------     --------------------------------       ALGSWGGWDHYMDV      WGKGTTVTVSS
PDG37      ------------------------------     -----     --------------     -----------------     --------------------------------       ALGSWGGWDHYMDV      WGKGTTVTVSS
M85255     --Q-V-------------------------     -----     --------------     -----------------     --T-----------------------------       DRPIARWTYGGMDV      WGQGTTVTVSS
B.         轻链
克隆        FR1                     CDR1            FR2           CDR2         FR3                             CDR3             FR4
DPL2       VLTQPPSASGTPGQRVTISC    SGSSSNIGSNTVN     WYQQLPGTAPKLLIY      SNNQRPS      GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC     AAWDDSLNG
PDG7       -V------------W-----    -------R--P-S     --H-V---------F      GSH----      -------------------R----G-AG----     -T---G---PV     FGGGTKLTVLSQP
PDG8       --------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     -----------     FGGGTKLTVLSQP
PDG10      --------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     -----------     FGGGTKLTVLSQP
PDG16      --------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     -----------     FGGGTKLTVLSQP
DPL2       VLTQPPSASGTPGQRVTISC    SGSSSNIGSNTVN     WYQQLPGTAPKLLIY      SNNQRPS      GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC     AAWDDSLNG
PDG13      -V------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     ---------WV     FGGGTKLTVLGQP
PDG17      --------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     -----------     FGGGTKLTVLGQP
PDG31      --------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     -----------     FGGGTKLTVLGQP
PDG37      --------------------    -------------     ---------------      -------      --------------------------------     -----------     FGGGTKLTVLGQP
FR：构架区；CDR：互补决定区。给出顶端序列(VH4.11；1.9III；DPL2)是为了进行比较，它们各代表最密切相关的已知株系基因序列的推定的氨基酸序列。虚线表示相同。M85255指的是EMPL/GenBank参照号，表示人抗GPIIb自身抗体2E7推定的氨基酸序列(Kunicki等，自身免疫学杂志，4(1991)，433-446)。对重链而言，前3个氨基酸(QVK)由pComb3载体序列确定。
表4显示出A组和B组克隆与已知的株系V基因序列之间氨基酸同源性的排布。
                 重链                  轻链
PDG phab克隆   VH家族     株系基因   同源性(％)   Vλ家族   株系基因  同源性(5)
A组：7，8，10，16   VH4     VH4.11   84.3   VλI   DPL2  81.4
B组：13，17，31，37   VH3     1.9III   95.1   VλI   DPL2  97.1
2.鉴定抗独特型抗体序列
2.1 phab克隆AI-X
根据实施例1所述的方法，使用噬粒技术鉴定抗独特型抗体的序列。将实施例1中选定的克隆PDG16用作抗原，没有阴性的预先选择。
使用组合phab文库的汇集物测定外周血B淋巴细胞的非免疫文库和已被红细胞固定化的外周血淋巴细胞文库，和得自扁桃体的B淋巴细胞非免疫文库的特异性。
分析4轮淘选之后所得的phab库，为此，随机选择40个phab克隆，测定它们的结合特异性，选定克隆中有25个能与抗GPIIb/IIIaphab反应。这些抗独特型phab克隆属于两组：I组(3个克隆)仅与A组自身抗体phab克隆(PDG7，8，10和16)反应，而II组phab克隆(共22个克隆)与A组和B组phab克隆、鼠抗GPIIb/IIIa单克隆抗体、纯化的血清免疫球蛋白(IVIgG)或其F(ab’)2片断以及抗IgE Fab都能反应。14个phab克隆(III组)不与上述任何物质反应。1个IV组phab克隆仅与抗GPIIb/IIIa抗体反应。这些特异性试验的结果简述于表5a中。
对I组phab克隆(AI-X16，17和24)进行的DNA序列分析表明除了CDR2区域的1个氨基酸外，重链编码序列完全相同，而轻链编码序列完全相同。与已知株系基因序列的比较结果表明与VH3 H链序列约有85％的同源性，与V-λIIL链家族序列约有90％同源性。在II，III和IV组phab克隆中各取1个代表，对其进行H链基因的DNA序列分析，序列分析的结果和与已知株系基因序列的比较结果简述于表6和7a。
抑制试验的结果示于图1，利用免疫斑点试验测定纯化的GPIIb/IIIa对AI-X17与PDG-A结合的抑制作用。将660和220ng PDG-A phab分别滴加至硝酸纤维素滤膜上，将抗原与浓度范围为50μg/ml至50ng/ml的GPIIb/IIIa保温2小时，与缓冲溶液保温2小时作为对照，然后再与噬菌体克隆AI-X17(终浓度为1012/ml)保温2小时。使用过氧化物酶缀合的多克隆兔抗噬菌体抗体，通过电化学发光法检测结合的噬菌体。
发现AI-X17 phab(I组)能抑制A组抗体phab(PDG-X)与IIb/IIIa糖蛋白的结合，这证明AI-X17能识别PDG-A上的抗原结合位点。
测定结合PDG-A的另一个克隆AI-X2的序列，与克隆AI-X20，39和40类似，此克隆仅具有重链而无轻链。重链自身(可能是作为二聚体)能以足够的特异性和亲和性与抗原(即PDG-A)结合。
2.2 phab克隆AI-B
根据实施例2.1所述的方法，使用噬粒技术鉴定其它抗独特型抗体的序列，将实施例1中选择的克隆PDG-B用作抗原。
共选择40个phab克隆，测定其结合特异性。选定克隆中的34个与抗GPIIb/IIIa phab反应，这些抗独特型phab克隆属于3组：
I组(14个克隆)仅与B组抗体phab克隆反应，而II组phab克隆(共8个克隆)与A组和B组phab克隆均反应，III组phab克隆(共12个克隆)还与鼠单克隆抗GPIIb/IIIa抗体、纯化的血清免疫球蛋白(IVIgG)或其F(ab’)2片断以及抗IgE Fab反应。6个phab克隆(IV组)不与上述任何物质反应。这些特异性试验的结果简述于表5b中。
对I组phab克隆(AI-14，18，24和38)进行DNA序列分析的结果简述于表6和7b。克隆AI-B14，18和38仅具有重链。
AI-B14和17是相同的，AI-B34和40也与AI-B18相同。
AI-B phab对PDG-B与血小板之结合的抑制作用示于图2。利用流式细胞计数分析测定这种抑制作用。为此，使用辅助噬菌体作为对照，在存在或缺乏AI-Bphab时，将富含血小板的血浆(共107个血小板)与生物素化的PDG-B保温。用低聚甲醛固定血小板，用R-藻红蛋白(RPE)标记的链霉亲和素检测结合的PDG-B。FACScan仪器中的计数为10,000，记录荧光的平均值(±SD)。克隆AI-B18，24和38获得最强的抑制作用(＞60％)。结合抑制作用表明AI-B克隆能与PDG-B上的抗原结合位点相互作用。
表5a
                      结合于
AIX phab克隆                           PDGA       PDGB      抗-IgE  Fab     抗-GPIIb/IIIa     SG     F(ab’)2
                                                                            mAb
I组：16，17，24                   3    +          -         -               -                 -      -
II组：                            22   +          +         +               +                 +      +
1，2，3，4，5，6，7，9，11，13，
14，23，26，27，28，29，33，
35，36，37，38，40
III组：                           14   -          -         -               -                 -      -
8，10，12，15，18，19，21，22，
25，30，31，32，34，39
IV组：20                          1    -          -         -               +                 -      -
表5b
AI-B                                                          结合于
phab克隆n                             PDG-X       PDG-B      抗-IgE      抗-GPIIb/IIIa     IvIgG      IvIgG
                                                             Fab         mAb                          F(ab’)2
14
(AI-B5，7，8，14，17，18，23，24，    -          +           -           -                 -          -
30，31，33，34，38，40)               ----------------------------------------------------------------------------------
8                                     +          +           -           -                 -          -
12                                    +          +           +           +                 +          +
6                                     -          -           -           -                 -          -
表6
抗Id噬菌体克隆
                            H链                                    L链
抗独特型
Phab-克隆                    株系基因    同源性                 株系基因     同源性
                   VH家族                           Vλ家族
(AI-X和AI-B)                             (％)*                               (％)*
AI-X16，AI-X24     VH3      DP47        88          Vλ2      DPL10        88
AI-X17             VH3      DP47        87          VΛ2      DPL10        88
AI-X39             VH3      DP49        94          -          -            -
AI-X40             VH3      DP31        95          -          -            -
AI-X20             VH4      DP71        78          -          -            -
AI-B14，AI-B17     VH3      DP46        91          -          -            -
AI-B18             VH1      DP10        85          -          -            -
AI-B24             VH3      DP49        81          VΛ3      3h           82
AI-B38             VH1      DP5         98          -          -            -
*各个phab克隆的氨基酸序列与已知株系V基因序列的最高同源性(以％表示)。
表7a
A.        重链
克隆       FR1                            CDR1      FR2                CDR2                  FR3                          CDR3              FR4
DP47      EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS     SYAMS     WVRQAPGKGLEWVS     AISGSGGSTYYADSVKG     RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
