CN115786366B - 一种茄子抗寒调控基因、蛋白及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种茄子抗寒调控基因、蛋白及其应用，该茄子抗寒调控基因其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；SmERF1基因编码的茄子抗寒SmERF1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次克隆到茄子抗寒调控基因SmERF1与其编码的蛋白，SmERF1基因受低温、高温和干旱诱导表达，其中受低温诱导表达效果最显著。本发明提供的茄子抗寒调控SmERF1基因可以改良植物在低温中生长不良，赋予植物低温环境良好生长特性，同时适用于茄子抗寒研究、植物分子标记辅助育种和基因工程领域遗传性状的改良，为茄子抗寒分子育种奠定基础。

Description

一种茄子抗寒调控基因、蛋白及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种茄子抗寒调控基因、蛋白及其应用。

背景技术

在自然条件下，植物的生长发育不可避免地要受到低温、高温、干旱和盐胁迫等逆境胁迫的影响，严重者甚至造成植物的死亡，这严重影响了农业的生产及生态环境。因此，提高作物的抗逆性对农业的生产发展具有重要研究意义。ERF转录因子主要通过调控胁迫响应基因转录在植物应对低温、干旱、高温和盐胁迫中发挥重要作用。目前已从很多植物中克隆得到ERF基因，如大豆、马铃薯、番茄和拟南芥等。番茄TERF2/LeERF2基因在烟草和番茄中的超表达，调控了抗寒相关基因的诱导表达，增强了转基因植株的抗寒性。番茄SlERF5基因的超表达，增强了番茄的抗旱性及抗盐性。拟南芥AtERF53基因的超表达，通过调控ABA信号转导途径和脯氨酸合成，使转基因植株的抗热性增强。杨树PtaERF194基因的超表达，通过提高水分的利用效率、限制水分散失，提高了植物对干旱胁迫逆境的抵抗能力。由以上结果可知，不同的ERF转录因子在植物中的功能不同，发掘新的转录因子并阐明其生物学功能具有重要研究意义。茄子作为一种重要的蔬菜作物，与其他茄科蔬菜相比，其受逆境胁迫的危害严重。但目前茄子ERF基因在逆境胁迫响应中的研究报道较少。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明提供一种茄子抗寒调控基因，其可以改良植物如茄子在低温中生长不良，赋予其低温环境良好生长中的特性。

本发明还提供所述抗寒基因编码的抗寒蛋白和应用。

技术方案：为了实现上述目的，本发明一种茄子抗寒调控基因SmERF1，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明所述的茄子抗寒调控基因SmERF1编码的茄子抗寒调控蛋白SmERF1，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，所述的茄子抗寒调控基因的编码区长度为849bp，命名为SmERF1。该基因不含内含子结构，该基因编码一种茄子抗寒调控蛋白，所述的氨基酸序列共含有1个AP2结构域。

本发明所述的用于扩增SmERF1基因的引物对，所述引物对的碱基序列如SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4所示。

本发明所述的茄子抗寒调控基因SmERF1或者所述的茄子抗寒调控蛋白SmERF1在改良植物品质中的应用。

其中，所述改良植物品质中为改良植物在低温中生长不良，赋予植物低温环境良好生长中的应用。

本发明所述的茄子抗寒调控基因SmERF1或者所述的茄子抗寒调控蛋白SmERF1在培育植物抗逆品种中应用。

其中，所述应用为培育抗寒植物品种中的应用。

其中，所述植物为茄子或者拟南芥。

本发明所述的SmERF1基因在茄子响应低温、高温和干旱的时的表达量分析方法，所述方法包括如下步骤：

S1、获得植物低温、高温和干旱胁迫处理不同时间后的叶片组织，提取其总RNA；

S2、以所述总RNA为模板，反转录获得cDNA；

S3、以cDNA第一条链为模板，分别用SmERF1基因与内参基因APRT(JX448345)的特异性引物扩增进行荧光定量分析，获得所述SmERF1基因在茄子不同胁迫时的表达量；所述扩增SmERF1基因的特异性引物的碱基序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；所述扩增内参基因APRT(JX448345)特异性引物的碱基序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。

