CN115485260A

CN115485260A - 与芳基环丙基羧酸的形成有关的方法

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Publication number: CN115485260A
Application number: CN202180028763.5A
Authority: CN
Inventors: P·J·卡布雷拉文图拉; N·蔡; S·N·古德; 李方正; E·O·麦考克; P·J·尼尔森; J·尼森; M·A·罗宾森; T·罗森塔尔
Original assignee: Kedihua Agricultural Technology Co ltd
Current assignee: Kedihua Agricultural Technology Co ltd
Priority date: 2020-04-24
Filing date: 2021-04-21
Publication date: 2022-12-16
Also published as: BR112022019791A2; WO2021216629A1; US20230220427A1; JP2023522975A; EP4139272A1

Abstract

本公开涉及形成芳基环丙基羧酸的方法，这些羧酸可用于形成对节肢动物、软体动物和线虫中的有害生物具有杀有害生物效用的分子。

Description

与芳基环丙基羧酸的形成有关的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年4月24日提交的美国临时专利申请序列号63/014758的权益，其通过引用明确地并入本文。

技术领域

本公开涉及形成芳基环丙基羧酸的方法，该羧酸可用于形成对节肢动物、软体动物和线虫中的有害生物具有杀有害生物效用的分子。

背景技术

芳基环丙基羧酸的形成已经公开于以下申请中：WO/2016/168056；WO/2016/168058；WO/2016/168059；WO/2018/071320；和WO/2018/071327。

以电子方式递交的序列表的引用

该序列表的官方副本经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以电子方式递交，文件名为81306_ST25.txt，创建于2021年4月19日，且具有12千字节大小，并与本说明书同时提交。该ASCII格式的文档中包含的序列表是说明书的一部分，并且通过引用以其全文并入本文。

本公开中使用的定义

这些定义中给出的实例不是详尽的，并且不得解释为限制本公开。可以理解的是，取代基应相对于与其附接的特定分子遵从化学键合规则和空间相容性约束。这些定义仅用于本公开的目的。

术语“烷氧基”意指进一步由碳-氧单键组成的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、和叔丁氧基。

术语“烷基”意指由碳和氢组成的无环、饱和、支链或直链的取代基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、和叔丁基。

术语“芳基”意指由氢和碳组成的环状芳香族取代基，例如苯基、萘基、和联苯。

术语“卤基”意指氟、氯、溴、和碘。

术语“卤代烷氧基”意指进一步由从一至最大可能数目的相同或不同的卤基组成的烷氧基，例如氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2-二氟丙氧基、氯甲氧基、三氯甲氧基、1,1,2,2-四氟乙氧基、和五氟乙氧基。

术语“卤代烷基”意指进一步由一至最大可能数目的相同或不同的卤基组成的烷基，例如氟甲基、三氟甲基、2,2-二氟丙基、氯甲基、三氯甲基、和1,1,2,2-四氟乙基。

术语“羟烷基”意指含有一个或多个羟基的烷基，例如羟甲基、羟乙基、羟基异丁基、1,3-二羟基丁基和1,3,5-三羟基己基。

具体实施方式

以下是与芳基环丙基羧酸的形成有关的方法。

在方案一的实施例一中

方案一

(a)R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地是H、F、Cl、Br、I、CN、NH₂、NO₂、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)卤代烷基、或(C₁-C₆)卤代烷氧基，其条件是R₂、R₃和R₄中的至少一个不是H；

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)(1)每个R_n独立地是(C₁-C₆)烷基，或者

(2)两个R_n在两个氧原子之间形成(C₂-C₆)烷基键。

在方案一的实施例二中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且每个R_n是C₂H₅。这种分子(“S1a-1”)表示如下。

反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯

方案一中的反应在将S1a氧化成S1b的氧化剂存在下进行。换言之，氧化剂在功能上将-C(OR_n)₂或-C(-O((C₂-C₆)烷基)O-)氧化成-C(＝O)OH。氧化剂的实例是氧气(O₂)、次氯酸钠(NaOCl)、臭氧(O₃)、过氧化氢(H₂O₂)、有机过酸(-OOH)、和其他无机氧化剂，如过氧单硫酸钾、过硫酸钾、过氧单硫酸氢钾硫酸盐(具有式2KHSO₅·KHSO₄·K₂SO₄的三合盐[CAS70693-62-8]，其从杜邦公司(E.I.du Pont de Nemours and Company)或其附属公司作为

(杜邦公司或附属公司的注册商标)可获得)。通常，可以使用约0.1摩尔至约3摩尔的氧化剂/摩尔的S1a、更优选约0.5摩尔至约1.5摩尔的氧化剂/摩尔的S1a。通常，当使用过氧化氢(H₂O₂)溶液时，可以使用约1％w/w至约70％w/w的浓度，然而，目前优选的是约20％w/w至约50％w/w。也可以使用氧化剂的混合物。

方案一中的反应在极性溶剂存在下进行。极性溶剂的实例是极性非质子溶剂和极性质子溶剂。极性非质子溶剂的实例是乙酸乙酯、四氢呋喃(“THF”)、二氯甲烷、丙酮、乙腈(“ACN”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、和二甲亚砜(“DMSO”)。极性质子溶剂的实例是乙酸(“AcOH”)、正丁醇(“n-BuOH”)、异丙醇(“i-PrOH”)、正丙醇(“n-PrOH”)、乙醇(“EtOH”)、甲醇(“MeOH”)、甲酸(“HCOOH”)、叔丁醇(“t-BuOH”)、和水(“H₂O”)。任选地，可以使用此类极性溶剂的混合物，并且实例如下表S1-MR中所示。

方案一中的反应可以在环境温度和压力下进行。然而，可以使用更高和更低的温度和压力。目前，可以使用从约0℃至约80℃的温度，优选地可以使用从约20℃至约60℃的温度。目前，可以使用从约10千帕(kPa)至约1000kPa的压力，优选地可以使用从约50kPa至约150kPa的压力。

任选地，酸催化剂和水可用于促进缩醛转化为醛，然后醛可以氧化成酸。合适的酸催化剂的实例是有机酸(乙酸、三氟乙酸、甲酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸)、无机酸如氯化氢或盐酸(HCl)、硅铝酸盐(沸石、氧化铝、硅铝磷酸盐)、硫酸化氧化锆(硫酸化氧化锆(IV))、以及许多过渡金属氧化物(钛、锆和铌)。优选地，使用具有强酸性磺酸基的基于聚苯乙烯的离子交换树脂，其实例是

15(CAS号39389-20-3)。(Amberlyst是陶氏化学公司(The Dow Chemical Company)或陶氏附属公司的注册商标。)甚至更优选地，使用硫酸(H₂SO₄)。通常，酸与氧化剂的摩尔比范围可以为从1:4至1:400、更优选从1:20至1:200。可以使用酸的混合物。

在方案二的实施例一中

方案二

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基。

在方案二的实施例二中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且R_x是CH₃。这种分子(“S2a-1”)表示如下。

反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯

在方案二的实施例三中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且R_x是CH₂CH₃。这种分子(“S2a-6”)表示如下。

反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯

方案二中的反应在酸存在下进行，该酸在醇存在下促进S1b的酯化以提供S2a。酸的实例是硫酸(H₂SO₄)、对甲苯磺酸一水合物、甲磺酸、三氟甲烷磺酸钪(III)、和其他酸性树脂，如

15、Nafion^TM(全氟化树脂(CAS号：31175-20-9)；Nafion^TM是科慕公司(The Chemours Company FC,LLC)的商标)、以及其混合物。通常，可以使用约0.001摩尔至约5摩尔的酸/摩尔的S1b、更优选约0.05摩尔至约0.5摩尔的酸/摩尔的S1b。

方案二中的反应在(C₁-C₆)醇存在下进行。(C₁-C₆)醇的实例是正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇、乙二醇、叔丁醇、及其混合物。任选地，此类醇的混合物可以多种摩尔比使用，并且在溶剂如甲苯、四氯化碳、苯、二乙醚、己烷、庚烷和二氯甲烷的存在下使用。例如，对于两种组分的混合物，可以使用1:1、1:5、1:10、1:50和1:100的比率。

方案二中的反应可以在环境温度和压力下进行。然而，可以使用更高或更低的温度和压力。目前，可以使用从约0℃至约100℃的温度；优选地，可以使用从约50℃至约70℃的温度。目前，可以使用从约10kPa至约1000kPa的压力；优选地，可以使用从约50kPa至约150kPa的压力。

可以使用任何有机或无机干燥剂来除去由反应产生的水。可以使用约0.1至约5摩尔的干燥剂/摩尔的S1b；优选地，可以使用约0.2至约2摩尔的干燥剂/摩尔的S1b。优选使用原酸酯作为干燥剂，尤其是具有式[R_y1C(OR_y2)₃]的那些，其中R_y1是氢或(C₁-C₆)烷基，并且R_y2是(C₁-C₆)烷基。此类干燥剂的实例是原乙酸三乙酯，CH₃C(OCH₂CH₃)₃；原乙酸三甲酯，CH₃C(OCH₃)₃；原甲酸三乙酯，HC(OCH₂CH₃)₃；和原甲酸三甲酯，HC(OCH₃)₃。此外，可以使用分子筛、硫酸镁、氯化钙和硫酸钠。任选地，可以使用干燥剂的混合物。

在方案三的实施例一中

方案三

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基。

在方案三的实施例二中，其中R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且R_x是CH₃，这种分子以上在方案2中示出并且命名为反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(也称为S2a-1)。

在方案三的实施例三中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；并且R₇和R₈是Cl。这种分子(“S3a-1”)表示如下。

(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸

方案三中的转化可以是手性动力学拆分，其涉及使用手性催化剂或试剂来促进一种对映体(在这种情况下是S2a的(R,R)-对映体)相对于另一种(S2a的(S,S)-对映体)的选择性转化，得到对映体富集的起始材料与产物的混合物，该混合物可以通过化学和/或物理方法分离。类似动力学拆分的理论产率为约50％，因为外消旋混合物(在这种情况下是S2a)由等量的两种对映体构成。参考文献：Keith,J.M.；Larrow,J.F.；Jacobsen,E.N.Adv.Synth.Catal[先进合成与催化].2001,343,5。在方案三的实施例二中，由此转化产生两种主要组分，(S,S)-酯的对映体富集部分和(R,R)-酸产物；也可以存在少量的(S,S)-酸和(R,R)-酯。在此转化之后，可以使用常规分离(separation)和分离(isolation)技术回收(R,R)-酸。

