CN115808483A - 一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液磷脂有关物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，通过高效液相色谱仪联用蒸发光检测器对待测药物制剂样品进行分离和检测，有关物质为溶血磷脂酰胆碱(LPC)和硬脂酸(SA)；所述方法采用的流动相为A相：0.13％三乙胺‑0.04v/v％甲酸缓冲液，B相：甲醇；采用梯度洗脱程序进行分析。与现有技术的气相色谱法相比，本方法采用常规的液相条件，极大地提高了有关物质的检测效率。并从方法专属性、检测限、定量限、线性、准确度、重复性和耐用性等角度进行了考察。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液磷脂有关物质的方法。
背景技术
脂质体作为药物递送的重要方式，其凭借类生物膜结构的天然优势，使得药物被包封到脂质体中，特定到达病灶部位，从而实现靶向性和低毒性的双重功效，提高了治疗效果。磷脂是脂质体的重要组成部分，是实现药物包封的基础。较之天然卵磷脂，目前市场上出现了许多人工合成磷脂，其通过改性的方式，改善及拓宽了磷脂的特定功能和用途，如中性磷脂类，DPPC(二棕榈酰磷脂酰胆碱)、DMPC(二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱)和DSPC(二硬脂酰磷脂酰胆碱)等，具有性质稳定，抗氧化性强，成品稳定等特点，已成为不可或缺的辅料来源。
溶血磷脂酰胆碱(LPC)是磷脂的一份子，同时也是磷脂类产品固有的代谢产物，其在细胞膜和组织中有少量存在，如体内含量过高，会引起红细胞等破裂，进而引发溶血或细胞坏死现象。因此，准确测定LPC含量是衡量脂质体质量稳定性和安全性的关键指标之一。
盐酸伊立替康脂质体注射液中主成分伊立替康与磷脂具有特定的比例关系，这关系到药品的长期稳定性。硬脂酸(SA)是自然界广泛存在的一种脂肪酸，作为磷脂的另一代谢产物，对于衡量脂质体的稳定性同样起到指示作用。
ELSD检测器作为一种通用性检测器，已被广泛应用到药品检测领域。应用ELSD法测定溶血磷脂酰胆碱已有不少研究。陈华等(《药物分析杂志》，2014年第34卷第3期，442-446页)发表了HPLLC-ELSD法同时测定丙泊酚注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量，但溶血磷脂酰胆碱呈现双肩峰，不利于准确定量。王全一等(《药物分析杂志》，2014年第34卷第7期，1291-1295)发表了HPLC-ELSD法测定前列地尔注射液中溶血磷脂酰胆碱的方法改进。其通过改进药典方法，消除了溶血磷脂酰胆碱呈现双肩峰的情形，但色谱条件采用了正相色谱条件，需要专用的色谱柱、试剂等，对于资源有限的实验室来说并不友好。刘婉君等(《中国药剂学杂志》，2015年第13卷第1期)发表了HPLC-ELSD法对多烯磷脂酰胆碱胶囊含量和有关物质检测的研究。陈华等(《中国生化药物杂志》，2016年第36卷第10期，15-18页)发表了HPLC-ELSD法同时测定依托咪酯乳状注射液中磷脂酰胆碱与溶血磷脂酰胆碱。二者采用的一样的梯度洗脱方法，流动相体系配制复杂，以正己烷-异丙醇-冰醋酸-三乙胺(814∶170∶15∶0.8)为流动相A、异丙醇-水-冰醋酸-三乙胺(844∶140∶15∶0.8)为流动相B，且存在仪器平衡时间长，流速增加，系统压力升高的问题。靖会等(《化学工程师》，2019年第2期)发表了HPLC-ELSD法测定银杏内酯B脂微球中溶血磷脂酰胆碱的含量。该文采用流动相为甲醇-冰醋酸(500∶10，三乙胺调节pH值至6.0)，在38.4～480μg·ml-1时线性关系良好。严格意义上，pH表示水溶液的酸碱度，该流动相为有机相体系，测量方式严谨度欠佳。丁丽燕等(《上海医药》，2020年第41卷第10期)发表了丙泊酚中/长链脂肪乳注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的测定方法验证。其涉及的LPC线性验证范围较高(20.56～411.12mg/ml)，只适合丙泊酚中高浓度的LPC含量检测。同样以氟比洛芬酯注射液为检测对象，陈蓉等(《中国药师》，2020年第23卷第1期)发表了HPLC-ELSD法同时测定氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺的含量。该文基本完成了方法验证的各个检项，但耐用性考察处，除ELSD检测器的参数指标外，并未提及色谱条件的耐用性，考察不全面。CN114324622A公开发表了一种改进的药物制剂中溶血磷脂酰胆碱的检测方法，以正向色谱条件检测溶血磷脂酰胆碱。二者方法中，对照品溶液中均使用了二类溶剂：三氯甲烷，对于人体有严重的安全隐患，罗氏已明确禁用。CN107957467B公开了一种分离测定药物制剂中溶血磷脂酰胆碱的方法。该方法通过高效液相色谱仪联用蒸发光检测器对待测药物制剂样品进行分离和检测，采用的流动相为无水甲醇-无水乙醇-冰醋酸，三者的体积比为(300-800):(300-800):(15-25)。然而该方法对试剂级别要求过高，需要使用无水甲醇和无水乙醇，即使如此，色谱柱使用寿命也只维持了6个月，这显然增加了检测成本。