AIX16     Q-K---------H----------------D     NF---     --------------     G---G-LL-H-------     ------N--R--V-------------------     VRDLGYRVLSTFTFDI     WGQGTKVTVSS
AIX24     ------------------------------     -----     --------------     -----------------     --------------------------------     ----------------     -----------
AIX17     ------------------------------     -----     --------------     ------------N----     --------------------------------     ----------------     -----------
DP49      QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGGETES     SYGMH     WVRQAPGKGLEWVA     VISYDGSNKYYADSVKG     RETISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
AIX39     --K-L------H------------------     --T--     --------------     L-------------        --A-----------------K-----------     DGRSGSYAREDGMDV      WGQGTTVTVSS
DP31      EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGETFD     DYAMH     WVRQAPGKGLEWVS     GISWNSGSIGYADSVKG     RETISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKD
AIX40     Q-K-L-------------------------     ---L-     --------------     ----D-T----------     ------------------------------V--    MGSSVVATYNAFDI       WGQGTMVTVSS
DP71      QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS     SYYWS     WIRQPPGKGLEWIG     YIYYSGSTNYNPSLKS      RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR
AIX20     --K-L--------------------DV--R     -H---     -L------------     F--DGAR-RF----R-      --SL-M-P-K-------G------S-------     DADGDGFSPYYFPY       WGQGIPVSVSS
B.轻链
克隆       FR1                       CDR1            FR2          CDR2      FR3                              CDR3             FR4
DPL10     QSALTQPASVSGSPGQSITISC    TGTSSDVGSYNLVS    WYQQHPGKAPKLMIY     EVSKRPS     GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC     CSYAGSSTF
AIX16       VV------------------    -----AI-N--F-P    ---------------     -G-----     ----------------------------E---     ---VH---N       WVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLEPPSS
AIX24       --------------------    --------------    ---------------     -------     --------------------------------     ---------       ----------------------------
AIX17       --------------------    --------------    ---------------     -------     --------------------------------     ---------       ----------------------------
25
FR：构架区；CDR：互补决定区。给出顶端序列(DP47；DP49；DP31；DP71和DPL10)是为了进行比较，它们各代表最密切相关的已知株系序列。虚线表示相同。对重链而言，前3个氨基酸(QVK)由pComb3载体序列确定。
表7b
A.重链
克隆       FR1                            CDR1     FR2            CDR2                   FR3                           CDR3           FR4
DP-46     QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS    SYAMH    WVRQAPGKGLEWVA    VISYDGSNKYYADSVKG     RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
AI-B14    --K-L-------------------------    D-G--    --------------    A----------------     --S------H------ST----------F---     DSETAIAAAGRFDI     WGQGTMVTVSS
AI-B17    ------------------------------    -----    --------------    -----------------     --------------------------------     --------------     -----------
DP-10     QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFS    SYAIS    WVRQAPGQGLEWMG    GIIPIFGTANYAQKFQG     RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
AI-B18    --K-LE------------M-----------    -HT--    --------------    --T------V-------     --------P--------R--T-DDSGI-----     EDGTTVPSQPLEF      WGQGTRVTVSS
DP-49     QVQLVESGGGVVPGRSLRLSCAASGFTFS     SYGMH    WVRQAPGKGLEWVA    VISYDGSNKYYADSVKG     RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
AI-B24    --K-L-----L---G------S------N     K-AI-    -----------Y-S    A--SN-G-T---------    ------------V----S------------VR     GSGSYLGYYFDY       WGQGTLVTVSS
DP-5      QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTLT    ELSMH    WVRQAPGKGLEWMG    GFDPEDGETIYAQKFQG     RVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT
AI-B38    Q-K-LE------------------------    -----    --------------    -----------------     --------------------------------     GLRSYNYGRNLDY      WGQGTLVTVSS
B.轻链
克隆       FR1                       CDR1            FR2         CDR2      FR3                              CDR3             FR4
VL3h      SYVLTQPPSVSVAPGKTARITC     GGNNIGSKSVH     WYQQKPGQAPVLVIY     YDSDRPS     FIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYC      QVWDSSSDH
AI-B24    -V------------RQ--T---     --YK-------     -------------V-     E--Y---     E--------------M---TG-----------      ----HTH-Q       TIFGGGTKLTVLRQPKAAPSVTLFPPSS
FR：构架区；CDR：互补决定区。给出顶端序列(DP46；DP10；DP49；DP5和VL3h)是为了进行比较，它们各代表最密切相关的已知株系序列。虚线表示相同。对重链而言，前3个氨基酸(QVK)由pComb3载体序列确定。
3.自身抗体多肽对血纤蛋白原与血小板之结合的影响
3.1方法
分析Fab与经EDTA预处理的血小板的结合
将富含血小板的血浆与10mM EDTA保温30分钟，加入生物素化的PDG-B和PDG-A多肽，室温下将混合物保温1小时，使用藻红蛋白标记的链霉亲和素通过流式细胞计数分析测定PDG-A和PDG-B与血小板的结合。
聚集实验
新鲜制备富含血小板的血浆(250×109/l)，将其保存于5％CO2中。在缺乏或存在PDG-A或PDG-B的情况下(最大量为10微克Fab)，通过不同稀释度的ADP(最大浓度为410μM)激活血浆。在Rodell 300BD-5aggregometer(Baxter AG，Dudingen，Switzerland)中测定聚集作用。在随后的实验中，加入PDG-A或PDG-B之后再将多克隆的抗Fab抗血清加入激活的血小板中。
血纤蛋白原结合试验
用0.5μg/ml GPIIb/IIIa包被ELISA板的孔，并用溶于Tris-缓冲盐溶液的3.5％牛血清白蛋白封闭之。在缺乏或存在PDG-A，PDG-B或作为对照的抗IgE Fab(最大浓度为23μg/ml)的情况下，以不同的浓度(最大为0.08μg/ml)加入血纤蛋白原(Kabi Diagnostics，Stockholm，Sweden)。用大鼠抗人血纤蛋白原抗体、生物素化的小鼠抗大鼠抗体和由链霉亲和素和生物素化的辣根过氧化物酶组成的缀合物(Amersham Pharmacia Biotech Europe GmbH，Dubendorf，Switzerland)，使用ELISA Easy Reader(EAR340AT，SLT Instruments，Austria)，在405nm下测定结合的血纤蛋白原。
使用单克隆抗体7E3和抗体片断ReoPro的竞争试验
在存在或缺乏鼠单克隆抗体7E3或其Fab片断ReoPro(Fab总量范围为1014至1010)的情况下，将富含血小板的血浆(230×109/l)与PDG-B或PDG-A(分别为200和400μg/ml)一起保温1.5小时。用等体积的1％低聚甲醛固定之后，使用藻红蛋白标记的链霉亲和素通过流式细胞计数分析测定PDG-B和PDG-A与血小板的结合。
3.2结果
检测的重组型抗GPIIb/IIIa Fab自身抗体片断未表现出与经10mM EDTA预处理的血小板的结合，这表明自身抗体片断仅识别构象完整的抗原(图3)。
在使用富含血小板之血浆的聚集实验中，PDG-A和PDG-B都不能抑制聚集。在血纤蛋白原的浓度比血清中的低104至106倍的血纤蛋白原结合试验中，PDG-A和PDG-B完全抑制血纤蛋白原的结合(图4)。当将使用类似的富集方法得到的抗IgE Fab用作对照时，没有抑制作用出现。这些结果表明PDG-A和PDG-B均与GPIIb/IIIa上的血纤蛋白原结合位点强有力地相互作用。
在用鼠单克隆抗GPIIb/IIIa抗体7E3或其可商购的Fab片断ReoPro进行的研究中，它们都能抑制血纤蛋白原与激活的GPIIb/IIIa结合，PDG-B与血小板的结合被选择性地和完全地抑制(图5和7)。与之形成对照的是，7E3或ReoPro都未显著抑制PDG-A与血小板的结合。
                          序列表
1)一般资料：
  (i)申请人：
    (A)姓名：ASAT AG Applied Science & Technology
    (B)街道：Baarerstrasse 77
    (C)城市：Zug
    (E)国家：瑞士
    (F)邮政编码：6302
  (ii)发明题目：重组抗体
  (iii)序列数：30
  (iv)计算机可读形式：
    (A)介质类型：软盘
    (B)计算机：IBM PC兼容机
    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
    (D)软件：PatentIn Release #1.0，Version#1.30(EPO)
  (vi)原始申请资料：
    (A)申请号：DE 19723904.8
    (B)申请日：06-JUN-1997
  (vi)原始申请资料：
    (A)申请号：DE 19755227.7
    (B)申请日：12-DEC-1997
  (vi)原始申请资料：
    (A)申请号：DE 19820663.1
    (B)申请日：08-MAY-1998
(2)SEQ ID NO：1的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：357个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..357