本发明为了充分利用分子育种的优势，从分子生物学方法的角度出发，利用无缝克隆、并对其测序、拼接，得到三月茄SmERF1基因编码区序列；随后，对其进行生物信息学分析、检测SmERF1基因在响应不同非生物胁迫时的表达模式，以进一步验证其功能，揭示该基因在抗寒中所发挥的作用，确定抗寒相关基因。本发明从茄子中克隆ERF转录因子基因SmERF1并进行了生物信息学及其对低温、高温和干旱胁迫响应的分析，以期为更深入了解SmERF1转录因子在茄子非生物胁迫响应中的功能及作用机制提供参考依据。

本发明的SmERF1基因获得方法包括以下步骤：1)提取三月茄叶片组织总RNA，并反转录成cDNA；2)以参考基因组序列为模板，设计引物(cP1F和cP1R)；3)以步骤1)中反转录的cDNA为模板，并且利用基于步骤2)中设计的引物进行克隆；4)对步骤3)中获得的PCR产物进行回收、测序与序列分析。

SmERF1基因受低温、高温和干旱诱导表达，其中受低温诱导表达效果最显著。本发明提供的茄子抗低温基因SmERF1，适用于茄子抗寒研究、植物分子标记辅助育种和基因工程领域遗传性状的改良，为茄子抗寒分子育种奠定基础。

本发明的基因对培育植物抗逆品种，特别是抗寒茄子品种提高作物产量和品质具有重要意义。

具体地，本发明的茄子抗寒调控基因SmERF1获得以及表达量分析按照如下步骤：

1)提取三月茄样本(生长60d左右的三月茄植株叶片)总RNA；

2)以步骤1)中所提取RNA反转录成的cDNA为模板，进行PCR扩增，得到三月茄SmERF1基因编码区序列，在PCR扩增中所使用的特异引物的核苷酸序列如下：

cP1F：

GGACTCTAGAGGATCCATGGATTCATCTTCACTAGATTTGATAAGACAACA(SEQ ID NO.3)

cP1：R：

GACCACCCGGGGATCCTTATGAAACCAAAAGTTGTGAGTATCCAAAACTTG G(SEQ ID NO.4)

3)对步骤2)中所获得的PCR产物回收、连接转化、菌落PCR筛选、测序与序列分析。

4)SmERF1基因在茄子非生物胁迫时表达量分析，所述方法包括如下步骤：

S1、获得植物样品，提取其总RNA；

S2、以所述总RNA为模板，反转录获得cDNA；

S3、以cDNA第一条链为模板，分别用SmERF1基因与内参基因APRT(JX448345)的特异性引物扩增进行荧光定量分析，获得所述SmERF1基因在不同非生物胁迫时的表达量；所述扩增SmERF1基因的特异性引物的碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；所述扩增内参基因APRT(JX448345)的碱基序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有的优点和效果：

(1)本发明筛选到一种全新的茄子抗寒调控基因SmERF1，是首次报道的茄子ERF基因的序列，实验表明该基因响应低温胁迫过程，该基因的克隆及研究对理解茄子抗寒机制具有一定的参考价值；

(2)本发明提供的茄子抗寒调控SmERF1基因可以改良植物在低温中生长不良，赋予植物低温环境良好生长特性，该基因的获得既可作为茄子抗寒分子标记辅助育种提供参考基因，也丰富了茄子等植物抗寒转基因育种的基因选择，为茄子抗寒分子育种奠定初步基础。

附图说明

图1为本发明的茄子SmERF1基因克隆电泳图；

图2为本发明的茄子SmERF1转录因子多序列比对分析；

图3为本发明的茄子SmERF1转录因子的系统进化分析；

图4为本发明的茄子SmERF1转录因子及其他物种ERF转录因子保守基序及结构域的比较分析；

图5为本发明的茄子SmERF1蛋白二级结构的预测结果；

图6为本发明的茄子SmERF1蛋白三级结构的预测结果；

图7为CbERF5蛋白(SmERF1)互作网络分析；

图8为本发明的茄子SmERF1基因在不同非生物胁迫下的表达模式；

图9为三月茄子叶侵染后诱导愈伤组织的过程；

图10为低温胁迫下(4℃)茄子幼苗的根系生长情况；

图11为4℃胁迫下茄子幼苗的根长情况；

图12为SmERF1基因的CDS序列经NCBI Blastn比对结果；

图13为SmERF1转录因子比对结果。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

下述实施例便于更好的理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例中所用到的实验耗材，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到。

