CN116350726A - 一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用，涉及医药领域，所述的双丹明目组合物包括组分：女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牛膝、牡丹皮、泽泻、茯苓和红土茯苓。对于苯扎氯铵诱导的干眼模型小鼠，本发明的组合物各组分合理配比，所制备的药物可以明显提高干眼小鼠泪液分泌和泪膜稳定，还可以改善小鼠角、结膜损伤，其疗效优于丹参和山茱萸提取物、杞菊地黄丸、以及市售的双丹明目胶囊药物。

Description

一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用。

背景技术

干眼是指由于各种原因引起的泪液的质和量或动力学的异常，导致泪膜不稳定和/或眼表的异常，从而导致眼部不适的一类疾病。常见的症状有眼部干涩、异物感、烧灼感、畏光、眼红、视物模糊、视力波动、视疲劳等。干眼是临床常见的眼表疾病之一。

目前，西医临床多采用人工泪液、抗炎、补充必需脂肪酸等局部对症治疗为主，可在短时间内缓解症状，但无法根本改善泪膜功能，治疗效果不明显。干眼在中医称为“白涩症”，中医书籍中曾记载：“不肿不赤，爽快不得，沙涩昏朦，名曰白涩”；“五脏六腑之津液，尽渗于目”。津液在目化为神水，于眼外润泽为泪，于眼内充养为液，津液亏损而发为干眼。本病与肺、肝、肾关系密切，肝肾阴虚、肝之津液不足是其发病主要原因；肺失宣降，燥伤肺阴，不能上荣于目是其发病的主要诱因。治则以滋肾养肝、清热明目为法。干眼是一个多因素的疾病，由多种潜在的因素造成，而随着社会的发展，现代视频终端综合征如长时间的使用电脑、电视、游戏机等终端屏幕，长期配角膜接触镜、眼部手术及损伤史、眼局部用药史、眼局部病变等相关因素均会引起干眼。中医药在治疗干眼方面取得了良好的疗效。

文献《干眼症的中医经验方治疗研究》(DOI：10.16368/j.issn.1674-8999.2010.03.003)及文献《中医药对干眼治疗研究进展》(韩竹梅,张兴儒.中医药对干眼治疗研究进展[J].国际眼科杂志,2011,11(09):1570-1573.)总结了根据干眼症的不同发病机制，主要从肝肾、肾、肝、脾、肺的中医经验方法治疗干眼症。其中，给出了治疗干眼频数较多的前20味药物，其中有地黄、枸杞子、当归、白芍、菊花、麦冬、熟地、石斛、牡丹皮、川穹等。

中国发明专利CN104189445A公开了一种用于缓解干眼症状的中药组合物及其制备方法和用途。该发明的中药组合物的组分为生地黄、熟地黄、枸杞子、山茱萸、山药、牡丹皮、泽泻、茯苓、甘草、玄参、麦门冬、白芍和菊花。制成的中药组合物对于干眼治愈效果明显，并且不产生耐药性。中国发明专利CN110038084A公开了一种治疗绝经后干眼的药物组合物及其制备方法和用途，组合物包括女贞子、墨旱莲、桑葚。枸杞子、菟丝子、北沙参。麦冬、当归、菊花、密蒙花。该药物组合物能缓解绝经后干眼患者的临床症状，有效治疗绝经后干眼，无毒副作用，使用方便，为临床提供了一种新的药物选择。

双丹明目胶囊由女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牡丹皮、泽泻、茯苓、红土茯苓、牛膝十一味中药材组成，其处方是在古方二至丸和六味地黄丸的基础上，进行加减化裁而成。将二至丸中的补阴药女贞子、墨旱莲代替六味地黄丸中的补血药熟地黄，可加强滋阴补肾的作用；加入活血化瘀药如丹参、三七等，可在滋阴补肾的同时新增活血明目的效果。杞菊地黄丸由枸杞子、菊花、熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成，其处方是在在六味地黄丸基础上加菊花、枸杞子制成的中成药制剂，功擅滋肾养肝，《中医药治疗干眼临床应用指南》推荐杞菊地黄丸为干眼治疗药。此外，双丹明目胶囊中的单味药山茱萸和丹参均有直接报道。专利CN104189445A《一种中药组合物及其制备方法和应用》报道了组合物：生地黄、熟地黄、枸杞子、山茱萸、山药、牡丹皮、泽泻、茯苓、甘草、玄参、麦门冬、白芍、菊花可以改善干眼症状。