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：1：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCG GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCG GAG           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
 1                5                  10                  15
ACC CTG TCC CTC AAC TGC ACT GTC TCT GGT CGC TCC ATC AGT GGT TAC           96
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Thr Val Ser Gly Arg Ser Ile Ser Gly Tyr
             20                  25                  30
TCT TGG AGA TGG ATC CGG CAG TCT CCA GGG AAG GGA CTA GAG TGG ATT          144
Ser Trp Arg Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
         35                  40                  45
GGG GAT ATC TCT TAT AGT GGG AGT ACC AAG TAC AAA CCC TCC CTC AGG          192
Gly Asp Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Lys Pro Ser Leu Arg
     50                  55                  60
AGT CGA GTC ACC CTG TCA GTA GAC ACG TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG          240
Ser Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
 65                  70                  75                  80
AAG CTG AAT TCG GTG ACC GCT GCG GAC ACG GCC GTC TAT TAC TGT GCG          288
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
CGA GTC TTG CCC TTT GAC CCG ATC TCG ATG GAC GTC TGG GGC AAA GGG          336
Arg Val Leu Pro Phe Asp Pro Ile Ser Met Asp Val Trp Gly Lys Gly
            100                 105                 110
ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA                                              357
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
(2)SEQ ID NO：2的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：119个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：2：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
  1               5                  10                  15
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Thr Val Ser Gly Arg Ser Ile Ser Gly Tyr
             20                  25                  30
Ser Trp Arg Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
         35                  40                  45
Gly Asp Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Lys Pro Ser Leu Arg
     50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
 65                  70                  75                  80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg Val Leu Pro Phe Asp Pro Ile Ser Met Asp Val Trp Gly Lys Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115
(2)SEQ ID NO：3的资料：
   (i)序列特征：
     (A)长度：333个碱基对
     (B)类型：核苷酸
     (C)链型：双链
     (D)拓扑结构：线性
   (ix)特征：
     (A)名称/关键词：CDS
     (B)位置：1..333
   (xi)序列描述：SEQ ID NO：3：
GTG GTG ACT CAG CCA CCC TCA GCG TCT GGG ACC CCC GGG CAG TGG GTC           48
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Trp Val
120                 125                 130                 135
ACC ATC TCT TGT TCT GGG AGC AGC TCC AAC ATC AGA AGT AAT CCT GTT           96
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Arg Ser Asn Pro Val
            140                 145                 150
AGC TGG TAT CAC CAG GTC CCA GGC ACG GCC CCC AAA CTC CTC ATC TTT          144
Ser Trp Tyr His Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe
            155                 160                 165
GGT AGT CAT CAG CGG CCC TCA GGG GTC CCT GAC CGA TTC TCT GGC TCC          192
Gly Ser His Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
        170                 175                 180
AAG TCG GGC ACC TCC GCC TCC CTG GCC ATC CGT GGG CTC CAA TCT GGG          240
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln Ser Gly
    185                 190                 195
GAT GCT GGT GAC TAT TAC TGT GCA ACA TGG GAT GAC GGC CTC AAT GGT          288
Asp Ala Gly Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Gly Leu Asn Gly
200                 205                 210                 215
CCG GTG TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA AGT CAG CCC              333
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro
                220                 225                 230
(2)SEQ ID NO：4的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：111个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：4：
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Trp Val
  1               5                  10                  15
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Arg Ser Asn Pro Val
             20                  25                  30
Ser Trp Tyr His Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe
         35                  40                  45
Gly Ser His Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln Ser Gly
 65                  70                  75                  80
Asp Ala Gly Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Gly Leu Asn Gly
                 85                  90                  95
Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu ThrVal Leu Ser Gln Pro
            100                 105                110
(2)SEQ ID NO：5的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：369个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
   (D)拓扑结构：线性
(ix)特征：
   (A)名称/关键词：CDS
   (B)位置：1..369
(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCT GGG AGG           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
            115                 120                 125
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT           96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
        130                 135                 140
GCT ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG          144
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
    145                 150                 155
GCA GTT ATA TCA TAT GAT GGA AGC AAT AAA TAC TAC GCA GAC TCC GTG          192
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
160                 165                 170                 175
AAG GGC CGA TTC GCC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTG TAT          240
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
                180                 185                 190
CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT          288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
            195                 200                 205
GCG AGA GCG CTG GGG AGC TGG GGG GGT TGG GAC CAC TAC ATG GAC GTC          336
Ala Arg Ala Leu Gly Ser Trp Gly Gly Trp Asp His Tyr Met Asp Val
        210                 215                 220
TGG GGC AAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA                              369
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
    225                 230
(2)SEQ ID NO：6的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：123个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：6：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg Ala Leu Gly Ser Trp Gly Gly Trp Asp His Tyr Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQID NO：7的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：333个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..333