实施例1

茄子SmERF1基因的克隆

1、植物材料的获得

本实验所用的植物材料为茄子优良种质资源三月茄。实验材料由淮阴工学院提供。以温室盆栽生长60d左右且大小一致的三月茄为材料，收集三月茄从顶部往下数第二和第三片的真叶用于提取RNA。

2、RNA的提取

参照植物RNA提取试剂盒(HiPure HP Plant RNA Kit)说明书提取处理后的三月茄叶片RNA，电泳鉴定RNA的完整性，然后在分光光度计上测定RNA的纯度及浓度。利用宝生物反转录酶试剂(PrimeScript^TMRT reagent Kit with gDNA Eraser)进行反转录得到cDNA，用于后续基因的克隆。

3、SmERF1基因的克隆

根据茄子参考基因组序列，利用Snapgene设计SmERF1基因无缝克隆引物。

cP1F：

GGACTCTAGAGGATCCATGGATTCATCTTCACTAGATTTGATAAGACAACA(SEQ ID NO.3)

cP1R：

GACCACCCGGGGATCCTTATGAAACCAAAAGTTGTGAGTATCCAAAACTTG G(SEQ ID NO.4)

以合成的茄子cDNA为模板，进行PCR，扩增得到预期长度后回收并连接到pBI121载体上，转化大肠杆菌DH5α，菌落PCR筛选阳性克隆，提取质粒并送生工生物工程股份有限公司(南京)进行测序，测序结果表明SmERF1基因的开放阅读框序列为849bp(图1)，详细序列见SEQ ID NO.1。根据CDS开放阅读框序列推导出SmERF1的氨基酸序列，共282个氨基酸残基，分子量为31933.74Da，理论等电点(pI)为6.18，详细序列见SEQ ID NO.2所示序列。

实施例2

茄子SmERF1转录因子序列与系统进化分析

本发明将SmERF1基因的CDS序列经NCBI Blastn比对后，发现SmERF1基因与马铃薯ERF基因的同源性最高(一致性最高只能达到85.16％)(图12)；经Blastp比对后发现SmERF1基因编码的氨基酸序列与烟草ERF转录因子同源性最高(一致性为57.05％)(图13)。利用Jalview软件将茄子SmERF1氨基酸序列与20个已知的AP2/ERF转录因子序列进行氨基酸多序列比对分析，结果发现所有AP2/ERF家族转录因子均含有AP2结构域，且结构域中具有典型的WLG元件，表明该蛋白属于AP2/ERF转录因子家族；进一步的分析发现，在结构域的第14个与第19个氨基酸为丙氨酸和天冬氨酸，所以SmERF1蛋白属于AP2/ERF家族中的ERF亚族(图2)。运用MEGA X软件的大似然法构建系统发育进化树，结果表明，SmERF1蛋白与林烟草NsERF4亲缘性最近，与番茄和拟南芥的ERF转录因子亲缘性较远(图3)。分析原因是由于ERF转录因子家族成员数量大，SmERF1与番茄和拟南芥ERF转录因子序列差异较大，导致三物种的同源性较低。

实施例3

茄子及其他物种ERF转录因子保守基序及结构域的比较分析

对茄子及其他物种ERF蛋白的保守基序进行了预测分析，大多数ERF蛋白含有5个或4个Motifs，其中Motif 1和Motif 2分布在每个ERF转录因子中，它们是ERF蛋白的保守区域，且茄子SmERF1蛋白含有5个Motifs(Motif 1、Motif 2、Motif 4、Motif 5和Motif 6)；之后利用NCBI中Batch-CD数据库对该转录因子的保守结构域进行预测分析，茄子SmERF蛋白与其他物种的ERF转录因子相同，仅含有1个AP2保守结构域；同时本发明的蛋白SmERF1与林氏烟草NsERF4转录因子的AP2功能域所在位点相近，仅有一个AP2结构功能域，这进一步表明SmERF1属于AP2/ERF家族蛋白的ERF亚族(图4)。

