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CN115785134B - 一种含氮杂环的硼酸化合物及制备方法和应用 - Google Patents

一种含氮杂环的硼酸化合物及制备方法和应用 Download PDF

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CN115785134B CN202211337963.1A CN202211337963A CN115785134B CN 115785134 B CN115785134 B CN 115785134B CN 202211337963 A CN202211337963 A CN 202211337963A CN 115785134 B CN115785134 B CN 115785134B
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Abstract

本发明公开了一种含氮杂环的硼酸化合物及制备方法和应用。本发明以3‑溴‑1‑对甲基苯磺酰基‑1H‑吡咯[2，3‑b]嘧啶为起始原料经三步反应制备(3‑((5‑氯‑4‑(1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑3‑基)嘧啶‑2‑基)氨基)苯基)硼酸。本发明提供的(3‑((5‑氯‑4‑(1H‑吡咯[2,3‑b]吡啶‑3‑基)嘧啶‑2‑基)氨基)苯基)硼酸经细胞实验证实具有良好的抑制脑胶质瘤增殖的活性，为一类结构新颖的治疗脑胶质瘤的候选药物。

Description

一种含氮杂环的硼酸化合物及制备方法和应用
技术领域
本申请属于有机合成及药物化学领域，具体涉及含氮杂环的硼酸化合物及制备方法和应用。
背景技术
脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤，约占恶行脑部肿瘤的80％，成年人的年发病率约为2.2-3.7/10万人口。脑胶质瘤具有复发率高、死亡率高和预后不良的特点，患者1年生存率为35.7％，5年生存率＜5％。因其侵袭性生长的特征，且好发于脑部重要功能区及深部，同时对其发病机制研究不是很充分，在临床上对于脑胶质瘤的治疗仍然缺乏相应的有效药物，其治疗方式一直是神经领域研究的热点。
目前，临床治疗脑胶质瘤多采用在尽可能保护脑功能前提下，最大限度地切除肿瘤，术后同步放化疗的标准治疗方法。但II-III级别的脑胶质瘤患者在治疗之后数年之内多数存在复发情况，Ⅳ级别脑胶质瘤患者常常在治疗后一年之内出现复发，患者的存活时间中位数仅为12个月，5年存活率仅有10％。
因此，亟需研发针对脑胶质瘤的药物来满足临床治疗中所面临的迫切需求。
发明内容
鉴于此，本申请实施例提供一种含氮杂环的硼酸化合物及制备方法和应用。
根据本申请实施例，提供一种含氮杂环的硼酸化合物，其结构式如式(I) 所示：
该化合物的化学式名称为(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸。
上述的含氮杂环的硼酸化合物的制备方法，该制备方法通过以下合成路线实现：
上述的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
(1)3-溴-1-对甲基苯磺酰基-1H-吡咯[2，3-b]嘧啶、双联频哪醇硼酸酯在[1， 1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯催化下生成3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
(2)3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶、2，4，5-三氯嘧啶在四(三苯基膦)钯催化下生成3-(2,5-二氯嘧啶-4- 基)-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
(3)3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶、间氨基苯硼酸在5％HCl正丁醇溶液中回流得到目标化合物(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶 -3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
上述的含氮杂环的硼酸化合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
(1)将3-溴-1-对甲基苯磺酰基-1H-吡咯[2，3-b]嘧啶、双联频哪醇硼酸酯和醋酸钾溶解于乙二醇二甲醚，氮气保护下加入[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，加完后用氮气置换多次于90℃下反应，反应完全后，反应液冷却、过滤，滤液旋干直接硅胶拌样过柱得到3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2- 基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
(2)3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶、2，4，5-三氯嘧啶和碳酸钠溶解于装有乙腈溶液，氮气保护下加入四(三苯基膦)钯，加完后用氮气置换多次于85℃下反应，反应完全后，反应液冷却，过滤，滤饼用水洗涤，真空干燥得到3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-对甲苯基-1H- 吡咯[2,3-b]吡啶；