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：7：
GTG GTG ACT CAG CCA CCC TCA GCG TCT GGG ACC CCC GGG CAG AGG GTC           48
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val
    125                 130                 135
ACC ATC TCT TGT TCT GGA AGC AGC TCC AAC ATC GGA AGT AAT ACT GTA           96
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val
140                 145                 150                 155
AAC TGG TAC CAG CAG CTC CCA GGA ACG GCC CCC AAA CTC CTC ATC TAT          144
Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
                160                 165                 170
AGT AAT AAT CAG CGG CCC TCA GGG GTC CCT GAC CGA TTC TCT GGC TCC          192
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
            175                 180                 185
AAG TCT GGC ACC TCA GCC TCC CTG GCC ATC AGT GGG CTC CAG TCT GAG          240
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu
        190                 195                 200
GAT GAG GCT GAT TAT TAC TGT GCA GCA TGG GAT GAC AGC CTG AAT GGT          288
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly
    205                 210                 215
TGG GTG TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGT CAG CCC              333
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
220                 225                 230
(2)SEQ ID NO：8的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：111个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：8：
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val
  1               5                  10                  15
Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val
             20                  25                  30
Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
         35                  40                  45
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
     50                  55                  60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu
  65                 70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly
                 85                  90                  95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
            100                 105                 110
(2)SEQ ID NO：9的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：369个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..369
 (xi)序列描述：SEQ ID NO：9：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTT CAC CCC GGG GGG          48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
            115                 120                 125
TCC CTG AGA CTC TCT TGT GCA GCC TCT GGA TTT ACG TTT GAC AAC TTT          96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asn Phe
        130                 135                 140
GCC ATG AGC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGG CTG GAG TGG GTC         144
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
    145                 150                 155
TCA GGC ATT AGT GGT GGT GGT CTT TTG ACA CAC TAC GCA GAC TCC GTG         192
Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Leu Leu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
160                 165                 170                 175
AAG GGC CGG TTC ACC ATC TCC AGA AAC AAT TCC AGG AAC ACT GTA TAC         240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Arg Asn Thr Val Tyr
                180                 185                 190
CTA CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCC GAA GAC ACG GCC GTG TAT TAT TGT         288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
            195                 200                 205
GTG AGA GAT CTG GGC TAT AGA GTA CTT TCG ACT TTT ACT TTT GAT ATC         336
Val Arg Asp Leu Gly Tyr Arg Val Leu Ser Thr Phe Thr Phe Asp Ile
        210                 215                 220
TGG GGC CAG GGG ACA AAG GTC ACC GTC TCT TCA                             369
Trp Gly Gln Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Ser
    225                 230
(2)SEQ ID NO：10的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：123个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：10：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asn Phe
             20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Gly Gly Gly Leu Leu Thr His Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asn Asn Ser Arg Asn Thr Val Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Arg Asp Leu Gly Tyr Arg Val Leu Ser Thr Phe Thr Phe Asp Ile
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Lys Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：11的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：375个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..375
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：11：
GTG GTG ACT CAG CCT GCC TCC GTG TCT GGG TCT CCT GGA CAG TCG ATC           48
Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile
    125                 130                 135
ACC ATC TCC TGC ACT GGA ACC AGC AGT GCT ATT GGG AAT TAT AAC TTT           96
Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Ala Ile Gly Asn Tyr Asn Phe
140                 145                 150                 155
GTC CCC TGG TAC CAA CAG CAC CCA GGC AAA GCC CCC AAA CTC ATG ATT          144
Val Pro Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile
                160                 165                 170
TAT GAG GGC AGT AAG CGG CCC TCA GGG GTT TCT AAT CGC TTC TCT GGC          192
Tyr Glu Gly Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly
            175                 180                 185
TCC AAG TCT GGC AAC ACG GCC TCC CTG ACA ATC TCT GGG CTC CAG GCT          240
Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala
        190                 195                 200
GAG GAC GAG GCT GAG TAT TAC TGC TGC TCA TAT GTT CAT AGT AGC ACT          288
Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Val His Ser Ser Thr
    205                 210                 215
AAT TGG GTG TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA GGT CAG CCC          336
Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
220                 225                 230                 235
AAG GCT GCC CCC TCG GTC ACT CTG TTC CCA CCC TCC TCT                          375
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
                240                 245
(2)SEQ ID NO：12的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：125个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：12：
Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile
  1               5                  10                  15
Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Ala Ile Gly Asn Tyr Asn Phe
             20                  25                  30