在现行中国药典中，硬脂酸作为一种药用辅料，采用的是气相检测方法，样品处理及其复杂。与之相比，本方法采用常规的液相条件，极大地提高了硬脂酸的检测效率。
由此可见，现有技术的方法并不能同时测定盐酸伊立替康脂质体注射液中多种磷脂有关物质，因此，本领域亟需一种能同时检测多种磷脂有关物质，且分离效果好，实现对盐酸伊立替康脂质体注射液质量监测的作用的检测方法。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，所述方法为高效液相色谱法；
进一步的，所述方法检测的有关物质为溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸；
进一步的，所述方法采用的流动相为A相：0.13v/v％三乙胺-0.04v/v％甲酸缓冲液，B相：甲醇；
更进一步的，所述流动相A pH调节范围为4～5；更进一步优选的，所述流动相A pH调节范围为4.1～4.5，再优选的，所述流动相A pH为4.3；
进一步的，所述方法采用的洗脱程序为梯度洗脱程序，洗脱时间为35min；更进一步的，所述梯度洗脱程序为：
进一步的，所述方法采用的色谱柱为C8柱；更进一步的，所述方法采用的色谱柱规格为250×4.6mm，内径5μm；
进一步的，所述方法采用的流动相流速为0.5～1.5ml/min；优选为1.0ml/min
进一步的，所述方法采用的柱温为20～40℃；进一步优选的，柱温为25℃；进一步的，所述方法采用的样品盘温度为20～30℃；优选为25℃；
进一步的，所述方法采用的进样体积为10～50μl；优选为20μl；
进一步的，所述方法采用的检测器为ELSD检测器；更进一步的，所述检测器型号为Waters2424或AllChrom 6100；
进一步的，所述对照品贮备溶液的制备方法包括：分别精密称取溶血磷脂酰胆碱对照品和硬脂酸对照品，置于同一适宜体积容量瓶中，采用稀释剂定容，摇匀，即获得混合对照品贮备溶液，其中溶血磷脂酰胆碱浓度为0.5～2mg/ml以及硬脂酸浓度为0.25～1mg/ml；更进一步的，所述混合对照品贮备溶液中，溶血磷脂酰胆碱浓度为1mg/ml以及硬脂酸浓度为0.5mg/ml；
进一步的，所述供试品溶液的制备方法包括：精密量取盐酸伊立替康脂质体注射液0.5～2ml，置于适宜体积容量瓶中，用稀释剂定容，稀释5～10倍，摇匀，然后将上述溶液在5000～15000rpm下离心3～10min，取上清液，即得供试品溶液；更进一步的，所述离心转速为10000rpm；更进一步的，所述离心时间为5min；
进一步的，所述稀释剂为甲醇；
进一步的，所述溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸的保留时间tR分别为14.7和18.0min。
附图说明
图1为实施例1中同时分离并检测溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸的HPLC色谱图
有益效果
本发明采用HPLC-ELSD检测方法，实现了盐酸伊立替康脂质体注射液中溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸的同时检测，该方法专属性强，操作简便，分离度好，灵敏度高，为脂质体注射液其他相关磷脂的降解产物检测提供了参考价值。
具体实施方式
在一个具体的实施方式中，采用的ELSD检测器为Waters 2424，运行的气体压力为30～50psi，增益值为40～60，漂移管温度为50～80℃；
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
(一)实施例1
一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸的方法，所述方法为高效液相色谱法，具体方法包括：
1.1色谱条件
(1)色谱柱：所述方法采用的色谱柱为C8柱(Phenomenex
C8)，规格为250×4.6mm，内径5μm；柱温为25℃；
(2)流动相：A相：0.13v/v％三乙胺-0.04v/v％甲酸缓冲液，所述流动相A pH为4.3；B相：甲醇；
(3)梯度洗脱程序：洗脱时间为35min；具体梯度洗脱程序为：
(4)检测器：采用ELSD检测器Waters2424，气体压力：40psi，漂移管温度：65℃，增益值：50(Waters 2424)；
(5)流动相流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；
1.2溶液的制备
(1)对照品贮备溶液的制备方法包括：分别精密称取溶血磷脂酰胆碱对照品20mg和硬脂酸对照品10mg，同时置于20mg容量瓶中，采用甲醇定容，摇匀，即获得对照品贮备溶液，其中溶血磷脂酰胆碱浓度为1mg/ml以及硬脂酸浓度为0.5mg/ml；