方案三中的转化在水解酶存在下进行，该水解酶优选归类为酶委员会编号EC3“水解酶”的水解酶；更优选归类为酶委员会编号EC3.1的水解酶-作用于酯键；并且最优选归类为酶委员会编号EC3.1.1的水解酶-羧酸酯水解酶。合适的水解将S2a的外消旋混合物中的酯水解为S3a的对映体富集的混合物。如果S2a的产值(PV，如等式1中所计算)大于20％、更优选超过30％、并且最优选超过40％，则该水解是优选的。优选地，S3a——其中(R,R)-对映体——的对映体过量(ee，如等式2中所计算)大于80％、优选大于90％、更优选大于95％、并且最优选大于99％。要使用的合适的羧酸酯水解酶可以选自斯氏假单胞菌脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、产碱杆菌属物种脂肪酶E、产碱杆菌属物种脂肪酶C、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶A、和洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶B。可以使用其他酶，但希望这些酶的同源性与至少一种上述羧酸酯水解酶至少90％同源、优选至少95％同源。所使用的水解酶、酯酶和脂肪酶的量可以是相对于S2a从约0.01重量％至约200重量％、优选相对于S2a约0.1重量％至1重量％。在商业上，水解酶可获得自各种供应商，例如Almac集团有限公司(Almac Group Limited)；天野酶美国有限公司(Amano Enzyme USA Co.,Ltd.)；c-LEcta股份有限公司(c-LEcta GmbH)；创意酶公司(Creative Enzymes)；Codexis有限公司(CodexisInc.)；宁波酶赛生物工程有限公司(Enzymaster(Ningbo)Bio-Engineering Co.,Ltd.)；Meito Sangyo有限公司(Meito Sangyo Co.,Ltd.)，诺维信公司(Novozymes A/S)。对于进一步的信息，参见由Karlheinz Drauz,Harald

和Oliver May编辑的EnzymeCatalysis in Organic Synthesis[有机合成中的酶催化],第3卷集,第46章(例如，参见第1852-1854页)；以及由David Rozzell编辑的“Tabular Survey of Available Enzymes[可用酶的表格调查]”,第1849-1985页，其由威利-维克出版社有限公司及股份两合公司(Wiley-VCh Verlag GmbH&Co.KGaA)在2012年取得版权，并且由威利-维克出版社有限公司及股份两合公司在2012年公开。任选地，水解酶可以固定或负载在聚合物、二氧化硅或其他载体材料上，以允许回收酶以供进一步使用。以下序列或具有90％或更高氨基酸序列同源性的那些序列可用于这种转化：AND61386(SEQ ID NO:1)；AAA50466(UniProt P22088)(SEQID NO:2)；AAC60400(UniProt P25275)(SEQ ID NO:3)；EGD05490(UniProt F0FZ41)(SEQID NO:4)；CAA83122(SEQ ID NO:5)；BBC47796(SEQ ID NO:6)；UniProt P20261(SEQ IDNO:7)。

方案三的转化在水(H₂O)、优选去离子水存在下进行。

方案三的转化任选地在水解酶优选可溶的水性缓冲剂存在下进行。合适的缓冲剂的实例是磷酸钠、2-[双(2-羟乙基)氨基]-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇(“双-三甲烷”)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(“HEPES”)、磷酸钾、3-吗啉代丙烷-1-磺酸(“MOPS”)、哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)(“PIPES”)、柠檬酸钠、3-{[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基]氨基}丙烷-1-磺酸(“TAPS”)、赖氨酸、2-氨基-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇(“TRIS”)、及其混合物。缓冲剂浓度可以为约0.0001摩尔(M)至约0.5M、优选约0.05M至约0.2M。

方案三的转化可以任选地在胺碱存在下进行。胺碱的实例是赖氨酸、乙醇胺、甘氨酸、及其混合物。因此，赖氨酸可以同时用作缓冲剂。胺碱的量为基于S2a的重量从约0.1wt％至约150wt％、优选约10wt％至约40wt％。

方案三的转化可以在共溶剂存在下进行。共溶剂的实例是丙酮、乙腈、甲基四氢呋喃、甲基叔丁基醚、己烷、甲苯、甲基乙基酮、环戊基甲基醚、二甲亚砜、二甲氧基乙烷、及其混合物。共溶剂可用于增加S2a的溶解度。所使用的共溶剂的量可以为总体积的从约1体积％至约90体积％、优选基于总体积的约10体积％至约40体积％。

方案三中的转化可以在环境温度和压力下进行。然而，可以使用更高或更低的温度和压力。目前，可以使用从约0℃至约80℃的温度；优选地，可以使用从约15℃至约60℃的温度；更优选地，可以使用从约25℃至约50℃的温度。目前，可以使用从约10kPa至约1000kPa的压力；优选地，可以使用从约50kPa至约150kPa的压力。转化混合物的pH应在约pH5至约pH 11、优选约pH 6至约pH 10的范围内。

实例

这些实例是为了说明的目的，而不应被解释为将本公开局限于在这些实例中所公开的实施例。

在不进一步纯化的情况下，使用从商业来源获得的起始材料、试剂、和溶剂。无水溶剂作为Sure/Seal^TM购买自奥德里奇公司(Aldrich)并且按所收到的原样使用。在ThomasHoover Unimelt毛细管熔点装置或来自斯坦福研究系统(Stanford Research Systems)的OptiMelt自动熔点系统上获得熔点，并且不经校正。使用“室温”的实例在温度范围为从约20℃至约24℃的气候受控的实验室中进行。分子被给予它们已知的名称，根据ISIS Draw、ChemDraw、或ACD Name Pro中的命名程序命名。如果此类程序不能命名分子，则使用常规命名规则命名此类分子。¹H NMR光谱数据按ppm(δ)计并且在300、400、500、或600MHz记录；¹³CNMR光谱数据按ppm(δ)计并且在75、100或150MHz记录；并且¹⁹F NMR光谱数据按ppm(δ)计并且在376MHz记录，除非另行说明。

实例1a：(E)-1-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-3,5-双(三氟甲基)苯的合成

在配备有搅拌棒的3升(L)单颈烧瓶中：将(E)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)丙烯醛(290克(g)，1081毫摩尔(mmol))在乙醇(360毫升(mL))中搅拌。添加原甲酸三乙酯(187mL，1125mmol)，然后添加4-甲基苯磺酸吡啶-1-鎓盐(PPTS；0.544g，2.163mmol)。将悬浮液在20℃下搅拌。4小时后，添加4-甲基吗啉(2.378mL，21.63mmol)以淬灭酸。经由旋转蒸发(45℃)浓缩混合物以除去乙醇。将浓缩物在庚烷与水(pH 7)之间分配。分离有机部分，经硫酸钠干燥、并浓缩(45℃，<1托)，以提供黄色油状物(341g，93％)：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.82(s,2H),7.76(s,1H),6.80(dd,J＝16.2,1.2Hz,1H),6.36(dd,J＝16.1,4.6Hz,1H),5.12(dd,J＝4.6,1.3Hz,1H),3.87-3.35(m,4H),1.27(t,J＝7.1Hz,6H)；¹⁹F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-63.05。

根据实例1a中公开和举例说明的程序，制备以下分子。

(E)-4-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-1-氟-2-(三氟甲基)苯

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.62(dd,J＝6.9,2.3Hz,1H),7.56(ddd,J＝7.5,4.7,2.3Hz,1H),7.15(t,J＝9.3Hz,1H),6.69(d,J＝16.1Hz,1H),6.19(dd,J＝16.1,4.9Hz,1H),5.07(dd,J＝4.9,1.2Hz,1H),3.71(dq,J＝9.5,7.1Hz,2H),3.56(dq,J＝9.4,7.1Hz,2H),1.26(t,J＝7.1Hz,6H)；GC-MS m/z 292.1。实例1b：反式-外消旋-1-2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1)的合成

在配备有顶置式搅拌器、挡板、冷凝器、温度探头和氮气入口的5-L夹套反应器中：将(E)-1-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-3,5-双(三氟甲基)苯(125g，365mmol)和苄基三乙基氯化铵(0.412g，1.826mmol)在氯仿(1180mL)和庚烷(535mL)的混合物中搅拌。在30分钟内经由加料漏斗添加50％氢氧化钠(NaOH，水溶液；484mL，9130mmol)。将夹套温度设置为45℃。将反应混合物在45℃下剧烈搅拌直至反应达到90％至95％的转化率。将反应混合物冷却至20℃后，向反应器中装入水(1.2L)，并将混合物搅拌5分钟。分离各层后，除去水层，并将有机层用另外的水(1.2L)洗涤。将有机层在真空下浓缩以获得含有所希望产物S1a-1的棕色油状物(85％锅内产率)：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.83(s,1H),7.71(s,2H),4.64(d,J＝6.1Hz,1H),3.82-3.55(m,4H),2.94(d,J＝8.4Hz,1H),2.35(dd,J＝8.5,6.1Hz,1H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H)；¹⁹F NMR(471MHz,CDCl₃)δ-62.87。

根据实例1b中公开和举例说明的程序，制备以下分子。

反式-外消旋-4-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-1-氟-2-(三氟甲基)苯

(S1a-2)

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.50(dd,J＝6.7,2.3Hz,1H),7.43(ddd,J＝7.4,4.5,2.4Hz,1H),7.19(t,J＝9.3Hz,1H),4.60(d,J＝6.2Hz,1H),3.83-3.56(m,4H),2.83(d,J＝8.4Hz,1H),2.26(dd,J＝8.4,6.2Hz,1H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H)；GC-MS m/z 375.1。

实例1c：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1)的合成

在配备有机械搅拌器、温度探头和冷凝器的3-L四颈烧瓶中：将反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1；96.5g，227mmol)在乙酸(779mL)中搅拌。添加水(82mL)。添加