文献《双丹明目胶囊治疗2型糖尿病视网膜病变的有效性和安全性评价》(DOI:10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2022.05.003.)对双丹明目胶囊治疗2型糖尿病变肝肾阴虚、淤血阻络症的安全性和有效性进行再评价。其中，双丹明目胶囊由女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牡丹皮、泽泻、茯苓、红土茯苓、牛膝所组成，是治疗糖尿病视网膜病变的中药，对患者视力、视物模糊、双目干涩、眼底病变具有名表现的改善，减少眼底视网膜渗出数目。

而现有技术中，尚未公开双丹明目药物在治疗干眼症，改善角膜病变中的应用。

发明内容

本发明在现有技术的基础上，提供了一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用，并以此为基础，组合物配方组分协同配伍，为治疗由苯扎氯铵诱导引发的干眼症提供了新的药物。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用。

优选地，所述的双丹明目组合物，包括组分：女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牛膝、牡丹皮、泽泻、茯苓和红土茯苓。

进一步优选地，所述的双丹明目组合物，按照重量份包括组分：10-20份女贞子、6-15份墨旱莲、6-15份山茱萸、9-21份山药、6-18份丹参、1-10份三七、4-15份牛膝、3-12份牡丹皮、4-15份泽泻、5-15份茯苓和8-18份红土茯苓。

更进一步优选地，所述的双丹明目组合物，按照重量份包括组分：10-17份女贞子、8-14份墨旱莲、8-14份山茱萸、10-20份山药、8-14份丹参、2-8份三七、5-12份牛膝、5-10份牡丹皮、5-12份泽泻、8-12份茯苓和10-16份红土茯苓。

优选地，所述的双丹明目组合物，各组分合理配比，对于苯扎氯铵诱导的干眼模型小鼠的治疗应用，可以明显提高干眼小鼠泪液分泌和泪膜稳定，还可以改善小鼠角、结膜损伤，对角膜病变的治疗有良好的效果。

优选地，上述双丹明目组合物的制备方法，包括步骤：

(1)三七粉碎成细粉，备用；

(2)牡丹皮加水蒸馏，收集馏出液，加入β-环糊精，30-50℃搅拌1-2h使包合，包合物置40-70℃干燥，得到β-环状糊精包合物，保留药渣；

(3)女贞子、山茱萸、丹参、泽泻加乙醇加热回流提取1-3次，每次1-3h，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40的稠膏，与占三七细粉总量30-50％的三七细粉混匀，40-70℃干燥，粉碎成粗粉，得到醇提浸膏粉，保留药渣；

(4)剩余组合物成分与步骤(2)-(3)的药渣混合，水煎煮1-3次，每次1-3h，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40的稠膏，与剩余三七细粉混匀，60-70℃减压干燥，粉碎成粗粉；

(5)将步骤(2)的β-环状糊精包合物、步骤(3)的醇提浸膏粉与步骤(4)的粗粉混匀，制得组合物。

进一步优选地，步骤(1)中，所述细粉的粒径为80-100目，步骤(4)中，所述粗粉的粒径为24-65目。

进一步优选地，步骤(2)中，所述牡丹皮与β-环糊精的质量比为1：0.1-0.3。

进一步优选地，步骤(2)中，所述得到β-环状糊精包合物的具体步骤为：牡丹皮与2-5倍量的水蒸馏，收集馏出液，加入β-环糊精，40℃搅拌1.5小时使包合，抽滤，包合物置50-60℃干燥，得到β-环状糊精包合物；保留药渣。

优选地，步骤(3)中，所述乙醇的浓度为75-95％。

进一步优选地，所述乙醇的浓度为90％。

优选地，步骤(3)中，所述乙醇的添加量为女贞子、山茱萸、丹参、泽泻总质量的2-5倍。

优选地，步骤(3)-(4)中，所述的相对密度，是在60-70℃下热测而得。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1、本发明创造性的发现了以女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牛膝、牡丹皮、泽泻、茯苓和红土茯苓为成分的双丹明目药物组合物在治疗干眼症中的新应用。

2、对于苯扎氯铵诱导的干眼模型小鼠，本发明的双丹明目组合物各组分合理配比，所制备的组合物可以明显提高干眼小鼠泪液分泌和泪膜稳定，还可以改善小鼠角、结膜损伤，其疗效优于丹参和山茱萸提取物、杞菊地黄丸，以及传统市售的双丹明目胶囊。