(3)将3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶和间氨基苯硼酸溶于正丁醇中，往上述体系滴加浓盐酸，回流反应，蒸干溶剂后直接硅胶拌样过柱得到(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
上述的含氮杂环的硼酸化合物在制备治疗脑胶质瘤药物中的应用。本发明经细胞实验证实该化合物具有良好的抑制脑胶质瘤增殖的活性。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
图1是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸核磁氢谱图。
图2是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在胶质瘤细胞中作用24、48和72h增殖影响结果图，图中S3为(3-((5- 氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
图3是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在胶质瘤细胞中克隆形成能力影响结果图，图中S3为(3-((5-氯-4-(1H- 吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
图4是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在胶质瘤细胞U251中作用24h的细胞周期阻滞结果图，图中S3为 (3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
图5是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在胶质瘤细胞U87中作用24h的细胞周期阻滞结果图，图中S3为(3-((5- 氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
图6是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在胶质瘤细胞U251和U87中作用48h后Western blot检测细胞中增殖相关信号通路相关蛋白变化结果图，图中S3为(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3- 基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
图7是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在胶质瘤细胞U251中作用48h后Western blot检测细胞中细胞周期相关蛋白变化结果图，图中S3为(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸。
图8是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸作用24h后对胶质瘤细胞U251和A172细胞迁移能力的影响结果图，图中S3为(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
具体实施方式
下面将结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
实施例一
的制备
(1)3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶的制备：
将3-溴-1-对甲基苯磺酰基-1H-吡咯[2，3-b]嘧啶(21.2g，60.5mmol)，双联频哪醇硼酸酯(22.40g，88.1mmol)和醋酸钾(17.9g，183mmol)溶解于装有乙二醇二甲醚(500mL)的I L三颈瓶中，氮气保护下加入[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁] 二氯化钯(2.68g，3.67mmol)，加完后用氮气置换3次于90℃下反应4小时。反应完全后，反应液冷却、过滤，滤液旋干直接硅胶拌样过柱(乙酸乙酯:石油醚＝0～5％)得到3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯 [2,3-b]吡啶，收率82％。
(2)3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶的制备：
3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶 (5.00g，12.5mmol)，2，4，5-三氯嘧啶(2.27g，12.5mmol)和碳酸钠(1.98g， 18.7mmol)溶解于装有乙腈：水(4:1)(50mL)的I00mL单口瓶中，氮气保护下加入四(三苯基膦)钯(1.44g，1.25mmol)，加完后用氮气置换3次于85℃下反应4小时。反应完全后，反应液冷却，过滤，滤饼用水(40mL×3)洗涤，真空干燥得到3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶，收率71％。
(3)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸的制备：
将3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶(418mg,1mmol) 和间氨基苯硼酸溶于正丁醇(100mL)中，往上述体系滴加5滴浓盐酸，回流反应 6小时后，蒸干溶剂后直接硅胶拌样过柱得到(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3- 基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸，收率67％，其结构式如下：