(140g，227mmol)。将混合物加热至30℃。30分钟后，将温度缓慢增加至45℃。20小时后，将混合物冷却至25℃。添加亚硫酸氢钠(23.6g，227mmol)以淬灭剩余的过氧化物。搅拌30分钟后，在用碘化钾(KI)纸测试时不存在过氧化物。添加乙腈(1.5L)。过滤混合物并将滤液浓缩。将浓缩物在乙酸乙酯(500mL)与盐水(200mL)之间分配。将乙酸乙酯部分浓缩以提供橙色油状物。将油状物在乙腈(500mL)与庚烷(300mL)之间分配。将庚烷部分用乙腈(100mL)萃取。将乙腈部分浓缩以提供呈橙色油状物的产物S1b-1(81.8g，93％)：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.89(s,1H),7.73(s,2H),3.60(d,J＝8.2Hz,1H),2.99(d,J＝8.3Hz,1H)；¹⁹F NMR(471MHz,氯仿-d)δ-62.90。

实例1d：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1)的合成

在配备有机械搅拌器、温度探头、冷凝器和氮气入口的1-L夹套反应器中：将反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1；127g，299mmol)在乙腈(478mL)中搅拌。添加水(118mL)。添加

(184g，299mmol)。将反应混合物加热至35℃。24小时后，分析表明完全转化。将反应混合物冷却至20℃。该混合物的过氧化物检测呈阳性。分小份添加亚硫酸氢钠(10.88g，105mmol)直至混合物的过氧化物检测呈阴性。添加乙酸乙酯(1.5L)。分离有机部分并浓缩以提供黄色油状物。将油状物吸收在乙腈(600mL)中并用正庚烷(2×200mL)分配。浓缩乙腈层。将乙腈部分浓缩至干并将残余物在正庚烷(800mL)中搅拌并搅拌过夜。将混合物在冰浴中冷却。2小时后，将浆料真空过滤，并且收集固体并将其真空干燥以得到S1b-1(102.6g，95％)。

实例1e：反式-外消旋-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲酸(S1b-2)的合成

在配备有温度探头、冷凝器和氮气入口的1-L四颈烧瓶中：将反式-外消旋-4-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-1-氟-2-(三氟甲基)苯(S1a-2；30g，80mmol)在乙酸(276mL)中搅拌。添加水(27.6mL)。将混合物加热至40℃。16小时后，¹H-NMR分析示出完全形成反式-外消旋-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲醛(>99％转化率)：¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δ9.55(d,J＝4.0Hz,1H),7.50(dd,J＝6.6,2.3Hz,1H),7.50-7.42(m,1H),7.24(t,J＝9.1Hz,1H),3.57(d,J＝7.9Hz,1H),2.93(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-61.51(d,J＝12.9Hz),-113.97(q,J＝12.4Hz)。

如此，将

(30.4g，49.4mmol)添加到反应混合物中。将混合物加热至50℃并搅拌20小时。使混合物冷却至23℃。分批添加亚硫酸氢钠(3.95g，38mmol)以淬灭剩余的过氧化物。将混合物用乙腈(500mL)稀释。搅拌1小时后，将混合物过滤并浓缩。将浓缩物在乙酸乙酯与水之间分配。将有机部分干燥并浓缩以提供呈橙色油状物的S1b-2(24g，95％)：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.53-7.42(m,2H),7.23(t,J＝9.2Hz,1H),3.48(d,J＝8.3Hz,1H),2.88(d,J＝8.3Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-61.49(d,J＝12.9Hz),-114.27(q,J＝12.7Hz)。

实例1f：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1)的合成

向配备有温度探头和氮气入口的100-mL反应器中添加乙酸(280mL)和水(28.0mL)。将反应混合物加热至50℃。一次性添加反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1；30g，70.6mmol)。通过¹H-NMR和GC-MS分析监测反应进程。60分钟后，观察到起始材料完全转化为反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲醛(>99％转化率)：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.61(d,J＝3.7Hz,1H),7.92-7.85(m,1H),7.78-7.67(m,2H),3.67(d,J＝8.0Hz,1H),3.05(dd,J＝8.0,3.7Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.92；GC-MS m/z 315。

如此，将

(43.4g，70.6mmol)一次性添加到反应混合物中。观察到轻微放热。3小时后，¹H NMR分析示出完全转化为所希望的甲酸产物。将混合物冷却至20℃并搅拌过夜。将混合物冷却至5℃并用在水(30mL)中的亚硫酸氢钠(9.54g，92mmol)淬灭。将混合物升温至25℃并用水(200mL)稀释。添加甲基叔丁基醚(MTBE；300mL)。将水层用MTBE(300mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(3×200mL)洗涤、收集、干燥(MgSO₄)、过滤并浓缩。将残余物用庚烷(200mL)稀释并浓缩至干。添加固体外消旋产物的种子。固体开始形成。将固体用正庚烷(200mL)磨碎、过滤并用正庚烷洗涤以得到所希望的产物(23.5g，91％)。

实例1g：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1)的合成

在配备有温度探头、氮气入口和顶置式搅拌器的夹套反应器中：将反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1；127g，78.6wt％纯，235mmol)溶解在乙酸(538mL，9391mmol)中。添加硫酸(0.63mL，11.7mmol)。将混合物升温至50℃。在8小时内添加过氧化氢(30wt％；48mL，470mmol)。在完全添加过氧化氢后，将混合物在50℃下保持14小时。以10wt％在水中的溶液添加亚硫酸氢钠(29.3g，282mmol)。30分钟后，用碘化钾(KI)淀粉纸测试出反应混合物对残余过氧化物呈阴性。蒸馏(15-38托，60℃-70℃)混合物直至除去606.8g馏出物。在60℃-70℃下将庚烷(743mL)添加到残余物中并分离各层。将庚烷层用水(127mL)洗涤两次。通过蒸馏浓缩庚烷层直至收集到255g馏出物。将浓缩物冷却至-5℃并保持60分钟。通过真空过滤收集所得固体并真空干燥以得到S1b-1(71.7g，82％)。

实例1h：反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3-氯-4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸(S1b-3)的合成

在配备有搅拌棒的100mL单颈烧瓶中：将反式-外消旋-2-氯-4-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-1-氟苯(如Heemstra等人的WO 2016168059 A1所制备；4.246g，12.43mmol)在乙酸(28.5mL)中搅拌。添加硫酸(0.61g，0.621mmol)。将混合物加热至50℃。在8小时内添加过氧化氢(30wt％，2.54mL，24.86mmol)。22小时后，将混合物冷却至25℃。以10wt％在水中的溶液添加亚硫酸氢钠(1.552g，14.91mmol)以淬灭剩余的过氧化物。将混合物在真空下浓缩大约一半体积。添加水(14mL)。将混合物用二氯甲烷(10mL)萃取三次。将合并的萃取物在真空下浓缩以得到S1b-3(3.18g，90％)：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.39-7.34(m,1H),7.20-7.15(m,2H),3.43(d,J＝8.2Hz,1H),2.88(d,J＝8.3Hz,1H)；¹³C NMR(126MHz,氯仿-d)δ158.16(d,J＝250.6Hz),129.40(d,J＝4.0Hz),128.69(d,J＝7.4Hz),121.57(d,J＝18.2Hz),116.99(d,J＝21.5Hz)；¹⁹F NMR(471MHz,氯仿-d)δ-115.20。

实例2a：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)的合成

在配备有机械搅拌器、温度探头和冷凝器的3-L单颈烧瓶中：将反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1；123.6g，337mmol)在甲醇(1362mL，33700mmol)中搅拌。添加硫酸(1.077mL，20.20mmol)。将混合物加热至温和回流(约65℃)。20小时后，使混合物冷却。添加4-甲基吗啉(3.33mL，30.3mmol)。将混合物浓缩。将浓缩物吸收在己烷(1.5L)中并用水(500mL)洗涤。将己烷部分干燥并浓缩以提供呈固体的S2a-1(123.72g，92％)：¹H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.87(s,1H),7.71(s,2H),3.88(s,3H),3.58(d,J＝8.3Hz,1H),2.95(d,J＝8.3Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-62.93。

根据在方案2中公开的且在实例2a中举例说明的程序，制备以下分子。

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-2)

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.52-7.41(m,2H),7.22(t,J＝9.2Hz,1H),3.86(s,3H),3.48(d,J＝7.4Hz,1H),2.85(d,J＝8.3Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,氯仿-d)δ-61.48(d,J＝12.8Hz),-114.60(q,J＝12.5Hz)。

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,4-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-3)

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.45(d,J＝8.3Hz,1H),7.35(dd,J＝2.1,0.7Hz,1H),7.11(ddd,J＝8.3,2.1,0.7Hz,1H),3.85(s,3H),3.42(d,J＝8.3Hz,1H),2.82(d,J＝8.3Hz,1H)。

实例2b：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)的合成

在配备有磁力搅拌棒的玻璃小瓶中：添加反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1；1.0g，2.72mmol)和原甲酸三甲酯(0.343mL，3.13mmol)。一次性添加硫酸(5.45mg，0.054mmol)在甲醇(0.441mL，10.90mmol)中的溶液。将反应混合物加热至65℃并搅拌19小时。将温度增加至75℃以蒸馏掉挥发物持续1小时。将残余物冷却至50℃-55℃，然后添加庚烷(4.0mL)和在水(2.0mL)中的碳酸钾(0.015g，0.11mmol)。将混合物搅拌15分钟，并且然后分离各层。将庚烷层在真空下浓缩以得到S2a-1(1.0g，96％)。

根据在方案2中公开的且在实例2b中举例说明的程序，制备以下分子。

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,5-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-4)

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.35-7.33(m,1H),7.17-7.14(m,2H),3.85(s,3H),3.41(d,J＝8.3Hz,1H),2.84(d,J＝8.3Hz,1H)；¹³C NMR(126MHz,氯仿-d)δ166.62,135.94,135.32,128.63,127.47,61.30,53.21,39.37,37.46。

实例2c：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)的合成

在配备有磁力搅拌棒的玻璃小瓶中：添加反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1；1.0g，2.72mmol)和原甲酸三甲酯(0.343mL，3.13mmol)。一次性添加硫酸(5.45mg，0.054mmol)在甲醇(0.441mL，10.90mmol)中的溶液。将反应混合物加热至65℃并搅拌19小时。将温度增加至75℃以蒸馏掉挥发物持续1小时。将残余物冷却至环境温度，得到所希望的产物S2a-1(1.0g，96％)。将残余物冷却至50℃-55℃，然后添加庚烷(4.0mL)和在水(2.0mL)中的碳酸钾(0.015g，0.11mmol)。将混合物搅拌15分钟，并且然后分离各层。将庚烷层在真空下浓缩以得到S2a-1(1.0g，96％)。任选地，可在50℃-55℃下将残余物在庚烷(4.0mL)与在水(2.0mL)中的碳酸钾(0.015g，0.11mmol)之间分配。可将庚烷层在真空下浓缩以得到S2a-1。