3、对于苯扎氯铵诱导的干眼模型小鼠，本发明的组合物各组分合理配比，所制备的组合物在治疗干眼症的效果方面，明显优于非本申请组分和配比的组合物。

具体实施方式

以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本申请要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本申请的发明做出多种改变和修饰，而其也应当属于本申请要求保护的范围之中。

下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。

实施例双丹明目组合物治疗苯扎氯铵诱导的干眼小鼠(雄性BALB/c)的药效和应用研究1、干眼小鼠模型构建

130只SPF级健康雄性BALB/c小鼠(6-8周龄，体质量18-22g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2012-0001)，在室温25℃、湿度60％、12h明暗周期的条件下适应性饲养1周后随机分为13组，分别为：空白对照组、模型对照组、杞菊地黄丸组(阳性对照)、丹参和山茱萸提取物低剂量组、丹参和山茱萸提取物高剂量组、双丹明目胶囊低剂量组、双丹明目胶囊高剂量组、双丹明目组合物1组、双丹明目组合物2组、双丹明目组合物3组、组合物4组、组合物5组、组合物6组。所有的小鼠都给予相同的水量和食物。除正常对照组外，其余各组小鼠每天早晚2次用0.2％苯扎氯铵溶液滴双眼，每次50μL，持续2周。

苯扎氯铵为多种滴眼液中的防腐剂，同时也是滴眼液引起干眼症不适症状的主要因素。因此，苯扎氯铵被研究者用于制备干眼动物模型，可引发泪液分泌量减少、泪膜稳定性下降以及角膜、结膜损伤等多种类似于人干眼的症状。

2、药物、组合物配置及每日给药量

(1)空白对照组：生理盐水；

(2)模型对照组：生理盐水；

(3)杞菊地黄丸组(阳性对照)：杞菊地黄丸，购自上海宝龙安庆药业有限公司，批准文号：国药准字Z34020557；规格：420丸/盒；给药量：7丸·kg^-1·d^-1(为临床2倍等效量)，生理盐水溶解。

(4)丹参和山茱萸提取物低剂量组：取丹参250g、山茱萸250g，加90％乙醇加热回流提取二次，每次加6倍量，每次2小时，过滤提取液，滤液减压浓缩至相对密度为1.3-1.4(60-70℃热测)的稠膏，60-70℃干燥，粉碎成粉末，制成1000份，即得。每份85mg，为一粒双丹明目胶囊中所含的丹参+山茱萸。给药量：153mg·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(5)丹参和山茱萸提取物高剂量组：取丹参250g、山茱萸250g，加90％乙醇加热回流提取二次，每次加6倍量，每次2小时，过滤提取液，滤液减压浓缩至相对密度为1.3-1.4(60-70℃热测)的稠膏，60-70℃干燥，粉碎成粉末，制成1000份，即得。每份85mg，为一粒双丹明目胶囊中所含的丹参+山茱萸。给药量：306mg·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(6)双丹明目胶囊低剂量组：双丹明目胶囊，购自北京岐黄制药有限公司，批准文号：国药准字Z20080062；规格：0.5g/粒；给药量：0.9g·kg^-1·d^-1(为临床等效量)，生理盐水溶解。

(7)双丹明目胶囊高剂量组：双丹明目胶囊，购自北京岐黄制药有限公司，批准文号：国药准字Z20080062；规格：0.5g/粒；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1(为临床2倍等效量)，生理盐水溶解。

(8)双丹明目组合物1组：以重量份计，女贞子15份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、三七6份、牛膝10份、牡丹皮10份、泽泻10份、茯苓10份、红土茯苓15份，研磨成粉并混合；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(9)双丹明目组合物2组：以重量份计，女贞子17份、墨旱莲14份、山茱萸14份、山药10份、丹参14份、三七8份、牛膝12份、牡丹皮5份、泽泻12份、茯苓12份、红土茯苓16份，研磨成粉并混合；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(10)双丹明目组合物3组：以重量份计，女贞子10份、墨旱莲8份、山茱萸8份、山药20份、丹参8份、三七2份、牛膝5份、牡丹皮10份、泽泻5份、茯苓5份、红土茯苓10份，研磨成粉并混合；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(11)组合物4组：在组合物1的基础上添加了以下重量组分：生地黄10份、熟地黄16份、枸杞子20份、甘草7份、玄参12份、麦门冬20份、白芍15份、菊花12份，研磨成粉并混合；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(12)组合物5组：以重量份计，墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、牛膝10份、牡丹皮10份、茯苓10份，研磨成粉并混合；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