熔点:188-190℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.45(s,1H),9.59(S,1H), 8.95(s,1H),8.61(s,1H),8.47(s,1H),8.33(s,1H),7.97(d,J＝10.6Hz,3H),7.80(d,J＝7.0Hz,1H),7.47(d,J＝6.8Hz,1H),7.29(t,J＝7.4Hz,1H),7.15(s,1H). HRMS(ESI):m/z calcdfor C17H14BClN5O2 +:366.0924,found:366.0925.图1是一实施例给出的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸核磁氢谱图。
实施例二(活性评价)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸在抗胶质母细胞瘤的应用
(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸对胶质母细胞瘤增殖和转移的影响：
1、实验方法
(1)SRB(黄酰罗丹明)比色分析法
细胞传代至对数生长期后，经0.25％胰酶-EDTA消化并吹打成单个细胞，调整细胞终浓度为2000-3000个/孔，接种于96孔板中，每孔100μl，(边缘孔用无菌PBS填充)，5％CO2，37℃孵育。24h后(至细胞单层铺满孔底30％-50％)，加入含有相应浓度药物的细胞培养液，于5％CO2，37℃培养箱中孵育24、48 以及72h，药物各个浓度设3个平行孔。细胞在加药培养24、48和72h后用三氯醋酸(TCA)固定，细胞每孔加预冷的15％TCA液100ul固定，然后将96孔板移至4℃放置4h。倒掉固定液，96孔用灭菌三蒸水洗5遍，甩干，37℃烘箱空气干燥。每孔加入100μl 0.4％SRB溶液，避光，室温放置30min，未与蛋白结合的SRB用1％冰醋酸溶液洗净，37℃烘箱空气干燥。结合的SRB用100μl 10mM 非缓冲Tris碱液(pH 10.5)溶解，振荡混匀后在酶联免疫检测仪上测定OD值，用空白对照调零，在波长为570nm处测定每个小孔的OD值。将所获肿瘤细胞生长抑制率定义为药物对肿瘤细胞的体外抑制率。抑制率＝给药组OD值/对照组 OD值×100％。
(2)细胞克隆形成实验
取对数生长期的细胞，经0.25％胰酶-EDTA消化并吹打成单个细胞，以2000-3000个/孔细胞的密度接种于6孔板中，轻轻摇晃，使细胞分散均匀，置 5％CO2，37℃培养箱中孵育。24h后弃去原有培养基，加入含有相应浓度药物的新鲜细胞培养基，在培养箱中孵育14天左右，期间每2-3天更换含有相应浓度药物的新鲜培养基。经常观察，当培养板中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心清洗2次。加入700μl 1％结晶紫甲醇溶液，固定染色30min，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。将培养板置于白光板上拍照计数，最后计算克隆形成数。
(3)细胞流式术
取对数生长期的细胞，经0.25％胰酶-EDTA消化并吹打成单个细胞，以 2000-3000个/孔细胞的密度接种于6孔板中，轻轻摇晃，使细胞分散均匀，置 5％CO2，37℃培养箱中孵育。24h后弃去原有培养基，加入含有相应浓度药物的新鲜细胞培养基，在培养箱中孵育24h后，经0.25％胰酶-EDTA消化，用1mL 预冷的PBS清洗2次后，用250μlPBS重悬，并缓慢滴加进750μl预冷的75％乙醇中，-20℃固定过夜。次日将固定好的细胞以1000rpm的转速离心5min，弃上清，加入1mLPBS清洗2次，用1mL PBS重悬细胞。加入终浓度50mg/ml碘化丙啶(PI)室温避光染色1h，经纱布过滤后转至流式管，用流式细胞仪检测和分析。
(4)Transwell实验
取对数生长期的细胞，经0.25％胰酶-EDTA消化并吹打成单个细胞，吸取 200μL含5×104个细胞的无血清培养基加入Transwell上室，600μL含20％ FBS 的培养基至Transwell下室，并在上下室中加入含有相应浓度药物。细胞培养箱培养24h。24孔板中每孔加入300μL的1％结晶紫甲醇溶液，吸弃培养基后，将Transwell小室放在结晶紫中室温避光固定，染色30min。用镊子夹取小室置于PBS缓冲液中缓慢清洗，用棉签轻柔擦拭上室内细胞和多余结晶紫，然后在显微镜下拍照计数，统计各组细胞迁移个数。
(5)Western blot实验
样本制备
1)Loading buffer法
弃去细胞上清，PBS清洗两遍，根据细胞汇合度加入相应量的Loading buffer，用移液器枪头全覆盖搅拌，收集至离心管，离心后放入100℃高温金属浴变性 10min，置于冰上冷却，离心，-20℃保存，后期Western blot备用，并通过Western blot预实验调整上样体积，确保内参蛋白均匀。
2)BSA定量法
胰酶消化收集实验处理过的细胞，1500rpm/min转速下离心4min，弃去上清，用预冷的PBS重悬清洗，而后转移至1.5mL Eppendorf管，再次离心，弃尽上清。在冰上进行细胞裂解，根据沉淀量加入适量RIPA裂解液，移液器吹打均匀后放在冰上静置，每隔10min涡旋或拨散一次，30min后放入提前预冷的 4℃离心机，12000rpm/min，离心30min。吸取上清至新的Eppendorf管中，即蛋白样品溶液。
选择标准蛋白BSA用于制作标准曲线，BSA依次倍半稀释10倍，蛋白样品用去离子水稀释10倍后，吸取5μL稀释后的样品至新的Eppendorf管，然后每管加入200μL BCA试剂(A液：B液＝50：1)，置于37℃烘箱中孵育30min。反应结束后涡旋混匀，吸取100μL至96孔板中，在562nm波长处测量OD值。按照标准曲线进行定量，分装蛋白样本后，加入5×Loadingbuffer，100℃变性 10min，冷却离心后置于-20℃备用。