(2)供试品溶液的制备方法包括：精密量取盐酸伊立替康脂质体注射液1ml，置于10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，然后将上述溶液在10000rpm下离心5min，取上清液，即得供试品溶液；
1.3测定法
取对照品贮备溶液、供试品溶液分别进样20μL，结果如图1所示，二者之间的分离度为15.3，该方法专属性强。溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸的保留时间tR分别为14.7和18.0min。
(二)方法学考察
2.1专属性考察：
2.1.1色谱条件如下表1所示：
表1色谱条件
2.1.2溶液配制(稀释剂为甲醇)：
(1)对照品贮备液：精确称取溶血磷脂酰胆碱对照品约20mg和硬脂酸对照品约10mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解定容，摇匀，即得对照品贮备溶液；
(2)供试品溶液：精密量取盐酸伊立替康脂质体注射液1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂定容，摇匀；取上述溶液，以10000rpm离心5min，取上清液，即得供试品溶液；
(3)加标供试品溶液：精密量取盐酸伊立替康脂质体注射液1ml，对照品储备液1ml，置同一10ml量瓶中，用稀释剂定容，摇匀；取上述溶液，以10000rpm离心5min，取上清液；
(4)系统适用性溶液：精密量取对照品贮备溶液1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂定容，摇匀；
(5)定位组分配制：
a.LPC：称取溶血卵磷脂(LPC)对照品约1mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解定容，摇匀。
b.SA：称取硬脂酸(SA)对照品约1mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解定容，摇匀。
c.DSPC：称取二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)约2mg，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解定容，摇匀；
d.Chol：称取Chol约1mg，置20ml量瓶中，用稀释剂溶解定容，摇匀；
e.伊立替康葡萄糖溶液：称取盐酸伊立替康约5mg，置10ml量瓶中，用9％(g/100ml)葡萄糖溶液溶解定容，摇匀；
f.清洗液：分别称取约5mg的NaCl及4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)，置10ml量瓶中，调节pH至中性，用纯水溶解定容，摇匀；
g.SOS-TEA：称取SOS-TEA约5mg，置10ml量瓶中，用纯水溶解定容，摇匀；
f.MPEG2000-DSPE：称取MPEG2000-DSPE约2mg，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解定容，摇匀。
结果如表2所示，其余组分均不会干扰LPC和SA的检测，二者之间的分离度为15.3，该方法专属性强。
表2专属性结果表
2.2线性考察
2.2.1概述
该方法线性响应是以LPC限度(1mg/ml)，SA限度(0.5mg/ml)约25％～200％以内的相对浓度之间进行检查，结果显示响应值(峰面积)的对数与给定的范围内样品中被分析物的浓度的对数成正比。
色谱条件同实施例1。
2.2.2溶液配制：
对照品贮备液制备：精确称取溶血卵磷脂(LPC)对照品约20mg和硬脂酸(SA)对照品约10mg，置20ml量瓶中，用甲醇溶解定容，摇匀。
各线性溶液按下表3配制：
表3线性溶液配制
检验结果如表4所示：
表4线性结果表
| 名称 | LPC | SA |
| 线性方程 | Y＝1.8230X+8.4808 | Y＝1.7335X+8.4392 |
| 相关系数 | 0.999 | 0.998 |
结果表明，LPC在限度25.6％～204.9％(0.0256mg/ml～0.2049mg/ml)范围内线性关系良好，SA在限度25.8％～206.4％(0.0129mg/ml～0.1032mg/ml)范围内线性关系良好，满足接受标准。
2.3检测限(LOD)和定量限(LOQ)考察。
色谱条件同实施例1。
2.3.1溶液配制
检测限溶液：精密量取实施例2中的线性系列溶液Ll(浓度级别25％)5ml，置10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。
定量限溶液：取线性系列溶液L1(浓度级别25％)。
检验结果如表5、6所示：
表5检测限结果表
表6定量限结果表
LPC检测限的连续2针信噪比分别为6和7；SA检测限的连续2针信噪比分别为7和9。检测限满足信噪比≥3的接受标准。LPC定量限的连续6针信噪比分别为：35，38，40，50，42和37；LPC定量限峰面积RSD为4.3％。SA定量限的连续6针信噪比分别为：31，30，30，38，29和25；SA定量限峰面积RSD为4.1％。定量限满足信噪比≥10及峰面积RSD≤10.0％的接受标准。