(13)组合物6组：以重量份计，女贞子25份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药8份、丹参20份、三七6份、牛膝10份、牡丹皮2份、泽泻10份、茯苓20份、红土茯苓15份，研磨成粉并混合；给药量：1.8g·kg^-1·d^-1，生理盐水溶解。

其中，组合物1组-组合物3组均为双丹明目组合物组方，组合物4-组合物6均非双丹明目组合物组方。

其中，组合物1组-组合物6组的组合物按照上述组合物的组分和重量份进行制备，制备方法包括步骤：

(1)三七粉碎成细粉，粒径为90目，备用；

(2)牡丹皮加3倍量的水煮沸蒸馏2h，提取2次，收集馏出液，加入相当于牡丹皮0.2倍量的β-环糊精，40℃搅拌1.5小时使包合，抽滤，包合物置40-60℃干燥，得到β-环状糊精包合物；保留药渣；

(3)女贞子、山茱萸、丹参、泽泻加3倍质量的90％的乙醇60℃加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30-1.40(60-70℃热测)的稠膏，与占三七细粉总量30-50％的三七细粉混匀，60-70℃干燥，粉碎成粗粉，得到醇提浸膏粉；保留药渣；

(4)剩余组合物成分与步骤(2)-(3)的药渣混合，加3倍量的水煮沸煎煮2次，每次2h，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40的稠膏，加入剩余的三七细粉混匀，60-70℃减压干燥，粉碎成粗粉；

(5)将步骤(2)得到的β-环状糊精包合物、步骤(3)得到的醇提浸膏粉与步骤(4)得到的粗粉，充分混匀，制得组合物。

生理盐水购自湖北天圣药业有限公司，国药准字H20217115。

杞菊地黄丸由枸杞子、菊花、熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻组成，其处方是在在六味地黄丸基础上加菊花、枸杞子制成的中成药制剂，功擅滋肾养肝，已有文献报道，推荐杞菊地黄丸为干眼治疗药(《中成药治疗优势病种临床应用指南》标准化项目组.中医药治疗干眼临床应用指南(2021年)[J].中国中西医结合杂志，2022)。

已有文献报道，丹参和山茱萸对干眼症的治疗有一定的效果(马贤德，刘洋，李睿，等.山茱萸对苯扎氯铵诱导的干眼症小鼠结膜、角膜及泪腺炎性因子调控的作用研究[J].中药新药与临床药理，2019，30(11):1329-1335；王艳丽.生脉注射液和丹参注射液治疗干眼症的临床观察和护理方法研究[J].药物与临床，2019，16(01):41-43+55)。

已有文献报道，组合物组分：生地黄、熟地黄、枸杞子、山茱萸、山药、牡丹皮、泽泻、茯苓、甘草、玄参、麦门冬、白芍、菊花对改善干眼症状有一定的效果(CN104189445A《一种中药组合物及其制备方法和应用》)。

3、给药方式

所有动物均给予等量普通饲料+饮用水，按上述每日给药量，各组药物、组合物制成溶液后按照10mL/kg灌胃给药，连续给药4周。

4、应用效果的检测指标和检测方法

(1)泪液分泌量：采用SchirmerⅠ试验测量BALB/c小鼠泪液的分泌量。滴眼前，腹腔注射1％戊巴比妥(美国Sigma公司)40mg/kg全身麻醉后，拉开下睑，用眼科显微镊夹持酚红棉线(天津晶明新技术开发有限公司)的一端放置在小鼠右眼外眦中外1/3交界处，计时5min后测量红色部分长度以换算泪液分泌量。该实验应在同一条件(时间、地点、照明亮度、湿度及温度)下由同一人进行相同操作。

(2)泪膜稳定性：采用泪膜破裂时间测量BALB/c小鼠泪膜的稳定性。用玻璃棒蘸取1％荧光素钠溶液(广西梧州制药(集团)股份有限公司)1μL滴入结膜囊内，手动瞬目3次，扒开睑裂，在裂隙灯显微镜(重庆康华有限公司，SLM-Ⅲ)钴蓝光下观察记录角膜染色区出现第1个破裂点的时间。该实验应在同一条件(时间、地点、照明亮度、湿度及温度)下由同一人进行相同操作。