实施例4

茄子SmERF1转录因子的二、三级结构预测

本发明新的茄子SmERF1蛋白的二级结构主要由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角4种结构元件组成，且4种结构元件所占比例分别为53.90％、27.30％、13.48％和5.32％(图5)。使用在线分析软件SWISS-MODEL，以转录因子AtERF1(PDB:2gcc.1.A)为模板对转录因子SmERF1三级结构进行预测，结果发现SmERF1转录因子主要由无规则卷曲、α-螺旋和延伸链组成，其无规卷曲占比较多(图6)。三级结构预测与二级结构预测结果相符。

实施例5

本发明新的茄子SmERF1蛋白与同属茄科作物灯笼辣椒(Capsicum baccatum)的CbERF5转录因子进行比对，序列一致性为78.1％，利用其蛋白互作关系构建互作网络。CbERF5转录因子(Ethylene-responsive transcription factor 5)主要与2个有丝分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase)、1个SNF1相关蛋白激酶调节亚基β-1(SNF1-related protein kinase regulatory subunit beta-1)、2个SNF1相关蛋白激酶调节亚基β-2(SNF1-related protein kinase regulatory subunit beta-2)、1个转录因子KAN2(Putative transcription factor KAN2)、2个鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基类β蛋白(Guanine nucleotide-binding protein subunit beta-like protein)、1个非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Non-specific serine/threonine protein kinase)和1个未注释的蛋白(Uncharacterized protein)互作(图7)。表明茄子SmERF1转录因子在植物生长发育和信号转导过程中发挥着重要的作用。

实施例6

茄子SmERF1基因结构及启动子顺式作用元件预测分析

SmERF1基因的启动子序列中包含真核生物的核心元件27个CAAT-box和72个TATA-box。进一步分析发现启动子区域还有许多功能性元件，如茉莉酸甲酯诱导顺式作用元件CGTCA-motif和TGACG-motif、厌氧诱导顺式作用元件ARE、脱落酸诱导顺式作用元件ABRE、生长素响应元件TGA-element和TGA-box及昼夜节律调控元件circadian等。另外还有光响应相关的元件，如CAG-motif，GA-motif，G-Box，GT1-motif，LAMP-element和TCCC-motif等(表1)。表面SmERF1转录因子可能参与植物生长发育及激素信号转导过程。

表1茄子SmERF1基因启动子区域中的部分顺式作用元件

本发明克隆获得茄子ERF转录因子基因SmERF1，编码区长度为849bp，可编码282个氨基酸，是一种定位于细胞核的不稳定的非分泌型亲水蛋白。SmERF1含有1个保守的AP2结构域，并在结构域的第14与第19位氨基酸为丙氨酸和天冬氨酸，与同属茄科的烟草同源性最高。保守基序的结果表明，ERF类转录因子均含有的Motif 1和Motif 2是AP2结构域的保守区域。SmERF1主要与植物生长发育和信号转导过程中相应激酶和转录因子发生相互作，且SmERF1基因启动子中含有与植物生长发育及激素信号转导过程等有关的顺式作用元件。表明SmERF1基因主要参与植物生长发育和非生物胁迫的激素信号转导过程。

实施例7

茄子SmERF1基因响应不同非生物胁迫的表达模式分析

1、植物材料的处理

以温室中(光照16h,27℃/黑暗8h,19℃)盆栽的生长60d左右且大小一致的三月茄为材料，在可调温的植物光照培养箱分别对其进行低温(4℃)、高温(40℃)和干旱胁迫处理(20％PEG)，以未做任何胁迫处理的叶片组织作为对照组。处理不同时间后(低温和高温分别处理1、3、6、12和24h，干旱处理3、6和12h)。收集三月茄从顶部往下数第二和第三片真叶，将样品分别用铝铂纸包好后立刻投入液氮中，接着转入-80℃超低温冰箱中贮存待用。