实例2d：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)的合成

在配备有机械搅拌器和回流冷凝器的玻璃反应器中：添加反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1；93wt％，260g，659mmol)和原甲酸三甲酯(80.4g，758mmol)。添加甲醇(84.4g，2638mmol)。添加硫酸(1.3g，13.3mmol)。将反应混合物加热至65℃并搅拌12小时。将温度增加至75℃并通过蒸馏除去挥发物。将残余物冷却至50℃-55℃。添加庚烷(712.4g)。添加碳酸钾(3.64g，26.3mmol)在水(520g)中的溶液。将混合物搅拌15-30分钟。分离各层并通过真空蒸馏浓缩有机层，得到所希望的产物S2a-1(259g，96wt％，96％)。

实例2e：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-5)的合成

在配备有搅拌棒和回流冷凝器的100mL单颈烧瓶中：添加反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S1b-3；5.93g，20.93mmol)和原甲酸三甲酯(2.66mL，24.05mmol)。一次性添加硫酸(41mg，0.42mmol)在甲醇(3.38mL，84mmol)中的溶液。将反应混合物加热至65℃并搅拌19小时。将温度增加至75℃以蒸馏掉挥发物持续1小时。将残余物冷却至环境温度。将残余物在二氯甲烷(20mL)和碳酸氢钾溶液(1.16wt％，10mL)之间分配。分离二氯甲烷部分并浓缩以提供所希望的产物S2a-5(5.90g，95％)：¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δ7.30(dq,J＝6.8,1.3Hz,1H),7.17-7.12(m,2H),3.85(s,3H),3.42(d,J＝8.3,1.0Hz,1H),2.81(d,J＝8.3Hz,1H)。

实例2f：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯(S2a-6)的合成

在配备有磁力搅拌棒、回流冷凝器和氮气入口的30-mL小瓶中：将反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S1b-1；3.0g，8.17mmol)与原甲酸三乙酯(1.56mL，9.40mmol)混合。添加硫酸(16mg，0.163mmol)在乙醇(1.91mL)中的溶液。将混合物加热至75℃。搅拌1天后，添加乙醇(1.91mL)。搅拌3天后，将混合物冷却至50℃并浓缩为油状物。将油状物在庚烷(10mL)与10wt％碳酸氢钠水溶液(10mL)之间分配。将庚烷层浓缩以得到呈黄色油状物的标题化合物S2a-6(2.56g，79％)：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.86(s,1H),7.71(d,J＝1.6Hz,2H),4.33(qd,J＝7.1,1.9Hz,2H),3.57(d,J＝8.3Hz,1H),2.94(d,J＝8.3Hz,1H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)；¹⁹F NMR(471MHz,氯仿-d)δ-62.91。

作为方案1和2的替代方案，S1a到S2a的转化可以如实例2.5a和2.5b中所示进行。

实例2.5a：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯(S2a-6)的合成

在配备有磁力搅拌棒、温度探头和氮气入口的50-mL圆底烧瓶中：将反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1；2.00g，4.70mmol)在乙醇(9.39mL)中搅拌。添加水(0.25mL，14.11mmol)。添加

(2.89g，4.70mmol)。将反应混合物加热至55℃。72小时后，分析表明完全转化。将反应混合物冷却至23℃。添加亚硫酸氢钠(0.538g，5.17mmol)。将混合物搅拌30分钟。用碘化钾(KI)纸测试出混合物对过氧化物呈阴性。将混合物过滤。将滤液浓缩为油状物。将油状物在水(10mL)与庚烷(10mL)之间分配。将庚烷层浓缩以得到呈黄色油状物的标题化合物S2a-6(1.384g，75％)：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.86(s,1H),7.71(d,J＝1.6Hz,2H),4.33(qd,J＝7.1,1.9Hz,2H),3.57(d,J＝8.3Hz,1H),2.94(d,J＝8.3Hz,1H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)；¹⁹F NMR(471MHz,氯仿-d)δ-62.91。

实例2.5b：反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯(S2a-6)的合成

在配备有磁力搅拌棒、回流冷凝器和氮气入口的50-mL圆底烧瓶中：将反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯(S1a-1；1.00g，2.35mmol)在乙醇(4.70mL)中搅拌。添加过碳酸钠(0.369g，2.35mmol)。添加硫酸(0.28ml，5.17mmol)。将反应混合物加热至70℃。20小时后，分析表明大约78％的转化率。将反应混合物冷却至23℃。添加亚硫酸氢钠(0.073g，0.71mmol)。将混合物搅拌20分钟。测试出混合物对过氧化物呈阴性(KI纸)。将混合物用庚烷(10ml)稀释并将混合物搅拌5分钟。将混合物过滤。将固体滤饼用庚烷(5ml)洗涤。将滤液浓缩为油状物。将油状物溶解在庚烷(10ml)中。将混合物经硫酸钠干燥。过滤混合物并浓缩滤液以得到呈黄色油状物的标题化合物S2a-6(65％锅内产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.86(s,1H),7.71(d,J＝1.6Hz,2H),4.33(qd,J＝7.1,1.9Hz,2H),3.57(d,J＝8.3Hz,1H),2.94(d,J＝8.3Hz,1H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)；¹⁹F NMR(471MHz,氯仿-d)δ-62.91。

实例3a：(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的合成

在配备有具有9-cm直径Rushton型叶轮的机械搅拌器、两个1-cm宽挡板、温度探头和冷凝器的5-L夹套反应器容器(18.4-厘米(cm)直径)中，装入L-赖氨酸一水合物(60g，365mmol)在去离子水(1800mL)中的溶液。在以280转/分钟(RPM)剧烈搅拌的同时，将反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1；300g，771mmol)在丙酮(1200mL)中的溶液添加到反应器中。将容器内容物的温度增加至30℃并混合30分钟。将斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Almac集团有限公司产品，代码AH-04；9g)作为固体添加到反应中。当反应达到45％的反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)到(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的产值时，将反应混合物在280RPM和30℃下搅拌24小时。

使用以下等式1计算产值。

等式1

HPLC分析方法如下：手性HPLC柱：

OJ-3R(150×4.6毫米(mm)内径，3.0微米(μm))；温度：30℃；流量：0.625mL/min；等度50:50 0.1％在乙腈中的甲酸-0.1％在水中的甲酸；在220纳米(nm)处的UV检测器。(S,S)-酯的预期洗脱时间为18.0分钟，并且(R,R)-酯的预期洗脱时间为18.8分钟。

实例3b：(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的分离

在配备有具有倾斜叶片型叶轮的机械搅拌器的1-L夹套反应器容器中，添加pH为7的0.2M 2-氨基-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇缓冲溶液(131.25mL)和100mg/mL赖氨酸溶液(70mL)。在以200RPM混合的同时，将反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1；7g，771mmol)在丙酮(79mL)中的溶液添加到反应器中。将容器内容物的温度增加至30℃并混合30分钟。将溶解在去离子水(35mL)中的斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Almac集团，产品代码AH-04；70mg)添加到反应器中。将反应混合物在250RPM和30℃下搅拌24小时。

将反应溶液收获到1-L离心瓶中并在Beckman Avanti J-26落地式离心机中以4402相对离心力(“RCF”)离心5分钟。将含有绝大多数S3a-1产物的上清液从较稠密的油相中倾析出。将主要由未反应的S2a-1组成的较稠密的油相转移至50mL聚丙烯锥形小瓶中，并在Thermo Scientific Sorvall ST8中以3100RCF离心足够的持续时间以实现相分离，以便回收另外的S3a-1。将上清液与先前的上清液合并。从反应器收获的298.22g材料中回收了总计287.55g上清液，其中剩余部分包含S,S-甲酯富集的稠密油相。

将上清液(47.75g)添加到250mL玻璃烧杯中。使用Watson Marlow 520SU蠕动泵以0.6RPM在1小时内添加0.1当量(N)盐酸(214.8g)。盐酸降低了溶液的pH，从而降低了S3a-1的溶解度极限，导致结晶。将结晶浆料在Thermo Scientific Sorvall ST8中以3100RCF在50mL锥形小瓶中离心足够的持续时间以沉淀晶体。将湿晶体转移至玻璃闪烁小瓶中并在25mm Hg真空压力和环境温度下干燥过夜。这产生了0.20413g的纯度为92.0％的S3a-1。

实例3c：(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的分离

在实例3a中描述的(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的合成之后，通过在减压下蒸发从反应混合物中除去丙酮。通过添加2M氢氧化钠水溶液使剩余混合物呈碱性至pH 11.5。然后将含水混合物用甲基叔丁基醚萃取两次。使剩余的水层经受反应性结晶，其中缓慢添加3M盐酸水溶液以将混合物的pH调节至pH 4.0。将所得浆料在室温下搅拌5小时，并然后通过多孔玻璃漏斗过滤以获得呈灰白色固体的S3a-1(42％分离产率)。

实例4a：针对水解反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸酯(S2a-1)以合成(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的活性和选择性筛选酶

反应：

制备反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)在丙酮中的溶液至浓度为200毫克/毫升(mg/mL；“底物溶液”)。在水中制备赖氨酸的溶液至浓度为200mg/mL(“赖氨酸溶液”)。向15-mL锥形小瓶中装入赖氨酸溶液(0.25mL)、底物溶液(1.0mL)、丙酮(0.5mL)和去离子水(3.25mL)。将加盖的15-mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。将选自表4a-2所示列表的脂肪酶称重到单独的15-mL锥形小瓶(40mg)中。向每个含有脂肪酶的小瓶中添加水(1.0mL)。将小瓶以3000RPM涡旋三分钟以分散和部分溶解脂肪酶。将底物、丙酮和赖氨酸溶液的内容物转移至含有酶的小瓶中。将小瓶在30℃下以40RPM倒置24小时，以允许脂肪酶催化的水解继续进行。24小时后，取两个样品通过HPLC进行分析，以评估S2a-1的近似转化率和S3a-1产物的对映体过量。