Val Pro Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile
         35                  40                  45
Tyr Glu Gly Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly
     50                  55                  60
Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala
 65                  70                  75                  80
Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Val His Ser Ser Thr
                 85                  90                  95
Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
            100                 105                 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
        115                 120                 125
(2)SEQ ID NO：13的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：366个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..366
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：13：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCA GGA CCA GGA CTG GTG AAG CCC TCG GAG           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
                130                 135                 140
ACC CTG TCT CTC ACC TGC ACT GTC TCT GAT GTC TCC ATC AGA AGT CAT           96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Val Ser Ile Arg Ser His
            145                 150                 155
TAC TGG AGT TGG CTC CGG CAG CCC CCA GGG AAG GGA CTG GAG TGG ATT          144
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        160                 165                 170
GGG TTT ATC TAT GAC GGT GCG AGA ACC AGG TTC AAC CCC TCC CTC AGG          192
Gly Phe Ile Tyr Asp Gly Ala Arg Thr Arg Phe Asn Pro Ser Leu Arg
    175                 180                 185
AGT CGA GTC TCC CTT TCA ATG GAC CCA TCC AAG AAG CAG TTT TCC CTG          240
Ser Arg Val Ser Leu Ser Met Asp Pro Ser Lys Lys Gln Phe Ser Leu
190                 195                 200                 205
AAA CTG GGG TCT GTG ACC GCT GCG GAC TCG GCC GTC TAC TAC TGT GCG          288
Lys Leu Gly Ser Val Thr Ala Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                210                 215                 220
AGA GAC GCG GAT GGA GAT GGC TTC AGC CCA TAC TAC TTT CCC TAC TGG          336
Arg Asp Ala Asp Gly Asp Gly Phe Ser Pro Tyr Tyr Phe Pro Tyr Trp
            225                 230                 235
GGC CAG GGA ATC CCG GTC TCC GTC TCC TCG                                  366
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ser Val Ser Ser
        240                 245
(2)SEQ ID NO：14的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：122个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：14：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
  1               5                  10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Val Ser Ile Arg Ser His
             20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
         35                  40                  45
Gly Phe Ile Tyr Asp Gly Ala Arg Thr Arg Phe Asn Pro Ser Leu Arg
     50                  55                  60
Ser Arg Val Ser Leu Ser Met Asp Pro Ser Lys Lys Gln Phe Ser Leu
 65                  70                  75                  80
Lys Leu Gly Ser Val Thr Ala Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg Asp Ala Asp Gly Asp Gly Phe Ser Pro Tyr Tyr Phe Pro Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ser Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：15的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：372个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..372
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：15：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAC CCT GGG AGG          48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val His Pro Gly Arg
        125                 130                 135
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT AGC TAT          96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
    140                 145                 150
ACT ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG         144
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
155                 160                 165                 170
GCA CTT ATA TCA TAT GAT GGA AGC AAT AAA TAC TAC GCA GAC TCC GTG         192
Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
                175                 180                 185
AAG GGC CGA TTC GCC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG CTA TAT         240
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
            190                 195                 200
CTG CAA ATG AAC AGC CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT         288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
        205                 210                 215
GCG AAA GAT GGC CGG AGT GGG AGC TAC GCC AGG TTC GAC GGT ATG GAC         336
Ala Lys Asp Gly Arg Ser Gly Ser Tyr Ala Arg Phe Asp Gly Met Asp
    220                 225                 230
GTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA                         372
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
235                 240                 245
(2)SEQ ID NO：16的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：124个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：16：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val His Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
             20                  25                  30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Lys Asp Gly Arg Ser Gly Ser Tyr Ala Arg Phe Asp Gly Met Asp
            100                 105                 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：17的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：372个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..372
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：17：
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA CAG CCT GGC AGG           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
125                 130                 135                 140
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTT GAT GAT TAT           96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
                145                 150                 155
GCC CTG CAC TGG GTC CGT CAA GCT CCA GGG AAG GGC CTG GAG TGG GTC          144
Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
            160                 165                 170
TCA GGT ATT AGT TGG GAT AGT GGT ACC ATA GGC TAT GCG GAC TCT GTG          192
Ser Gly Ile Ser Trp Asp Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
        175                 180                 185
AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAC GCC AAG AAC TCC CTG TAT          240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
    190                 195                 200
CTG CAA ATG AAC AGT CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCC TTG TAT TAC TGT          288