2、RNA的提取

参照植物RNA提取试剂盒(HiPure HP Plant RNA Kit)说明书提取处理后的三月茄叶片RNA，用普通琼脂糖凝胶电泳(胶浓度1.2％；1×TAE电泳缓冲液；150v，15min)检测完整性。电泳条带中最大rRNA亮度应为第二条rRNA亮度的1.5-2.0倍，否则表示rRNA样品的降解。纯度较好的RNA，A260/A280以及A260/A230约为2.0左右。用分光光度计测定OD值并计算RNA含量。

3、cDNA的获得

以1μg的总RNA为模板，利用宝生物反转录酶试剂(PrimeScript^TMRT reagent Kitwith gDNA Eraser)进行反转录得到cDNA备用。

4、设计特异性引物以进行实时荧光定量PCR分析基因在不同胁迫时的表达量。根据已获得的茄子SmERF1基因序列，利用引物设计软件Snapgene设计用于Real-time PCR中SmERF1基因定量分析的特异性引物，

ERF1-F：5′-AGTGCCACCTTTGTCACCAT-3′(SEQ ID NO.5)

ERF1-R：5′-TCATGGATTGTAACAGCAAGATGA-3′(SEQ ID NO.6)

内参基因为APRT，其引物为

APRT-F：5′-GAGATGCATGTAGGTGCTGTGCAA-3′(SEQ ID NO.7)

APRT-R：5′-GGCCCTTCAATTCTGGCAACTCAA-3′(SEQ ID NO.8)

5、待测样品中目的基因的实时荧光定量分析。以合成的cDNA第一条链为模板，分别用目的基因与内参基因的特异性引物扩增进行荧光定量分析，罗氏Cobaz480实时荧光定量PCR仪上进行qRT-PCR试验，反应体系为20μL。

反应采用三步法，95℃变性10min，接着40个循环：95℃10s；58℃10s；72℃45s。

6、采用2^-ΔΔCt法作相对定量分析。结果表明在低温胁迫(4℃)处理期间，SmERF1基因的相对表达量受低温诱导表达，整体呈现先上升后下降的趋势。其中SmERF1基因在4℃处理3h时达到最显著水平(约是对照的34.86倍)，而处理24h时其相对表达量最低(约为对照的9.97倍)，与对照达到差异显著水平。在40℃胁迫下，SmERF1基因表达水平整体呈现先降后升再降的趋势，在6h时显著地诱导表达，约为对照的1.26倍，而SmERF1基因在1h、12h和24h时显著地抑制表达(分别约是对照的0.79倍、0.53倍和0.26倍)。在干旱处理中，SmERF1基因呈先上升后下降的趋势，其中3h时受诱导表达(约为对照的1.82倍)而6h和12h受抑制表达(分别约为对照的0.30倍和0.07倍)，但均未达到差异显著水平(图8)。表明SmERF1基因在茄子低温胁迫响应中具有重要的调控作用。

实施例8

茄子SmERF1基因的功能验证

1、SmERF1基因表达载体构建

(1)本实验采用TaKaRa常规限制酶(TaKaRa，日本)对转化载体pBI121进行酶切反应实验，具体反应体系如下：

10×K Buffer	5μL
		pBI121	32μL
BamHⅠ	1μL
		ddH2O	12μL
Total volume	50μL

体系中各溶液混合后进行瞬时离心，在37℃水浴锅中保温16h后结束酶切反应，琼脂糖凝胶电泳观察酶切条带，随后将载体片段切胶回收，用于后续的载体连接反应。

(2)参照Trelief^TM SoSoo Cloning Kit Ver.2(擎科生物，中国)操作说明书，将酶切反应后回收的表达载体pBI121与目的基因片段产物相互连接，体系如下：

组分	用量
		目的基因片段	1.5μL
pBI121(BamH I)	1.0μL
		2×SoSoo Mix Ver.2	5.0μL
ddH2O	2.5μL
		Total volume	10.0μL