通过非手性HPLC分析近似转化率：

将充分混合的反应溶液(333μL)称量到25mL容量瓶中。向烧瓶中添加内标物溶液(200μL)。内标物溶液由溶解在乙腈(0.5mL)和水(0.5mL)中的4,4’-二羟基二苯基甲烷(8.33mg)组成。添加另外的1:1体积乙腈/体积水，以使总体积达到25mL。将溶液涡旋30秒。将等分试样转移至HPLC小瓶中，并使用以下方法通过HPLC分析：

HPLC柱：Agilent ZORBAX SB-苯基(150mm×4.6mm内径与3.5μm粒度，安捷伦公司(Agilent)零件编号863953-912)；温度：环境(大约20℃)；流量：1.0mL/min；注射体积：5μm；在210nm处的UV检测；根据下表的溶剂梯度：

预期内标物将在3.9分钟洗脱，S3a-1在6.2分钟洗脱，并且S2a-1在7.3分钟洗脱。使用基于内标物和以下等式的定量从非手性HPLC结果计算近似转化率：

通过手性HPLC分析对映体过量：

从锥形反应小瓶中取出50-μL样品并置于过滤HPLC小瓶中，向其中添加乙腈(400μL)。插入过滤柱塞并使用以下方法通过HPLC分析经过滤的溶液：手性HPLC柱：DAICEL

OJ-3R(150mm×4.6mm内径，3μm硅胶)；温度：30℃；流量：0.625mL/min；等度50％:50％0.1％在水中的甲酸-0.1％在乙腈中的甲酸；在220nm处的UV检测；注射体积为5.0μL。(S,S)-酸的预期洗脱时间为7.2分钟，(R,R)-酸的预期洗脱时间为7.7分钟，(S,S)-酯的预期洗脱时间为18.0分钟并且(R,R)-酯的预期洗脱时间为18.8分钟。使用以下等式从手性HPLC结果计算对映体过量。

实例4b：评估用于水解反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,5-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-4)以合成(1R,3R)-2,2-二氯-3-(3,5-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸(S3a-4)的斯氏假单胞菌脂肪酶的活性和选择性

反应：

在水中制备赖氨酸的溶液至浓度为80mg/mL(“赖氨酸溶液”)。向四个15-mL锥形小瓶中装入200mg的反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,5-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-4)、赖氨酸溶液(0.5mL)、以及以下溶剂之一：丙酮(2.4mL)、二甲亚砜(0.45mL)、乙腈(0.6mL)或甲基叔丁基醚(3mL)。用去离子水使小瓶填充体积达到总计5mL。将加盖的15-mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。通过将斯氏假单胞菌脂肪酶(Almac集团，AH-04)溶解在去离子水中至浓度为2mg/mL(“脂肪酶溶液”)来制备脂肪酶溶液。将脂肪酶溶液(1.0mL)添加到每个15-mL锥形小瓶中。将15-mL锥形小瓶在30℃下以40RPM倒置24小时，以允许脂肪酶催化的水解继续进行。

24小时后，将1N盐酸(0.25mL)添加到每个15-mL锥形小瓶中。通过添加3mL的二氯甲烷、涡旋、沉降并通过移液除去二氯甲烷，将混合物用二氯甲烷萃取两次。重复该过程以进行第二次萃取。将二氯甲烷萃取物合并、经硫酸钠干燥、过滤并通过旋转蒸发浓缩。将所得油状物溶解在乙腈中并通过HPLC分析以评估S2a-4的近似转化率并通过手性HPLC分析以评估S3a-4产物的对映体过量。分析结果在表4b-1中示出。

实例4c：评估用于水解反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3-氯-4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-5)以合成(1R,3R)-2,2-二氯-3-(3-氯-4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸(S3a-5)的斯氏假单胞菌脂肪酶的活性和选择性

制备反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3-氯-4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-5)在丙酮中的溶液至浓度为200mg/mL(“底物溶液”)。在水中制备赖氨酸的溶液至浓度为80mg/mL(“赖氨酸溶液”)。向15-mL锥形小瓶中装入赖氨酸溶液(0.5mL)、底物溶液(1.0mL)、丙酮(1.4mL)和去离子水(2.1mL)。将加盖的15-mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。通过将斯氏假单胞菌脂肪酶(Almac集团，AH-04)溶解在去离子水中至浓度为2mg/mL(“脂肪酶溶液”)来制备脂肪酶溶液。将脂肪酶溶液(1.0mL)添加到每个15-mL锥形小瓶中。将小瓶在30℃下以40RPM倒置24小时，以允许脂肪酶催化的水解继续进行。

向反应溶液中添加1N盐酸(0.25mL)。通过添加3mL的二氯甲烷、涡旋、沉降并通过移液除去二氯甲烷，将混合物用二氯甲烷萃取两次。重复该过程以进行第二次萃取。将二氯甲烷萃取物合并、经硫酸钠干燥、过滤并通过旋转蒸发浓缩。将所得油状物溶解在乙腈中并通过HPLC分析以评估S2a-5的近似转化率并通过手性HPLC分析以评估S3a-5产物的对映体过量。HPLC分析示出26％的转化率，并且手性HPLC结果示出反应产物的94.4％的对映体过量。

实例5：(1R,3R)-2,2-二氯-3-(3-三氟甲基-4-氟苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-2)的合成

在100mL烧瓶中，在室温下将反式-外消旋-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-2；500mg，1.510mmol)溶解在DMSO(10mL)和缓冲溶液(0.1M磷酸氢二钾和磷酸二氢钾，pH 7.0；100mL)中。添加酶(斯氏假单胞菌脂肪酶，可获得自Almac集团，产品代码AH-04；250mg)，并将悬浮液在30℃下搅拌4天。将反应混合物用乙酸乙酯和6N盐酸稀释。分离出主要含有乙酸乙酯的有机层并用另外的水洗涤。通过真空蒸发浓缩有机层以得到(1R,3R)-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲酸(150mg，31.3％分离摩尔产率，96％对映体过量)：¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.60-7.41(m,2H),7.30-7.17(m,1H),3.50(d,J＝8.2Hz,1H),2.89(d,J＝8.3Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,DMSO)δ-61.48,-114.25；LCMS m/z＝316([M-H]^-)。手性HPLC方法：柱：CHIRALPAK^@ZWIX(+)，粒度3μm，尺寸3mm×150mm，DAIC 511584；流动相：49％乙腈-49％甲醇-水与50毫摩尔(mM)甲酸和二乙胺；流量：0.5mL/min；洗脱时间：9分钟；温度：25℃。

实例6：(1R,3R)-2,2-二氯-3-(3,4-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸(S3a-3)的合成

将在DMSO(50μL)中的反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,4-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-3；约5mg)添加到四个2mL艾本德(Eppendorf)管中的每一个中。在pH为7.0的0.1M磷酸钾缓冲剂中制备斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Almac集团，产品代码AH-04；)的溶液。制备足够体积的脂肪酶溶液和磷酸钾缓冲溶液，以向每个2mL艾本德管中添加0.05mg与15mg之间的缓冲剂中的脂肪酶(950μL)，从而使每个管的总体积达到1mL。根据表6-1，使用管式倒置器在30℃下以40RPM旋转小瓶持续40与80小时之间，使反应混合物继续进行。将混合物用乙酸乙酯和6N盐酸稀释。收集主要含有乙酸乙酯的有机层并通过HPLC分析。每个反应的所得转化率和对映体过量在表6-1中示出。

手性HPLC方法：柱：CHIRALPAK^@ZWIX(+)，粒度3μm，尺寸3mm×150mm，DAIC 511584；流动相：49％乙腈-49％甲醇-水与50mM甲酸和二乙胺；流量：0.5mL/min；洗脱时间：9分钟；温度：25℃。

脂肪酶*＝斯氏假单胞菌脂肪酶(Almac AH-04)

**产值计算如下：

实例7：(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)的合成

制备反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)在丙酮中的溶液至浓度为200mg/mL(“底物溶液”)。在水中制备赖氨酸的溶液至浓度为100mg/mL(“赖氨酸溶液”)。制备斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Almac集团，产品代码AH-04)在水中的溶液至浓度为2mg/mL(“酶溶液”)。向15-mL锥形小瓶中装入赖氨酸溶液(0.25mL)、酯溶液(0.5mL)、丙酮(1mL)和水(4.125mL)。将加盖的15-mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。将酶溶液(0.125mL)添加到15-mL锥形小瓶中，使斯氏假单胞菌脂肪酶的质量等于S2a-1的质量的0.25％。将管在30℃下以40RPM倒置48小时，以允许脂肪酶拆分继续进行。从锥形小瓶中取出50-μL样品并置于过滤HPLC小瓶中，向其中添加乙腈(400μL)。插入过滤柱塞并通过HPLC分析经过滤的溶液。

HPLC分析方法如下：手性HPLC柱：DAICEL

OJ-3R(150mm×4.6mm内径，3μm硅胶)；温度：30℃；流量：0.625mL/min；等度50:50 0.1％在水中的甲酸-0.1％在乙腈中的甲酸；在220nm处的UV检测；注射体积为5.0μL。(S,S)-酸的预期洗脱时间为7.2分钟，(R,R)-酸的预期洗脱时间为7.7分钟，(S,S)-酯的预期洗脱时间为18.0分钟并且(R,R)-酯的预期洗脱时间为18.8分钟。

HPLC分析示出47.7％的产值与98.8％的对映体过量。产值计算如下。

实例8：由反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯(S2a-6)合成(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)

制备反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯(S2a-6)在丙酮中的溶液至浓度为200mg/mL(“底物溶液”)。在水中制备无水赖氨酸的溶液至浓度为80mg/mL(“赖氨酸溶液”)。制备斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Meito Sangyo有限公司，产品代码Lipase TL)在水中的溶液至浓度为2mg/mL(“酶溶液”)。向两个15-mL锥形小瓶中各自装入赖氨酸溶液(0.5mL)、底物溶液(1.0mL)、丙酮(0.5mL)和水(3.0mL)。将加盖的15-mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。将脂肪酶溶液(1.0mL)添加到一个15-mL锥形小瓶中，使斯氏假单胞菌脂肪酶的质量等于S2a-6的质量的1.0％。将管在30℃下以40RPM倒置24小时。从每个锥形小瓶中取出50-μL样品并置于过滤HPLC小瓶中，向其中添加乙腈(400μL)。插入过滤柱塞并通过HPLC分析经过滤的溶液。