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
205                 210                 215                 220
GTA AAA GAT ATG GGG TCT TCG GTA GTG GCT ACG TAC AAT GCT TTT GAT          336
Val Lys Asp Mer Gly Ser Ser Val Val Ala Thr Tyr Asn Ala Phe Asp
                225                 230                 235
ATC TGG GGC CAA GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA                          372
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
            240                 245
(2)SEQ ID NO：18的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：124个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：18：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
             20                  25                  30
Ala Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Trp Asp Ser Gly Thr Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Lys Asp Met Gly Ser Ser Val Val Ala Thr Tyr Asn Ala Phe Asp
            100                 105                 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：19的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：360个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：mRNA的cDNA
  (vii)直接来源：
    (B)克隆：AI-X2
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..360
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：19
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCA GGC CCA GGA CTG GTG AAG CCT TCG GAG           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
125                 130                 135                 140
ACC CTG TCC CTC ACC TGC ACT GTC TCT GGT GGC TCC TTC AGT ACT TAC           96
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr
                145                 150                 155
TAT TGG AGC TGG ATC CGG CAG CCC CCA GGG AAG GGA CTG GAG TGG ATT          144
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
            160                 165                 170
GGG TAT ATC TAT TAC AGT GGG AAC ACC AAC TAC AAC CCC TCC CTC AAG          192
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
        175                 180                 185
AGT CGA GCC ACC ATA TCA GTA GAC ACG TCC AAG AAC CAG TTC TCC CTG          240
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
    190                 195                 200
AAG CTG AGC TCT GTT ACC GCC GCA GAC ACG GCC GTA TAT TAC TGT GCG          288
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
205                 210                 215                 220
AGA CTG CGT AAC GAT GGC TGG AAT GAT GGC TTT GAT ATC TGG GGC CAA          336
Arg Leu Arg Asn Asp Gly Trp Asn Asp Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln
                225                 230                 235
GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA                                      360
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
            240
(2)SEQ ID NO：20的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：120个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：20：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
  1               5                  10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Phe Ser Thr Tyr
             20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
         35                  40                  45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
     50                  55                  60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
 65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                  90                  95
Arg Leu Arg Asn Asp Gly Trp Asn Asp Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：21的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：369个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：mRNA的cDNA
  (vi)原始来源：
    (A)生物体：人
 (vii)直接来源：
    (B)克隆：AI-B14
 (viii)基因组中的位置：
    (A)染色体/区段：14
    (B)作图位置：q32.3
 (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..369
 (xi)序列描述：SEQ ID NO：21
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC GTG GTC CAG CCT GGG AGG            48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
                125                 130                 135
TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGT GAC TAT            96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            140                 145                 150
GGC ATG CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGC AAG GGG CTG GAG TGG GTG           144
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        155                 160                 165
GCA GCT ATA TCA TAT GAT GGA AGT AAC AAA TAC TAT GCA GAC TCC GTG           192
Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    170                 175                 180
AAG GGC CGA TTC TCC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAC AAT ACG CTA TAT           240
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Tyr
185                 190                 195                 200
CTG CAA ATG AGC ACC CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTC TAT TTC TGT           288
Leu Gln Met Ser Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
                205                 210                 215
GCG AGA GAT TCG GAA ACG GCA ATA GCG GCA GCT GGA CGG TTT GAT ATC           336
Ala Arg Asp Ser Glu Thr Ala Ile Ala Ala Ala Gly Arg Phe Asp Ile
            220                 225                 230
TGG GGC CAA GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCT TCA                               369
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        235                 240
(2)SEQ ID NO：22的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：123个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
 (ii)分子类型：蛋白质
 (xi)序列描述：SEQ ID NO：22：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
             20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
         35                  40                  45
Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Thr Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg Asp Ser Glu Thr Ala Ile Ala Ala Ala Gly Arg Phe Asp Ile
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：23的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：366个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：mRNA的cDNA
  (vi)原始来源：
    (A)生物体：人
  (vii)直接来源：
    (B)克隆：AI-B18
  (viii)基因组中的位置：
    (A)染色体/区段：14
    (B)作图位置：q32.3
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..366
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：23
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG CCT GGG TCC           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
    125                 130                 135
TCG GTG ATG GTC TCC TGC AAG GCT TCT GGA GGC ACC TTC AGC AGC CAT           96
Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser His
140                 145                 150                 155