阳性对照体系如下

组分	用量
		Control Vector(5ng/μL)	2.0μL
Control Template(10ng/μL)	3.0μL
		2×SoSoo Mix Ver.2	5.0μL
Total volume	10.0μL

在微型管中将体系中的溶液混合，50℃反应15min。转化E.coli DH5α，阳性克隆通过PCR鉴定和测序，确认含基因SmERF1的过量表达载体构建成功。

2、转化农杆菌

a.取冻存的农杆菌GV3101感受态细胞，置于冰上缓慢融化。

b.加入7μL提取纯化的重组质粒DNA于上述100μL未完全融化的感受态细胞中，混匀，放置冰上45min。

c.将离心管封口，在液氮中冷冻3min后，迅速转置于37℃水浴环境温育5min；

d.重复c操作，冰上放置5min。

e.向离心管中加入900μL新鲜的YEB液体培养基，于28℃，225rpm摇床上振荡培养4h。

f.4℃，4000rpm离心5min，用移液枪小心吸取上清液，留下约150μl左右，用枪头轻轻吸打以重悬菌体。

g.将菌液均匀涂布于含Kan(50mg/L)、Str(50mg/L)、Rif(80mg/L)和Cb(100mg/L)的YEB固体平板上，28℃恒温箱中培养2天。

h.挑取平板上的单克隆，加入适量的YEB液体培养基，28℃，220rpm，培养48h，PCR检测阳性克隆，然后使用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增片段的正确性，获得含有SmERF1基因表达载体的农杆菌。

3、茄子SmERF1基因超表达

茄子材料为三月茄。将含有SmERF1基因表达载体的农杆菌GV3101培养OD值为0.4-0.6，4000rpm离心5min，弃上清，菌体沉淀用MS液重悬，侵染三月茄的子叶18min，并不断振荡，无菌滤纸上吸去多余的菌液，放回愈伤诱导培养基进行暗培养(图9)，直至长出愈伤组织。将愈伤组织切成小块转至Kan筛选培养基上分化培养。继代培养至分化出芽，芽生长至2～3cm时转至生根培养基上诱导生根，约一个月后长出完整的根系并移栽到温室中，得到抗性植株，将检测为阳性的转基因植株收获T1代种子。选取籽粒饱满、大小一致的T1代种子，先用75％酒精浸泡90s，进行初步的表面消毒，无菌水冲洗1-2次；再用20％次氯酸钠表面消毒42min，无菌水冲洗5-7次。以平摆法将其接种于种子萌发培养基(MS+3％蔗糖)中，置于25℃的光照条件下培养，待种子萌动后，转至4±0.5℃条件下胁迫处理4周，观察其生长情况并测其根长度。结果发现，转基因植株(O2和O5)的根系长，有明显的侧根，而对照植株(WT)的根系较短，侧根不明显(图10和图11)。表明SmERF1基因的超表达会促进茄子幼苗在低温胁迫时根系的生长发育。

Claims (5)

1.一种茄子抗寒调控基因SmERF1，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述的茄子抗寒调控基因SmERF1编码的茄子抗寒调控蛋白SmERF1，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种用于扩增权利要求1所述的茄子抗寒调控基因SmERF1的引物对，其特征在于，所述引物对的碱基序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示。

4.一种权利要求1所述的茄子抗寒调控基因SmERF1或者权利要求2所述的茄子抗寒调控蛋白SmERF1在促进茄子低温胁迫时根系生长发育中的应用。

5.一种如权利要求1所述的茄子抗寒调控基因SmERF1在茄子响应低温、高温和干旱的时的表达量分析方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、获得茄子低温、高温和干旱胁迫处理不同时间后的叶片组织，提取其总RNA；

S2、以所述总RNA为模板，反转录获得cDNA；

S3、以cDNA第一条链为模板，分别用SmERF1基因与内参基因APRT的特异性引物扩增进行荧光定量分析，获得所述SmERF1基因在茄子不同胁迫时的表达量；

所述扩增SmERF1基因的特异性引物的碱基序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；所述扩增内参基因APRT特异性引物的碱基序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。