HPLC分析方法如下：手性HPLC柱：DAICEL

OJ-3R(150mm×4.6mm内径，3μm硅胶)；温度：30℃；流量：0.625mL/min；等度50:50 0.1％在水中的三氟乙酸-0.1％在乙腈中的三氟乙酸；在220nm处的UV检测；注射体积为5.0μL。(S,S)-酸的预期洗脱时间为7.2分钟，(R,R)-酸的预期洗脱时间为7.7分钟，(S,S)-酯的预期洗脱时间为18.0分钟并且(R,R)-酯的预期洗脱时间为18.8分钟。

使用以下等式从手性HPLC结果计算对映体过量。

使用以下等式从手性HPLC结果计算产值：

结果呈现在表8-1中。

实例9：使用斯氏假单胞菌脂肪酶用于立体选择性地水解反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸酯(S2a-1)以合成(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)

制备反式-外消旋--3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)在丙酮中的溶液至浓度为200mg/mL(“底物溶液”)。在水中制备无水赖氨酸的溶液至浓度为80mg/mL(“赖氨酸溶液”)。制备斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Meito Sangyo有限公司，产品代码Lipase TL)在水中的溶液至浓度为2mg/mL(“Lipase TL溶液”)。制备斯氏假单胞菌脂肪酶(可获得自Almac集团，产品代码AH-04)在水中的溶液至浓度为2mg/mL(“AH-04溶液”)。向两个15-mL锥形小瓶中各自装入赖氨酸溶液(1.0mL)、底物溶液(1.0mL)、丙酮(0.5mL)和水(2.5mL)。将加盖的15-mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。将脂肪酶溶液(1.0mL)添加到一个15-mL锥形小瓶中，使斯氏假单胞菌脂肪酶的质量等于S2a-1的质量的1.0％。将酯酶溶液(1.0mL)添加到另一个15-mL锥形小瓶中，使酯酶的质量等于S2a-1的质量的1.0％。将管在30℃下以40RPM倒置24小时。从每个锥形小瓶中取出50-μL样品并置于过滤HPLC小瓶中，向其中添加乙腈(400μL)。插入过滤柱塞并通过HPLC分析经过滤的溶液。

HPLC分析方法如下：手性HPLC柱：DAICEL

使用以下等式从手性HPLC结果计算对映体过量。

使用以下等式从手性HPLC结果计算产值：

结果呈现在表9-1中。

实例10：使用荧光假单胞菌脂肪酶用于立体选择性地水解反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸酯(S2a-1)以合成(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸(S3a-1)

反应：

制备反式-外消旋--3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯(S2a-1)在丙酮中的溶液至浓度为100mg/mL(“底物溶液”)。使用无水赖氨酸作为起始材料在水中制备赖氨酸的溶液至浓度为100mg/mL(“赖氨酸溶液”)。在水中制备磷酸二氢钾和磷酸氢二钾的溶液至浓度为0.1M(“缓冲溶液”)，其比例应使pH为7.0。向15mL锥形小瓶中装入赖氨酸溶液(1.0mL)、底物溶液(1.0mL)、丙酮(0.5mL)和缓冲溶液(2.5mL)。将加盖的15mL锥形小瓶在管式倒置器上以40RPM旋转30分钟。通过在缓冲溶液中溶解至浓度为20mg/mL(“酶溶液”)来制备荧光假单胞菌脂肪酶(AH-35，Almac集团)的溶液。向15mL锥形小瓶中添加1mL的酶溶液。将小瓶在30℃下以40RPM倒置24小时，以允许酶催化的水解继续进行。24小时后，取样品通过HPLC进行分析，以评估S3a-1产物的产值和对映体过量。

通过手性HPLC进行分析：

OJ-3R(150mm×4.6mm内径，3μm硅胶)；s温度：30℃；流量：0.625mL/min；等度50％:50％0.1％在水中的三氟乙酸-0.1％在乙腈中的三氟乙酸；在220nm处的UV检测；注射体积为5.0μL。(S,S)-酸的预期洗脱时间为7.2分钟，(R,R)-酸的预期洗脱时间为7.7分钟，(S,S)-酯的预期洗脱时间为18.0分钟并且(R,R)-酯的预期洗脱时间为18.8分钟。使用以下等式从手性HPLC结果计算对映体过量。

使用以下等式从手性HPLC结果计算产值：

对反应小瓶的分析得到7.9％的产值和95％的对映体过量(ee)。

因此，鉴于以上内容，提供以下另外的非详尽的公开内容细节(d)。

1d.一种方法，其包括在极性溶剂存在下用氧化剂将S1a氧化成S1b

方案一

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)(1)每个R_n独立地是(C₁-C₆)烷基，或者

(2)两个R_n在两个氧原子之间形成(C₂-C₆)烷基键。

2d.根据1d所述的方法，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且每个R_n是C₂H₅

反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯。

3d.根据1d或2d所述的方法，其中，所述氧化剂是氧气、次氯酸钠、臭氧、过氧化氢、有机过酸、过氧单硫酸钾、过硫酸钾、过氧单硫酸氢钾硫酸盐、或其混合物。

4d.根据3d所述的方法，其中，所使用的氧化剂的量为从约0.1摩尔至约3摩尔的氧化剂/摩尔的S1a。

5d.根据3d所述的方法，其中，所使用的氧化剂的量为从约0.5摩尔至约1.5摩尔的氧化剂/摩尔的S1a。

6d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述极性溶剂是极性非质子溶剂。

7d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述极性溶剂是极性质子溶剂。

8d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述极性溶剂是乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、或其混合物。

9d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述极性溶剂是乙酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇、甲酸、叔丁醇、水、或其混合物。

10d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述溶剂是两种或更多种极性溶剂的混合物，其中所述极性溶剂是乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、乙酸、正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇、甲酸、叔丁醇、水、其混合物、或选自表S1-MR的混合物。

11d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述方法在从约0℃至约80℃的温度下进行。

12d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述方法在从约20℃至约60℃的温度下进行。

13d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述方法在从约10kPa至约1000kPa的压力下进行。

14d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述方法在从约50kPa至约150kPa的压力下进行。

15d.根据前述细节中任一项所述的方法，其中，所述方法在酸催化剂存在下进行。

16d.一种方法，其包括在酸和(C₁-C₆)醇存在下将S1b酯化成S2a，其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；

(c)R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基；

任选地其中所述S1b根据1d至15d产生。

17d.根据16d所述的方法，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且R_x是CH₃

反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯。

17.5d.根据16d所述的方法，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且R_x是CH₂CH₃

反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯。

18d.根据16d、17d或17.5d所述的方法，其中，所述酸是硫酸、对甲苯磺酸一水合物、甲磺酸、三氟甲烷磺酸钪(III)、其混合物、或酸性树脂。

19d.根据18d所述的方法，其中，约0.001摩尔至约5摩尔的酸/摩尔的S1b。

20d.根据18d所述的方法，其中，约0.05摩尔至约0.5摩尔的酸/摩尔的S1b。

21d.根据前述细节16d至20d中任一项所述的方法，其中，所述醇是正丁醇、异丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇、乙二醇、叔丁醇、或其混合物。

22d.根据前述细节16d至21d中任一项所述的方法，其中，所述醇与至少一种选自甲苯、四氯化碳、苯、二乙醚、己烷、庚烷或二氯甲烷的溶剂混合。

23d.根据前述细节16d至22d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约0℃至约100℃的温度下进行。

24d.根据前述细节16d至23d中任一项所述的方法，其中，所述反应在约50℃至约70℃的温度下进行。

25d.根据前述细节16d至24d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约10kPa至约1000kPa的压力下进行。

26d.根据前述细节16d至25d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约50kPa至约150kPa的压力下进行。

27d.根据前述细节16d至26d中任一项所述的方法，其中，使用干燥剂。

28d.根据前述细节16d至27d中任一项所述的方法，其中，可以使用约0.1至约5摩尔的干燥剂/摩尔的S1b。

29d.根据前述细节16d至27d中任一项所述的方法，可以使用约0.2至约2摩尔的干燥剂/摩尔的S1b。

30d.根据前述细节16d至29d中任一项所述的方法，其中，所述干燥剂是具有式R_y1C(OR_y)₃的原酸酯，其中R_y1是氢或(C₁-C₆)烷基，并且R_y2是(C₁-C₆)烷基。

31d.根据前述细节16d至30d中任一项所述的方法，其中，所述干燥剂是原乙酸三乙酯，CH₃C(OCH₂CH₃)₃；原乙酸三甲酯，CH₃C(OCH₃)₃；原甲酸三乙酯，HC(OCH₂CH₃)₃；原甲酸三甲酯，HC(OCH₃)₃；分子筛、硫酸镁、氯化钙、和硫酸钠或干燥剂的混合物。

32d.一种方法，其包括在水和任选地水性缓冲剂存在下使用一种或多种羧酸酯水解酶将S2a水解成S3a

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；

(c)R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基；并且

任选地，其中S2a由16d至31d产生。

33d.根据32d所述的方法，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；R₇和R₈是Cl；并且R_x是CH₃

34d.根据32d或33d所述的方法，其中，所述一种或多种羧酸酯水解酶是斯氏假单胞菌脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、产碱杆菌属物种脂肪酶E、产碱杆菌属物种脂肪酶C、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶A、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶B、或其混合物。

35d.根据34d所述的方法，其中，S2a的产值大于20％。

36d.根据34d所述的方法，其中，S2a的产值大于30％。

37d.根据34d所述的方法，其中，S2a的产值大于40％。

38d.根据34d所述的方法，其中，S3a——其中(R,R)-对映体——的对映体过量(ee)大于80％。

39d.根据34d所述的方法，其中，S3a——其中(R,R)-对映体——的对映体过量(ee)大于90％。

40d.根据34d所述的方法，其中，S3a——其中(R,R)-对映体——的对映体过量(ee)大于95％。

41d.根据34d所述的方法，其中，S3a——其中(R,R)-对映体——的对映体过量(ee)大于99％。

42d.根据细节32d至41d中任一项所述的方法，其中，所述羧酸酯水解酶与以下脂肪酶之一相比具有至少90％的同源性：斯氏假单胞菌脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、产碱杆菌属物种脂肪酶E、皱褶假丝酵母脂肪酶B、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶A、或洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶B。

43d.根据细节32d至41d中任一项所述的方法，其中，所述羧酸酯水解酶与以下羧酸酯水解酶之一相比具有至少95％的同源性：斯氏假单胞菌脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、产碱杆菌属物种脂肪酶E、皱褶假丝酵母脂肪酶B、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶A、或洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶B。