ACT ATC AGC TGG GTG CGG CAG GCC CCT GGA CAA GGC CTT GAG TGG ATG          144
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
                160                 165                 170
GGA GGG ATC ACC CCT ATC TTT GGT ACA GTG AAC TAC GCA CAG AAG TTC          192
Gly Gly Ile Thr Pro Ile Phe Gly Thr Val Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
            175                 180                 185
CAG GGC AGA GTC ACC ATT ACC GCG GAC GAA CCC ACG AGC ACA GCC TAC          240
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Pro Thr Ser Thr Ala Tyr
        190                 195                 200
ATG GAA CTG AGG AGC CTG ACA TCT GAC GAC TCG GGC ATC TAT TAC TGT          288
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Gly Ile Tyr Tyr Cys
    205                 210                 215
GCG AGA GAA GAT GGC ACT ACA GTA CCA AGT CAA CCC CTT GAG TTC TGG          336
Ala Arg Glu Asp Gly Thr Thr Val Pro Ser Gln Pro Leu Glu Phe Trp
220                 225                 230                 235
GGC CAG GGA ACC CGG GTC ACC GTC TCC TCT                                  366
Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
                240                 245
(2)SEQ ID NO：24的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：122个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：24：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
  1               5                  10                  15
Ser Val Met Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser His
             20                  25                  30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
         35                  40                  45
Gly Gly Ile Thr Pro Ile Phe Gly Thr Val Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
     50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Pro Thr Ser Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Gly Ile Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Ala Arg Glu Asp Gly Thr Thr Val Pro Ser Gln Pro Leu Glu Phe Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：25的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：363个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：mRNA的cDNA
  (vi)原始来源：
    (A)生物体：人
  (vii)直接来源：
    (B)克隆：AI-B24
  (viii)基因组中的位置：
    (A)染色体/区段：14
    (B)作图位置：q32.3
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..363
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：25
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTC CAG CCT GGG GGG          48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
        125                 130                 135
TCC CTG AGA CTC TCC TGT TCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AAT AAA TAT          96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
    140                 145                 150
GCA ATA CAC TGG GTC CGC CAG GCT CCA GGG AAG GGA CTG GAA TAT GTT         144
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
155                 160                 165                 170
TCA GCT ATT AGT AGT AAT GGG GGT AAC ACA TAC TAC GCA GAC TCC GTG         192
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
                175                 180                 185
AAG GGC AGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT TCC AAG AAC ACG GTG TAT         240
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
            190                 195                 200
CTT CAA ATG AGC AGT CTG AGA GCT GAG GAC ACG GCT GTG TAT TAC TGT         288
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
        205                 210                  215
GTT AGA GGA AGT GGG AGC TAC TTA GGA TAC TAC TTT GAC TAC TGG GGC         336
Val Arg Gly Ser Gly Ser Tyr Leu Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
    220                 225                 230
CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA                                     363
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
235                 240
(2)SEQ ID NO：26的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：121个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：26：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
  1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
             20                  25                  30
Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
         35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
     50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
 65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Val Arg Gly Ser Gly Ser Tyr Leu Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：27的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：366个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：mRNA的cDNA
  (vi)原始来源：
    (A)生物体：人
  (vii)直接来源：
    (B)克隆：AI-B24
  (viii)基因组中的位置：
    (A)染色体/区段：22
    (B)作图位置：q11
  (ix)特征：
    (A)名称/关键词：CDS
    (B)位置：1..366
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：27
GTG GTG ACT CAG CCA CCC TCG GTG TCA GTG GCT CCA AGA CAG ACG GCC           48
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Arg Gln Thr Ala
            125                 130                 135
ACG ATT ACC TGT GGG GGA TAC AAG ATT GGA AGT AAA AGT GTC CAC TGG           96
Thr Ile Thr Cys Gly Gly Tyr Lys Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp
        140                 145                 150
TAC CAA CAG AAG CCA GGC CAG GCC CCT GTA TTG GTC GTC TAT GAG GAT          144
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Glu Asp
    155                 160                 165
TCC TAC CGG CCC TCA GAG ATC CCT GAG CGA TTC TCT GGC TCC AAC TCT          192
Ser Tyr Arg Pro Ser Glu Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
170                 175                 180                 185
GGG AAC ATG GCC ACC CTG ACC ATC ACC GGG GTC GAA GCC GGG GAT GAG          240
Gly Asn Met Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu
                190                 195                 200
GCC GAC TAC TAC TGT CAG GTG TGG GAT AAT ACT AAT GAT CAG ACG ATA         288
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Thr Asn Asp Gln Thr Ile
            205                 210                 215
TTC GGC GGA GGG ACC AAG CTG ACC GTC CTA CGT CAG CCC AAG GCT GCC         336
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln Pro Lys Ala Ala
        220                 225                 230
CCC TCG GTC ACT CTG TTC CCG CCC TCC TCT                                 366
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
    235                 240
(2)SEQ ID NO：28的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：122个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
  (ii)分子类型：蛋白质
  (xi)序列描述：SEQ ID NO：28：
Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Arg Gln Thr Ala
  1               5                  10                  15
Thr Ile Thr Cys Gly Gly Tyr Lys Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp
             20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Glu Asp
         35                  40                  45
Ser Tyr Arg Pro Ser Glu Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
     50                  55                  60
Gly Asn Met Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu
 65                  70                  75                  80
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Thr Asn Asp Gln Thr Ile
                 85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln Pro Lys Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
        115                 120
(2)SEQ ID NO：29的资料：
  (i)序列特征：
    (A)长度：366个碱基对
    (B)类型：核苷酸
    (C)链型：双链
    (D)拓扑结构：线性
 (ii)分子类型：mRNA的cDNA
 (vi)原始来源：
   (A)生物体：人
 (vii)直接来源：
   (B)克隆：AI-B38
 (viii)基因组中的位置：
   (A)染色体/区段：14
   (B)作图位置：q32.3
 (ix)特征：
   (A)名称/关键词：CDS
   (B)位置：1..366
 (xi)序列描述：SEQ ID NO：29
CAG GTG AAA CTG CTC GAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG CCT GGG GCC           48
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
        125                 130                 135
TCA GTG AAG GTC TCC TGC AAG GTT TCC GGA TAC ACC CTC ACT GAA TTA           96
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
    140                 145                 150
TCC ATG CAC TGG GTG CGA CAG GCT CCT GGA AAA GGG CTT GAG TGG ATG          144
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
155                 160                 165                 170
GGA GGT TTT GAT CCT GAA GAT GGT GAA ACA ATC TAC GCA CAG AAA TTC          192
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
                175                 180                 185
CAG GGC AGAGTC ACC ATG ACC GAG GAC ACA TCT ACA GAC ACG GCC TAC           240
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
            190                 195                 200
ATG GAG CTG AGC AGC CTG AGA TCT GAG GAC ACG GCC GTG TAT TAC TGT          288
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
        205                 210                 215
GAG ACA GGT CTG AGG TCG TAC AAC TAT GGT CGT AAC CTT GAC TAT TGG          336
Glu Thr Gly Leu Arg Ser Tyr Asn Tyr Gly Arg Asn Leu Asp Tyr Trp
    220                 225                 230
GGC CAG GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA                                  366
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
235                 240
(2)SEQ ID NO：30的资料：
 (i)序列特征：
  (A)长度：122个氨基酸
  (B)类型：氨基酸
  (D)拓扑结构：线性
 (ii)分子类型：蛋白质
 (xi)序列描述：SEQ ID NO：30：
Gln Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
  1                   5              10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu
                 20              25                  30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
             35              40                  45
Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe
         50              55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
 65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                 85                  90                  95
Glu Thr Gly Leu Arg Ser Tyr Asn Tyr Gly Arg Asn Leu Asp Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120

Claims (16)

1.一种核酸，该核酸：
(1)编码能与GPIIb/IIIa结合的人抗体重链或者其功能衍生物或其片断，其中含有：
(i)选自下组的CDR3区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
V L P F D P I S M D V                       (I)
和
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
A L G S W G G W D H Y M D V                 (II)
(ii)选自下组的CDR1区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G Y S W R                                   (III)
和
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S Y A M H                                   (IV)
以及
(iii)选自下组的CDR2区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D I S Y S G S T K Y K P S L R S             (V)
和
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
V I S Y D G S N K Y Y A D S V K G           (VI)；
(2)并且编码能与GPIIb/IIIa结合的人抗体轻链或者其功能衍生物或
其片断，其中含有：
(i)选自下组的CDR3区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
A T W D D G L N G P V                       (VII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
A A W D D S L N G W V                    (VIII)
前提条件是，当所述核酸包含(b)中所述的核苷酸序列时，它并不同时含有编码氨基酸序列SGSSSNIGSNTVN和SNNQRPS的核苷酸序列，
(ii)选自下组的CDR1区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S G S S S N I R S N P V S                (IX)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S G S S S N I G S N T V N                (X)
以及
(iii)选自下组的CDR2区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G S H Q R P S                            (XI)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
S N N Q R P S                            (XII)。
2.一种核酸，该核酸：
(1)编码人抗体重链或者其功能衍生物或其片断，其中含有：
(i)选自下组的CDR3区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
V R D L G Y R V L S T F T F D I          (XIII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D G R S G S Y A R F D G M D V            (XIV)
(c)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
M G S S V V A T Y N A F D I              (XV)
(d)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D A D G D G F S P Y Y F P Y              (XVI)
(e)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
L R N D G W N D G F D I                  (XVII)
(f)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
D S E T A I A A A G R F D I       (XVIII)
(g)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
E D G T T V P S Q P L E F         (XIX)
(h)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G S G S Y L G Y Y F D Y           (XX)
(i)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
G L R S Y N Y G R N L D Y         (XXI)
和
(j)编码具有同等的与针对GPIIb/IIIa的自身抗体相结合的能力的氨基酸序列的核苷酸序列；和
(ii)CDR1和CDR2区域，所述区域选自编码表7a或b所示氨基酸序列的核苷酸序列。
3.根据权利要求2的核酸，其中所述核酸进一步：
(2)编码人抗体轻链或者其功能衍生物或其片断，其中含有：
(i)选自下组的CDR3区域：
(a)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
C S Y V H S S T N              (XXII)
(b)编码下述氨基酸序列的核苷酸序列：
Q V W D N T N D Q              (XXIII)
和
(c)编码具有同等的与抗GPIIb/IIIa之自身抗体结合之能力的氨基酸序列的核苷酸序列；和
(ii)CDR1和CDR2区域，所述区域选自编码表7a或b所示氨基酸序列的核苷酸序列。
4.一种载体，其特征在于：
(a)含有根据权利要求1的核酸或者
(b)含有根据权利要求2或3的核酸。
5.一种细胞，其特征在于：
(a)表达根据权利要求1的核酸或者
(b)根据权利要求2或3的核酸。
6.一种多肽，其特征在于由根据权利要求1的核酸或者根据权利要求2或3的核酸编码。
7.根据权利要求6的多肽，其特征在于含有人抗体H链的可变区和/或L链的可变区。
8.根据权利要求6的多肽，其特征在于同时含有H链的可变区和L链的可变区。
9.根据权利要求6至8中任一项的多肽，其特征在于偶联了标记基团或毒素。
10.针对根据权利要求6至9中任一项之多肽的抗体。
11.根据权利要求10的抗体，其特征在于该抗体针对的是多肽抗体重链和/或轻链的CDR3区域。
12.一种药物组合物，其含有根据权利要求1或2或3的核酸、根据权利要求4的载体、根据权利要求5的细胞、根据权利要求6至9中任一项的多肽或者根据权利要求10或11的抗体作为活性成分，适当时还含有其它活性成分和常规的药用佐剂、添加剂或赋形剂。
13.根据权利要求1或2或3的核酸、根据权利要求4的载体、根据权利要求5的细胞、根据权利要求6至9中任一项的多肽、根据权利要求10或11的抗体或者根据权利要求12的药物组合物用于制备诊断或者治疗或预防AITP之药剂的用途。
14.根据权利要求1或2或3的核酸、根据权利要求4的载体、根据权利要求5的细胞、根据权利要求6至9中任一项的多肽或者根据权利要求12的药物组合物用于制备能对血纤蛋白原与血小板的结合产生影响之药剂的用途。
15.根据权利要求14的用途，其用于制备调节血液凝结的药剂。
16.根据权利要求15的用途，其用于制备可溶解血栓和/或预防血栓形成之药剂。
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