2.4准确度考察
2.4.1概述
准确度是测定该方法在测定磷脂有关物质LPC和SA时测定结果与真实值的差异，从而确认是否该方法可以获得准确的测试结果。
色谱条件同实施例1。
2.4.2溶液配制：
供试品溶液：精密量取供试品1.0ml，置10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀；取上述溶液，以10000rpm离心5min，取上清液。
准确度溶液1(25％，相对L3计)：精密量取供试品1.0ml，L2线性溶液5.0ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。平行制备3份。
准确度溶液2(50％，相对L3计)：精密量取供试品1.0ml，对照品贮备液0.5ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。平行制备3份。
准确度溶液3(100％，相对L3计)：精密量取供试品1.0ml，对照品贮备液1.0ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。平行制备3份。
准确度溶液4(200％，相对L3计)：精密量取供试品1.0ml，对照品贮备液2.0ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。平行制备3份。
检验结果如表7、8所示
表7LPC准确度结果表
表8SA准确度结果表
LPC：25％水平的回收率分别为：101.1％，95.7％，101.5％，平均回收率为99.4％；50％水平的回收率分别为：101.7％，103.5％，104.4％，平均回收率为103.2％；100％水平的回收率分别为：101.4％，103.6％，100.4％，平均回收率为101.8％；200％水平的回收率分别为：99.1％，99.0％，97.2％，平均回收率为98.4％；12份样品的总平均回收率为100.7％，RSD为2.6％。准确度满足回收率在80.0～120.0％之间，且RSD≤10.0％的接受标准。
SA：25％水平的回收率分别为：88.0％，84.9％，90.3％，平均回收率为87.7％；50％水平的回收率分别为：82.0％，85.1％，85.5％，平均回收率为84.2％；100％水平的回收率分别为：90.0％，89.6％，88.9％，平均回收率为89.5％；200％水平的回收率分别为：98.2％，92.3％，98.3％，平均回收率为96.3％；12份样品的总平均回收率为89.4％，RSD为5.6％。准确度满足回收率在80.0～120.0％之间，且RSD≤10.0％的接受标准。
2.5精密度考察
2.5.1概述：精密度指在规定的测试条件下同一个均匀供试品，经多次测定所得到的结果之间的接近度。在相同条件下由同一分析人员测定所得的结果之间的接近度称为重复性，平行测定6份同一浓度供试品加标溶液，计算含量的RSD值，得到重复性。
色谱条件同实施例1。
2.5.2溶液配制
供试品溶液：精密量取供试品1.0ml，对照品贮备液1.0ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。平行制备6份。
检验结果如表9所示：
表9重复性结果表
| 名称 | LPC含量(mg/ml) | SA含量(mg/ml) |
| 1 | 0.1112 | 0.0560 |
| 2 | 0.1105 | 0.0566 |
| 3 | 0.1132 | 0.0555 |
| 4 | 0.1087 | 0.0569 |
| 5 | 0.1085 | 0.0545 |
| 6 | 0.1096 | 0.0566 |
| 平均值 | 0.1103 | 0.0560 |
| RSD％ | 1.6％ | 1.6％ |
结果：6份供试品溶液中，LPC含量的RSD为1.6％，SA含量的RSD为1.6％，重复性满足RSD≤5.0％的接受标准。
2.6耐用性考察
2.6.1概述：耐用性是检验方法参数很小变化(诸如样品放置时间、流速、柱温、载气压力的变化等)而保持不受影响的能力，对此进行研究，证明方法的可靠性。
2.6.2色谱条件如下表10所示：
表10色谱条件
2.6.3溶液配制：
供试品溶液：精密量取供试品2.0ml，对照品贮备液2.0ml，置同一20ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀。
2.6.4检验结果：如下表11～14所示。
表11改变流速结果表
表12改变柱温结果表
表13改变载气压力结果表
表14溶液稳定性结果表
检验结果：