44d.根据32d至41d中任一项所述的方法，其中，所述羧酸酯水解酶与以下羧酸酯水解酶之一相比具有至少99％的同源性：斯氏假单胞菌脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、产碱杆菌属物种脂肪酶E、皱褶假丝酵母脂肪酶B、荧光假单胞菌脂肪酶、洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶A、或洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶B。

45d.根据细节32d至44d中任一项所述的方法，其中，所使用的羧酸酯水解酶的量为相对于S2a从约0.01重量％至约200重量％。

46d.根据细节32d至44d中任一项所述的方法，其中，所使用的羧酸酯水解酶的量为相对于S2a从约0.1重量％至约5重量％。

47d.根据细节32d至46d中任一项所述的方法，其中，所述羧酸酯水解酶可以固定或负载在聚合物、二氧化硅或其他载体材料上。

48d.根据细节32d至47d中任一项所述的方法，其中，所述水性缓冲剂是磷酸钠、2-[双(2-羟乙基)氨基]-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸、磷酸钾、3-吗啉代丙烷-1-磺酸、哌嗪-N,N′-双(2-乙磺酸)、柠檬酸钠、3-{[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基]氨基}丙烷-1-磺酸、赖氨酸、2-氨基-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇、或其混合物。

49d.根据细节32d至48d中任一项所述的方法，其中，缓冲剂浓度为从约0.0001摩尔至约0.5M。

50d.根据细节32d至48d中任一项所述的方法，其中，缓冲剂浓度为从0.05M至约0.2M。

51d.根据细节32d至50d中任一项所述的方法，其中，反应混合物的pH是约pH 5至约pH 11。

52d.根据细节32d至50d中任一项所述的方法，其中，反应混合物的pH是约pH 6至约pH 10。

53d.根据细节32d至52d中任一项所述的方法，其中，所述方法在胺碱存在下进行。

54d.根据53d所述的方法，其中，所述胺碱是赖氨酸、乙醇胺、甘氨酸、或其混合物。

55d.根据53d或54d所述的方法，其中，胺碱的量为基于S2a的重量从约0.1重量百分比(wt％)至约150重量百分比。

56d.根据53d或54d所述的方法，其中，胺碱的量为基于S2a的重量从约10重量百分比至约40重量百分比。

57d.根据细节32d至56d中任一项所述的方法，其中，所述反应在共溶剂存在下进行，其中所述共溶剂是丙酮、乙腈、甲基四氢呋喃、甲基叔丁基醚、己烷、甲苯、甲基乙基酮、环戊基甲基醚、二甲亚砜、二甲氧基乙烷、或其混合物。

58d.根据57d所述的方法，其中，所述反应在共溶剂存在下进行，并且共溶剂的量为基于所述反应体积的总体积的从约1体积％至约90体积％。

59d.根据57d所述的方法，其中，所述反应在共溶剂存在下进行，并且共溶剂的量为基于所述反应体积的总体积的从约10体积％至约40体积％。

60d.根据前述32d至59d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约0℃至约80℃的温度下进行。

61d.根据前述32d至60d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约15℃至约60℃的温度下进行。

62d.根据前述32d至60d中任一项所述的方法，其中，所述反应在约25℃至约50℃的温度下进行。

63d.根据前述32d至62d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约10kPa至约1000kPa的压力下进行。

64d.根据前述32d至62d中任一项所述的方法，其中，所述反应在从约50kPa至约150kPa的压力下进行。

65d.一种可用于产生芳基环丙基羧酸的分子，所述分子选自由以下组成的组：

(a)

(E)-1-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-3,5-双(三氟甲基)苯；

(b)

反式-外消旋-1-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲醛；

(c)

反式-外消旋-1-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-3,5-双(三氟甲基)苯；

(d)

反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸甲酯；

(e)

(E)-4-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-1-氟-2-(三氟甲基)苯；

(f)

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲醛；

(g)

反式-外消旋-4-(2,2-二氯-3-(二乙氧基甲基)环丙基)-1-氟-2-(三氟甲基)苯；

(h)

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯；

(i)

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,4-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯；

(j)

反式-外消旋-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸乙酯；以及

(k)

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3-氯-4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯。

66d.一种方法，其包括以下步骤：

(A)在极性溶剂存在下用氧化剂将S1a氧化成S1b

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)(1)每个R_n独立地是(C₁-C₆)烷基，或者

(2)两个R_n在两个氧原子之间形成(C₂-C₆)烷基键，

任选地其中

细节2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d、9d、10d、11d、12d、13d、14d和15d中的任一项或多项也用于(A)中；

接着是

(B)在酸和(C₁-C₆)醇存在下将S1b酯化成S2a

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₇和R₈是如上在(A)中所述的；并且R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基

任选地其中

细节17d、17.5d、18d、19d、20d、21d、22d、23d、24d、25d、26d、27d、28d、29d、30d和31d中的任一项或多项也用于(B)中；

接着是

(C)在水和任选地水性缓冲剂存在下使用一种或多种羧酸酯水解酶将S2a水解成S3a

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₇、R₈和R_x是如上在(B)中所述的

任选地其中

细节33d、34d、35d、36d、37d、38d、39d、40d、41d、42d、43d、44d、45d、46d、47d、48d、49d、50d、51d、52d、53d、54d、55d、56d、57d、58d、59d、60d、61d、62d、63d和64d中的任一项或多项也用于(C)中。

67d.一种对映体富集的S3a制剂，其中S3a(R,R)-对映体的对映体过量大于80％、大于90％、或大于95％

(a)R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地是H、F、Cl、Br、I、CN、NH₂、NO₂、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基、(C₁-C₆)卤代烷基、或(C₁-C₆)卤代烷氧基，其条件是R₂、R₃和R₄中的至少一个不是H；以及

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I。

68d.根据细节67d所述的制剂，其中，所述S3a(R,R)-对映体的对映体过量大于96％、大于97％、或大于98％。

69d.一种杀有害生物制剂，其包含如细节67d或68d所述的对映体富集的制剂。

70d.根据细节67d或68d所述的制剂，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；并且R₇和R₈是Cl

(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸。

71d.根据细节69d所述的杀有害生物制剂，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；并且R₇和R₈是Cl