(3)角膜病变程度：采用角膜荧光素染色评分测量BALB/c小鼠角膜的缺损/溃疡程度。用玻璃棒蘸取1％荧光素钠溶液1μL滴入结膜囊内，90s时通过裂隙灯显微镜钴蓝光下观察角膜上皮荧光素钠染色情况。将角膜划分为鼻上方、鼻下方、颞上方、颞下方4个象限，每个象限评分按照0分(无着色)、1分(点状着色)、2分(点片状着色)、3分(片状着色)进行，每个角膜评分为4个象限评分之和。该实验应在同一条件(时间、地点、照明亮度、湿度及温度)下由同一人进行相同操作。

5、应用试验结果

(1)泪液分泌量

各组小鼠给药前后泪液测试试纸湿润长度(

n＝10，mm)结果见表1。

表1

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，^****p＜0.0001；

与双丹明目胶囊低剂量组比较，^◆p＜0.05，^◆◆p＜0.01，^◆◆◆p＜0.001，^◆◆◆◆p＜0.0001；

与双丹明目胶囊高剂量组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001，^####p＜0.0001。

从表1可以看出，给药前，与模型组相比，各给药组泪液测定试纸湿润长度无显著性差异，而正常对照组差异显著(P＜0.0001)，提示造模后，小鼠泪液分泌量下降。给药后，正常对照组和模型对照组与给药前相比，试纸湿润长度未见变化，说明造模成功后四周，模型泪液分泌量依然稳定，未出现自然恢复现象。但是与模型对照组比较，各给药组均有显著性差异(均P＜0.01)。并且分别与双丹明目胶囊低剂量组和高剂量组比较，丹参和山茱萸提取物低剂量组和高剂量组疗效均远低于前者(均P＜0.0001)。与双丹明目胶囊高剂量组比较，组合物1-4组无显著性差异，组合物5-6组差异具有显著性(均P＜0.01)，值得注意的是，双丹明目胶囊高剂量组治疗干眼小鼠泪液分泌量的效果显著高于阳性药杞菊地黄丸组(P＜0.01)，杞菊地黄丸的治疗效果与双丹明目胶囊低剂量组以及组合物5-6组相当。

(2)泪膜稳定性

各组小鼠给药前后泪膜破裂时间(

n＝10，s)结果见表2。

表2

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，^****p＜0.0001；

与双丹明目胶囊低剂量组比较，^◆p＜0.05，^◆◆p＜0.01，^◆◆◆p＜0.001，^◆◆◆◆p＜0.0001；

与双丹明目胶囊高剂量组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001，^####p＜0.0001。

从表2可以看出，给药前，与模型组相比，各给药组泪膜破裂时间无显著性差异，而正常对照组差异显著(P＜0.0001)，提示造模后，小鼠泪膜稳定性下降。给药后，正常对照组和模型对照组与给药前相比，泪膜破裂时间未见变化，说明造模成功后四周，模型泪膜不稳依然存在，未出现自然恢复现象。但是与模型对照组比较，各给药组均有显著性差异(均P＜0.001)。并且分别与双丹明目胶囊低剂量组和高剂量组比较，丹参和山茱萸提取物低剂量组和高剂量组疗效均远低于前者(均P＜0.01)。与双丹明目胶囊高剂量组比较，组合物1-4组无显著性差异，组合物5-6组差异具有显著性(均P＜0.05)，值得注意的是，双丹明目胶囊高剂量组治疗干眼小鼠泪膜稳定性的效果显著高于阳性药杞菊地黄丸组(P＜0.01)，但杞菊地黄丸的治疗效果与双丹明目胶囊低剂量组以及组合物5-6组无显著性差异。

(3)角膜病变程度

各组小鼠给药前后角膜染色评分(

n＝10，分)结果见表3。

表3

注：与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，^****p＜0.0001；

与双丹明目胶囊低剂量组比较，^◆p＜0.05，^◆◆p＜0.01，^◆◆◆p＜0.001，^◆◆◆◆p＜0.0001；

与双丹明目胶囊高剂量组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001，^####p＜0.0001。