3)制胶根据目标蛋白分子大小制作所需要的凝胶，凝固后放在去离子水中，保存在4℃冰箱备用。
4)电泳电泳前将蛋白样品放在100℃加热3-5min，冷却离心后上样。样本前先加入蛋白marker，然后按照一定顺序等体积或等量上样。上样完成后恒压进行电泳，调节电压至70V，待样本跑至距离底部玻璃板1cm处停止电泳，进行转膜。
5)转膜配置含10％无水乙醇的1×Transfer buffer 1000mL，无水乙醇激活 PVDF膜1min，激活后放入Trans Buffer溶液中。根据目标蛋白分子切胶，按照黑胶白膜方式转膜，冰水浴条件下330mA恒流转膜70min。
6)封闭转膜结束后将膜放入5％的脱脂奶粉溶液中，室温摇床封闭1h。
7)孵育一抗配制相应一抗，用于孵育目标条带。放置于4℃冰箱摇床孵育过夜。回收一抗，将膜用1×T-PBS洗涤3遍，每次8min.
8)孵育二抗加入一抗对应的辣根过氧化物酶标记的荧光二抗，室温摇床孵育 1h，回收二抗，将膜用1×T-PBS洗涤3遍，每次8min。用于后续曝光。
9)曝光用镊子将膜从有蛋白marker的一侧夹起，正面向下置于曝光仪器中，选中条带所覆盖的目标区域，选用程序进行扫描成像。
2、实验结果
(1)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸以时间和剂量依赖性方式抑制胶质母细胞瘤的细胞增殖能力：
首先，我们评估了(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 硼酸对三种不同胶质母细胞瘤细胞系U251、A172和U87MG细胞的生长抑制作用。将不同浓度的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理U251、A172、U87细胞24h、48h和72h后，采用SRB测定法检测(3-((5- 氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理后的细胞存活率。结果发现，(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸的应用对U251、A172、U87细胞产生了显著的细胞毒性作用，并且这种细胞毒性作用具有时间和剂量依赖性，其中U87的细胞毒性作用较U251和A172更为明显。 U251、A172、U87细胞对于(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸处理72h后的IC50值分别为0.38μM、0.48μM和0.17μM(参见图2)。 (2)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸以剂量依赖性方式抑制胶质母细胞瘤细胞集落形成能力：
为了确定(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸对胶质母细胞瘤细胞集落形成能力的影响，我们将不同浓度的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯 [2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理U251和A172细胞14天后，通过克隆测定确定细胞集落形成能力，结果显示，(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶 -3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理以剂量依赖性方式降低了细胞集落数量，A172细胞对(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理的反应显著强于U251细胞。细胞存活和集落形成实验结果表明，(3-((5-氯 -4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸在GBM细胞中表现出抗增殖活性(参见图3)。
(3)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸以剂量依赖性方式阻滞胶质母细胞瘤的G2/M期：
为了确定(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸对 U251和U87细胞的生长抑制作用的机制，在不同浓度处理(3-((5-氯-4-(1H-吡咯 [2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理24h后，通过流式细胞术分析评估细胞周期。结果发现，(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基) 苯基)硼酸处理后U251和U87细胞的G2/M期略有增加。经过24h处理后，(3-((5- 氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理的U251细胞的 G2/M期分布分别从14.70％增加到40.61％，U87细胞的G2/M期分布分别从11.99％增加到42.62％(参见图4和图5)。
(4)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸以剂量依赖性方式下调p-STAT3(Try705)、p-AKT(Ser473)、p-Erk1/2、c-Myc以及Cyclin B1的蛋白表达：
然后，我们为了确定在GBM细胞中(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理后哪些通路受到影响。将(3-((5-氯-4-(1H-吡咯 [2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理U251和U87细胞24h后，我们采用蛋白质免疫印迹法检测细胞蛋白表达的变化。结果显示，p-Stat3、p-Akt、 c-Myc和Cyclin B1的蛋白表达减少，然而检测到p-Erk1/2蛋白表达增加。(3-((5- 氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理可能抑制了STAT3 和Akt信号通路的激活(参见图6和图7)。