(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸。

序列表

<110> 科迪华农业科学有限责任公司（Corteva Agriscience LLC）

<120> 与芳基环丙基羧酸的形成有关的方法

<130> 81306-WO-PCT

<160> 4

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 311

<212> PRT

<213> 斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）

<400> 1

Met Asn Lys Asn Lys Thr Leu Leu Ala Leu Cys Leu Gly Ser Ala Met

1 5 10 15

Ala Leu Ala Gly Gln Ala His Ala Ala Thr Gly Ser Gly Tyr Thr Ala

20 25 30

Thr Lys Tyr Pro Ile Val Leu Ala His Gly Met Leu Gly Phe Asp Ser

35 40 45

Leu Leu Gly Ile Asp Tyr Trp Tyr Gly Ile Pro Ser Ala Leu Arg Arg

50 55 60

Asp Gly Ala Gln Val Tyr Val Thr Glu Val Ser Gln Leu Asn Thr Ser

65 70 75 80

Glu Leu Arg Gly Glu Glu Leu Leu Ala Gln Val Glu Glu Ile Val Ala

85 90 95

Ile Ser Gly Lys Pro Lys Val Asn Leu Val Gly His Ser His Gly Gly

100 105 110

Pro Thr Val Arg Tyr Val Ala Gly Val Arg Pro Asp Leu Ile Ala Ser

115 120 125

Val Thr Ser Val Gly Ala Pro His Lys Gly Ser Asp Val Ala Asp Leu

130 135 140

Ile Arg Lys Ile Pro Glu Gly Ser Ser Gly Glu Ala Ile Ile Ala Gly

145 150 155 160

Leu Val Asn Ala Met Gly Ser Phe Ile Asn Phe Val Ser Gly Ser Ser

165 170 175

Ser Thr Ala Pro Gln Asp Ser Leu Gly Ser Leu Glu Ser Leu Asn Ser

180 185 190

Glu Gly Ala Ala Arg Phe Asn Ala Lys Phe Pro Gln Gly Ile Pro Thr

195 200 205

Thr Ala Cys Gly Glu Gly Ala Tyr Arg Val Asn Gly Val Arg Tyr Tyr

210 215 220

Ser Trp Ser Gly Thr Ser Pro Leu Thr Asn Pro Leu Asp Ile Ser Asp

225 230 235 240

Ala Met Met Gly Ala Gly Ala Leu Ala Phe Ser Gly Pro Asn Asp Gly

245 250 255

Leu Val Gly Arg Cys Ser Ser His Leu Gly Met Val Ile Arg Asp Asn

260 265 270

Tyr Arg Met Asn His Leu Asp Glu Val Asn Gln Phe Met Gly Leu Thr

275 280 285

Ser Leu Phe Glu Thr Asp Pro Val Ser Val Tyr Arg Gln His Ala Asn

290 295 300

Arg Leu Lys Asn Ala Gly Leu

305 310

<210> 2

<211> 364

<212> PRT

<213> 洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）

<400> 2

Met Ala Arg Thr Met Arg Ser Arg Val Val Ala Gly Ala Val Ala Cys

1 5 10 15

Ala Met Ser Ile Ala Pro Phe Ala Gly Thr Thr Ala Val Met Thr Leu

20 25 30

Ala Thr Thr His Ala Ala Met Ala Ala Thr Ala Pro Ala Ala Gly Tyr

35 40 45

Ala Ala Thr Arg Tyr Pro Ile Ile Leu Val His Gly Leu Ser Gly Thr

50 55 60

Asp Lys Tyr Ala Gly Val Leu Glu Tyr Trp Tyr Gly Ile Gln Glu Asp

65 70 75 80

Leu Gln Gln Asn Gly Ala Thr Val Tyr Val Ala Asn Leu Ser Gly Phe

85 90 95

Gln Ser Asp Asp Gly Pro Asn Gly Arg Gly Glu Gln Leu Leu Ala Tyr

100 105 110

Val Lys Thr Val Leu Ala Ala Thr Gly Ala Thr Lys Val Asn Leu Val

115 120 125

Gly His Ser Gln Gly Gly Leu Ser Ser Arg Tyr Val Ala Ala Val Ala

130 135 140

Pro Asp Leu Val Ala Ser Val Thr Thr Ile Gly Thr Pro His Arg Gly

145 150 155 160

Ser Glu Phe Ala Asp Phe Val Gln Asp Val Leu Ala Tyr Asp Pro Thr

165 170 175

Gly Leu Ser Ser Ser Val Ile Ala Ala Phe Val Asn Val Phe Gly Ile

180 185 190

Leu Thr Ser Ser Ser His Asn Thr Asn Gln Asp Ala Leu Ala Ala Leu

195 200 205

Gln Thr Leu Thr Thr Ala Arg Ala Ala Thr Tyr Asn Gln Asn Tyr Pro

210 215 220

Ser Ala Gly Leu Gly Ala Pro Gly Ser Cys Gln Thr Gly Ala Pro Thr

225 230 235 240

Glu Thr Val Gly Gly Asn Thr His Leu Leu Tyr Ser Trp Ala Gly Thr

245 250 255

Ala Ile Gln Pro Thr Leu Ser Val Phe Gly Val Thr Gly Ala Thr Asp

260 265 270

Thr Ser Thr Leu Pro Leu Val Asp Pro Ala Asn Val Leu Asp Leu Ser

275 280 285

Thr Leu Ala Leu Phe Gly Thr Gly Thr Val Met Ile Asn Arg Gly Ser

290 295 300

Gly Gln Asn Asp Gly Leu Val Ser Lys Cys Ser Ala Leu Tyr Gly Lys

305 310 315 320

Val Leu Ser Thr Ser Tyr Lys Trp Asn His Leu Asp Glu Ile Asn Gln

325 330 335

Leu Leu Gly Val Arg Gly Ala Tyr Ala Glu Asp Pro Val Ala Val Ile

340 345 350

Arg Thr His Ala Asn Arg Leu Lys Leu Ala Gly Val

355 360

<210> 3

<211> 364

<212> PRT

<213> 假单胞菌属物种（Pseudomonas sp.） KWI-56

<400> 3

Met Ala Arg Thr Met Arg Ser Arg Val Val Ala Gly Ala Val Ala Cys

1 5 10 15

Ala Met Ser Ile Ala Pro Phe Ala Gly Thr Thr Ala Val Met Thr Leu

20 25 30

Ala Thr Thr His Ala Ala Met Ala Ala Thr Ala Pro Ala Asp Gly Tyr

35 40 45

Ala Ala Thr Arg Tyr Pro Ile Ile Leu Val His Gly Leu Ser Gly Thr

50 55 60

Asp Lys Tyr Ala Gly Val Val Glu Tyr Trp Tyr Gly Ile Gln Glu Asp

65 70 75 80

Leu Gln Gln Asn Gly Ala Thr Val Tyr Val Ala Asn Leu Ser Gly Phe

85 90 95

Gln Ser Asp Asp Gly Ala Asn Gly Arg Gly Glu Gln Leu Leu Ala Tyr

100 105 110

Val Lys Thr Val Leu Ala Ala Thr Gly Ala Thr Lys Val Asn Leu Val

115 120 125

Gly His Ser Gln Gly Gly Leu Thr Ser Arg Tyr Val Ala Ala Val Ala

130 135 140

Pro Asp Leu Val Ala Ser Val Thr Thr Ile Gly Thr Pro His Arg Gly

145 150 155 160

Ser Glu Phe Ala Asp Phe Val Gln Asn Val Leu Ala Tyr Asp Pro Thr

165 170 175

Gly Leu Ser Ser Ser Val Ile Ala Ala Phe Val Asn Val Phe Gly Ile

180 185 190

Leu Thr Ser Ser Ser His Asn Thr Asn Gln Asp Ala Leu Ala Ala Leu

195 200 205

Gln Thr Leu Thr Thr Ala Arg Ala Ala Thr Tyr Asn Gln Asn Tyr Pro

210 215 220

Ser Ala Gly Leu Gly Ala Pro Gly Ser Cys Gln Thr Gly Ala Pro Thr

225 230 235 240

Glu Thr Val Gly Gly Asn Thr His Leu Leu Tyr Ser Trp Ala Gly Thr

245 250 255

Ala Ile Gln Pro Thr Leu Ser Val Phe Gly Ile Thr Gly Ala Thr Asp

260 265 270

Thr Ser Thr Val Pro Leu Val Asp Leu Ala Asn Val Leu Asp Pro Ser

275 280 285

Thr Leu Ala Leu Phe Gly Thr Gly Thr Val Met Ile Asn Arg Gly Ser

290 295 300

Gly Gln Asn Asp Gly Leu Val Ser Lys Cys Ser Ala Leu Tyr Gly Lys

305 310 315 320

Val Leu Ser Thr Ser Tyr Lys Trp Asn His Leu Asp Glu Ile Asn Gln

325 330 335

Leu Leu Gly Val Arg Gly Ala Tyr Ala Glu Asp Pro Val Ala Val Ile

340 345 350

Arg Thr His Ala Asn Arg Leu Lys Leu Ala Gly Val

355 360

<210> 4

<211> 347

<212> PRT

<213> 伯克霍尔德菌属物种（Burkholderia sp.） TJI49

<400> 4

Met Ser Val Ala Pro Phe Ala Gly Thr Ala Ala Leu Thr Met Ala Ala

1 5 10 15

Thr Thr Arg Ala Ala Leu Ala Ala Thr Ala Pro Ala Asp Ala Tyr Ala

20 25 30

Ala Thr Arg Tyr Pro Ile Ile Leu Val His Gly Leu Thr Gly Thr Asp

35 40 45

Lys Tyr Ala Gly Val Leu Asp Tyr Trp Tyr Gly Ile Arg Glu Asp Leu

50 55 60

Gln Gln His Gly Ala Thr Val Tyr Val Ala Asn Leu Ser Gly Phe Gln

65 70 75 80

Ser Asp Asp Gly Pro Asn Gly Arg Gly Glu Gln Leu Leu Ala Tyr Val

85 90 95

Lys Thr Val Leu Ala Ala Thr Gly Ala Ala Lys Val Asn Leu Ile Gly

100 105 110

His Ser Gln Gly Gly Leu Thr Ser Arg Tyr Val Ala Ala Val Ala Pro

115 120 125

Asp Leu Val Ala Ser Val Thr Thr Ile Gly Thr Pro His Arg Gly Ser

130 135 140

Glu Phe Ala Asp Phe Val Gln Gly Val Leu Ala Thr Asp Pro Thr Gly

145 150 155 160

Leu Ser Ser Ser Val Ile Ala Ala Phe Val Asn Val Phe Gly Ile Leu

165 170 175

Thr Ser Ser Thr His Asn Thr Asn Gln Asp Ala Leu Ala Ala Leu Gln

180 185 190

Thr Leu Thr Thr Ala Arg Ala Ala Ala Tyr Asn Gln Asn Tyr Pro Ser

195 200 205

Ala Gly Leu Gly Ala Pro Gly Ser Cys Gln Thr Gly Ala Pro Thr Glu

210 215 220

Thr Val Gly Gly Asn Thr His Leu Leu Tyr Ser Trp Ala Gly Thr Ala

225 230 235 240

Ile Gln Pro Thr Val Ser Ala Phe Gly Val Thr Gly Ala Ala Asp Thr

245 250 255

Ser Thr Ile Pro Leu Val Asp Pro Ala Asn Ala Leu Asp Leu Ser Thr

260 265 270

Leu Ala Leu Leu Gly Thr Gly Thr Val Met Ile Asn Arg Gly Ser Gly

275 280 285

Gln Asn Asp Gly Leu Val Ser Lys Cys Ser Ala Leu Tyr Gly Lys Val

290 295 300

Leu Ser Thr Ser Tyr Lys Trp Asn His Leu Asp Glu Ile Asn Gln Leu

305 310 315 320

Leu Gly Val Arg Gly Ala Tyr Ala Glu Asp Pro Leu Ala Val Ile Arg

325 330 335

Thr His Ala Asn Arg Leu Lys Leu Ala Gly Val

340 345

Claims

1.一种方法，其包括在极性溶剂存在下用氧化剂将S1a氧化成S1b

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)(1)每个R_n独立地是(C₁-C₆)烷基，或者

(2)两个R_n在两个氧原子之间形成(C₂-C₆)烷基键。

2.一种方法，其包括在酸和(C₁-C₆)醇存在下将S1b酯化成S2a

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基。

3.一种方法，其包括在水和任选地水性缓冲剂存在下使用一种或多种羧酸酯水解酶将S2a水解成S3a

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基。

4.一种方法，其包括以下步骤：

(A)在极性溶剂存在下用氧化剂将S1a氧化成S1b

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I；以及

(c)(1)每个R_n独立地是(C₁-C₆)烷基，或者

(2)两个R_n在两个氧原子之间形成(C₂-C₆)烷基键

接着是

(B)在酸和(C₁-C₆)醇存在下将S1b酯化成S2a

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₇和R₈是如上在(A)中所述的；并且

R_x是(C₁-C₆)烷基或(C₁-C₆)羟烷基；

接着是

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₇、R₈和R_x是如上在(B)中所述的。

5.一种可用于产生芳基环丙基羧酸的分子，所述分子选自由以下组成的组：

(a)

(E)-1-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-3,5-双(三氟甲基)苯；

(b)

(c)

(d)

(e)

(E)-4-(3,3-二乙氧基丙-1-烯-1-基)-1-氟-2-(三氟甲基)苯；

(f)

(g)

(h)

(i)

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3,4-二氯苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯；

(j)

(k)

反式-外消旋-2,2-二氯-3-(3-氯-4-氟苯基)环丙烷-1-甲酸甲酯。

6.一种对映体富集的S3a制剂，其中S3a(R,R)-对映体的对映体过量大于80％、大于90％、或大于95％

其中

(b)R₇和R₈各自独立地是F、Cl、Br、或I。

7.如权利要求6所述的制剂，其中，所述S3a(R,R)-对映体的对映体过量大于96％、大于97％、或大于98％。

8.一种杀有害生物制剂，其包含如权利要求6或7所述的对映体富集的制剂。

9.如权利要求6或7所述的制剂，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；并且R₇和R₈是Cl

(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸。

10.如权利要求8所述的杀有害生物制剂，其中，R₂和R₄是CF₃；R₁、R₃和R₅是H；并且R₇和R₈是Cl

(1R,3R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-2,2-二氯环丙烷-1-甲酸。