在室温条件下，供试品溶液LPC含量的RSD为1.0％，SA含量的RSD为1.4％，证明供试品溶液在24h内稳定。改变流速：LPC含量的RSD为3.0％，SA含量的RSD为0.9％；改变柱温：LPC含量的RSD为1.8％，SA含量的RSD为0.9％；改变载气压力：LPC含量的RSD为4.8％，SA含量的RSD为4.5％。以上实验中，RSD均符合≤5.0％的接受标准，说明流速，柱温及载气压力的微小变化对LPC和SA的含量检测无影响。LPC和SA为相邻峰，二者之间的分离度均不小于13，结果满足不同组分分离度≥1.5的接受标准。
结论：
(1)空白溶液及该产品中其余组分物质均不干扰LPC和SA的检测，且二者之间的分离度高达15，显示了很强的专属性；
(2)LPC和SA的检测限浓度可低至约13ug/ml和7ug/ml，定量限浓度可分别达到约26μg/ml和13μg/ml；
(3)LPC线性方程：Y＝1.8230X+8.4808，相关系数r为0.999；SA线性方程：Y＝1.7335X+8.4392，相关系数r为0.998；
(4)LPC和SA准确度的回收率在80.0％～120.0％之间；
(5)二者重复性良好，LPC和SA含量的RSD均为1.6％；
(6)通过对流速、柱温、载气压力等参数的微小变化，考察了耐用性，结果显示出LPC和SA的含量RSD均小于5.0％，且二者分离度良好，均大于15；在室温条件下，供试品溶液LPC含量的RSD为1.0％，SA含量的RSD为1.4％，证明供试品溶液在24h内稳定。
这为磷脂的降解产物检测提供了很好的参考价值，实现对盐酸伊立替康脂质体注射液质量监测作用。
熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (13)
1.一种测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法；进一步的，所述方法检测的有关物质为溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸。
2.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的流动相为A相：0.13v/v％三乙胺-0.04v/v％甲酸缓冲液，B相：甲醇。
3.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述流动相ApH调节范围为4～5；更进一步优选的，所述流动相A pH调节范围为4.1～4.5，再优选的，所述流动相A pH为4.3。
4.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的洗脱程序为梯度洗脱程序，洗脱时间为35min；更进一步的，所述梯度洗脱程序为：
5.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱为C8柱；更进一步的，所述方法采用的色谱柱规格为250×4.6mm，内径5μm。
6.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的流动相流速为0.5～1.5ml/min；优选为1.0ml/min。
7.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的柱温为20～40℃；进一步优选的，柱温为25℃；进一步的，所述方法采用的样品盘温度为20～30℃；优选为25℃。
8.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的进样体积为10～50μl；优选为20μl。
9.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用的检测器为ELSD检测器；更进一步的，所述检测器型号为Waters2424或AllChrom 6100。
10.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述对照品贮备溶液的制备方法包括：分别精密称取溶血磷脂酰胆碱对照品和硬脂酸对照品，置于同一适宜体积容量瓶中，采用稀释剂定容，摇匀，即获得对照品贮备溶液，其中溶血磷脂酰胆碱浓度为0.5～2mg/ml以及硬脂酸浓度为0.25～1mg/ml；更进一步的，所述对照品贮备溶液中，溶血磷脂酰胆碱浓度为1mg/ml以及硬脂酸浓度为0.5mg/ml。
11.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法包括：精密量取盐酸伊立替康脂质体注射液0.5～2ml，置于适宜体积容量瓶中，用稀释剂定容，稀释5～10倍，摇匀，然后将上述溶液在5000～15000rpm下离心3～10min，取上清液，即得供试品溶液；更进一步的，所述离心转速为10000rpm；更进一步的，所述离心时间为5min。
12.根据权利要求10或11所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述稀释剂为甲醇。
13.根据权利要求1所述的测定盐酸伊立替康脂质体注射液中磷脂有关物质的方法，其特征在于，所述溶血磷脂酰胆碱和硬脂酸的保留时间tR分别为14.7和18.0min。
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