(5)(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸以剂量依赖性方式抑制胶质母细胞瘤的细胞迁移能力：
然后，为了确定(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基) 硼酸对胶质母细胞瘤细胞迁移能力的影响，我们采用Transwell实验将不同浓度的(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸处理U251和 A172细胞24h后，通过1％结晶紫甲醇溶液进行固定染色，观察细胞迁移数量。结果显示，在不影响细胞增殖的前提下，(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基) 嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸的处理对U251、A172细胞产生了显著的细胞迁移抑制作用，并且这种迁移抑制作用具有剂量依赖性，其中A172的迁移抑制作用较 U251更为显著(参见图8)。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的内容后，将容易想到本申请的其它实施方案。本申请旨在涵盖本申请的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本申请的一般性原理并包括本申请未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本申请的真正范围和精神由权利要求指出。
应当理解的是，本申请并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本申请的范围仅由所附的权利要求来限制。

Claims (4)

1.一种含氮杂环的硼酸化合物，其特征在于，其结构式如式（I）所示：
；
该化合物的化学式名称为(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
2.权利要求1所述的含氮杂环的硼酸化合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）3-溴-1-对甲基苯磺酰基-1H-吡咯[2，3-b]嘧啶、双联频哪醇硼酸酯在[1，1 ’ -双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯催化下生成3-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基）-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
（2）3-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基）-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶、2，4，5-三氯嘧啶在四（三苯基膦）钯催化下生成3-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
（3）3-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶、间氨基苯硼酸在5%HCl正丁醇溶液中回流得到目标化合物(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
3.权利要求1所述的含氮杂环的硼酸化合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）将3-溴-1-对甲基苯磺酰基-1H-吡咯[2，3-b]嘧啶、双联频哪醇硼酸酯和醋酸钾溶解于乙二醇二甲醚，氮气保护下加入[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，加完后用氮气置换多次于90°C下反应，反应完全后，反应液冷却、过滤，滤液旋干直接硅胶拌样过柱得到3-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基）-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
（2）3-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基）-1-甲苯磺酰-1H-吡咯[2,3-b]吡啶、2，4，5-三氯嘧啶和碳酸钠溶解于装有乙腈溶液，氮气保护下加入四（三苯基膦）钯，加完后用氮气置换多次于85°C下反应，反应完全后，反应液冷却，过滤，滤饼用水洗涤，真空干燥得到3-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶；
（3）将3-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1-对甲苯基-1H-吡咯[2,3-b]吡啶和间氨基苯硼酸溶于正丁醇中，往上述体系滴加浓盐酸，回流反应，蒸干溶剂后直接硅胶拌样过柱得到(3-((5-氯-4-(1H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)硼酸。
4.权利要求1所述的含氮杂环的硼酸化合物在制备治疗脑胶质瘤药物中的应用。
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