从表3可以看出，给药前，与模型组相比，各给药组角膜染色评分无显著性差异，而正常对照组差异显著(P＜0.0001)，提示造模后，小鼠角膜缺损/溃疡。给药后，正常对照组和模型对照组与给药前相比，角膜染色评分未见变化，说明造模成功后四周，模型角膜缺损/溃疡依然存在，未出现自然恢复现象。但是与模型对照组比较，各给药组均有显著性差异(均P＜0.001)。并且分别与双丹明目胶囊低剂量组和高剂量组比较，丹参和山茱萸提取物低剂量组和高剂量组疗效均远低于前者(均P＜0.0001)。与双丹明目胶囊高剂量组比较，组合物1-4组无显著性差异，组合物5-6组差异具有显著性(均P＜0.01)，值得注意的是，双丹明目胶囊高剂量组治疗干眼小鼠角膜病变的效果显著高于阳性药杞菊地黄丸组(P＜0.0001)，但杞菊地黄丸的治疗效果与组合物5组相当，低于双丹明目胶囊低剂量组以及组合物6组，但与后两者比较差异无显著性。

本研究结果中，造模后(给药前)小鼠的泪液测定试纸湿润长度及泪膜破裂时间显著缩小(均P＜0.0001)，角膜染色评分显著增加(P＜0.0001)，提示模型复制成功。给药后，与模型组相比，各给药组泪液测定试纸湿润长度以及泪膜破裂时间均显著增加(均P＜0.01)，角膜染色评分均显著增加(均P＜0.0001)，提示各给药组的设立均对干眼有一定程度的治疗作用。其中与双丹明目胶囊低剂量组比较，丹参和山茱萸提取物低剂量组各项指标差异均有显著性(均P＜0.01)，提示双丹明目处方具有显著增效作用；与双丹明目胶囊高剂量组比较，丹参和山茱萸提取物高剂量组各项指标差异同样具有显著性(均P＜0.01)，组合物1-4组差异无显著性，组合物5-6组差异有显著性，在本专利保护范围内，双丹明目组合物针对干眼具有最佳疗效。值得注意的是，与杞菊地黄丸比较，双丹明目胶囊低剂量组治疗效果与其相当，双丹明目胶囊高剂量组各项指标差异均有显著性(均P＜0.01)。

综上，本专利中，所公开的双丹明目组合物可以明显提高干眼小鼠泪液分泌和泪膜稳定，还可以改善小鼠角、结膜损伤，其疗效优于丹参和山茱萸提取物、杞菊地黄丸、以及超保护配比范围组合物。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种双丹明目组合物在制备治疗干眼症药物中的应用，其特征在于，所述的双丹明目组合物包括组分：女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牛膝、牡丹皮、泽泻、茯苓和红土茯苓。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的双丹明目组合物，按照重量份包括组分：10-20份女贞子、6-15份墨旱莲、6-15份山茱萸、9-21份山药、6-18份丹参、1-10份三七、4-15份牛膝、3-12份牡丹皮、4-15份泽泻、5-15份茯苓和8-18份红土茯苓。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的双丹明目组合物，按照重量份包括组分：10-17份女贞子、8-14份墨旱莲、8-14份山茱萸、10-20份山药、8-14份丹参、2-8份三七、5-12份牛膝、5-10份牡丹皮、5-12份泽泻、8-12份茯苓和10-16份红土茯苓。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述双丹明目组合物的制备方法包括步骤：

(1)三七粉碎成细粉，备用；

(2)牡丹皮加水蒸馏，收集馏出液，加入β-环糊精，30-50℃搅拌1-2h使包合，包合物置40-70℃干燥，得到β-环状糊精包合物，保留药渣；

(3)女贞子、山茱萸、丹参、泽泻加乙醇回流提取1-3次，每次1-3h，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40的稠膏，与占三七细粉总量30-50％的三七细粉混匀，40-70℃干燥，粉碎成粗粉，得到醇提浸膏粉，保留药渣；

(4)剩余组合物成分与步骤(2)-(3)的药渣混合，水煎煮1-3次，每次1-3h，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40的稠膏，与剩余三七细粉混匀，60-70℃干燥，粉碎成粗粉；

(5)将步骤(2)的β-环状糊精包合物、步骤(3)的醇提浸膏粉与步骤(4)的粗粉混匀，制得组合物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述细粉的粒径为80-100目，步骤(4)中，所述粗粉的粒径为24-65目。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述牡丹皮与2-5倍量的水蒸馏。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述牡丹皮与β-环糊精的质量比为1：0.1-0.3。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(3)中所述乙醇的浓度为75-95％。

9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(3)中所述乙醇的浓度为90％。

10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述乙醇的添加量为女贞子、山茱萸、丹参、泽泻总质量的2-5倍。